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一種重組嗜堿芽孢桿菌及其制備方法和應用以及制備D-乳酸的方法與流程

文檔序號:12697184閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種重組嗜堿芽孢桿菌的制備方法,其特征在于,該制備方法包括:

以生產(chǎn)L-乳酸的嗜堿芽孢桿菌為出發(fā)菌株,通過遺傳工程操作,使該出發(fā)菌株不表達L-乳酸脫氫酶而表達D-乳酸脫氫酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其中,使出發(fā)菌株不表達L-乳酸脫氫酶的方式為:突變或敲除出發(fā)菌株中的L-乳酸脫氫酶編碼基因,所述出發(fā)菌株優(yōu)選為保藏編號為CGMCC NO.0369的嗜堿芽孢桿菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法,其中,使D-乳酸脫氫酶表達的方式為:將含有D-乳酸脫氫酶編碼基因的表達載體導入不表達L-乳酸脫氫酶的嗜堿芽孢桿菌中。

4.一種由權(quán)利要求1-3中任意一項所述的制備方法制備得到的重組嗜堿芽孢桿菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組嗜堿芽孢桿菌,其中,所述重組嗜堿芽孢桿菌的保藏編號為CGMCC No.11581。

6.權(quán)利要求4或5所述的重組嗜堿芽孢桿菌在制備D-乳酸中的應用。

7.一種制備D-乳酸的方法,其特征在于,該方法包括將權(quán)利要求4或5所述的重組嗜堿芽孢桿菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵,獲得含有D-乳酸的發(fā)酵液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其中,所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有碳源、氮源和選擇性含有的無機鹽;優(yōu)選地,在所述發(fā)酵培養(yǎng)基中,所述碳源的含量 為60-150克/升,所述氮源的含量為10-50克/升,所述無機鹽的含量為0-5克/升。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述碳源為糖,優(yōu)選為葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、甘露糖和半乳糖中的至少一種,更優(yōu)選為葡萄糖和/或果糖;所述氮源為無機氮源和/或有機氮源,優(yōu)選為有機氮源,更優(yōu)選為由花生粕、蛋白胨、酵母粉和豆餅粉中的至少一種提供;所述無機鹽為醋酸鈉。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其中,所述發(fā)酵的條件包括:發(fā)酵的溫度為35-45℃,發(fā)酵的時間為90-100小時,發(fā)酵的pH值為9-10,控制發(fā)酵過程中碳源的含量為20-50克/升。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中,控制發(fā)酵的pH值的方式為向發(fā)酵體系中補加中和劑,所述中和劑包括NaOH、氨水和Na2CO3中的至少一種,優(yōu)選為NaOH和/或Na2CO3。

12.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任意一項所述的方法,其中,在所述發(fā)酵之前對發(fā)酵的設備和/或發(fā)酵培養(yǎng)基進行滅菌或不進行滅菌,優(yōu)選不進行滅菌。

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