本發(fā)明涉及功能食品領(lǐng)域，具體地，涉及一種提取植物源角鯊烯組合物的方法、一種含角鯊烯的藥物的制備方法以及由該方法制備得到的含角鯊烯的藥物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：角鯊烯是一種高度不飽和的烴類化合物，是一種具有特殊氣味的無色油狀液體，其系統(tǒng)命名為2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，分子式為C30H50。角鯊烯屬于一種高度不飽和的直鏈三萜類化合物，結(jié)構(gòu)式為：角鯊烯具有抗氧化、促進皮膚健康、促進心血管健康、提高人體耐缺氧能力等諸多功效，廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥、化妝品領(lǐng)域，近些年來在保健品領(lǐng)域的應(yīng)用也逐步擴展。目前市售的角鯊烯產(chǎn)品均為從深海鯊魚肝油中提取得到的，隨著對深海鯊魚的動物保護呼聲高漲，歐盟國家于2006年在大西洋東北方向限制深海鯊魚的捕撈，這導(dǎo)致了以深海鯊魚肝臟為原料的角鯊烯資源日益匱乏?？蒲腥藛T也試圖通過化學(xué)或者生物合成的方法擴充角鯊烯的市場供應(yīng)， 但是化學(xué)反應(yīng)的工藝流程長，且多采用有毒的化學(xué)藥劑，生產(chǎn)工藝距離工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)還存在一定的距離，而且化學(xué)合成的角鯊烯雙鍵結(jié)構(gòu)與天然角鯊烯的全反式結(jié)構(gòu)存在差別。另外，CN102257149B公布了一種制備純化酵母的方法，采用超量生產(chǎn)角鯊烯的酵母制備高純度的角鯊烯，用來制備水包油乳液用作免疫佐劑。CN103266137B涉及一種角鯊烯的生產(chǎn)方法，將角鯊烯合成酶基因進行克隆并在大腸桿菌中共表達，從而構(gòu)建了能合成角鯊烯的重組菌株的方法。但是，生物合成在菌種和目的物的得率等方面都還不理想，還存在某些局限性，距離工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)還有一定距離。由于角鯊烯在植物中也廣泛存在，有研究工作以橄欖油或脫臭餾出物為原料對植物源的角鯊烯進行提取研究，由于原料中角鯊烯含量偏低，考慮到生產(chǎn)成本，對角鯊烯進行提純并不具備工業(yè)化生產(chǎn)和商業(yè)化的條件，因此植物源角鯊烯的工作多局限在研究所和高校等機構(gòu)。由于物料體系組分復(fù)雜，并且所涉及的植物源角鯊烯的提純生產(chǎn)均以較高純度(90％以上)的角鯊烯產(chǎn)品為目標，現(xiàn)有技術(shù)均需要采用多步工藝才可能達到分離純化的目的，而且采用的處理步驟多，實驗流程長，溶劑和能量消耗大，生產(chǎn)效率低。目前從植物油脫臭過程中產(chǎn)生的植物油脫臭餾出物，尤其是橄欖油脫臭餾出物中提取角鯊烯成為一個有效的方法，根據(jù)我國國情，大部分橄欖油都是依靠進口，缺乏橄欖油脫臭餾出物的穩(wěn)定資源。因此從我國現(xiàn)有的油脂資源中開發(fā)設(shè)計分離角鯊烯的工藝是一種經(jīng)濟可行的處理方式。CN102146014A公開了以油茶籽為原料提取角鯊烯的方法，其提取方法的工藝流程為：浸提、濃縮、甲酯化、配位劑-硼砂反應(yīng)、大孔樹脂色譜分離純化、濃縮、萃取以及洗滌后繼續(xù)濃縮，得到角鯊烯粗油后再進行超臨界二氧化碳萃取，得到含量為80％以上的角鯊烯產(chǎn)品。然而，該方法工藝路線 復(fù)雜，溶劑能耗消耗大，而且色譜分離存在死吸附、填料需要再生的問題，增加了生產(chǎn)成本。CN1284752C公開了一種植物角鯊烯的提取方法，將羅漢果的種仁或種籽破碎，用有機溶劑浸漬提取出脂溶性物質(zhì)，除去有機溶劑，制得羅漢果角鯊烯粗品；將羅漢果角鯊烯粗品過硅膠層析柱，用有機溶劑洗脫，收集洗脫液無色部分，用減壓蒸餾法除去有機溶劑，制得羅漢果角鯊烯精品。然而，該方法存在原料角鯊烯含量低，提取成本高的缺點。CN103483305A公開了采用尿素及溶劑為助劑，使其與油脂脫臭餾出物溶解混合，進行真空脫氣并密封，再采用超高壓使餾出物中的飽和脂肪酸、脂肪烴和甾醇等快速結(jié)晶凝聚，壓濾分離后得到濾渣和濾液，脫除溶劑后可得較高純度的VE、角鯊烯和多不飽和脂肪酸的混合物。此工藝也采用了超高壓，并需要真空脫氣，增加了能耗和后續(xù)處理的難度。申請?zhí)枮?01410375211.3現(xiàn)有技術(shù)公開了一種絡(luò)合提取角鯊烯的工藝，將油茶樹的種仁破碎，加石油醚進行超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮，然后將所得山茶油脂溶性物質(zhì)濃縮液與強堿的醇溶液混合，加熱回流后用石油醚提取，然后加入硝酸銀甲醇水溶液進行絡(luò)合反應(yīng)，然后繼續(xù)用石油醚反萃取得到解離后的角鯊烯石油醚有機相；將角鯊烯石油醚有機相用NaCl水溶液清洗后進行減壓蒸餾，再次用蒸餾水清洗，真空干燥，即得到終產(chǎn)物角鯊烯精品。然而，該現(xiàn)有技術(shù)的工藝流程中引入了硝酸銀進行絡(luò)合反應(yīng)，大幅度增加了工藝成本，并產(chǎn)生了化學(xué)污染的可能，不利于工業(yè)生產(chǎn)的推廣。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，在不降低含有角鯊烯的產(chǎn)品的效果的前提下提供一種新的植物源角鯊烯組合物，以及提供一種工藝流程簡單、成本低且適合工業(yè)化生產(chǎn)的獲得所述新的植物源角鯊烯組合物的方法， 使用本發(fā)明的方法提取得到的新的植物源角鯊烯組合物在不需要進一步提純的前提下就可以獲得與現(xiàn)有技術(shù)提供的高純度的角鯊烯(純度通常高于90％)相當(dāng)甚至更好的抗氧化效果。本發(fā)明的發(fā)明人是基于以下考慮完成本發(fā)明的技術(shù)方案的：植物源的角鯊烯原料與動物源的角鯊烯原料存在很大的差異，一些組分的含量在動物源中相對較少，而植物源的原料中則含量豐富，以豆甾醇為例，其分子量為412.69，與角鯊烯的分子量(410.72)非常接近，很難與角鯊烯分離開來。發(fā)明人考慮若是能夠通過簡單的工藝操作獲得角鯊烯含量適中且能夠保留植物源角鯊烯原料中的其它多種活性物質(zhì)的組合物，則能夠大大節(jié)約生產(chǎn)成本并且實現(xiàn)含角鯊烯的產(chǎn)品的綠色生產(chǎn)?；诖?，發(fā)明人進行了一系列創(chuàng)造性研究，并且發(fā)現(xiàn)通過簡單的工藝操作獲得的角鯊烯含量適中且保留植物源角鯊烯原料中的其它多種活性物質(zhì)的組合物在功效上與高純度(90％以上)的角鯊烯相當(dāng)，甚至效果更佳。第一方面，本發(fā)明提供一種提取植物源角鯊烯組合物的方法，該方法包括：將富含角鯊烯的原料依次進行預(yù)處理和富集分離，其中，控制所述富集分離的條件使得得到的植物源角鯊烯組合物中含有35-80重量％的角鯊烯，所述富含角鯊烯的原料中含有5-30重量％的角鯊烯和10-40重量％的甾醇。第二方面，本發(fā)明提供一種含角鯊烯的藥物的制備方法，該方法包括：(1)提取植物源角鯊烯組合物：采用本發(fā)明前述的提取植物源角鯊烯組合物的方法提取植物源角鯊烯組合物；(2)制備藥物：將含有步驟(1)得到的所述植物源角鯊烯組合物的藥學(xué)活性成分與藥用輔料進行混合。第三方面，本發(fā)明提供由本發(fā)明的前述方法制備得到的含角鯊烯的藥物。第四方面，本發(fā)明提供前述含角鯊烯的藥物在用于增強免疫力、抗氧化 和降低血脂密度的產(chǎn)品中的應(yīng)用。由本發(fā)明所涉及的提取植物源角鯊烯組合物的方法得到的植物源角鯊烯組合物中除了含有35-80重量％的角鯊烯以外還含有甾醇等活性物質(zhì)，由本發(fā)明的方法提取得到的植物源角鯊烯組合物能夠保持與現(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)甚至更好的藥學(xué)活性。而且，本發(fā)明的提取植物源角鯊烯組合物的方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，適合作為工業(yè)化方法進行推廣。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。附圖說明附圖是用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：圖1是本發(fā)明提供的測試例的結(jié)果示意圖。具體實施方式以下對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。第一方面，本發(fā)明提供了一種提取植物源角鯊烯組合物的方法，該方法包括：將富含角鯊烯的原料依次進行預(yù)處理和富集分離，其中，控制所述富集分離的條件使得得到的植物源角鯊烯組合物中含有35-80重量％的角鯊烯，所述富含角鯊烯的原料中含有5-30重量％的角鯊烯和10-40重量％的甾醇。優(yōu)選地，控制所述富集分離的條件使得得到的植物源角鯊烯組合物中含有40-70重量％的角鯊烯。優(yōu)選情況下，所述富含角鯊烯的原料中含有10-30重量％的角鯊烯和 10-40重量％的甾醇。所述植物源角鯊烯組合物中進一步含有0.5-10重量％的甾醇；更加優(yōu)選地，所述植物源角鯊烯組合物中進一步含有0.5-5重量％的甾醇。本發(fā)明所述的甾醇為植物甾醇，包括豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇中的至少一種。在本發(fā)明所述的富含角鯊烯的原料中還可以含有少量的其它烴類、醇類和酯類物質(zhì)等。在本發(fā)明中，所述富含角鯊烯的原料可以為各種常規(guī)的滿足上述組成的原料。在一種優(yōu)選實施方式中，所述富含角鯊烯的原料可以通過包括以下步驟的工藝獲得：(1)將植物油脫臭餾出物依次進行酯化反應(yīng)和轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)，并將得到的反應(yīng)產(chǎn)物進行第一結(jié)晶分離，得到第一固體相和第一液體相；(2)將所得第一液體相進行第一分子蒸餾，得到富含維生素E和角鯊烯的餾分；以及(3)將所得到的富含維生素E和角鯊烯的餾分依次進行第一色譜分離和蒸發(fā)，得到高純度的維生素E和富含角鯊烯的原料。在本發(fā)明中，優(yōu)選所述植物油脫臭餾出物為植物油在精煉脫臭過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物。在本發(fā)明中，優(yōu)選所述植物油脫臭餾出物中含有10-80重量％的脂肪酸、10-30重量％的甘油酯、0.5-20重量％的維生素E、0.5-20重量％的植物甾醇、0.5-20重量％的植物甾醇酯和0.5-30重量％的角鯊烯。在本發(fā)明中，為了獲得所述富含角鯊烯的原料，可以采用公開號為CN105016956A的專利申請中所述的方法獲得。本發(fā)明在此不再贅述。優(yōu)選地，所述預(yù)處理的步驟選自皂化、酯化、尿素包合和冷凍結(jié)晶中的至少一種。更加優(yōu)選地，所述預(yù)處理的步驟為皂化或者皂化和酯化。根據(jù)一種優(yōu)選的具體實施方式，所述預(yù)處理的步驟采用皂化進行，所述皂化的步驟包括：在堿性條件下，將所述富含角鯊烯的原料進行回流反應(yīng)，然后采用有機溶劑將回流反應(yīng)后得到的混合物進行萃取，并收集油相。優(yōu)選地，所述回流反應(yīng)的時間為1.5-5h。在本發(fā)明中，所述回流反應(yīng)的溶劑可以為多種，優(yōu)選地，參與所述回流反應(yīng)的溶劑例如可以為乙醇。更加優(yōu)選情況下，所述皂化的操作可以為：將所述富含角鯊烯的原料溶于少量乙醇中，并且加熱至60-88℃以有利于所述原料的溶解；然后取適量上述溶解的原料在氫氧化鉀-乙醇溶液中進行回流反應(yīng)，優(yōu)選地，參與所述回流反應(yīng)的富含角鯊烯的原料的濃度為0.5-2g/mL；反應(yīng)結(jié)束后加入水并持續(xù)攪拌至室溫，然后采用所述有機溶劑將回流反應(yīng)后得到的混合物進行萃取，并收集油相。進行萃取的有機溶劑例如可以為正己烷。本發(fā)明還可以將收集得到的所述油相在例如10重量％的乙醇-水溶液中進行洗滌至中性，得到待進行富集分離的樣品。優(yōu)選地，所述富集分離的步驟采用三級分子蒸餾或真空精餾進行。優(yōu)選地，所述三級分子蒸餾中的第一級分子蒸餾的條件包括：壓力為5-25Pa，溫度為120-140℃，刮膜轉(zhuǎn)速為200-300rpm；第二級分子蒸餾的條件包括：壓力為5-25Pa，溫度為110-125℃，刮膜轉(zhuǎn)速為200-300rpm；第三級分子蒸餾的條件包括：壓力為5-25Pa，溫度為100-120℃，刮膜轉(zhuǎn)速為200-300rpm。更加優(yōu)選情況下，所述第三級分子蒸餾的溫度比所述第二級分子蒸餾的溫度低5-10℃。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，控制所述第三級分子蒸餾的溫度比所述第二級分子蒸餾的溫度低5-10℃且在本發(fā)明的上述范圍內(nèi)時，能夠使得得到的植物源角鯊烯組合物的抗氧化作用更強。優(yōu)選地，所述真空精餾的條件包括：壓力為100-2000Pa，溫度為180-250℃，理論塔板數(shù)為15-30。更加優(yōu)選地，所述真空精餾的條件包括：壓力為300-600Pa，溫度為200-230℃，理論塔板數(shù)為15-25。本發(fā)明的所述 真空精餾可以在例如氮氣作為保護氣體存在下進行，將其中的輕組分餾分蒸出，釜底所得的餾分還含有部分重質(zhì)的蠟和烷烴類物質(zhì)，可以通過后續(xù)進行尿素包合處理或者冷凍結(jié)晶處理進行去除。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選的具體實施方式，本發(fā)明的方法包括：所述富集分離的步驟采用三級分子蒸餾進行，而且在進行所述富集分離之前，先將經(jīng)過所述皂化后得到的產(chǎn)物進行酯化反應(yīng)。優(yōu)選地，所述酯化反應(yīng)的條件包括：溫度為70-90℃，時間為1-10h。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選的具體實施方式，本發(fā)明的方法包括：所述富集分離的步驟采用真空精餾進行，而且在進行所述富集分離之前，先將經(jīng)過所述皂化后得到的產(chǎn)物進行酯化反應(yīng)；以及將所述富集分離后得到的產(chǎn)物進行尿素包合處理和/或冷凍結(jié)晶處理。優(yōu)選地，所述酯化反應(yīng)的條件包括：溫度為70-90℃，時間為1-10h。優(yōu)選地，所述尿素包合處理的步驟可以為：1)配制濃度為0.01-7g/mL的尿素-乙醇溶液，然后向該尿素-乙醇溶液中加入所述富集分離后得到的產(chǎn)物，并加熱回流0.5-8h進行包合；2)將步驟1)得到的產(chǎn)物冷卻至室溫，并置于零下20℃至零上10℃的條件下進行冷卻結(jié)晶3-48h，然后進行過濾；3)向步驟2)所得濾液中加入有機溶劑(例如正己烷)，并且使用有機溶劑對過濾后得到的濾渣進行洗滌，合并有機相后依次用例如5重量％氯化鈉溶液和水進行洗滌，收集有機相并進行濃縮。優(yōu)選地，所述冷凍干燥的步驟可以為：將所述富集分離后得到的產(chǎn)物溶于適量乙醇中，加熱至完全溶解；然后置于0-35℃中放置0.5-5h，然后轉(zhuǎn)入更低的溫度(第二溫度)下放置1-10小時，有大量晶體析出；過濾后，再把濾液置于第二溫度下放置過夜，進行二次冷析；為了促進結(jié)晶生長，可在體系中加入硅藻土進行促晶生長，過濾后收集濾液并蒸干溶劑。第二方面，本發(fā)明提供了一種含角鯊烯的藥物的制備方法，該方法包括：(1)提取植物源角鯊烯組合物：采用本發(fā)明前述的方法提取植物源角 鯊烯組合物；(2)制備藥物：將含有步驟(1)得到的所述植物源角鯊烯組合物的藥學(xué)活性成分與藥用輔料進行混合。在本發(fā)明的第二方面中，有關(guān)所述提取植物源角鯊烯組合物的方法如本發(fā)明的前述第一方面所述，為了避免重復(fù)，本發(fā)明在此不再贅述。優(yōu)選地，在步驟(1)中，所述植物源角鯊烯組合物中進一步含有0.5-10重量％的甾醇；更加優(yōu)選地，所述植物源角鯊烯組合物中進一步含有0.5-5重量％的甾醇。本發(fā)明步驟(1)獲得的植物源角鯊烯組合物在不需要進一步提純的前提下就能夠直接與藥用輔料進行混合以制備藥物。這大大節(jié)約了生產(chǎn)成本，也有利于本發(fā)明的富含角鯊烯的原料中的其它活性成分的保留。本發(fā)明所述的藥用輔料可以為本領(lǐng)域內(nèi)常規(guī)使用的各種藥用輔料，例如明膠、甘油等。優(yōu)選地，在本發(fā)明所述的含角鯊烯的藥物的制備方法中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)用量確定所述藥學(xué)活性成分與藥用輔料的用量比例，例如所述藥學(xué)活性成分與藥用輔料的用量重量比可以為1：0.1-1000。第三方面，本發(fā)明提供了由前述方法制備得到的含角鯊烯的藥物。第四方面，本發(fā)明提供了前述含角鯊烯的藥物在用于增強免疫力、抗氧化和降低血脂密度的產(chǎn)品中的應(yīng)用。以下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。在沒有特別說明的情況下，以下使用的各種原料均來自商購。在本發(fā)明中的回收率(％)根據(jù)最終所得到的純物質(zhì)的重量占原料中的純物質(zhì)總重量的百分含量計算。以下角鯊烯通過HPLC進行分析，分析條件為采用XunionC18柱(5um，4.6mm×150mm)，流動相體積比為乙腈：甲醇＝60：40，流速為2mL/min， 檢測在210nm處紫外吸收，控制柱溫為25℃。甾醇采用GC進行測定，分析條件為分流比為39：1，氮氣流量為40mL/min，進樣口和檢測器(FID檢測器)溫度為300℃。采用程序升溫，初始溫度為210℃，以10℃/min升至275℃，保留25min。制備例1用于說明本發(fā)明的富含角鯊烯的原料的來源。實施例1-7用于說明本發(fā)明的提取植物源角鯊烯組合物的方法。測試例1用于說明本發(fā)明的含角鯊烯的組合物的應(yīng)用。制備例1取1000g菜籽油脫臭餾出物(組成以及相關(guān)參數(shù)如表1所示，其余為雜質(zhì))，加入35g濃硫酸和300g甲醇在70℃下進行酯化反應(yīng)，將酯化反應(yīng)產(chǎn)物進行水洗并蒸發(fā)脫水至水分含量0.4重量％以下，然后加入40g甲醇鈉和300g甲醇在70℃溫度下進行轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)，然后將轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)產(chǎn)物進行第一結(jié)晶分離。在所述第一結(jié)晶分離步驟中以8℃/h的降溫速率降溫至15℃，維持這一溫度養(yǎng)晶10小時，然后進行第一次固液分離；將第一次固液分離得到的液體進行第二降溫，降溫速率為4℃/h，降溫至5℃，維持這一溫度養(yǎng)晶10小時，進行第二次固液分離。兩次固液分離所得固體(即粗植物甾醇固體)經(jīng)乙醇清洗、重結(jié)晶、干燥后得到純度為94.8重量％的植物甾醇118.14g，回收率71.79％。第二次固液分離所得濾液進行第一分子蒸餾，其中第一級分子蒸餾的壓力為15Pa，溫度為120℃，刮膜轉(zhuǎn)速為280rpm；第二級分子蒸餾的壓力為20Pa，蒸餾溫度為160℃，刮膜轉(zhuǎn)速為280rpm；第三級分子蒸餾的壓力為15Pa，蒸餾溫度為200℃，刮膜轉(zhuǎn)速為280rpm；收集第一級分子蒸餾和第二級分子蒸餾輕相餾分，得到脂肪酸酯約750g；收集第三級分子蒸餾所得輕相餾分并進行第一色譜分離，填料采用陰離子交換樹脂，流動相采用無水乙醇，上樣后用流動相進行沖洗，收集未吸附的物質(zhì)，即得到富含角鯊烯的原料。所得到的富含角鯊烯的原料的組成及含量分別為角鯊烯15重量％，甾醇28重量％。再往色譜柱中沖入二氧化碳氣體進行解吸，用流動相沖洗，收集得解吸相即為富含維生表E的液體相，將得到富集維生素E的液體相進行濃縮，再進行精制，得到純度為90.3重量％的維生素E產(chǎn)品43.19g，回收率90.70％。表1組分含量(重量％)脂肪酸和甘油酯77.01植物甾醇含量15.60維生素E含量4.30角鯊烯含量2.01實施例1提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-分子蒸餾的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：取制備例1制備得到的富含角鯊烯的原料78.65g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流2h后加入50mL蒸餾水，并保持攪拌以防止分層，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后靜置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重復(fù)洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗滌己烷相至所述己烷相呈中性時停止洗滌。旋蒸濃縮己烷相，得黃色油狀液體。分子蒸餾：將皂化后得到的油狀物進行分子蒸餾，通過三級分子蒸餾提純得到角鯊烯組合物，其中，第一級分子蒸餾的壓力為10Pa，溫度為125℃，刮膜轉(zhuǎn)速為250rpm；第二級分子蒸餾的壓力為10Pa，溫度為115℃，刮膜轉(zhuǎn)速為250rpm；第三級分子蒸餾的壓力為10Pa，溫度為108℃，刮膜轉(zhuǎn)速為250rpm。結(jié)果第三級分子蒸餾所得輕相中角鯊烯的含量為42.34重量％，甾醇的含量為3.6重量％。實施例2提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-酯化-分子蒸餾的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：取制備例1制備得到的富含角鯊烯的原料98.81g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流4h后加入50mL蒸餾水，并保持攪拌以防止分層，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后靜置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重復(fù)洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗滌己烷相至所述己烷相呈中性時停止洗滌。旋蒸濃縮己烷相，得黃色油狀液體。酯化：向上述皂化反應(yīng)后得到的產(chǎn)物中加入溶有4.4g的甲醇鈉的66g的甲醇中，于70℃回流1.5h；然后向回流反應(yīng)混合物中加入含有4g濃硫酸的30mL的甲醇，保持溫度70℃回流2小時；然后將所得產(chǎn)物用水進行洗滌直至pH值為7.0；收集油相，得到酯化后樣品。分子蒸餾：將酯化后得到的油狀物進行分子蒸餾，通過三級分子蒸餾提純得到角鯊烯組合物，其中，第一級分子蒸餾的壓力為10Pa，溫度為125℃，刮膜轉(zhuǎn)速為260rpm；第二級分子蒸餾的壓力為12Pa，溫度為118℃，刮膜轉(zhuǎn)速為260rpm；第三級分子蒸餾的壓力為10Pa，溫度為108℃，刮膜轉(zhuǎn)速為250rpm。通過HPLC分析，結(jié)果第三級分子蒸餾所得輕相中角鯊烯的含量為53.25重量％，甾醇的含量為2.9重量％。實施例3提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-酯化-真空精餾-尿素包合的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：取制備例1制備得到的富含角鯊烯的原料180.56g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流3h后加入50mL蒸餾水，并保持攪拌以防止分層，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后靜置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重復(fù)洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗滌己烷相至所述己烷相呈中性時停止洗滌。旋蒸濃縮己烷相，得黃色油狀液體。酯化：向上述皂化反應(yīng)后得到的產(chǎn)物中加入溶有9.0g的甲醇鈉的150g的甲醇中，于80℃回流2.5h；然后向回流反應(yīng)混合物中加入含有8g濃硫酸的60mL的甲醇，保持溫度80℃回流3h；然后將所得產(chǎn)物用水進行洗滌直至pH值為7.0；收集油相，得到酯化后樣品。真空精餾：將酯化后產(chǎn)品進行真空精餾分離，精餾在相當(dāng)于20個塔板高度的塔上，在300Pa的真空下進行，將酯化后樣品注入溫度為210℃的塔頂，同時充入氮氣進行保護，將輕組分的餾分蒸出，釜底所得的餾分棕黃色油狀液體。尿素包合：將240mL乙醇、60g尿素在80℃下加熱回流30min，趁熱加入35g上述真空精餾后所得物料，繼續(xù)加熱回流60min，然后在5℃冷水浴中放置3h，過濾，將所得濾液與水混合，然后用50mL正己烷萃取3次，合并正己烷相，用5重量％的NaCl溶液洗滌3次，再用去離子水洗滌3次。所得有機相在55℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至溶劑揮發(fā)完畢，得油狀物，所得物料繼續(xù)進行第二次包合，得到角鯊烯69.89重量％，甾醇含量為1.3重量％。實施例4提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-酯化-真空精餾-冷凍結(jié)晶的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：采用與實施例3相同的方法進行；酯化：采用與實施例3相同的方法進行；真空精餾：采用與實施例3相同的方法進行；冷凍結(jié)晶：將真空精餾釜底所得物料溶于300mL乙醇中加熱至45℃保持15min；然后將所得產(chǎn)物冷至室溫后在0℃下放置5小時，有大量晶體析出；過濾后，再把濾液置于-5℃下放置過夜，進行二次冷析；過濾后收集濾液，蒸干溶劑得到油狀物質(zhì)，其中得到角鯊烯68.36重量％，甾醇含量為1.2重量％。實施例5提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-分子蒸餾的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：采用與實施例1相同的方法進行；分子蒸餾：采用與實施例1相似的方法進行，所不同的是：本實施例中第二級分子蒸餾的溫度為110℃。其余均與實施例1中相同。結(jié)果第三級分子蒸餾所得輕相中角鯊烯的含量為42.96重量％，甾醇的含量為4.6重量％。實施例6提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-分子蒸餾的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：采用與實施例1相同的方法進行；分子蒸餾：采用與實施例1相似的方法進行，所不同的是：本實施例中第二級分子蒸餾的溫度為120℃。其余均與實施例1中相同。結(jié)果第三級分子蒸餾所得輕相中角鯊烯的含量為42.55重量％，甾醇的含量為3.5重量％。實施例7提取植物源角鯊烯組合物：本實施例采用皂化-分子蒸餾的工藝提取植物源角鯊烯組合物。具體地：皂化：采用與實施例1相同的方法進行；分子蒸餾：采用與實施例1相似的方法進行，所不同的是：本實施例中第二級分子蒸餾的溫度為108℃，第三級分子蒸餾的溫度為101℃。其余均與實施例1中相同。結(jié)果第三級分子蒸餾所得輕相中角鯊烯的含量為45.69重量％，甾醇的含量為2.8重量％。測試例1采用以下方法測試本發(fā)明的實施例制備得到的含角鯊烯的組合物的抗氧化作用。制備膠束分散液：將定量的亞油酸溶于少量氯仿中，再用氬氣將氯仿吹干，使亞油酸在瓶壁上形成一層薄膜，抽真空10min以除去可能殘存的氯仿，然后加入含有表面活性劑的50mmol磷酸鹽緩沖液(pH值為7.0)，緩沖液中加入0.1mmol的EDTA以絡(luò)合可能存在的微量金屬雜質(zhì)，該混合物溶液在CQ250型超聲波振蕩器中振蕩5min形成透明的膠束分散液。氧氣吸收用SP-2型氧氣吸收儀測定，氧電極的電位用YEW3066型電子電位差計記錄，靈敏度為5微伏，該裝置可測出10-8mol/L的氧氣，測定時， 將本發(fā)明的上述制備得到的膠束分散液置于帶有電磁攪拌的反應(yīng)器中，密閉，避光，37℃恒溫，用氧電極測定氧氣含量，然后用進樣器加入AAPH引發(fā)劑(18mmol/L)引發(fā)亞油酸的過氧化，或同時加入引發(fā)劑(18mmol/L)和上述實施例制備得到的含角鯊烯的組合物(10μmol/L)，連續(xù)記錄含氧量隨時間的變化，結(jié)果如圖1中所示，其中，圖中，1表示不向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和/或含角鯊烯的組合物的情況；2表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑的情況；3表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例1的含角鯊烯的組合物的情況；4表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例2的含角鯊烯的組合物的情況；5表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例3的含角鯊烯的組合物的情況；6表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例4的含角鯊烯的組合物的情況；7表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例5的含角鯊烯的組合物的情況；8表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例6的含角鯊烯的組合物的情況；9表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和實施例7的含角鯊烯的組合物的情況；10表示向所述膠束分散液中加入引發(fā)劑和根據(jù)CN105016956A中的實施例1制備得到的角鯊烯的情況。從圖中可以看出，本發(fā)明提供的含角鯊烯的組合物的抗氧化作用明顯優(yōu) 于現(xiàn)有技術(shù)提供的高純度的角鯊烯的抗氧化效果。以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁1 2 3