本發(fā)明屬于新醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及2-芳胺基吡啶、嘧啶或三嗪衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其可用于某種由某些變異形態(tài)的表皮生長因子受體(例如L858R激活突變體、delE746_A750突變體、Exonl9缺失激活突變體和T790M耐藥突變體)所介導(dǎo)的疾病或病況的治療或預(yù)防。此類化合物或其鹽、或其溶劑化物可用于很多不同癌癥的治療或預(yù)防。本發(fā)明還涉及包含所述化合物的制備中有用的中間體的制備方法。
背景技術(shù)：
癌癥患者的主要治療為放療、化療及手術(shù)治療。臨床上，約80％的肺癌為非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)，根據(jù)美國癌癥協(xié)會的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，美國每年大約新增20萬例NSCLC患者。其中65％以上確診時已屬III、IV期。除部分III期NSCLC可經(jīng)誘導(dǎo)治療手術(shù)切除，大部分需要采用化療。晚期非小細(xì)胞肺癌的治療仍具挑戰(zhàn)性，外科手術(shù)僅可以治愈大約30％的局限期病變。而化療藥物的全身毒副作用大，給患者帶來極大痛苦。因此，尋找高效低毒的靶向治療藥物成為抗腫瘤藥物發(fā)展的必然方向。
表皮生長因子受體(EGFR)是erbB受體家族的跨膜蛋白酪氨酸激酶成員。當(dāng)與生長因子配體(如表皮生長因子(EGF))結(jié)合時，受體可以與附加的EGFR分子發(fā)生同源性二聚，或與另一個家庭成員(如erbB2(HER2)、erbB3(HER3)、或erbB4(HER4))發(fā)生異源性二聚。
erbB受體的同源性二聚化和/或異源性二聚化導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)域關(guān)鍵酪氨酸殘基的磷酸化，進而導(dǎo)致對參與細(xì)胞增殖和生存的許多細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路的刺激。機體對erbB家族信號傳導(dǎo)控制的異常，促進了擴散、入侵、轉(zhuǎn)移、血管生成和腫瘤細(xì)胞的生成，并且已在許多人類癌癥(包括肺，頭部和頸部和胸部等)中得到了描述。因此，erbB受體家族為抗癌藥物開發(fā)的合理靶點。其中以EGFR為靶點的一些藥物已經(jīng)上市，包括吉非替尼(Gifitinib，IRESSATM)、厄洛替尼(Erlotinib，TARCEVATM)、拉帕替尼(TYKERBTM，TYVERBTM)等。非專利文獻1和2提供了對erbB受體信號傳導(dǎo)及其參與腫瘤發(fā)生的詳細(xì)論述。
非專利文獻3和4報道了在非小細(xì)胞肺癌中表皮生長因子受體的激活突變與對吉非替尼治療的反應(yīng)有關(guān)。最常見的表皮生長因子受體激活突變(L858R delE746_A750)導(dǎo)致相對于野生型(WT)表皮生長因子受體而言，對小分子酪氨酸激酶抑制劑(如吉非替尼和厄洛替尼)的親和力增加以及對ATP親和力的下降。最終，產(chǎn)生了對吉非替尼和厄洛替尼治療的獲得耐藥性，例如由于看門殘基T790M的突變，據(jù)報道在50％的臨床耐藥性患者中檢測到該突變。該突變不被認(rèn)為是在空間上阻礙了吉非替尼或厄洛替尼與EGFR結(jié)合，僅將與ATP親和力水平改變到與野生型(WT)表皮生長因子受體的水平。
鑒于這種突變在靶向EGFR的現(xiàn)有療法的抗性中的重要性，我們認(rèn)為可以抑制包含看門基因突變的EGFR藥物在癌癥的治療中特別有用。
相對于激活突變體形式的EGFR(如L858R EGFR突變體，或delE746_A750突變體或Exonl9缺失EGFR)和/或耐藥突變形式的EGFR(如T790M EGFR突變體)，對于可表現(xiàn)出對WT EGFR的有效特性、和/或?qū)ζ渌甘荏w的選擇性的化合物依然存在著需求，所述選擇性使得這些化合物特別有希望被開發(fā)成治療藥物。就此而言，對于某些激活或耐藥性突變形式的表皮生長因子受體結(jié)合顯示較高的抑制效果，且與WT EGFR抑制效果不明顯的化合物存在著需求。由于與WT EGFR抑制有關(guān)毒理作用小，因而預(yù)期此類化合物可以更適于用作治療劑，特別是對于癌癥的治療。為了克服T790M突變引起的相關(guān)的耐藥性，一些不可逆的ATP競爭性抑制劑(如PF00299804，CI-1033，HKI-272，AZD9291等)已經(jīng)進入臨床研究階段。不可逆抑制劑含有一個邁克爾加成的受體片段，能夠和結(jié)合位點的一個保守氨基酸殘基(Cys797)的巰基(SH)生成共價鍵。這種抑制劑和EGFR之間通過不可逆的共價鍵結(jié)合的能力通常比可逆性抑制劑和EGFR之間的結(jié)合能力強(非專利文獻5)。盡管如此，上述這些不可逆抑制劑的臨床實驗結(jié)果表明這些抑制劑仍然有一定的局限性，如由于脫靶效應(yīng)造成的毒性作用，低選擇性導(dǎo)致的副作用，無法實現(xiàn)患者體內(nèi)足夠的藥物濃度。因此，開發(fā)新型的不可逆EGFR抑制劑具有重大的臨床意義和應(yīng)用前景。
現(xiàn)有技術(shù)文獻
非專利文獻
非專利文獻1：New England Journal of Medicine,2008,vol.358,1160-1174
非專利文獻2：Biochemical and Biophysical Research Communications,2004,vol.319,1-11
非專利文獻3：Science,2004,vol.304,1497-1500
非專利文獻4：New England Journal of Medicine,2004,vol.350,2129-2139
非專利文獻5：Journal of Medicinal Chemistry,2009,vol.52,1231-1236
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明人設(shè)計合成了一系列未見文獻報道的2-芳胺基吡啶、嘧啶或三嗪衍生物，并進行了結(jié)構(gòu)表征。另外，對此系列化合物進行了細(xì)胞水平的活性測試，具有高EGFR抑制活性，同時顯示了對WT EGFR相對較低的抑制活性。
本發(fā)明涉及的2-芳胺基吡啶、嘧啶或三嗪衍生物類EGFR抑制劑可以阻斷EGFR的磷酸化過程，抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增殖和分化，因而，可以開發(fā)成為新的抗腫瘤藥物。
本發(fā)明如下所述。
1.式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物：
其中，X選自碳，Y選自碳，Z選自C-Ra，R1選自甲氧基；或X選自氮，Y選自碳，Z選自C-Rb，R1選自甲氧基或二氟甲氧基；或X選自氮，Y選自氮，Z選自C-Rc，R1選自甲氧基或二氟甲氧基；或X選自氮，Y選自氮，Z選自C-Rd，R1選自二氟甲氧基；
Ra選自3-甲基-1H-吲唑-1-基、1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基或咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基；
Rb選自苯并[d]異惡唑-3-基、1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基、2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基、2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基或1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基；
Rc選自1H-苯并[d]咪唑-1-基、1H-吲哚-7-基或1-甲基-1H-吲哚-7-基；
Rd選自1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
2.根據(jù)項1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其具有式(II)所示的結(jié)構(gòu)，
其中，Ra選自3-甲基-1H-吲唑-1-基、1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基或咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
3.根據(jù)項1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其具有式(III)所示的結(jié)構(gòu)，
其中，Rb選自苯并[d]異惡唑-3-基、1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基、2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基、2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基或1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基；
R1選自甲氧基或二氟甲氧基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
4.根據(jù)項1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其具有式(IV)所示的結(jié)構(gòu)，
其中，Rc選自1H-苯并[d]咪唑-1-基、1H-吲哚-7-基或1-甲基-1H-吲哚-7-基；
R1選自甲氧基或二氟甲氧基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
5.根據(jù)項1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其具有式(V)所示的結(jié)構(gòu)，
其中，Rd選自1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
6.根據(jù)項3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其中，Rb選自苯并[d]異惡唑-3-基、1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基或1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基。
7.根據(jù)項4所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其中，Rc為1H-吲哚-7-基。
8.根據(jù)項1～7中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其中，R2為(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基。
9.根據(jù)項1～5中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其中，所述式(I)所示的化合物選自以下化合物中的任意一種：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡咯-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺、N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺、N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡咯-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺、或N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺。
10.根據(jù)項1～9中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，其用于治療癌癥。
11.根據(jù)項10所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物，所述癌癥包括非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、食管癌、肝癌、腎癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、皮膚癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、多發(fā)性骨髓癌或?qū)嶓w瘤。
12.一種藥物組合物，包含根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑和/或載體。
13.根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物作為藥物的用途。
14.根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物在制備治療癌癥的藥物中的用途。
15.根據(jù)項14所述的用途，其中，所述癌癥包括非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、食管癌、肝癌、腎癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、皮膚癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、多發(fā)性骨髓癌或?qū)嶓w瘤。
16.在需要治療的溫血動物例如人中產(chǎn)生抗癌作用的方法，其包括：向所述動物給藥有效量的根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物。
17.根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物和附加的抗腫瘤物質(zhì)的用途，用于癌癥的同時，獨立或序貫治療。
18.一種制備根據(jù)項1～11中任一項所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其溶劑化物的方法，包括：
在有機溶劑的存在下，使下述式(VI)所示的化合物或其鹽與羧酸或羧酸衍生物反應(yīng)，
式(VI)中，X、Y、Z、R1和R2與所述式(I)同義。
19.根據(jù)項18所述的方法，其中，所述有機溶劑包括二氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或N,N-二甲基乙酰胺。
20.根據(jù)項18或19所述的方法，其中，所述羧酸或羧酸衍生物包括丙烯酸、丙烯酰氯或丙烯酸酯。
21.根據(jù)項18～20中任一項所述的方法，其中，所述式(VI)所示的化合物選自以下化合物中的任意一種：N4-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺、N4-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲苯-1,2,4-三胺、N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺、5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺、N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺、5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺、N4-(4-(1H-吲哚-7基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺、N4-(4-(1H-吲哚-7基)-1,3,5-三嗪-2-基)-5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲苯-1,2,4-三胺或5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯-1,2,4-三胺。
在本發(fā)明中，合適的式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽例如可以是酸加成鹽。例如，可以用無機酸或有機酸加成鹽?？梢允褂眠x自鹽酸、氫溴酸、硫酸或磷酸的無機鹽形成酸加成鹽?？梢允褂眠x自三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、草酸、乙酸、甲酸、苯甲酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、甲磺酸、苯磺酸或?qū)妆交撬岬挠袡C酸形成酸加成鹽。
在一個實施方式中，提供N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡咯-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
在一個實施方式中，提供N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的甲磺酸鹽。
應(yīng)當(dāng)理解的是，式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽可以以溶劑化形式和未溶劑化形式存在。例如，溶劑化形式可以是水合形式。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明包括所有這種溶劑化和未溶劑化的形式。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物可以以前藥的形式給藥，該前藥在人體或動物體內(nèi)被分解而產(chǎn)生式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物。前藥的例子包括式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物的體內(nèi)可水解酯。可通過將式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物中的羥基酯化，形成體內(nèi)可水解酯。本領(lǐng)域已知各種形式的前藥。這種前藥衍生物的例子可見于：
(a)《前藥的設(shè)計(Design of Prodrugs)》，由H.Bundgaard編輯(Elsevier,1985年)和Methods in Enzymology,第42卷，第309-396頁，由K.Wedder等人編輯(Academic Press，1985年)；
(b)《藥物設(shè)計和開發(fā)的教科書(A Textbook of Drug Design and Development)》，由Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard編輯，第5章：“前藥的設(shè)計和應(yīng)用”，由H.Bundgaard編輯，第113-191頁(1991年)；
本發(fā)明的一個方面提供式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物，其抑制一種或多種EGFR的激活或抗性突變，如L858R EGFR突變體，或delE746_A750突變體或Exonl9缺失EGFR和/或耐藥突變形式的EGFR(如T790M EGFR突變體)。所述化合物可用于對基于EGFR抑制劑的現(xiàn)有療法已產(chǎn)生或者有風(fēng)險產(chǎn)生一定程度的抗性的患者的癌癥治療。
在本發(fā)明的一個方面，提供式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的化合物，其對激活或抗性突變體形式的EGFR顯示比WT EGFR更高的抑制活性。由于與WT EGFR抑制相關(guān)的毒性降低，因而預(yù)期這種化合物可能更適于用作治療劑，尤其實用于癌癥治療。已知這種毒理學(xué)在人體中表現(xiàn)為皮疹和/或腹瀉。
另一方面，在本發(fā)明的式(I)所示的化合物的制備方法中，式(VI)所示的化合物可通過將相應(yīng)的氨基保護的胺化合物脫保護而制備。保護基的例子包括適用于保護氮原子的保護基以及形成和最后脫保護的方法，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts,《有機合成中保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)》，第二版，John Wiley&Sons，紐約，1991年。
本發(fā)明的另一方面提供這些其它的中間體。
因此，本發(fā)明的另一方面提供式(VII)所示的化合物或其鹽：
其中，X選自碳，Y選自碳，Z選自C-Ra，R1選自甲氧基；或X選自氮，Y選自碳，Z選自C-Rb，R1選自甲氧基或二氟甲氧基；或X選自氮，Y選自氮，Z選自C-Rc，R1選自甲氧基或二氟甲氧基；或X選自氮，Y選自氮，Z選自C-Rd，R1選自二氟甲氧基；
Ra選自3-甲基-1H-吲唑-1-基、1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基、吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基或咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基；
Rb選自苯并[d]異惡唑-3-基、1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基、2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基、2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基或1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基；
Rc選自1H-苯并[d]咪唑-1-基、1H-吲哚-7-基或1-甲基-1H-吲哚-7-基；
Rd選自1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基；
R2選自(2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基、4-甲基哌嗪-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基、4-(二甲氨基)哌啶-1-基、(S)-2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基或5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基。
下面給出上述實施方式中的僅部分實例：
在一個實施方式中，提供中間體化合物12a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物19a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-5-硝基苯-1,4二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物29a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物37a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-5-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物49a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物49b、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-5-硝基苯-1,4二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物78a、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(4-(1H-吲哚-7基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物78b、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供N1-(4-(1H-吲哚-7基)-1,3,5-三嗪-2-基)-2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
在一個實施方式中，提供中間體化合物83、或其鹽。
因此，在這種情況下，提供2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-5-硝基苯-1,4-二胺、或其鹽。
另一方面，在本發(fā)明的藥物組合物中，作為藥學(xué)上可接受的稀釋劑和/或載體，沒有特別限制，可以使用目前公知的稀釋劑和/或載體。
本發(fā)明的藥物組合物可采用適合于下列給藥方式的劑型：口服使用(例如片劑、錠劑、硬或軟膠囊、水懸浮劑或油懸浮劑、乳劑、分散性粉劑或顆粒劑、或者糖漿劑等)；局部使用(例如霜劑、軟膏劑、凝膠劑、水溶液或油溶液、或者懸浮液)；通過吸入給藥(例如細(xì)粉或者液體氣溶膠)；通過吹入法給藥(例如細(xì)分)或者胃腸外給藥(例如用于靜脈、皮下、肌肉內(nèi)給藥的無菌水溶液或油溶液，或者用于直腸給藥的栓劑)。
本發(fā)明的藥物組合物可通過使用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)藥用輔料的常規(guī)步驟而獲得。因此，用于口服使用的組合物可含有例如：一種或多種著色劑、甜味劑、矯味劑和/或防腐劑。
雖然每個人的需求各不相同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定本發(fā)明的藥物組合物中每種活性成分的的最佳劑量。一般情況下，本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，對哺乳動物每天口服給藥，藥量按照約0.0025到50毫克/公斤體重。但最好是每公斤體重口服給藥約0.01到10毫克。根據(jù)治療的主體，具體給藥途徑，正在治療的疾病的嚴(yán)重程度有必要改變每日劑量。
本發(fā)明的化合物或藥物組合物可用于治療各種由表皮生長因子受體激酶(EGFR)介導(dǎo)的疾病。本文中，由EGFR介導(dǎo)的疾病為各種癌癥。所述癌癥包括但不僅限于非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、食管癌、肝癌、腎癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、皮膚癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、多發(fā)性骨髓癌或?qū)嶓w瘤。
應(yīng)理解，本發(fā)明中，EGFR包括其野生型以及能導(dǎo)致疾病的各種變異體。這些變異體包括但不限于包含以下突變的變異體：T790M、L858R、L861Q、或L858R/T790M。本發(fā)明也包括EGFR的能導(dǎo)致疾病的截短形式。因此，本發(fā)明化合物或其藥物組合物可用于治療由EGFR野生型或其能導(dǎo)致疾病的各種變異體所介導(dǎo)的各種疾病，包括上文所述的各種癌癥，或抑制EGFR野生型或其能導(dǎo)致疾病的各種變異體的生物學(xué)活性。
具體實施方式
EGFR抑制劑合成部分
在以下的實施例中將進一步舉例說明本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
化合物14a-14e的合成路線如方案1所示：
方案1
(2-氟苯基)(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)甲酮(化合物4)
將化合物1(51.84g，0.32mol)溶于1,4-二氧六環(huán)(600mL)中，室溫攪拌下加入化合物2(48g，0.39mol)與化合物3(23.68g，0.11mol)，冰水浴冷卻下慢慢加入NaH(60％)(15.36g，0.39mol)，加畢撤去冰水浴，升溫至回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，慢慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干，柱層析得到41g白色固體化合物4。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.80(d,J＝4.9Hz,1H),7.77-7.75(m,1H),7.65-7.57(m,1H),7.53(d,J＝4.9Hz,1H),7.34-7.29(m,1H),7.20-7.12(m,1H),2.47(s,3H)。
(Z)-(2-氟苯基)(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)甲酮肟(化合物5)
將鹽酸羥胺(51.8g，0.75mol)加入到無水乙醇(700mL)中，室溫攪拌下加入吡啶(58.9g，0.75mol)，室溫下攪拌5min，再加入化合物4(37g，0.15mol)，升溫至回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，減壓蒸去乙醇，殘余物加水與乙酸乙酯攪拌，分液，水相再用乙酸乙酯萃取一次，合并有機相，用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干得到54g黃色油狀液體化合物5，直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+264.0。
3-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)苯并[d]異惡唑(化合物6)
將化合物5粗品(54g，0.15mol)溶于DMF(500mL)中，室溫下加入DBU(40.2g，0.26mol)，升溫至90℃反應(yīng)3小時。反應(yīng)液冷卻至室溫，慢慢倒入冰水中，攪拌析出固體，過濾，濾餅用水洗兩次，干燥得到47g黃色固體。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.71(d,J＝5.1Hz,1H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(d,J＝5.1Hz,1H),7.71-7.63(m,2H),7.52-7.42(m,1H),2.74(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+244.0。
3-(2-(甲磺酰基)嘧啶-4-基)苯并[d]異惡唑(化合物7)
將化合物6(24.3g，0.1mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，冰水浴冷卻下分批加入間氯過氧苯甲酸(25.9g，0.15mol)，加畢升至室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)液中加入飽和碳酸氫鈉溶液，攪拌10分鐘后分液，有機相再用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干得到白色固體24g，直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+276.0。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物8)
將化合物7(12g，0.044mol)加入到250mL封管反應(yīng)器中，再加入乙腈(100mL)與氨水(30mL)，升至70℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻，過濾得到6g白色固體。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.52-8.50(m,2H),7.70-7.62(m,2H),7.53(d,J＝5.1Hz,1H),7.46-7.42(m,1H),5.30(s,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+213.1。
1-溴-4-氟-2甲氧基-5-硝基苯(化合物10)
將化合物9(15g，0.073mol)溶于濃硫酸(150mL)中，冰鹽浴冷卻下慢慢加入硝酸鉀(7.4g，0.073mol)，加畢升至室溫反應(yīng)1h。反應(yīng)液慢慢倒入冰水中，攪拌析出固體，過濾，濾餅用水洗兩次，烘干得到灰色固體13.2g。MS(ESI)(m/z):[M+H]+250.9。
N1-(4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯基)-N1，N2，N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(化合物11a)
將化合物10(15g，0.06mol)溶于乙腈(150mL)中，加入N,N,N’-三甲基乙二胺(6.74g，0.066mol)與碳酸鉀(16.56g，0.12mol)，升溫至回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗兩次，合并濾液，減壓蒸干，柱層析得到黃色油狀物15g。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.10(s,1H),6.62(s,1H),3.94(s,3H),3.33(t,J＝6.9Hz,2H),2.89(s,3H),2.57(t,J＝6.9Hz,2H),2.26(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+332.1。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物12a)
將化合物8(100mg，0.47mmol)溶于甲苯(10mL)中，加入化合物11a(236mg，0.71mmol)，叔丁醇鉀(162mg，1.44mmol)，2-二環(huán)己基磷-2,4,6-三異丙基聯(lián)苯(X-Phos)(448mg，0.94mmol)與三(二亞芐基丙酮)二鈀(431mg，0.47mmol)，用氮氣置換三次后，升溫至90℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗兩次，合并濾液，減壓蒸干，柱層析得到黃色粉末60mg。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.04(s,1H),8.61(d,J＝4.7Hz,1H),8.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.70-7.63(m，4H),7.51-7.47(m,1H),6.76(s,1H),4.02(s,3H),3.37(m,2H),2.91(s,3H),2.69(m,2H),2.36(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+464.2。
N4-(4-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物13a)
將化合物12a(60mg，0.13mmol)溶于乙醇(9mL)與水(3mL)中，加入還原鐵粉(43mg，0.77mmol)，氯化銨(5mg，0.09mmol)，升溫至回流反應(yīng)2h。反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，濾液用飽和碳酸鉀調(diào)至堿性，二氯甲烷萃取兩次，合并有機相，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干，刮板得到黃色粉末40mg。MS(ESI)(m/z):[M+H]+434.2。
實施例1：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物14a)
將化合物13a(40mg，0.14mmol)溶于二氯甲烷(10mL)與叔丁醇(1mL)中，冰鹽浴冷卻下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI，35mg，0.28mmol)，三乙胺(19mg，0.28mmol)與丙烯酸(13mg，0.28mmol)，加畢升至室溫反應(yīng)2h。反應(yīng)液中加入飽和碳酸鉀溶液，攪拌10min后分液，有機相干燥，蒸干，制備色譜純化得到淡黃色固體8mg。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.23(s,1H),9.50(s,1H),8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.68-7.57(m,4H),7.38-7.29(m,1H),6.85(s,1H),6.45-6.28(m,2H),5.71(m,1H),3.93(s,3H),2.96-2.88(m,2H),2.75(s,3H),2.39-2.28(m,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+488.2。
1-(4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(化合物11b)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成4-甲基哌嗪之外，與化合物11a同樣地制備化合物11b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.23(s,1H),6.52(s,1H),3.98(s,3H),3.20-3.10(m,4H),2.69-2.59(m,4H),2.40(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+330.0。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物12b)
將化合物8(200mg，0.94mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(10mL)中，加入化合物11b(311mg，0.94mmol)，碳酸銫(1.23g，3.77mmol)，2-二環(huán)己基磷-2,4,6-三異丙基聯(lián)苯(X-Phos)(270mg，0.57mmol)與三(二亞芐基丙酮)二鈀(173mg，0.19mmol)，用氮氣置換三次后，升溫至90℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗兩次，合并濾液，減壓蒸干，柱層析得到紅色油狀物180mg。MS(ESI)(m/z):[M+H]+462.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物13b)
除了將化合物12a替換成化合物12b之外，與化合物13a同樣地制備化合物13b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+432.2。
實施例2：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物14b)
除了將化合物13a替換成化合物13b之外，與化合物14a同樣地制備化合物14b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.45(s,1H),8.68(d,J＝5.0Hz,1H),8.56-8.54(m,2H),7.68-7.58(m,4H),7.39-7.35(m,1H),6.85(s,1H),6.44-6.23(m,2H),5.78(d,J＝9.1Hz,1H),3.93(s,3H),2.99-2.98(m,4H),2.69(m,4H),2.45(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+486.2。
1-(4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(化合物11c)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基哌啶-4-胺之外，與化合物11a同樣地制備化合物11c。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(s,1H),6.51(s,1H),3.97(s,3H),3.38(d,J＝12.4Hz,2H),2.93-2.87(m,2H),2.45-2.31(m,7H),1.95-1.92(m,2H),1.84-1.74(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+358.1。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物12c)
除了將化合物11a替換成化合物11c之外，與化合物12a同樣地制備化合物12c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.18(s,1H),8.66(d,J＝5.1Hz,1H),8.55(d,J＝7.7Hz,1H),7.78-7.63(m,4H),7.55-7.50(m,1H),6.67(s,1H),4.05(s,3H),3.42-3.36(m,2H),2.94-2.78(m,2H),2.37-2.35(m,7H),1.96-1.83(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+490.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-6-甲氧基苯-1,3-二胺(化合物13c)
除了將化合物12a替換成化合物12c之外，與化合物13a同樣地制備化合物13c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+460.2。
實施例3：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(化合物14c)
除了將化合物13a替換成化合物13c之外，與化合物14a同樣地制備化合物14c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.39(s,1H),8.65(d,J＝5.0Hz,1H),8.52(d,J＝7.9Hz,1H),8.41(s,1H),7.75-7.53(m,4H),7.36(t,J＝7.4Hz,1H),6.76(s,1H),6.37-6.36(m,2H),5.78-5.77(m,1H),3.92(s,3H),3.18-3.15(m,2H),2.81-2.76(m,3H),2.67(s,6H),2.25-2.22(m,2H),1.98-1.96(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+514.3。
(S)-1-(1-(4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯基)吡咯烷-2-基)-N,N-二甲基甲胺(化合物11d)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成(S)-N,N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)-甲胺之外，與化合物11a同樣地制備化合物11d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(s,1H),6.71(s,1H),3.95(s,3H),3.62-3.55(m,1H),2.72-2.61(m,2H),2.49-2.23(m,8H),2.09-1.71(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+359.1。
(S)-4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物12d)
除了將化合物11a替換成化合物11d之外，與化合物12a同樣地制備化合物12d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+490.2。
(S)-N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-6-甲氧基苯-1,3-二胺(化合物13d)
除了將化合物12a替換成化合物12d之外，與化合物13a同樣地制備化合物13d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+460.2。
實施例4：(S)-N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(化合物14d)
除了將化合物13a替換成化合物13d之外，與化合物14a同樣地制備化合物14d。1H NMR(400MHz,CDCl3)；δ12.02(s,1H),9.55(s,1H),9.29(s,1H),8.66(d,J＝5.0Hz,1H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.73-7.53(m,4H),7.45(m,1H),6.72(s,1H),6.37(d,J＝16.1Hz,1H),5.72(d,J＝11.4Hz,1H),3.94(s,3H),2.97(m,1H),2.83-2.20(m,8H),2.13-1.60(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+514.3。
2-(4-溴-5-甲氧基-2-硝基苯基)-5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷(化合物11e)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷之外，與化合物11a同樣地制備化合物11e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(s,1H),5.97(s,1H),4.15(d,J＝9.2Hz,2H),3.96(s,3H),3.75(d,J＝9.2Hz,2H),2.77(t,J＝7.2Hz,2H),2.50(s,3H),2.15-2.11(m,2H),1.88-1.75(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+357.1。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-甲氧基-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物12e)
除了將化合物11a替換成化合物11e之外，與化合物12a同樣地制備化合物12e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+488.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物13e)
除了將化合物12a替換成化合物12e之外，與化合物13a同樣地制備化合物13e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+458.2。
實施例5：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物14e)
除了將化合物13a替換成化合物13e之外，與化合物14a同樣地制備化合物14e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.58(d,J＝5.0Hz,1H),8.55-8.23(m,2H),7.72-7.51(m,4H),7.48-7.38(m,1H),7.18-6.91(m,1H),6.53-6.14(m,3H),5.78-5.64(m,1H),4.10-4.06(m,2H),3.98-3.95(m,3H),3.77-3.71(m,2H),2.93-2.76(m,2H),2.60-2.52(m,3H),2.28-2.12(m,2H),1.89-1.84(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+512.2。
化合物21a-21f的合成路線如方案2所示：
方案2
1-溴-2-(二氟甲氧基)-4-氟苯(化合物16)
將化合物15(80g，0.42mol)溶于DMF(800mL)中，加入碳酸鈉(266g，2.5mol)，升溫至90℃，滴加二氟氯乙酸(191g，1.46mol)，滴畢保持90℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫，慢慢倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取兩次，合并有機相，用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，旋干得到粗品95g，直接用于下一步反應(yīng)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.62-7.58(m,1H),7.04-7.01(m,1H),6.93-6.88(m,1H),6.57(t,J＝72.8Hz,1H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+240.9。
1-溴-2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯(化合物17)
除了將化合物9替換成化合物16之外，與化合物10同樣地制備化合物17。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝11.1Hz,1H),6.71(t,J＝71.0Hz,1H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+286.9。
N1-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)-N1,N2,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(化合物18a)
除了將化合物10替換成化合物17之外，與化合物11a同樣地制備化合物18a。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.03(s,1H),7.03(s,1H),6.60(t,J＝72.6Hz,1H),3.33(t,J＝6.8Hz,2H),2.87(s,3H),2.57(t,J＝6.8Hz,2H),2.28(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+369.0。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物19a)
除了將化合物11a替換成化合物18a之外，與化合物12a同樣地制備化合物19a。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.00(s,1H),8.66(d,J＝4.9Hz,1H),8.45(d,J＝7.7Hz,1H),7.69-7.66(m,3H),7.60-7.45(m,2H),7.08(s,1H),6.70(t,J＝72.3Hz,1H),3.30(t,J＝7.0Hz,2H),2.90(s,3H),2.62-2.53(m,2H),2.29(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+500.2。
N4-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物20a)
除了將化合物12a替換成化合物19a之外，與化合物13a同樣地制備化合物20a。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.61(d,J＝5.0Hz,1H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(s,1H),7.73-7.60(m,3H),7.49-7.44(m,2H),6.94(s,1H),6.49(t,J＝74.4Hz,1H),2.97(t,J＝6.4Hz,2H),2.72(s,3H),2.46(t,J＝6.4Hz,2H),2.31(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+470.2。
實施例6：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物21a)
除了將化合物13a替換成化合物20a之外，與化合物14a同樣地制備化合物21a。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.33(s,1H),9.53(s,1H),8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.67-7.57(m,3H),7.45(s,1H),7.34(t,J＝7.5Hz,1H),7.12(s,1H),6.77-6.28(m,3H),5.75-5.72(m,1H),2.96-2.84(m,2H),2.75(s,3H),2.39-2.32(m,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+524.2。
1-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(化合物18b)
除了將化合物10替換成化合物17，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成4-甲基哌嗪之外，與化合物11a同樣地制備化合物18b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+366.0。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物19b)
除了將化合物11a替換成化合物18b之外，與化合物12a同樣地制備化合物19b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63(d,J＝5.0Hz,1H),8.53(d,J＝8.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.77-7.61(m,3H),7.55(s,1H),7.46(t,J＝7.4Hz,1H),6.97(s,1H),6.52(t,J＝74.0Hz,1H),3.21(m,4H),3.03(m,4H),2.68(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+498.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物20b)
除了將化合物12a替換成化合物19b之外，與化合物13a同樣地制備化合物20b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+468.2。
實施例7：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物21b)
除了將化合物13a替換成化合物20b之外，與化合物14a同樣地制備化合物21b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.48(s,1H),8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.63(s,1H),8.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.73-7.55(m,3H),7.47(s,1H),7.36(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(s,1H),6.80-6.25(m,3H),5.82(d,J＝9.8Hz,1H),2.98(m,4H),2.71(m,4H),2.47(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+522.2。
1-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)-N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺(化合物18c)
除了將化合物10替換成化合物17，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物11a同樣地制備化合物18c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+366.1。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物19c)
除了將化合物11a替換成化合物18c之外，與化合物12a同樣地制備化合物19c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.98(s,1H),8.63(s,1H),8.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.78-7.61(m,3H),7.52-7.37(m,2H),6.67(t,J＝72.3Hz,1H),6.45(s,1H),4.14(t,J＝7.7Hz,2H),3.76-3.73(m,2H),3.27-3.18(m,1H),2.23(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+498.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)苯-1,3-二胺(化合物20c)
除了將化合物12a替換成化合物19c之外，與化合物13a同樣地制備化合物20c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+468.2。
實施例8：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物21c)
除了將化合物13a替換成化合物20c之外，與化合物14a同樣地制備化合物21c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.77(s,1H),8.61(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(d,J＝7.9Hz,1H),7.72-7.49(m,4H),7.39-7.36(m,2H),6.47-6.33(m,4H),5.79(d,J＝8.4Hz,1H),3.94(t,J＝6.6Hz,2H),3.72(t,J＝6.3Hz,2H),3.26-3.14(m,1H),2.28(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+522.2。
1-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺(化合物18d)
除了將化合物10替換成化合物17，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基哌啶-4-胺之外，與化合物11a同樣地制備化合物18d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+394.0。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物19d)
除了將化合物11a替換成化合物18d之外，與化合物12a同樣地制備化合物19d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+526.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)苯-1,3-二胺(化合物20d)
除了將化合物12a替換成化合物19d之外，與化合物13a同樣地制備化合物20d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+496.2。
實施例9：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物21d)
除了將化合物13a替換成化合物20d之外，與化合物14a同樣地制備化合物21d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.44(s,1H),8.67(d,J＝5.0Hz,1H),8.55(s,1H),8.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.75-7.55(m,3H),7.47(s,1H),7.35(t,J＝7.4Hz,1H),7.04(s,1H),6.79-6.31(m,3H),5.83-5.80(m,1H),3.17-3.14(m,2H),2.83-2.66(m,3H),2.63(s,6H),2.24-2.21(m,2H),2.01-1.93(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+550.2。
(S)-1-(1-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)吡咯烷-2-基)-N,N-二甲基甲胺(化合物18e)
除了將化合物10替換成化合物17，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成(S)-N,N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)-甲胺之外，與化合物11a同樣地制備化合物18e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+394.0。
(S)-4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物19e)
除了將化合物11a替換成化合物18e之外，與化合物12a同樣地制備化合物19e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+526.2。
(S)-N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-(二氟甲氧基)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)苯-1,3-二胺(化合物20e)
除了將化合物12a替換成化合物19e之外，與化合物13a同樣地制備化合物20e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+496.2。
實施例10：(S)-N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物21e)
除了將化合物13a替換成化合物20e之外，與化合物14a同樣地制備化合物21e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.87(s,1H),9.31(s,1H),8.66(d,J＝5.1Hz,1H),8.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.73-7.55(m,3H),7.44-7.41(m,2H),6.96(s,1H),6.85-6.32(m,3H),5.75(d,J＝11.6Hz,1H),3.83-3.52(m,2H),3.01-2.95(m,1H),2.53(s,6H),2.32-1.95(m,4H),1.88-1.78(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+550.2。
2-(4-溴-5-(二氟甲氧基)-2-硝基苯基)-5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛(化合物18f)
除了將化合物10替換成化合物17，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷之外，與化合物11a同樣地制備化合物18f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(s,1H),6.84-6.36(m,2H),4.15(d,J＝9.2Hz,2H),3.73(d,J＝9.2Hz,2H),2.79(t,J＝7.2Hz,2H),2.51(s,3H),2.21-2.05(m,2H),1.86-1.79(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+392.0。
4-(苯并[d]異惡唑-3-基)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)嘧啶-2胺(化合物19f)
除了將化合物11a替換成化合物18f之外，與化合物12a同樣地制備化合物19f。MS(ESI)(m/z):[M+H]+524.2。
N1-(4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)-6-(二氟甲氧基)-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物20f)
除了將化合物12a替換成化合物19f之外，與化合物13a同樣地制備化合物20f。MS(ESI)(m/z):[M+H]+494.2。
實施例11：N-(5-((4-(苯并[d]異惡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物21f)
除了將化合物13a替換成化合物20f之外，與化合物14a同樣地制備化合物21f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.67(s,1H),8.60(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.72-7.48(m,4H),7.48-7.36(m,2H),6.81-6.30(m,4H),5.79(m,1H),4.10(d,J＝8.0Hz,2H),3.71(d,J＝7.7Hz,2H),2.93(m,2H),2.64(s,3H),2.31-2.17(m,2H),1.91-1.90(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+548.2。
化合物31a-31f的合成路線如方案3所示：
方案3
1-甲基-3-(三丁基錫)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(化合物25)
將3-溴-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(化合物24，參考文獻Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2014,24,3238-3242合成)(2.4g,11.4mmol)溶于干燥的THF(60mL)中,在-70℃下滴加正丁基鋰(2.5M正己烷溶液，5.0mL，12.5mmol)，滴加完成后體系保持-70℃繼續(xù)攪拌30min。然后在相同溫度下滴加三丁基氯化錫(4.06g,12.5mmol)，加完后緩慢升到室溫攪拌3h。加入500mL乙酸乙酯,依次用水和飽和食鹽水洗滌有機相，干燥濃縮后得到粗品黃色油狀物(5.4g，純度70％)。該粗品不用純化可直接用于下一步反應(yīng)。
3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(化合物26)
將化合物25(5.4g，純度70％，9.0mmol)溶于DMF(70mL)中，依次加入2,4-二氯嘧啶(1.34g,9.0mmol)，氯化鋰(1.89g,45.0mmol)和雙三苯基磷二氯化鈀(320mg,0.45mmol)。體系用氮氣置換三次，加熱到100℃反應(yīng)16h。冷至室溫后，加入大量乙酸乙酯，依次用水和飽和食鹽水洗滌有機相。有機相干燥濃縮后過柱純化得到淡黃色固體粗品(500mg，純度80％)，該粗品不用純化可直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+245.0。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物28)
將化合物26(500mg，純度80％，1.64mmol)溶于仲戊醇(20mL)，依次加入對甲苯磺酸(420mg,2.46mmol)和化合物27(310mg,1.64mmol)。將混合物加熱到110℃反應(yīng)18h。反應(yīng)結(jié)束后，體系降到室溫再繼續(xù)攪拌30min后過濾，固體沉淀用少量仲戊醇洗滌后得到未干燥的黃色粗品化合物。該粗品用適量乙腈打漿過濾得到淡黃色固體化合物(650mg)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+395.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物29a)
室溫下向化合物28(650mg，1.65mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(15mL)的溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(280mg，2.14mmol)和N,N,N'-三甲基乙二胺(202mg，1.98mmol)。混合物加熱到70℃反應(yīng)6小時，反應(yīng)完成后，加入乙酸乙酯和水。充分?jǐn)嚢?，加硅藻土過濾，有機相用飽和食鹽水多次洗滌，干燥濃縮后得到深紅色固體化合物29a(450mg,57％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.77(s,1H),δ8.65(s,1H),8.64-8.60(m,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝5.2Hz,1H),7.72-7.68(m,1H),7.56(s,1H),7.24-7.20(m,1H),6.67(s,1H),3.99(s,6H),3.30(t,J＝7.2Hz,2H),3.01(s,3H),2.58(t,J＝7.2Hz,2H),2.27(s,6H)；MS(ESI)(m/z):MS(ESI)(m/z):[M+H]+477.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物30a)
將化合物29a(450mg,0.95mmol)溶于乙醇(18mL)/H2O(6mL)，加入鐵粉(300mg,5.70mmol)和氯化銨(36mg,0.67mmol)。將體系加熱至回流反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)物倒入二氯甲烷:甲醇＝10:1的溶液中，再加入適量水?dāng)嚢?。加硅藻土過濾，有機相干燥濃縮后柱層析純化(二氯甲烷:甲醇＝100:1至10:1)得到淡黃色固體30a(200mg,47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.62(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.17(d,J＝5.2Hz,1H),8.15(s,1H),7.69-7.65(m,1H),7.58(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.70(s,1H),3.89(s,3H),3.84(s,3H),3.04(t,J＝7.2Hz,2H),2.68(s,3H),2.50(t,J＝7.2Hz,2H),2.34(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+447.2。
實施例12：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物31a)
將化合物30a(120mg，0.27mmol)溶于二氯甲烷(10mL)/叔丁醇(1mL)，在0-5℃下依次加入三乙胺(50mg，0.54mmol)，EDCI(100mg，0.54mmol)和丙烯酸(40mg，0.54mmol)。室溫攪拌2h，加入適量乙酸乙酯，用水洗滌有機相。有機相干燥濃縮后柱層析純化得到類白色固體31a(80mg，59％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.24(bs,1H),9.94(s,1H),9.56(bs,1H),8.61-8.57(m,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.77(s,1H),7.70-7.65(m,1H),7.21-7.15(m,1H),6.80(s,1H),6.50-6.34(m,2H),5.72(m,1H),4.04(s,3H),3.89(s,3H),2.90(t,J＝7.2Hz,2H),2.71(s,3H),2.30-2.22(m,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+501.3。
N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物29b)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成4-甲基哌嗪之外，與化合物29a同樣地制備化合物29b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+475.1。
6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物30b)
除了將化合物29a替換成化合物29b之外，與化合物30a同樣地制備化合物30b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63-8.59(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.22(s,1H),8.17(d,J＝5.2Hz,1H),8.15(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.56(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.71(s,1H),3.89(s,3H),3.84(s,3H),2.94(m,4H),2.58(m,4H),2.37(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+445.2。
實施例13：N-(4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物31b)
除了將化合物30a替換成化合物30b之外，與化合物31a同樣地制備化合物31b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.91(bs,1H),9.47(s,1H),8.80(bs,1H),8.59-8.55(m,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.77(s,1H),7.67-7.63(m,1H),7.20-7.16(m,1H),6.80(s,1H),6.48-6.30(m,2H),5.78(m,1H),4.02(s,3H),3.88(s,3H),2.92(m,4H),2.62(m,4H),2.41(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+499.2。
N-(4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物29c)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物29a同樣地制備化合物29c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.82(s,1H),8.73(s,1H),8.64(d,J＝4.4Hz,1H),8.47(d,J＝5.1Hz,1H),8.27(d,J＝5.2Hz,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.26-7.23(m,1H),6.07(s,1H),4.22(t,J＝7.6Hz,2H),4.01(s,6H),3.80-3.72(m,2H),3.25-3.22(m,1H),2.25(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+475.2。
4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物30c)
除了將化合物29a替換成化合物29c之外，與化合物30a同樣地制備化合物30c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+445.2。
實施例14：N-(2-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物31c)
除了將化合物30a替換成化合物30c之外，與化合物31a同樣地制備化合物31c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.40(s,1H),9.23(s,1H),8.60(d,J＝4.5Hz,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.21(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.21-7.18(m,1H),6.56-6.40(m,3H),5.80-5.78(m,1H),4.01(s,3H),3.92(s,3H),3.88(t,J＝6.8Hz,2H),3.64(t,J＝6.5Hz,2H),3.17-3.11(m,1H),2.24(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+499.2。
N-(4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物29d)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基哌啶-4-胺之外，與化合物29a同樣地制備化合物29d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.86(s,1H),8.67(s,1H),8.63-8.58(m,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝5.2Hz,1H),7.73-7.67(m,1H),7.56(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.59(s,1H),3.99(s,3H),3.98(s,3H),3.38(m,2H),2.85(m,2H),2.48-2.22(m,7H),1.98-1.74(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+503.2。
4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物30d)
除了將化合物29a替換成化合物29d之外，與化合物30a同樣地制備化合物30d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63-8.59(m,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.17(d,J＝5.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.70-7.65(m,1H),7.54(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.67(s,1H),3.89(s,3H),3.84(s,3H),3.18(m,2H),2.68-2.60(m,2H),2.34(s,6H),2.28(m,1H),1.95(m,2H),1.68(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+473.2。
實施例15：N-(2-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物31d)
除了將化合物30a替換成化合物30d之外，與化合物31a同樣地制備化合物31d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.89(bs,1H),9.48(s,1H),8.77(bs,1H),8.61-8.57(m,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.74(s,1H),7.69-7.65(m,1H),7.21-7.15(m,1H),6.76(s,1H),6.44-6.30(m,2H),5.78(m,1H),4.02(s,3H),3.89(s,3H),3.03(m,2H),2.74(m,2H),2.36(s,6H),2.19(m,1H),2.04(m,2H),1.64(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+527.2。
(S)-N-(4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物29e)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成(S)-N,N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)-甲胺之外，與化合物29a同樣地制備化合物29e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+503.2。
(S)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物30e)
除了將化合物29a替換成化合物29e之外，與化合物30a同樣地制備化合物30e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+473.3。
實施例16：(S)-N-(2-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物31e)
除了將化合物30a替換成化合物30e之外，與化合物31a同樣地制備化合物31e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.83(s,1H),9.43(s,1H),9.39(s,1H),8.65-8.56(m,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(d,J＝5.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.73-7.67(m,1H),7.22-7.19(m,1H),7.06(d,J＝28.2Hz,1H),6.68(s,1H),6.51-6.46(m,1H),5.79-5.76(m,1H),4.02(s,3H),3.91(s,3H),3.75-3.66(m,1H),2.93-2.81(m,2H),2.65(s,6H),2.40-2.21(m,2H),2.19-1.89(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+527.3。
N-(2-甲氧基-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物29f)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷之外，與化合物29a同樣地制備化合物29f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.75(s,1H),8.70(s,1H),8.65-8.58(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.73-7.67(m,1H),7.50(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.05(s,1H),4.13(m,2H),3.98(s,6H),3.76(m,2H),2.74(m,2H),2.50(s,3H),2.12(m,2H),1.81(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+501.2。
6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物30f)
除了將化合物29a替換成化合物29f之外，與化合物30a同樣地制備化合物30f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63-8.59(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J＝5.2Hz,1H),8.05(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.43(s,1H),7.22-7.17(m,1H),6.35(s,1H),4.13-3.54(m,10H),2.76(m,2H),2.53(s,3H),2.20(m,2H),1.82(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+471.2。
實施例17：N-(4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物31f)
除了將化合物30a替換成化合物30f之外，與化合物31a同樣地制備化合物31f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.22(bs,1H),9.14(s,1H),8.59-8.55(m,1H),8.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.18(d,J＝5.2Hz,1H),7.68-7.64(m,1H),7.54(s,1H),7.41(s,1H),7.20-7.14(m,1H),6.50-6.30(m,3H),5.76(m,1H),3.99(s,3H),3.92(m,2H),3.91(s,3H),3.76-3.64(m,2H),2.78-2.74(m,2H),2.53(s,3H),2.22-2.18(m,2H),1.86-1.82(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+525.2。
化合物39a-39f的合成路線如方案4所示：
方案4
2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基苯(化合物33)
將化合物32(10g，63.7mmol)溶于DMF(100mL)中，攪拌均勻，然后加入碳酸鈉(40.5g，382.1mmol)，油浴升溫至90℃后再慢慢加入二氟氯乙酸(29.1g，223.0mmol)，1h后TLC監(jiān)控反應(yīng)完全。后處理將反應(yīng)液慢慢倒入冰水(200mL)中，用乙酸乙酯(100mL，2次)萃取，有機相用飽和食鹽水洗兩遍，適量硫酸鈉干燥，柱層析純化，最終得到黃色油狀目標(biāo)產(chǎn)物33(11g，83.44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.08-8.04(m,1H),7.21-7.09(m,2H),6.88-6.48(m,1H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+208.0。
2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-苯胺(化合物34)
將化合物33(11g，53.11mmol)溶于乙醇(100mL)中然后加入Pd/C(2.2g)，用H2置換3次，用氫氣球加氫反應(yīng)，室溫反應(yīng)過夜。后處理用硅藻土抽濾反應(yīng)液，濾液直接旋干得到較純產(chǎn)物34(9.0g，95.74％)，棕色油狀。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.89-6.83(m,1H),6.83-6.71(m,2H),6.70-6.31(m,1H),3.59(s,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+178.0。
2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯胺(化合物35)
將化合物34(9g，50.8mmol)溶于濃硫酸(100mL)中，冰水浴降溫，慢慢加入硝酸鉀(5.14g，50.8mmol)，1h反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入冰水中淬滅，二氯甲烷萃取，硫酸鈉干燥，柱層析純化得到目標(biāo)產(chǎn)物35(10.4g，92.15％)，橙紅色固體。MS(ESI)(m/z):[M+H]+223.0。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物36)
將化合物26(1.2g,，純度60％，2.95mmol)溶于仲戊醇(30mL)，依次加入對甲苯磺酸(760mg，4.4mmol)和化合物35(650mg，2.95mmol)。將混合物加熱到110℃反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，體系降到室溫再繼續(xù)攪拌30min后過濾，固體沉淀用少量仲戊醇洗滌后得到未干燥的黃色粗品化合物36。該粗品用適量乙腈打漿過濾得到淡黃色固體化合物36(800mg，63％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+431.1。
2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物37a)
室溫下向化合物36(600mg，1.39mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(15mL)的溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(233mg，1.80mmol)和N,N,N'-三甲基乙二胺(170mg，1.67mmol)?；旌衔锛訜岬?0℃反應(yīng)2h，反應(yīng)完成后，加入乙酸乙酯和水。充分?jǐn)嚢?，加硅藻土過濾，有機相用飽和食鹽水多次洗滌，干燥濃縮后得到深紅色固體化合物37a(680mg，96％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.68(s,1H),8.62-8.58(m,1H),8.48(s,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.70-7.64(m,1H),7.36(s,1H),7.23-7.19(m,1H),7.01(s,1H),6.67(t,J＝72Hz,1H),3.95(s,3H),3.23(t,J＝7.2Hz,2H),2.88(s,3H),2.54(t,J＝7.2Hz,2H),2.26(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+513.2。
5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺)(化合物38a)
將化合物37a(700mg，1.37mmol)溶于乙醇(15mL)/H2O(5mL)，加入鐵粉(460mg，8.2mmol)和氯化銨(50mg，0.96mmol)。將體系加熱至回流反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)物倒入二氯甲烷:甲醇＝10:1的溶液中，再加入適量水?dāng)嚢?。加硅藻土過濾，有機相干燥濃縮后柱層析純化得到淡黃色固體38a(300mg，45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63-8.59(m,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.24-8.18(m,2H),8.05(s,1H),7.70-7.65(m,1H),7.28(s,1H),7.23-7.18(m,1H),6.88(s,1H),6.44(t,J＝72Hz,1H),3.89(s,3H),2.95(t,J＝7.2Hz,2H),2.66(s,3H),2.45(t,J＝7.2Hz,2H),2.30(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+483.2。
實施例18：N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物39a)
將化合物38a(120mg，0.25mmol)溶于二氯甲烷(10mL)/叔丁醇(1mL)，在0-5℃下依次加入三乙胺(50mg，0.50mmol)，EDCI(96mg，0.50mmol)和丙烯酸(36mg，0.50mmol)。室溫攪拌2h，加入適量乙酸乙酯，用水洗滌有機相。有機相干燥濃縮后柱層析純化得到類白色固體39a(60mg，45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.36(bs,1H),10.01(s,1H),9.47(bs,1H),8.62-8.58(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.70-7.65(m,1H),7.51(s,1H),7.21-7.15(m,1H),7.07(s,1H),6.68-6.32(m,3H),5.76(m,1H),4.01(s,3H),2.86(t,J＝7.2Hz,2H),2.70(s,3H),2.32-2.22(m,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+537.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物37b)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成4-甲基哌嗪之外，與化合物37a同樣地制備化合物37b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+511.2。
6-(二氟甲氧基)-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物38b)
除了將化合物37a替換成化合物37b之外，與化合物38a同樣地制備化合物38b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.64-8.60(m,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.24-8.18(m,2H),8.09(s,1H),7.71-7.67(m,1H),7.27(s,1H),7.22-7.18(m,1H),6.88(s,1H),6.43(t,J＝72Hz,1H),4.04(bs,2H),3.91(s,3H),2.92(m,4H),2.58(m,4H),2.37(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+481.2。
實施例19：N-(4-(二氟甲氧基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物39b)
除了將化合物38a替換成化合物38b之外，與化合物39a同樣地制備化合物39b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.96(bs,1H),9.38(s,1H),8.85(bs,1H),8.62-8.58(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝5.2Hz,1H),7.70-7.56(m,1H),7.50(s,1H),7.20-7.16(m,1H),7.05(s,1H),6.70-6.30(m,3H),5.82(m,1H),4.00(s,3H),2.92(m,4H),2.62(m,4H),2.41(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+535.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物37c)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物37a同樣地制備化合物37c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.81(s,1H),8.65-8.63(m,1H),8.62(s,1H),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝5.2Hz,1H),7.74-7.71(m,1H),7.34(s,1H),7.27-7.23(m,1H),6.66(t,J＝72.4Hz,1H),6.43(s,1H),4.16(t,J＝7.7Hz,2H),4.00(s,3H),3.76-3.72(m,2H),3.28-3.18(m,1H),2.24(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+511.2。
6-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物38c)
除了將化合物37a替換成化合物37c之外，與化合物38a同樣地制備化合物38c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+481.2。
實施例20：N-(4-(二氟甲氧基)-2-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物39c)
除了將化合物38a替換成化合物38c之外，與化合物39a同樣地制備化合物39c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(s,1H),9.25(s,1H),8.62(d,J＝3.8Hz,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.82(s,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.41(s,1H),7.23-7.21(m,1H),6.80(s,1H),6.77-6.33(m,3H),5.85(d,J＝8.9Hz,1H),4.03(s,3H),3.90(t,J＝6.5Hz,2H),3.66(t,J＝6.6Hz,2H),3.28-3.14(m,1H),2.28(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+535.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物37d)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基哌啶-4-胺之外，與化合物37a同樣地制備化合物37d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.78(s,1H),8.63-8.59(m,1H),8.53(s,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.73-7.65(m,1H),7.42(s,1H),7.25-7.19(m,1H),6.92(s,1H),6.65(t,J＝72Hz,1H),3.95(s,3H),3.32(m,2H),2.82(m,2H),2.44-2.22(m,7H),1.98-1.74(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+539.2。
6-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物38d)
除了將化合物37a替換成化合物37d之外，與化合物38a同樣地制備化合物38d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.62-8.58(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.22-8.16(m,2H),8.05(s,1H),7.68-7.63(m,1H),7.28(s,1H),7.23-7.17(m,1H),6.83(s,1H),6.44(t,J＝72Hz,1H),4.05(bs,2H),3.87(s,3H),3.18(m,2H),2.64-2.54(m,2H),2.34(s,6H),2.26(m,1H),1.95(m,2H),1.68(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+509.2。
實施例21：N-(4-(二氟甲氧基)-2-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物39d)
除了將化合物38a替換成化合物38d之外，與化合物39a同樣地制備化合物39d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.95(s,1H),9.40(s,1H),8.84(s,1H),8.62-8.58(m,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.71-7.65(m,1H),7.49(s,1H),7.20-7.16(m,1H),7.02(s,1H),6.70-6.30(m,3H),5.80(m,1H),4.01(s,3H),3.07-3.03(m,2H),2.76-2.70(m,2H),2.36(s,6H),2.19(m,1H),2.04(m,2H),1.64(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+563.2。
(S)-N-(2-(二氟甲氧基)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物37e)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成(S)-N,N-二甲基-1-(吡咯烷-2-基)-甲胺之外，與化合物37a同樣地制備化合物37e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.75(s,1H),8.66-8.64(m,1H),8.61(s,1H),8.49(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,J＝5.2Hz,1H),7.74-7.72(m,1H),7.35(s,1H),7.26-7.24(m,1H),7.07(s,1H),6.71(t,J＝72.4Hz,1H),4.01(s,3H),3.64-3.60(m,1H),2.75-2.59(m,2H),2.48-2.28(m,8H),2.09-1.74(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+539.2。
(S)-6-(二氟甲氧基)-4-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物38e)
除了將化合物37a替換成化合物37e之外，與化合物38a同樣地制備化合物38e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+509.3。
實施例22：(S)-N-(4-(二氟甲氧基)-2-(2-((二甲氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物39e)
除了將化合物38a替換成化合物38e之外，與化合物39a同樣地制備化合物39e。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82(s,1H),9.73(s,1H),9.28(s,1H),8.59-8.58(m,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.69-7.67(m,1H),7.53(d,J＝18.2Hz,1H),7.20-7.18(m,1H),7.03(s,1H),6.93(s,1H),6.82-6.39(m,2H),5.81-5.78(m,1H),3.98(s,3H),3.81-3.59(m,2H),2.90-2.84(m,2H),2.56(s,6H),2.24-2.20(m,1H),2.10-1.72(m,4H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+563.3。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(5-甲基-2,5二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-胺(化合物37f)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺替換成5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷之外，與化合物37a同樣地制備化合物37f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.74(s,1H),8.64-8.58(m,1H),8.58(s,1H),8.44(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.72-7.64(m,1H),7.28(s,1H),7.24-7.18(m,1H),6.64(t,J＝72Hz,1H),6.40(s,1H),4.10(m,2H),3.90(s,3H),3.70(m,2H),2.74(m,2H),2.50(s,3H),2.12(m,2H),1.81(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+537.2。
6-(二氟甲氧基)-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)-4-(5-甲基-2,5二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物38f)
除了將化合物37a替換成化合物37f之外，與化合物38a同樣地制備化合物38f。1H NMR(400MHz,CDCl3):8.63-8.59(m,1H),8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.24-8.16(m,2H),7.93(s,1H),7.69-7.65(m,1H),7.23-7.18(m,1H),7.15(s,1H),6.50(s,1H),6.45(t,J＝72Hz,1H),3.94-3.84(m,5H),3.60(m,2H),2.74(m,2H),2.50(s,3H),2.18(m,2H),1.81(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+507.2。
實施例23：N-(4-(二氟甲氧基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(5-甲基-2,5二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物39f)
除了將化合物38a替換成化合物38f之外，與化合物39a同樣地制備化合物39f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.40(bs,1H),9.16(s,1H),8.62-8.58(m,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝5.2Hz,1H),7.71-7.65(m,1H),7.50(s,1H),7.32(s,1H),7.20-7.15(m,1H),6.74-6.30(m,4H),5.82(m,1H),3.98(s,3H),3.95-3.92(m,2H),3.64-3.62(m,2H),2.81-2.77(m,2H),2.53(s,3H),2.22-2.18(m,2H),1.86-1.82(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+561.2。
化合物51a-51f的合成路線如方案5所示：
方案5
化合物43的合成參照文獻synthesis(Germany),2014,第46卷，第96-100頁，化合物46的合成參照專利申請WO 2013030138。
3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑(化合物47)
在100mL的單口瓶中將1-甲基-(三丁基錫)-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑46(1.5g，3.5mmol)溶于DMF(50mL)中，然后加入2,4-二氯嘧啶(0.778g，5.3mmol)，碘化亞銅(0.138g,0.7mmol)和四(三苯基膦)鈀(0.202g，0.175mmol)。在80℃氮氣保護下反應(yīng)1小時。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物(0.8g，3.2mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+251.1。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物48a)
在100mL的單口瓶中將化合物47(600mg，2.4mmol)溶于2-戊醇(50mL)中，然后加入化合物27(580mg，3.1mmol)和對甲苯磺酸(1.2g，7.2mmol)。在110℃反應(yīng)3h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物(300mg，0.75mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+401.1。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物48b)
除了將化合物27換成化合物35之外，與化合物48a同樣地制備化合物48b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+437.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物49a)
在100mL的單口瓶中將化合物48a(400mg,1.0mmol)溶于二甲基乙酰胺(50mL)中，然后加入N,N,N'-三甲基乙二胺(153mg，1.5mmol)和N,N-二異丙基乙胺(387mg，3.0mmol)。在80℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物49a(300mg，0.622mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+483.3。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物50a)
在100mL的單口瓶中將化合物49a(300mg，0.622mmol)溶于乙醇(20ml)中，然后加入飽和氯化銨溶液(20ml)和鐵粉(174mg，3.11mmol)。在50℃反應(yīng)2h。加入50mL水，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物50a(150mg，0.33mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+453.2。
實施例24：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物51a)
在100mL的單口瓶中將化合物50a(150mg，0.33mmol)溶于20mL二氯甲烷中，然后加入丙烯酸(28.7mg，0.39mmol)，EDCI(127mg,0.66mmol)和三乙胺(100mg，0.99mmol)，室溫反應(yīng)2h。加入水30(mL)，二氯甲烷萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物51a(30mg，0.059mmol).1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.20(s,1H),9.47(s,1H),8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.62(s,1H),7.43(d,J＝5.3Hz,1H),7.37(d,J＝5.2Hz,1H),6.93(d,J＝5.3Hz,1H),6.81(s,1H),6.45-6.39(m,2H),5.70-5.67(m,1H),4.13(s,3H),3.90(s,3H),2.93(s,2H),2.74(s,3H),2.26-2.33(m,8H).MS(ESI)(m/z):[M+H]+507.2。
2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物49b)
除了將化合物48a換成化合物48b之外，與化合物49a同樣地制備化合物49b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+519.2。
5-(二氟甲氧基-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺)(化合物50b)
除了將化合物49a換成化合物49b之外，與化合物50a同樣地制備化合物50b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.47(d,J＝5.1Hz,1H),7.73(s,1H),7.39(s,1H),7.35(d,J＝5.3Hz,1H),7.11(d,J＝5.3Hz,1H),6.93(d,J＝5.1Hz,1H),6.86(s,1H),6.45(t,J＝74.4Hz,1H),4.43(s,3H),3.00(t,J＝6.4Hz,2H),2.66(s,3H),2.61(t,J＝6.0Hz,2H),2.42(s,6H).MS(ESI)(m/z):[M+H]+489.2。
實施例25：N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物51b)
除了將化合物50a換成化合物50b之外，與化合物51a同樣地制備化合物51b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.34(s,1H),9.40(s,1H),8.60(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(d,J＝5.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.17(d,J＝5.4Hz,1H),7.09(s,1H),7.03(d,J＝5.2Hz,1H),6.71-6.33(m,3H),5.76-5.73(m,1H),4.48(s,3H),2.89-2.87(m,2H),2.74(s,3H),2.36-2.34(m,2H),2.30(s,6H).MS(ESI)(m/z):[M+H]+543.3。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物49c)
除了將化合物48a換成化合物48b，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成4-甲基哌嗪之外，與化合物49a同樣地制備化合物49c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+517.1。
6-(二氟甲氧基)-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物50c)
除了將化合物49a換成化合物49c之外，與化合物50a同樣地制備化合物50c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+487.1。
實施例26：N-(4-(二氟甲氧基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物51c)
除了將化合物50a換成化合物50c之外，與化合物51a同樣地制備化合物51c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.36(s,1H),8.62(s,1H),8.58(d,J＝5.2Hz,1H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.14(d,J＝5.2Hz,1H),7.06(s,1H),7.02(d,J＝5.2Hz,1H),6.50(t,J＝72Hz,1H),6.44-6.22(m,2H),5.82-5.78(m,1H),4.47(s,3H),2.93-2.89(m,4H),2.64-2.60(m,4H),2.39(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+541.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物49d)
除了將化合物48a換成化合物48b，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物49a同樣地制備化合物49d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.88(s,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝5.2Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(d,J＝5.2Hz,1H),6.62(t,J＝72Hz,1H),6.40(s,1H),4.52(s,3H),4.20-4.05(m,2H),3.78-3.62(m,2H),3.26-3.16(m,1H),2.20(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+517.2。
6-(二氟甲氧基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物50d)
除了將化合物49a換成化合物49d之外，與化合物50a同樣地制備化合物50d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.51(d,J＝5.2Hz,1H),7.65(s,1H),δ7.38(d,J＝5.2Hz,1H),7.22(s,1H),7.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.96(d,J＝5.2Hz,1H),6.52(s,1H),6.43(t,J＝72Hz,1H),4.46(s,3H),3.96-3.90(m,2H),3.62-3.52(m,2H),3.16-3.08(m,1H),2.20(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+487.2。
實施例27：N-(4-(二氟甲氧基)-2-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物51d)
除了將化合物50a換成化合物50d之外，與化合物51a同樣地制備化合物51d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.65(s,1H),8.51(d,J＝5.2Hz,2H),7.42(s,1H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.21(s,1H),7.14(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),6.62(s,1H),6.51(t,J＝72Hz,1H),6.48-6.26(m,2H),5.84-5.76(m,1H),4.43(s,3H),3.94-3.84(m,2H),3.66-3.58(m,2H),3.16-3.08(m,1H),2.19(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+541.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物49e)
除了將化合物48a換成化合物48b，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成N,N-二甲基哌啶-4-胺之外，與化合物49a同樣地制備化合物49e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+545.2。
6-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物50e)
除了將化合物49a換成化合物49e之外，與化合物50a同樣地制備化合物50e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+515.2。
實施例28：N-(4-(二氟甲氧基)-2-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物51e)
除了將化合物50a換成化合物50e之外，與化合物51a同樣地制備化合物51e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.33(s,1H),8.62-8.54(m,2H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.30(s,1H),7.14(d,J＝5.2Hz,1H),7.05-6.98(m,2H),6.50(t,J＝72.0Hz,1H),6.44-6.22(m,2H),5.82-5.76(m,1H),4.47(s,3H),3.10-3.03(m,2H),2.76-2.66(m,2H),2.42(s,6H),2.41-2.39(m,1H),2.14-2.05(m,2H),1.78-1.66(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+569.2。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-胺(化合物49f)
除了將化合物48a換成化合物48b，N,N,N’-三甲基乙二胺替換成5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛烷之外，與化合物49a同樣地制備化合物49f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.88(s,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝5.2Hz,1H),7.24(s,1H),7.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(d,J＝5.2Hz,1H),6.64(t,J＝72Hz,1H),6.42(s,1H),4.52(s,3H),4.16-4.06(m,2H),3.74-3.64(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.49(s,3H),2.15-2.07(m,2H),1.86-1.76(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+543.2。
6-(二氟甲氧基)-N1-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物50f)
除了將化合物49a換成化合物49f之外，與化合物50a同樣地制備化合物50f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.38(d,J＝5.2Hz,1H),7.21(s,1H),7.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.97(d,J＝5.2Hz,1H),6.50(s,1H),6.44(t,J＝72Hz,1H),4.46(s,3H),3.94-3.88(m,2H),3.66-3.60(m,2H),3.55(bs,2H),2.80-2.72(m,2H),2.51(s,3H),2.22-2.14(m,2H),1.86-1.76(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+513.2。
實施例29：N-(4-(二氟甲氧基)-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物51f)
除了將化合物50a換成化合物50f之外，與化合物51a同樣地制備化合物51f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.57(s,1H),8.50(d,J＝5.2Hz,1H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.25(m,1H),7.20(s,1H),7.14(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),6.69-6.29(m,4H),5.82-5.76(m,1H),4.43(s,3H),4.02-3.94(m,2H),3.68-3.60(m,2H),2.82-2.72(m,2H),2.52(s,3H),2.22-2.12(m,2H),1.86-1.76(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+567.2。
化合物63的合成路線如方案6所示：
方案6
2-甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯(化合物53)
將化合物52(3g，16.6mmol，參考專利申請US20080004327合成)溶于500ml四氫呋喃中，冷卻后緩慢加入四氫鋁鋰(2.5g，66mmol)，然后加熱至70℃攪拌4小時。冷卻至室溫后，用1M的碳酸氫鈉溶液在0℃淬滅，接著過濾旋干，柱層析純化得到白色固體(1.8g，79％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+138.1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.11(br,1H)，6.91-6.89(m,1H)，6.65(s,1H)，6.39(s,1H)，2.54(s,3H)。
6-(2-氯嘧啶-4-基)-2-甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯(化合物54)
將2,4-二氯嘧啶(2.44g，16.4mmol)和三氯化鐵(2.66g，16.4mmol)加入200mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌3小時，再加入化合物53(1.5g，11mmol)，室溫攪拌4小時。過濾濃縮后，硅膠柱純化得到褐色固體(100mg，2.4％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+250.1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.50(br,1H),8.38(d,J＝5.6Hz,1H),7.33(d,J＝5.2Hz,1H),7.05(d,J＝1.6Hz,1H),6.67(s,1H),2.57(d,J＝1.2Hz,3H)。
6-(2-氯嘧啶-4-基)-2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯(化合物55)
將化合物54(100mg，0.4mmol)，碘甲烷(1.42g，4mmol)和碳酸鉀(276mg，2mmol)加入DMF 5mL中，室溫攪拌一周后，加入乙酸乙酯稀釋，依次用水和飽和食鹽水洗滌，干燥后硅膠柱純化得到黃色固體(50mg，47％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+264.1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.36(d,J＝5.6Hz,1H),7.36(d,J＝5.6Hz,1H),7.01(s,1H),6.66(s,1H),4.14(s,3H),2.57(d,J＝0.8Hz,3H)。
4-(2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基)-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物56)
將化合物55(50mg，0.19mmol)，2-甲氧基-4-氟-5-硝基苯胺(71mg，0.38mmol)和一水合對甲苯磺酸(108mg，0.57mmol)加入仲戊醇5mL中，100℃攪拌5小時。冷卻后過濾，固體用乙酸乙酯洗滌得到黃色固體(65mg，83％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+414.1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.35(d,J＝8.4Hz,1H),8.33(d,J＝5.2Hz,1H),7.59(br,1H),7.05(d,J＝5.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.75(d,J＝12Hz,1H),6.68(s,1H),4.15(s,3H),4.02(s,3H),2.57(s,3H)。
N1-(4-(2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物57)
將化合物56(65mg，0.16mmol)和N,N,N’-三甲基乙二胺(32mg，0.31mmol)溶于10ml乙腈中，加入碳酸鉀(43mg，0.31mmol)，80℃攪拌4小時。然后過濾濃縮，硅膠柱純化得到紅色固體(55mg，70％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+496.3。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.05(s,1H),8.31(d,J＝5.2Hz,1H),7.48(s,1H),7.00(d,J＝5.6Hz,1H),6.94(s,1H),6.76(s,1H),6.68(s,1H),4.15(s,3H),4.00(s,3H),3.41-3.37(m,2H),2.88(s,3H),2.80-2.77(m,2H),2.57(s,3H),2.46(s,6H)。
N4-(4-(2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物58)
將化合物57(55mg，0.11mmol)和鈀碳在甲醇中的混合物在氫氣氛圍下室溫攪拌1h。硅藻土過濾后，濾液濃縮得到黃色固體(50mg，98％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+466.2。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.94(s,1H),7.48(s,1H),6.91-6.90(m,2H),6.70(s,1H),6.66(s,1H),4.13(s,3H),3.83(s,3H),2.97-2.94(m,2H),2.67(s,3H),2.57(d,J＝0.8Hz,3H),2.41-2.38(m,2H),2.26(s,6H)。
實施例30：N-(5-((4-(2,4-二甲基-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯)丙烯酰胺(化合物59)
將化合物58(50mg，0.1mmol)，三乙胺(33mg，0.32mmol)和丙烯酸(23mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷2mL，加入催化量的叔丁醇，冷卻至-10℃，接著加入EDCI(41mg，0.22mmol)，室溫攪拌2小時。反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋，碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，干燥后硅膠柱和制備板純化得到黃色固體(7.7mg，13.8％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+520.2。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.49(s,1H),9.27(s,1H),8.32(d,J＝5.2Hz,1H),7.51(s,1H),7.06-6.93(m,3H),6.68(s,1H),6.63(s,1H),6.42(d,J＝16.8Hz,1H),5.71(d,J＝10.4Hz,1H),4.06(s,3H),3.87(s,3H),3.18(s,2H),2.93(s,2H),2.69(s,3H),2.66(s,6H),2.56(s,3H)。
化合物72的合成路線如方案7所示：
方案7
(5-甲基噻吩-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物61)
將5-甲基-2-噻吩甲酸(10g，70.3mmol)溶于叔丁醇(100mL)中，然后依次加入三乙胺(7.83g，77.4mmol)和疊氮磷酸二苯酯(21.29g，77.4mmol)，室溫攪拌30min后油浴升溫至80℃回流過夜反應(yīng)。后處理直接旋干反應(yīng)液，柱層析得到化合物61(7g，46.7％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ10.13(s,1H),6.45-6.44(m,1H),6.29(d,J＝3.6Hz,1H),2.32(t,J＝4.0Hz,3H),1.48(d,J＝16.5Hz,9H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+214.1。
(3-甲?；?5-甲基噻吩-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物62)
在冰水浴條件下，慢慢將POCl3(15.1g，98.5mmol)滴加進DMF(4.8g，65.7mmol)中，攪拌15-30分鐘出現(xiàn)白色固體。另將化合物61(7g，32.8mmol)溶于四氫呋喃(100mL)，加入反應(yīng)瓶中，升至室溫攪拌過夜反應(yīng)。反應(yīng)液慢慢加到溫水(100mL)中淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，柱層析得到化合物62(3g，38.0％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.47(s,1H),9.69(s,1H),6.76(s,1H),2.39(s,3H),1.56(s,9H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+242.1。
2-((叔丁氧羰基)(3-甲酰基-5-甲基噻吩-2-基)氨基)乙酸乙酯(化合物63)
將化合物62(2.9g，12.0mmol)溶于DMF(30mL)中，再加入碳酸鉀(2.5g，18.1mmol)和溴乙酸乙酯(2.4g，14.4mmol)，室溫攪拌過夜。后處理加水(50mL)，乙酸乙酯萃取，硫酸鈉干燥旋干得到粗產(chǎn)品63(4g，100％)，直接用作下一步投料。MS(ESI)(m/z):[M+H]+328.1。
6-叔丁基5-乙基4-羥基-2-甲基-4H-噻吩[2,3-b]吡咯-5,6(5H)-二羧酸酯(化合物64)
將化合物63(4g，12.2mmol)溶于DMF(40mL)中，加入碳酸鉀(2.53g，18.3mmol)，油浴升溫60℃反應(yīng)過夜。后處理加水(50mL)，乙酸乙酯萃取，柱層析得到化合物64(3.8g，86.2％)。
2-甲基-6H-噻吩[2,3-b]吡咯-5-甲酸乙酯(化合物65)
將化合物64(3.8g，11.6mmol)溶于乙醇(15mL)中，加入3mL濃鹽酸，室溫攪拌，待反應(yīng)完全后，直接將反應(yīng)液旋干，加水(50mL)，用碳酸鉀中和，乙酸乙酯(50mL)萃取，硫酸鈉干燥，旋干后得到化合物65(1.8g，74％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+210.1。
2,5-二甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯(化合物66)
將化合物65(500mg，2.4mmol)溶于無水THF(5mL)中，冰鹽浴冷卻，慢慢加入氫化鋁鋰(226.7mg，6.0mmol)，放熱且大量氣泡產(chǎn)生，加畢，油浴升溫至70℃回流。待反應(yīng)完全，冰水浴降溫，慢慢加水，NaOH(aq)，乙酸乙酯萃取，硅藻土過濾，旋干得到化合物66(250mg，69.1％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.88(s,1H),6.62(t,J＝6.0Hz,1H),6.08-5.94(m,1H),2.52(d,J＝1.2Hz,3H),2.39-2.37(m,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+152.0。
4-(2-氯嘧啶-4-基)-2,5-二甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯(化合物67)
將化合物66(200mg，1.3mmol)溶于1,2-二氯甲烷(5mL)中，然后依次加入2,4-二氯嘧啶(295.5mg，2.0mmol)、三氯化鋁(264.5mg，2.0mmol)，油浴升溫至80℃反應(yīng)。待反應(yīng)完全后加水(10mL)淬滅反應(yīng)，抽濾掉固體，加二氯甲烷萃取，有機相干燥旋干，柱層析提純得到化合物67(100mg，26.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.73(s,1H),8.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.18(d,J＝5.5Hz,1H),6.88(d,J＝1.1Hz,1H),2.59(d,J＝1.0Hz,3H),2.49(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+264.0。
4-(2-氯嘧啶-4-基)-2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯(化合物68)
將化合物67(73mg，0.38mmol)溶于DMF(5mL)中，然后依次加入碘甲烷(47.14mg，0.45mmol)、碳酸鉀(57.30mg，0.57mmol)室溫攪拌。后處理加水(10mL)和乙酸乙酯(10mL)萃取，飽和食鹽水洗兩遍，干燥濃縮，得到化合物68(80mg)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+278.0。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基)嘧啶-2-胺(化合物69)
將化合物68(80mg，0.288mmol)溶于仲戊醇(5mL)中，然后依次加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(53.6mg，0.288mmol)、對甲苯磺酸(82.18mg，0.430mmol)，油浴升溫105℃反應(yīng)。后處理，直接旋干反應(yīng)液，制備色譜純化得到化合物69(60mg，48.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.65(s,1H),7.10(d,J＝5.3Hz,1H),6.96(s,1H),6.80(d,J＝4.2Hz,1H),4.05(s,3H),3.68(s,3H),2.79(s,3H),2.59(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+428.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-2-硝基-N4-(4-(2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基)嘧啶-2-基)苯-1,4-二胺(化合物70)
將化合物69(60mg，0.14mmol)溶于DMF(5mL)中，然后依次加入N,N,N’-三甲基乙二胺(17.2mg，0.16mmol)、N,N-二異丙基乙胺(23.6mg，0.18mmol)，油浴升溫至85℃攪拌。反應(yīng)完全后加水(10mL)淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯(10mL)萃取，飽和食鹽水洗兩遍，干燥旋干，制備色譜純化得到化合物70(50mg，69.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.19(s,1H),8.37(d,J＝5.3Hz,1H),7.60(s,1H),7.03(d,J＝5.3Hz,1H),6.95(s,1H),6.87(s,1H),4.05(s,3H),3.65(s,3H),3.52(t,J＝6.6Hz,2H),3.49(s,3H),3.02(t,J＝6.8Hz,2H),2.88(s,3H),2.76(s,3H),2.66(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+510.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(2,5,6-三甲基-6H-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物71)
將化合物70(50mL，0.098mmol)溶于乙醇(6mL)和水(2mL)中，再依次加入鐵粉(32.87mg，0.587mmol)、氯化銨(3.67mg，0.067mmol)，油浴升溫80℃反應(yīng)，2小時反應(yīng)完全。抽濾反應(yīng)液，制備色譜純化得到化合物71(21mg，44.68％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+480.2。
實施例31：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(2,5,6-三甲基-噻吩并[2,3-b]吡咯-4-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物72)
將化合物71(21mg，0.044mmol)溶于DCM(5mL)和叔丁醇(0.5mL)中，冰水浴冷卻后，依次加入EDCI(16.79mg，0.088mmol)、三乙胺(8.84mg，0.088mmol)、丙烯酸(6.31mg，0.088mmol)攪拌3h反應(yīng)完全。制備色譜純化得到化合物72(5mg，21.39％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.64(s,1H),9.33(s,1H),8.33(d,J＝5.4Hz,1H),7.48(s,1H),6.96(d,J＝5.5Hz,1H),6.87(s,1H),6.71(s,1H),6.41(d,J＝16.8Hz,1H),5.71(d,J＝11.7Hz,1H),4.08(s,3H),3.90(s,3H),3.12(s,2H),2.77(s,2H),2.72(s,3H),2.60(s,6H),2.54(s,3H),2.41(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+534.3。
化合物80a-80f的合成路線如方案8所示：
方案8
4-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物74a)
將化合物73(1.77g，11.80mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，然后依次加入2-甲氧基-4-氟-5-硝基苯胺(2g，10.74mmol)、N,N-二異丙基乙胺(1.67g，12.92mmol)，室溫攪拌，3小時后反應(yīng)完全，加水(50mL)，析出大量固體，抽濾得到粗品，再用乙酸乙酯洗兩遍，得到純品產(chǎn)物74a(1.8g，56.25％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+300.0。
4-氯-N-(2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物74b)
在250mL的單口瓶中將2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯胺(30g，0.135mol)溶于DMF(100mL)中，加入碳酸氫鈉(17g，0.20mol)然后在冰浴下慢慢加入化合物73(30g，0.20mol)，升到室溫反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物74b(50g，0.149mol)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ10.64(s,1H),8.64(s,1H),8.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.63(d,J＝12.0Hz,1H),7.61-7.22(m,1H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+336.0。
7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)-1H-吲哚(化合物76a)
在1L的單口瓶中將7-溴吲哚(20g，0.102mol)溶于DMSO(100mL)中，加入聯(lián)硼酸頻哪醇酯(39g，0.153mol)，[1,1'-雙(二苯基磷)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl2，4g，0.005mol)和醋酸鉀(15g，0.153mol)，升溫到85℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析產(chǎn)物(25g，0.103mol)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.29(s,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,1H),7.70(d,J＝7.0Hz,1H),7.32-7.29(m,1H),7.21-7.14(m,1H),6.62-6.57(m,1H),1.44(s,12H).MS(ESI)(m/z):[M+H]+244.1。
1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜戊硼烷-2-基)-1H-吲哚(化合物76b)
在100mL的單口瓶中將7-溴-1-甲基-1H-吲哚(2g，0.01mol)溶于DMSO(50mL)中，加入聯(lián)硼酸頻哪醇酯(5g，0.02mol)，Pd(dppf)Cl2(0.8g，0.001mol)和醋酸鉀(2.4g，0.024mol)。升溫到85℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物76b(2.5g，0.012mol)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.79-7.72(m,1H),7.70(d,J＝6.9Hz,1H),7.13(t,J＝7.5Hz,1H),7.04(d,J＝3.1Hz,1H),6.52(d,J＝3.1Hz,1H),4.00(s,3H),1.43(s,12H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+258.1。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物77a)
在100mL的單口瓶中將化合物76a(609mg，2.5mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(50mL)中，加入化合物74a(500mg，1.67mmol)，四(三苯基膦)鈀(193mg，0.167mmol)，碳酸鈉(442mg，4.17mmol)和水(15mL)升到80℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物77a(1g，2.6mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+381.1。
N-(2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物77b)
除了將化合物74a換成化合物74b之外，與化合物77a同樣地制備化合物77b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+417.1。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物77c)
除了將化合物76a換成化合物76b之外，與化合物77a同樣地制備化合物77c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+395.1。
N1-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物78a)
在100mL的單口瓶中將化合物77a(1g,2.63mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入N,N,N’-三甲基乙二胺(458mg,3.95mmol)，N,N-二異丙基乙胺(1.01g，7.89mmol)。升到60℃反應(yīng)2小時。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物78a(400mg,0.866mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.91(s,1H),9.31(s,1H),8.84(s,1H),8.57(s,1H),7.91(d,J＝7.7Hz,1H),7.69(s,1H),7.40-7.30(m,2H),6.70(s,1H),6.66-6.62(m,1H),3.99(s,3H),3.35(t,J＝6.9Hz,2H),2.94(s,3H),2.62(t,J＝7.0Hz,2H),2.31(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+463.2。
N1-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物78b)
除了將化合物77a換成化合物77b之外，與化合物78a同樣地制備化合物78b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+499.2。
4-(1H-吲哚-7-基)-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物78c)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺換成4-甲基哌嗪之外，與化合物78a同樣地制備化合物78c。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ11.90(s,1H),9.90(s,1H),8.85(s,1H),8.74(s,1H),8.35-8.33(m,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(s,1H),7.20(t,J＝7.7Hz,1H),6.90(s,1H),6.64(s,1H),4.07(s,3H),3.27-3.23(m,4H),2.98-2.82(m,4H),2.74(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+461.2。
N-(4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物78d)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物78a同樣地制備化合物78d。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ11.86(s,1H),9.74(s,1H),8.81(s,1H),8.53(s,1H),8.35(s,1H),7.88(d,J＝6.9Hz,1H),7.57(s,1H),7.20(t,J＝7.3Hz,1H),6.64(s,1H),6.32(s,1H),4.08-3.89(m,5H),3.82-3.78(m,2H),3.20-3.16(m,1H),2.17(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+461.2。
4-(1H-吲哚-7基)-N-(2-甲氧基-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)-5-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2胺(化合物78e)
除了將N,N,N’-三甲基乙二胺換成N,N-二甲基氮雜環(huán)丁-3-胺之外，與化合物78a同樣地制備化合物78e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+487.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物78f)
除了將化合物77a換成化合物77c之外，與化合物78a同樣地制備化合物78f。MS(ESI)(m/z):[M+H]+477.2。
N4-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物79a)
在100mL的單口瓶中將化合物78a(200mg,0.433mmol)溶于乙醇(20mL)-水(20mL)中，加入鐵粉(606mg,10.82mmol)，氯化銨(139mg，2.6mmol)。升到50℃反應(yīng)2小時。加飽和碳酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物79a(150mg,0.35mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+433.2。
N4-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物79b)
除了將化合物78a換成化合物78b之外，與化合物79a同樣地制備化合物79b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.86(s,1H),8.83(s,1H),8.49-8.42(m,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(s,1H),7.60(s,1H),7.34(s,1H),7.28(m,1H),6.95(s,1H),6.68-6.27(m,2H),2.99(t,J＝6.3Hz,2H),2.74(s,3H),2.49(t,J＝6.3Hz,2H),2.33(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+469.2。
N1-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-6-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺(化合物79c)
除了將化合物78a換成化合物78c之外，與化合物79a同樣地制備化合物79c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+431.2。
N1-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-6-甲氧基苯-1,3-二胺(化合物79d)
除了將化合物78a換成化合物78d之外，與化合物79a同樣地制備化合物79d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+431.2。
N1-(4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-6-甲氧基-4-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯-1,3-二胺(化合物79e)
除了將化合物78a換成化合物78e之外，與化合物79a同樣地制備化合物79e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+457.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物79f)
除了將化合物78a換成化合物78f之外，與化合物79a同樣地制備化合物79f。MS(ESI)(m/z):[M+H]+447.3。
實施例32：N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯)丙烯酰胺(化合物80a)
在100mL的單口瓶中將化合物79a(200mg,0.463mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入丙烯酸(33.3mg,0.463mmol)，EDCI(222mg，1.15mmol)。室溫反應(yīng)2小時。加水淬滅反應(yīng)，二氯甲烷萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物84a(95mg,0.195mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.94(s,1H),10.20(s,1H),9.68(s,1H),8.89(s,1H),7.89(d,J＝7.7Hz,1H),7.79(s,1H),7.32(d,J＝7.2Hz,1H),6.86(s,1H),6.66-6.49(m,2H),6.41-6.32(m,1H),5.79-5.72(m,1H),3.92(s,3H),2.99-2.88(m,2H),2.77(s,3H),2.40-2.34(m,2H),2.32(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+487.2。
實施例33：N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物80b)
除了將化合物79a換成化合物79b之外，與化合物80a同樣地制備化合物80b。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.90(s,1H),10.36(s,1H),9.69(s,1H),8.88(s,1H),8.72(s,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),7.57(s,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,2H),7.12(s,1H),6.73-6.34(m,4H),5.80(d,J＝10.2Hz,1H),2.96-2.86(m,2H),2.76(s,3H),2.45-2.35(m,2H),2.33(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+523.2。
實施例34：N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺(化合物80c)
除了將化合物79a換成化合物79c之外，與化合物80a同樣地制備化合物80c。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.94(s,1H),9.59(s,1H),8.86-8.48(m,3H),7.95-7.76(m,2H),7.41-7.25(m,2H),6.82(s,1H),6.62(s,1H),6.51-6.47(m,1H),6.37-6.30(m,1H),5.81(d,J＝10.3Hz,1H),3.90(s,3H),3.06-3.00(m,4H),2.88-2.80(m,4H),2.51(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+485.2。
實施例35：N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-2-(3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(化合物80d)
除了將化合物79a換成化合物79d之外，與化合物80a同樣地制備化合物80d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.92(s,1H),8.79(s,1H),8.59(s,1H),7.87(d,J＝7.3Hz,1H),7.68(s,1H),7.42-7.21(m,4H),6.61(s,1H),6.52-6.48(m,1H),6.38-6.31(m,2H),5.81(d,J＝10.2Hz,1H),4.13-3.81(m,5H),3.71-3.67(m,2H),3.16-3.12(m,1H),2.22(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+485.2。
實施例36：N-(5-((4-(1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-4-甲氧基-2-(5-甲基-2,5-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)丙烯酰胺(化合物80e)
除了將化合物79a換成化合物79e之外，與化合物80a同樣地制備化合物80e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.05-10.71(m,1H),8.72(s,1H),8.58-8.00(m,2H),7.85-7.56(m,3H),7.31(s,1H),7.21(t,J＝7.6Hz,1H),6.65-6.29(m,3H),6.05(s,1H),5.77(d,J＝10.7Hz,1H),4.02-4.00(m,2H),3.79(s,3H),3.65-3.63(m,2H),2.88-2.73(m,2H),2.53(s,3H),2.12-2.10(m,2H),1.81-1.77(m,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+511.3。
實施例37：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物80f)
除了將化合物79a換成化合物79f之外，與化合物80a同樣地制備化合物80f。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.14(s,1H),9.65(s,1H),8.98(s,1H),7.87(s,1H),7.79(d,J＝7.2Hz,1H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝3.1Hz,1H),6.83(s,1H),6.60(d,J＝3.1Hz,1H),6.49(d,J＝15.7Hz,1H),6.39-6.28(m,1H),5.73(d,J＝10.6Hz,1H),3.90(s,3H),3.76(s,3H),2.99-2.86(m,2H),2.75(s,3H),2.33(m,8H)。
化合物85的合成路線如方案9所示：
方案9
N-(2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物82)
將化合物81(15g，0.058mol)溶于1,4-二氧六環(huán)(150mL)和水(50mL)中，然后加入化合物74b(13g，0.038mol)、碳酸鈉(12.3g，0.116mol)，氮氣置換3次后，加入四(三苯基膦)鈀(9g，0.008mol)再用氮氣置換3次，油浴升溫90℃反應(yīng)，1h后反應(yīng)完全，硅藻土抽濾，柱層析純化，得到化合物82(7g，41.90％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.80(s,1H),8.85-8.83(m,1H),8.80(s,1H),8.47-8.45(m,2H),7.48-7.45(m,1H),7.33-7.30(m,1H),7.22(d,J＝10.7Hz,1H),6.97-6.59(m,1H),4.05(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+432.1。
2-(二氟甲氧基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-甲基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物83)
將化合物82(7g，0.016mol)溶于DMF(100mL)中，將N,N-二異丙基乙胺(2.73g，0.021mL),N,N,N’-三甲基乙二胺(1.99g，0.019mL)加入反應(yīng)中，油浴升溫至80℃攪拌，半小時反應(yīng)完全，加水(100mL)淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗兩遍，柱層析純化，得到化合物83(3.0g，36.14％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.23(s,1H),8.82-8.80(m,1H),8.72(s,1H),8.44-8.43(m,1H),8.41(s,1H),7.43(s,1H),7.31-7.28(m,1H),7.05(s,1H),6.91-6.48(m,1H),4.03(s,3H),3.33(t,J＝7.0Hz,2H),2.93(d,J＝10.1Hz,3H),2.59(t,J＝7.0Hz,2H),2.29(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+514.2。
5-(二氟甲氧基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物84)
將化合物83(3.2g，6.23mmol)溶于乙醇(30mL)中,加水(10mL)，將鐵粉(2.09g，37.42mmol)，氯化銨(0.23g，4.30mmol)加入反應(yīng)中油浴升溫80℃攪拌，3h后反應(yīng)完全，直接抽濾反應(yīng)液，濾液旋干，柱層析純化，得到化合物84(3.1g，99.7％)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+484.2。
實施例38：N-(4-(二氟甲氧基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物85)
將化合物84(3.1g，6.41mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入叔丁醇(5mL)，冰水浴降溫，然后加入丙烯酸(0.92g，12.77mmol)，EDCI(2.46g，12.83mmol)，三乙胺(1.30g，12.87mmol)，3h后反應(yīng)完全，加入飽和碳酸鉀溶液攪拌10min，二氯甲烷萃取，柱層析純化，得到化合物85(1.1g，31.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.41(s,1H),10.03(s,1H),9.39(bs,1H),8.87-8.85(m,1H),8.76(s,1H),8.43-8.41(m,1H),7.56(s,1H),7.26-7.24(m,1H),7.11(s,1H),6.76-6.33(m,3H),5.83-5.81(m,1H),4.10(s,3H),2.93-2.85(m,2H),2.75(s,3H),2.36-2.34(m,2H),2.32(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+538.2。
化合物89的合成路線如方案10所示：
方案10
4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺(化合物86)的合成
在100mL的單口瓶中將化合物74a(500mg，1.67mmol)溶于DMF(30mL)中，加入苯并咪唑(179mg,1.52mmol)，碳酸鉀(419mg，3.04mmol)。室溫反應(yīng)16h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物86(300mg,0.785mmol)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ10.17(s,1H),9.14-8.95(m,1H),8.81(s,1H),8.61-8.52(m,1H),7.79(d,J＝7.3Hz,1H),7.57-7.18(m,3H),3.99(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+382.1。
N1-(4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物87)
在100mL的單口瓶中將化合物86(650mg，1.7mmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(50mL)中，加入N,N,N'-三甲基乙二胺(297mg，2.6mmol)，N,N-二異丙基乙胺(658mg，5.1mmol)。升到60℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物87(300mg，0.65mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.12-8.63(m,3H),8.59-8.46(m,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,1H),7.81-7.69(m,1H),7.47-7.38(m,2H),6.71(s,1H),3.99(s,3H),3.36(s,2H),2.94(s,3H),2.62(t,J＝6.7Hz,2H),2.30(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+464.2。
N4-(4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物88)
在100mL的單口瓶中將化合物87(500mg，1.08mmol)溶于乙醇(20mL)-水(2mL)中，加入鐵粉(604mg，10.08mmol)，氯化銨(604mg，10.08mmol)。升到50℃反應(yīng)2h。加飽和碳酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物88(250mg，0.577mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+434.2。
實施例39：N-(5-((4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(化合物89)
除了將化合物84換成化合物88之外，與化合物85同樣地制備化合物89。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.23(s,1H),9.74(s,2H),9.61(s,1H),8.73(s,1H),8.61(s,1H),7.98(s,1H),7.88-7.86(m,1H),7.38(m,2H),6.70-6.36(m,2H),5.76(d,J＝10.7Hz,1H),3.93(s,3H),2.93(s,2H),2.77(s,3H),2.33(s,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+488.2。
化合物97a-97e的合成路線如方案11所示：
方案11
4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-胺(化合物94a)
在100mL的單口瓶中將化合物92(1.3g，6.25mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(50mL)中，加入3-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(2g，6.25mmol)，四(三苯基膦)鈀(360mg，0.31mmol)，碳酸鈉(1.3g，12.5mmol)和水(15ml)升到80℃反應(yīng)2h。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，旋干得粗產(chǎn)物93a。然后在粗產(chǎn)物93a中加入鹽酸水溶液(50mL)加熱到50℃反應(yīng)2h，先用乙酸乙酯萃取2遍倒掉有機層，然后再用NaOH調(diào)水相pH到9，再用乙酸乙酯萃取3遍，干燥，濃縮，柱層析得化合物94a(300mg,1.34mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+225.1。
4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)吡啶-2-胺(化合物94b)
在100mL的單口瓶中將化合物46(1.5g,3.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，然后加入化合物90(223mg,1.288mmol),碘化亞銅(44mg,0.24mmol)和四三苯基膦鈀(135mg,0.117mmol)。在80℃氮氣保護下反應(yīng)1小時。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后產(chǎn)物94b(300mg,1.3mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+231.1。
4-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)吡啶-2-胺(化合物94c)
在100mL的單口瓶中將92(1.3g,4.06mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(50mL)中，加入3-碘-1-甲基-1H-吡唑[4,3-b]吡啶(400mg,1.54mmol)，四三苯基膦鈀(178mg，0.308mmol),碳酸鈉(408mg,3.85mmol)和水(15ml)升到80℃反應(yīng)2小時。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮得粗產(chǎn)物93c,然后在粗產(chǎn)物中加入鹽酸水溶液(50ml)加熱到50℃反應(yīng)2h,先用乙酸乙酯萃取2遍倒掉有機層，后再用NaOH調(diào)水相pH到9，再用乙酸乙酯萃取3遍，干燥，濃縮，柱層析得產(chǎn)物94c(350mg,1.56mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+226.1。
4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)吡啶-2-胺(化合物94d)
除了將3-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶換成3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶之外，與化合物94a同樣地制備化合物94d。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.23-9.19(m,1H),8.75(s,1H),8.73-8.71(m,1H),7.92(d,J＝5.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.22-7.14(m,2H),5.90(bs,2H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+212.1。
4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-胺(化合物94e)
除了將3-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶換成3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶之外，與化合物94a同樣地制備化合物94e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+211.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物95a)
在100mL的單口瓶中將化合物94a(400mg，1.79mmol)溶于DMF(50mL)中，加入化合物11a(886mg，2.7mmol)，三(二亞芐基丙酮)二鈀(16mg，0.0179mmol)，4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(21mg，0.0358mmol)和碳酸銫(1.75g，5.37mmol)升到85℃反應(yīng)12小時。加水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得化合物95a(300mg，0.63mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+476.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物95b)
除了將化合物94a換成化合物94b之外，與化合物95a同樣地制備化合物95b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+482.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物95c)
除了將化合物94a換成化合物94c之外，與化合物95a同樣地制備化合物95c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+477.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-2-硝基-N4-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)吡啶-2-基)苯-1,4-二胺(化合物95d)
除了將化合物94a換成化合物94d之外，與化合物95a同樣地制備化合物95d。MS(ESI)(m/z):[M+H]+463.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物95e)
除了將化合物94a換成化合物94e之外，與化合物95a同樣地制備化合物95e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.82(s,1H),8.53(d,J＝7.0Hz,1H),8.43-8.35(m,1H),7.85(s,1H),7.73(d,J＝9.1Hz,1H),7.35-7.26(m,1H),7.05-6.95(m,3H),6.91(s,1H),6.71(s,1H),3.99(s,3H),3.35-3.26(m,2H),2.90(s,3H),2.67-2.56(m,2H),2.30(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+462.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物96a)
在100mL的單口瓶中將95a(475mg,2.37mmol)溶于乙醇(20mL)-水(20mL)中，加入鐵粉(1.3g,23.75mmol)，氯化銨(1.3g，23.75mmol)。升到50℃反應(yīng)2小時。加飽和碳酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物96a(100mg,0.224mmol)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+446.3。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)吡啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物96b)
除了將化合物95a換成化合物95b之外，與化合物96a同樣地制備化合物96b。MS(ESI)(m/z):[M+H]+452.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)吡啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物96c)
除了將化合物95a換成化合物95c之外，與化合物96a同樣地制備化合物96c。MS(ESI)(m/z):[M+H]+447.3。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)吡啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物96d)
除了將化合物95a換成化合物95d之外，與化合物96a同樣地制備化合物96d。1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.25-9.21(m,1H),8.78(s,1H),8.75-8.71(m,1H),8.13-8.10(d,J＝5.2Hz,1H),7.69(s,1H),7.63(s,1H),7.49(s,1H),7.48-7.43(m,1H),7.21-7.17(m,1H),6.74(s,1H),3.75(s,3H),3.18(s,3H),2.90(t,J＝7.2Hz,2H),2.42(t,J＝7.2Hz,2H),2.23(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+433.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-N4-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲苯-1,2,4-三胺(化合物96e)
除了將化合物95a換成化合物95e之外，與化合物96a同樣地制備化合物96e。MS(ESI)(m/z):[M+H]+432.2。
實施例40：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物97a)
在100mL的單口瓶中將96a(445mg,0.45mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入丙烯酸(72mg，0.67mmol)，EDCI(173mg，0.9mmol)，室溫反應(yīng)2小時，加水淬滅反應(yīng)，DCM萃取3遍，硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析得產(chǎn)物97a(30mg,0.06mmol)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.52(s,1H),8.45(dd,J＝8.0,1.3Hz,1H),8.38-8.32(m,1H),8.12(d,J＝5.4Hz,1H),8.06(s,1H),7.41(s,1H),7.24(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.16(dd,J＝5.5,1.4Hz,1H),7.00(s,1H),6.62-6.55(m,1H),6.48-6.41(m,1H),5.86-5.83(m,1H),3.96(d,J＝3.8Hz,6H),3.20(s,2H),2.73(s,3H),2.50(s,5H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+500.3。
實施例41：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物97b)
除了將化合物96a換成化合物96b之外，與化合物97a同樣地制備化合物97b。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.58(s,1H),8.18-8.11(m,1H),7.61(d,J＝5.3Hz,1H),7.21(d,J＝1.7Hz,2H),7.15(d,J＝5.3Hz,1H),7.00(s,1H),6.63-6.48(m,1H),6.40-6.29(m,1H),5.80(d,J＝10.2Hz,1H),4.09(s,3H),3.92(s,4H),3.13(t,J＝5.5Hz,3H),2.72(d,J＝5.9Hz,3H),2.59(s,2H),2.39(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+506.2。
實施例42：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物97c)
除了將化合物96a換成化合物96c之外，與化合物97a同樣地制備化合物97c。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(d,J＝11.8Hz,1H),8.63(m,1H),8.20(d,J＝5.4Hz,1H),8.12-8.06(m,2H),7.75(m,1H),7.46(m,1H),6.99(s,1H),6.55-6.50(m,1H),6.35(m,1H),5.79(d,J＝10.2Hz,1H),4.18(s,3H),3.93(d,J＝4.8Hz,3H),3.11(d,J＝5.5Hz,2H),2.72(s,3H),2.36(m,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+501.3。
實施例43：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物97d)
除了將化合物96a換成化合物96d之外，與化合物97a同樣地制備化合物97d。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.07(bs,1H),9.06(s,1H),8.87(bs,1H),8.74-8.70(m,1H),8.63-8.59(m,1H),8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.82(s,1H),7.64-7.60(m,1H),7.14(s,1H),6.93-6.87(m,1H),6.78(s,1H),6.52-6.38(m,2H),5.73-5.67(m,1H),3.87(s,3H),2.94(t,J＝7.2Hz,2H),2.71(s,3H),2.41(t,J＝7.2Hz,2H),2.34(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+487.2。
實施例44：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲氧基苯)丙烯酰胺(化合物97e)
除了將化合物96a換成化合物96e之外，與化合物97a同樣地制備化合物97e。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.85(s,1H),9.02(s,1H),8.77(d,J＝6.9Hz,1H),8.32(d,J＝5.2Hz,1H),7.94(s,1H),7.73(d,J＝7.3Hz,1H),7.39-7.21(m,2H),7.10-6.84(m,4H),6.76(s,1H),6.50-6.45(m,1H),5.76-5.74(m,1H),3.86(s,3H),3.12-3.06(m,2H),2.75-2.72(m,5H),2.55(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+486.3。
化合物103的合成路線如方案12所示：
方案12
1-(2-氯吡啶-4-基)-3-甲基-1H-吲唑(化合物99)
在氮氣保護下，在100mL反應(yīng)瓶中加入化合物98(1.1g，8.3mmol)，2-氯-4-碘吡啶(4.0g，16.7mmol)，碘化亞銅(158mg，0.83mmol)，磷酸鉀(3.5g，16.7mmol)，反式-N,N’-二甲基環(huán)己二胺(237mg，1.67mmol)，甲苯(30mL)，升溫至80℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)完畢，過濾，濾液濃縮后，柱層析得到化合物99(1.2g)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.47(d,J＝5.6Hz,1H),7.90-7.85(m,2H),7.79-7.70(m,2H),7.62-7.53(m,1H),7.35(t,J＝7.5Hz,1H),2.67(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+244.1。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-1-基)吡啶-2-胺(化合物100)
在氮氣保護下，在100mL反應(yīng)瓶中加入化合物99(1.2g，4.9mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(1.2g，6.3mmol)，醋酸鈀(110mg，0.49mmol)，4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(566mg，0.98mmol)，叔丁醇鉀(1.1g，9.8mmol)，甲苯(20mL)，加熱至100℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)完畢，過濾，濾液濃縮后，柱層析得到化合物100(500mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.37(d,J＝8.2Hz,1H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.58-7.54(m,1H),7.37-7.31(m,2H),7.26(s,1H),7.13(s,1H),6.77(d,J＝12.1Hz,1H),4.05(s,3H),2.68(s,3H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+394.1。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(3-甲基-1H-吲唑-1-基)吡啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物101)
室溫下向化合物100(500mg，1.4mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(15mL)的溶液中依次加入N,N-二異丙基乙胺(0.5mL)和N,N,N'-三甲基乙二胺(0.36mL，2.8mmol)?；旌衔锛訜岬?0℃反應(yīng)2h，反應(yīng)完成后，加入乙酸乙酯和水。充分?jǐn)嚢?，加硅藻土過濾，有機相用飽和食鹽水多次洗滌，干燥濃縮后，柱層析得到化合物101(500mg)。MS(ESI)(m/z):[M+H]+476.2。
N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(3-甲基-1H-吲唑-1-基)吡啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物102)
除了將化合物95a換成化合物101之外，與化合物96a同樣地制備化合物102。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.32(d,J＝6.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.3Hz,1H),7.76(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.58-7.44(m,1H),7.34-7.24(m,2H),7.20(s,1H),6.99(s,1H),6.74(s,1H),3.85(s,3H),3.01(t,J＝6.6Hz,2H),2.70(s,3H),2.67(s,3H),2.48(m,2H),2.33(s,6H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+446.3。
實施例45：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(3-甲基-1H-吲唑-1-基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物103)
除了將化合物96a換成化合物102之外，與化合物97a同樣地制備化合物103。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.16(s,1H),9.22(s,1H),8.35(d,J＝5.6Hz,1H),8.11(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(t,J＝7.7Hz,1H),7.38(s,1H),7.27-7.24(m,2H),7.03(s,1H),6.82(s,1H),6.52-6.42(m,J＝19.5Hz,2H),5.75(d,J＝11.6Hz,1H),3.88(s,3H),2.92(m,2H),2.74(s,3H),2.66(s,3H),2.31-2.25(m,8H)；MS(ESI)(m/z):[M+H]+500.3。
生物活性測試部分
以下描述了MTT細(xì)胞增殖試驗。
腫瘤細(xì)胞增殖及生長抑制分析：H1975(非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，EGFR L858K/T790M)、Α431(人表皮癌細(xì)胞，EGFR野生型)細(xì)胞均從ATCC細(xì)胞庫購買。H1975細(xì)胞的生長培養(yǎng)基為RPMI-1640(GIBCO，A10491-065)，10％胎牛血清。A431細(xì)胞的生長培養(yǎng)基為DMEM(GIBCO，11995-065)，10％胎牛血清。采用CellTiter-Glo分析法檢測化合物對腫瘤細(xì)胞的增殖活性的影響。腫瘤細(xì)胞暴露在處理條件下72h，各細(xì)胞系每次實驗所使用的細(xì)胞密度根據(jù)細(xì)胞72h生長曲線進行調(diào)整。為待測試化合物設(shè)置了10個濃度梯度3倍稀釋(0.5nM-10μM)，每個濃度值使用3組平行對照。
將對數(shù)生長期的細(xì)胞用胰蛋白酶消化制成細(xì)胞懸液，Roche計數(shù)儀計數(shù)并用完全培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋，使細(xì)胞終濃度為1～2×103個cell/mL。將細(xì)胞接種于384孔板中，每孔為22.6μL，設(shè)置3組平行，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。將化合物溶于DMSO，配制濃度為10μmol/L的母液，隨后將化合物用BRAVO儀器進行梯度稀釋，逐步稀釋得到的化合物濃度分別為10、3.33、1.11、0.37、0.123、0.041、0.0137、0.00457、0.00152、0.0005μmol/L。取2μL化合物溶液加到18μL的培養(yǎng)基中，充分混合后，再取2μL化合物和培養(yǎng)基混合溶液加到18μL的培養(yǎng)基中，充分混合。取2.4μL的混合物加入384孔板中。2.4μL稀釋后的DMSO代替化合物溶液用作0％抑制對照(DMSO終濃度要小于0.1％，以減少DMSO帶來的影響)。培養(yǎng)72h之后,加入24μL CellTiter-Glo試劑。在一個定軌振蕩器上混合內(nèi)容物2min，誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。將384孔板室溫孵育10min，使熒光信號值穩(wěn)定。用M1000PRO(TECAN)讀取數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism version 5.0進行計算，GI50值通過使用劑量反應(yīng)曲線的非線性回歸模型調(diào)整得到。
測試結(jié)果如下表所示。