本發(fā)明涉及癌癥的聯(lián)合療法（或多藥療法），并且更具體地，涉及肝癌的索拉非尼-寡核苷酸（例如，微RNA模擬物)聯(lián)合療法。
背景技術(shù)：
：肝癌（或肝癌（hepaticcancer))是起源于肝臟的癌癥。原發(fā)性肝癌是全球排名第五的最常被診斷出的癌癥，并且是癌癥死亡的第二大原因。肝癌是在肝臟的表面或內(nèi)部生長的惡性腫瘤。它們由肝臟自身或由肝臟內(nèi)的包括血管或膽管在內(nèi)的結(jié)構(gòu)形成。肝癌的主要原因是乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的病毒感染。通常，繼發(fā)于由這些病毒引起的肝硬化而形成癌癥。由于這一原因，肝癌的最高發(fā)生率出現(xiàn)在這些病毒流行的地區(qū)，包括東亞和撒哈拉以南非洲。肝癌不應(yīng)與肝轉(zhuǎn)移混淆，肝轉(zhuǎn)移也被稱為繼發(fā)性肝癌，它是源于身體其他部位的器官并遷移至肝臟的癌癥。占所有原發(fā)性肝癌的約75%的最常見肝癌是肝細(xì)胞癌（HCC)。HCC是由肝細(xì)胞——已知為變成惡性的肝細(xì)胞——形成的癌癥。由肝細(xì)胞形成的另一種類型的癌癥是肝母細(xì)胞瘤，它特別是由不成熟的肝細(xì)胞形成的。它是主要在兒童中發(fā)生的罕見惡性腫瘤，并且占所有兒童癌癥的約1%和所有15歲以下原發(fā)性肝癌的79%。肝癌還可以由肝臟內(nèi)的其他結(jié)構(gòu)如膽管、血管和免疫細(xì)胞形成。膽管的癌癥（膽管癌和膽管細(xì)胞囊腺癌)占原發(fā)性肝癌的約6%。還有由HCC和膽管癌組成的HCC的變化類型。肝血管的腫瘤包括血管肉瘤和血管內(nèi)皮瘤。胚胎性肉瘤和纖維肉瘤產(chǎn)生于被稱為間充質(zhì)的一種類型的結(jié)締組織。由肝臟中的肌肉產(chǎn)生的癌癥是平滑肌肉瘤和橫紋肌肉瘤。其他不太常見的肝癌包括癌肉瘤、畸胎瘤、卵黃囊瘤、類癌瘤和淋巴瘤。淋巴瘤通常具有肝臟的彌漫性浸潤，但是在罕見的情況下它也可以形成肝腫塊（livermass)。手術(shù)切除通常是非硬化肝臟的治療選擇。并發(fā)癥如肝衰竭的風(fēng)險(xiǎn)可隨著硬化肝的切除而增大。近幾十年來，切除后的5年生存率已大大提高，并且現(xiàn)在可超過50%。由于初始腫瘤的擴(kuò)散或新腫瘤的形成，切除后的復(fù)發(fā)率超過70%。還可以在HCC的病例中使用肝移植，條件是該治療形式是能夠被接受的并且該腫瘤符合特定的標(biāo)準(zhǔn)（例如，米蘭標(biāo)準(zhǔn)（Milancriteria))。少于30-40%的患有HCC的個(gè)體符合手術(shù)和移植的條件，因?yàn)樵摪┌Y通常發(fā)現(xiàn)于晚期。而且，HCC可能在等待肝移植的期間內(nèi)進(jìn)展，這最終可以妨礙移植。經(jīng)皮消融是可以提供治愈的唯一非手術(shù)治療。有許多形式的經(jīng)皮消融，它們由向肝臟中注射化學(xué)品（乙醇或乙酸)或使用射頻消融、微波、激光或冷凍療法產(chǎn)生極端溫度組成。在這些形式中，射頻消融在HCC治療中是最受推崇的之一，但是其限制包括分別由于生成熱和熱同步效應(yīng)而無法治療靠近其他器官和血管的腫瘤。全身化療對于HCC而言不常規(guī)使用，盡管局部化療可以在被稱為經(jīng)動脈化療栓塞的程序中使用。在該程序中，細(xì)胞毒性藥物如多柔比星或順鉑與碘油一起施用，并且供應(yīng)肝臟的動脈被明膠海綿或其他顆粒阻塞。由于大多數(shù)全身性藥物在HCC的治療中無效，因此對參與肝癌形成的分子途徑的研究得到了索拉非尼（Sorafenib)，它是在一些情況下阻止細(xì)胞增殖和血細(xì)胞生長的一種靶向治療藥物。放療不常用于HCC，因?yàn)楦闻K不耐受放射。但隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，有可能提供對腫瘤的良好靶向放射，從而使到達(dá)腫瘤之外部分的劑量減至最小。放療加上化療栓塞、局部化療、全身化療或靶向治療藥物的雙重治療與單獨(dú)放療相比可以顯示出益處。索拉非尼（作為銷售）是一種FDA批準(zhǔn)的用于晚期原發(fā)性肝癌患者的藥物。它是與多種細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面激酶相互作用并且在靶向Raf/Mek/Erk途徑中唯一的小分子。通過抑制這些激酶，抑制與細(xì)胞增殖和血管生成有關(guān)的遺傳轉(zhuǎn)錄。然而，即便研發(fā)出了藥物如索拉非尼，但由于其效果有限且毒性嚴(yán)重，所以目前可供選擇的肝癌治療不足。雖然正在進(jìn)行新治療劑和改善現(xiàn)有治療劑的研究，但是還未產(chǎn)生任何臨床上相關(guān)的突破。在一個(gè)實(shí)例中，研究人員推測微RNA技術(shù)有可能改善已知的治療劑如索拉非尼。參見Yang等人,“microRNA-34aTargetsBcl-2andSensitizesHumanHepatocellularCarcinomaCellstoSorafenibTreatment”1-10TechnologyinCancerResearchandTreatment，2013年7月11日。然而，該工作受限于其沒有建立微RNA與索拉非尼之間的協(xié)同作用或大于加和的作用，并且它沒有建立任何臨床上相關(guān)的關(guān)于給藥的信息或指南。藥物-藥物相互作用的本質(zhì)以及兩種藥劑是否協(xié)同地、加和地或拮抗地配合，可根據(jù)藥物比例、藥物濃度和所需的效力而變化。因此，通常基于Loewe的加和性模型使用數(shù)學(xué)算法來評估藥物組合。在該模型中，當(dāng)單獨(dú)使用和聯(lián)合使用時(shí)，計(jì)算由單獨(dú)的單一藥劑的劑量-響應(yīng)曲線推出的聯(lián)合指數(shù)（CI)值。CI<1、CI=1和CI>1分別表示協(xié)同、加和和拮抗的相互作用。因此，需要新的療法來改善患者結(jié)果和降低毒性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明至少部分地基于以下發(fā)現(xiàn)：索拉非尼和微RNA的某些組合對于抑制和阻止肝癌細(xì)胞的增殖是特別有效的。可以將此發(fā)現(xiàn)表述為對于索拉非尼、miR-34和miR-215以及肝癌（例如，HCC）特異性的協(xié)同作用或大于加和的作用。對于miR-34和miR-215，該發(fā)現(xiàn)在多種肝癌細(xì)胞類型中是一致的，但是并不必然地直接延伸到其他的微RNA、化療劑和/或癌癥。此外，該發(fā)現(xiàn)不能延伸到索拉非尼與miR-34或miR-215的所有比例——一些比例是近乎加和的，而其他比例是拮抗的。因此，本發(fā)明提供了用于治療/處理受試者中包括肝癌細(xì)胞的肝癌以及肝癌細(xì)胞的方法和組合物，由此按特別有效（例如，協(xié)同的或大于加和的）的比例施用索拉非尼和miR-34或miR-215模擬物。例如，在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療患有肝癌的受試者（或患有原發(fā)性肝癌的受試者，或患有HCC的受試者）的方法。該方法包括向該受試者施用合成的寡核苷酸。該寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列。該方法還包括向該受試者施用索拉非尼。索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比（即，向該受試者施用的索拉非尼與寡核苷酸的摩爾比）為約10-2000（即，在約10-2000的范圍內(nèi)）。在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括抑制肝癌細(xì)胞（或原發(fā)性肝癌細(xì)胞，或HCC細(xì)胞)的增殖的方法。該方法包括向所述細(xì)胞施用合成的寡核苷酸。該寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列。該方法還包括向所述細(xì)胞施用索拉非尼。索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比為約10-2000。在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括抑制肝癌細(xì)胞的增殖的方法。該方法包括向肝癌細(xì)胞施用寡核苷酸，該寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列；并且向所述細(xì)胞施用索拉非尼，其中索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比為約10-2000。在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療患有肝細(xì)胞癌（HCC)的受試者的方法。該方法包括向患有HCC的受試者施用寡核苷酸，該寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列；并且向該受試者施用索拉非尼，其中索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比為約10-2000并具有<1的聯(lián)合指數(shù)（CI)。在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療患有肝細(xì)胞癌（HCC)的受試者的方法。該方法包括向患有HCC的受試者施用每天約10、20、25、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225或250mg/m2的寡核苷酸，該寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列；并且向該受試者施用約800、600、400或200mg/天的索拉非尼，其中根據(jù)在一天、一周、14天、21天或28天內(nèi)向該受試者施用的索拉非尼:寡核苷酸的量，索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比為約10-2000，并且其中索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比具有小于約0.95、0.90、0.85、0.80、0.75、0.70、0.65、0.60、0.55、0.50、0.45、0.40、0.35、0.30、0.25或0.20的聯(lián)合指數(shù)（CI)。在多個(gè)實(shí)施方案中，任意所述方面和實(shí)施方案可以與以下任意一種或多種特征組合。例如：在一些實(shí)施方案中，所述肝癌是原發(fā)性肝癌。在一些實(shí)施方案中，所述肝癌是肝細(xì)胞癌（HCC)。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:1-4中的至少一個(gè)至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:1至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列至少85%、90%、95%或100%相同。在一些實(shí)施方案中，所述摩爾比表現(xiàn)出協(xié)同作用。在一些實(shí)施方案中，所述協(xié)同作用被量化為小于約0.80、0.75、0.70、0.65、0.60、0.55、0.50、0.45、0.40、0.35、0.30、0.25或0.20的聯(lián)合指數(shù)（CI）。在一些實(shí)施方案中，所述摩爾比在約50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、100-500、100-400、100-300、100-200、150-500、150-400、150-300、150-200、200-500、200-400、200-300、250-500、250-400或250-300的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述摩爾比在約15-1723、15-492、60-197、30-492、52-1723的范圍內(nèi)，或?yàn)榧s30、40、53、60、70、79、89、98、106、141、197、266、311或931。在一些實(shí)施方案中，所述摩爾比基于在一天、一周、14天、21天或28天內(nèi)向受試者施用的索拉非尼:寡核苷酸的量。在一些實(shí)施方案中，將所述寡核苷酸以如下方式施用于受試者：經(jīng)7天以1、2、3、4、5、6或7個(gè)日劑量；經(jīng)14天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個(gè)日劑量；經(jīng)21天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21個(gè)日劑量；或者經(jīng)28天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個(gè)日劑量。在一些實(shí)施方案中，以如下方式向所述受試者施用所述寡核苷酸：施用2周（共14天)；施用1周、停藥1周（共14天)；連續(xù)施用3周（共21天)；施用2周、停藥1周（共21天)；施用1周、停藥2周（共21天)；連續(xù)施用4周（共28天)；連續(xù)3周、停藥1周（共28天)；施用2周、停藥2周（共28天)；或施用1周、連續(xù)停藥3周（共28天)。在一些實(shí)施方案中，在7、14、21或28天周期的第1天；在21或28天周期的第1天和第15天；在21或28天周期的第1天、第8天和第15天；或在21或28天周期的第1天、第2天、第8天和第15天，施用所述寡核苷酸。根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述寡核苷酸每1、2、3、4、5、6、7或8周施用一次。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)周期。在一些實(shí)施方案中，在索拉非尼之前、與索拉非尼同時(shí)或在索拉非尼之后施用所述寡核苷酸。在一些實(shí)施方案中，索拉非尼的劑量為約800、600、400或200mg/天。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸的劑量為每天約10、20、25、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225或250mg/m2。在一些實(shí)施方案中，所述肝癌對索拉非尼具有原發(fā)性或繼發(fā)性抗性。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i)具有與SEQIDNO:1或SEQIDNO:11至少80%相同的5’至3’序列的微RNA區(qū)，和（ii)具有與該微RNA區(qū)60-100%互補(bǔ)的5’至3’序列的互補(bǔ)區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含以下一項(xiàng)或多項(xiàng)：（i)該分子的互補(bǔ)鏈的5'末端處核苷酸的磷酸基團(tuán)（phosphate)或羥基的替代基團(tuán)；（ii)互補(bǔ)區(qū)的最前或最后1至6個(gè)殘基中的一個(gè)或多個(gè)糖修飾；或（iii)互補(bǔ)區(qū)的3'端處最后1至5個(gè)殘基中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸與微RNA區(qū)的相應(yīng)核苷酸之間的非互補(bǔ)性。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i)封閉5’OH或5’末端處磷酸基團(tuán)的至少一個(gè)修飾的核苷酸，其中所述至少一個(gè)核苷酸修飾為NH2、生物素、胺基團(tuán)、低級烷基胺基團(tuán)、乙?；鶊F(tuán)或2’氧-甲基（2’O-Me)修飾；或（ii)選自2’F、2’NH2、2’N3、4’硫代或2’O-CH3的至少一個(gè)核糖修飾。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）具有與SEQIDNO:1或SEQIDNO:11具有至少80%序列同一性的序列的第一多核苷酸；（ii）具有與所述第一多核苷酸60-100%互補(bǔ)的5'至3'序列的單獨(dú)的第二多核苷酸；以及（iii）在互補(bǔ)鏈的5'端處的低級烷基胺基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，所述肝癌是肝細(xì)胞癌（HCC）；所述序列與SEQIDNO:1或SEQIDNO:11至少80%相同；并且所述摩爾比具有<1的聯(lián)合指數(shù)（CI）。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:5-8中的至少一個(gè)至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:9至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:10至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:11至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述序列與SEQIDNO:12至少80%相同。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸為7-130、7-30、7-25、15-30、15-25、17-30、17-25、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)核堿基長。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸具有雙鏈結(jié)構(gòu)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸不通過轉(zhuǎn)染施用。在一些實(shí)施方案中，所述受試者不是細(xì)胞培養(yǎng)物或組織培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、豬或非人靈長類動物。本發(fā)明的各個(gè)其他方面、實(shí)施方案和特征在下文中詳細(xì)說明并在權(quán)利要求中體現(xiàn)。也就是說，前文和以下描述僅是示例性和解釋性的，并非限制所請求保護(hù)的本發(fā)明。附圖說明圖1A-D示出了miRNA模擬物在肝癌細(xì)胞中的劑量-效應(yīng)曲線。使系列稀釋的miRNA（0.03–30nM）在肝癌細(xì)胞中反向轉(zhuǎn)染，并在轉(zhuǎn)染后6天通過阿拉瑪藍(lán)（AlamarBlue）測定細(xì)胞增殖或抑制百分比（效應(yīng)）。將數(shù)據(jù)相對于假轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行歸一化。圖1A呈現(xiàn)了miR-34的數(shù)據(jù)，圖1B呈現(xiàn)了miR-124a的數(shù)據(jù)，圖1C呈現(xiàn)了miR-215的數(shù)據(jù)，圖1D呈現(xiàn)了miR-101的數(shù)據(jù)，圖1E呈現(xiàn)了miR-26a的數(shù)據(jù)。圖2示出了索拉非尼在肝癌細(xì)胞中的劑量-效應(yīng)曲線。將細(xì)胞以每孔2000個(gè)細(xì)胞接種在96孔板中。接種細(xì)胞后三天，向培養(yǎng)基中加入（0.1–100μM）系列稀釋的索拉非尼。在藥物處理后3天，通過阿拉瑪藍(lán)測定細(xì)胞增殖或抑制百分比。將數(shù)據(jù)相對于經(jīng)索拉非尼溶劑（DMSO最終濃度為1%）處理的細(xì)胞進(jìn)行歸一化。圖3A-D示出了聯(lián)合指數(shù)（CI）圖，其顯示實(shí)際CI值相對于軸上從0（無抑制）至1（100%抑制）的癌細(xì)胞抑制水平。被認(rèn)為是協(xié)同的并且具有臨床價(jià)值的組合是在最大癌細(xì)胞抑制處具有低CI值（<0.6）的那些組合。圖3A呈現(xiàn)了miR-34的數(shù)據(jù)，圖3B呈現(xiàn)了miR-101的數(shù)據(jù)，圖3C呈現(xiàn)了miR-26a的數(shù)據(jù)，圖3D呈現(xiàn)了miR-215的數(shù)據(jù)。圖4示出了miR-34-Mim/索拉非尼組合在原位人Hep3b異種移植物中的體內(nèi)功效。圖5呈現(xiàn)了索拉非尼:miR-34比例和給藥的不同范圍。具體實(shí)施方式本發(fā)明至少部分地基于以下發(fā)現(xiàn)：索拉非尼和微RNA的某些組合對于抑制和阻止肝癌細(xì)胞的增殖是特別有效的。可以將此發(fā)現(xiàn)表述為對于索拉非尼和miR-34及miR-215的某些組合以及肝癌特異性的協(xié)同作用或大于加和的作用。對于miR-34和miR-215的特定濃度，該發(fā)現(xiàn)在多種肝癌細(xì)胞類型中是一致的，但是并不必然地直接延伸到其他的微RNA、化療劑和/或癌癥。實(shí)際上，大多數(shù)藥物不能協(xié)同作用，并且許多可能拮抗。即使在存在協(xié)同作用的情況下，它可能僅存在于某個(gè)濃度范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明提供了用于治療/處理受試者中包括肝癌細(xì)胞的肝癌以及肝癌細(xì)胞的出乎意料的有利方法和組合物，由此以特別有效（例如，協(xié)同的或大于加和的）的比例施用索拉非尼和miR-34或miR-215模擬物。微RNA和合成寡核苷酸微RNA（miRNA）是天然存在的小的非編碼RNA分子，它在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)并通過調(diào)節(jié)多種基因產(chǎn)物和細(xì)胞途徑來決定細(xì)胞命運(yùn)（Bartel,Cell,2004.116(2):281-97)。miRNA通過經(jīng)由阻斷蛋白質(zhì)翻譯機(jī)制降解mRNA轉(zhuǎn)錄物來干擾基因表達(dá)（Bartel，同上)。miRNA靶向至具有完全或部分互補(bǔ)的序列的mRNA，這賦予這些調(diào)節(jié)性RNA靶向至寬泛但特異性的一組mRNA的能力。迄今為止，有大約1,500個(gè)帶注釋的人類miRNA基因在諸如細(xì)胞增殖、分化、凋亡、干細(xì)胞發(fā)育和免疫功能等多樣化的過程中發(fā)揮作用（Costinean等人,ProcNatlAcadSciUSA,2006.103(18):7024-9)。通常，miRNA的誤調(diào)節(jié)可能導(dǎo)致包括癌癥在內(nèi)的人類疾病的發(fā)展（Esquela-Kerscher等人,NatRevCancer,2006.6(4):259-69；Calin等人,2006.6(11):857-66)。在癌癥中解除調(diào)節(jié)的miRNA可用作真正的腫瘤抑制基因或癌基因。單一miRNA可靶向至多個(gè)癌基因和致癌信號途徑（Forgacs等人,PatholOncolRes,2001.7(1):6-13)，并且將這種能力轉(zhuǎn)化為將來的治療可能有希望產(chǎn)生針對腫瘤異質(zhì)性有效的治療方法。因此，miRNA具有成為針對癌癥的強(qiáng)力治療劑的潛力（Volinia等人,ProcNatlAcadSciUSA,2006.103(7):2257-61；Tong等人,CancerGeneTher,2008.15(6):341-55)，根據(jù)我們目前對癌癥的了解，該癌癥充當(dāng)僅在干預(yù)多個(gè)癌癥途徑時(shí)才能被成功治療的“途徑疾病”（Wiggins等人,CancerRes,2010.70(14):5923–5930；Jones等人,Science,2008.321(5897):1801-6；Parsons等人,Science,2008.321(5897):1807-12)。截至2013年3月，MirnaTherapeutics（Austin，TX)已完成了臨床前開發(fā)項(xiàng)目，以支持cGMP材料的生產(chǎn)和基于miR-34的補(bǔ)充療法（miR-34-Mim)的IND授權(quán)研究（IND-enablingstudies)的進(jìn)行。Mirna在非GLP初步研究中使用小鼠、大鼠和非人靈長類動物評估了含有miR-34模擬物的制劑的毒性以及藥代動力學(xué)譜。這些實(shí)驗(yàn)在預(yù)測的miR-34-Mim的治療水平下沒有顯示不良事件，如通過臨床觀察、體重、臨床化學(xué)（包括LFT、RFT以及其他)、血液學(xué)、總體病理學(xué)、所選器官的組織病理學(xué)和補(bǔ)體（CH50)所測定的。此外，配制成脂質(zhì)納米顆粒的miRNA模擬物并不誘導(dǎo)先天免疫系統(tǒng)，如在完全免疫活性的小鼠、大鼠、非人靈長類動物以及人全血樣本中所顯示的。在Bader,FrontGenet.2012；3120中提供了對臨床前數(shù)據(jù)的更詳細(xì)的評述。在本發(fā)明的方法中，將特定的合成寡核苷酸（例如，合成微RNA模擬物)作為與索拉非尼的聯(lián)合療法的一部分施用于受試者。在特定的實(shí)施方案中，該寡核苷酸是miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-449a、miR-449b、miR-449c、miR-192或miR-215的模擬物。這些微RNA是本領(lǐng)域公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，它們包括傳統(tǒng)的天然存在的序列及其任何化學(xué)修飾的形式和序列同源物。代表性的序列在以下表1中提供。在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明采用合成寡核苷酸作為微RNA模擬物，就此而言，該寡核苷酸或微RNA沒有被轉(zhuǎn)染至受試者細(xì)胞中。相反，在多個(gè)實(shí)施方案中，通過注射或輸注施用該寡核苷酸。所述受試者可以是哺乳動物（例如，人或?qū)嶒?yàn)動物如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、豬、非人靈長類動物等)，而非分離的細(xì)胞、組織或其培養(yǎng)物。類似地，本發(fā)明不使用反義的RNA干擾（RNAi)或類似的技術(shù)。此外，這是一個(gè)重要的區(qū)別，因?yàn)楸景l(fā)明的寡核苷酸或微RNA是“有義”鏈或模擬物，它與反義和RNAi的極性相反。通常，與本發(fā)明一起使用的寡核苷酸是7-130個(gè)核苷酸長的雙鏈RNA分子，其具有兩個(gè)單獨(dú)的鏈或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。例如，寡核苷酸可以是7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、7-30、7-25、15-30、15-25、17-30或17-25個(gè)核苷酸長。兩條鏈中被稱為“引導(dǎo)鏈”的一條鏈含有與下表中所示的親本微RNA序列的種子序列（核苷酸位置2-9)相同或基本相同的序列。如本文所用的“基本相同”意指最多允許1或2個(gè)置換和/或缺失。在一些實(shí)施方案中，所述引導(dǎo)鏈包含與本文提供的相應(yīng)全長序列至少80%、85%、90%、95%相同的序列。兩條鏈中被稱為“過客鏈（passengerstrand）”的第二條鏈含有與相應(yīng)的給定微RNA的種子序列互補(bǔ)或基本互補(bǔ)的序列。0如本文所用的“基本互補(bǔ)”意指最多允許1或2個(gè)錯(cuò)配和/或缺失。在一些實(shí)施方案中，所述過客鏈包含與本文提供的相應(yīng)的全長序列的互補(bǔ)序列至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%相同的序列。在一些實(shí)施方案中，該寡核苷酸是miR-34a、miR-34b、miR-34c、miR-449a、miR-449b、miR-449c、miR-192或miR-215的模擬物，或其類似物或同源物。在一些實(shí)施方案中，該寡核苷酸包括這些微RNA中的一個(gè)的種子序列。表1-微RNA序列和序列標(biāo)識號“*”表示缺失或任意核苷酸。miR-34/449和miR-192/215種子序列以粗體突出顯示。合成寡核苷酸可以配制在脂質(zhì)體中，例如在美國專利號7,858,117和7,371,404、美國專利申請公開號2009-0306194和2011-0009641中所述的那些脂質(zhì)體中。其他遞送技術(shù)是可用的，包括脂質(zhì)或各種配體綴合物等。合成寡核苷酸還可以被化學(xué)修飾，例如，合成寡核苷酸可具有在過客鏈上的5'帽（例如，NH2-(CH2)6-O-）和/或在同一條鏈的第一和/或第二核苷酸處的錯(cuò)配。其他可能的化學(xué)修飾可以包括骨架修飾（例如，硫代磷酸酯、嗎啉代）、核糖修飾（例如，2’-OMe、2’-Me、2’-F、2’-4’-鎖糖/橋糖（例如，LNA、ENA、UNA））以及核堿基修飾（參見，例如，Peacock等人,2011.JAmChemSoc.,133(24):9200–9203）。在某些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸具有如在美國專利號7,960,359和美國專利申請公開號2012-0276627和2012-0288933中所述的修飾。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）具有與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的5’至3’序列的微RNA區(qū)，和（ii）具有與該微RNA區(qū)60-100%互補(bǔ)的5’至3’序列的互補(bǔ)區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸包含與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%、85%、90%、95%或100%相同的序列。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸包含單一多核苷酸或雙鏈多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸包含發(fā)夾多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）具有與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列的第一多核苷酸；和（ii）具有與第一多核苷酸60-100%互補(bǔ)的5’至3’序列的單獨(dú)的第二多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含以下一項(xiàng)或多項(xiàng)：（i）RNA分子的互補(bǔ)鏈的5'末端處核苷酸的磷酸基團(tuán)或羥基的替代基團(tuán)；（ii）互補(bǔ)區(qū)的最前或最后1至6個(gè)殘基中的一個(gè)或多個(gè)糖修飾；或（iii）互補(bǔ)區(qū)的3'端處最后1至5個(gè)殘基中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸與微RNA區(qū)的相應(yīng)核苷酸之間的非互補(bǔ)性。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）封閉5’OH或5’末端處磷酸基團(tuán)的至少一個(gè)修飾的核苷酸，其中所述至少一個(gè)核苷酸修飾為NH2、生物素、胺基團(tuán)、低級烷基胺基團(tuán)、乙?；鶊F(tuán)或2’氧-甲基（2’O-Me）修飾；或（ii）選自2’F、2’NH2、2’N3、4’硫代或2’O-CH3的至少一個(gè)核糖修飾。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）具有與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)至少80%相同的序列的第一多核苷酸；（ii）具有與所述第一多核苷酸60-100%互補(bǔ)的5'至3'序列的單獨(dú)的第二多核苷酸；以及（iii）在互補(bǔ)鏈的5'端處的低級烷基胺基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，所述合成寡核苷酸為17至30個(gè)核苷酸的長度，并且包含（i）具有與SEQIDNO:1-12中的至少一個(gè)100%相同的第一多核苷酸；（ii）具有與所述第一多核苷酸100%互補(bǔ)的5'至3'序列的單獨(dú)的第二多核苷酸；以及（iii）在互補(bǔ)鏈的5'端處的低級烷基胺基團(tuán)。合成寡核苷酸通?？梢砸苑秶鸀槊縿?.001-6.0mg/kg，例如，每劑0.01-3.0、0.025-1.0或0.25-0.5mg/kg的劑量，通過緩慢團(tuán)注經(jīng)靜脈內(nèi)施用，每周一、二、三個(gè)或更多個(gè)劑量，持續(xù)2、4、6、8周或必要時(shí)更長的時(shí)間。關(guān)于合成寡核苷酸給藥和施用的進(jìn)一步說明和細(xì)節(jié)在以下“聯(lián)合化療”部分提供。索拉非尼在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明包括索拉非尼（即，甲苯磺酸索拉非尼以及索拉非尼的其他藥學(xué)上可接受的形式，鹽和酯）的使用。索拉非尼作為可商購獲得，其為索拉非尼的甲苯磺酸鹽。甲苯磺酸索拉非尼的化學(xué)名稱為4-(4-{3-[4-氯-3(三氟甲基)苯基]脲基}苯氧基)N-甲基吡啶-2-甲酰胺4-甲基苯磺酸鹽，并且其結(jié)構(gòu)式如下：式I甲苯磺酸索拉非尼是白色到淡黃色或淡褐色的固體，其分子式為C21H16ClF3N4O3xC7H8O3S，分子量為637.0g/mol。甲苯磺酸索拉非尼在水性介質(zhì)中部分不溶，在乙醇中微溶，而在PEG400中可溶。美國專利號7,235,576、7,235,576、7,897,623和8,124,630中也描述了索拉非尼。索拉非尼的劑量和施用被批準(zhǔn)為每天兩次口服400mg（2片），不隨食物服用。然而，可能需要中斷治療和/或減少劑量來控制疑似的藥物不良反應(yīng)。在這樣的情況下，可將劑量減少至每天一次400mg或減少至每隔一天400mg（參見，例如，口服片劑的FDA標(biāo)簽，美國首次批準(zhǔn)：2005年）。普通技術(shù)人員將會理解，索拉非尼劑量和施用可以遵照醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的指南，以及這些指南的醫(yī)學(xué)上接受的差異或改變。關(guān)于索拉非尼給藥和施用的進(jìn)一步說明和細(xì)節(jié)在以下“聯(lián)合化療”部分提供。肝癌在多個(gè)方面和實(shí)施方案中，本發(fā)明適用于處理肝癌細(xì)胞，包括受試者中的癌細(xì)胞，或體外處理經(jīng)分離的癌細(xì)胞。如果癌細(xì)胞在受試者中，則該受試者可以是患有肝癌的靈長類動物，如人。該受試者可以是哺乳動物，如除了小鼠之外的哺乳動物。該受試者可以是成人（即，18歲或以上）或未成年人（即，小于18歲）。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述肝癌（例如，HCC）對索拉非尼沒有抗性。或者，該肝癌（例如，HCC）可能對索拉非尼具有原發(fā)性或繼發(fā)性抗性。所述受試者可以是在不存在微RNA或合成寡核苷酸的情況下對索拉非尼的反應(yīng)者。所述受試者可以是在不存在微RNA或合成寡核苷酸的情況下對索拉非尼的無反應(yīng)者。在一些實(shí)施方案中，該受試者已經(jīng)經(jīng)歷了持續(xù)至少2、4、6、8、10個(gè)月或更長時(shí)間的采用索拉非尼的既往治療。在其他實(shí)施方案中，該受試者是已經(jīng)經(jīng)歷了對索拉非尼的一個(gè)或多個(gè)顯著不良副作用并因此需要減少劑量的患者。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述肝癌（例如，HCC）是中間期、晚期或末期的。該肝癌（例如，HCC）可以是轉(zhuǎn)移性或非轉(zhuǎn)移性的。該肝癌（例如，HCC）可以是可切除或不可切除的。該肝癌（例如，HCC）可以包含單個(gè)腫瘤、多個(gè)腫瘤或具有浸潤性生長模式（進(jìn)入門靜脈或肝靜脈）的邊界不清的腫瘤。該肝癌（例如，HCC）可以包括纖維層樣、假腺性（腺樣）、多形性（巨細(xì)胞）或透明細(xì)胞模式。該肝癌（例如，HCC）可以包括分化良好的形式，并且腫瘤細(xì)胞類似于肝細(xì)胞，形成小梁、索帶（cord）和巢，和/或在細(xì)胞質(zhì)中含有膽色素。該肝癌（例如，HCC）可以包括分化不良的形式，并且惡性上皮細(xì)胞是松散的、多形性的、間變性的和/或巨大的。在一些實(shí)施方案中，該肝癌（例如，HCC）與乙型肝炎、丙型肝炎、肝硬化或2型糖尿病相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是東部腫瘤協(xié)作組（ECOG）體力狀態(tài)≤2的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是具有如下定義的可接受的肝功能的人：（i）總膽紅素≤正常值上限（ULN）的1.5倍；僅對于肝細(xì)胞癌患者，總膽紅素≤3mg/dL（即，膽紅素的Child-Pugh得分不大于2）；（ii）天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和堿性磷酸酶（ALP）≤5xULN；或（iii）可接受的腎功能：·血清肌酸酐≤ULN的1.5倍，或者對于肌酸酐水平為規(guī)定正常值的1.5倍以上的患者，計(jì)算的肌酸酐清除率≥60mL/min/1.73m2。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是具有如下定義的可接受的血液狀態(tài)的人：（i）絕對嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（ANC）≥1500個(gè)細(xì)胞/mm3；（ii）血小板計(jì)數(shù)≥100,000個(gè)血小板/mm3（沒有輸血的情況下）；僅對于肝細(xì)胞癌患者，≥75,000個(gè)血小板/mm3；或（iii）血紅蛋白≥9g/dL。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是具有以下參數(shù)的人：凝血酶原時(shí)間（PT）或國際標(biāo)準(zhǔn)化比例（INR）≤1.25xULN；INR<1.7或凝血酶原時(shí)間（PT）<ULN以上4秒（即，凝血參數(shù)的Child-Pugh得分不大于1）；或血清白蛋白>2.8g/dL（即，白蛋白的Child-Pugh得分不大于2）。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是患有凝血酶原Child-PughA級（得分5-6）疾病的人。肝性腦病的得分必為1；腹水的得分必不大于2并且在臨床上無關(guān)；針對Child-Pugh級別的確定。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不患有紐約心臟協(xié)會（NYHA）III或IV級心臟病、在過去的6個(gè)月內(nèi)無心肌梗死、無不穩(wěn)定和/或癥狀性心律失?；蛟贓GC上無缺血跡象的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者不具有需要全身治療的不受控制的活動性細(xì)菌、病毒或真菌感染。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是非妊娠或哺乳婦女的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不具有人免疫缺陷病毒（HIV）的已知感染的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不患有可影響治療的嚴(yán)重的非惡性疾病（例如，腎盂積水、肝衰竭或其他病狀）的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不具有近期出血史的人和由于凝血病或結(jié)構(gòu)異常而易出血的患者。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不需要采用治療劑量的香豆素型抗凝血藥進(jìn)行治療的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是不患有被分級為Child-PughB或C的肝硬化的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是這樣的人，其中該受試者具有>10、50、100、200、300、400或500ng/mL的甲胎蛋白（AFP）。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是這樣的人，其中該受試者具有提高的（>10%）AFP-L3水平。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是脫-γ-羧基（異常）凝血酶原（DCP）>5、7.5、10、25、50、75或100ng/mL的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是具有異常水平的表皮生長因子受體（EGFR）（erbB-1）、c-erb-2（Her-2/neu）、c-erb-3（HER-3）、c-erb-4（HER-4）或其組合的人。在一些實(shí)施方案中，所述受試者是具有異常水平的甲胎蛋白（AFP）；磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）；脫-γ-羧基（異常）凝血酶原（DCP）；血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）；α-1-巖藻糖苷酶（AFU）；人羰基還原酶2；高爾基磷蛋白2（GOLPH2）；轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）；腫瘤特異性生長因子（TSGF）；肝細(xì)胞生長因子/分散因子（HGF/SF）；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；甲胎蛋白mRNA（AFPmRNA）；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶mRNA（GGTmRNA）；胰島素樣生長因子II（IGF-II）mRNA；白蛋白mRNA；DKK1；高爾基蛋白73（GP73）；由維生素K缺乏或拮抗劑誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)II（PIVKA-II）；miR-122、miR-192、miR-21、miR-223、miR-26a、miR-27a和miR-801或其組合的人。聯(lián)合化療聯(lián)合化療或多藥療法是使用多于一種藥物或其他療法（例如，不同于單藥療法，即單獨(dú)采用的任何療法）。如本文針對本發(fā)明所使用的，該術(shù)語是指使用索拉非尼和寡核苷酸（例如，miR-34或miR-215模擬物）的特定組合（例如，比例和/或給藥計(jì)劃表）。更具體地，本發(fā)明提供了用于治療肝癌的方法和組合物，其中以特別有效（例如，協(xié)同的或大于加和的）的比例施用索拉非尼和寡核苷酸（例如，miR-34或miR-215模擬物）。在多個(gè)實(shí)施方案中，該比例（例如，索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比）為約50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、100-500、100-400、100-300、100-200、150-500、150-400、150-300、150-200、200-500、200-400、200-300、250-500、250-400或250-300。在一些實(shí)施方案中，該摩爾比為或至少為約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000。在一些實(shí)施方案中，該摩爾比為或小于約1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950或2000。摩爾比的實(shí)例為約15-1723、15-492、60-197、30-492、52-1723、30、40、53、60、70、79、89、98、106、141、197、266、311或931。在整篇說明書和實(shí)施例中提供了其他實(shí)例。如本文在描述例如比例、劑量、時(shí)間等的范圍時(shí)所用的，術(shù)語“約”包含了在相關(guān)誤差界限之內(nèi)的、基本相同的（例如，對于遵循正態(tài)或高斯分布的現(xiàn)象，在本領(lǐng)域接受的置信區(qū)間如95%以內(nèi)）或另外不會實(shí)質(zhì)改變所定量的事物的效果的變化?？梢栽诓煌臅r(shí)間段內(nèi)測量索拉非尼：寡核苷酸的摩爾比。例如，該摩爾比可以是在一天、一周、14天、21天或28天內(nèi)向受試者施用的索拉非尼:寡核苷酸的量。索拉非尼給藥量和/或計(jì)劃表可以遵循臨床上批準(zhǔn)的指南或?qū)嶒?yàn)指南。在多個(gè)實(shí)施方案中，索拉非尼的劑量為約800、600、400或200mg/天。200mg/天的劑量可以按照每隔一天400mg的劑量來施用。同樣地，寡核苷酸給藥量和/或計(jì)劃表可以遵循臨床上批準(zhǔn)的指南或?qū)嶒?yàn)指南。在多個(gè)實(shí)施方案中，寡核苷酸的劑量為每天約10、20、25、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225或250mg/m2?？梢愿鶕?jù)選擇的索拉非尼的比例和劑量在治療有效范圍內(nèi)設(shè)定該劑量。如上文所討論的，可以利用在一天、一周、14天、21天或28天內(nèi)向受試者施用的寡核苷酸的量確定該比例。在多個(gè)實(shí)施方案中，將寡核苷酸經(jīng)一周（7天）以1、2、3、4、5、6或7個(gè)日劑量施用于受試者。可將寡核苷酸經(jīng)14天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個(gè)日劑量施用于受試者?？蓪⒐押塑账峤?jīng)21天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21個(gè)日劑量施用于受試者。可將寡核苷酸經(jīng)28天以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28個(gè)日劑量施用于受試者。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸：施用2周（共14天）；施用1周、停藥1周（共14天）；連續(xù)施用3周（共21天）；施用2周、停藥1周（共21天）；施用1周、停藥2周（共21天）；連續(xù)施用4周（共28天）；連續(xù)施用3周、停藥1周（共28天）；施用2周、停藥2周（共28天）；施用1周、連續(xù)停藥3周（共28天）。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸：在7、14、21或28天周期的第1天施用；在21或28天周期的第1天和第15天施用；在21或28天周期的第1天、第8天和第15天施用；或在21或28天周期的第1天、第2天、第8天和第15天施用。該寡核苷酸可以每1、2、3、4、5、6、7或8周施用一次。索拉非尼-寡核苷酸（例如，miR-34或miR-215模擬物）療法的療程可以由臨床醫(yī)生規(guī)定。該寡核苷酸（因此，該聯(lián)合療法）可以施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)周期?？衫^續(xù)索拉非尼-寡核苷酸（例如，miR-34或miR-215模擬物）療法的療程直到滿足臨床終點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，繼續(xù)該療法直到發(fā)生疾病進(jìn)展或不能接受的毒性。在一些實(shí)施方案中，繼續(xù)該療法直到達(dá)到被定義為沒有肝癌（例如，HCC）的病理完全響應(yīng)（pCR）率。在一些實(shí)施方案中，繼續(xù)該療法直到出現(xiàn)肝癌的部分或完全緩解。向多個(gè)患有HCC的受試者施用寡核苷酸和索拉非尼增加了總生存率（OS）、無進(jìn)展生存率（PFS）、無病生存率（DFS）、響應(yīng)率（RR）、生活質(zhì)量（QoL）或其組合。在多個(gè)實(shí)施方案中，所述治療減小了肝癌腫瘤的大小和/或數(shù)目。所述治療可以阻止肝癌腫瘤大小和/或數(shù)目的增加。所述治療可以阻止肝癌腫瘤轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明的方法中，施用不限于任何特定的遞送系統(tǒng)，并且可包括但不限于腸胃外（包括皮下、靜脈內(nèi)、髓內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)注射）、直腸、局部、經(jīng)皮或口服（例如，以膠囊、懸浮液或片劑的形式）。向個(gè)體施用可以以單一劑量或以重復(fù)給藥的形式，以及以多種生理學(xué)上可接受的鹽形式的任何形式，和/或以可接受的藥物載體和/或添加劑作為藥物組合物的一部分而發(fā)生。生理學(xué)上可接受的鹽形式和標(biāo)準(zhǔn)的藥物配制技術(shù)、劑量和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的（參見，例如，Physicians’DeskReference(）2005,59thed.,MedicalEconomicsCompany,2004；和Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,eds.Gennado等人21thed.,Lippincott,Williams&Wilkins,2005）。此外，在一種動物中獲得的有效劑量可使用本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)換因子外推用于另一種動物，包括人類。關(guān)于等效表面積劑量因子，參見，例如，F(xiàn)reireich等人,CancerChemotherReports50(4):219-244(1966)以及表2。表2-等效表面積劑量因子本發(fā)明的聯(lián)合療法并非具體地局限于任何特定的過程或方案，并且可以單獨(dú)地或與其他治療方法（例如，化療或放療）一起使用。在多個(gè)實(shí)施方案中，在索拉非尼之前、與索拉非尼同時(shí)、在索拉非尼之后或其組合施用所述寡核苷酸?？梢造o脈內(nèi)施用所述寡核苷酸。可以全身地或局部地施用所述寡核苷酸。除索拉非尼和寡核苷酸之外，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合療法還可包括附加的療法（例如，藥物、放射等）。類似地，本發(fā)明可以用作輔助療法（例如，當(dāng)與手術(shù)聯(lián)合時(shí)）。在多個(gè)實(shí)施方案中，受試者還通過手術(shù)切除、經(jīng)皮乙醇或乙酸注射、經(jīng)導(dǎo)管動脈化學(xué)栓塞、射頻消融、激光消融、冷凍消融、聚焦外束輻射立體定向放療（focusedexternalbeamradiationstereotacticradiotherapy）、選擇性內(nèi)照射療法、動脈內(nèi)碘-131-碘油施用和/或高強(qiáng)度聚焦超聲來治療。寡核苷酸和索拉非尼的組合可以用作輔助、新輔助、伴隨、同時(shí)或姑息性療法。寡核苷酸和索拉非尼的組合可以用作一線療法、二線療法或交叉療法。在一些實(shí)施方案中，通過與寡核苷酸組合減少了索拉非尼的治療有效劑量。例如，索拉非尼的周劑量或月劑量可相對于最大推薦劑量或最大耐受劑量減少至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在其他實(shí)施方案中，索拉非尼以有效劑量施用，該有效劑量比在不存在該寡核苷酸（或微RNA抑制劑）施用的情況下有效所需的劑量低至少50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實(shí)施方案中，索拉非尼的IC50相對于在不存在合成寡核苷酸（或微RNA抑制劑）的情況下的IC50降低了至少4、5、10、20、30、40、50或100倍。在下面的實(shí)施例部分提供了聯(lián)合療法的進(jìn)一步描述和實(shí)施方案。協(xié)同作用和聯(lián)合指數(shù)（CI）值如以上所討論和以下實(shí)施例中進(jìn)一步說明的，本發(fā)明提供了用于治療肝癌的方法和組合物，其中索拉非尼和miR-34以特別有效（例如，協(xié)同的或大于加和的）的比例施用。盡管協(xié)同作用和同義的術(shù)語在本領(lǐng)域中常用，但該性質(zhì)不總是被定義的或量化的（因此，聲稱的協(xié)同作用可能實(shí)際上并不存在）。關(guān)于本發(fā)明和以下實(shí)施例，使用聯(lián)合指數(shù)（CI）值來量化索拉非尼和寡核苷酸的各種組合的效果。基于Loewe的加和性模型測定CI值，以評估藥物-藥物相互作用的本質(zhì)，即對于各種藥物-藥物濃度和效應(yīng)水平（Fa，受影響的分?jǐn)?shù)；癌細(xì)胞增殖的抑制）其可以是加和的（CI=1）、拮抗的（CI>1）或協(xié)同的（CI<1）。按照Chou等人的方法，使用CompuSyn軟件（ComboSynInc.,Paramus,NJ）根據(jù)線性回歸趨勢線計(jì)算CI值，由此將雙曲線和S形的劑量-效應(yīng)曲線轉(zhuǎn)化為線性型（ChouTC(2010)DrugcombinationstudiesandtheirsynergyquantificationusingtheChou-Talalaymethod.CancerRes70:440-6，也可以在ComboSyn,Inc.,www.combosyn.com上獲得說明書）。在多個(gè)實(shí)施方案中，索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比在肝癌（例如，HCC）中表現(xiàn)出CI<1。索拉非尼:寡核苷酸的摩爾比可以在肝癌（例如，HCC）中表現(xiàn)出CI<0.95、0.90、0.85、0.80、0.75、0.70、0.65、0.60、0.55、0.50、0.45、0.40、0.35、0.30、0.25或0.20。在一個(gè)實(shí)施方案中，該寡核苷酸為miR-34（例如，miR-34模擬物）且該CI<0.60。CI可以與其他參數(shù)一起使用，例如CI<0.60、DRI>2及Fa>65%。在一個(gè)實(shí)施方案中，該寡核苷酸為miR-215（或miR-215模擬物）且CI<0.80、0.75、0.70、0.65、0.60、0.55或0.50（并且任選地與其他參數(shù)例如DRI>2和Fa>65%組合）。以下實(shí)施例提供了本發(fā)明的說明性實(shí)施方案。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會認(rèn)識到，可在不改變本發(fā)明的精神或范圍的情況下進(jìn)行多種修改和變化。這樣的修改和變化包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這些實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1-肝癌細(xì)胞中的索拉非尼和miRNA組合研究目的：研究治療性miRNA模擬物是否與索拉非尼協(xié)同配合以抑制培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞。概要：miR-34-Mim、miR-124a-Mim、miR-215-Mim、miR-101-Mim和miR-26a-Mim分別是強(qiáng)效的治療性miRNAmiR-34、miR-124a、miR-215、miR-101和miR-26a的模擬物。由于miR-449具有與miR-34相同的種子序列，因此miR-34-Mim也可以被認(rèn)為是miR-449模擬物。由于miR-192具有與miR-215相同的種子序列，因此miR-215-Mim也可以被認(rèn)為是miR-192模擬物。此處，我們確定了miR-34-Mim和miR-215-Mim為在四種肝癌細(xì)胞系中與索拉非尼協(xié)同作用的miRNA模擬物。數(shù)據(jù)表明，在特定的組合比例和高水平的癌細(xì)胞抑制下觀測到miR-34-Mim與索拉非尼之間的協(xié)同作用。引言：微RNA（miRNA）——一類小的非編碼RNA——可以充當(dāng)腫瘤抑制物。miRNA抑制多種癌基因產(chǎn)物和途徑，因此很有可能改善抗藥性并與其他抗癌劑協(xié)同作用。該實(shí)施例顯示了一系列的臨床前和臨床候選藥物，它們是使用索拉非尼的組合研究的對象?；贚oewe的加和性模型，按照Chou-Talalay的算法測試了miRNA/索拉非尼組合，以產(chǎn)生聯(lián)合指數(shù)（CI）值，該值指示加和的（CI=1）、協(xié)同的（CI<1）或拮抗的（CI>1）藥物作用。在四種肝癌細(xì)胞系中測定組合效果。材料和試劑：miRNAs：miR-34-Mim（Ambion,Cat#AM16099,Lot#ASO0012XE）miR-124a-Mim（Ambion,Cat#AM17104,Lot#ASO0L5VC）miR-215-Mim（Ambion,Cat#AM17104,Lot#ASO0M54V）miR-101-Mim（Ambion,Cat#AM17104,Lot#ASO0M5VA）miR-26a-Mim（TriLink,Lot#M109-E01B）miRNA制品為體內(nèi)可用級質(zhì)量（in-vivoreadyquality）并且被制備為在無核酸酶的H2O中的600nM儲備溶液。索拉非尼：在DMSO中10mM（LCLaboratories,CAT#S-8502,Lot#BSF-105）細(xì)胞系：Hep3b、HepG2、C3A（ATCCHB-8064,HB-8065,CRL-10741）和Huh7（日本）細(xì)胞培養(yǎng)基：EMEM（ATCC,Cat#30-2003,Lot#60946371）DMEM（Gibco,Cat#11320-033,Lot#1147373）胰蛋白酶（Gibco,Cat#25300-054）PBS（Ambion,Cat#AM9625）Opti-MEM（Gibco,Cat#31985-070,Lot#1293625）LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑（LifeTechnology,Cat#13778-150,Lot#1233863）儀器：PolarStarOptima讀板儀（BMGLabtech）數(shù)據(jù)分析：使用GraphPad（Prism）軟件確定索拉非尼和miRNA的IC50。使用CompuSyn軟件確定聯(lián)合指數(shù)值（CI）和劑量減少指數(shù)值（DRI）。DRI反映了在（i）單藥療法中的藥物與（ii）聯(lián)合療法中的相同藥物之間，達(dá)到預(yù)設(shè)效果所需的藥物濃度的變化（例如，當(dāng)存在協(xié)同作用時(shí)為減少）。實(shí)驗(yàn)程序：按照LAB-SOP-018中所述的方案，使用LipofectamineRNAiMAX將系列稀釋的miRNA模擬物反向轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中。使用阿拉瑪藍(lán)（Invitrogen）測定細(xì)胞增殖。轉(zhuǎn)染后六天，使用GraphPad（Prism）軟件計(jì)算非線性回歸曲線和IC50值。藥物處理后3天，建立每個(gè)細(xì)胞系的索拉非尼劑量響應(yīng)曲線，并使用阿拉瑪藍(lán)（Invitrogen）測定細(xì)胞增殖。使用GraphPad（Prism）軟件計(jì)算非線性回歸和IC50值。進(jìn)行組合研究，以使得每種miRNA和索拉非尼在如以下表3的平板布局（platelayout）中所示的恒定比例下使用。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)重復(fù)進(jìn)行三次。表3首先，在表3所示的濃度下反向轉(zhuǎn)染miRNA。然后，在轉(zhuǎn)染后3天，用新鮮培養(yǎng)基（每孔90μL）更換上清液，并添加以上表3所示濃度的索拉非尼（每孔10μL）。索拉非尼處理后3天，測定細(xì)胞增殖。使用CompuSyn軟件計(jì)算CI和DRI值。對于miR-34-Mim/索拉非尼組合，使用全平板布局（固定濃度和恒定比例的方法，參見以下）測定在Hep3B細(xì)胞中在多個(gè)藥物比例下的作用。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)重復(fù)進(jìn)行三次，并且每個(gè)實(shí)驗(yàn)單獨(dú)地重復(fù)三次。表4所有的對照和標(biāo)準(zhǔn)值均在該測定的限值范圍內(nèi)。結(jié)果：miRNA和索拉非尼在肝癌細(xì)胞中的劑量響應(yīng)曲線和IC50值示于圖1和圖2中。圖1示出了測試的miRNA模擬物在肝癌細(xì)胞中的劑量-效應(yīng)曲線。如上所述，使系列稀釋的miRNA（0.03–30nM）在肝癌細(xì)胞中反向轉(zhuǎn)染，并在轉(zhuǎn)染后6天通過阿拉瑪藍(lán)測定細(xì)胞增殖或抑制百分比（效應(yīng)）。使用GraphPad軟件計(jì)算IC50值。圖1A呈現(xiàn)了miR-34的數(shù)據(jù)，圖1B呈現(xiàn)了miR-124a的數(shù)據(jù)，圖1C呈現(xiàn)了miR-215的數(shù)據(jù)，圖1D呈現(xiàn)了miR-101的數(shù)據(jù)，圖1E呈現(xiàn)了miR-26a的數(shù)據(jù)。圖2示出了索拉非尼在肝癌細(xì)胞中的劑量-效應(yīng)曲線。將細(xì)胞以每孔2000個(gè)細(xì)胞接種在96孔板中。接種細(xì)胞后三天，向培養(yǎng)基中加入（0.1–100μM）系列稀釋的索拉非尼。藥物處理后3天通過阿拉瑪藍(lán)測定細(xì)胞增殖或抑制百分比，并使用GraphPad軟件計(jì)算IC50值。表5IC50Hep3bHepG2HUH7C3A索拉非尼，μM5.4-12.76.7–9.013.1–16.010.66-11.8miR-34-Mim,nM0.3-7.21.7-60.2–0.610.25-0.53miR-124-Mim,nM0.09-0.132.3-7.40.23-0.240.17-0.28miR-215-Mim,nM0.76-3.872.8-11.63.5-11.350.3-0.87miR-101-Mim,nM0.07-0.211.7-11.61.78-1.480.33-0.91miR-26-Mim,nM0.14-0.173.5-5.97*n/a1.15-1.3表5列出了使用GraphPad測定的索拉非尼和miRNA的IC50。該表顯示了來源于兩個(gè)或三個(gè)實(shí)驗(yàn)的一系列IC50值。由于miR-26-Mim在Huh7細(xì)胞中不是非常強(qiáng)效的，因此無法計(jì)算IC50，并且沒有在該細(xì)胞系中測試所述組合。圖3示出了miRNA/索拉非尼組合的聯(lián)合指數(shù)（CI）圖—單一比例。CI圖顯示了實(shí)際CI值相對于軸上從0（無抑制）至1（100%抑制）的癌細(xì)胞抑制水平。使用Compusyn軟件生成趨勢線。被認(rèn)為是協(xié)同的并且具有臨床價(jià)值的組合是在最大癌細(xì)胞抑制處具有低CI值（優(yōu)選低于0.6）的那些組合。如上所示，miR-34-Mim是在所有四種HCC細(xì)胞系中始終與索拉非尼協(xié)同作用的唯一模擬物。CI，聯(lián)合指數(shù)；Fa，受影響的分?jǐn)?shù)（=增殖的抑制）。數(shù)據(jù)點(diǎn)低于水平線代表協(xié)同作用。圖3A呈現(xiàn)了miR-34的數(shù)據(jù)，圖3B呈現(xiàn)了miR-101的數(shù)據(jù)，圖3C呈現(xiàn)了miR-26a的數(shù)據(jù)，圖3D呈現(xiàn)了miR-215的數(shù)據(jù)。藥物-藥物相互作用的準(zhǔn)確評估是復(fù)雜的，因?yàn)榻Y(jié)果依賴于藥物比例、藥物濃度和所需效力。具體地并且如圖3所示，CI值在低藥物濃度下大于1而在較高藥物濃度下低于1，這表明在低藥物濃度下為拮抗的相互作用而在較高濃度下則為協(xié)同作用。表6AmiR-34-Mim/索拉非尼組合在四種HCC細(xì)胞系中的CI和DRI值—單一比例。miR-34-Mim與索拉非尼組合在任何給定作用下的CI和DRI值。使用CompuSyn軟件測定該值。上面和下面的數(shù)據(jù)表示兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。表6BmiR-215-Mim/索拉非尼組合在四種HCC細(xì)胞系中的CI和DRI值—單一比例。使用CompuSyn軟件測定該值。miR-34-Mim/索拉非尼組合在Hep3B細(xì)胞中的CI和DRI值—多個(gè)比例列于以下表7至表10中。在Hep3B細(xì)胞中觀察在多個(gè)組合比例下索拉非尼與miR-34-Mim之間的協(xié)同作用。突出顯示的區(qū)域表示滿足以下標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)同作用：癌細(xì)胞抑制的水平>70%；CI<0.6；DRI>2。表7癌細(xì)胞抑制百分比表8CI值表9索拉非尼DRI表10miR-34-MimDRI結(jié)論：協(xié)同作用不是抗腫瘤微RNA與索拉非尼組合的共有性質(zhì)。盡管miR-34-Mim和miR-215-Mim顯示與索拉非尼組合的協(xié)同作用，但是miR-124a-Mim、miR-101-Mim或miR-26a-Mim都未顯示任何這樣的作用。而且，在與另外兩種化療劑——多柔比星和5-FU的組合中沒有鑒別到協(xié)同作用（數(shù)據(jù)未示出）。某些索拉非尼:miR-34-Mim組合的協(xié)同作用在所有四種肝癌細(xì)胞系中是一致的。在高水平的癌細(xì)胞抑制下觀測到某些索拉非尼:miR-34-Mim/miR-215-Mim組合的協(xié)同作用。在miRNA模擬物和索拉非尼的若干個(gè)比例下觀測到協(xié)同的索拉非尼：miR-34-Mim/miR-215-Mim組合，其可以應(yīng)用于研發(fā)肝癌療法。實(shí)施例2-在肝癌小鼠模型中miR-34-Mim聯(lián)合索拉非尼的優(yōu)異效果將2×106個(gè)Hep3b細(xì)胞原位植入雌性Nod/Scid小鼠的肝左側(cè)葉。為了監(jiān)測腫瘤生長，每周收集血清樣品兩次，以使用DRGHumanAFPELISA測定甲胎蛋白（AFP)的水平，AFP是肝癌的一種生物標(biāo)志物。三周后，將小鼠隨機(jī)分為5組，使得每組（n=8)中的平均AFP濃度相同。按照如下的劑量水平和間隔，單獨(dú)采用單一藥劑處理動物：靜脈內(nèi)給予miR-34-Mim，每周三次，每次施用為0.1mg/kg；每天通過口飼給予10mg/kg的索拉非尼（M-F)。對于所述組合，按照與每一種單一藥劑相同的劑量和速率給予兩種藥物。（i)使用等同于0.1mg/kgmiR-34-Mim的脂質(zhì)濃度，通過靜脈內(nèi)注射（3次/周)，用未裝載的脂質(zhì)體（NOV340，空的脂質(zhì)體)；或（ii)用PO載體（12.5%EtOH:12.5%Cremaphor:75%H2O)每天（M-F)處理對照小鼠。處理后兩周，針對腫瘤生長測定血清AFP濃度，并在處死后獲取腫瘤重量以評估腫瘤消退。使用Studentt檢驗(yàn)和/或采用Dunnett后檢驗(yàn)的單因素方差分析（MS-Excel和GraphadPrism)來分析數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)變化。結(jié)果示于圖4中，圖4示出了miR-34-Mim/索拉非尼組合在原位人Hep3b異種移植物中的體內(nèi)功效。實(shí)施例3-索拉非尼:寡核苷酸比例和給藥的選擇圖5示出了索拉非尼:miR-34-Mim比例和給藥的不同范圍。第1層隊(duì)列（tiercohorts)表示800mg/天的索拉非尼給藥，而第2層隊(duì)列表示400mg/天的索拉非尼給藥。所有的臨床比例均包括第1和第2層隊(duì)列以及200mg/天的索拉非尼給藥。周劑量R1表示每周兩天施用miR-34，并且周劑量R1表示每周連續(xù)五天施用miR-34。日劑量表示在一天的給藥中計(jì)算出的比例，而周劑量表示在一周的給藥中計(jì)算出的比例。其他給藥計(jì)劃表是可能的（例如，每周一次)。寡核苷酸（在脂質(zhì)體制劑中)給藥可以在50-250mg/m2的范圍內(nèi)。因此，在多個(gè)實(shí)施方案中，摩爾比可以為約15-1723、15-492、60-197、30-492、30、40、53、60、70、79、98、106、141、197、298或492。由于協(xié)同增加的功效，可以降低miR-34劑量（例如，低于miR-34單藥療法中的劑量）以達(dá)到所需比例而同時(shí)維持索拉非尼的預(yù)先批準(zhǔn)的劑量（例如，F(xiàn)DA批準(zhǔn)的用于單藥療法的劑量）。由于協(xié)同增加的功效，在一些實(shí)施方案中，可以降低索拉非尼劑量（例如，低于某些FDA批準(zhǔn)的單藥療法劑量，800mg/天或400mg/天）以在毒性（例如，索拉非尼毒性）降低的情況下獲得所需功效。在多個(gè)實(shí)施方案中，這樣的組合可以提供超過索拉非尼單藥療法的功效上的改善?？梢栽谙嗤幕A(chǔ)上確定miR-215以及根據(jù)本發(fā)明的所有寡核苷酸的比例和給藥。應(yīng)當(dāng)指出，不是所有比例都提供治療有效的方案。例如，在低劑量下不存在協(xié)同作用。而且，即使是在技術(shù)上可能被認(rèn)為是協(xié)同的較低劑量，仍可能無法提供有效的治療。類似地，高于某個(gè)點(diǎn)的比例可以證明是拮抗的。參見，例如，圖5中的“HepG2協(xié)同的比例”和“HepG2拮抗的比例”的比例。因此，在多個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明不僅僅是基于在肝癌治療中索拉非尼和miR-34協(xié)同作用（例如，miR-34a和HCC）的數(shù)據(jù)，而且基于所述協(xié)同作用僅存在于某個(gè)治療有效的范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)。對于miR-215觀測到類似的結(jié)果。實(shí)施例4-索拉非尼:寡核苷酸給藥范圍的實(shí)例以下表11-表13提供了可能在臨床上相關(guān)（例如，在人肝癌治療中）的索拉非尼:寡核苷酸給藥比例的實(shí)例。在該實(shí)例中的比例基于部分（而非質(zhì)量（mass））。該寡核苷酸可以是根據(jù)本發(fā)明的任意寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等）。表11體外研究的給藥范圍實(shí)例。劑量范圍為1:143（最低)至1:9143（最高)。miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等)。表12在人肝癌的動物（小鼠)模型中研究的給藥范圍實(shí)例。劑量范圍為1:2（最低)至1:217338（最高)，并且包括1:2329（實(shí)際)。miR-Mim劑量基于20g的小鼠體重。miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等)。表13人類受試者的給藥范圍實(shí)例。劑量范圍為1:22（最低)至1:3105（最高)。miR-Mim劑量基于70kg的人體重。miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等)。表14基于每天給予索拉非尼和miR-Mim，基于70kg患者（索拉非尼mw=637，miR-34mw=14834)的人類臨床給藥范圍實(shí)例。該miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等)。表15基于每天給予索拉非尼和每兩周給予miR-Mim，基于70kg患者（索拉非尼mw=637，miR-34mw=14834）的人類臨床給藥范圍實(shí)例。該miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等）。表15基于每天給予索拉非尼和每周給予五個(gè)日劑量的miR-Mim，基于70kg患者（索拉非尼mw=637，miR-34mw=14834）的人類臨床給藥范圍實(shí)例。該miR-Mim可以是根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸（例如，miR-34-Mim、miR-215-Mim等）。在治療人類受試者的一些實(shí)施方案中，索拉非尼劑量為800mg/天而miR-Mim（例如，在脂質(zhì)體制劑中的miR-34-Mim）為1mg/kg/天，這導(dǎo)致了在每天和每周的基礎(chǔ)上分別為1:266和1:931的比例。在治療人類受試者的其他實(shí)施方案中，索拉非尼和miR-Mim均以最大耐受劑量（MTD)施用。假設(shè)miR-34（在脂質(zhì)體制劑中)的MTD為3mg/kg，所述劑量在每天和每周的基礎(chǔ)上分別為1:89和1:310的比例。這樣的劑量與通過以上實(shí)施例中討論的體外研究所確定的協(xié)同的比例是一致的。在多個(gè)實(shí)施方案中，可以通過降低miR-Mim相對于索拉非尼的劑量來達(dá)到所需比例。實(shí)施例5-基于800mg/天的索拉非尼的聯(lián)合療法對于臨床實(shí)踐，如下使用miR-34-Mim+索拉非尼組合。給予患者800mg索拉非尼的每日口服劑量（每天兩次400mg)和劑量水平范圍為50mg/m2至165mg/m2的miR-34-Mim的靜脈內(nèi)30min至3hr輸注。這些劑量水平代表基于70kg患者，每天索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為60至197。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每天索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為197、141、106、79和60。在另一個(gè)實(shí)例中，按照800mg的每日口服劑量給予索拉非尼，以及在30min至3hr輸注期間，以范圍為50mg/m2至165mg/m2的劑量水平，每周兩次（例如，每周一和每周四)給予miR-34-Mim三次。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為209至689。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為689、492、371、278和209。在另一個(gè)實(shí)例中，按照800mg的每日口服劑量給予索拉非尼，以及在每周連續(xù)五天給藥、接下來兩天停藥的情況下，以范圍為50mg/m2至165mg/m2的劑量水平通過靜脈內(nèi)30min至3hr輸注每天給予miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為84至276。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為276、197、148、111和84?？梢栽谙嗤幕A(chǔ)上確定mir-215以及根據(jù)本發(fā)明的所有寡核苷酸的比例和給藥。實(shí)施例6-基于400mg/天的索拉非尼的聯(lián)合療法在另一個(gè)實(shí)例中，如下使用miR-34-Mim+索拉非尼組合。給予患者400mg索拉非尼的每日口服劑量和劑量水平范圍為50mg/m2至165mg/m2的miR-34-Mim的靜脈內(nèi)30min至3hr輸注。這些劑量水平代表基于70kg患者，每天索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為30至98。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每天索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為98、70、53、40和30。在另一個(gè)實(shí)例中，按照400mg的每日口服劑量給予索拉非尼，以及在30min至3hr輸注期間，以范圍為50mg/m2至165mg/m2的劑量水平，每周兩次（例如，每周一和每周四)給予miR-34-Mim三次。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為104至345。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為345、246、185、139和104。在另一個(gè)實(shí)例中，按照400mg的每日口服劑量給予索拉非尼，以及在每周連續(xù)五天給藥、接下來兩天停藥的情況下，以范圍為50mg/m2至165mg/m2的劑量水平通過靜脈內(nèi)30min至3hr輸注每天給予miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼相對于miR-34模擬物的摩爾比為42至138。在特定的情況下，給予50、70、93、124或165mg/m2劑量水平的miR-34-Mim。這些劑量水平代表基于70kg患者，每周索拉非尼與miR-34模擬物之間的摩爾比為138、98、74、56和42?？梢栽谙嗤幕A(chǔ)上確定mir-215以及根據(jù)本發(fā)明的所有寡核苷酸的比例和給藥。*****本說明書根據(jù)在說明書內(nèi)引用的參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)得到最徹底的理解。說明書內(nèi)的實(shí)施方案提供了對本發(fā)明的實(shí)施方案的說明，并且不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。技術(shù)人員容易認(rèn)識到，本發(fā)明涵蓋許多其他實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到或僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)就能夠確定本文所述的本發(fā)明具體實(shí)施方案的許多等同方案。旨在由以下權(quán)利要求涵蓋此類等同方案。序列表<110>安德里斯·巴德簡·趙<120>肝癌的索拉非尼-微RNA聯(lián)合療法<130>112172-251<150>US61/946,110<151>2014-02-28<160>15<170>PatentInversion3.5<210>1<211>23<212>RNA<213>智人<400>1uggcagugucuuagcugguuguu23<210>2<211>23<212>RNA<213>智人<400>2uaggcagugucauuagcugauug23<210>3<211>23<212>RNA<213>智人<400>3aggcaguguaguuagcugauugc23<210>4<211>22<212>RNA<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(1)<223>n表示缺失或任意核苷酸<220><221>misc_feature<222>(10)..(10)<223>n表示缺失或任意核苷酸<220><221>misc_feature<222>(18)..(18)<223>n表示缺失或任意核苷酸<220><221>misc_feature<222>(22)..(22)<223>n表示缺失或任意核苷酸<400>4nggcagugunuuagcugnuugn22<210>5<211>22<212>RNA<213>智人<400>5uggcaguguauuguuagcuggu22<210>6<211>22<212>RNA<213>智人<400>6aggcaguguauuguuagcuggc22<210>7<211>25<212>RNA<213>智人<400>7uaggcaguguauugcuagcggcugu25<210>8<211>22<212>RNA<213>智人<220><221>misc_feature<222>(14)..(14)<223>n表示缺失或任意核苷酸<220><221>misc_feature<222>(19)..(19)<223>n表示缺失或任意核苷酸<220><221>misc_feature<222>(21)..(21)<223>n表示缺失或任意核苷酸<400>8uggcaguguauugnuagcngng22<210>9<211>7<212>RNA<213>智人<400>9ggcagug7<210>10<211>21<212>RNA<213>智人<400>10cugaccuaugaauugacagcc21<210>11<211>21<212>RNA<213>智人<400>11augaccuaugaauugacagac21<210>12<211>7<212>RNA<213>智人<400>12ugaccua7<210>13<211>22<212>RNA<213>智人<400>13uucaaguaauccaggauaggcu22<210>14<211>21<212>RNA<213>智人<400>14uacaguacugugauaacugaa21<210>15<211>22<212>RNA<213>智人<400>15uuaaggcacgcggugaaugcca22當(dāng)前第1頁1 2 3