本申請(qǐng)要求2014年4月4日提交的標(biāo)題為“癌癥治療的生物標(biāo)記”的中國專利申請(qǐng)201410135569.9的優(yōu)先權(quán)。其全部內(nèi)容在此參考并入。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明一般涉及用于確定受試者對(duì)MEK或者ERK抑制劑的治療的應(yīng)答性的方法。

背景技術(shù)：

Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)級(jí)聯(lián)(MEK/ERK通路)是關(guān)鍵性的促增殖和促存活通路之一。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MEK/ERK通路中的突變導(dǎo)致在許多癌癥(例如，黑素瘤)中生長失控。已經(jīng)使用了抑制MEP/ERK通路中的步驟的化合物來治療癌癥。然而，一些具有MEK/ERK通路突變的患者顯示出對(duì)MEK或者ERK抑制劑的抗性。

需要有效的方法來確定哪些具有MEK/ERK通路突變的患者會(huì)對(duì)MEK或者ERK抑制劑的治療具有耐受性并且需要將這種確定性發(fā)現(xiàn)結(jié)合到有效的治療中。

發(fā)明概述

一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑的應(yīng)答性的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括通過使來源于所述癌細(xì)胞的核酸樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述癌細(xì)胞中選自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53組的一種或多種基因中的至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意組合中突變的存在指示所述癌細(xì)胞對(duì)所述MEK抑制劑的降低的應(yīng)答性。

在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞來源于癌癥患者。

在某些實(shí)施方案中，所述MEK抑制劑是曲美替尼(Trametinib)。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突變選自下組突變：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突變；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括將所述寡核苷酸用作引物來擴(kuò)增所述基因的至少一部分，以及檢測(cè)所述擴(kuò)增產(chǎn)物從而確定在所述基因中所述突變的存在。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括使所述核酸樣品接觸所述寡核苷酸，所述寡核苷酸與所述基因的所述突變特異性雜交以形成復(fù)合物，以及檢測(cè)所述復(fù)合物的形成從而確定在所述基因中所述突變的存在。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N鑒定MEK抑制劑的可能的應(yīng)答者或者可能的無應(yīng)答者的方法，所述方法包括：通過使來自患者的樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述樣品中選自下組的一種或多種基因中至少一種突變的存在：ADAM12、COL14A1、TNN和TP53，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；如果在所述樣品中檢測(cè)到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意組合中的至少一種突變，則將所述患者鑒定為所述MEK抑制劑的可能的無應(yīng)答者。

在某些實(shí)施方案中，所述MEK抑制劑是曲美替尼(Trametinib)。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突變選自下組突變：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者不推薦用所述ERK抑制劑的單一療法或者M(jìn)EK抑制劑治療。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括推薦被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者用不同的MEK抑制劑治療，或者用不同的MEK抑制劑和另外的具有不同機(jī)制的治療劑的聯(lián)合療法治療。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括推薦被鑒定為可能的應(yīng)答者的所述患者用所述MEK抑制劑治療。

在某些實(shí)施方案中，所述樣品來源于所述患者的癌細(xì)胞或者組織。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑的應(yīng)答性的方法，所述方法包括：通過使來源于所述癌細(xì)胞的核酸樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述癌細(xì)胞中選自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53組的一種或多種基因中的至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意組合中突變的存在指示所述癌細(xì)胞對(duì)所述ERK抑制劑的降低的應(yīng)答性。

在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞來源于癌癥患者。

在某些實(shí)施方案中，所述ERK抑制劑是SCH772984。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突變選自下組突變：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括用所述寡核苷酸作為引物來擴(kuò)增所述基因的至少一部分，以及檢測(cè)所述擴(kuò)增產(chǎn)物從而確定在所述基因中所述突變的存在。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括使所述核酸樣品接觸所述寡核苷酸，所述寡核苷酸與所述基因的所述突變特異性雜交以形成復(fù)合物，以及檢測(cè)所述復(fù)合物的形成從而確定在所述基因中所述突變的存在。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N鑒定ERK抑制劑的可能的應(yīng)答者或者可能的無應(yīng)答者的方法，所述方法包括：通過使來自患者的樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述樣品中選自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53組的一種或多種基因中至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；如果在所述樣品中檢測(cè)到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意組合中的至少一種突變，則將所述患者鑒定為所述ERK抑制劑的可能的無應(yīng)答者。

在某些實(shí)施方案中，所述ERK抑制劑是SCH772984。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突變選自下組突變：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者不推薦用所述ERK抑制劑的單一療法或者ERK抑制劑治療。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括推薦被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者用不同的ERK抑制劑治療，或者用不同的ERK抑制劑和另外的具有不同機(jī)制的治療劑的聯(lián)合療法治療。

在某些實(shí)施方案中，所述樣品來源于所述患者的癌細(xì)胞或者組織。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N試劑盒，其包括至少一種能用于確定一個(gè)或多個(gè)基因中至少一種突變的存在的寡核苷酸，其中所述基因選自下組：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于確定ADAM12中至少一種突變的存在的第一寡核苷酸，用于確定COL14L1中至少一種突變的存在的第二寡核苷酸，用于確定TNN中至少一種突變的存在的第三寡核苷酸，用于確定TP53中至少一種突變的存在的第四寡核苷酸，或其任意組合。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于確定ADAM12中至少一種突變的存在的第一寡核苷酸，用于確定PEX5L中至少一種突變的存在的第二寡核苷酸，用于確定TNN中至少一種突變的存在的第三寡核苷酸，用于確定TP53中至少一種突變的存在的第四寡核苷酸，和或其組合。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于擴(kuò)增基因序列的至少一部分的引物對(duì)，或者包括用于與所述基因的所述突變特異性雜交以形成復(fù)合物的探針。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝酥辽僖环N寡核苷酸在制造用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞或者癌癥患者對(duì)MEK抑制劑或者ERK抑制劑的應(yīng)答性的試劑盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于檢測(cè)一種或多種基因中至少一種突變的存在，所述基因選自下組：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。

附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了具有ADAM12基因中的突變的細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)的增強(qiáng)的敏感性。

圖2顯示了具有COL14A1基因中的突變的細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)的降低的敏感性。

圖3顯示了具有TNN基因中的突變的細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)的增強(qiáng)的敏感性。

圖4顯示了具有TP53基因中的突變的細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)的增強(qiáng)的敏感性。

圖5顯示了具有ADAM12、COL14A1、TNN和TP53基因中的多種突變的細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)的增強(qiáng)的敏感性。

圖6顯示了具有ADAM12基因中的突變的細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑SCH772984的增強(qiáng)的敏感性。

圖7顯示了具有PEX5L基因中的突變的細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑SCH772984的增強(qiáng)的敏感性。

圖8顯示了具有TNN基因中的突變的細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑SCH772984的增強(qiáng)的敏感性。

圖9顯示了具有TP53基因中的突變的細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑SCH772984的增強(qiáng)的敏感性。

圖10顯示了具有ADAM12、PEX5L、TNN和TP53基因中的多種突變的細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑SCH772984的增強(qiáng)的敏感性。

發(fā)明詳述

一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞對(duì)MEK抑制劑的應(yīng)答性的方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括通過使來源于所述癌細(xì)胞的核酸樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述癌細(xì)胞中選自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53組的一種或多種基因中的至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意組合中突變的存在指示所述癌細(xì)胞對(duì)所述ERK抑制劑的降低的應(yīng)答性。

絲裂原活化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(MEK)-細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)級(jí)聯(lián)，也稱為Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路，是涉及腫瘤惡性生長和發(fā)展的關(guān)鍵性信號(hào)通路之一。所述信號(hào)通路始于信號(hào)分子(例如，生長因子)與細(xì)胞表面的受體結(jié)合之時(shí)。這觸發(fā)Ras(一種GTP酶)離開其GDP而結(jié)合GTP。結(jié)合GTP的Ras隨后激活Raf，所述Raf激活MEK，所述MEK激活ERK。ERK隨后激活一些蛋白質(zhì)，例如myc，其控制細(xì)胞分裂和細(xì)胞存活。當(dāng)通路中的一種或多種蛋白質(zhì)(例如Ras)突變時(shí)，其可導(dǎo)致所述信號(hào)通路陷入活化的狀態(tài)，所述狀態(tài)是許多癌癥發(fā)展中的必經(jīng)步驟。因此，已經(jīng)開發(fā)了MEK/ERK信號(hào)通路的抑制劑來治療癌癥。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些患者對(duì)MEK或者ERK的抑制劑具有抗性。尚不清楚對(duì)這些抑制劑的抗性的潛在機(jī)制。

多種MEK和ERK1/2的抑制劑目前正處于癌癥治療的臨床研究中，并且更多的靶向MEK或ERK1/2的試劑正處于臨床前開發(fā)中。MEK抑制劑的實(shí)例包括但不限于曲美替尼(Trametinib)(GSK1120212)、司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。ERK抑制劑包括但不限于SCH772984、FR180204、GDC-0994。

在某些實(shí)施方案中，所述MEK抑制劑是曲美替尼(Trametinib)。曲美替尼(Trametinib)(商品名Mekinist)具有化學(xué)名稱N-(3-{3-環(huán)丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氫吡啶[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺。曲美替尼(Trametinib)的結(jié)構(gòu)如下所示。

本文使用的術(shù)語“應(yīng)答性”是指細(xì)胞/個(gè)體/患者/受試者對(duì)MEK或者ERK抑制劑的治療產(chǎn)生應(yīng)答的可能性，即在用MEK或者ERK抑制劑治療后顯示出降低的增殖/生長和/或增強(qiáng)的細(xì)胞死亡。在某些實(shí)施方案中，可將所述應(yīng)答性分為不敏感的(即，不太可能產(chǎn)生應(yīng)答)、敏感的(可能產(chǎn)生應(yīng)答)和不確定的。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述細(xì)胞/個(gè)體/患者/受試者顯示出發(fā)生病理完全反應(yīng)(pcR)(即，不存在侵襲性癌癥)的降低的可能性時(shí)，則所述細(xì)胞/個(gè)體/患者/受試者不太可能對(duì)MEK或者ER抑制劑的治療產(chǎn)生應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，降低的可能性是指在參照患者(例如，在目標(biāo)基因中沒有突變的患者)中發(fā)生pcR的可能性的約70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％。在某些實(shí)施方案中，可以通過測(cè)定細(xì)胞對(duì)MEK或者ERK抑制劑的IC50來評(píng)價(jià)所述細(xì)胞的應(yīng)答性。

本文使用的術(shù)語“突變”是指基因組DNA相對(duì)正常參照(例如野生型基因組DNA)的偏離，例如，添加、缺失、插入、重排、倒位、轉(zhuǎn)換、顛換、移碼突變、無義突變、錯(cuò)義突變、易位和單核苷酸多態(tài)性。

檢測(cè)基因中突變的存在的方法描述于本文中并且是本領(lǐng)域已知的(通常參見例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第2版,ed.By Sambrook,Fritsch and Maniatis,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)。所述方法的實(shí)例包括但不限于，核酸測(cè)序(例如Sanger二脫氧測(cè)序、“二代”測(cè)序方法和單分子測(cè)序)、基于PCR(聚合酶鏈反應(yīng))的測(cè)定法(實(shí)時(shí)RCR、PCR-RFLP測(cè)定法(參見Cancer Research 59(1999)，5169-5175)、質(zhì)譜基因分型(例如MALDI-TOF)、HPLC、酶法和SSPC(單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(參見Pathol Int(1996)46,801-804))、基于雜交的測(cè)定法(例如Northern印跡、Southern印跡、5'-外切核酸酶(TaqMan^TM)探針、分子信標(biāo)、熒光能量轉(zhuǎn)移探針、Scorpion探針)。

在某些實(shí)施方案中，所述方法可以包括對(duì)有待于通過PCR進(jìn)行評(píng)價(jià)的基因的DNA或cDNA片段進(jìn)行酶擴(kuò)增。所得到的PCR產(chǎn)物可以進(jìn)行常規(guī)的基于Sanger的雙脫氧核苷酸測(cè)序法或者平行測(cè)序法(“二代測(cè)序”)，例如由Roche(454technology)、Illumina(Solexa technology)ABI(Solid technology)或者Invitrogen(IonTorrent)市售的方法。通過與公眾可獲得的基因序列數(shù)據(jù)庫比較，可以從序列讀數(shù)中鑒定突變。或者，可以通過摻入等位基因特異性探針來鑒定突變，所述探針可以用酶檢測(cè)反應(yīng)、熒光、質(zhì)譜法等來檢測(cè)。

在某些實(shí)施方案中，所述方法可以包括使用僅特異性結(jié)合正常和突變的序列中的一個(gè)的引物來擴(kuò)增目標(biāo)基因的DNA或cDNA片段。因此，只能在正常和突變的基因中的一個(gè)中發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物。因此，可以通過檢測(cè)所述擴(kuò)增產(chǎn)物的存在來確定所述基因中突變的存在。

在某些實(shí)施方案中，所述方法可以包括使核酸樣品接觸寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針與基因的突變特異性雜交以形成復(fù)合物。可以將所述寡核苷酸探針設(shè)計(jì)成不與基因的正常序列雜交。可以使用報(bào)告信號(hào)，例如熒光來檢測(cè)雜交復(fù)合物的存在。因此，可以通過檢測(cè)所述復(fù)合物的形成來確定基因中突變的存在。

在某些實(shí)施方案中，突變存在于基因的外顯子中。在某些實(shí)施方案中，所述突變的存在導(dǎo)致由所述基因編碼的多肽的氨基酸改變。表3顯示了本發(fā)明要確定的突變的示例性核酸序列。如本文中所使用的，將特定突變標(biāo)注為所得到的氨基酸的改變。例如，Q650K突變是指編碼所述基因第650位的氨基酸K的密碼子/三聯(lián)體，其中氨基酸G存在于野生型序列中。

ADAM12基因(基因ID：8038)編碼ADAM(一種去整合素和金屬蛋白酶)蛋白家族的成員。ADAM家族的成員是與蛇毒去整合素結(jié)構(gòu)相關(guān)的膜錨定蛋白，并且已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)涉及細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)的相互作用。ADAM12基因具有兩個(gè)可變剪接的轉(zhuǎn)錄物：較短的分泌形式和較長的膜結(jié)合形式。

COL14A1基因(基因ID：7373)編碼XIV類膠原的α鏈，所述膠原是FACIT(具有間斷三螺旋的原纖維相關(guān)膠原)膠原家族的成員。XIV型膠原與所述原纖維表面相互作用并參與調(diào)節(jié)原纖維形成。

TNN基因(基因ID：63923)編碼腱生蛋白N前體。腱生蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白家族，其成員已被發(fā)現(xiàn)參與傷口愈合以及發(fā)現(xiàn)于一些腫瘤基質(zhì)中。

TP53基因(基因ID：7157)編碼腫瘤蛋白p53，其是含有轉(zhuǎn)錄激活域、DNA結(jié)合域和寡聚化結(jié)構(gòu)域的腫瘤抑制蛋白。腫瘤蛋白p53響應(yīng)多種細(xì)胞應(yīng)激以調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、凋亡、衰老、DNA修復(fù)、或者代謝變化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TP53基因中的突變與多種癌癥相關(guān)。TP53基因的可變剪接和替代啟動(dòng)子的使用導(dǎo)致產(chǎn)生多個(gè)轉(zhuǎn)錄本變體和同種型。還已經(jīng)顯示使用替代的翻譯起始密碼子產(chǎn)生了另外的同種型。如本文中所使用的，位置編號(hào)是指腫瘤蛋白p53同種型a的序列。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突變選自下組突變：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*，其中“*”表示所述突變引起產(chǎn)生終止密碼子，“fs”表示突變導(dǎo)致移碼，“剪接”表示所述突變導(dǎo)致mRNA的可變剪接。

所述癌細(xì)胞可以，例如，來源于肺癌、非小細(xì)胞肺(NSCL)癌、支氣管肺泡細(xì)胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭部或頸部的癌癥、皮膚或眼內(nèi)黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)域的癌癥、胃癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細(xì)胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細(xì)胞癌、膽管癌、慢性或急性白血病、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的腫瘤、脊髓軸腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、鱗狀細(xì)胞癌、垂體腺瘤，包括上述任何癌癥的難治性形式，或者一種或多種上述癌癥的組合。在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞來源于癌癥患者。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N鑒定MEK抑制劑的可能的應(yīng)答者或者可能的無應(yīng)答者的方法，所述方法包括通過使來自患者的樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述樣品中選自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53組的一種或多種基因中至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；如果在所述樣品中檢測(cè)到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意組合中的至少一種突變，則將所述患者鑒定為所述MEK抑制劑的可能的無應(yīng)答者。

本文使用的術(shù)語“應(yīng)答者”是指對(duì)用MEK或ERK抑制劑治療更有可能應(yīng)答的個(gè)體/患者/受試者。本文使用的“更有可能應(yīng)答”是指在用MEK或ERK抑制劑治療的患者中有增加的將發(fā)生病理完全反應(yīng)的可能性。術(shù)語“無應(yīng)答者”是指對(duì)用MEK或ERK抑制劑治療不太可能產(chǎn)生應(yīng)答的個(gè)體/患者/受試者。本文使用的“不太可能應(yīng)答”是指在用MEK或ERK抑制劑治療的患者中有降低的發(fā)生病理完全反應(yīng)的可能性。

在某些實(shí)施方案中，在患者被評(píng)估為可能的“應(yīng)答者”的情況下，推薦所述患者用MEK或者ERK抑制劑治療。

在患者被鑒定為可能的無應(yīng)答者的情況下，對(duì)不推薦所述患者用MEK或者ERK抑制劑的單一療法治療，或者不推薦用MEK或者ERK抑制劑治療。

在某些實(shí)施方案中，當(dāng)患者被鑒定為MEK抑制劑的可能的無應(yīng)答者時(shí)，對(duì)所述患者推薦用不同的MEK抑制劑治療，或者用不同的MEK抑制劑和另外的具有不同機(jī)制的治療劑的聯(lián)合療法治療。有別于曲美替尼(Trametinib)的MEK抑制劑的實(shí)例包括，但不限于，司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是靶向PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路的試劑。所述靶向PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路的試劑是本領(lǐng)域已知的并且包括，但不限于，美國專利號(hào)8,022,205B2中公開的稠合嘧啶衍生物或者WO2009/099163中公開的稠合吡咯并嘧啶衍生物。

在某些實(shí)施方案中，具有不同機(jī)制的另外的試劑可以包括c-Met抑制劑(例如，ARQ197(taventinib，由Daichi Sankyo和ArQule開發(fā)))、AMG458(由Amgen開發(fā))、GSK1363089(也稱為XL880或者foretinib，由GSK開發(fā))、克唑替尼(也稱為PF2341066，由Pfizer開發(fā))、PF04217903(由Pfizer開發(fā))、INCB28060(由Incyte開發(fā))、E7050(由Eisai開發(fā))、MK-2461(由Merck開發(fā))、BMS-777607(由BMS開發(fā))、JNJ-38877605(由Johnson&Johnson開發(fā))、XL184(由BMS/Exelixis開發(fā)))。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是化療劑(例如，環(huán)磷酰胺(CTX；例如)、苯丁酸氮芥(CHL；例如)、順鉑(CisP；例如)、白消安(例如)、美法侖、卡莫司汀(BCNU)、鏈脲佐菌素、三亞乙基胺(TEM)、絲裂霉素C)。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是抗代謝物，例如甲氨蝶呤(MTX)、依托泊苷(VP16；例如)、6-巰基嘌呤(6MP)、6-硫代鳥嘌呤(6TG)、阿糖胞苷(Ara-C)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他濱(例如)、達(dá)卡巴嗪(DTIC))。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是其他抗腫瘤劑，例如紫杉醇(例如)和紫杉醇衍生物、細(xì)胞生長抑制劑、糖皮質(zhì)激素例如地塞米松(DEX；例如)和皮質(zhì)類固醇例如潑尼松、核苷酶抑制劑例如羥基脲、氨基酸耗竭酶例如天冬酰胺酶、亞葉酸鈣、亞葉酸、雷替曲塞和其他葉酸衍生物，以及類似的多種抗腫瘤劑。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是抗激素劑(例如，類固醇受體拮抗劑，抗雌激素劑例如他莫昔芬、雷洛昔芬，芳香酶抑制劑4(5)-咪唑，其他芳香酶抑制劑，42-羥基他莫昔芬，三氧嘧啶，keoxifene，LY 117018，奧那司酮和托瑞米芬(例如)；抗雄激素劑例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任意的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物；糖蛋白激素例如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)以及黃體生成素(LH)和LHRH(促卵泡激素釋放激素)的激動(dòng)劑和/或拮抗劑；LHRH激動(dòng)劑醋酸戈舍瑞林，市售為(AstraZeneca)；LHRH拮抗劑D-丙氨酰胺N-乙?；?3-(2-萘基)-D-丙氨?；?4-氯-D-苯丙氨?；?3-(3-吡啶基)-D-丙氨?；?L-絲氨?；?N6-(3-吡啶基羰基)-L-賴氨?；?N6-(3-吡啶基羰基)-D-賴氨?；?L-亮氨酰基-N6-(1-甲基乙基)-L-賴氨?；?L-脯氨酸(例如Ares-Serono)；LHRH拮抗劑醋酸加尼瑞克；甾體抗雄激素醋酸環(huán)丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，市售為(Bristol-MyersOncology)；非甾體抗雄激素氟他胺(2-甲基-N-[4,20-硝基-3-(三氟甲基)苯基丙酰胺)，市售為(Schering Corp.)；非甾體抗雄激素尼魯米特(5,5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4'-硝基苯基)-4,4-二甲基-咪唑烷二酮)；和其他非容許受體的拮抗劑，例如RAR、RXR、TR、VDR等的拮抗劑)。

在某些實(shí)施方案中，所述另外的具有不同機(jī)制的治療劑可以是血管生成抑制劑(例如，VEGFR抑制劑，例如SU5416和SU6668(南舊金山的Sugen Inc.，加州，美國)，或者如例如國際申請(qǐng)?zhí)朩O 99/24440、WO 99/62890、WO 95/21613、WO 99/61422、WO 98/50356、WO 99/10349、WO 97/32856、WO 97/22596、WO 98/54093、WO 98/02438、WO 99/16755和WO 98/02437，以及美國專利號(hào)5,883,113、5,886,020、5,792,783、5,834,504和6,235,764中所述的抑制劑；VEGF抑制劑如IM862(柯克蘭的Cytran Inc.，華盛頓，美國)；血管酶，其是來自Ribozyme(Boulder，科羅拉多州)和Chiron(Emeryville，加州)的合成的核酶；以及VEGF的抗體，例如貝伐單抗(Avastin^TM,Genentech，南舊金山，加州)，其是VEGF的重組人源化抗體；整合素受體拮抗劑和整合素拮抗劑，例如針對(duì)α_vβ₃、α_vβ₅和α_vβ₆整合素的拮抗劑，及其亞型，例如西侖吉肽(EMD 121974)，或抗整合素抗體，如，例如α_vβ₃特異性的人源化抗體(例如)；因子如IFN-α(美國專利號(hào)41530,901、4,503,035和5,231,176)；血管生成抑制素和纖溶酶原片段(例如kringle 14、kringle 5、kringle 1-3(O'Reilly,M.S.等(1994)Cell 79:315-328；Cao等(1996)J.Biol.Chem.271:29461-29467；Cao等(1997)J.Biol.Chem.272:22924-22928)；內(nèi)皮抑素(O'Reilly,M.S.等(1997)Cell88:277；以及國際專利公開號(hào)WO 97/15666)；血小板反應(yīng)蛋白(TSP-1；Frazier,(1991)Curr.Opin.Cell Biol.3:792)；血小板因子4(PF4)；纖溶酶原激活物/尿激酶抑制劑；尿激酶受體拮抗劑；肝素酶；煙曲霉素類似物例如TNP-4701；蘇拉明和蘇拉明類似物；血管穩(wěn)定類固醇；bFGF拮抗劑；flk-1和flt-1拮抗劑；抗血管生成劑例如MMP-2(基質(zhì)金屬蛋白酶2)抑制劑和MMP-9(基質(zhì)金屬蛋白酶9)抑制劑)。

在某些實(shí)施方案中，所述樣品是來源于患者的癌細(xì)胞或者組織。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞對(duì)ERK抑制劑的應(yīng)答性的方法，所述方法包括通過使來源于所述癌細(xì)胞的核酸樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述癌細(xì)胞中選自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53組的一種或多種基因中的至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意組合中突變的存在指示所述癌細(xì)胞對(duì)所述ERK抑制劑的降低的應(yīng)答性。

在某些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞來源于癌癥患者。

在某些實(shí)施方案中，所述ERK抑制劑是SCH772984。SCH772984，化學(xué)名為(R)-1-(2-氧代-2-(4-(4-(嘧啶-2-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-N-(3-(吡啶-4-基)-1H-吲唑-5-基)吡咯烷-3-甲酰胺，是ERK1/2新型的、選擇性的并且ATP競(jìng)爭(zhēng)性的抑制劑(參見Morris EJ等,Discovery of a novel ERK inhibitor with activity in models ofacquired resistance to BRAF and MEK inhibitors,Cancer Discov.20133(7):742-50)。SCH772984的結(jié)構(gòu)如下所示。

在某些實(shí)施方案中，所述在ADAM12中的突變選自下組突變：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突變選自下組突變：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突變選自下組突變：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突變；所述在TP53中的突變選自下組突變：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括將所述寡核苷酸用作引物來擴(kuò)增所述基因的至少一部分，以及檢測(cè)所述擴(kuò)增產(chǎn)物從而確定在所述基因中所述突變的存在。

在某些實(shí)施方案中，所述檢測(cè)步驟包括使所述核酸樣品接觸所述寡核苷酸，所述寡核苷酸與所述基因的所述突變特異性雜交以形成復(fù)合物，以及檢測(cè)所述復(fù)合物的形成從而確定在所述基因中所述突變的存在。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N鑒定ERK抑制劑的可能的應(yīng)答者或者可能的無應(yīng)答者的方法，所述方法包括通過使來自患者的樣品與至少一種寡核苷酸接觸來檢測(cè)所述樣品中選自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53組的一種或多種基因中至少一種突變的存在，其中所述寡核苷酸允許特異性檢測(cè)所述突變；如果在所述樣品中檢測(cè)到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意組合中的至少一種突變，則將所述患者鑒定為所述ERK抑制劑的可能的無應(yīng)答者。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者不推薦用所述ERK抑制劑的單一療法或者ERK抑制劑治療。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括推薦被鑒定為可能的無應(yīng)答者的所述患者用不同的ERK抑制劑治療，或者用不同的ERK抑制劑和另外的具有不同機(jī)制的治療劑的聯(lián)合療法治療。除了SCH772984之外的ERK抑制劑的實(shí)例包括FR180204、GDC-0994。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N試劑盒，其包括至少一種能用于確定一個(gè)或多個(gè)基因中至少一種突變的存在的寡核苷酸，其中所述基因選自下組：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于確定ADAM12中至少一種突變的存在的第一寡核苷酸，用于確定COL14L1中至少一種突變的存在的第二寡核苷酸，用于確定TNN中至少一種突變的存在的第三寡核苷酸，用于確定TP53中至少一種突變的存在的第四寡核苷酸，或其任意組合。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于確定ADAM12中至少一種突變的存在的第一寡核苷酸，用于確定PEX5L中至少一種突變的存在的第二寡核苷酸，用于確定TNN中至少一種突變的存在的第三寡核苷酸，用于確定TP53中至少一種突變的存在的第四寡核苷酸，和或其組合。

在某些實(shí)施方案中，所述至少一種寡核苷酸包括用于擴(kuò)增基因序列的至少一部分的引物對(duì)，或者包括用于與所述基因的所述突變特異性雜交以形成復(fù)合物的探針。

另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝酥辽僖环N寡核苷酸在制造用于預(yù)測(cè)癌細(xì)胞或者癌癥患者對(duì)ERK抑制劑或者M(jìn)EK抑制劑的應(yīng)答性的試劑盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于檢測(cè)一種或多種基因中至少一種突變的存在，所述基因選自下組：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。

實(shí)施例1

以下是鑒定與對(duì)MEK抑制劑和/或ERK抑制劑的敏感性相關(guān)的基因的實(shí)例。

我們?cè)?0個(gè)細(xì)胞系組中檢查了MEK抑制劑曲美替尼(trametinib)和ERK1/2抑制劑SCH772984的抗增殖活性(參見表1)。

表1.用于所述篩選的細(xì)胞系

材料和方法

細(xì)胞培養(yǎng)

在37℃溫度、5％CO₂和95％濕度的條件下，除非有特別標(biāo)注，否則將在補(bǔ)充有10％FBS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所有細(xì)胞。

細(xì)胞活力試劑

通過使用發(fā)光細(xì)胞活力測(cè)定試劑盒(目錄號(hào)：G7572，Promega，在-20℃下儲(chǔ)存)測(cè)定了細(xì)胞活力。為了制備所述CellTiter_Glo試劑，在使用前將CellTiter-Glo緩沖液解凍并平衡至室溫。為了方便起見，可以在使用前將CellTiter-Glo緩沖液解凍并在室溫下儲(chǔ)存長達(dá)48小時(shí)。在使用前將凍干的CellTiter-Glo底物平衡至室溫。將適當(dāng)體積(100ml)的CellTiter-Glo緩沖液轉(zhuǎn)移到含有CellTiter-Glo底物的琥珀色瓶中，以重構(gòu)凍干的酶/底物混合物，其形成所述CellTiter-Glo試劑。在某些情況下，可將CellTiter-Glo緩沖液瓶的整個(gè)液體體積加入到CellTiter-Glo底物小瓶中。通過輕輕震蕩、渦旋或者通過倒轉(zhuǎn)內(nèi)容物進(jìn)行混合以獲得均勻的溶液。所述CellTiter-Glo底物會(huì)在不到一分鐘內(nèi)就能迅速成為溶液。

MEK和ERK抑制劑

MEK抑制劑曲美替尼(Trametinib)購自Selleckchem(目錄號(hào)S2673)并于使用前儲(chǔ)存在-20℃。ERK1/2抑制劑SCH772984購自Selleckchem(目錄號(hào)S7101)并于使用前儲(chǔ)存在-20℃。

設(shè)備

在實(shí)驗(yàn)中使用了以下設(shè)備：EnVision多標(biāo)記檢測(cè)儀2104-0010A，PerkinElmer(美國)；Countstar，Inno-Alliance Biotech(美國)；Forma II系列水套CO2培養(yǎng)箱，ThermoScientific(美國)；生物安全柜，Thermo Scientific，(美國)；倒置顯微鏡，奧林巴斯CKX41SF(日本)。

細(xì)胞毒性和IC50的確定

在實(shí)驗(yàn)前一天(第-1天)，在對(duì)數(shù)生長期期間用細(xì)胞解離緩沖液(Gibco 13151-014)解離細(xì)胞，與合適的細(xì)胞培養(yǎng)基混合并且以1000rpm離心3分鐘。在用表1中所列的相應(yīng)培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至優(yōu)化的密度(即4.44×10⁴個(gè)細(xì)胞/ml)前，使用Countstar重新懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)，用于3天的CTG測(cè)定法(在實(shí)際研究之前優(yōu)化細(xì)胞密度；在測(cè)試中使用的細(xì)胞密度可以隨不同細(xì)胞系而變化)。對(duì)于3天的CTG測(cè)定法，將90μl細(xì)胞懸浮液加入到兩個(gè)96孔板(板A和板B)中，得到4×10³個(gè)細(xì)胞/孔(在實(shí)際研究之前優(yōu)化細(xì)胞密度；在測(cè)試中使用的細(xì)胞密度可以隨不同細(xì)胞系而變化)。將板A和板B組在37℃具有5％CO₂的加濕的培養(yǎng)箱中培育過夜。

在第0天，對(duì)于板A組，向每個(gè)孔中加入10μl培養(yǎng)基用于讀取T0。以與每孔中存在的細(xì)胞培養(yǎng)基相等的體積加入試劑(例如，對(duì)于96孔板，向100μl含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入100μl試劑)。將內(nèi)容物在軌道搖床上混合2分鐘以促進(jìn)細(xì)胞裂解。將所述板在室溫下培育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。將背封黑色貼紙(Backsealblack sticker)放置到每個(gè)板的底部。使用EnVision多標(biāo)記檢測(cè)儀記錄發(fā)光。這形成了T0值的基礎(chǔ)。

在第0天，以測(cè)試物稀釋圖所示的濃度溶解測(cè)試物和陽性對(duì)照。制備100×的PBS溶液，然后用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基將其稀釋(1:10)成10×的工作溶液。根據(jù)平板接種圖，在板B組的每個(gè)孔中分配10μl(10×)藥物溶液(每個(gè)藥物濃度一式三份)。將測(cè)試板在37°具有5％CO₂的加濕的培養(yǎng)箱中培育4天。

在第3天，以與每孔中存在的細(xì)胞培養(yǎng)基相等的體積加入試劑(例如，對(duì)于96孔板，向100μl含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入100μl試劑)。將內(nèi)容物在軌道搖床上混合2分鐘以促進(jìn)細(xì)胞裂解。將所述板在室溫下培育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號(hào)。將背封黑色貼紙(Backseal black sticker)放置到每個(gè)板的底部。使用EnVision多標(biāo)記檢測(cè)儀記錄發(fā)光。

使用GraphPad Prism 5.0以圖形的形式顯示數(shù)據(jù)。為了計(jì)算IC50，使用具有反曲劑量反應(yīng)的非線性回歸模型擬合劑量-應(yīng)答曲線。用于計(jì)算存活率的公式如下所示；使用GraphPad Prism 5.0軟件計(jì)算Y軸設(shè)置為50％時(shí)的絕對(duì)IC50。

存活率(％)＝(Lum_{測(cè)試物}-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})/(Lum_未處理組-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照})×100％。

將Lum_未處理組-Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照}設(shè)置為100％并且將Lum_{培養(yǎng)基對(duì)照}設(shè)置為0％存活率。T0值顯示為Lum_未處理組的百分比。

統(tǒng)計(jì)分析

我們根據(jù)其對(duì)于SCH772984和曲美替尼的IC50，分別將63個(gè)細(xì)胞系分成敏感組、不敏感組和不確定組，然后在敏感組和不敏感組之間檢測(cè)具有差異表達(dá)的或者不同突變類型的基因。這些基因在幾條癌癥相關(guān)通路中富集。

將所述63個(gè)細(xì)胞系分成3組(參見表1)：敏感組(IC50值小于1)、不敏感組(IC50值大于10)和不確定組(其余范圍)。因此，我們得到了針對(duì)SCH772984的25個(gè)敏感細(xì)胞系和22個(gè)不敏感細(xì)胞系，針對(duì)曲美替尼的34個(gè)敏感細(xì)胞系和24個(gè)不敏感細(xì)胞系。在隨后的分析中僅使用具有基因組數(shù)據(jù)的細(xì)胞系。使用GSEA軟件分析差異表達(dá)的基因和富集的通路，使用Fisher精確檢驗(yàn)檢測(cè)具有不同突變類型的基因。

結(jié)果

對(duì)于曲美替尼，32個(gè)敏感細(xì)胞系和23個(gè)不敏感細(xì)胞系具有通過Affymetrix U219陣列分析的基因表達(dá)，34個(gè)基因組顯著富集，標(biāo)稱p值<1％(參見表S2)。29個(gè)敏感細(xì)胞系和20個(gè)不敏感細(xì)胞系具有突變信息，并且通過臨界P值0.01鑒定出了ADAM12、COL14A1、TNN和TP53(參見表3和圖1-5)。

對(duì)于SCH772984，23個(gè)敏感細(xì)胞系和22個(gè)不敏感細(xì)胞系具有通過AffymetrixU219陣列分析的基因表達(dá)，10個(gè)基因組顯著富集，標(biāo)稱p值<1％。21個(gè)敏感細(xì)胞系和18個(gè)不敏感細(xì)胞系具有突變信息，并且通過臨界P值0.01鑒定出了ADAM12、PEX5L、TNN和TP53(參見表3和圖6-10)。

表2.IC50信息

雖然已經(jīng)以具體實(shí)施方案(其中一些是優(yōu)選的實(shí)施方案)為參考具體示出和描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不偏離在此公開的本發(fā)明的主旨和范圍的情況下，可以在形式和細(xì)節(jié)上進(jìn)行各種改變。

SEQUENCE LISTING

<110> 中美冠科(太倉)生物技術(shù)有限公司

<120> 用于確定對(duì)MEK/ERK抑制劑的應(yīng)答性的方法

<130> 061557-8005WO01

<150> CN201410135569.9

<151> 2014-04-04

<160> 10

<170> PatentIn 3.5版本

<210> 1

<211> 8050

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

acgccgccaa ctggcggggg tgcgggggag acaataattt gttccgcggt aataagaacg 60

gtgactgctg gccgtggatc catttcacag gcctgccttc tctcactaac gctcttccta 120

gtccccgggc caactcggac agtttgctca tttattgcaa cggtcaaggc tggcttgtgc 180

cagaacggcg cgcgcgcgcg cacgcacgca cacacacggg gggaaacttt tttaaaaatg 240

aaaggctaga agagctcagc ggcggcgcgg gcgctgcgcg agggctccgg agctgactcg 300

ccgaggcagg aaatccctcc ggtcgcgacg cccggccccg gctcggcgcc cgcgtgggat 360

ggtgcagcgc tcgccgccgg gcccgagagc tgctgcactg aaggccggcg acgatggcag 420

cgcgcccgct gcccgtgtcc cccgcccgcg ccctcctgct cgccctggcc ggtgctctgc 480

tcgcgccctg cgaggcccga ggggtgagct tatggaacca aggaagagct gatgaagttg 540

tcagtgcctc tgttgggagt ggggacctct ggatcccagt gaagagcttc gactccaaga 600

atcatccaga agtgctgaat attcgactac aacgggaaag caaagaactg atcataaatc 660

tggaaagaaa tgaaggtctc attgccagca gtttcacgga aacccactat ctgcaagacg 720

gtactgatgt ctccctcgct cgaaattaca cggtaattct gggtcactgt tactaccatg 780

gacatgtacg gggatattct gattcagcag tcagtctcag cacgtgttct ggtctcaggg 840

gacttattgt gtttgaaaat gaaagctatg tcttagaacc aatgaaaagt gcaaccaaca 900

gatacaaact cttcccagcg aagaagctga aaagcgtccg gggatcatgt ggatcacatc 960

acaacacacc aaacctcgct gcaaagaatg tgtttccacc accctctcag acatgggcaa 1020

gaaggcataa aagagagacc ctcaaggcaa ctaagtatgt ggagctggtg atcgtggcag 1080

acaaccgaga gtttcagagg caaggaaaag atctggaaaa agttaagcag cgattaatag 1140

agattgctaa tcacgttgac aagttttaca gaccactgaa cattcggatc gtgttggtag 1200

gcgtggaagt gtggaatgac atggacaaat gctctgtaag tcaggaccca ttcaccagcc 1260

tccatgaatt tctggactgg aggaagatga agcttctacc tcgcaaatcc catgacaatg 1320

cgcagcttgt cagtggggtt tatttccaag ggaccaccat cggcatggcc ccaatcatga 1380

gcatgtgcac ggcagaccag tctgggggaa ttgtcatgga ccattcagac aatccccttg 1440

gtgcagccgt gaccctggca catgagctgg gccacaattt cgggatgaat catgacacac 1500

tggacagggg ctgtagctgt caaatggcgg ttgagaaagg aggctgcatc atgaacgctt 1560

ccaccgggta cccatttccc atggtgttca gcagttgcag caggaaggac ttggagacca 1620

gcctggagaa aggaatgggg gtgtgcctgt ttaacctgcc ggaagtcagg gagtctttcg 1680

ggggccagaa gtgtgggaac agatttgtgg aagaaggaga ggagtgtgac tgtggggagc 1740

cagaggaatg tatgaatcgc tgctgcaatg ccaccacctg taccctgaag ccggacgctg 1800

tgtgcgcaca tgggctgtgc tgtgaagact gccagctgaa gcctgcagga acagcgtgca 1860

gggactccag caactcctgt gacctcccag agttctgcac aggggccagc cctcactgcc 1920

cagccaacgt gtacctgcac gatgggcact catgtcagga tgtggacggc tactgctaca 1980

atggcatctg ccagactcac gagcagcagt gtgtcacgct ctggggacca ggtgctaaac 2040

ctgcccctgg gatctgcttt gagagagtca attctgcagg tgatccttat ggcaactgtg 2100

gcaaagtctc gaagagttcc tttgccaaat gcgagatgag agatgctaaa tgtggaaaaa 2160

tccagtgtca aggaggtgcc agccggccag tcattggtac caatgccgtt tccatagaaa 2220

caaacatccc cctgcagcaa ggaggccgga ttctgtgccg ggggacccac gtgtacttgg 2280

gcgatgacat gccggaccca gggcttgtgc ttgcaggcac aaagtgtgca gatggaaaaa 2340

tctgcctgaa tcgtcaatgt caaaatatta gtgtctttgg ggttcacgag tgtgcaatgc 2400

agtgccacgg cagaggggtg tgcaacaaca ggaagaactg ccactgcgag gcccactggg 2460

cacctccctt ctgtgacaag tttggctttg gaggaagcac agacagcggc cccatccggc 2520

aagcagataa ccaaggttta accataggaa ttctggtgac catcctgtgt cttcttgctg 2580

ccggatttgt ggtttatctc aaaaggaaga ccttgatacg actgctgttt acaaataaga 2640

agaccaccat tgaaaaacta aggtgtgtgc gcccttcccg gccaccccgt ggcttccaac 2700

cctgtcaggc tcacctcggc caccttggaa aaggcctgat gaggaagccg ccagattcct 2760

acccaccgaa ggacaatccc aggagattgc tgcagtgtca gaatgttgac atcagcagac 2820

ccctcaacgg cctgaatgtc cctcagcccc agtcaactca gcgagtgctt cctcccctcc 2880

accgggctcc acgtgcacct agcgtccctg ccagacccct gccagccaag cctgcactta 2940

ggcaggccca ggggacctgt aagccaaacc cccctcagaa gcctctgcct gcagatcctc 3000

tggccagaac aactcggctc actcatgcct tggccaggac cccaggacaa tgggagactg 3060

ggctccgcct ggcacccctc agacctgctc cacaatatcc acaccaagtg cccagatcca 3120

cccacaccgc ctatattaag tgagaagccg acaccttttt tcaacagtga agacagaagt 3180

ttgcactatc tttcagctcc agttggagtt ttttgtacca acttttagga ttttttttaa 3240

tgtttaaaac atcattacta taagaacttt gagctactgc cgtcagtgct gtgctgtgct 3300

atggtgctct gtctacttgc tcaggtactt gtaaattatt aatttatgca gaatgttgat 3360

tacagtgcag tgcgctgtag taggcatttt taccatcact gagttttcca tggcaggaag 3420

gcttgttgtg cttttagtat tttagtgaac ttgaaatatc ctgcttgatg ggattctgga 3480

caggatgtgt ttgctttctg atcaaggcct tattggaaag cagtccccca actaccccca 3540

gctgtgctta tggtaccaga tgcagctcaa gagatcccaa gtagaatctc agttgatttt 3600

ctggattccc catctcaggc cagagccaag gggcttcagg tccaggctgt gtttggcttt 3660

cagggaggcc ctgtgcccct tgacaactgg caggcaggct cccagggaca cctgggagaa 3720

atctggcttc tggccaggaa gctttggtga gaacctgggt tgcagacagg aatcttaagg 3780

tgtagccaca ccaggataga gactggaaca ctagacaagc cagaacttga ccctgagctg 3840

accagccgtg agcatgtttg gaaggggtct gtagtgtcac tcaaggcggt gcttgataga 3900

aatgccaagc acttcttttt ctcgctgtcc tttctagagc actgccacca gtaggttatt 3960

tagcttggga aaggtggtgt ttctgtaaga aacctactgc ccaggcactg caaaccgcca 4020

cctccctata ctgcttggag ctgagcaaat caccacaaac tgtaatacaa tgatcctgta 4080

ttcagacaga tgaggctttc catgggacca caactatttt cagatgtgaa ccattaacca 4140

gatctagtca atcaagtctg tttactgcaa ggttcaactt attaacaatt aggcagactc 4200

tttatgcttg caaaaactac aaccaatgga atgtgatgtt catgggtata gttcatgtct 4260

gctatcatta ttcgtagata ttggacaaag aaccttctct atggggcatc ctctttttcc 4320

aacttggctg caggaatctt taaaagatgc ttttaacaga gtctgaacct atttcttaaa 4380

cacttgcaac ctacctgttg agcatcacag aatgtgataa ggaaatcaac ttgcttatca 4440

acttcctaaa tattatgaga tgctggcttg ggcagcatcc ccttgaactc ttcactcttc 4500

aaatgcctga ctagggagcc atgtttcaca aggtctttaa agtgactaat ggcatgagaa 4560

atacaaaaat actcagataa ggtaaaatgc catgatgcct ctgtcttctg gactggtttt 4620

cacattagaa gacaattgac aacagttaca taattcactc tgagtgtttt atgagaaagc 4680

cttcttttgg gggtcaacag ttttcctatg ctttgaaaca gaaaaatatg taccaagaat 4740

cttggtttgc cttccagaaa acaaaactgc atttcacttt cccggtgttc cccactgtat 4800

ctaggcaaca tagtattcat gactatggat aaactaaaca cgtgacacaa acacacacaa 4860

aagggaaccc agctctaata cattccaact cgtatagcat gcatctgttt attctatagt 4920

tattaagttc tttaaaatgt aaagccatgc tggaaaataa tactgctgag atacatacag 4980

aattactgta actgattaca cttggtaatt gtactaaagc caaacatata tatactatta 5040

aaaaggttta cagaatttta tggtgcatta cgtgggcatt gtctttttag atgcccaaat 5100

ccttagatct ggcatgttag cccttcctcc aattataaga ggatatgaac tgagtttttc 5160

ttttgttgtt tgttcttagc tgtaattcct atgcttctat ttcagagagc caggagagtt 5220

tgatattaaa ggaggttaaa actgtgatct tatgccatgt catcaatggc cacttagggg 5280

ccatggctga tgacacattc ttatctctac agtactaatg tgttattata gagccatgca 5340

ttttatttct gaataagaac atatttaaac taatattccc ttacaatatg gacagtatta 5400

atccttccaa gatgcagtat ttatcaagtg aagcatattt agcagcaaat tccattttaa 5460

cataacttag gaaccaataa ccagggtgtt ttgtggttgg gggaggcacg gggtggagta 5520

ttctttttta tatcctcaaa acaaaaaaaa tcaatactta tatttcaatg gcaatctagt 5580

atttttttaa aagactgtat aggcatgaat aatagaggtg gtttgagttt tgtagggcca 5640

tcacctggaa agtcaatgtg actagacaca aagtagccca gaggctactt ttcttcctac 5700

agcttattat agttgtaggt tctatgacct cacttcatgg gttccaggca attccgctga 5760

aaggtttgtc tcctgaaatt ttttaagttt gttttcctga cacatgtaat cagatgtgta 5820

gcaaccgagg gaaacgaagc ctaacattct ccattgtgga aatacacaca ggaggttaca 5880

tttcacagcg tggatttttc cagcttacac atgtgggatg acatcacaga aaccacaaaa 5940

gcagcaaatt aaactgtagg agagtcaata ctcctgacga gtctcggggg gggggcattt 6000

ttatgccttc ttaactttat gagaattctc aggctgaact ataggccatt gttcccaggc 6060

aaatcaatac atcaatgcat cctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaacc ggctaaaact 6120

gtgtcaaaat gttcttaagg agcctatggt ctccacggtg ctaaaaagag cctggtgctg 6180

ggccgactgg cagggctgag catcctcctg ccccctcgcc actgatgttt actaagcact 6240

ctgagccaat gagaccccca gcagcagaaa gggcacaagg tggcgccagg gcagcagggc 6300

cagatctttc tcatgcacct cgacctcttg cagactttct tcgtgagatg tactactcat 6360

ttcaaaactg ctttgcaggg ctcccctatg tattcggggg gcccacggca cactcaggct 6420

ggagatcctt cctcactgcg ctcaagatgg cctcagccag acaccagtta cccagctgaa 6480

agtcacaatc cctcccagaa gtctcccaac actagtgctg accagaggtg gggctctcag 6540

gctaggagtt tcacacacaa tgacaggctg ctgggggaca ttgcaggacc ccttttcctc 6600

tcctctccat gctagaagcc agccctaggc agctgcagtt actccctgtg actcagcagc 6660

aggctgattc aacacagctg cccacacaaa gccagtggct aatacatctg tttacctttc 6720

cctatcaccc agacacaagc ccctttccca ggtcaaacca caggccgatg catctccagt 6780

ttgacagtca aatcactact tccattgcta ctttagatca gccaaagtgg tgactgctgc 6840

agtgtgtggc tatccctaca aggcccaccc aagggatgcc caaagcccaa ccttctccag 6900

ggctgcagcc cagagcaacc ccaccagcct aagtccagca gaggacctcc cacccaatgt 6960

cttgttctaa ttagaagggg aagttagcca cagaaaatca acttatctat aattacaaaa 7020

ttctcttgac tcaccttaaa gttcctattg acatctactg cttttaaacc tatttgaaaa 7080

ctctgatact aaaacaaatg acactctaag aaagtttggg agccccatgc tgagaaccat 7140

ttctgtgcag tgaggatgtt tccagaagct acttacctac atgtgaatgt gccattttct 7200

ttccttttgt agagaaaatc ccctttactt tttggaacag taatggcagc ttctagtaca 7260

gccattacag tttcatatga gaaaaattaa gaataactat aaaattgtta aaatatccaa 7320

taatggataa tgatggccag aagatttaac atacaaagta attctcaatg taaagctatt 7380

cagctcttcc aggttgaatg ccctgtaacc caccctgacc ttccacatca tcttcaaaaa 7440

gcagtttctc tgttccccat gattctccta taaggtaact ctttagtcct ccatttagca 7500

cattttaaat cctccaaaga ataagtatca tgtgattatt ttagctttac aaaaaaaaag 7560

ttgaatggcg ttttattttc atggcctata agcaggtacc ttagtagggc agatatagga 7620

aaaacaaatt agagcaaaac aaatcctcta caaatccaag gcaggaaaag tggtggcaga 7680

gtgactcatt ctcctgtccc tcccatcagg tcaaatcagg aggctgcagt gaatgcctgt 7740

tctttgaatg tgtagcagtt gttcctgtaa ctctttaaaa cttggctata ggctgtttag 7800

cacagtacag attaaagata cagttacgta aacagcaaag taattttata gtgcttcatc 7860

catttatcat gctttggttt gctaattttt tcacatacct ttttctatca cagtctgttg 7920

cttttgtaca catttctcat attggggttc gacaggtaaa cacaaactgc tatttcagta 7980

gaaaaagtta ttgttatgaa tattaaaccc aataaattgt ataaaggtaa atatcaaaaa 8040

aaaaaaaaaa 8050

<210> 2

<211> 909

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Ala Ala Arg Pro Leu Pro Val Ser Pro Ala Arg Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ala Leu Ala Gly Ala Leu Leu Ala Pro Cys Glu Ala Arg Gly Val Ser

20 25 30

Leu Trp Asn Gln Gly Arg Ala Asp Glu Val Val Ser Ala Ser Val Gly

35 40 45

Ser Gly Asp Leu Trp Ile Pro Val Lys Ser Phe Asp Ser Lys Asn His

50 55 60

Pro Glu Val Leu Asn Ile Arg Leu Gln Arg Glu Ser Lys Glu Leu Ile

65 70 75 80

Ile Asn Leu Glu Arg Asn Glu Gly Leu Ile Ala Ser Ser Phe Thr Glu

85 90 95

Thr His Tyr Leu Gln Asp Gly Thr Asp Val Ser Leu Ala Arg Asn Tyr

100 105 110

Thr Val Ile Leu Gly His Cys Tyr Tyr His Gly His Val Arg Gly Tyr

115 120 125

Ser Asp Ser Ala Val Ser Leu Ser Thr Cys Ser Gly Leu Arg Gly Leu

130 135 140

Ile Val Phe Glu Asn Glu Ser Tyr Val Leu Glu Pro Met Lys Ser Ala

145 150 155 160

Thr Asn Arg Tyr Lys Leu Phe Pro Ala Lys Lys Leu Lys Ser Val Arg

165 170 175

Gly Ser Cys Gly Ser His His Asn Thr Pro Asn Leu Ala Ala Lys Asn

180 185 190

Val Phe Pro Pro Pro Ser Gln Thr Trp Ala Arg Arg His Lys Arg Glu

195 200 205

Thr Leu Lys Ala Thr Lys Tyr Val Glu Leu Val Ile Val Ala Asp Asn

210 215 220

Arg Glu Phe Gln Arg Gln Gly Lys Asp Leu Glu Lys Val Lys Gln Arg

225 230 235 240

Leu Ile Glu Ile Ala Asn His Val Asp Lys Phe Tyr Arg Pro Leu Asn

245 250 255

Ile Arg Ile Val Leu Val Gly Val Glu Val Trp Asn Asp Met Asp Lys

260 265 270

Cys Ser Val Ser Gln Asp Pro Phe Thr Ser Leu His Glu Phe Leu Asp

275 280 285

Trp Arg Lys Met Lys Leu Leu Pro Arg Lys Ser His Asp Asn Ala Gln

290 295 300

Leu Val Ser Gly Val Tyr Phe Gln Gly Thr Thr Ile Gly Met Ala Pro

305 310 315 320

Ile Met Ser Met Cys Thr Ala Asp Gln Ser Gly Gly Ile Val Met Asp

325 330 335

His Ser Asp Asn Pro Leu Gly Ala Ala Val Thr Leu Ala His Glu Leu

340 345 350

Gly His Asn Phe Gly Met Asn His Asp Thr Leu Asp Arg Gly Cys Ser

355 360 365

Cys Gln Met Ala Val Glu Lys Gly Gly Cys Ile Met Asn Ala Ser Thr

370 375 380

Gly Tyr Pro Phe Pro Met Val Phe Ser Ser Cys Ser Arg Lys Asp Leu

385 390 395 400

Glu Thr Ser Leu Glu Lys Gly Met Gly Val Cys Leu Phe Asn Leu Pro

405 410 415

Glu Val Arg Glu Ser Phe Gly Gly Gln Lys Cys Gly Asn Arg Phe Val

420 425 430

Glu Glu Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Glu Pro Glu Glu Cys Met Asn

435 440 445

Arg Cys Cys Asn Ala Thr Thr Cys Thr Leu Lys Pro Asp Ala Val Cys

450 455 460

Ala His Gly Leu Cys Cys Glu Asp Cys Gln Leu Lys Pro Ala Gly Thr

465 470 475 480

Ala Cys Arg Asp Ser Ser Asn Ser Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Thr

485 490 495

Gly Ala Ser Pro His Cys Pro Ala Asn Val Tyr Leu His Asp Gly His

500 505 510

Ser Cys Gln Asp Val Asp Gly Tyr Cys Tyr Asn Gly Ile Cys Gln Thr

515 520 525

His Glu Gln Gln Cys Val Thr Leu Trp Gly Pro Gly Ala Lys Pro Ala

530 535 540

Pro Gly Ile Cys Phe Glu Arg Val Asn Ser Ala Gly Asp Pro Tyr Gly

545 550 555 560

Asn Cys Gly Lys Val Ser Lys Ser Ser Phe Ala Lys Cys Glu Met Arg

565 570 575

Asp Ala Lys Cys Gly Lys Ile Gln Cys Gln Gly Gly Ala Ser Arg Pro

580 585 590

Val Ile Gly Thr Asn Ala Val Ser Ile Glu Thr Asn Ile Pro Leu Gln

595 600 605

Gln Gly Gly Arg Ile Leu Cys Arg Gly Thr His Val Tyr Leu Gly Asp

610 615 620

Asp Met Pro Asp Pro Gly Leu Val Leu Ala Gly Thr Lys Cys Ala Asp

625 630 635 640

Gly Lys Ile Cys Leu Asn Arg Gln Cys Gln Asn Ile Ser Val Phe Gly

645 650 655

Val His Glu Cys Ala Met Gln Cys His Gly Arg Gly Val Cys Asn Asn

660 665 670

Arg Lys Asn Cys His Cys Glu Ala His Trp Ala Pro Pro Phe Cys Asp

675 680 685

Lys Phe Gly Phe Gly Gly Ser Thr Asp Ser Gly Pro Ile Arg Gln Ala

690 695 700

Asp Asn Gln Gly Leu Thr Ile Gly Ile Leu Val Thr Ile Leu Cys Leu

705 710 715 720

Leu Ala Ala Gly Phe Val Val Tyr Leu Lys Arg Lys Thr Leu Ile Arg

725 730 735

Leu Leu Phe Thr Asn Lys Lys Thr Thr Ile Glu Lys Leu Arg Cys Val

740 745 750

Arg Pro Ser Arg Pro Pro Arg Gly Phe Gln Pro Cys Gln Ala His Leu

755 760 765

Gly His Leu Gly Lys Gly Leu Met Arg Lys Pro Pro Asp Ser Tyr Pro

770 775 780

Pro Lys Asp Asn Pro Arg Arg Leu Leu Gln Cys Gln Asn Val Asp Ile

785 790 795 800

Ser Arg Pro Leu Asn Gly Leu Asn Val Pro Gln Pro Gln Ser Thr Gln

805 810 815

Arg Val Leu Pro Pro Leu His Arg Ala Pro Arg Ala Pro Ser Val Pro

820 825 830

Ala Arg Pro Leu Pro Ala Lys Pro Ala Leu Arg Gln Ala Gln Gly Thr

835 840 845

Cys Lys Pro Asn Pro Pro Gln Lys Pro Leu Pro Ala Asp Pro Leu Ala

850 855 860

Arg Thr Thr Arg Leu Thr His Ala Leu Ala Arg Thr Pro Gly Gln Trp

865 870 875 880

Glu Thr Gly Leu Arg Leu Ala Pro Leu Arg Pro Ala Pro Gln Tyr Pro

885 890 895

His Gln Val Pro Arg Ser Thr His Thr Ala Tyr Ile Lys

900 905

<210> 3

<211> 6464

<212> DNA

<213> 智人

<400> 3

atctgatcct gggctcccag ctggagaggc ggaggcagct ccagggggct ggaagtggaa 60

gcgcagcggc agaaggagag ggagagagaa agagagagag gctaattaaa aaaggatact 120

ccgagggaag agagcaaggg cggtgcgccg ccaaggacca actagcggcg gagcttcgat 180

cttgcctagg cgcggagagc tcccaacctg ggctggaacc ttgcccagca caggtggctg 240

ctacacccca tgtaaaaagc ggaaaataaa atgaagattt tccagcgcaa gatgcggtac 300

tggttgcttc cacctttttt ggcaattgtt tatttctgca ccattgtcca aggtcaagtg 360

gctccaccca caaggttaag atataatgta atatctcatg acagtataca gatttcatgg 420

aaggctccaa gagggaaatt tggtggttac aaacttcttg tgactccaac ttcaggtgga 480

aaaactaacc agctgaatct gcagaacact gcaactaaag caattattca aggccttatg 540

ccagaccaga attacacagt tcaaattatt gcatacaata aagataaaga aagcaagcca 600

gctcaaggcc aattcagaat taaagattta gaaaaaagaa aggatccaaa gcccagagtc 660

aaagttgtgg acagaggaaa tgggagtaga ccatcttcac cagaagaagt gaaatttgtc 720

tgtcaaactc cagcaattgc tgacattgta atcctggtcg atggttcatg gagtattgga 780

agattcaact tcagactggt tcggcatttc ttggaaaacc tggttacagc attcgatgtg 840

ggctcagaga agacacgaat tggtcttgca cagtatagtg gtgaccccag aatagaatgg 900

cacttgaatg catttagcac aaaagatgaa gtgattgaag ctgtccgaaa cctcccatat 960

aaaggaggaa atacactaac aggtcttgct ttgaactaca tttttgaaaa tagcttcaaa 1020

ccagaagcag gatcaaggac tggagtatcc aaaattggca ttttaatcac agatggaaaa 1080

tcccaagatg acattattcc accatctaga aatcttcgtg agtctggtgt agaactgttt 1140

gccatagggg tgaaaaacgc ggatgtgaat gagctgcagg agatcgcctc tgaaccagac 1200

agcactcatg tgtacaatgt tgccgaattc gatctgatgc acacagttgt ggagagtctg 1260

accaggactc tctgctctag agtggaagaa caggacagag aaattaaagc ctcagcccat 1320

gccatcactg ggccgcctac ggagttgatt acttctgaag tcactgccag aagctttatg 1380

gttaactgga ctcatgcccc aggaaatgtg gaaaaataca gagttgtgta ttatcctacc 1440

aggggtggaa aaccagacga ggtggtggta gatggaactg tatcttccac agtgttgaaa 1500

aacttgatgt ctttaactga atatcagata gcagtctttg caatctatgc ccacactgct 1560

agtgaaggcc tacggggaac tgaaactaca cttgctttac cgatggcttc tgaccttcta 1620

ctgtacgacg tgactgagaa cagcatgcga gtcaaatggg atgcagtgcc tggggcctca 1680

ggttacctga tcctttatgc tcctctaaca gagggcctgg ctggggatga aaaagagatg 1740

aaaattggag agacccacac agatattgaa ttgagtgggt tgttgcccaa tacagaatac 1800

acagtcacag tttatgccat gtttggagaa gaggccagtg atcctgttac gggacaagaa 1860

acaacattgg ctttaagtcc accaagaaac ctgagaatct ccaatgttgg ctctaacagt 1920

gctcgattaa cctgggaccc aacttcaaga cagatcaatg gttatcgaat tgtatataac 1980

aatgcagatg ggactgaaat caatgaggtt gaagtcgatc ctattactac cttccctctg 2040

aagggcttga cacctctcac agagtatact attgctattt tctccatcta tgatgaagga 2100

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gaaattgatg aggtgacgac agacagtttt agggtgacct ggcatcccct ctcagctgat 2220

gaagggctac acaaattgat gtggattcca gtctatgggg ggaagactga ggaggttgtc 2280

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accacacttg acagtttttg gacagaacca gctacaacca tagtgcctac cacatctgtg 2460

acttcagttt tccagacggg aatcagaaac ctagttgtag gtgatgaaac tacttctagc 2520

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acagctcaag gggaccctga ggaagaagtc ataggaacgg ttatggtgcc tggaagccag 2640

aacaacctcc ttctgaagcc tctgcttcct gatactgaat acaaagtcac agtgactccc 2700

atctacacgg atggcgaagg cgtcagcgtc tccgctcctg gaaaaacctt accatcctcg 2760

gggccccaga acttgcgggt gtccgaggaa tggtataacc ggttgcgcat tacgtgggac 2820

cccccatctt ccccggtgaa aggctataga attgtctaca aacctgtcag tgttcctggt 2880

ccaacactgg aaacgtttgt gggagctgac attaacacca tccttatcac aaacctcctc 2940

agcggaatgg actacaatgt gaagatattt gcctcccagg cctcaggctt cagcgacgcc 3000

ctgacaggca tggtgaaaac attgttcttg ggtgttacca atctccaagc caaacatgtt 3060

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gttatagaat ccctccagga taggcaaaag caagaatcca ctgtgggtgg agggacaacc 3180

aggcattgct tctatggact tcagcctgat tctgaatata aaatcagtgt ttatacaaag 3240

ctccaggaga ttgaaggacc tagtgtgagc ataatggaaa aaacacaatc acttcctaca 3300

cgaccaccaa cttttcctcc aaccattcca ccagcaaaag aagtatgtaa ggcggccaag 3360

gctgacctgg tatttatggt ggatggatcc tggagcattg gagatgaaaa tttcaataag 3420

atcatcagct ttctatacag cactgttgga gccctgaaca agattggcac agatggaacc 3480

caagttgcaa tggttcagtt cactgatgat cccagaacag aatttaaact aaatgcttac 3540

aaaaccaaag agactcttct tgatgcaatt aaacacattt catacaaagg aggaaataca 3600

aaaacaggaa aagcaattaa gtatgttcga gataccttgt tcactgcaga gtcaggtaca 3660

agaaggggca tcccaaaggt tatcgtggtt ataactgatg gaagatcaca agatgatgtg 3720

aacaaaatct ccagggagat gcaattagat ggctatagca tttttgcaat tggtgtggcc 3780

gatgcagatt actcggagtt ggttagcatt ggcagtaagc ccagcgcacg ccatgtcttc 3840

tttgtggatg actttgacgc ctttaagaaa atcgaagatg agttaattac ttttgtctgc 3900

gaaacagcat cagcaacctg tccagtggta cacaaggatg gcattgatct tgcaggattt 3960

aagatgatgg aaatgtttgg tttggttgaa aaagattttt catcagtgga aggggtttct 4020

atggagcctg gtaccttcaa tgtgtttcca tgttaccaac tccataaaga tgccctggtt 4080

tcccagccaa ccaggtactt gcacccagaa ggattgccct ccgactacac aatcagtttt 4140

ctattccgga ttcttcctga cactccacag gagccatttg ctctttggga gattttaaat 4200

aaaaattctg acccattggt tggggttatt ttagacaatg gtgggaaaac tctaacatat 4260

ttcaactatg accagagtgg ggattttcaa actgttactt tcgaaggacc tgaaattagg 4320

aaaatttttt atggaagctt tcacaagcta cacattgttg tcagtgagac tttggtcaaa 4380

gtggttattg actgcaagca agtgggtgag aaggcaatga acgcatcagc taatatcacg 4440

tcagatggtg tagaagtgct agggaaaatg gttcgatcaa gaggaccagg tggaaactct 4500

gcaccgttcc agttacagat gtttgatatt gtttgctcca catcatgggc caatacagac 4560

aaatgctgtg aacttccagg cctgagagat gatgagtctt gcccagacct tccccattcc 4620

tgctcctgtt ctgaaaccaa tgaagtggct ctgggaccag cgggcccacc aggtggtcca 4680

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cggggtgaaa ttggtctgcc aggacctcag ggtccacctg gacctcaagg accaagtggt 4800

ctgtccattc aaggaatgcc cggaatgcca ggagaaaaag gagagaaagg agatactggc 4860

cttccaggtc cacagggtat cccaggaggc gttggttcac caggacgtga tggctcacca 4920

ggccagaggg gccttccggg aaaggatgga tcctcgggac ctccaggacc accagggcca 4980

ataggcattc ctggcacccc tggagtccca gggatcacag gaagcatggg accgcaaggc 5040

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cacatggcca ggtacactgc catcctcaac cagattccca gccactcctc atccatccgg 5220

actgtccaag ggcctcctgg ggagcctggg aggccaggct cacctggagc ccctggtgaa 5280

caaggacccc caggcacacc aggcttcccc ggaaatgcag gcgtgccagg gaccccagga 5340

gaacgaggtc taactggtat caaaggagaa aaaggaaatc caggcgttgg aacccaaggt 5400

ccaagaggcc cccctggacc agcaggacct tcaggggaga gtcggcctgg cagccctggg 5460

ccccctggct ctcctggacc aagaggccca ccaggtcatc tgggggttcc tggaccccaa 5520

ggtccttctg gccagcctgg atattgtgac ccctcatcat gttctgccta tggtgtgaga 5580

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ctgtggggcc ctggagtctg atagcctcag gagaaatttg aagaccaact gcaagaactc 5700

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gggctcattt cagcagccta aatctcctcc ttggataatg ttaatattat tattattatt 5820

aacaaaaaat atatattttt aaaaagttcc cttaatctat gacatggtag caatgatttc 5880

cctttggtgt cttaatggca tgtcagataa tttgtttttc cagagaagag agctcaaaga 5940

ggaattggga aaaataaatt gaactctgga atcttctctc tcaagtccta aaatgaacaa 6000

acagatatga ttgtgtttga gggaaatatg tccctagcag gaaaagaatt caaagaggtt 6060

caaagaatat gtcacttact cctacttgct gtaggaataa ccttgctgat aagaaaaaaa 6120

gggacaatat tggagaaact acctcttgtt taattgatct gtccaactct gagatcactt 6180

ggtaactggt ttcatgtgta tccaaaaatc agcatttgga tttaagcttt ctgaatttgg 6240

tagtttaaga aacagattta gtttttcagt ggttttaact catgtgaaat aatgattttc 6300

caccagctct gatgcaaaga gatataattt taatgaacga tttatccagc agtgtgttcc 6360

aggggttgcc tctccttatc tacggggatt actttgtaca tgcagataag ttttcgcaaa 6420

cctatttcca ttttcttttg taagcaaata aaactttaaa acaa 6464

<210> 4

<211> 1796

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Met Lys Ile Phe Gln Arg Lys Met Arg Tyr Trp Leu Leu Pro Pro Phe

1 5 10 15

Leu Ala Ile Val Tyr Phe Cys Thr Ile Val Gln Gly Gln Val Ala Pro

20 25 30

Pro Thr Arg Leu Arg Tyr Asn Val Ile Ser His Asp Ser Ile Gln Ile

35 40 45

Ser Trp Lys Ala Pro Arg Gly Lys Phe Gly Gly Tyr Lys Leu Leu Val

50 55 60

Thr Pro Thr Ser Gly Gly Lys Thr Asn Gln Leu Asn Leu Gln Asn Thr

65 70 75 80

Ala Thr Lys Ala Ile Ile Gln Gly Leu Met Pro Asp Gln Asn Tyr Thr

85 90 95

Val Gln Ile Ile Ala Tyr Asn Lys Asp Lys Glu Ser Lys Pro Ala Gln

100 105 110

Gly Gln Phe Arg Ile Lys Asp Leu Glu Lys Arg Lys Asp Pro Lys Pro

115 120 125

Arg Val Lys Val Val Asp Arg Gly Asn Gly Ser Arg Pro Ser Ser Pro

130 135 140

Glu Glu Val Lys Phe Val Cys Gln Thr Pro Ala Ile Ala Asp Ile Val

145 150 155 160

Ile Leu Val Asp Gly Ser Trp Ser Ile Gly Arg Phe Asn Phe Arg Leu

165 170 175

Val Arg His Phe Leu Glu Asn Leu Val Thr Ala Phe Asp Val Gly Ser

180 185 190

Glu Lys Thr Arg Ile Gly Leu Ala Gln Tyr Ser Gly Asp Pro Arg Ile

195 200 205

Glu Trp His Leu Asn Ala Phe Ser Thr Lys Asp Glu Val Ile Glu Ala

210 215 220

Val Arg Asn Leu Pro Tyr Lys Gly Gly Asn Thr Leu Thr Gly Leu Ala

225 230 235 240

Leu Asn Tyr Ile Phe Glu Asn Ser Phe Lys Pro Glu Ala Gly Ser Arg

245 250 255

Thr Gly Val Ser Lys Ile Gly Ile Leu Ile Thr Asp Gly Lys Ser Gln

260 265 270

Asp Asp Ile Ile Pro Pro Ser Arg Asn Leu Arg Glu Ser Gly Val Glu

275 280 285

Leu Phe Ala Ile Gly Val Lys Asn Ala Asp Val Asn Glu Leu Gln Glu

290 295 300

Ile Ala Ser Glu Pro Asp Ser Thr His Val Tyr Asn Val Ala Glu Phe

305 310 315 320

Asp Leu Met His Thr Val Val Glu Ser Leu Thr Arg Thr Leu Cys Ser

325 330 335

Arg Val Glu Glu Gln Asp Arg Glu Ile Lys Ala Ser Ala His Ala Ile

340 345 350

Thr Gly Pro Pro Thr Glu Leu Ile Thr Ser Glu Val Thr Ala Arg Ser

355 360 365

Phe Met Val Asn Trp Thr His Ala Pro Gly Asn Val Glu Lys Tyr Arg

370 375 380

Val Val Tyr Tyr Pro Thr Arg Gly Gly Lys Pro Asp Glu Val Val Val

385 390 395 400

Asp Gly Thr Val Ser Ser Thr Val Leu Lys Asn Leu Met Ser Leu Thr

405 410 415

Glu Tyr Gln Ile Ala Val Phe Ala Ile Tyr Ala His Thr Ala Ser Glu

420 425 430

Gly Leu Arg Gly Thr Glu Thr Thr Leu Ala Leu Pro Met Ala Ser Asp

435 440 445

Leu Leu Leu Tyr Asp Val Thr Glu Asn Ser Met Arg Val Lys Trp Asp

450 455 460

Ala Val Pro Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Ile Leu Tyr Ala Pro Leu Thr

465 470 475 480

Glu Gly Leu Ala Gly Asp Glu Lys Glu Met Lys Ile Gly Glu Thr His

485 490 495

Thr Asp Ile Glu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Thr Glu Tyr Thr Val

500 505 510

Thr Val Tyr Ala Met Phe Gly Glu Glu Ala Ser Asp Pro Val Thr Gly

515 520 525

Gln Glu Thr Thr Leu Ala Leu Ser Pro Pro Arg Asn Leu Arg Ile Ser

530 535 540

Asn Val Gly Ser Asn Ser Ala Arg Leu Thr Trp Asp Pro Thr Ser Arg

545 550 555 560

Gln Ile Asn Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Thr Glu

565 570 575

Ile Asn Glu Val Glu Val Asp Pro Ile Thr Thr Phe Pro Leu Lys Gly

580 585 590

Leu Thr Pro Leu Thr Glu Tyr Thr Ile Ala Ile Phe Ser Ile Tyr Asp

595 600 605

Glu Gly Gln Ser Glu Pro Leu Thr Gly Val Phe Thr Thr Glu Glu Val

610 615 620

Pro Ala Gln Gln Tyr Leu Glu Ile Asp Glu Val Thr Thr Asp Ser Phe

625 630 635 640

Arg Val Thr Trp His Pro Leu Ser Ala Asp Glu Gly Leu His Lys Leu

645 650 655

Met Trp Ile Pro Val Tyr Gly Gly Lys Thr Glu Glu Val Val Leu Lys

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Glu Glu Gln Asp Ser His Val Ile Glu Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu

675 680 685

Tyr Glu Val Ser Leu Leu Ala Val Leu Asp Asp Gly Ser Glu Ser Glu

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Val Val Thr Ala Val Gly Thr Thr Leu Asp Ser Phe Trp Thr Glu Pro

705 710 715 720

Ala Thr Thr Ile Val Pro Thr Thr Ser Val Thr Ser Val Phe Gln Thr

725 730 735

Gly Ile Arg Asn Leu Val Val Gly Asp Glu Thr Thr Ser Ser Leu Arg

740 745 750

Val Lys Trp Asp Ile Ser Asp Ser Asp Val Gln Gln Phe Arg Val Thr

755 760 765

Tyr Met Thr Ala Gln Gly Asp Pro Glu Glu Glu Val Ile Gly Thr Val

770 775 780

Met Val Pro Gly Ser Gln Asn Asn Leu Leu Leu Lys Pro Leu Leu Pro

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Asp Thr Glu Tyr Lys Val Thr Val Thr Pro Ile Tyr Thr Asp Gly Glu

805 810 815

Gly Val Ser Val Ser Ala Pro Gly Lys Thr Leu Pro Ser Ser Gly Pro

820 825 830

Gln Asn Leu Arg Val Ser Glu Glu Trp Tyr Asn Arg Leu Arg Ile Thr

835 840 845

Trp Asp Pro Pro Ser Ser Pro Val Lys Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Lys

850 855 860

Pro Val Ser Val Pro Gly Pro Thr Leu Glu Thr Phe Val Gly Ala Asp

865 870 875 880

Ile Asn Thr Ile Leu Ile Thr Asn Leu Leu Ser Gly Met Asp Tyr Asn

885 890 895

Val Lys Ile Phe Ala Ser Gln Ala Ser Gly Phe Ser Asp Ala Leu Thr

900 905 910

Gly Met Val Lys Thr Leu Phe Leu Gly Val Thr Asn Leu Gln Ala Lys

915 920 925

His Val Glu Met Thr Ser Leu Cys Ala His Trp Gln Val His Arg His

930 935 940

Ala Thr Ala Tyr Arg Val Val Ile Glu Ser Leu Gln Asp Arg Gln Lys

945 950 955 960

Gln Glu Ser Thr Val Gly Gly Gly Thr Thr Arg His Cys Phe Tyr Gly

965 970 975

Leu Gln Pro Asp Ser Glu Tyr Lys Ile Ser Val Tyr Thr Lys Leu Gln

980 985 990

Glu Ile Glu Gly Pro Ser Val Ser Ile Met Glu Lys Thr Gln Ser Leu

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Pro Thr Arg Pro Pro Thr Phe Pro Pro Thr Ile Pro Pro Ala Lys

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Glu Val Cys Lys Ala Ala Lys Ala Asp Leu Val Phe Met Val Asp

1025 1030 1035

Gly Ser Trp Ser Ile Gly Asp Glu Asn Phe Asn Lys Ile Ile Ser

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Phe Leu Tyr Ser Thr Val Gly Ala Leu Asn Lys Ile Gly Thr Asp

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Gly Thr Gln Val Ala Met Val Gln Phe Thr Asp Asp Pro Arg Thr

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Glu Phe Lys Leu Asn Ala Tyr Lys Thr Lys Glu Thr Leu Leu Asp

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Ala Ile Lys His Ile Ser Tyr Lys Gly Gly Asn Thr Lys Thr Gly

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Lys Ala Ile Lys Tyr Val Arg Asp Thr Leu Phe Thr Ala Glu Ser

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Gly Thr Arg Arg Gly Ile Pro Lys Val Ile Val Val Ile Thr Asp

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Gly Arg Ser Gln Asp Asp Val Asn Lys Ile Ser Arg Glu Met Gln

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Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Phe Ala Ile Gly Val Ala Asp Ala Asp

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Tyr Ser Glu Leu Val Ser Ile Gly Ser Lys Pro Ser Ala Arg His

1175 1180 1185

Val Phe Phe Val Asp Asp Phe Asp Ala Phe Lys Lys Ile Glu Asp

1190 1195 1200

Glu Leu Ile Thr Phe Val Cys Glu Thr Ala Ser Ala Thr Cys Pro

1205 1210 1215

Val Val His Lys Asp Gly Ile Asp Leu Ala Gly Phe Lys Met Met

1220 1225 1230

Glu Met Phe Gly Leu Val Glu Lys Asp Phe Ser Ser Val Glu Gly

1235 1240 1245

Val Ser Met Glu Pro Gly Thr Phe Asn Val Phe Pro Cys Tyr Gln

1250 1255 1260

Leu His Lys Asp Ala Leu Val Ser Gln Pro Thr Arg Tyr Leu His

1265 1270 1275

Pro Glu Gly Leu Pro Ser Asp Tyr Thr Ile Ser Phe Leu Phe Arg

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Ile Leu Pro Asp Thr Pro Gln Glu Pro Phe Ala Leu Trp Glu Ile

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Leu Asn Lys Asn Ser Asp Pro Leu Val Gly Val Ile Leu Asp Asn

1310 1315 1320

Gly Gly Lys Thr Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Asp Gln Ser Gly Asp

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Phe Gln Thr Val Thr Phe Glu Gly Pro Glu Ile Arg Lys Ile Phe

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Tyr Gly Ser Phe His Lys Leu His Ile Val Val Ser Glu Thr Leu

1355 1360 1365

Val Lys Val Val Ile Asp Cys Lys Gln Val Gly Glu Lys Ala Met

1370 1375 1380

Asn Ala Ser Ala Asn Ile Thr Ser Asp Gly Val Glu Val Leu Gly

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Lys Met Val Arg Ser Arg Gly Pro Gly Gly Asn Ser Ala Pro Phe

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Gln Leu Gln Met Phe Asp Ile Val Cys Ser Thr Ser Trp Ala Asn

1415 1420 1425

Thr Asp Lys Cys Cys Glu Leu Pro Gly Leu Arg Asp Asp Glu Ser

1430 1435 1440

Cys Pro Asp Leu Pro His Ser Cys Ser Cys Ser Glu Thr Asn Glu

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Val Ala Leu Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Gly Pro Gly Leu Arg

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Gly Pro Lys Gly Gln Gln Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Pro Asp

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Gly Pro Arg Gly Glu Ile Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro

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Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Leu Ser Ile Gln Gly Met Pro Gly

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Met Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Thr Gly Leu Pro Gly

1520 1525 1530

Pro Gln Gly Ile Pro Gly Gly Val Gly Ser Pro Gly Arg Asp Gly

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Ser Pro Gly Gln Arg Gly Leu Pro Gly Lys Asp Gly Ser Ser Gly

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Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ile Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly

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Val Pro Gly Ile Thr Gly Ser Met Gly Pro Gln Gly Ala Leu Gly

1580 1585 1590

Pro Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Arg Gly Glu Arg Gly

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Asp Leu Gln Ser Gln Ala Met Val Arg Ser Val Ala Arg Gln Val

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Cys Glu Gln Leu Ile Gln Ser His Met Ala Arg Tyr Thr Ala Ile

1625 1630 1635

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Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Arg Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro

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Gly Glu Gln Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Phe Pro Gly Asn Ala

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Gly Val Pro Gly Thr Pro Gly Glu Arg Gly Leu Thr Gly Ile Lys

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Gly Glu Lys Gly Asn Pro Gly Val Gly Thr Gln Gly Pro Arg Gly

1700 1705 1710

Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ser Gly Glu Ser Arg Pro Gly Ser

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Pro Gly Pro Pro Gly Ser Pro Gly Pro Arg Gly Pro Pro Gly His

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Leu Gly Val Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Gln Pro Gly Tyr

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Cys Asp Pro Ser Ser Cys Ser Ala Tyr Gly Val Arg Ala Pro His

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cggccccagc cactctggag cctcccggct gcagcaacaa ggagcaacag gtcactgtca 240

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gccccgcctg cgagcggctg gcctgccccg gggcgtgcag cggccacggg cgttgcgtgg 660

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ctgagaactg cagcggacac ggcgagtgcg tgcgcggcgt gtgccagtgc cacgaagact 780

tcatgtcgga ggactgcagc gagaagcgct gtcccggcga ctgcagcggc cacggcttct 840

gtgacacggg cgagtgctac tgcgaggagg gcttcacagg cctggactgt gcccaggtgg 900

tcaccccaca gggcctgcag ctgctcaaga acacggagga ttctctgctg gtgagctggg 960

agccctccag ccaggtggat cactacctcc tcagctacta ccccctgggg aaggagctct 1020

ctgggaagca gatccaagtg cccaaggagc agcacagcta tgagattctt ggtttgctgc 1080

ctggaaccaa gtacatagtc accctgcgta acgtcaagaa tgaagtttct agcagcccac 1140

agcatctact tgccaccaca gaccttgctg tgcttggcac tgcctgggtg acagatgaga 1200

ctgagaactc ccttgacgtg gagtgggaaa acccctcaac tgaggtggac tactacaagc 1260

tgcgatatgg ccccatgaca ggacaggagg tagctgaggt cactgtgccc aagagcagtg 1320

accccaagag ccgatatgac atcactggtc tgcacccggg gactgagtat aagatcacgg 1380

tggtgcccat gagaggagag ctggagggca agccgatcct cctgaatggc aggacagaaa 1440

ttgacagtcc aaccaatgtt gtcactgatc gagtgactga agacacagca actgtctcct 1500

gggacccagt gcaggctgtc atagacaagt atgtagtgcg ctacacttct gctgatgggg 1560

acaccaagga aatggcagtg cacaaggatg agagcagcac tgtcctgacg ggcctgaagc 1620

caggagaggc atacaaggtc tacgtgtggg ctgaaagggg caaccagggg agcaagaaag 1680

ctgacaccaa tgccctcaca gaaattgaca gcccagcaaa cctggtgact gaccgggtga 1740

ctgagaatac cgccaccatc tcctgggacc cggtacaggc caccattgac aagtacgtgg 1800

tgcgctacac ctctgctgac gaccaagaga ccagagaggt tctggtgggg aaggagcaga 1860

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agaaggggga ccgagagagc aagaaggctg acaccaacgc cccgacagat attgacagcc 1980

ccaaaaacct ggtgactgac cgggtgacag agaatatggc cacggtctcc tgggacccgg 2040

tgcaggccgc cattgacaag tacgtggtgc gctacacctc tgctggtgga gagaccaggg 2100

aggttccggt ggggaaggag cagagcagca cagtcctgac aggcctgaga ccgggtatgg 2160

agtacatggt gcacgtgtgg gcccagaagg gggaccagga gagcaagaag gccgacacca 2220

aggcccagac agacattgac agcccccaaa acctggtgac cgaccgggtg acagagaata 2280

tggccactgt ctcctgggac ccggtgcggg ccaccattga caggtatgtg gtgcgctaca 2340

cctctgccaa ggacggagag accagggagg ttccggtggg gaaggagcag agtagcactg 2400

tcctgacggg cctgaggccg ggtgtggagt acacggtgca cgtgtgggcc cagaaggggg 2460

cccaggagag caagaaggct gacaccaagg cccagacaga cattgacagc ccccaaaacc 2520

tggtcactga ctgggtgaca gagaatacag ccactgtctc ctgggacccg gtgcaggcca 2580

ccattgacag gtatgtggtg cactacacgt ctgccaacgg agagaccagg gaggttccag 2640

tggggaagga gcagagcagc actgtcctga cgggcctgag gccgggcatg gagtacacgg 2700

tgcacgtgtg ggcccagaag gggaaccagg agagcaagaa ggctgacacc aaggcccaga 2760

cagaaattga cggccccaaa aacctagtga ctgactgggt gacggagaat atggccactg 2820

tctcctggga cccggttcag gccaccattg acaagtacat ggtgcgctac acctctgctg 2880

acggagagac cagggaggtt ccggtgggga aggagcacag cagcactgtc ctgacgggcc 2940

tgagaccagg catggagtac atggtgcacg tgtgggccca gaagggggcc caggagagca 3000

agaaggctga caccaaggcc cagacagaac tcgaccctcc cagaaacctt cgtccatctg 3060

ctgtaacgca gtctggtggc atattgacct ggacgccccc ctctgctcag atccacggct 3120

acattctgac ttaccagttc ccagatggca cagttaagga gatgcagctg ggacgggaag 3180

accagaggtt tgcgttgcaa ggccttgagc aaggcgccac ctaccctgtc tcccttgttg 3240

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tgtacaccat ctacctgcat ggcgatgcca gccggcccct gcaggtgtac tgtgacatgg 3420

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tcaagcgatg gaggagctat gtggaaggct ttggggaccc catgaaggag ttctggcttg 3540

gacttgacaa gctacacaac ctcaccaccg gcactccagc gcggtatgag gtgagagtgg 3600

atttacagac tgccaatgaa tctgcctatg ctatatatga tttcttccaa gtggcctcca 3660

gcaaggagcg gtataagctg acagttggga aatacagagg cacggcaggg gatgctctta 3720

cttaccacaa tggatggaag tttacaactt ttgacagaga caatgatatc gcactcagca 3780

actgtgccct gacacatcat ggtggctggt ggtataagaa ctgccacttg gccaacccta 3840

atggcagata tggggagacc aagcacagtg agggggtgaa ctgggagcct tggaaaggac 3900

atgaattctc cattccttac gtggagttga aaatccgccc tcatggctac agcagggagc 3960

ctgtcctggg cagaaagaag cggacgctga gaggaaggct gcgaacgttc tgatggcccg 4020

tgtgagcagt cctcgcagga gacaccacca gctgtggcag cttggggcgg ggtgggtagt 4080

ggtcactgcg gtctgggagt gctcagatag cccgcagaac aaatcatgtc accaagcttc 4140

aagccatgga ggttccttcc ctctcacctg catttttgcc cgtctttatg agggtcttga 4200

aaatcaaaat agtagttgca cagtatgtgt aggaaagaca gtactggaac ggcaaggttt 4260

ctcagcttat cttcagcaac atatatactg gattagggca agagaaggaa tcacccagca 4320

cttcaccagt tggaaatctc tggaaattta catctatgta tttaaagttc tgctaatgca 4380

aatcttttct ctggaaagaa gcacagagga ggagttctga tgacccaggg gttagggctg 4440

agacaaccgg acgtttgtca cctcctttcc cattgggttt ttaggaaaac agtgtgaacc 4500

tccccctttt aatttctggt gttatgagga agaataaagg ggataaaagg ggctaagatg 4560

gactcatgtt tagctaagtt ctgacttgta tccagcatgc tggagaccaa agctgccgcc 4620

ttactgctat ttttaagtgc cctcttttca gtcatttgca taattgcgtc catagagctg 4680

catatgttgt gaataaattc tcactcattt caactttgaa taatttgact gtcttgataa 4740

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agtcttactg tttgatcgga cagttagcaa gatcagatcc tttttgctta ttttctatca 4920

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agaaaaaaaa taataaacca cttgattt 5008

<210> 6

<211> 1299

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Met Ser Leu Gln Glu Met Phe Arg Phe Pro Met Gly Leu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Ser Val Leu Leu Val Ala Ser Ala Pro Ala Thr Leu Glu Pro Pro Gly

20 25 30

Cys Ser Asn Lys Glu Gln Gln Val Thr Val Ser His Thr Tyr Lys Ile

35 40 45

Asp Val Pro Lys Ser Ala Leu Val Gln Val Asp Ala Asp Pro Gln Pro

50 55 60

Leu Ser Asp Asp Gly Ala Ser Leu Leu Ala Leu Gly Glu Ala Arg Glu

65 70 75 80

Glu Gln Asn Ile Ile Phe Arg His Asn Ile Arg Leu Gln Thr Pro Gln

85 90 95

Lys Asp Cys Glu Leu Ala Gly Ser Val Gln Asp Leu Leu Ala Arg Val

100 105 110

Lys Lys Leu Glu Glu Glu Met Val Glu Met Lys Glu Gln Cys Ser Ala

115 120 125

Gln Arg Cys Cys Gln Gly Val Thr Asp Leu Ser Arg His Cys Ser Gly

130 135 140

His Gly Thr Phe Ser Leu Glu Thr Cys Ser Cys His Cys Glu Glu Gly

145 150 155 160

Arg Glu Gly Pro Ala Cys Glu Arg Leu Ala Cys Pro Gly Ala Cys Ser

165 170 175

Gly His Gly Arg Cys Val Asp Gly Arg Cys Leu Cys His Glu Pro Tyr

180 185 190

Val Gly Ala Asp Cys Gly Tyr Pro Ala Cys Pro Glu Asn Cys Ser Gly

195 200 205

His Gly Glu Cys Val Arg Gly Val Cys Gln Cys His Glu Asp Phe Met

210 215 220

Ser Glu Asp Cys Ser Glu Lys Arg Cys Pro Gly Asp Cys Ser Gly His

225 230 235 240

Gly Phe Cys Asp Thr Gly Glu Cys Tyr Cys Glu Glu Gly Phe Thr Gly

245 250 255

Leu Asp Cys Ala Gln Val Val Thr Pro Gln Gly Leu Gln Leu Leu Lys

260 265 270

Asn Thr Glu Asp Ser Leu Leu Val Ser Trp Glu Pro Ser Ser Gln Val

275 280 285

Asp His Tyr Leu Leu Ser Tyr Tyr Pro Leu Gly Lys Glu Leu Ser Gly

290 295 300

Lys Gln Ile Gln Val Pro Lys Glu Gln His Ser Tyr Glu Ile Leu Gly

305 310 315 320

Leu Leu Pro Gly Thr Lys Tyr Ile Val Thr Leu Arg Asn Val Lys Asn

325 330 335

Glu Val Ser Ser Ser Pro Gln His Leu Leu Ala Thr Thr Asp Leu Ala

340 345 350

Val Leu Gly Thr Ala Trp Val Thr Asp Glu Thr Glu Asn Ser Leu Asp

355 360 365

Val Glu Trp Glu Asn Pro Ser Thr Glu Val Asp Tyr Tyr Lys Leu Arg

370 375 380

Tyr Gly Pro Met Thr Gly Gln Glu Val Ala Glu Val Thr Val Pro Lys

385 390 395 400

Ser Ser Asp Pro Lys Ser Arg Tyr Asp Ile Thr Gly Leu His Pro Gly

405 410 415

Thr Glu Tyr Lys Ile Thr Val Val Pro Met Arg Gly Glu Leu Glu Gly

420 425 430

Lys Pro Ile Leu Leu Asn Gly Arg Thr Glu Ile Asp Ser Pro Thr Asn

435 440 445

Val Val Thr Asp Arg Val Thr Glu Asp Thr Ala Thr Val Ser Trp Asp

450 455 460

Pro Val Gln Ala Val Ile Asp Lys Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala

465 470 475 480

Asp Gly Asp Thr Lys Glu Met Ala Val His Lys Asp Glu Ser Ser Thr

485 490 495

Val Leu Thr Gly Leu Lys Pro Gly Glu Ala Tyr Lys Val Tyr Val Trp

500 505 510

Ala Glu Arg Gly Asn Gln Gly Ser Lys Lys Ala Asp Thr Asn Ala Leu

515 520 525

Thr Glu Ile Asp Ser Pro Ala Asn Leu Val Thr Asp Arg Val Thr Glu

530 535 540

Asn Thr Ala Thr Ile Ser Trp Asp Pro Val Gln Ala Thr Ile Asp Lys

545 550 555 560

Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala Asp Asp Gln Glu Thr Arg Glu Val

565 570 575

Leu Val Gly Lys Glu Gln Ser Ser Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro

580 585 590

Gly Val Glu Tyr Thr Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Asp Arg Glu

595 600 605

Ser Lys Lys Ala Asp Thr Asn Ala Pro Thr Asp Ile Asp Ser Pro Lys

610 615 620

Asn Leu Val Thr Asp Arg Val Thr Glu Asn Met Ala Thr Val Ser Trp

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Asp Pro Val Gln Ala Ala Ile Asp Lys Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser

645 650 655

Ala Gly Gly Glu Thr Arg Glu Val Pro Val Gly Lys Glu Gln Ser Ser

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Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro Gly Met Glu Tyr Met Val His Val

675 680 685

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Glu Asn Met Ala Thr Val Ser Trp Asp Pro Val Arg Ala Thr Ile Asp

725 730 735

Arg Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala Lys Asp Gly Glu Thr Arg Glu

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Val Pro Val Gly Lys Glu Gln Ser Ser Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg

755 760 765

Pro Gly Val Glu Tyr Thr Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Ala Gln

770 775 780

Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys Ala Gln Thr Asp Ile Asp Ser Pro

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Gln Asn Leu Val Thr Asp Trp Val Thr Glu Asn Thr Ala Thr Val Ser

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820 825 830

Ser Ala Asn Gly Glu Thr Arg Glu Val Pro Val Gly Lys Glu Gln Ser

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Ser Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro Gly Met Glu Tyr Thr Val His

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Val Trp Ala Gln Lys Gly Asn Gln Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys

865 870 875 880

Ala Gln Thr Glu Ile Asp Gly Pro Lys Asn Leu Val Thr Asp Trp Val

885 890 895

Thr Glu Asn Met Ala Thr Val Ser Trp Asp Pro Val Gln Ala Thr Ile

900 905 910

Asp Lys Tyr Met Val Arg Tyr Thr Ser Ala Asp Gly Glu Thr Arg Glu

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Pro Gly Met Glu Tyr Met Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Ala Gln

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Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys Ala Gln Thr Glu Leu Asp Pro Pro

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Arg Asn Leu Arg Pro Ser Ala Val Thr Gln Ser Gly Gly Ile Leu Thr

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Val Ser Leu Val Ala Phe Lys Gly Gly Arg Arg Ser Arg Asn Val

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Ser Thr Thr Leu Ser Thr Val Gly Ala Arg Phe Pro His Pro Ser

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Tyr Thr Ile Tyr Leu His Gly Asp Ala Ser Arg Pro Leu Gln Val

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Tyr Cys Asp Met Glu Thr Asp Gly Gly Gly Trp Ile Val Phe Gln

1100 1105 1110

Arg Arg Asn Thr Gly Gln Leu Asp Phe Phe Lys Arg Trp Arg Ser

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Tyr Val Glu Gly Phe Gly Asp Pro Met Lys Glu Phe Trp Leu Gly

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Leu Asp Lys Leu His Asn Leu Thr Thr Gly Thr Pro Ala Arg Tyr

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Glu Val Arg Val Asp Leu Gln Thr Ala Asn Glu Ser Ala Tyr Ala

1160 1165 1170

Ile Tyr Asp Phe Phe Gln Val Ala Ser Ser Lys Glu Arg Tyr Lys

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Leu Thr Val Gly Lys Tyr Arg Gly Thr Ala Gly Asp Ala Leu Thr

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Ile Ala Leu Ser Asn Cys Ala Leu Thr His His Gly Gly Trp Trp

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Tyr Lys Asn Cys His Leu Ala Asn Pro Asn Gly Arg Tyr Gly Glu

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Thr Lys His Ser Glu Gly Val Asn Trp Glu Pro Trp Lys Gly His

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Tyr Ser Arg Glu Pro Val Leu Gly Arg Lys Lys Arg Thr Leu Arg

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<213> 智人

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ttgccaactg gccaagacct gccctgtgca gctgtgggtt gattccacac ccccgcccgg 660

cacccgcgtc cgcgccatgg ccatctacaa gcagtcacag cacatgacgg aggttgtgag 720

gcgctgcccc caccatgagc gctgctcaga tagcgatggt ctggcccctc ctcagcatct 780

tatccgagtg gaaggaaatt tgcgtgtgga gtatttggat gacagaaaca cttttcgaca 840

tagtgtggtg gtgccctatg agccgcctga ggttggctct gactgtacca ccatccacta 900

caactacatg tgtaacagtt cctgcatggg cggcatgaac cggaggccca tcctcaccat 960

catcacactg gaagactcca gtggtaatct actgggacgg aacagctttg aggtgcgtgt 1020

ttgtgcctgt cctgggagag accggcgcac agaggaagag aatctccgca agaaagggga 1080

gcctcaccac gagctgcccc cagggagcac taagcgagca ctgcccaaca acaccagctc 1140

ctctccccag ccaaagaaga aaccactgga tggagaatat ttcacccttc agatccgtgg 1200

gcgtgagcgc ttcgagatgt tccgagagct gaatgaggcc ttggaactca aggatgccca 1260

ggctgggaag gagccagggg ggagcagggc tcactccagc cacctgaagt ccaaaaaggg 1320

tcagtctacc tcccgccata aaaaactcat gttcaagaca gaagggcctg actcagactg 1380

acattctcca cttcttgttc cccactgaca gcctcccacc cccatctctc cctcccctgc 1440

cattttgggt tttgggtctt tgaacccttg cttgcaatag gtgtgcgtca gaagcaccca 1500

ggacttccat ttgctttgtc ccggggctcc actgaacaag ttggcctgca ctggtgtttt 1560

gttgtgggga ggaggatggg gagtaggaca taccagctta gattttaagg tttttactgt 1620

gagggatgtt tgggagatgt aagaaatgtt cttgcagtta agggttagtt tacaatcagc 1680

cacattctag gtaggggccc acttcaccgt actaaccagg gaagctgtcc ctcactgttg 1740

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gagtgcattg tgagggttaa tgaaataatg tacatctggc cttgaaacca ccttttatta 1860

catggggtct agaacttgac ccccttgagg gtgcttgttc cctctccctg ttggtcggtg 1920

ggttggtagt ttctacagtt gggcagctgg ttaggtagag ggagttgtca agtctctgct 1980

ggcccagcca aaccctgtct gacaacctct tggtgaacct tagtacctaa aaggaaatct 2040

caccccatcc cacaccctgg aggatttcat ctcttgtata tgatgatctg gatccaccaa 2100

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Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro

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Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser

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Val Pro Ser Gln Lys Thr Tyr Gln Gly Ser Tyr Gly Phe Arg Leu Gly

100 105 110

Phe Leu His Ser Gly Thr Ala Lys Ser Val Thr Cys Thr Tyr Ser Pro

115 120 125

Ala Leu Asn Lys Met Phe Cys Gln Leu Ala Lys Thr Cys Pro Val Gln

130 135 140

Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met

145 150 155 160

Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys

165 170 175

Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu Ala Pro Pro Gln

180 185 190

His Leu Ile Arg Val Glu Gly Asn Leu Arg Val Glu Tyr Leu Asp Asp

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Arg Asn Thr Phe Arg His Ser Val Val Val Pro Tyr Glu Pro Pro Glu

210 215 220

Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser

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Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr

245 250 255

Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val

260 265 270

Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn

275 280 285

Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr

290 295 300

Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys

305 310 315 320

Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu

325 330 335

Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp

340 345 350

Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His

355 360 365

Leu Lys Ser Lys Lys Gly Gln Ser Thr Ser Arg His Lys Lys Leu Met

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agatctcctc gacctgagtg aaccagtctc tcaaacccaa accaaagcca agaagtcaga 840

gccctcatca aaaacctcat ccctcaagaa aaaggccgat ggatctgacc tcatcagcac 900

ggatgctgag cagagaggcc agcctctcag agtcccggag acttcatcct tagatctaga 960

cattcaaaca caactggaaa aatgggacga tgttaagttt catggagatc gaaataccaa 1020

gggacatcca atggcagaga gaaaatcatc ctcatctaga actggatcaa aagagctctt 1080

atggtcctca gaacacagat ctcaaccaga actgagtggt ggaaaaagcg ccctcaactc 1140

tgagtcggct tcagaattgg aattagtggc tccgactcag gctcgactga ccaaagaaca 1200

tcgctgggga agcgcattac tttctagaaa ccactcctta gaagaagagt ttgaaagggc 1260

aaaagcagca gtggagtcag atacagagtt ttgggataag atgcaagcag aatgggaaga 1320

aatggctcgg aggaactgga tatctgagaa ccaagaagcc cagaaccaag taaccatctc 1380

ggctagtgag aagggatatt actttcacac tgaaaacccc ttcaaggact ggcctggagc 1440

atttgaagaa ggcttaaaaa ggctgaagga aggggatctg ccagtcacca tcctgttcat 1500

ggaagcagca attcttcagg accctggaga tgcagaggca tggcagttcc tcgggataac 1560

ccaggcggag aatgaaaatg aacaagcagc tattgtcgcc ctccagaggt gcttagaatt 1620

acagcccaac aacttaaaag ctttgatggc cttggctgtg agttatacta acactggcca 1680

tcagcaggat gcctgtgacg ctctgaagaa ttggattaag caaaatccaa agtacaaata 1740

ccttgtgaaa agcaagaagg gatctccagg cctcacccgg cggatgtcta agtccccagt 1800

tgatagctct gttctggaag gggtgaagga attatatctg gaagctgccc accaaaatgg 1860

agatatgatc gacccagacc tgcagacagg tctaggggtt ctgttccacc tgagtggaga 1920

atttaataga gcaatagatg catttaacgc tgccttaact gttcggccag aggactattc 1980

actatggaac cgcctcgggg cgaccttggc gaacggagac cgcagcgagg aagccgtgga 2040

ggcctatacg cgagcactgg agattcagcc aggattcatc cggtccagat acaacctagg 2100

aataagctgc atcaacctgg gcgcctacag agaagcggtc agcaattttc tcactgccct 2160

cagtttgcaa agaaagagca ggaatcagca gcaagttcct catcctgcaa tctctgggaa 2220

tatctgggct gccctcagaa ttgcgctctc tctgatggac caaccagaac tcttccaggc 2280

ggctaatctt ggtgacctgg atgtcctctt aagagctttc aacttggatc cttgaagaaa 2340

gaataatacc agtactaata atccctgatc tgtgtgattg tactgaaaaa tcaaaaacta 2400

ttttattatg aatttcaaaa ggataaatca aatattcaaa aggccatggt catatagccc 2460

aaggaaatta attcctgtgg acaatgccca gtctctgttc agatccaaaa gcacaaaatg 2520

ttgtatatag agtcaaagtc aggctcaaaa gaagaattaa gagactcaag acaaaccaag 2580

ataaagtaac tgtgtgttga atactctttc cacaagttgc aagcatattg caacacatgt 2640

tctttgggtt ttttgtctcc ccttgcagct gatgacacat ctgaggaact tgttcatggg 2700

aaacatggaa aaagcactgc ctcagattgg gaaattctga ctgtttctga actgtcttct 2760

tttgcaagac tgaacatagt ttgggccatt ggtgcatgca catatattaa cttgtgacta 2820

aagacagaca ttgcttaaac ctgttccaat tttaactttt actgtagccc tttgattcca 2880

gagagggagc tttgctggca aaagcagttt ttgcactaga aatttttgct gttcccaatc 2940

taaacttttc tggtattgta tatatgcact ttaatatctt atttatgcct tgctggagtt 3000

ttgttttgtt gctccaattt ttaacttggg ggtgaaagat ttaagaactc agcctcacta 3060

gatcaacgga ccaaataaac aattcctgaa gacagttttt catagtgtag gattttgaag 3120

aagtgttttt cttaaagcag atacgatgac ataaggcgta aatatggcaa acagatcttt 3180

tcattcacgt gctttctggg tctgtatgaa cataagtaag acacaaggta ctgtctcttc 3240

atgcattctc tgcaggaaga aagtttgatg gtatcgtgat ttctattgag ttcaaattaa 3300

cttgcttaag tgtcatactt tactggcttt gccctgcaca ccaatattcc ttttaaacca 3360

taaatatttt aaataatatt tcttaagagt gataaataac attttttcct aaaaattatg 3420

ttttcttagt ttcataataa tctgcactgt tcatcccctt gcattctaag tgatagaaga 3480

gcaacacttt caaaccaaat ctcactgaat gccagtgatt tcatatgaaa gatgcatgcc 3540

tctttggctc tttgaacatt tagcaagtat tgggaatttt ctattagcag tggtgtttta 3600

attggttgaa ttccacttag ttctccacag tgttttgtat gtgtttgggg cttggtgatt 3660

attttgaaag atacattttt taaagaatta ggaacatttt ttgcaaaatg ctaatcagaa 3720

tataattttc ccaatgtcag gtatagaagt tatcccattc ttctttacct ggtctccttc 3780

cttcgtctag aaccttcccc acagtagcta atcctaacaa ctttttattt atgttctttg 3840

ataataatag ctcatcccgc tcatgattat agctacccac aaaaaataaa acaacaacaa 3900

caaaaaagac tccacagaat tgggatcaaa acagtctaat tggctgggga ataagcttct 3960

actgaggagt aaatgtgcac acgtgcttat caattgaatg cgaggtacag gaataaaatc 4020

ctctcctctg ttacatctga agtccttggg ttgtgagagg gcctcaagtt aacagaaacc 4080

acaagtcctt gaggcttaca tatgttataa cctattctag tttataaaga caaaaagctg 4140

aggccactgt gaggagtgcc aggttttgat agtcattgtc aaagttgact tgggccaggt 4200

ggtagctcca gctggtcagc agaaggcaga ggcattcagg cactcatcat gggtagcagc 4260

gaccacccag tctcagaccg tgcttctcta cagtctcagc agcaaagtaa agctcaacaa 4320

tgctttcaag aatggtattg taagaattgt agaattcgag aaacccagtc tggtaaggac 4380

tcttggggcc agcctccaag ccatggcagg gcctgcttga atatgcctga ttaagcatcc 4440

tttccttccc tgctccttcc tcctgccatc tctgtacctt gaccagaaag tcggcatgaa 4500

tagttcatgg acaaaggatt gaatagcctc tgaacaaagg attcaaagca aactttgtaa 4560

gtgttctgtg atgccattct atactttgag cagcagctga atctgcagcc tggatttaaa 4620

gcctgaaact agtataaatg tcaaataatt aatttgttgc taaatggtgg caaattttgt 4680

ggcccaagtt ttattttgct attggaacac aaactccaag gagctgtttt agggaagact 4740

aaacaatctt ccattcttac cattatttgg caatttgcag agcatttagt agtactttct 4800

ctagtgtatg tagtatctgt cagatctaag atttttatag gctgtcaaga agtccagaat 4860

tacggcccaa gaggaaaaga gttgcatttt tcaataatat tttttataaa attaagttaa 4920

aaccattatt aaaacatgag tgacaggcca ggtgcggtgg ctcacgcctg taatcctagc 4980

actttgggag gcagaggcgg gcagaccacg aggtcaggag ttcgagacca gcctgaccaa 5040

catggtgaaa ccccgtcttt attaagaata caaaaattag ccgggtgtag tggtatgcac 5100

ctgtaatacc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaacca gggaggcgga 5160

ggttgcagtg agccgagatt gcaccgctgc actccagtct gggtgacaga gcgagactcc 5220

gtctcaaaaa aaacaaaaaa gtgacagttt ataggaatag agcaccacca agaaatcagt 5280

agcaagactt tagaacagtc tttttgtata aatcatatac agtaaatgtt ttgtttctta 5340

gaagtgcatc tactttattt tttggcagaa caatttttgg catcttatct tcatggcatg 5400

aaattgtcat ttaaattact ctttccgttt gaaaggggag ggtatcctta tttcccttct 5460

gaggtactct gagaaggctt tgagtttcct ttttcatgta ttaatgtata acagcctaac 5520

agctcctaga agagggtatt cttactagaa tggctacata cgggtgactt cagttacata 5580

caggtgactt ccagggactg acttcgcctg tagattggat gaaaataaag agaaagccag 5640

tgattattgc tgagtttcaa aatataacca tttctagtag gctacttcta catgctgttg 5700

taccttcctg gtgaggagga gacagaggga taggggagag gaggaggaat aaaaatccct 5760

ctcactgggc caatcatact gattcattcc ctttacttcc tccaaaactc actccccatg 5820

actcctgaaa aatgggtaga tctcgtccac caggaaattt taatagaata ctatgcaccg 5880

tgctttctca gtcaatctgg attcctacta gaacagaaaa gtaaggaaac ataactgggt 5940

aggaatgtcc acttacgttt cacaaactca cttttagagt ttcatgccac tttcctcatt 6000

cttctcttta agatactatt atattgaacg tgggacccat gtctaaatac ttgtatagat 6060

aaatatttct tgtatattct tcccatacaa gcaagacttg aatacagttg tagctagtcc 6120

cacttttata ataaaagctt ccaaactctt tatcataaac tttgtctgtg agcttgggaa 6180

tacagagaaa gcaagttgat cattctgaga cccttcctca tttgccctga atcagttccc 6240

caagattgga ctgtacttta agctagttgt tgtagcagtg gtggttgttg ttttatatct 6300

tgagatactt ctagaacatt ctagaaacag ggtattctaa aggcttactt tatatgccat 6360

cctttttgaa ccctcttatt ttagaaatta ttacacgtgc acacttatga tttcaacctt 6420

gtaaaataat ttcaaattca tttcgtatcc acattttact gcagtttccc tatcatcatc 6480

tcaatagtta tagaactggt tgaaattaaa ctgttttgaa ctaagaagta gatatatata 6540

tatatatata tatatatttt tttttttttt tttaaagagt gttcatagat aaactctggc 6600

ataaagtttg taaaaaagca attttttaaa agcaaaacgt ataacctcag gtacaaaaat 6660

attgcatgca ttagtattgc aaatttgcct actcaaatat taaccaaagc atgcaagata 6720

acttgactga atttaaattt acacagtgca tgattaagtc tcataggtta gcctgttgtt 6780

ccttgcctct atacaaggga gcatttttat gaactttgtg ttacagtttt tctatttgct 6840

tttcttatcc tatccttgag attgttttca tgctatcaca ctgaacttta cagatattca 6900

cacatctggt ttctacagtg ttaccagtgc caaactaatc ctctgaagaa tctgggacat 6960

ctaaacactt tttcaaaaac cagttgaggc acaacagatc ccaaacttaa acaaatccaa 7020

gtgtctgaat gctactaaac taaatcatgt tgactgcctc agcacataaa ggtttcgact 7080

ttaaattctt aataatgcat ttcaaaattt ttctaaaagt ttgggaataa attagaaaaa 7140

ctgatattct aaataaggcg aggaggttgg ggtaatgtca ggcacatcaa aatcatcaca 7200

caacgaagta gatatggggc cttaattttc ataaatgtca catagcaagt gtgtggggta 7260

tcacaacatt gttctgatac agccctgttt gtatggtagt tgagctgctt gggctaaatg 7320

tcccttgaga aactggactt gatcaacagg tctaaaaaca ctgatattta gggagtgatg 7380

aggtgatttc acggtcactc agaaccaact ctgaaatctt ctcactgcct tttcccataa 7440

cccctatttt atgaggagac cagaaaggga gagagcaaag ctcagtgaga ccatgtggtc 7500

ttacattagt aacagctttg ttactcactc catatacccc ggtaccctca cacacatacc 7560

atgaactcaa agacagaatt ctacacataa cacacatagc aaagacgatt gtggggaggc 7620

attaaacagt taagaggaaa aaaaaaaaca cagaaaatta aactgtgagg tttaacaacc 7680

tctcatgtgg tattttgcct tgaacgaagt ttccactacc tgcagcttct gcagaaatac 7740

caaaataaca cagtctagag acaagtgtcc caatgtcaga actgttttct caggaccttc 7800

tctataagag aaaactaact tgcaatgctg cagaatgtca gagcaaaacc ctgatgagct 7860

ccgtgggata cttaatagaa gcctgcactc aaaataatat taagatggaa acaacaacaa 7920

caattaggca gttctttgct caactataaa atgtgtatca ttcattgggg gagggggagg 7980

ggtcgtgttc tttggatttc ttggaaaggg aaatggtata acacaaaaag actaagaggt 8040

atacacactc agctcggtaa ttcgagcatt tggcattttc actgagatat atagcatttc 8100

tgcatggata ccatacaaga attctgccat gtgagaaatg tgttcatgat ggactacatt 8160

accagtagtt aagggaaata cagcaaactt aagtttttac caacttcctt tcatgttccc 8220

tatatatcat ctaacccaaa ctttcaattt acattgccca aatttgttta cattggttga 8280

aaaaaaactg attaatttat taaacttttt acaaactgta acaaacattt aactatttag 8340

aaaagacatt tctacatatt ttatatatct atgaatattg catctctaat ctaatctaaa 8400

aatgttgttt tgagacaatt cttctgtgat gcttcctcct catgctcata aatgtttaaa 8460

gtcttgggat ttcattttca ggctgaaata gataacaaga aaaaaattta agtttaaatg 8520

tttacattgc gttactaaat taataccaat tcaaattaag tgacctatag taaattaatg 8580

gcaatggggg ggaggggatt ttaaagtgat tggcatatta tgtgatactg tatcagtgat 8640

ttagtgaaat aatatgtatc atagcacaac tctgttgggt attaaggctt catcttagta 8700

tttccctgcg ttgctctttg aaataaaatt actaccataa aaataacctc ttatcatatt 8760

gatgtgttta atttactcag ttggcttcta atttgcgtaa caagattaag gtagtatttt 8820

tgtactatta ttggaagcat gccttccctt tttcacatta ttaaattgta tttatatttg 8880

tgcaatttta aactatgttt tcaaataaac tttgtctgcg gcttcgaggt cttttcagga 8940

atctttcaaa atgggatttg gggatcagaa ctccttctga tcaaatggaa tccaatttgt 9000

actactggct aaaggtcctt ttattaaata ttgaatatca ctacatatga ttttgcatga 9060

gctatctgga aatcaggaat gcatttttgg atataaaaca aaactttaaa aatcttcctc 9120

ctttgttaat tttttaagac taaaatatta tttaacctga aattgaattt tgtgattctt 9180

tttagaataa aaatattaaa ataaa 9205

<210> 10

<211> 626

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

Met Tyr Gln Gly His Met Gln Lys Ser Lys Glu Gln Gly Tyr Gly Lys

1 5 10 15

Leu Ser Ser Asp Glu Asp Leu Glu Ile Ile Val Asp Gln Lys Gln Gly

20 25 30

Lys Gly Ser Arg Ala Ala Asp Lys Ala Val Ala Met Val Met Lys Glu

35 40 45

Ile Pro Arg Glu Glu Ser Ala Glu Glu Lys Pro Leu Leu Thr Met Thr

50 55 60

Ser Gln Leu Val Asn Glu Gln Gln Glu Ser Arg Pro Leu Leu Ser Pro

65 70 75 80

Ser Ile Asp Asp Phe Leu Cys Glu Thr Lys Ser Glu Ala Ile Ala Arg

85 90 95

Pro Val Thr Ser Asn Thr Ala Val Leu Thr Thr Gly Leu Asp Leu Leu

100 105 110

Asp Leu Ser Glu Pro Val Ser Gln Thr Gln Thr Lys Ala Lys Lys Ser

115 120 125

Glu Pro Ser Ser Lys Thr Ser Ser Leu Lys Lys Lys Ala Asp Gly Ser

130 135 140

Asp Leu Ile Ser Thr Asp Ala Glu Gln Arg Gly Gln Pro Leu Arg Val

145 150 155 160

Pro Glu Thr Ser Ser Leu Asp Leu Asp Ile Gln Thr Gln Leu Glu Lys

165 170 175

Trp Asp Asp Val Lys Phe His Gly Asp Arg Asn Thr Lys Gly His Pro

180 185 190

Met Ala Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Arg Thr Gly Ser Lys Glu Leu

195 200 205

Leu Trp Ser Ser Glu His Arg Ser Gln Pro Glu Leu Ser Gly Gly Lys

210 215 220

Ser Ala Leu Asn Ser Glu Ser Ala Ser Glu Leu Glu Leu Val Ala Pro

225 230 235 240

Thr Gln Ala Arg Leu Thr Lys Glu His Arg Trp Gly Ser Ala Leu Leu

245 250 255

Ser Arg Asn His Ser Leu Glu Glu Glu Phe Glu Arg Ala Lys Ala Ala

260 265 270

Val Glu Ser Asp Thr Glu Phe Trp Asp Lys Met Gln Ala Glu Trp Glu

275 280 285

Glu Met Ala Arg Arg Asn Trp Ile Ser Glu Asn Gln Glu Ala Gln Asn

290 295 300

Gln Val Thr Ile Ser Ala Ser Glu Lys Gly Tyr Tyr Phe His Thr Glu

305 310 315 320

Asn Pro Phe Lys Asp Trp Pro Gly Ala Phe Glu Glu Gly Leu Lys Arg

325 330 335

Leu Lys Glu Gly Asp Leu Pro Val Thr Ile Leu Phe Met Glu Ala Ala

340 345 350

Ile Leu Gln Asp Pro Gly Asp Ala Glu Ala Trp Gln Phe Leu Gly Ile

355 360 365

Thr Gln Ala Glu Asn Glu Asn Glu Gln Ala Ala Ile Val Ala Leu Gln

370 375 380

Arg Cys Leu Glu Leu Gln Pro Asn Asn Leu Lys Ala Leu Met Ala Leu

385 390 395 400

Ala Val Ser Tyr Thr Asn Thr Gly His Gln Gln Asp Ala Cys Asp Ala

405 410 415

Leu Lys Asn Trp Ile Lys Gln Asn Pro Lys Tyr Lys Tyr Leu Val Lys

420 425 430

Ser Lys Lys Gly Ser Pro Gly Leu Thr Arg Arg Met Ser Lys Ser Pro

435 440 445

Val Asp Ser Ser Val Leu Glu Gly Val Lys Glu Leu Tyr Leu Glu Ala

450 455 460

Ala His Gln Asn Gly Asp Met Ile Asp Pro Asp Leu Gln Thr Gly Leu

465 470 475 480

Gly Val Leu Phe His Leu Ser Gly Glu Phe Asn Arg Ala Ile Asp Ala

485 490 495

Phe Asn Ala Ala Leu Thr Val Arg Pro Glu Asp Tyr Ser Leu Trp Asn

500 505 510

Arg Leu Gly Ala Thr Leu Ala Asn Gly Asp Arg Ser Glu Glu Ala Val

515 520 525

Glu Ala Tyr Thr Arg Ala Leu Glu Ile Gln Pro Gly Phe Ile Arg Ser

530 535 540

Arg Tyr Asn Leu Gly Ile Ser Cys Ile Asn Leu Gly Ala Tyr Arg Glu

545 550 555 560

Ala Val Ser Asn Phe Leu Thr Ala Leu Ser Leu Gln Arg Lys Ser Arg

565 570 575

Asn Gln Gln Gln Val Pro His Pro Ala Ile Ser Gly Asn Ile Trp Ala

580 585 590

Ala Leu Arg Ile Ala Leu Ser Leu Met Asp Gln Pro Glu Leu Phe Gln

595 600 605

Ala Ala Asn Leu Gly Asp Leu Asp Val Leu Leu Arg Ala Phe Asn Leu

610 615 620

Asp Pro

625