背景

可以使用有益細(xì)菌來抑制致病性細(xì)菌的生長。細(xì)菌和其它微生物在環(huán)境中無處不在。致病性細(xì)菌的發(fā)現(xiàn)和疾病的病菌理論對于健康和疾病狀況具有極大的影響。細(xì)菌是所有生物體的環(huán)境內(nèi)的一個(gè)正常部分。在腸道內(nèi)，這些細(xì)菌在正常條件下是不會致病的，并且實(shí)際上它們通過使正常的腸內(nèi)容物較不適于致病生物體存活來促進(jìn)健康。由多種途徑實(shí)現(xiàn)疾病預(yù)防：消耗營養(yǎng)物，留給病原體較少的營養(yǎng)物；產(chǎn)生不適于病原體存活的條件，如pH和氧張力；產(chǎn)生對病原體有毒性的化合物；病原體被這些微生物作為食物消耗掉；給病原體留有更小的物理空間；以及占據(jù)特異性結(jié)合位點(diǎn)，給病原體留下更少的可用結(jié)合位點(diǎn)。這些有益細(xì)菌的存在被視為可有效預(yù)防疾病狀況。

在本領(lǐng)域中需要可以抑制非自養(yǎng)細(xì)菌，例如致病性細(xì)菌的生長的改良的有益細(xì)菌。

概述

本公開尤其提供了一種評價(jià)制劑例如美容產(chǎn)品或治療產(chǎn)品的氨氧化細(xì)菌的存在例如水平的方法，其包括測量所述產(chǎn)品中氨氧化細(xì)菌的量或濃度以提供一值。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將所述制劑分類為需要添加氨氧化細(xì)菌或不需要添加氨氧化細(xì)菌。所述方法還可包括將所述值與對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍的取值范圍做比較。所述方法還可包括確定所述值是否是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍內(nèi)的值。

在一些實(shí)施方案中，如果所述值是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍內(nèi)，則可將所述產(chǎn)品分類為合格。如果所述值是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍外，則可將所述產(chǎn)品分類為不合格。

在一些實(shí)施方案中，如果所述值是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍外，則添加氨氧化細(xì)菌、氨、銨鹽和尿素中的至少一種。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括評價(jià)所述產(chǎn)品的污染性生物體。所述方法還可包括評價(jià)所述產(chǎn)品的致病生物體。

在一些實(shí)施方案中，致病生物體選自由銅綠假單胞菌(Psuedomonas aeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii)、丙酸桿菌(Propionibacteria)和寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas)及其組合組成的組。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括從所述產(chǎn)品中選擇樣品并且對所述樣品進(jìn)行測試。

在一些實(shí)施方案中，對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的所述取值范圍可介于約50毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌之間。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑用作皮膚病癥的治療或預(yù)防，與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防，體臭的治療或預(yù)防，向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療，或抑制微生物生長的治療。氨氧化細(xì)菌可選自由亞硝化單胞菌屬(Nitrosomonas)、亞硝化球菌屬(Nitrosococcus)、亞硝化螺菌屬(Nitrosospira)、亞硝化囊菌屬(Nitrosocystis)、亞硝化葉菌屬(Nitrosolobus)、亞硝化弧菌屬(Nitrosovibrio)及其組合組成的組。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括評價(jià)來自第一批次，例如供商業(yè)發(fā)布的第一批次的制劑。所述方法還可包括評價(jià)來自第二批次，例如供商業(yè)發(fā)布的第二批次的制劑。所述方法還可包括評價(jià)來自多個(gè)批次的制劑以確定所述多個(gè)中的每個(gè)批次是否滿足氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍。所述方法還可包括發(fā)布所述多個(gè)批次。所述多個(gè)批次可同時(shí)制備。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可用于治療以下的至少一種：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象(Raynaud’s phenomenon)、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可用于治療以下的至少一種：糖尿病足潰瘍中的感染、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻和皮膚感染。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可包含下述產(chǎn)品中的至少一種，作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑(hair lighteners with color)、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，可通過如本文所公開的方法制備或評價(jià)組合物。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物還包含賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑和美容上可接受的賦形劑。所述賦形劑，例如所述藥學(xué)上可接受的賦形劑和所述美容上可接受的賦形劑中的一種，可適于局部、鼻部、肺部和胃腸道施用中的一種。所述賦形劑，例如所述藥學(xué)上可接受的賦形劑和所述美容上可接受的賦形劑中的一種，可包含表面活性劑、抗粘附劑、粘合劑、涂層劑、崩解劑、填充劑、調(diào)味劑、著色劑、潤滑劑、助流劑、吸附劑、防腐劑或甜味劑。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物可大體上不含其它生物體。所述組合物可置于粉末、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶中。所述組合物可作為粉末、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶提供。所述組合物還可包含保溫劑、除臭劑、香味劑、著色劑、驅(qū)蟲劑、清潔劑或紫外線阻隔劑。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含選自由亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬、亞硝化弧菌屬及其組合組成的組的氨氧化細(xì)菌。所述組合物可包含氨氧化細(xì)菌制劑，該制劑包含介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L的氨氧化細(xì)菌。所述組合物可包含氨氧化細(xì)菌制劑，該制劑包含介于約50毫克(mg)至約1000mg的氨氧化細(xì)菌。所述組合物可包含質(zhì)量比在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑。所述組合物還可包含選自由乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、雙歧桿菌屬(Bifidobacter)及其組合組成的組的生物體。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物可用作皮膚病癥的治療或預(yù)防，與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防，體臭的治療或預(yù)防，向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療，或抑制微生物生長的治療。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物可用于治療以下的至少一種：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物可用于治療以下的至少一種：下肢靜脈性潰瘍、糖尿病足潰瘍中的感染、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、大皰性表皮松解癥和皮膚感染。

在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含下述產(chǎn)品中的至少一種或可作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，提供了一種評價(jià)受試者以便施加氨氧化細(xì)菌的方法。所述方法可包括從所述受試者的表面獲得樣品。所述方法可包括測試所述樣品以確定組分是否存在。所述組分可以是氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子、尿素、其它微生物例如病原微生物、亞硝酸鹽或一氧化氮中的一種或多種。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括確定所述受試者是否符合施加氨氧化細(xì)菌的要求。所述方法還可包括測定存在的組分的水平。所述組分可包含氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子、尿素、其它微生物例如病原微生物、亞硝酸鹽或一氧化氮中的一種。所述方法還可包括測定存在的組分的量或濃度。所述方法還可包括將所述組分的量或濃度與對應(yīng)于量或濃度的預(yù)定范圍的取值范圍做比較。所述方法還可包括確定所述量或濃度是否在對應(yīng)于所述預(yù)定范圍的取值范圍內(nèi)。

在一些實(shí)施方案中，如果所述量或濃度是在對應(yīng)于所述預(yù)定范圍的取值范圍內(nèi)，則可將所述產(chǎn)品分類為合格。如果所述量或濃度是在對應(yīng)于所述預(yù)定范圍的取值范圍外，則可將所述產(chǎn)品分類為不合格。如果所述量或濃度是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的所述預(yù)定范圍的取值范圍外，則所述方法可包括向受試者施加氨氧化細(xì)菌、氨、銨鹽和尿素中的至少一種。

在一些實(shí)施方案中，施加的氨氧化細(xì)菌的濃度可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。施加的氨氧化細(xì)菌的量介于約50毫克(mg)至約1000mg的氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，可施加氨氧化細(xì)菌作為皮膚病癥的治療或預(yù)防，與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防，體臭的治療或預(yù)防，向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療，或抑制微生物生長的治療。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌選自由亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬、亞硝化孤菌屬及其組合組成的組。

在一些實(shí)施方案中，可施加氨氧化細(xì)菌用于治療以下的至少一種：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

在一些實(shí)施方案中，施加氨氧化細(xì)菌用于治療以下的至少一種：糖尿病足潰瘍、下肢靜脈性潰瘍中的感染、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、大皰性表皮松解癥和皮膚感染。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或者可置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，提供了一種評價(jià)受試者以便施加氨氧化細(xì)菌的方法。所述方法可包括評估所述受試者的皮膚狀況。所述方法可包括響應(yīng)于所述評估，進(jìn)行下述至少一項(xiàng)：將受試者分類為需要氨氧化細(xì)菌，并且施用氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，所述方法可包括確定所述受試者是否符合施加氨氧化細(xì)菌的要求。所述受試者進(jìn)行評估步驟。除所述受試者以外的個(gè)體進(jìn)行評估步驟。

在一些實(shí)施方案中，可施用氨氧化細(xì)菌作為皮膚病癥的治療或預(yù)防，與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防，體臭的治療或預(yù)防，向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療，或抑制微生物生長的治療。在一些實(shí)施方案中，所述皮膚病癥或皮膚病狀可選自由以下組成的組：皮炎、全身性瘙癢、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍和過敏。

在一些實(shí)施方案中，施用的氨氧化細(xì)菌的濃度可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。施用的氨氧化細(xì)菌的量可介于約50毫克(mg)至約1000mg的氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括施用氨、銨鹽和尿素中的至少一種。氨氧化細(xì)菌可選自由亞硝化單胞菌屬(Nitrosomonas)、亞硝化球菌屬(Nitrosococcus)、亞硝化螺菌屬(Nitrosospira)、亞硝化囊菌屬(Nitrosocystis)、亞硝化葉菌屬(Nitrosolobus)、亞硝化弧菌屬(Nitrosovibrio)及其組合組成的組。

在一些實(shí)施方案中，提供了一種制備包含氨氧化細(xì)菌的產(chǎn)品的方法。所述方法可包括測量制劑中氨氧化細(xì)菌的量或濃度以提供一值。所述方法可包括，響應(yīng)于所述值，將所述制劑分類為需要氨氧化細(xì)菌或?qū)⑺鲋苿┓诸悶椴恍枰毖趸?xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括基于所述值向所述制劑中添加一定量或濃度的氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種以提供所述產(chǎn)品。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括響應(yīng)于所述值，使所述產(chǎn)品進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布所述產(chǎn)品的步驟，不添加氨氧化細(xì)菌。所述方法還可包括將所述產(chǎn)品包裝到包裝中。所述方法還可包括將所述包裝中的產(chǎn)品投放到商業(yè)中。所述方法還可包括將所述產(chǎn)品包裝在無菌隔室中。所述包裝可包含防腐劑。所述包裝可大體上不含防腐劑。所述包裝還可包含螯合劑。在某些方面，所述包裝可大體上不含螯合劑。

在一些實(shí)施方案中，提供了一種強(qiáng)化具有氨氧化細(xì)菌的天然產(chǎn)品的方法。所述方法可包括測量天然產(chǎn)品中氨氧化細(xì)菌的量或濃度以提供一值。所述方法還可包括，響應(yīng)于所述值，將所述天然產(chǎn)品分類為需要氨氧化細(xì)菌或?qū)⑺鎏烊划a(chǎn)品分類為不需要氨氧化細(xì)菌。所述方法還可包括基于所述值向所述天然產(chǎn)品中添加一定量或濃度的氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種以提供強(qiáng)化的天然產(chǎn)品。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括，響應(yīng)于所述值，使所述天然產(chǎn)品進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布所述天然產(chǎn)品的步驟，不添加氨氧化細(xì)菌。所述方法還可包括使所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品的步驟。所述方法還可包括將所述產(chǎn)品，例如所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品，包裝到包裝中。所述方法還可包括將所述包裝中的所述產(chǎn)品，例如所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品，投放到商業(yè)中。所述方法還可包括將所述產(chǎn)品，例如所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品，包裝在無菌隔室中。所述包裝可包含防腐劑。在某些方面，所述包裝可大體上不含防腐劑。所述包裝可包含螯合劑。在某些方面，所述包裝可大體上不含螯合劑。

在一些實(shí)施方案中，所述包裝可包含賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑中的一種。所述賦形劑，例如所述藥學(xué)上可接受的賦形劑和所述美容上可接受的賦形劑中的一種，可適于局部、鼻部、肺部和胃腸道施用中的一種。所述賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑和美容上可接受的賦形劑中的一種可為表面活性劑。所述表面活性劑可選自由以下組成的組：椰油酰胺丙基甜菜堿(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐溫80(Tween 80))、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸鈉/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜堿(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸鈉(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸鈉(Plantaren 200)、布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂((Dr.Bronner’s Castile soap))、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸鈉(Stepanol-WA Extra K)及其組合。

在一些實(shí)施方案中，所述包裝可大體上不含其它生物體。所述包裝可包含粉劑、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶。所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品作為粉劑、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶提供。所述包裝可包含保溫劑、除臭劑、香味劑、著色劑、驅(qū)蟲劑、清潔劑或紫外線阻隔劑。所述賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑，包含抗粘附劑、粘合劑、涂層劑、崩解劑、填充劑、調(diào)味劑、著色劑、潤滑劑、助流劑、吸附劑、防腐劑或甜味劑。

在一些實(shí)施方案中，所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品包含在約10⁸至約10¹⁴CFU/L范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌。所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品包含介于約50毫克(mg)至約1000mg之間的氨氧化細(xì)菌。氨氧化細(xì)菌與藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑的質(zhì)量比在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)。

在一些實(shí)施方案中，所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可用于治療或預(yù)防皮膚病癥，治療或預(yù)防與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀，治療或預(yù)防體臭，治療以向受試者供應(yīng)一氧化氮，或治療以抑制微生物生長。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌選自由亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬、亞硝化孤菌屬及其組合組成的組。所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品還可包含選自由乳酸桿菌屬、鏈球菌屬、雙歧桿菌屬及其組合組成的組的生物體。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可包含呈生長狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌包含呈儲存狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可用于治療以下的至少一種：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

在一些實(shí)施方案中，可施加所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品用于治療以下的至少一種：下肢靜脈性潰瘍、糖尿病足潰瘍中的感染、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、大皰性表皮松解癥和皮膚感染。

在一些實(shí)施方案中，包裝的重量低于約50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。所述包裝還可包含螯合劑。在某些方面，所述包裝可大體上不含螯合劑。

在一些實(shí)施方案中，其中所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品包含泥、水、食源性產(chǎn)品、植物源性產(chǎn)品、提取物和油中的至少一種。所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可用于溫泉療法。

在一些實(shí)施方案中，所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可摻入到粉末、乳霜、洗劑、包裹物、擦洗液、眼膜、面膜、體膜、氣霧劑、噴霧、藥膏、擦拭物、棒狀物、繃帶或浸泡液中的至少一種中。

在一些實(shí)施方案中，所述天然產(chǎn)品或所述強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或者可置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，可通過如本文所公開的任何方法制備組合物。

在一些實(shí)施方案中，提供了一種治療以下的至少一種的方法：HIV皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷；蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。所述方法可包括向受試者施用氨氧化細(xì)菌制劑。

在一些實(shí)施方案中，所述方法還可包括評價(jià)受試者以便施加氨氧化細(xì)菌，例如在向所述受試者施用所述氨氧化細(xì)菌制劑之前。所述制劑可包含氨、銨鹽和尿素中的至少一種。所述制劑包含控釋材料，例如緩釋材料。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可包含賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑中的一種。所述賦形劑，例如所述藥學(xué)上可接受的賦形劑和所述美容上可接受的賦形劑中的一種，可適于局部、鼻部、肺部和胃腸道施用中的一種。所述賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑和美容上可接受的賦形劑中的一種可為表面活性劑。所述表面活性劑可選自由以下組成的組：椰油酰胺丙基甜菜堿(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐溫80(Tween 80))、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸鈉/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜堿(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸鈉(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸鈉(Plantaren 200)、布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂((Dr.Bronner’s Castile soap))、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸鈉(Stepanol-WA Extra K)及其組合。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可大體上不含其它生物體。所述制劑可置于粉劑、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶中。所述制劑可作為粉劑、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶提供。所述制劑包含保溫劑、除臭劑、香味劑、著色劑、驅(qū)蟲劑、清潔劑或紫外線阻隔劑。

在一些實(shí)施方案中，所述賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑，可包含抗粘附劑、粘合劑、涂層劑、崩解劑、填充劑、調(diào)味劑、著色劑、潤滑劑、助流劑、吸附劑、防腐劑或甜味劑。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可包含約10⁸至約10¹⁴CFU/L。所述制劑可包含介于約50毫克(mg)至約1000mg的氨氧化細(xì)菌。所述制劑中氨氧化細(xì)菌與藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑的質(zhì)量比可在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可用于治療或預(yù)防皮膚病癥，治療或預(yù)防與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀，治療或預(yù)防體臭，治療以向受試者供應(yīng)一氧化氮，或治療以抑制微生物生長。氨氧化細(xì)菌可選自由亞硝化單胞菌屬(Nitrosomonas)、亞硝化球菌屬(Nitrosococcus)、亞硝化螺菌屬(Nitrosospira)、亞硝化囊菌屬(Nitrosocystis)、亞硝化葉菌屬(Nitrosolobus)、亞硝化弧菌屬(Nitrosovibrio)及其組合組成的組。所述制劑可包含乳酸桿菌屬、鏈球菌屬、雙歧桿菌屬及其組合。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可呈生長狀態(tài)。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌制劑包含可呈生長狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌制劑可呈多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌制劑包含呈儲存狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌、呈生長狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌和呈多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌中的至少一種。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可置于容器中，其中該容器的重量低于約50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可置于容器中，其中該容器和制劑共同的重量低于約50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。

氨氧化細(xì)菌是普遍存在的革蘭氏陰性專性化能自養(yǎng)菌，其具有只從氨轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽產(chǎn)生能量的獨(dú)特能力。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌催化下列反應(yīng)。

在中性pH下，由接近中性pH的銨產(chǎn)生的氨是初始反應(yīng)的底物。氨轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽分兩個(gè)步驟進(jìn)行，所述兩個(gè)步驟分別由氨單加氧酶(Amo)和羥胺氧化還原酶(Hao)催化，具體如下：

NH₃+2H⁺+2e-+O₂→NH₂OH+H₂O (A)

NH₂OH+H₂O→NO₂^-+4e-+5H⁺ (B)

在一些情況下，反應(yīng)B是如下所報(bào)道，指出在低pH下形成亞硝酸(HNO₂)：

NH₂OH+H₂O→HNO₂+4e-+4H⁺

在某些實(shí)施方案中，NH₄⁺和NH₃可以本公開的全文中互換使用。

本公開預(yù)期了前述方面和/或?qū)嵤┓桨钢械娜魏我粋€(gè)或多個(gè)的所有組合，以及與具體實(shí)施方式和實(shí)施例中所闡述的實(shí)施方案中的任何一個(gè)或多個(gè)的組合。

詳述

本公開提供了制備具有氨氧化細(xì)菌的材料的方法。本公開還提供了測試材料的氨氧化細(xì)菌的方法。考慮到了包含氨氧化細(xì)菌的制劑、組合物和配制物，包括例如天然產(chǎn)品和強(qiáng)化的天然產(chǎn)品。

亞硝化單胞菌屬的氨氧化細(xì)菌(AOB)是革蘭氏陰性專性自養(yǎng)細(xì)菌，其具有專門由氨作為能量來源產(chǎn)生亞硝酸鹽和一氧化氮的獨(dú)特能力。它們廣泛存在于土壤和水環(huán)境中并且是環(huán)境硝化過程的必需組分。由于亞硝酸鹽和一氧化氮作為幾種生理功能，如血管舒張、皮膚炎癥和傷口愈合的重要組分對人類皮膚的作用，這些細(xì)菌對于健康和免疫病理學(xué)兩種皮膚狀況而言均可具有有益特性。這些細(xì)菌可安全地用于人類，因?yàn)樗鼈兩L緩慢，但無法靠有機(jī)碳源生長，可對皂類和抗生素敏感，并且從未與動物或人類中的任何疾病或感染相關(guān)。

1.定義

氨氧化細(xì)菌是指能夠?qū)被蜾@氧化成亞硝酸鹽的細(xì)菌。這可以一定速率實(shí)現(xiàn)。速率，例如預(yù)定速率，可以指銨離子(NH₄⁺)(例如，約200mM)轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽(NO₂^-)的速率，為至少50、75、125或150微摩爾NO₂^-/分鐘，例如約100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩爾/分鐘，例如約125微摩爾NO₂^-/分鐘。氨氧化細(xì)菌的實(shí)例包括歐洲亞硝化單胞菌(Nitrosomonas eutropha)菌株，例如D23如C91，及亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬和亞硝化孤菌屬的其它細(xì)離。D23歐洲亞硝化單胞菌菌株是指被命名為AOB D23-100的菌株，其在2014年4月8日保藏于美國組織培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)(10801 University Blvd.，Manassas，VA，USA)，登錄號為PTA-121157。登錄號PTA-121157的核酸序列(例如基因組序列)在此通過引用整體并入。在某些實(shí)施方案中，歐洲亞硝化單胞菌是通過引用整體并入本文的2015年4月15日提交的PCT申請第PCT/US2015/025909號中描述的菌株。

如本文中所用，“純性”是指包含生物體的組合物大體上不含其它生物體。例如，氨氧化細(xì)菌的純性培養(yǎng)物是大體上不含除氨氧化細(xì)菌以外的生物體的培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，“大體上不含”表示不能被用于檢測其它生物體的方法(例如，平板接種培養(yǎng)物并檢查菌落形態(tài)，或針對保守基因如16S RNA的PCR)檢測到。純性組合物可以包含不是生物體的元素，例如，它可以包含營養(yǎng)物或賦形劑。本文所討論的氨氧化細(xì)菌的任何實(shí)施方案、制劑、組合物或配制物可以包含任選純性的氨氧化細(xì)菌、基本上由任選純性的氨氧化細(xì)菌組成或由任選純性的氨氧化細(xì)菌組成。

如本文中所使用，“自養(yǎng)生物體”例如自養(yǎng)細(xì)菌是能夠通過使用無機(jī)材料作為營養(yǎng)源以及使用光合作用或化學(xué)合成作為能量來源進(jìn)行自營養(yǎng)的任何生物體。自養(yǎng)細(xì)菌可由二氧化碳和衍生自其它來源的ATP、使氨氧化成亞硝酸鹽、使硫化氫氧化和使Fe2⁺氧化成Fe3⁺合成有機(jī)化合物。本公開的自養(yǎng)細(xì)菌無法引起感染。

“培養(yǎng)”是指將一定量的所需細(xì)菌放置在促進(jìn)其生長(即，促進(jìn)細(xì)胞分裂)的條件下的過程。所述條件可以涉及特定培養(yǎng)基、設(shè)定溫度的范圍和/或攪拌速率。可以在液體培養(yǎng)基中或在平板例如瓊脂平板上培養(yǎng)細(xì)菌。

“活化”，如本文中所用，是相對于自養(yǎng)細(xì)菌，例如，氨氧化細(xì)菌使用的?；罨侵缚墒拱毖趸?xì)菌處于可能更活躍的狀態(tài)，例如生長狀態(tài)下的任何作用。活化可涉及自養(yǎng)細(xì)菌，例如氨氧化細(xì)菌的刺激，以某種方式幫助將氨、銨離子和尿素中的至少一種轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽、一氧化氮或一氧化氮前提?；罨缮婕皫椭⒓?xì)菌菌落，例如，以允許自養(yǎng)細(xì)菌例如氨氧化細(xì)菌與其它現(xiàn)有細(xì)菌競爭?；罨缮婕疤峁┛衫谧责B(yǎng)細(xì)菌，例如氨氧化細(xì)菌的持續(xù)性和/或生長的環(huán)境?；罨缮婕凹铀僮责B(yǎng)細(xì)菌，例如氨氧化細(xì)菌對環(huán)境或表面的可利用率。“活化”可提供將呈“活化”或“生長狀態(tài)”的氨氧化細(xì)菌?！盎罨笨呻S活化劑的使用而發(fā)生。氨氧化細(xì)菌可接觸活化劑以提供呈“活化”或“生長”狀態(tài)的氨氧化細(xì)菌。這可以在容器、遞送裝置或遞送系統(tǒng)內(nèi)或外部發(fā)生，例如在第一腔室、第二腔室、混合腔室、第三或另外的腔室或其組合內(nèi)?；罨瘎┛蔀榘?、銨離子或尿素中的至少一種?；罨瘎┛蔀殇@鹽，例如氯化銨或硫酸銨。活化劑，例如銨鹽，例如氯化銨或硫酸銨的濃度可在約10微摩爾至約100毫摩爾的范圍內(nèi)。在某些方面，活化劑，例如銨鹽，例如氯化銨或硫酸銨的濃度可在約0.5mM至約50mM的范圍內(nèi)?；罨瘎┛沙嗜芤?、懸浮液、粉劑，例如結(jié)晶形式、培養(yǎng)基、緩沖液，或置于用于保持活化劑的合適載體中或作為載體提供。氨氧化細(xì)菌可呈任何合適形式，以保持AOB呈所需狀態(tài)，例如儲存狀態(tài)，例如水溶液、凝膠或粉劑形式。氨、銨離子或尿素中的至少一種可處于培養(yǎng)基或緩沖液中以促進(jìn)氨氧化細(xì)菌的生長，例如AOB培養(yǎng)基或生長培養(yǎng)基。定時(shí)釋放或控釋尿素可用作活化劑。

“致動”，如本文中所用，意指正在采取的某種作用，例如，正在開始的過程或正投入運(yùn)動的某物。在一些實(shí)施方案中，致動可指打破容器的屏障，或開始容器一種或多種內(nèi)容物的運(yùn)動，例如將容器的一種或多種內(nèi)容物遞送到容器外，例如遞送到表面或環(huán)境中。

“屏障”，如本文中所用，可意指可以用于阻礙通道或保持分離，例如介于容器的第一腔室和第二腔室之間的任何結(jié)構(gòu)或構(gòu)造。屏障可呈閥門(例如止回閥)、過濾材料、薄膜、蠟、脂質(zhì)、聚合物或控釋材料(例如，緩釋材料)的形式。屏障可以是在容器致動之后，可允許內(nèi)容物從第一腔室通過進(jìn)入第二腔室，內(nèi)容物從第二腔室通過進(jìn)入第一腔室，或兩者情況的材料?？梢栽谥聞訒r(shí)，例如通過刺破、擊穿、刺穿、穿孔、穿透、裂開、打開或撕裂屏障而破壞屏障。屏障可呈閥門(例如止回閥)、與容器的一種或多種內(nèi)容物接觸后無法降解的柔性或非柔性材料，或與容器的一種或多種內(nèi)容物接觸后可降解的柔性或非柔性材料、過濾材料的形式。屏障可由適于其目的的任何材料制成，例如，可用于阻礙通道或保持分離的材料，例如，聚合材料或金屬材料。

在一些實(shí)施方案中，與本公開最相關(guān)的狀態(tài)是生長(例如，最大生長)的狀態(tài)，其特征為至少約7.6的pH、氨、微量礦物質(zhì)、氧和二氧化碳。另一種狀態(tài)可以由約7.4或更小的pH表征以及由二氧化碳的缺乏表征。在低二氧化碳條件下，氨氧化細(xì)菌(例如，亞硝化單胞菌)繼續(xù)將氨氧化成亞硝酸鹽并產(chǎn)生ATP，但缺乏二氧化碳，例如，缺乏足夠的二氧化碳來固定和生成蛋白質(zhì)，其相反生成被其用作能量儲存介質(zhì)的多磷酸鹽。這可以允許氨氧化細(xì)菌保持在“儲存狀態(tài)”下一段時(shí)間，例如預(yù)定的時(shí)間段，例如，至少1、2、3、4、5、6、7天；1、2、3、4周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個(gè)月；1、2、3、4或5年。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可以保持在儲存狀態(tài)下至少保持約6個(gè)月至約1年。

如本文中所用，“生長狀態(tài)”是指在可以具有至少約7.6的pH的狀態(tài)下或環(huán)境(例如介質(zhì)，例如培養(yǎng)基，例如生長培養(yǎng)基)中的自養(yǎng)細(xì)菌(例如，氨氧化細(xì)菌)。氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平可以介于約1微摩爾和1000毫摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在約0.01微摩爾鐵和200微摩爾鐵之間。氧的水平在約5％和100％氧飽和度(例如，培養(yǎng)基的氧飽和度)之間。二氧化碳的水平在約20ppm和10％飽和度(例如，培養(yǎng)基的飽和度)之間。在某些方面，氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平可以在約10微摩爾和100毫摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在約0.1微摩爾鐵和20微摩爾鐵之間。氧的水平在約5％和100％氧飽和度之間。二氧化碳的水平在約200ppm和5％飽和度(例如，培養(yǎng)基的飽和度)之間。

如本文中所用，“多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)”是指在可以具有約7.4或更小的pH的狀態(tài)下或環(huán)境(例如介質(zhì)，例如培養(yǎng)基，例如生長培養(yǎng)基)中的自養(yǎng)細(xì)菌(例如，氨氧化細(xì)菌)。氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平在約1微摩爾和2000毫摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在0.01微摩爾鐵和200微摩爾鐵之間。氧的水平在約0％和100％O₂飽和度(例如，培養(yǎng)基的氧飽和度)之間。二氧化碳的水平介于/小于約0和400ppm之間，且磷酸鹽水平大于約1微摩爾。在某些方面，氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平在約10微摩爾和200毫摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在0.1微摩爾鐵和20微摩爾鐵之間。氧的水平在約5％和100％O₂飽和度之間。二氧化碳的水平介于/小于約0和200ppm之間，且磷酸鹽水平大于約10微摩爾。

可以誘導(dǎo)多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)一段時(shí)間，例如，預(yù)定時(shí)間段。該預(yù)定時(shí)間段可以是允許在氨氧化細(xì)菌中積累足夠的多磷酸鹽的時(shí)間段。該預(yù)定時(shí)間段是適于提供充足的多磷酸鹽負(fù)載以允許氨氧化細(xì)菌長時(shí)間儲存的時(shí)間段。預(yù)定時(shí)間段可以至少部分基于約0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍氨氧化細(xì)菌的倍增時(shí)間的時(shí)間段。預(yù)定的時(shí)間段可以至少部分基于氨氧化細(xì)菌的約1個(gè)倍增時(shí)間的時(shí)間段。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的時(shí)間段介于約8小時(shí)和12小時(shí)之間。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的時(shí)間段為約10小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的時(shí)間段為約24小時(shí)。

多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)的目的可以是向AOB提供充足的氨、銨離子和/或尿素和O₂，以使得可以產(chǎn)生ATP，但不向AOB提供CO₂和碳酸鹽，以使得它們無法使用該ATP固定C0₂，而是使用該ATP來生成可以由細(xì)菌儲存的多磷酸鹽。

如本文中所用，術(shù)語“儲存狀態(tài)”是指在具有約7.4或更小的pH(在一些實(shí)施方案中，pH可以為7.6或更小)的狀態(tài)下或環(huán)境(例如介質(zhì)，例如培養(yǎng)基，例如生長培養(yǎng)基)中的自養(yǎng)細(xì)菌(例如，氨氧化細(xì)菌)。氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平在約_1和1000微摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在約0.1和100微摩爾之間。氧的水平在約0％和100％飽和度(例如，培養(yǎng)基的飽和度)之間。二氧化碳的水平在約0和800ppm之間。在某些方面，氨、銨離子和尿素中的至少一種的水平在約_10和100微摩爾之間。微量物質(zhì)的水平在約1和10微摩爾之間。氧的水平在約0％和100％飽和度(例如，培養(yǎng)基的飽和度)之間。二氧化碳的水平在約0和400ppm之間。

根據(jù)本公開的一些實(shí)施方案通過在生長狀態(tài)期間生成AOB生物體質(zhì)，然后使AOB暴露于多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)，然后除去培養(yǎng)基并使AOB再懸浮于緩沖液(例如儲存緩沖液)中(即，儲存狀態(tài))來產(chǎn)生AOB。

氨氧化細(xì)菌可以保持在“儲存狀態(tài)”下一段時(shí)間，例如預(yù)定的時(shí)間段，例如，至少1、2、3、4、5、6、7天；1、2、3、4周；1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個(gè)月；1、2、3、4或5年。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可以保持在儲存狀態(tài)下至少保持約6個(gè)月至約1年。在恢復(fù)后，氨氧化細(xì)菌的活力是氨氧化細(xì)菌在儲存之前(例如，在生長狀態(tài)下)的活力的至少約50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些實(shí)施方案中，可以制備氨氧化細(xì)菌的制劑，以使得當(dāng)在選定的條件下儲存時(shí)，使NH₄⁺氧化的能力損失不超過10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％。

使氨氧化細(xì)菌從儲存狀態(tài)(或多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài))恢復(fù)所需要的時(shí)間可以是預(yù)定的時(shí)間段。例如，預(yù)定的時(shí)間段可以小于約75小時(shí)或小于約72小時(shí)。預(yù)定的時(shí)間段可以至少部分基于約0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍氨氧化細(xì)菌的倍增時(shí)間的時(shí)間段。預(yù)定的時(shí)間段可以至少部分基于氨氧化細(xì)菌的約1個(gè)倍增時(shí)間的時(shí)間段。預(yù)定的時(shí)間段可以在約8小時(shí)和12小時(shí)之間。預(yù)定的時(shí)間段可以為約10小時(shí)。預(yù)定的時(shí)間段可以小于約75小時(shí)、72小時(shí)、70小時(shí)、68小時(shí)、65小時(shí)、60小時(shí)、55小時(shí)、50小時(shí)、45小時(shí)、40小時(shí)、35小時(shí)、30小時(shí)、25小時(shí)、20小時(shí)、15小時(shí)、10小時(shí)、5小時(shí)、4小時(shí)、3小時(shí)、2小時(shí)或1小時(shí)。預(yù)定的時(shí)間段可以在約5分鐘和5小時(shí)之間。預(yù)定的時(shí)間段可以為約5-10分鐘、10-15分鐘、15-20分鐘、20-25分鐘、25-30分鐘、30-45分鐘、45-60分鐘、60分鐘-1.5小時(shí)、1.5小時(shí)-2小時(shí)、2小時(shí)-2.5小時(shí)、2.5小時(shí)-3小時(shí)、3小時(shí)-3.5小時(shí)、3.5小時(shí)-4小時(shí)、4小時(shí)-4.5小時(shí)、4.5小時(shí)-5小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，預(yù)定的時(shí)間段可以為約2小時(shí)。例如，預(yù)定的時(shí)間段可以是實(shí)現(xiàn)氨氧化細(xì)菌的復(fù)活(例如，實(shí)現(xiàn)氨氧化細(xì)菌相對于該細(xì)菌在儲存之前(例如，在生長狀態(tài)下)的活力的活力，例如，至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或100％活力)可能需要的時(shí)間。

如本文中所使用，“組合”施用意指在受試者罹患病癥的過程中將兩種(或更多種)不同的治療遞送給受試者，例如，在受試者已被診斷為患有所述病癥之后以及在所述病癥已經(jīng)被治愈或消除之前遞送所述兩種或更多種治療。在一些實(shí)施方案中，一種治療的遞送在第二治療的遞送開始時(shí)仍然在發(fā)生，從而存在重疊。這有時(shí)在本文中被稱為“同時(shí)”或“伴隨”或“共同遞送”。在其它實(shí)施方案中，一種治療的遞送在開始另一種治療的遞送之前結(jié)束。這有時(shí)在本文中被稱為“連續(xù)”或“順序遞送”或“依序遞送”。在任一種情況的實(shí)施方案中，治療都因?yàn)榻M合施用而更有效。例如，第二治療是更有效的，例如，相比于如果在缺少第一治療的情況下施用第二治療將觀察到的情況，利用更少的第二治療觀察到同等的效果，或第二治療在更大程度上減少癥狀，或者對于第一治療將觀察到類似的情況。在一些實(shí)施方案中，遞送使得癥狀或與病癥相關(guān)的其它參數(shù)的減少比在遞送一種治療而缺少另一種治療的情況下將會觀察到的減少更大。兩種治療的作用可以部分相加、全部相加或比相加更大(即，協(xié)同)。所述遞送可以使得遞送的第一治療的作用在遞送第二治療時(shí)仍然是可檢測的。

“天然產(chǎn)品”是或者可包含可至少部分源自自然界的產(chǎn)品。它可以是任何事物，或包括由活生物體產(chǎn)生的任何事物，并且可包括生物體本身。天然產(chǎn)品可包括或包含整個(gè)生物體和生物體的一部分(例如，植物的一部分)、來自于生物體的提取物、來自于生物體的有機(jī)化合物、來自于生物體的純化有機(jī)化合物。天然產(chǎn)品可以是或包含發(fā)現(xiàn)的有機(jī)物和細(xì)胞，包括初級代謝物(氨基酸、碳水化合物和核酸)和次級代謝產(chǎn)物(在有限范圍的物種中找到的有機(jī)化合物，例如，聚酮、脂肪酸、萜類、類固醇、苯丙烷類、生物體堿、專用氨基酸和肽、專用碳水化合物)。天然產(chǎn)品可以是或包含聚合有機(jī)材料，例如纖維素、木質(zhì)素和蛋白質(zhì)。

天然產(chǎn)品可以是或包含商用產(chǎn)品，并且可以指由天然來源產(chǎn)生的化妝品、膳食補(bǔ)充劑和食品。天然產(chǎn)品可具有可能，例如在治療疾病或病狀中具有治療益處的藥理學(xué)或生物體學(xué)活性。天然產(chǎn)品可包括在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)、用于美容目的的治療和溫泉療法中。本文提到的天然產(chǎn)品可包含本文描述的任何一種或多種組分，其作為天然產(chǎn)品摻入包含一種或多種其它組分，例如賦形劑的制劑或配制物中。稱為天然產(chǎn)品的制劑或配制物可包含本文定義的天然產(chǎn)品和一種或多種另外的組分或成分。本公開全篇所討論的任何組合物、制劑或配制物可以是或包含一種或多種天然產(chǎn)品。

如本文中所用，“存在”或“水平”可指組分，例如氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子、尿素、亞硝酸鹽或一氧化氮中的任何一種或多種的定性或定量的量。存在或水平可包括零值或缺乏組分的存在。

術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”(如果為單鏈)在本文中可互換地用于指氨基酸聚合物。該聚合物可以是直鏈或支鏈，其可以包含修飾的氨基酸，并且其可以間雜有非氨基酸。該術(shù)語還包括已被修飾的氨基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂質(zhì)化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，諸如與標(biāo)記組分綴合。該多肽可以從天然來源中分離，可以通過重組技術(shù)從真核或原核宿主產(chǎn)生，或者可以是合成程序的產(chǎn)物。

如本文中所用，術(shù)語“表面活性劑”包括可降低兩種液體之間或液體和固體之間的表面張力或界面張力的化合物。表面活性劑可作為洗滌劑、潤濕劑、乳化劑、發(fā)泡劑和分散劑。表面活性劑可以包括下列中的一種或多種，單獨(dú)的或與所列那些的組合，或其它表面活性劑或表面活性劑樣化合物：椰油酰胺丙基甜菜堿(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，吐溫80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf6 NAT)、月桂基醚硫酸鈉/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜堿(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸鈉(例如，Rhodapex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸鈉(Plantaren 200)、布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂、布朗納博士的嬰兒肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸鈉(Stepanol-WA Extra K)及其組合。布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂和嬰兒肥皂包含水、有機(jī)椰子油、氫氧化鉀、有機(jī)橄欖油、有機(jī)fair deal麻油、有機(jī)荷荷巴油、檸檬酸和生育酚。

如本文中所用，“轉(zhuǎn)基因”意指包含DNA的一個(gè)或多個(gè)外源性部分。外源性DNA衍生自另一種生物體，例如，另一種細(xì)菌、噬菌體、動物或植物。

如本文中所用，“疾病或病狀的治療”是指與類似的但未經(jīng)治療的患者相比，降低所述疾病或病狀的至少一種癥狀的嚴(yán)重程度或頻率。治療還可以指與類似的但未經(jīng)治療的患者相比，阻止、減緩或逆轉(zhuǎn)疾病或病狀的進(jìn)展。治療可以包括解決疾病和/或一種或多種癥狀的根本原因。

如本文中所使用，“治療有效量”是指足以防止疾病或病狀的推進(jìn)或引起疾病或病狀的消退，或能夠緩解疾病或病狀的癥狀，或能夠?qū)崿F(xiàn)所需結(jié)果的劑量。治療有效劑量可以被測量為例如細(xì)菌的數(shù)量或活菌的數(shù)量(例如，以CFU計(jì))或細(xì)菌的質(zhì)量(例如，以毫克、克或千克計(jì))，或細(xì)菌的體積(例如，以mm³計(jì))。

如本文中所使用，術(shù)語“活力”是指自養(yǎng)細(xì)菌(例如，氨氧化細(xì)菌)以預(yù)定速率將氨、銨或尿素氧化為亞硝酸鹽的能力。在一些實(shí)施方案中，速率是指銨離子(NH₄⁺)(例如，約200mM)轉(zhuǎn)化為硝酸鹽(NO₂^-)的速率，為至少50、75、125或150微摩爾NO₂^-/分鐘，例如約100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩爾/分鐘，例如約125微摩爾NO₂^-/分鐘。

如本文中所提及的“生長培養(yǎng)基”或“AOB培養(yǎng)基”包括表1或表2中的下列組分。

表1.

表2.

給每種溶液高壓滅菌，并儲存在室溫下。

2.氨氧化細(xì)菌(AOB)

自養(yǎng)型氨氧化細(xì)菌(在本文中可以被稱為AOB)是如以下文獻(xiàn)所記錄的專性自養(yǎng)菌：Alan B.Hooper和A.Krummel等人，Alan B.Hooper，Biochemical Basis of Obligate Autotrophy in Nitrosomonas europaea，Journal of Bacteriology，1969年2月，第776-779頁；Antje Krummel等人，Effect of Organic Matter on Growth and Cell Yield of Ammonia-Oxidizing Bacteria，Arch Microbiol(1982)133：50-54。這些細(xì)菌只從氨氧化為硝酸鹽獲得所有的代謝能量(一氧化氮(NO)作為其呼吸鏈中的中間產(chǎn)物)并且通過固定二氧化碳獲得幾乎所有的碳。它們不能利用除了一些簡單分子外的其它碳源。

氨氧化細(xì)菌(AOB)廣泛存在于環(huán)境中，并且在氨、氧和微量金屬的存在下將固定二氧化碳和增殖。AOB可以緩慢生長，并且在AOB可以增殖并使氨減少至無毒水平之前，毒性水平的氨可能會殺死魚類和其它生物體。AOB的緩慢生長還可能會延遲AOB在施用于皮膚時(shí)所產(chǎn)生的NO和亞硝酸鹽的健康效益。

向魚缸、皮膚或過程中補(bǔ)充針對該目的而生長和儲存的充足的活A(yù)OB是理想的。AOB不形成孢子，因此以高活力儲存在干燥狀態(tài)下是困難的，且儲存在潮濕狀態(tài)下使它們具有代謝活性。

已經(jīng)研究了在廢水處理用AOB的儲存期間的硝化能力的衰減，例如(Munz G，Lubello C，Oleszkiewicz JA.Modeling the decay of ammonium oxidizing bacteria.Water Res.2011年1月；45(2)：557-64.Oi：10.1016/j.watres.2010.09.022.)

Cassidy等人(U.S.5,314,542)討論了亞硝化單胞菌的生長、長期儲存和活性恢復(fù)，其中他們公開了生長亞硝化單胞菌，去除有毒廢物，在適當(dāng)鹽度的無菌水中儲存長達(dá)一年的時(shí)間段，且然后通過添加緩沖液(CaCO₃)和200ppm銨復(fù)活，所述復(fù)活需要72小時(shí)。

本公開規(guī)定如果將AOB保持在低二氧化碳但具有足夠氧和氨的條件下，在其中它們積累多磷酸鹽約1個(gè)倍增時(shí)間的時(shí)間段(約10小時(shí))，則它們積累了足夠的多磷酸鹽以大大擴(kuò)充其儲存活力、儲存時(shí)間并且如Cassidy等人所公開，加速其添加和不添加緩沖液和氨時(shí)的復(fù)活。

作為專性自養(yǎng)生物體，AOB經(jīng)由使用能量固定CO₂以及還原由氨氧化為亞硝酸鹽所生成的等效物來合成蛋白質(zhì)。生長需要氨、氧、礦物質(zhì)和二氧化碳。

根據(jù)K.R.Terry和A.B.Hooper所著的“Polyphosphate and Orthophosphate Content of Nitrosomonas europaea as a Function of Growth”，Journal of Bacteriology，1970年7月，第199-206頁，第103卷，第I期，亞硝化單胞菌可以以幾種代謝狀態(tài)存在。

在本公開中預(yù)期的AOB可以包含相對于野生型AOB的突變。這些突變可以例如自然發(fā)生、由隨機(jī)誘變引入或由定點(diǎn)誘變引入。例如，AOB可以缺少野生型AOB通常包含的一個(gè)或多個(gè)基因或調(diào)控DNA序列。AOB還可以包含相對于測序菌株或野生型菌株的點(diǎn)突變、取代、插入、缺失和/或重排。AOB可以是優(yōu)化AOB的純化制品。

在某些實(shí)施方案中，AOB是轉(zhuǎn)基因的。例如，它可以包含野生型氨氧化細(xì)菌缺少的一個(gè)或多個(gè)基因或調(diào)控DNA序列。更具體地說，氨氧化細(xì)菌可以包含例如報(bào)告基因、選擇標(biāo)記、編碼酶的基因或啟動子(包括誘導(dǎo)型啟動子或阻抑型啟動子)。在一些實(shí)施方案中，額外的基因或調(diào)控DNA序列被整合到細(xì)菌染色體內(nèi)；在一些實(shí)施方案中，額外的基因或調(diào)控DNA序列位于質(zhì)粒上。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，AOB與天然存在的細(xì)菌的不同之處在于至少一種核苷酸。例如，AOB與天然存在的細(xì)菌的不同之處可以在于作為相關(guān)途徑(例如，氨代謝途徑、尿素代謝途徑或用于產(chǎn)生一氧化氮或一氧化氮前體的途徑)的一部分的基因或蛋白質(zhì)。更具體地說，AOB可以包含提升所述途徑的活性(例如，通過提高該途徑的要素的水平或活性)的突變。

上述突變可以使用任何合適的技術(shù)來引入。用于將突變引入給定位置中的許多方法是已知的。例如，可以使用定點(diǎn)誘變、寡核苷酸定向誘變或位點(diǎn)特異性誘變。具體誘變方案的非限制性實(shí)例描述于例如Mutagenesis，13.1-13.105頁(Sambrook和Russell編輯，Molecular Cloning ALaboratory Manual，第3卷，第3增補(bǔ)版，2001)中。此外，可從商業(yè)供應(yīng)商得到的充分表征的誘變方案的非限制性實(shí)例包括但不限于：Altered Sites.RTM.II體外誘變系統(tǒng)(Promega Corp.，Madison，Wis.)；Erase-a-Base.RTM.系統(tǒng)(Promega，Madison，Wis.)；GeneTailor.TM.定點(diǎn)誘變系統(tǒng)(Invitrogen，Inc.，Carlsbad，Calif.)；QuikChange.RTM.II定點(diǎn)誘變試劑盒(Stratagene，La Jolla，Calif.)；以及Transformer.TM.定點(diǎn)誘變試劑盒(BD-Clontech，Mountain View，Calif.)。

在本公開的一些實(shí)施方案中，所述氨氧化細(xì)菌可以是純性的。氨氧化細(xì)菌的制劑(例如配制物，例如組合物)可以包含純性氨氧化細(xì)菌、基本上由純性氨氧化細(xì)菌組成或由純性氨氧化細(xì)菌組成。氨氧化細(xì)菌可以來自選自由亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬、亞硝化弧菌屬及其組合組成的組的屬。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含一定濃度或量的氨氧化細(xì)菌以至少部分治療病狀或疾病。氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含一定濃度或量的氨氧化細(xì)菌，以改變(例如，減少或增加)表面(例如，皮膚表面)上的細(xì)菌或細(xì)菌屬的量、濃度或比例。所述細(xì)菌可以是非致病性的或致病性的，或潛在致病性的。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含約10⁸至約10¹⁴CFU/L。所述制劑可以包含至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹、10¹²、2x10¹²、5x10¹²、10¹³、2x10¹³、5x10¹³或10¹⁴；或約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/L。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以包含至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹、10¹²、2x10¹²、5x10¹²、10¹³、2x10¹³、5x10¹³或10¹⁴；或約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

在某些方面，所述制劑可以包含約1x10⁹CFU至約10x10⁹CFU。在某些方面，所述制劑可以包含約1x10⁹CFU/L至約10x10⁹CFU/L。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，所述制劑可以包含約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌。所述制劑可以包含約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含質(zhì)量比在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑。所述制劑可以包含質(zhì)量比在約0.1-02、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含緩沖液中的氧化細(xì)菌，基本上由或由緩沖溶液中的氧化細(xì)菌組成，所述緩沖溶液包含磷酸二鈉和氯化鎂，基本上由或由磷酸二鈉和氯化鎂(例如50mM Na₂HPO₄和2mM MgCl₂)組成。

所述制劑可包含約0.1至約100液量盎司、約0.2至約50液量盎司、約0.5至約25液量盎司、約1.0至約10液量盎司、約2.0至約7液量盎司、約3至約5液量盎司的體積。在一些實(shí)施方案中，制劑可包含約3.4液量盎司的體積。

所述制劑可于容器中提供，該容器構(gòu)造為容納約0.1至約100液量盎司、約0.2至約50液量盎司、約0.5至約25液量盎司、約1.0至約10液量盎司、約2.0至約7液量盎司、約3至約5液量盎司。在一些實(shí)施方案中，所述制劑是構(gòu)造為容納約3.4液量盎司的容器。所述容器可以是單室容器，或本文公開的任何其它容器。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以處于生長狀態(tài)。生長狀態(tài)可以通過使氨氧化細(xì)菌暴露于可以促進(jìn)生長的環(huán)境來提供。生長狀態(tài)可以是例如氨氧化細(xì)菌處于允許氨氧化細(xì)菌能夠即時(shí)將銨離子(NH₄⁺)轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽(NO₂^-)的環(huán)境中的狀態(tài)。生長狀態(tài)可以包括在具有大于約7.6的pH的環(huán)境中提供氨氧化細(xì)菌。生長狀態(tài)還可以包括在如在以上部分1中所述的具有氨、銨離子和/或尿素、微量礦物質(zhì)以及充足的氧和二氧化碳的環(huán)境中提供氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以處于多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)，其中所述狀態(tài)或環(huán)境(例如介質(zhì)，例如培養(yǎng)基，例如生長培養(yǎng)基)可以具有小于約7.4的pH。選擇組分的水平為AOB提供氨和氧，以使得可以產(chǎn)生ATP，但不向AOB提供二氧化碳和碳酸鹽，以使得它們無法使用該ATP固定二氧化碳，而是使用該ATP來生成可以儲存的多磷酸鹽。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以處于儲存狀態(tài)。儲存狀態(tài)可以被定義為氨氧化細(xì)菌處于它們可以被儲存至稍后恢復(fù)的環(huán)境中。儲存狀態(tài)可以是例如氨氧化細(xì)菌處于允許氨氧化細(xì)菌在復(fù)活后(例如，在放置于促進(jìn)生長狀態(tài)的環(huán)境中預(yù)定的時(shí)間段后)可用的環(huán)境中的狀態(tài)。

儲存狀態(tài)可以包括在具有小于約7.4的pH的環(huán)境中提供氨氧化細(xì)菌。儲存狀態(tài)還可以包括在如在以上部分1中所述的具有氨、氨離子和/或尿素、微量礦物質(zhì)、氧和低濃度二氧化碳的環(huán)境中提供氨氧化細(xì)菌。

儲存還可以通過在4℃下儲存最多幾個(gè)月來完成。儲存緩沖液在一些實(shí)施方案中可以包含50mM Na₂HPO₄-2mM MgCl₂(pH 7.6)。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可以低溫保存?？梢詫?.25ml氨氧化細(xì)菌對數(shù)中期培養(yǎng)物添加到2ml的凍存管和0.75ml無菌的80％甘油中。管可以輕輕振蕩，并在室溫下培養(yǎng)15分鐘，以允許細(xì)胞吸收冷凍保護(hù)劑?？梢詫⑺龉苤苯觾Υ嬖?80℃冷凍器中用于冷凍和儲存。

對于培養(yǎng)物的復(fù)蘇，可以使冷凍原液在冰上解凍10到20分鐘，然后在4℃下，在8000xg下離心3分鐘。球團(tuán)可以通過將它懸浮在2ml AOB培養(yǎng)基中進(jìn)行洗滌，隨后在4℃下，在8000xg下再離心3分鐘，以降低冷凍保護(hù)劑的潛在毒性?？梢允顾銮驁F(tuán)再懸浮于2ml AOB培養(yǎng)基中，接種到含50mM NH₄⁺的50ml AOB培養(yǎng)基中，并通過在200rpm下振蕩，在30℃的黑暗環(huán)境中培養(yǎng)。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包括在儲存狀態(tài)下的氨氧化細(xì)菌和/或在多磷酸鹽負(fù)載狀態(tài)下的氨氧化細(xì)菌和/或在生長狀態(tài)下的氨氧化細(xì)菌。

不希望受理論的束縛，通過將氨氧化細(xì)菌保持在具有低二氧化碳以及足夠的氧和氨的條件下或環(huán)境中，它們可以積累多磷酸鹽達(dá)預(yù)定的時(shí)期，例如，約一個(gè)倍增時(shí)間的時(shí)期，例如約8-12小時(shí)，例如約10小時(shí)。氨氧化細(xì)菌可以積累足夠的多磷酸鹽以延長其儲存活力、儲存時(shí)間，并加快其復(fù)活。這可以在添加或不添加緩沖液和氨的情況下發(fā)生。

存在儲存充足的多磷酸鹽可以允許氨氧化細(xì)菌(ATP資源)在甚至不存在氨和氧的情況下維持代謝活性，并在原本將會致命的攻擊下存活。

氨氧化產(chǎn)生ATP的過程具有兩個(gè)步驟。第一步驟是通過氨單加氧酶(Amo)使氨氧化為羥胺，然后通過羥胺氧化還原酶(Hao)使羥胺轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。來自第二步驟(羥胺轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽)的電子被用來致動第一步驟(氨氧化為羥胺)。

如果氨氧化細(xì)菌不具有羥胺來生成用于Amo的電子，則羥胺不可用于Hao。例如，乙炔不可逆地抑制對于氨氧化為亞硝酸鹽中的第一步驟(氨氧化為羥胺)而言關(guān)鍵的酶。一旦AOB暴露于乙炔，Amo即被不可逆地抑制，并且在可以產(chǎn)生羥胺之前必須合成新的酶。在正常的聚生體生物膜棲息地，AOB可以分享和接收來自其它AOB(甚至是對抑制劑具有不同易感性的不同菌株)的羥胺，因此生物膜趨于比單個(gè)生物體對抑制劑如乙炔更具抗性。AOB可以使用儲存的多磷酸鹽來合成新的Amo，即使在沒有羥胺的情況下。

本文所討論的氨氧化細(xì)菌的任何實(shí)施方案、制劑、組合物或配制物可以包含任選純性的氨氧化細(xì)菌、基本上由任選純性的氨氧化細(xì)菌組成或由任選純性的氨氧化細(xì)菌組成。

3.生產(chǎn)氨氧化細(xì)菌的方法

培養(yǎng)各種氨氧化細(xì)菌，例如亞硝化單胞菌屬種類的方法是本領(lǐng)域中已知的?？梢岳缡褂萌缫陨媳?或表2中所述的培養(yǎng)基來培養(yǎng)氨氧化細(xì)菌。

氨氧化細(xì)菌可以生長在例如液體培養(yǎng)基中或平板上。合適的平板包括1.2％R2A瓊脂、1.2％瓊脂、1.2％瓊脂糖和含有0.3g/L丙酮酸鹽的1.2％瓊脂糖。

在一些實(shí)施方案中，可在無有機(jī)物培養(yǎng)基中培養(yǎng)氨氧化細(xì)菌。使用無有機(jī)物培養(yǎng)基的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是除了由自養(yǎng)細(xì)菌產(chǎn)生的底物外它缺乏異養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行代謝的底物。使用生長態(tài)培養(yǎng)物的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是大量的亞硝酸鹽在培養(yǎng)基中積累，而該亞硝酸鹽也抑制異養(yǎng)細(xì)菌且因此在儲存期間作為防腐劑。

在一些實(shí)施方案中，具有改善的(例如，優(yōu)化的)性質(zhì)的氨氧化細(xì)菌是通過繁殖和選出所需性質(zhì)的迭代過程而產(chǎn)生。在一些實(shí)施方案中，選擇和繁殖同時(shí)進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，在包含50mM、75mM、100mM、125mM、150mM、175mM、200mM、225mM、250mM、275mM或300mM NH₄⁺(例如，至少200mM NH₄⁺)的反應(yīng)介質(zhì)(例如，完全歐洲亞硝化單胞菌培養(yǎng)基)中進(jìn)行選擇。在一些實(shí)施方案中，繁殖和/或選擇的周期為至少1、2、3或6個(gè)月。在實(shí)施方案中，繁殖和/或選擇的周期為至少1、2、4、6、8或10年。

在一些方面，所述氨氧化細(xì)菌是以商業(yè)規(guī)模來生產(chǎn)。在一些實(shí)施方案中，商業(yè)規(guī)模是指具有至少10,000、20,000、30,000、50,000或100,000升(L)的培養(yǎng)基體積的液體培養(yǎng)方法。在一些實(shí)施方案中，在生物體反應(yīng)器中生產(chǎn)細(xì)菌。所述生物體反應(yīng)器可以使用例如絕緣熱夾套、溫度傳感器以及加熱或冷卻元件將細(xì)菌維持在恒定溫度例如約26℃-30℃下。所述生物體反應(yīng)器可以具有用于攪拌培養(yǎng)物以改善營養(yǎng)物如氨、尿素、氧、二氧化碳和各種礦物質(zhì)的分布的裝置。所述生物體反應(yīng)器還可以具有用于添加新培養(yǎng)基的進(jìn)口管，以及用于收集細(xì)胞的出口管。所述生物體反應(yīng)器還可以具有用于將氧和/或二氧化碳分配至培養(yǎng)物中的曝氣器。所述生物體反應(yīng)器可以是例如間歇式反應(yīng)器、饋料分批反應(yīng)器或連續(xù)反應(yīng)器。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)以約10¹²CFU/升產(chǎn)生1,000至100,000L/天的批料。商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)可以產(chǎn)生例如1,000-5,000L/天、5,000-10,000L/天、10,000-50,000L/天或50,000-100,000L/天的批料。商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)可以產(chǎn)生例如1,000-5,000、5,000-10,000、10,000-50,000或50,000-100,000L/批的批料。在一些實(shí)施方案中，生成物的濃度為至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹或10¹²或約10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/L。在一些實(shí)施方案中，生成物的濃度為至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹、10¹²、2x10¹²、5x10¹²、10¹³、2x10¹³、5x10¹³或10¹⁴；或約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

在一些實(shí)施方案中，通常包括商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，進(jìn)行質(zhì)量控制(QC)測試步驟。QC的一般步驟通常包括：1)培養(yǎng)氨氧化細(xì)菌；2)對培養(yǎng)物或其等分試樣執(zhí)行測試步驟；以及3)從所述測試步驟獲得值，并且任選地：4)將所獲得的值與參考值或可接受值的范圍進(jìn)行比較，和5)如果所獲得的值滿足可接受的參考值或范圍，則將培養(yǎng)物分類為合格，且如果所獲得的值不滿足可接受的參考值或范圍，則將培養(yǎng)物分類為不合格。如果培養(yǎng)物被分類為合格，則可以例如允許培養(yǎng)物繼續(xù)生長且/或可以收獲培養(yǎng)物并將其加入商業(yè)產(chǎn)品中。如果培養(yǎng)物被分類為不合格，則可以例如安全地處置培養(yǎng)物或者可以補(bǔ)救缺陷。

測試步驟可以包括測量培養(yǎng)物的光密度(OD)。OD是在分光光度計(jì)中進(jìn)行測量，并且提供區(qū)別于吸收或散射的光關(guān)于透射通過樣品的光的量的信息。在一些實(shí)施方案中，可以測定OD600(例如，具有600nm波長的光的光密度)。這種測量通常指示培養(yǎng)基中的細(xì)胞的濃度，其中較高的光密度對應(yīng)于較高的細(xì)胞密度。

測試步驟可以包括測量培養(yǎng)物的pH。氨氧化細(xì)菌培養(yǎng)物的pH指示氮氧化的速率，并且還可以指示培養(yǎng)物是否包含污染性生物體。pH可以使用例如包括電極(如氫電極、醌氫醌電極、銻電極、玻璃電極)的pH感測裝置、包括半導(dǎo)體的pH感測裝置或顏色指示試劑(如pH試紙)來測量。

在某些實(shí)施方案中，生產(chǎn)氨氧化細(xì)菌包括進(jìn)行各種質(zhì)量控制步驟。例如，可以測試其中生長有氨氧化細(xì)菌的培養(yǎng)基，以例如確定它是否具有適當(dāng)?shù)膒H，它是否具有足夠低的廢產(chǎn)物水平，和/或它是否具有足夠高的營養(yǎng)物水平。還可以測試污染性生物體的存在。污染性生物體通常為非氨氧化細(xì)菌的生物體，例如選自微桿菌屬(Microbacterium)、產(chǎn)堿菌科(Alcaligenaceae)細(xì)菌、柄桿菌屬(Caulobacter)、多噬伯克霍爾德氏菌(Burkodelia multivorans)、大腸桿菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)和金黃色葡萄球菌的生物體?？梢酝ㄟ^例如提取DNA、擴(kuò)增該DNA并對保守基因如16S rRNA進(jìn)行測序來測試污染物。還可以通過將培養(yǎng)物接種在瓊脂平板上并觀察菌落形態(tài)來測試污染物。氨氧化細(xì)菌通常形成紅色菌落，所以非紅色菌落往往指示污染性生物體。

4.測試產(chǎn)品的氨氧化細(xì)菌的方法和質(zhì)量控制方法

在一些實(shí)施方案中，提供了評價(jià)制劑的方法。該方法可以包括評價(jià)制劑中氨氧化細(xì)菌的存在，例如水平。氨氧化細(xì)菌可以是選自由亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬、亞硝化弧菌屬及其組合組成的組的屬。

所述制劑可為美容產(chǎn)品或治療產(chǎn)品，或者可處于制備或生產(chǎn)成美容產(chǎn)品或治療產(chǎn)品的過程中。所述制劑可置于美容產(chǎn)品或治療產(chǎn)品中或作為美容產(chǎn)品或治療產(chǎn)品提供?？蓪⑺鲋苿┕?yīng)給，例如生產(chǎn)商、保健公司或消費(fèi)產(chǎn)品公司，他們可使用所述制劑或?qū)⑺鲋苿┺D(zhuǎn)化成治療產(chǎn)品或消費(fèi)產(chǎn)品。

可以提供評價(jià)制劑的方法來評價(jià)，例如，天然產(chǎn)品、已制造的產(chǎn)品、可天然含有氨氧化細(xì)菌的產(chǎn)品，或其中已經(jīng)添加或?qū)⒁砑影毖趸?xì)菌的產(chǎn)品。

所述方法可包括測量所述產(chǎn)品中氨氧化細(xì)菌的量或濃度以提供一值。這可以通過測量制劑的pH來實(shí)現(xiàn)。氨氧化細(xì)菌制劑的pH可指示氮氧化的速率，并且還可以指示制劑是否包含污染性生物體。pH可以使用例如包括電極(如氫電極、醌氫醌電極、銻電極、玻璃電極)的pH感測裝置、包括半導(dǎo)體的pH感測裝置或顏色指示試劑(如pH試紙)來測量。在一些實(shí)施方案中，可以培養(yǎng)制劑的樣品以提供氨氧化培養(yǎng)物，然后可以通過測量培養(yǎng)物的pH進(jìn)行測試。

測量產(chǎn)品中氨氧化細(xì)菌的量或濃度以提供一值可以，如將為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的那樣，通過例如使用格里斯試劑(Griess Reagent)，測量氨、銨離子和/或尿素氧化以提供亞硝酸鹽的速率，例如氨、銨離子和/或尿素轉(zhuǎn)化成亞硝酸鹽的速率，或測量樣品中亞硝酸鹽的水平來實(shí)現(xiàn)。測量制劑中亞硝酸鹽的存在或水平也可以實(shí)現(xiàn)以提供一值。在一些實(shí)施方案中，測量所述產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的量或濃度也可以實(shí)現(xiàn)以提供一值。樣品中總蛋白的量或濃度可用于計(jì)算氨氧化細(xì)菌的濃度。

在一些實(shí)施方案中，本公開的方法包括將所述制劑分類為需要添加氨氧化細(xì)菌或不需要添加氨氧化細(xì)菌。這可以通過評價(jià)如以上所討論的測量值以確定其是在預(yù)定值范圍內(nèi)還是預(yù)定值范圍外來實(shí)現(xiàn)。

可將所述值與對應(yīng)于預(yù)定值范圍，例如氨氧化細(xì)菌的量的范圍，例如氨氧化細(xì)菌的濃度范圍的取值范圍做比較。然后可以確定所述值是否在對應(yīng)于預(yù)定值范圍的取值范圍內(nèi)。如果所述值是在對應(yīng)于預(yù)定值范圍的取值范圍內(nèi)，則可將所述產(chǎn)品分類為合格。這可能意味著該產(chǎn)品可適于生產(chǎn)、包裝、投放到商業(yè)中、供應(yīng)或銷售給例如生產(chǎn)商、保健公司、消費(fèi)產(chǎn)品公司(例如化妝品公司或美容用品公司)、衛(wèi)生保健提供者或消費(fèi)者。

如果所述值在對應(yīng)于預(yù)定值范圍的取值范圍外，則可將所述產(chǎn)品分類為不合格。如果所述值是在對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍的取值范圍外，則可進(jìn)一步加工或丟棄所述制劑。如果進(jìn)一步加工所述制劑，如果氨氧化細(xì)菌的量或濃度高于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍，則可稀釋所述制劑。如果進(jìn)一步加工所述制劑，例如，如果所述值在對應(yīng)于預(yù)定值范圍的取值范圍外，例如，低于對應(yīng)預(yù)定范圍的取值范圍，則可添加額外的組分。

在所述值在對應(yīng)于預(yù)定值范圍的取值范圍外的一些實(shí)施方案中，可向所述制劑中添加一定量或濃度的氨氧化細(xì)菌。在其它實(shí)施方案中，可進(jìn)行氨、銨離子和尿素中的一種或多種的添加。在一些實(shí)施方案中，可添加氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的一種或多種的組合。

可進(jìn)行進(jìn)一步評價(jià)以確定如上所述，所述制劑可被分類為合格還是不合格。

可進(jìn)行進(jìn)一步評價(jià)所述產(chǎn)品以確定是否存在污染性生物體，例如致病生物體。這可以通過測試制劑的pH來實(shí)現(xiàn)。致病生物體可包括金黃色葡萄球菌(S.aureus)、銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)、化膿性鏈球菌(S.pyogenes)、鮑曼不動桿菌(A.baumannii)、丙酸桿菌和寡養(yǎng)單胞菌及其組合。這也可通過ingsin生物體負(fù)荷試驗(yàn)實(shí)現(xiàn)，例如將制劑樣品平板接種在LB瓊脂板上并且在30-37℃下將其培養(yǎng)一段時(shí)間，例如約24小時(shí)或更長時(shí)間，以確定致病生物體的存在。這也可以通過使用15S rRNA基因測序?qū)崿F(xiàn)以確定可能存在的病原體。

在一些實(shí)施方案中，可選擇來自所述產(chǎn)品的樣品并且可對該樣品進(jìn)行測試。

對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的濃度的預(yù)定范圍的取值范圍可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。在某些方面，對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍的所述取值范圍低于約10^8，或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/L。

對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的濃度的預(yù)定范圍的取值范圍可介于約10⁸CFU/ml至約10¹⁴CFU/ml。在某些方面，對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍的所述取值范圍低于約10^8、或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

在某些方面，所述制劑可以包含約1x10⁹CFU至約10x10⁹CFU。

對應(yīng)于氨氧化細(xì)菌的量的預(yù)定范圍的所述取值范圍可包括約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，所述制劑可以包含約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌。該范圍可包括約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

本公開的評價(jià)方法可包括評價(jià)來自第一批次，例如供商業(yè)發(fā)布的第一批次的制劑?？稍u價(jià)來自第二批次，例如供商業(yè)發(fā)布的第二批次的制劑?？稍u價(jià)一個(gè)或多個(gè)另外的批次，例如第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十五、第二十、第一百個(gè)批次或更多個(gè)批次，例如，供商業(yè)發(fā)布?？梢栽u價(jià)多個(gè)批次，并且可在預(yù)定時(shí)間或批次間隔評價(jià)額外批次以便，例如評價(jià)隨時(shí)間推移和在生產(chǎn)批次中制劑的稠度，生產(chǎn)批次也可被稱為批量。

本公開的方法可包括評價(jià)來自多個(gè)批次的制劑以確定所述多個(gè)中的每個(gè)批次是否滿足氨氧化細(xì)菌的量或濃度的預(yù)定范圍。

所述批次可包括發(fā)布所述多個(gè)批次。所述多個(gè)批次，例如至少一個(gè)批次，可商業(yè)發(fā)布給例如生產(chǎn)商、保健公司、消費(fèi)產(chǎn)品公司(例如化妝品公司或美容用品公司)、衛(wèi)生保健提供者或消費(fèi)者。

所述批次可同時(shí)或依序制備。同時(shí)可能意味著當(dāng)?shù)诙蔚闹苽溟_始時(shí)，第一批次的制備仍在進(jìn)行，使得存在重疊。這可稱為“同時(shí)”、“伴隨”或“共同”制備。依序可能意味著一個(gè)批次的制備在制備第二批次之前結(jié)束。這在本文中可稱為“連續(xù)”、“順序”或“依序”制備。

可由如上所述的評價(jià)方法，提供組合物，例如制劑或配制物。所述組合物可包含本公開全篇所描述的一種或多種賦形劑，并且可適于局部、鼻部、肺部和胃腸道施用中的一種。所述組合物可大體上不含其它生物體。所述組合物可置于粉劑、化妝品、霜?jiǎng)魻钗?、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶中或作為這些物品提供，并且如本文所述，其還可包含保溫劑、除臭劑、香味劑、著色劑、驅(qū)蟲劑、清潔劑或紫外線阻隔劑。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含選自由乳酸桿菌屬、鏈球菌屬、雙歧桿菌屬及其組合組成的組的生物體。

本文描述的，例如通過所述評價(jià)方法提供的組合物可用作皮膚病癥的治療或預(yù)防，與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防，體臭的治療或預(yù)防，向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療，或抑制微生物生長的治療。

所述組合物可用于治療以下的至少一種：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

在某些方面，本文描述的組合物可用于治療以下的至少一種：糖尿病足潰瘍中的感染、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻和皮膚感染。

本文描述的，例如通過所述評價(jià)方法提供的組合物可包含下述產(chǎn)品中的至少一種，作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，本文描述的，例如通過所述評價(jià)方法提供的組合物可包含下述產(chǎn)品中的至少一種，作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、撲面粉、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、口腔衛(wèi)生用品、漱口水、浴用香皂、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；曬黑制劑，例如凝膠、乳霜和液體。

5.評價(jià)受試者的方法

提供了評價(jià)受試者的方法。所述方法可包括評價(jià)受試者以便施加氨氧化細(xì)菌。這可以包括自我評價(jià)，其中受試者評價(jià)其自身的狀況，例如皮膚狀況，或其健康狀況，并評價(jià)是否向其自身施用或施加氨氧化細(xì)菌。這還可包括由另一個(gè)體，例如衛(wèi)生保健專業(yè)人員對受試者的評價(jià)，以評價(jià)受試者的狀況，例如皮膚狀況，或其健康狀況，并評價(jià)是否向受試者施用或施加氨氧化細(xì)菌，或建議受試者或另一個(gè)體向受試者施用或施加氨氧化細(xì)菌。所述方法可用于確定所述受試者是否符合施加氨氧化細(xì)菌的要求。

所述方法可包括評估所述受試者的皮膚狀況。響應(yīng)于所述評估，進(jìn)行以下中的一項(xiàng)：(1)將所述受試者分類為需要氨氧化細(xì)菌；以及(2)施用氨氧化細(xì)菌。這樣可以提供確定受試者是否符合施加氨氧化細(xì)菌的要求的方法。受試者可以進(jìn)行評估步驟，或另一個(gè)體可以進(jìn)行評估步驟。在一些實(shí)施方案中，受試者可以被分類為不需要氨氧化細(xì)菌。在這些實(shí)施方案中，受試者可以不施用氨氧化細(xì)菌。

可以評估的皮膚病癥或皮膚病狀可選自由以下組成的組：皮炎、全身性瘙癢、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、大皰性表皮松解癥和過敏。

所述方法可包括從所述受試者的表面獲得樣品。這可涉及從受試者的表面獲得樣品的任何方法，例如使受試者的表面，例如皮膚，接觸擦拭物、布、棉球、棉簽、紗布、毛巾、小毛巾或其它材料，以便從所述表面獲得細(xì)菌樣品。一旦取得樣品，就可測試所述材料的表面以便確定組分是否存在。

根據(jù)要測試的組分，可建議所得到的推薦治療。例如，如果確定氨氧化細(xì)菌存在，則可以不采取行動。可選地，可按預(yù)定濃度或量向受試者，例如受試者的表面，例如皮膚施用或施加額外的氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子或尿素。這可取決于所述存在或檢測到的水平是否被確定為充足，例如是否在將適于治療受試者病狀的取值范圍內(nèi)。

如果確定存在氨、銨離子或尿素，則可以或可以不采取行動。例如，如果確定存在氨、銨離子或尿素，則可以或可以不按預(yù)定濃度或量向受試者，例如受試者的表面，例如皮膚施用或施加氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種。

如果確定存在一種或多種致病性細(xì)菌，則可以或可以不采取行動。例如，如果確定存在致病性細(xì)菌，則可以或可以不按預(yù)定濃度或量向受試者，例如受試者的表面，例如皮膚施用或施加氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種。

如果確定存在亞硝酸鹽和一氧化氮中的一種或多種，則可以或可以不采取行動。例如，如果確定存在亞硝酸鹽和/或一氧化氮，則可以或可以不按預(yù)定濃度或量向受試者，例如受試者的表面，例如皮膚施用或施加氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種。

可測定存在的組分的水平。這可以是定量或定性測定。例如，可測定組分的量或濃度。這個(gè)量或濃度可用于確定氨氧化細(xì)菌的施用或施加是否是需要或期望的，或其它化合物，例如氨、銨離子或尿素的施用或施加是否是需要或期望的。

可將測定的量或濃度與對應(yīng)于量或濃度的預(yù)定范圍的取值范圍做比較?？纱_定所述量或濃度是在對應(yīng)于預(yù)定范圍的取值范圍之內(nèi)還是之外。

在某些方面，如果所述量或濃度是在對應(yīng)于預(yù)定范圍的取值范圍內(nèi)，則可將所述產(chǎn)品分類為合格。在某些其它方面，如果所述量或濃度是在對應(yīng)于預(yù)定范圍的取值范圍外，則可將所述產(chǎn)品分類為合格。

在某些方面，如果所述量或濃度是在對應(yīng)于預(yù)定范圍的取值范圍內(nèi)，則可將所述產(chǎn)品分類為不合格。在某些其它方面，如果所述量或濃度是在對應(yīng)于預(yù)定范圍的取值范圍外，則可將所述產(chǎn)品分類為不合格。

如果所述量或濃度被分類為不合格，則可以進(jìn)行氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種的施用或施加。如果所述量或濃度被分類為合格，則可不進(jìn)行氨氧化細(xì)菌、氨、銨離子和尿素中的至少一種的施用或施加。

氨氧化細(xì)菌濃度的預(yù)定范圍可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。在某些方面，氨氧化細(xì)菌濃度的預(yù)定范圍可低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/L。

氨氧化細(xì)菌濃度的預(yù)定范圍可介于約10⁸CFU/ml至約10¹⁴CFU/ml之間。在某些方面，氨氧化細(xì)菌濃度的預(yù)定范圍可低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

氨氧化細(xì)菌量的預(yù)定范圍可包含約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，預(yù)定范圍可介于約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌之間。該范圍可包括約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

施用或施加的氨氧化細(xì)菌的濃度可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L。在某些方面，施用或施加的氨氧化細(xì)菌的濃度可低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/L。

施用或施加的氨氧化細(xì)菌的濃度可介于約10⁸CFU/ml至約10¹⁴CFU/ml。在某些方面，施用或施加的氨氧化細(xì)菌的濃度可低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

施用或施加的氨氧化細(xì)菌的量可包含約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，施用或施加的量可包含約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌。施用或施加的量可包含約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

6.制備AOB產(chǎn)品的方法

提供了制備包含氨氧化細(xì)菌的產(chǎn)品的方法。所述制備可以或可以不涉及添加額外的(例如)外源性氨氧化細(xì)菌以提供含氨氧化細(xì)菌的產(chǎn)品，或?yàn)楫a(chǎn)品補(bǔ)充額外的氨氧化細(xì)菌。

這種方法可包括測量制劑中氨氧化細(xì)菌的量或濃度。測量可以提供一值。響應(yīng)于所述值，可將所述制劑分類為需要氨氧化細(xì)菌或不需要氨氧化細(xì)菌。

如果將所述制劑分類為需要氨氧化細(xì)菌，則所述方法還可包括添加一定量或濃度的氨氧化細(xì)菌。另外，或在替代方案中，該方法還可包括向所述制劑中添加一定量或濃度的氨、銨離子和尿素中的至少一種。這可以基于測量的值。添加這些組分中的一種或多種可以提供可以商業(yè)發(fā)布的產(chǎn)品。

在某些方面，響應(yīng)于值的測量，可使所述制劑進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布所述產(chǎn)品的步驟，不添加氨氧化細(xì)菌。

可將通過本文討論的方法提供的產(chǎn)品(包括制劑)包裝到包裝，例如容器中，然后可將包裝投入商業(yè)中。所述包裝可包括無菌或滅菌隔室。所述包裝可大體上不含其它生物體。所述包裝可大體上不含防腐劑或含有防腐劑或其它組分，例如，如本公開中所討論的賦形劑或螯合劑。

所述產(chǎn)品可以在容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置中提供。氨氧化細(xì)菌可呈生長狀態(tài)或儲存狀態(tài)。容器中可包括其它組分，如氨、銨離子和/或尿素。額外的組分可處于與氨氧化細(xì)菌分開的隔室或腔室內(nèi)，并且在致動容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置后，或在遞送內(nèi)容物后，氨氧化細(xì)菌可與容器的其它組分接觸，例如混合。

7.強(qiáng)化天然產(chǎn)品

可通過本公開強(qiáng)化天然產(chǎn)品。天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可包含泥、水、食源性產(chǎn)品、植物源性產(chǎn)品、提取物和油中的至少一種。天然產(chǎn)品可用于美容和治療應(yīng)用中，例如用于美容產(chǎn)品，例如治療產(chǎn)品，例如溫泉療法中。

天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可摻入到粉末、乳霜、洗劑、包裹物、擦洗液、眼膜、面膜、體膜、氣霧劑、噴霧、藥膏、擦拭物、棒狀物、繃帶或浸泡液中的至少一種中。

天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或者可置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如防曬凝膠、防曬霜和防曬液及室內(nèi)曬黑制劑。

可用氨氧化細(xì)菌強(qiáng)化天然產(chǎn)品。另外，或在替代方案中，可用氨、銨離子和/或尿素強(qiáng)化天然產(chǎn)品。在某些方面，天然產(chǎn)品可天然包含氨氧化細(xì)菌(即，從天然來源獲得，未添加氨氧化細(xì)菌，例如無人為干預(yù))。在某些方面，天然產(chǎn)品可天然包含氨、銨離子和/或尿素。氨氧化細(xì)菌可呈生長狀態(tài)或儲存狀態(tài)。

強(qiáng)化天然產(chǎn)品可包括測量天然產(chǎn)品中氨氧化細(xì)菌的量或濃度。測量可以提供一值。響應(yīng)于所述值，將所述天然產(chǎn)品分類為需要氨氧化細(xì)菌或?qū)⑺鎏烊划a(chǎn)品分類為不需要氨氧化細(xì)菌。

可向天然產(chǎn)品中添加一定量或濃度的氨氧化細(xì)菌。這可響應(yīng)于測量的值，和/或響應(yīng)于如上所述的分類進(jìn)行。這樣可提供強(qiáng)化的天然產(chǎn)品。

可向天然產(chǎn)品中添加一定量或濃度的氨、銨離子和尿素。這可響應(yīng)于測量的值，和/或響應(yīng)于如上所述的分類進(jìn)行。這樣可提供強(qiáng)化的天然產(chǎn)品。

響應(yīng)于測量的值，可使所述天然產(chǎn)品進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布天然產(chǎn)品的步驟，不添加氨氧化細(xì)菌。

也可使強(qiáng)化的天然產(chǎn)品進(jìn)入下一商業(yè)發(fā)布強(qiáng)化的天然產(chǎn)品的步驟。

可將通過本文討論的方法提供的產(chǎn)品，例如天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品(包括包含一種或多種天然產(chǎn)品的制劑)包裝到包裝，例如容器中，然后可將包裝投入商業(yè)中。所述包裝可包括無菌或滅菌隔室。所述包裝可大體上不含其它生物體。所述包裝可大體上不含防腐劑或含有防腐劑或其它組分，例如，如本公開中所討論的賦形劑或螯合劑。

所述產(chǎn)品可以在容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置中提供。氨氧化細(xì)菌可呈生長狀態(tài)或儲存狀態(tài)。容器中可包括其它組分，如氨、銨離子和/或尿素。額外的組分可處于與氨氧化細(xì)菌分開的隔室或腔室內(nèi)，并且在致動容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置后，或在遞送內(nèi)容物后，氨氧化細(xì)菌可與容器的其它組分接觸，例如混合。

有或無內(nèi)容物的包裝、容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置的重量可低于約50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。

所述包裝、天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可作為粉劑、化妝品、霜?jiǎng)?、棒狀物、氣溶膠、藥膏、擦拭物或繃帶提供，置于其中或包含它們。

可用以強(qiáng)化天然產(chǎn)品或天然產(chǎn)品可包含的氨氧化細(xì)菌的濃度范圍可介于約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L之間。在某些方面，氨氧化細(xì)菌的濃度范圍低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/L。

可用以強(qiáng)化天然產(chǎn)品或天然產(chǎn)品可包含的氨氧化細(xì)菌的濃度范圍可介于約10⁸CFU/ml至約10¹⁴CFU/ml之間。在某些方面，氨氧化細(xì)菌的濃度范圍低于約10⁸或介于約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³、或10¹³-10¹⁴CFU/ml。

可用以強(qiáng)化天然產(chǎn)品或天然產(chǎn)品可包含的氨氧化細(xì)菌量的范圍可介于約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，該范圍可介于約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌之間。該范圍可包括約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

在一些實(shí)施方案中，天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可以包含質(zhì)量比在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑。天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品可以包含質(zhì)量比在約0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑。

8.包含氨氧化細(xì)菌的組合物

本公開尤其提供了包含氨氧化細(xì)菌的組合物，例如，氨氧化細(xì)菌的制劑或氨氧化細(xì)菌的純化制劑，例如，天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品?？梢栽诿廊莓a(chǎn)品或治療產(chǎn)品中提供包含氨氧化細(xì)菌的組合物，例如，氨氧化細(xì)菌的制劑或氨氧化細(xì)菌的純化制劑，例如，天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品。所述制劑可以包含尤其是氨、銨離子和尿素中的至少一種。

在一些方面，本公開提供了具有限定數(shù)量的物種的組合物。例如，本發(fā)明提供了一種組合物，其具有氨氧化細(xì)菌，或更具體地具有一個(gè)屬的氨氧化細(xì)菌，或更具體地具有一個(gè)種類的氨氧化細(xì)菌，例如歐洲亞硝化單胞菌和另一類型的生物體且無其它類型的生物體。在其它實(shí)例中，所述組合物具有氨氧化細(xì)菌，或更具體地具有一個(gè)屬的氨氧化細(xì)菌，或更具體地具有一個(gè)種類的氨氧化細(xì)菌，例如歐洲亞硝化單胞菌和另外2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)類型的生物體且無其它類型的生物體。適用于此目的的氨氧化細(xì)菌包括亞硝化單胞菌屬、亞硝化球菌屬、亞硝化螺菌屬、亞硝化囊菌屬、亞硝化葉菌屬或亞硝化孤菌屬的細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，在氨氧化細(xì)菌的制劑中可以包括除了氨氧化細(xì)菌以外的一種或多種其它生物體。例如，可以在氨氧化細(xì)菌的制劑中提供選自由乳酸桿菌屬、鏈球菌屬、雙歧桿菌屬及其組合組成的組的屬的生物體。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可大體上不含其它生物體。

在一些實(shí)施方案中，包含氨氧化細(xì)菌的組合物提供支持氨氧化細(xì)菌活力的條件。例如，所述組合物可以促進(jìn)氨氧化細(xì)菌生長和代謝，或者可以促進(jìn)本文所述的休眠狀態(tài)(例如，冷凍)或儲存狀態(tài)，活的氨氧化細(xì)菌可以從所述休眠狀態(tài)和儲存狀態(tài)恢復(fù)。當(dāng)所述組合物促進(jìn)生長或代謝時(shí)，其可以包含水和/或氨氧化細(xì)菌消耗的營養(yǎng)物，例如銨離子、氨、尿素、氧、二氧化碳或微量礦物質(zhì)。

氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含約10⁸CFU/L至約10¹⁴CFU/L。所述制劑可以包含至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹、10¹²、2x10¹²、5x10¹²、10¹³、2x10¹³、5x10¹³或10¹⁴；或約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/L。

氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含約10⁸至約10¹⁴CFU/ml。所述制劑可以包含至少10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、2x10¹¹、5x10¹¹、10¹²、2x10¹²、5x10¹²、10¹³、2x10¹³、5x10¹³或10¹⁴；或約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰、10¹⁰-10¹¹、10¹¹-10¹²、10¹²-10¹³或10¹³-10¹⁴CFU/L。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以包含約1x10⁹至約10x10⁹CFU/L。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以包含約3x10¹⁰CFU，例如3x10¹⁰CFU/天。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以包含約1x10⁹至約10x10⁹CFU，例如約1x10⁹至約10x10⁹CFU/天。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含約0.1毫克(mg)至約1000mg氨氧化細(xì)菌。在某些方面，所述制劑可以包含約50mg至約1000mg氨氧化細(xì)菌。所述制劑可以包含約0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-1000mg。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以包含質(zhì)量比在約0.1克/升至約1克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑。所述制劑可以包含質(zhì)量比在約0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范圍內(nèi)的氨氧化細(xì)菌與賦形劑。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌的制劑可以是于緩沖溶液中的氧化細(xì)菌，所述緩沖溶液包含磷酸二鈉和氯化鎂，基本上由或由磷酸二鈉和氯化鎂(例如50mM Na₂HPO₄和2mM MgCl₂)組成。所述制劑可于緩沖液中按例如約0.1至約100液量盎司、約0.2至約50液量盎司、約0.5至約25液量盎司、約1.0至約10液量盎司、約2.0至約7液量盎司、約3至約5液量盎司的預(yù)定體積提供。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可于容器中提供。所述制劑可于構(gòu)造為容納約3.4液量盎司或本文公開的任何其它體積的容器中提供。所述制劑可以呈可能能夠被噴霧、噴射或霧化的形式，即呈霧狀形式的形式。

氨氧化細(xì)菌可以與一種或多種賦形劑，例如一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑組合。在一些實(shí)施方案中，“藥學(xué)上可接受的賦形劑”是指藥學(xué)上可接受的物質(zhì)、組合物或媒介物，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或封裝材料。在一些實(shí)施方案中，每種賦形劑從與藥物配制物的其它成分相容的意義上說是“藥學(xué)上可接受的”，并且適用于接觸人類和動物的組織或器官，而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)、免疫原性或與合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的其它問題或并發(fā)癥。參見Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版；Lippincott Williams&Wilkins：Philadelphia，Pa.，2005；Handbook of Pharmaceutical Excipients，第6版；Rowe等人編輯；The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association：2009；Handbook ofPharmaceutical Additives，第3版；Ash和Ash編輯；Gower Publishing Company：2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation，第2版；Gibson編輯；CRC Press LLC：Boca Raton，F(xiàn)la.，2009。

在一些實(shí)施方案中，美容上可接受的賦形劑是指美容上可接受的物質(zhì)、組合物或媒介物，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或封裝材料。在一些實(shí)施方案中，每種賦形劑從與美容配制物的其它成分相容的意義上說是美容上可接受的，并且適用于接觸人類和動物的組織或器官，而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)、免疫原性或與合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的其它問題或并發(fā)癥。

雖然活性成分(例如，氨氧化細(xì)菌)可以單獨(dú)施用，但在許多實(shí)施方案中，其存在于藥物配制物、制劑或組合物，或美容配制物、制劑或組合物中。因此，本公開提供一種藥物配制物(制劑或組合物)或美容配制物(制劑或組合物)，其包含氨氧化細(xì)菌和藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑。藥物組合物和美容組合物可以呈如下所述的配制物的形式。

本文所述的藥物和美容配制物(例如，制劑或組合物)可包括那些適用于口服(例如，經(jīng)由胃腸道或?yàn)榱顺练e在胃腸道中的目的)、腸胃外(包括皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))、吸入(包括可以通過各種類型的定量加壓氣霧劑、噴霧器或吹入器產(chǎn)生的細(xì)顆粒粉劑或細(xì)霧，并且包括經(jīng)鼻內(nèi)(鼻部)或經(jīng)肺(肺部))、直腸和局部(包括皮膚、經(jīng)皮、經(jīng)粘膜、口腔、舌下和眼內(nèi))施用的配制物，但最合適的途徑可以取決于例如接受者的病狀和病癥。

配制物(例如，制劑或組合物)可以方便地以單位劑型呈現(xiàn)，并且可以通過藥學(xué)或美容學(xué)領(lǐng)域中已知的任何方法來制備。通常，方法包括使活性成分(例如，氨氧化細(xì)菌)與組成一種或多種輔助成分的藥物或美容載體締合的步驟。通常，所述配制物是通過使活性成分與液體載體或微細(xì)固體載體或兩者均勻且緊密地締合且然后在必要時(shí)使產(chǎn)品成型為所需配制物來制備。

配制物可以呈現(xiàn)為離散單位如膠囊劑、扁囊劑或片劑，每個(gè)單位含有預(yù)定量的氨氧化細(xì)菌；呈現(xiàn)為粉劑或顆粒劑；呈現(xiàn)為在水性液體或非水性液體中的溶液劑或混懸劑；或呈現(xiàn)為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。活性成分還可以呈現(xiàn)為大丸劑、藥糖劑或糊劑。各種藥學(xué)上可接受的載體及其配制物描述于標(biāo)準(zhǔn)配制論文例如E.W.Martin所著的Remington′s Pharmaceutical Sciences中。還參見Wang，Y.J.和Hanson，M.A.，Journal of Parenteral Science and Technology，Technical Report No.10，Supp.42：2S，1988。

所述氨氧化細(xì)菌配制物、組合物或制劑可以例如以適于立即釋放或控釋(長期釋放)的形式來施用。合適的緩釋系統(tǒng)的實(shí)例包括合適的聚合物材料，例如呈成形制品的形式(例如，薄膜或微膠囊)的半滲透性聚合物基質(zhì)；合適的疏水性材料，例如作為在可接受的油中的乳劑；或離子交換樹脂。控釋(長期釋放)系統(tǒng)的施用方式可以為：口服；經(jīng)直腸；腸胃外；腦池內(nèi)；陰道內(nèi)；腹膜內(nèi)；局部，例如作為粉末、軟膏、凝膠、滴劑或透皮貼劑；口腔；或作為噴霧劑。

可以適當(dāng)?shù)嘏渲朴糜谑┯玫闹苿┮砸鸢毖趸?xì)菌的控制釋放。例如，配制物、制劑或組合物可以為包含生物體可降解聚合物、多糖膠凝和/或生物體粘附聚合物或兩親性聚合物中的一種或多種的顆粒形式。這些組合物表現(xiàn)出允許活性物質(zhì)控釋的某些生物體相容性特征。參見美國專利第5,700,486號。所述制劑可包含控釋材料。

示例性組合物，例如，作為制劑，可包括混懸液，其可以含有例如用于賦予體積的微晶纖維素、藻酸或作為懸浮劑的藻酸鈉、作為增粘劑的甲基纖維素、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂和/或乳糖和/或其它賦形劑、粘合劑、增量劑、崩解劑、稀釋劑和潤滑劑、甘露醇、乳糖、蔗糖和/或環(huán)糊精。此類配制物中還可以包括高分子量賦形劑如纖維素(微晶纖維素(avicel))或聚乙二醇(PEG)。此類配制物還可以包括用于輔助粘膜粘附的賦形劑，如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(SCMC)、馬來酸酐共聚物(例如，Gantrez)，以及用于控制釋放的試劑如聚丙烯酸類共聚物(例如，Carbopol 934)。還可以添加潤滑劑、表面活性劑、助流劑、香料、著色劑和穩(wěn)定劑以便于制造和使用。表面活性劑可以是兩性離子型表面活性劑、非離子型表面活性劑或陰離子型表面活性劑。

可以用于本公開的實(shí)施方案的賦形劑如表面活性劑可以包括下列中的一個(gè)或多個(gè)：椰油酰胺丙基甜菜堿(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如，Tween 80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸鈉/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜堿(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸鈉(例如，RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如，Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸鈉(Plantaren 200)、布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂、布朗納博士的嬰兒肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸鈉(Stepanol-WA Extra K)及其組合。布朗納博士的卡斯蒂利亞肥皂包含水、有機(jī)椰子油、氫氧化鉀、有機(jī)橄欖油、有機(jī)fair deal麻油、有機(jī)荷荷巴油、檸檬酸和生育酚。

在一些實(shí)施方案中，表面活性劑可以以允許亞硝酸鹽產(chǎn)生發(fā)生的量與氨氧化細(xì)菌一起使用。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以具有少于約0.0001％至約10％的表面活性劑。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以具有約0.1％至約10％的表面活性劑。在一些實(shí)施方案中，所用的表面活性劑的濃度可以在約0.0001％至約10％之間。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以大體上不含表面活性劑。

在一些實(shí)施方案中，配制物例如制劑可以包括可增強(qiáng)氨氧化細(xì)菌的效力或增強(qiáng)治療或指示的其它組分。

在一些實(shí)施方案中，制劑中可以包括螯合劑。螯合劑可以是可以與另一種化合物(例如，金屬)結(jié)合的化合物。螯合劑可以幫助從環(huán)境中去除不想要的化合物，或可以以保護(hù)方式起到減少或消除特定化合物與環(huán)境(例如，氨氧化細(xì)菌，例如氨氧化細(xì)菌的制劑，例如賦形劑)的接觸的作用。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以大體上不含螯合劑。

配制物(例如制劑，包括天然產(chǎn)品和強(qiáng)化的天然產(chǎn)品)還可以含有抗氧化劑、緩沖劑、防止非所需細(xì)菌生長的抑菌劑、溶質(zhì)以及可以包括懸浮劑和增稠劑的水性和非水性無菌混懸液。所述配制物可以呈現(xiàn)在單位劑量或多劑量容器(例如，密封的安瓿和小瓶)中，并且可以儲存在僅需要在使用前立即加入無菌液體載體(例如，鹽水或注射用水)的冷凍干燥(凍干)條件下。臨時(shí)性溶液和混懸液可以由先前所描述的種類的粉末、顆粒和片劑制備。示例性組合物包括溶液或混懸液，其可以含有例如合適的無毒的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或溶劑，如甘露醇、1，3-丁二醇、水、林格氏溶液、等滲氯化鈉溶液，或其它合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑，包括合成的單甘油酯或二甘油酯，以及脂肪酸，包括油酸或Cremaphor。水性載體可以是例如在約3.0至約8.0的pH、約3.5至約7.4(例如3.5至6.0，例如3.5至約5.0)的pH下的等滲緩沖溶液。有用的緩沖劑包括檸檬酸鈉-檸檬酸和磷酸鈉-磷酸，以及乙酸鈉/乙酸緩沖劑。在一些實(shí)施方案中，組合物不包括氧化劑。

可以包括的賦形劑是例如蛋白質(zhì)，如人血清白蛋白或血漿制劑。必要時(shí)，藥物組合物，例如制劑，還可以含有少量的無毒輔助物質(zhì)，諸如潤濕劑或乳化劑、表面活性劑、防腐劑和pH緩沖劑等，例如乙酸鈉或山梨糖醇酐單月桂酸酯。在一些實(shí)施方案中，賦形劑(例如，藥學(xué)上可接受的賦形劑或美容上可接受的賦形劑)可以包括抗粘附劑、粘合劑、涂層劑、崩解劑、填充劑、調(diào)味劑、著色劑、潤滑劑、助流劑、吸附劑、防腐劑或甜味劑。在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以大體上不含賦形劑。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以大體上不含本公開中所列的化合物或物質(zhì)中的一種或多種。

用于氣霧劑施用的示例性組合物包括鹽水溶液，其可以含有例如芐醇或其它合適的防腐劑、用于提高生物體利用度的吸收促進(jìn)劑和/或其它增溶劑或分散劑。方便的是，在用于氣霧劑施用的組合物中，氨氧化細(xì)菌是以從加壓包裝或噴霧器的氣霧劑噴霧表現(xiàn)的形式，使用合適的推進(jìn)劑(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體)來遞送。在加壓氣霧劑的情況下，劑量單位可以通過提供閥以遞送計(jì)量的量來確定?？梢詫⒂衫缑髂z制成的膠囊和藥盒配制成含有氨氧化細(xì)菌和合適的粉末基質(zhì)(例如，乳糖或淀粉)的粉末混合物。在某些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌是作為氣霧劑，通過氣霧劑適配器(又稱致動器)從定量閥施用。任選地，還包括穩(wěn)定劑，且/或包括用于深肺遞送的多孔顆粒(例如，參見美國專利第6,447,743號)。所述組合物或制劑可以呈可能能夠被噴霧、噴射或霧化的形式，即呈霧狀形式的形式。氨氧化細(xì)菌的制劑可以是于緩沖溶液中的氧化細(xì)菌，所述緩沖溶液包含磷酸二鈉和氯化鎂，基本上由或由磷酸二鈉和氯化鎂(例如50mM Na₂HPO₄和2mM MgCl₂)組成。

配制物可以與載體如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇一起呈現(xiàn)。此類載體在常溫下通常為固體，但在體溫下液化和/或溶解以釋放氨氧化細(xì)菌。

用于局部施用的示例性組合物包括局部載體如Plastibase(與聚乙烯一起膠化的礦物油)。在一些方面，所述組合物，例如制劑和/或賦形劑可以是液體、固體或凝膠中的一個(gè)或多個(gè)的形式。例如，液體混懸劑可以包括但不限于水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水或氨氧化儲存緩沖液。

凝膠配制物可以包括但不限于瓊脂、二氧化硅、聚丙烯酸(例如)、羧甲基纖維素、淀粉、瓜耳膠、藻酸鹽或殼聚糖。

在一些實(shí)施方案中，所述配制物，例如制劑可以補(bǔ)充有氨源，包括但不限于氨、銨離子(例如，氯化銨或硫酸銨)和尿素中的一種或多種。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌組合物，例如制劑被配制來提高NO滲透到皮膚中。凝膠形成材料如KY膠或各種發(fā)膠將形成NO損失到環(huán)境空氣中的擴(kuò)散障礙，從而提高NO的皮膚吸收。皮膚中的NO水平一般不會大大超過20nM/L，因?yàn)樵撍郊せ頖C并且將會引起局部血管舒張和過量NO的氧化破壞。

應(yīng)當(dāng)理解的是，除了上文特別提到的成分，如本文所述的配制物(例如制劑)可以包括在涉及所討論的制劑類型的領(lǐng)域中常用的其它試劑。

所述配制物(例如，制劑，例如組合物)可以提供在容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置中，所述容器、遞送系統(tǒng)或遞送裝置具有包括或不包括容器的內(nèi)容物可以小于約50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克的重量。

合適的單位劑量配制物是含有如前文所述的有效劑量或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的氨氧化細(xì)菌的那些單位劑量配制物。

治療有效量的氨氧化細(xì)菌可以作為單脈沖劑量、作為單次劑量或作為隨時(shí)間施用的脈沖劑量來施用。因此，在脈沖劑量中，提供氨氧化細(xì)菌的推注施用，在隨后的時(shí)間段中將氨氧化細(xì)菌施用給受試者，接著進(jìn)行第二次推注施用。在具體的非限制性實(shí)例中，在一天期間、在一周期間或在一個(gè)月期間施用脈沖劑量。

在一些實(shí)施方案中，可以施用氨氧化細(xì)菌的制劑(例如，配制物，例如組合物)預(yù)定的天數(shù)。這可以至少部分基于例如病狀或疾病的嚴(yán)重程度、治療反應(yīng)、施用劑量和給藥頻率。例如，可以施用所述制劑約1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、84-91天，例如約1個(gè)月、約2個(gè)月、約3個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，施用氨氧化細(xì)菌無限期的時(shí)間，例如，大于一年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。

在一些實(shí)施方案中，可以每天施用氨氧化細(xì)菌的制劑(例如，配制物，例如組合物)預(yù)定的次數(shù)。這可以至少部分基于例如病狀或疾病的嚴(yán)重程度、治療反應(yīng)、施用劑量和給藥頻率。例如，可以每天施用所述制劑1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24次。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可以每天施用一次。在其它實(shí)施方案中，所述制劑可以每天施用兩次。在一些實(shí)施方案中，可以在某幾天施用第一預(yù)定量的所述制劑，且在隨后的某幾天施用第二預(yù)定量的所述制劑。在一些實(shí)施方案中，可以施用所述制劑約16天。

氨氧化細(xì)菌可以與多種消費(fèi)產(chǎn)品相關(guān)，且此類產(chǎn)品的實(shí)例如下所述。在一些實(shí)施方案中，將與產(chǎn)品相關(guān)的氨氧化細(xì)菌與所述產(chǎn)品混合，例如均勻地散布在整個(gè)產(chǎn)品中，并且在一些實(shí)施方案中，與產(chǎn)品相關(guān)的氨氧化細(xì)菌層疊在所述產(chǎn)品上。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與粉末相關(guān)。粉末通常是小顆粒固體，它們彼此不粘附并且在傾斜時(shí)可以自由流動。消費(fèi)用途的示例性粉劑包括滑石粉和一些化妝品(例如，粉底霜，包括粉餅)?？梢钥紤]其它粉劑，連同本公開的氨氧化細(xì)菌系統(tǒng)和方法一起使用。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與化妝品相關(guān)。化妝品可以是旨在改變個(gè)人的外觀的供局部施用的物質(zhì)，例如，粉底液、粉底霜、腮紅或唇膏?；瘖y品可以是在食品和藥物管理法規(guī)中例如根據(jù)21C.F.R.§720.4所列舉的任何物質(zhì)。

所述制劑，例如化妝品，可以是下述產(chǎn)品中的至少一種：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；眼妝制劑，例如眉筆、眼線筆、眼影、洗眼劑、眼部卸妝液、睫毛膏；香料制劑，例如古龍香水、花露水、香水、香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、直發(fā)膏、燙發(fā)劑、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、敷料、毛發(fā)梳理助劑、卷發(fā)液；染發(fā)制劑，例如發(fā)用染料和顏料、染發(fā)劑、染發(fā)漂洗劑、染發(fā)洗發(fā)劑、淺色染發(fā)劑、頭發(fā)漂白劑；化妝制劑，例如撲面粉、粉底、腿部和身體涂劑、唇膏、妝前底霜、胭脂、定妝劑；美甲制劑，例如底部涂層和內(nèi)部涂層、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、指甲延長物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗劑；口腔衛(wèi)生用品，例如牙粉、漱口水和口氣清新劑；浴用香皂和清洗劑、除臭劑、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑、胡須軟化劑、滑石粉、剃須前洗劑、剃須膏、剃須皂；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、脫毛劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如凝膠、乳霜和液體及室內(nèi)曬黑制劑。

在一些實(shí)施方案中，本文描述的配制物、組合物或制劑可包含下述產(chǎn)品中的至少一種，作為下述產(chǎn)品中的至少一種提供或置于下述產(chǎn)品中的至少一種中：嬰兒用品，例如嬰兒洗發(fā)劑、嬰兒洗劑、嬰兒油、嬰兒粉、嬰兒霜；浴用制劑，例如浴油、浴皂、浴鹽、泡沫浴、浴用膠囊；香粉(噴粉和滑石粉)、香囊；發(fā)用制劑，例如護(hù)發(fā)素、漂洗劑、洗發(fā)劑、滋補(bǔ)劑、撲面粉、角質(zhì)層軟化劑、指甲霜和洗劑、口腔衛(wèi)生用品、漱口水、浴用香皂、灌洗液、女性衛(wèi)生除臭劑；剃須用制劑，例如剃須后洗劑；護(hù)膚制劑，例如清潔劑、面部和頸部、身體和手、腳部粉劑和噴霧、保溫劑、夜用制劑、膏狀面膜、皮膚清新劑；和曬黑制劑，例如凝膠、乳霜和液體。

可以向藥物配制物，例如制劑或美容制劑中添加由美容配制物領(lǐng)域的技術(shù)人員選擇的其它組分，諸如(例如)水、礦物油、著色劑、香料、蘆薈、甘油、氯化鈉、碳酸氫鈉、pH緩沖劑、紫外線阻隔劑、硅油、天然油、維生素E、草藥濃縮物、乳酸、檸檬酸、滑石、粘土、碳酸鈣、碳酸鎂、氧化鋅、淀粉、尿素和異抗壞血酸，或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其它賦形劑(包括本文中所公開的那些)。

在一些實(shí)施方案中，所述制劑可置于粉末、化妝品、乳霜、棒狀物、氣霧劑、藥膏、擦拭物或繃帶中，或作為這些來提供。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與乳霜相關(guān)。乳霜可以是包含增稠劑的流體，且一般具有允許其均勻涂敷在皮膚上的稠度。示例性乳霜包括保溫乳液、面霜和潤膚霜。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與棒狀物相關(guān)。棒狀物通常是當(dāng)放置成與表面接觸時(shí)將棒狀物內(nèi)容物的一些轉(zhuǎn)移到表面的固體。示例性棒狀物包括除臭棒、唇膏、棒狀潤唇膏和防曬霜涂抹棒。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與氣霧劑相關(guān)。氣霧劑通常是微細(xì)固體顆?；蛭⒓?xì)液滴在氣體如空氣中的膠體。氣霧劑可以通過將氨氧化細(xì)菌(和任選載體)放置在處于壓力下的容器中，然后打開閥門以釋放內(nèi)容物來產(chǎn)生。所述容器可以被設(shè)計(jì)為僅施加與氨氧化細(xì)菌活力相容的壓力水平。例如，僅可以短時(shí)間施加高壓力，且/或壓力可以足夠低而不損害活力。氣霧劑的消費(fèi)用途的實(shí)例包括用于防曬霜、除臭劑、香水、發(fā)膠和驅(qū)蟲劑。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與藥膏相關(guān)。藥膏可以是具有液體或奶油樣稠度的局部施用劑，其旨在保護(hù)皮膚或促進(jìn)愈合。藥膏的實(shí)例包括燒傷膏和潤膚液。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與擦拭物相關(guān)。擦拭物可以是適于將液體或乳霜局部施加到皮膚上的柔性材料。擦拭物可以是例如紙基或布基的。示例性擦拭物包括紙巾和濕巾。

包含氨氧化細(xì)菌的組合物還可以包含保溫劑、除臭劑、香味劑、著色劑、驅(qū)蟲劑、清潔劑或紫外線阻隔劑中的一種或多種。

例如，保溫劑可以是減少或防止皮膚干燥的試劑。示例性的保溫劑包括潤濕劑(例如，尿素、甘油、α-羥基酸和聚二甲基硅氧烷)和潤膚劑(例如，羊毛脂、礦物油和礦脂)。保溫劑可以包括在例如含有氨氧化細(xì)菌的乳霜、香脂、洗劑或防曬霜中。

除臭劑可以是減少非所需的氣味的試劑。除臭劑可以通過直接中和氣味、防止排汗或防止產(chǎn)生氣味的細(xì)菌的生長來起作用。示例性的除臭劑包括鋁鹽(例如，氯化鋁或羥基氯化鋁)、環(huán)甲硅油、滑石、小蘇打、香精油、礦物鹽、啤酒花和金縷梅。除臭劑通常存在于除臭噴霧或除臭棒中，并且還可以發(fā)現(xiàn)于一些皂類和服裝中。

驅(qū)蟲劑可以是能夠被施加至表面(例如，皮膚)以阻止昆蟲和其它節(jié)肢動物停落在該表面上的試劑。驅(qū)蟲劑包括DEET(N，N-二乙基-間-甲苯甲酰胺)、對-薄荷烷-3，8-二醇(PMD)、?？ㄈ鸲?icaridin)、荊芥內(nèi)酯(nepetalactone)、香茅油、印楝油、沼澤番石榴、肼基甲酸酯二甲酯、三環(huán)癸烯基烯丙醚和IR3535(3-[N-丁基-N-乙?；鵠-氨基丙酸乙酯)。

清潔劑可以是從表面如皮膚去除污物或非所需的細(xì)菌的試劑。示例性清潔劑包括條皂、液體皂和洗發(fā)劑。

紫外線阻隔劑可以是能夠被施加到表面上以減少表面的紫外光接收量的試劑。紫外線阻隔劑可以阻隔UV-A和/或UV-B光線。紫外線阻隔劑可以通過吸收、反射或散射紫外線而起作用。示例性紫外線阻隔劑包括吸收劑，例如，胡莫柳酯(homosalate)、奧替柳酯(octisalate)(又稱水楊酸辛酯)、奧西諾酯(octinoxate)(又稱甲氧基肉桂酸辛酯或OMC)、奧克立林(octocrylene)、羥苯甲酮和阿伏苯宗(avobenzone)；以及反射劑(例如，二氧化鈦和氧化鋅)。紫外線阻隔劑通常存在于防曬霜中，并且還可以發(fā)現(xiàn)于護(hù)膚霜和一些化妝品中。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與護(hù)發(fā)素相關(guān)。護(hù)發(fā)素通常是指可以施加于毛發(fā)以改善其外觀、強(qiáng)度或順滑性的具有奶油樣稠度的物質(zhì)。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與布料相關(guān)。布料通常是指適用于制成服裝的柔性材料，例如，其具有足夠的材料強(qiáng)度來承受穿著者的日常運(yùn)動。布料可以是纖維的、織造的或針織的；它可以由天然存在的材料或合成材料制成。示例性布料包括棉、亞麻、羊毛、苧麻、絲、牛仔布、皮革、尼龍、聚酯和氯綸及其共混物。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與紗相關(guān)。紗通常是指適合于針織或編織的細(xì)長柔性紡成材料。紗可以由例如羊毛、棉、聚酯和其共混物制成。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與線相關(guān)。線通常是指適合于縫紉的細(xì)長柔性紡成材料。線通常具有比紗更細(xì)的直徑。線可以由例如棉、聚酯、尼龍、絲及其共混物制成。

還可以用氨氧化細(xì)菌處理服裝制品，如(例如)鞋類、鞋墊、睡衣、運(yùn)動鞋、皮帶、帽子、襯衫、內(nèi)衣、運(yùn)動服裝、頭盔、毛巾、手套、襪子、繃帶等。還可以用氨氧化細(xì)菌處理床上用品，包括床單、枕頭、枕套和毛毯。在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌還可以接觸在一段時(shí)間內(nèi)不能清洗的皮膚區(qū)域。例如，封閉在矯形鑄件(其在愈合過程中固定受傷肢體)中的皮膚，以及為了適當(dāng)愈合而必須保持干燥的接近受傷處的區(qū)域可以受益于與氨氧化細(xì)菌的接觸。

在一些方面，本公開提供了一種可穿戴制品，其包含氨氧化細(xì)菌或如本文所述的氨氧化細(xì)菌?？纱┐髦破房梢允悄軌蚺c使用者的身體密切相連而不妨礙行走的輕質(zhì)制品。可穿戴制品的實(shí)例包括手表、腕帶、頭帶、頭筋、發(fā)網(wǎng)、浴帽、帽子、假發(fā)和珠寶。包含本文所述的氨氧化細(xì)菌的可穿戴制品可以例如在提供下列中的一種或多種的濃度下提供：皮膚病癥的治療或預(yù)防、與低亞硝酸鹽水平相關(guān)的疾病或病狀的治療或預(yù)防、體臭的治療或預(yù)防、向受試者供應(yīng)一氧化氮的治療或抑制微生物生長的治療。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌與旨在接觸毛發(fā)的產(chǎn)品(例如，刷子、梳子、洗發(fā)劑、護(hù)發(fā)素、頭帶、頭筋、發(fā)網(wǎng)、浴帽、帽子和假發(fā))相關(guān)。在頭發(fā)上，在頭發(fā)上形成的遠(yuǎn)離皮膚表面形成的一氧化氮可以被捕獲在帽子、頭巾或面罩內(nèi)并引導(dǎo)至吸入的空氣中。

接觸人類受試者的表面的制品如尿布可以與氨氧化細(xì)菌相關(guān)。因?yàn)槟虿急辉O(shè)計(jì)成保持和容納由失禁個(gè)體產(chǎn)生的尿液和糞便，尿液和糞便中的尿素可以被皮膚和糞便細(xì)菌水解而形成游離氨，所述游離氨具有刺激性且可能導(dǎo)致尿布疹。摻入將尿素代謝成亞硝酸鹽或硝酸鹽的細(xì)菌(如氨氧化細(xì)菌)可以避免游離氨的釋放，并且可以釋放亞硝酸鹽并最終釋放NO，它們可以有助于維持兒童和失禁成人的健康皮膚。一氧化氮在尿布中的釋放還可以對存在于人類糞便中的致病生物體具有抗微生物作用。這種作用即使在一次性尿布被作為廢物處置后仍可以持續(xù)，并且可以通過接觸弄臟的一次性尿布而減少疾病傳播的發(fā)生。

在一些實(shí)施方案中，包裝含氨氧化細(xì)菌的產(chǎn)品。包裝可以用于壓縮產(chǎn)品或保護(hù)其免受損壞、污垢或降解。包裝可以包括例如塑料、紙、紙板或木材。在一些實(shí)施方案中，包裝是不透細(xì)菌的。在一些實(shí)施方案中，包裝可滲透氧氣和/或二氧化碳。

9.用氨氧化細(xì)菌治療的方法

本公開提供了使用氨氧化細(xì)菌治療疾病和病狀的各種方法，例如通過施用氨氧化細(xì)菌，例如氨氧化細(xì)菌的制劑，例如天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品或包含天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品組合物、制劑或配制物。可以評價(jià)受試者，例如評價(jià)以便施加氨氧化細(xì)菌，例如在向受試者施用氨氧化細(xì)菌制劑之前。

可用于治療疾病和病狀的氨氧化細(xì)菌包括本申請中描述的所有氨氧化細(xì)菌組合物，例如氨氧化細(xì)菌的制劑、天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品，或包含天然產(chǎn)品或強(qiáng)化的天然產(chǎn)品組合物、制劑或配制物。

例如，本公開提供了氨氧化細(xì)菌的組合物用于治療病狀或疾病(例如，抑制受試者皮膚上的微生物生長)的用途。在實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌可用于治療潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍，例如糖尿病性潰瘍，例如糖尿病足潰瘍)、慢性傷口、痤瘡(例如，尋常痤瘡)、酒渣鼻、濕疹、蕁麻疹或銀屑病。

本公開的系統(tǒng)和方法可以提供或含有可用于治療或預(yù)防皮膚病癥，治療或預(yù)防與低亞硝酸鹽水平有關(guān)的疾病或病狀，治療或預(yù)防體臭，治療以向受試者供應(yīng)一氧化氮，或治療以抑制微生物生長的內(nèi)容物。

本公開的系統(tǒng)和方法可以用于減少環(huán)境中(例如，受試者的表面)的非所需細(xì)菌的量。

本公開的系統(tǒng)和方法可提供或含有用于治療以下的至少一種的內(nèi)容物：HIV、皮炎、潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)中的感染(例如糖尿病足潰瘍中的感染)、過敏性皮炎、痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、接觸性皮炎、過敏反應(yīng)、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染、血管疾病、陰道酵母菌感染、性傳播疾病、心臟病、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、繼發(fā)于糖尿病或臥床的下肢潰瘍、心絞痛(特別是慢性穩(wěn)定型心絞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注損傷、蹄葉炎、高血壓、肥厚性器官退化、雷諾氏現(xiàn)象、纖維化、纖維化器官退化、過敏、自身免疫性致敏、終末期腎病、肥胖、陽痿、肺炎、原發(fā)性免疫缺陷病、大皰性表皮松解癥或癌癥。

本公開的系統(tǒng)和方法可提供或含有用于治療以下的至少一種的內(nèi)容物：痤瘡(例如尋常痤瘡)、濕疹、銀屑病、蕁麻疹、酒渣鼻、皮膚感染和傷口(例如感染的傷口)。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌用于治療受試者。受試者可以包括動物、哺乳動物、人、非人類動物、家畜動物或伴侶動物。

在一些實(shí)施方案中，本文所述的氨氧化細(xì)菌用于抑制其它生物體的生長。例如，氨氧化細(xì)菌可以良好地適于長期定植于人類皮膚，并且在一些實(shí)施方案中，它競爭過在皮膚上非所需的其它細(xì)菌。非所需的皮膚細(xì)菌包括例如那些可以感染傷口、提高疾病的風(fēng)險(xiǎn)或嚴(yán)重程度或產(chǎn)生氣味的細(xì)菌。非所需的細(xì)菌可以被稱為致病性細(xì)菌。某些非所需的皮膚細(xì)菌包括金黃色葡萄球菌(S.aureus)、銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)、化膿性鏈球菌(S.pyogenes)、鮑曼不動桿菌(A.baumannii)、丙酸桿菌和寡養(yǎng)單胞菌。本文所述的氨氧化細(xì)菌可以通過例如消耗稀少的營養(yǎng)物或產(chǎn)生有害于其它生物體的副產(chǎn)物(例如，使皮膚的pH變成不利于非所需生物體生長的水平)競爭過其它生物體。

因此，本公開尤其提供了一種抑制受試者皮膚上的微生物生長的方法，其包括向有需要的人局部施用有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。類似地，本公開提供了用于抑制受試者皮膚上的微生物生長的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。同樣地，本公開提供了氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)用于抑制受試者皮膚上的微生物生長的藥劑中的用途。

本公開還提供了一種向受試者供應(yīng)一氧化氮的方法，其包括將有效劑量的本文所述的氨氧化細(xì)菌放置在緊鄰所述受試者處。類似地，本公開提供了用于向受試者供應(yīng)一氧化氮的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。同樣地，本公開提供了氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)適于放置在緊鄰受試者處的藥劑或組合物中的用途。

本公開還提供了一種減少體臭的方法，其包括向有需要的受試者局部施用有效劑量的本文所述的氨氧化細(xì)菌。類似地，本公開提供了用于減少受試者的體臭的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。同樣地，本公開提供了如本文所述的氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)用于減少體臭的藥劑或組合物中的用途。

本公開還提供了一種治療或預(yù)防與低亞硝酸鹽水平有關(guān)的疾病的方法，其包括向有需要的受試者局部施用治療有效劑量的本文所述的氨氧化細(xì)菌。類似地，本公開提供了用于治療與低亞硝酸鹽水平有關(guān)的疾病的如本文所述的氨氧化細(xì)菌的局部用配制物。同樣地，本公開提供了如本文所述的氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)用于治療與低亞硝酸鹽水平有關(guān)的疾病的局部用藥劑中的用途。

本公開還提供了一種治療或預(yù)防皮膚病癥或皮膚感染的方法，其包括向有需要的受試者局部施用治療有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。類似地，本公開提供了用于治療受試者中的皮膚病癥的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。同樣地，本公開提供了如本文所述的氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)用于治療皮膚病癥的藥劑中的用途。在實(shí)施方案中，所述皮膚病癥是痤瘡(例如尋常痤瘡)、酒渣鼻、濕疹、銀屑病或蕁麻疹；所述皮膚感染是膿皰病。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的氨氧化細(xì)菌治療痤瘡(例如尋常痤瘡)；和/或通過酸化的亞硝酸鹽和NO產(chǎn)生來限制和/或抑制與尋常痤瘡有關(guān)的痤瘡丙酸桿菌的擴(kuò)散和增殖。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌治療酒渣鼻可以涉及由于NO生成所引起的下調(diào)。這可能是由于Kazal型KLK5/KLK7抑制劑的表達(dá)，其可以減少人抗菌肽(cathelicidin)LL-37從其前體前肽hCAP18的形成。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌治療濕疹和/或過敏性皮炎可以涉及由于NO生成所引起的炎癥下調(diào)；和/或通過酸化的亞硝酸鹽和NO產(chǎn)生來限制和/或抑制金黃色葡萄球菌和經(jīng)常與過敏性皮炎中的極高的定植率和皮膚負(fù)荷有關(guān)的其它皮膚病原體的擴(kuò)散和增殖。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的本文所述的氨氧化細(xì)菌治療銀屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎癥下調(diào)以及人抑菌肽LL-37形成的減少。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌治療銀屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎癥下調(diào)。

雖然不希望受理論的束縛，但提出了用治療有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌治療膿皰病或其它皮膚感染和軟組織感染可以涉及限制和/或抑制金黃色葡萄球菌(S.aureus)、銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)、化膿性鏈球菌(S.pyogenes)、鮑曼不動桿菌(A.baumannii)、丙酸桿菌和寡養(yǎng)單胞菌的擴(kuò)散和增殖。

本公開還提供了一種促進(jìn)傷口愈合的方法，其包括向傷口施用有效劑量的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。類似地，本公開提供了用于治療傷口的如本文所述的氨氧化細(xì)菌。同樣地，本公開提供了如本文所述的氨氧化細(xì)菌在生產(chǎn)用于治療傷口的藥劑或組合物中的用途。

如本文所述的氨氧化細(xì)菌可以用于促進(jìn)愈合能力受損的患者(例如，糖尿病患者)中的傷口愈合。

在一些實(shí)施方案中，本公開提供了使用如本文所述的氨氧化細(xì)菌來預(yù)防疾病或病癥(例如，皮膚病癥)的方法。在某些實(shí)施方案中，預(yù)防意指相比于類似的未經(jīng)治療的受試者降低受試者發(fā)展疾病的風(fēng)險(xiǎn)。需要將所述風(fēng)險(xiǎn)降低至零。

沐浴頻率降低的個(gè)體(如宇航員、潛艇船員、戰(zhàn)役期間的軍事人員、偏遠(yuǎn)地區(qū)的民工、難民、臥床不起的個(gè)體和許多其它人)可以通過將氨氧化細(xì)菌保持在皮膚上來維持更健康的皮膚。關(guān)于臥床不起的個(gè)體，在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌通過擴(kuò)張不充分循環(huán)來降低褥瘡的頻率或嚴(yán)重性。

應(yīng)當(dāng)理解，許多現(xiàn)代的退行性疾病可能由缺乏NO種類所引起，且外部皮膚上的氨氧化細(xì)菌可以通過擴(kuò)散供應(yīng)那些種類，并且對皮膚施用氨氧化細(xì)菌解決長期的醫(yī)療狀況。在某些實(shí)施方案中，向受試者施加氨氧化細(xì)菌以抵消現(xiàn)代的沐浴實(shí)踐，尤其是陰離子去污劑從外部皮膚上除去氨氧化細(xì)菌。

局部施加的一種合適的方法為施加足夠的氨氧化細(xì)菌，然后穿上足夠的衣物，以便誘導(dǎo)出汗。然而，許多人將希望得到氨氧化細(xì)菌的益處，同時(shí)維持他們當(dāng)前的沐浴習(xí)慣，在這種情況下，可以連同足夠的底物一起施用所述細(xì)菌的培養(yǎng)物以供它們產(chǎn)生NO。接近人類汗液的無機(jī)組成的營養(yǎng)液可以用于此目的。利用適于接近人類汗液的培養(yǎng)基的細(xì)菌使它們在被施用時(shí)適應(yīng)的時(shí)間減至最少。由于汗液一旦分泌到皮膚表面上便蒸發(fā)，因此使用具有較高離子強(qiáng)度的培養(yǎng)基是理想的。約兩倍于人類汗液的濃度是合適的，但還考慮了其它條件。NH₃或尿素、O₂、CO₂和礦物質(zhì)通常滿足氨氧化細(xì)菌的營養(yǎng)需求。在一些實(shí)施方案中，所述底物包含微量礦物質(zhì)，其包括鐵、銅、鋅、鈷、鉬、錳、鈉、鉀、鈣、鎂、氯化物、磷酸鹽、硫酸鹽或其任何組合。

在一些實(shí)施方案中，本公開提供了一種通過將含有氨氧化細(xì)菌的繃帶施加到傷口上來治療所述傷口的方法。還提供了生產(chǎn)此類繃帶的方法。所述繃帶可以包括例如將繃帶固定在傷口附近的未受損皮膚上的粘附部分以及包覆或覆蓋傷口的柔軟的柔性部分。在一些實(shí)施方案中，所述繃帶不包含除氨氧化細(xì)菌以外的其它生物體體。所述繃帶可以由可滲透材料制成，所述可滲透材料在繃帶被施加至傷口上時(shí)允許氣體如氧氣和二氧化碳觸及氨氧化細(xì)菌。在某些實(shí)施方案中，所述繃帶包含用于氨氧化細(xì)菌的營養(yǎng)物，如銨、氨、尿素或微量礦物質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述繃帶包含氨氧化細(xì)菌耐受的抗生素。所述抗生素抗性可以產(chǎn)生自一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源性抗性基因或產(chǎn)生自一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)基因。

在一些實(shí)施方案中，氨氧化細(xì)菌例如，氨氧化細(xì)菌的制劑，以每次施用或每天約10⁸-10⁹CFU、10⁹-10¹⁰CFU、10¹⁰-10¹¹CFU、10¹¹-10¹²CFU、10¹²-10¹³CFU或10¹³-10¹⁴CFU的劑量施用。在一些實(shí)施方案中，按約10⁹-10¹⁰CFU，約1x10⁹-5x10⁹、1x10⁹-3x10⁹或1x10⁹-10x10⁹CFU；或約10¹⁰-10¹¹CFU，例如約1x10¹⁰-5x10¹⁰，1x10¹⁰-3x10¹⁰，或1x10¹⁰-2x10¹⁰CFU；或約10¹¹-10¹²CFU，例如約1x10¹¹-5x10¹¹、1x10¹¹-3x10¹¹或1x10¹¹-2x10¹¹CFU；或約10¹²-10¹³CFU，例如約1x10¹²-5x10¹²、1x10¹²-3x10¹²或1x10¹²-2x10¹²CFU；或約10¹³-10¹⁴CFU，例如約1x10¹³-5x10¹³、1x10¹³-3x10¹³或1x10¹³-2x10¹³CFU的劑量局部施用氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，以每劑約1-2、2-5、5-10、10-15、12-18、15-20、20-25或25-50的體積施用氨氧化細(xì)菌。在一些實(shí)施方案中，溶液的濃度為約10⁸-10⁹、10⁹-10¹⁰或10¹⁰-10¹¹CFU/ml。在一些實(shí)施方案中，每天以兩個(gè)15ml劑量施用氨氧化細(xì)菌，其中每個(gè)劑量的濃度為10⁹CFU/ml。

在一些實(shí)施方案中，每天施用氨氧化細(xì)菌一次、兩次、三次或四次。在一些實(shí)施方案中，每周施用氨氧化細(xì)菌一次、兩次、三次、四次、五次或六次。在一些實(shí)施方案中，在沐浴后不久施用氨氧化細(xì)菌。在一些實(shí)施方案中，在睡覺前不久施用氨氧化細(xì)菌。

在一些實(shí)施方案中，施用氨氧化細(xì)菌約1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、84-91天，例如約1個(gè)月、約2個(gè)月、約3個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，施用氨氧化細(xì)菌無限期的時(shí)間，例如，大于一年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。

在某些方面，本公開提供了組合療法，其包括氨氧化細(xì)菌和第二治療劑。例如，本公開提供了物理混合的兩種(或更多種)療法的物理混合物。在其它實(shí)施方案中，將兩種(或更多種)療法作為單獨(dú)的配制物組合施用。第二療法可以是例如藥物制劑、手術(shù)或治療有關(guān)疾病或病癥的任何其它醫(yī)療方法。以下段落描述能夠治療潰瘍(例如糖尿病潰瘍)、慢性創(chuàng)傷、痤瘡(例如尋常痤瘡)、酒渣鼻、濕疹和銀屑病的組合療法。組合療法可以治療下肢靜脈性潰瘍。

例如，在能夠治療潰瘍(例如，靜脈性潰瘍，例如下肢潰瘍，例如下肢靜脈性潰瘍)的組合療法中，例如，第二療法可以包括例如傷口敷料(例如，吸收性填充劑、水凝膠敷料或水膠體)、血管緊張素、血管緊張素類似物、富血小板纖維蛋白療法、高壓氧療法、負(fù)壓傷口療法、清創(chuàng)術(shù)、引流、動脈血管再生、高壓氧療法、低強(qiáng)度激光療法和腓腸肌退縮術(shù)。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

在能夠治療慢性創(chuàng)傷的組合療法中，第二療法可以包括例如抗生素(例如，局部或全身性的，以及殺菌或抑菌的)，如青霉素、頭孢菌素、多粘菌素、利福霉素(rifamycin)、臺勾霉素(lipiarmycin)、喹諾酮類、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類、四環(huán)素類、環(huán)脂肽、甘氨酰環(huán)素類、惡唑烷酮類和臺勾霉素；血管緊張素、血管緊張素類似物；清創(chuàng)術(shù)；引流；傷口沖洗；負(fù)壓傷口療法；加熱；動脈血管再生；高壓氧療法；抗氧化劑，如抗壞血酸、谷胱甘肽、硫辛酸、胡蘿卜素、α-生育酚或泛醇；低強(qiáng)度激光療法；腓腸肌退縮術(shù)；生長因子，如血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣生長因子1-2、血小板源性生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β或表皮生長因子；施加自體血小板，如那些分泌一種或多種生長因子如血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣生長因子1-2、血小板源性生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β或表皮生長因子的自體血小板；角化細(xì)胞培養(yǎng)物的植入；同種異體移植物；膠原蛋白，例如包含膠原蛋白的敷料；或蛋白酶抑制劑如SLPI。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

在能夠治療痤瘡(例如尋常痤瘡)的組合療法中，第二療法可以包括例如藥物治療(例如，全身或局部的)，如過氧化苯甲酰、抗生素(如紅霉素、克林霉素或四環(huán)素)、水楊酸、激素(例如，包括孕激素如去氧孕烯(desogestrel)、諾孕酯(norgestimate)或屈螺酮(drospirenone))；類視色素如維甲酸(tretinoin)、阿達(dá)帕林(adapalene)、他扎羅汀(tazarotene)或異維甲酸(isotretinoin)。第二療法還可以是諸如粉刺摘除、皮質(zhì)類固醇注射或手術(shù)切縫的程序。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

在能夠治療酒渣鼻的組合療法中，第二療法可以包括例如抗生素，例如，口服四環(huán)素抗生素如四環(huán)素、強(qiáng)力霉素或米諾環(huán)素，或局部抗生素如甲硝唑；壬二酸；α-羥基酸；可以開具處方的異維甲酸；檀香油；可樂定(clonidine)；β-阻斷劑如納多洛爾(nadolol)和普萘洛爾(propranolol)；抗組胺藥(如氯雷他定(loratadine))；米氮平(mirtazapine)；甲基磺酰甲烷或水飛薊素(silymarin)，任選地彼此組合；激光，如皮膚血管激光或CO₂激光；或光療法，如強(qiáng)脈沖光、低強(qiáng)度光療法或光子嫩膚術(shù)。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

在能夠治療濕疹的組合療法中，第二療法可以包括例如皮質(zhì)類固醇，如氫化可的松或丙酸氯倍他索；免疫抑制劑(局部或全身的)，如吡美莫司(pimecrolimus)、他克莫司(tacrolimus)、環(huán)孢素、硫唑嘌呤或甲氨蝶呤；或光療法，如利用紫外光。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

在能夠治療銀屑病的組合療法中，第二療法可以包括例如皮質(zhì)類固醇，如去羥米松；類視色素；焦油；維生素D或其類似物，如帕立骨化醇(paricalcitol)或卡泊三醇(calcipotriol)；保溫劑和潤膚劑，如礦物油、凡士林、卡泊三醇、decubal或椰子油；地蒽酚(dithranol)；或醋酸氟輕松(fluocinonide)。組合療法可以包含上述治療中的一種或多種。

10.用于改善氨氧化細(xì)菌治療的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/p>

包含如本文所述的氨氧化細(xì)菌(其任選與另一種療法組合)的治療可以使用許多模型系統(tǒng)加以改善。這些模型系統(tǒng)可以用于確定合適的劑量和施用時(shí)間安排。

例如，對于慢性創(chuàng)傷和潰瘍(例如靜脈性潰瘍，例如糖尿病性潰瘍或本文公開的其它潰瘍)，可以使用小鼠皮膚穿刺模型。這些病癥的其它模型包括豚鼠模型中的受控皮膚缺血、兔耳潰瘍模型、對傷口施用鈣或局部施用阿霉素(doxorubicin)。

對于痤瘡(例如尋常痤瘡)，可以使用(例如)墨西哥無毛犬模型、犀鼠模型或兔耳分析。對于酒渣鼻，可以使用(例如)皮內(nèi)注射LL-37至小鼠皮膚中或敘利亞倉鼠(Syrian hamster)模型。對于濕疹，可以使用(例如)對致敏豚鼠或NC/Nga小鼠的耳部施加粉塵螨(Dermatophagoides farina)的粗提取物，施加二硝基氯苯。對于銀屑病，可以使用(例如)異種移植模型，其中將涉及和未涉及的銀屑病皮膚移植到免疫缺陷小鼠上；對SCID小鼠的皮膚施加針對白介素15的抗體；以及Sharpin^cpdm/Sharpin^cpdm小鼠模型。

11.治療效益的機(jī)制

雖然不希望受理論的束縛，但據(jù)信下列的一種或多種機(jī)制有助于氨氧化細(xì)菌的有益作用，其在通過引用整體并入本文的國際申請WO/2005/030147中被找到。

為了理解這些細(xì)菌有益的方面，理解血管生成是有幫助的。所有的體細(xì)胞，除了那些暴露在幾百微米外界空氣中的細(xì)胞，都從血液供應(yīng)中獲取所有代謝氧氣。氧氣被肺中的血液吸收，作為氧合血紅蛋白被血紅細(xì)胞運(yùn)載到外周組織，在那里和二氧化碳交換，二氧化碳然后被運(yùn)回，從肺中呼出。氧氣必須從紅細(xì)胞中擴(kuò)散，通過細(xì)胞質(zhì)，穿過內(nèi)皮，并穿過各種組織直到到達(dá)利用氧氣的細(xì)胞線粒體。人體內(nèi)含有約5升血液，所以循環(huán)系統(tǒng)的體積與身體的體積相比而言很小。氧氣不能主動被運(yùn)輸。它被動的通過濃度梯度從空氣擴(kuò)散到紅細(xì)胞中，從紅細(xì)胞擴(kuò)散到細(xì)胞中，再從細(xì)胞到消耗氧氣的細(xì)胞色素氧化酶。消耗氧氣部位的氧氣濃度在體內(nèi)是最低的，且O₂通量由擴(kuò)散阻力和濃度梯度決定。完成給所有的外周組織供應(yīng)充足氧氣需要對毛細(xì)血管的大小和位置進(jìn)行敏銳的控制。如果毛細(xì)血管的空間增加，完成同樣的氧氣通量就需要更大的濃度差和因此更低的細(xì)胞色素氧化酶的O₂濃度。毛細(xì)血管之間的細(xì)胞越多，O₂的需求就會更大。如果毛細(xì)血管之間的空間減小，完成器官代謝功能的細(xì)胞的可利用的空間也減小。

在某些方面，來自氨氧化細(xì)菌的NO容易被外皮膚所吸收，且由于外皮膚沒有血紅蛋白而轉(zhuǎn)化成S-亞硝基硫醇。M.Stucker等人在“The cutaneous uptake of atmospheric oxygen contributes significantly to the oxygen supply of human dermis and epidermis”中已經(jīng)表明，外皮膚從外界空氣中接受所有的氧氣。(Journal of Physiology(2002)，538.3，第985-994頁。)這是顯然的，因?yàn)榭梢钥吹酵馄つw基本上沒有紅細(xì)胞。因?yàn)樗鼈兪腔畹模倚枰褐械臓I養(yǎng)而不僅僅是氧氣，所以這些層之間存在血漿循環(huán)。形成的S-亞硝基硫醇是穩(wěn)定的，可以擴(kuò)散通過身體，并構(gòu)成可靠NO的體積源和使蛋白巰基轉(zhuǎn)亞硝基的NO源。

在一些方面，應(yīng)該了解，毛細(xì)血管稀薄是NO水平不足的首要表現(xiàn)之一。F.T.Tarek等人表明，疏松的毛細(xì)血管或者說毛細(xì)血管稀薄在患有原發(fā)性高血壓的人群中較為常見。(Structural Skin Capillary Rarefaction in Essential Hypertension.Hypertension.1999；33：998-1001

許多病狀與毛細(xì)血管密度變得疏松有關(guān)。高血壓是其中一種，且研究者報(bào)道稀疏的毛細(xì)血管也見于原發(fā)性高血壓人群的孩童時(shí)期中以及糖尿病人群中。糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥是高血壓、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性神經(jīng)病。R.Candido等人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，最后兩種病狀的特征是觀察到癥狀之前流向受影響部位的血流量降低。(Haemodynamics in microvascular complications in type 1 diabetes.Diabetes Metab Res Rev 2002；18：286-304.)降低的毛細(xì)血管密度和肥胖癥相關(guān)，且普通體重降低增加毛細(xì)血管密度，如由A Philip等人在“Effect of Weight Loss on Muscle Fiber Type，F(xiàn)iber Size，Capilarity，and Succinate Dehydrogenase Activity in Humans”中所示。The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism第84卷，第11期4185-4190，1999。

研究者已表明，在原發(fā)性雷諾現(xiàn)象(PRP)中，甲襞毛細(xì)血管比正常對照組的稀薄(輕微的)，且比已經(jīng)發(fā)展為全身硬化(SSc)的病人豐富的多。M.Bukhari，Increased Nailfold Capillary Dimensions In Primary Raynaud’s Phenomenon And Systemic Sclerosis.British Journal of Rheumatology，第24卷，第35期：1127-1131，1996。他們發(fā)現(xiàn)毛細(xì)血管密度從35loops/mm²(正常對照組)降到33(PRP組)、17(SSc組)。對照組、PRP組、SSc組毛細(xì)血管支路之間的平均距離分別是18μ、18μ和30μ。

在某些方面，應(yīng)該了解，正常情況下身體用于感受“缺氧”的機(jī)制可影響到調(diào)節(jié)毛細(xì)血管密度的身體系統(tǒng)。根據(jù)本公開的這個(gè)方面，大量的“缺氧”組分被感受到，不是通過O2水平的降低，而是通過一氧NO水平的增加。NO基礎(chǔ)水平的降低干擾了“缺氧”的感受，所以影響了許多通過“缺氧”調(diào)節(jié)的身體功能。例如，貧血通常被定義為“血紅蛋白不足”，血紅蛋白不足的一個(gè)后果就是“缺氧”，它被定義為“氧氣不足”。根據(jù)一些方面，這些普通的定義不能解釋兩種病狀的一氧化氮引起的方面。

在休息狀態(tài)時(shí)，急性等容貧血的耐受性良好。血細(xì)胞比容的2/3的減少對靜脈回流的PvO2影響很小，這暗示了無論是O₂壓還是整個(gè)身體的運(yùn)輸都沒有降低。Weiskopf等人，Human cardiovascular andmetabolic response to acute，severe isovolemic anemia.JAMA 1998，第279卷，第3期，217-221。在降低50％時(shí)(從140到70g Hb/L)，平均PvO2飽和度(大于32個(gè)受試者)從大約77％降到74％。血液中O₂容量的降低通過血管舒張和心率從63增加到85bpm的心動過速來補(bǔ)償。補(bǔ)償是有效而明顯的，然而，機(jī)制卻不是。典型的解釋是“缺氧”感受器檢測到了“缺氧”，并用血管舒張和心動過速的方式補(bǔ)償。然而，卻檢測不到“缺氧“。血液乳酸(厭氧呼吸的標(biāo)志物)輕微地從0.77降到0.62mM/L，暗示了較少厭氧呼吸和較少”缺氧”。靜脈回流PvO2的3％的降低與人的海拔上升300米(通常不會產(chǎn)生心動過速)是同樣水平的“缺氧”。靜脈回流的O₂濃度保持不變，且O₂消耗保持不變，在體內(nèi)沒有O₂濃度降低的空間。因?yàn)镺₂感應(yīng)，等容貧血期間的代償不會發(fā)生。

因此，急性等容貧血中觀察到的血管舒張可歸因于血管壁處的NO濃度增加。NO響應(yīng)剪切應(yīng)力和其它因素介導(dǎo)血管擴(kuò)張。觀察到NO代謝水平?jīng)]有改變，因?yàn)镹O的產(chǎn)生速率沒有改變，且繼續(xù)等于起消耗速率。沒有觀察到“低氧癥”的metHb代償是很容易理解的，因?yàn)閙etHb就像Hb那樣結(jié)合NO，因此當(dāng)Hb降低導(dǎo)致metHb代償時(shí)NO濃度并沒有增加。

一氧化氮在許多代謝途徑中起重要作用。已經(jīng)表明，NO的基本水平在色調(diào)抑制反應(yīng)中發(fā)揮作用，并且這個(gè)基本水平的降低導(dǎo)致這些路徑雙重抑制。Zanzinger等人曾經(jīng)報(bào)道NO抑制基本交感緊張和減弱興奮反射。(Inhibition of basal and reflex-mediated sympathetic activity in the RVLM by nitric oxide.Am.J.Physiol.268(Regulatory Integrative Comp.Physiol.37)：R958-R962，1995。)

在一些方面，應(yīng)該了解，NO體積源的一種組分為低分子量S-亞硝基硫醇，其在無紅細(xì)胞皮膚上通過氨氧化細(xì)菌由外皮膚上產(chǎn)生的NO產(chǎn)生。這些低分子量S-亞硝基硫醇長期穩(wěn)定，并且可以在血漿中自由擴(kuò)散和循環(huán)。多種酶可從多種S-亞硝基硫醇裂解出NO，從而在酶切位點(diǎn)釋放出NO。皮膚上的AOB的這個(gè)NO體積源的損失導(dǎo)致破壞正常生理。身體使用S-亞硝基硫醇遠(yuǎn)離毛細(xì)血管產(chǎn)生NO的優(yōu)點(diǎn)在于從S-亞硝基硫醇生產(chǎn)NO無需O₂。一氧化氮合成酶(NOS)產(chǎn)生NO需要O₂。當(dāng)有足夠的S-亞硝基硫醇背景時(shí)，甚至在缺氧區(qū)域中也可以生成NO。也不需要游離NO，因?yàn)镹O只有與另一個(gè)分子附接時(shí)才發(fā)揮作用，如半胱氨酸殘基的巰基或血紅素的鐵，因此NO的作用可以被轉(zhuǎn)亞硝基化所介導(dǎo)，甚至沒有自由NO而只要有S-亞硝基硫醇和轉(zhuǎn)亞硝基酶存在時(shí)也是可以的。

Frank等人已表明，伴隨普通創(chuàng)傷恢復(fù)的血管生成部分是由提升的VEGF產(chǎn)生的，VEGF是由增加的一氧化氮誘導(dǎo)的。(Nitric oxide triggers enhanced induction of vascular endothelial growth factor expression in cultured keratinocytes(HaCaT)and during cutaneous wound repair.FASEB J.13，2002-2014(1999).)

NO在形成癌癥中起重要作用，表明本文所述細(xì)菌可用于癌癥治療和預(yù)防的方法中。根據(jù)某些方面，應(yīng)該了解，在缺氧期間存在NO可阻止細(xì)胞在缺氧應(yīng)激下分裂，這時(shí)細(xì)胞復(fù)制DNA的錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)較大。一個(gè)相關(guān)的細(xì)胞功能是調(diào)控細(xì)胞周期。這是控制著細(xì)胞如何和何時(shí)復(fù)制DNA、組裝成雙染色體和分裂的調(diào)控程序。細(xì)胞周期的調(diào)控是非常復(fù)雜的，并且沒有完全理解。但是，已知，在細(xì)胞周期的路徑上存在許多點(diǎn)，在這些點(diǎn)上細(xì)胞周期可以被停止，且分裂可以被阻止直至發(fā)生這種情況的狀態(tài)被改善。p53腫瘤抑制蛋白是細(xì)胞周期調(diào)控時(shí)的關(guān)鍵蛋白，且它通過包括DNA損傷的不同細(xì)胞壓力信號啟動細(xì)胞阻滯和凋亡，并且P53在超過一半以上的人類癌癥中發(fā)生突變，如Ashcroft等人在“Stress Signals Utilize Multiple Pathways To Stabilize p53”中所報(bào)道。(MolecularAnd Cellular Biology，2000年5月，第3224-3233頁。)缺氧啟動p53的積累，而且當(dāng)缺氧在調(diào)控細(xì)胞周期中佷重要時(shí)，缺氧單獨(dú)不能誘導(dǎo)p53mRNA效應(yīng)蛋白的下游表達(dá)，因此不能夠引起細(xì)胞周期的停止。Goda等人曾經(jīng)報(bào)道到細(xì)胞阻滯的缺氧誘導(dǎo)需要缺氧-誘導(dǎo)因子-1(HIF-1α)。(Hypoxia-Inducible Factor 1α Is Essential for Cell Cycle Arrest during Hypoxia.Molecular And Cellular Biology，2003年1月，第359-369頁。)Britta等人曾經(jīng)報(bào)道，NO是HIF-1α的主要刺激物之一。(Accumulation ofHIF-1aunder the influence ofnitric oxide.Blood，2001年2月15日，第97卷，第4號。)相比之下，NO引起轉(zhuǎn)錄活性P53的積累，并且引起細(xì)胞周期的阻滯，和引起凋亡。Wang等人，P53 Activation By Nitric Oxide Involves Down-Regulation Of Mdm2。THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY第277卷，第18期，發(fā)行期5月3日，第15697-15702頁，2002。

在本公開的某些方面，應(yīng)該了解，通過阻止會導(dǎo)致缺氧性死亡的毛細(xì)血管稀薄來阻止細(xì)胞壞死性死亡可以防止自身免疫性疾病。當(dāng)細(xì)胞暴露于慢性缺氧時(shí)，反應(yīng)性氧物質(zhì)(ROS)生產(chǎn)增加，且對細(xì)胞代謝機(jī)能的損傷增加，最終導(dǎo)致細(xì)胞DNA的損傷增加。降低的代謝能力，由于ROS和外源性致癌物質(zhì)暴露，將會降低損傷恢復(fù)能力。隨時(shí)間推移，損傷積累，并增加三個(gè)事件的概率：細(xì)胞將缺失抑癌基缺失，且細(xì)胞將變得癌化，細(xì)胞將通過壞死而死亡，或細(xì)胞通過細(xì)胞凋亡而死亡。當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)，無論是壞死還是凋亡，細(xì)胞殘骸必須從那個(gè)部位中清除。死亡細(xì)胞被免疫細(xì)胞，包括樹枝狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所吞噬。當(dāng)這些細(xì)胞吞噬主體，所述主體通過各種蛋白水解酶消化為抗原片段，然后將這些抗原附接至主要組織相容性復(fù)合物(MHC1、MHC2)，并將抗原-MHC復(fù)合物移動到細(xì)胞表面，在那里與它可與T細(xì)胞相互作用，并以各種方式激活T細(xì)胞。任何細(xì)胞損傷都會通過不同方式釋放出刺激免疫系統(tǒng)的輔助因子。一般來說，壞死的細(xì)胞會比凋亡的細(xì)胞刺激更大的免疫反應(yīng)。因此，將免疫細(xì)胞長期暴露于已經(jīng)死亡或正在死亡的細(xì)胞有可能導(dǎo)致自身性免疫疾病。

在某些方面，應(yīng)該了解，低基本NO導(dǎo)致纖維性肥大。一旦清除死亡細(xì)胞后，新的細(xì)胞無法輕易取代其位置，因?yàn)闆]有足夠O₂的支持。任何此類新的細(xì)胞將遭遇相同宿命。空間可保持空置，其這種情況下，器官萎縮，毛細(xì)血管彼此靠的更緊，現(xiàn)在新的細(xì)胞被由正在死亡的細(xì)胞剝奪先前產(chǎn)生的VEGF，所以毛細(xì)血管消失，并重新形成缺氧區(qū)。這可導(dǎo)致受影響的組織全面萎縮。在支持纖維化的組織中，相對惰性的膠原纖維可填充空間。因?yàn)樯眢w對正在討論的特定器官的代謝需求沒有降低，器官就試圖變大，但現(xiàn)在有著大量纖維含量。這可導(dǎo)致纖維性肥大，例如心臟和肝臟的纖維化肥大。一些器官如腦無法變大或變小，因?yàn)樯窠?jīng)和血管的三維連通性很重要，且無法連續(xù)并同時(shí)地映射到不對稱萎縮的腦上?？臻g必須充滿著物質(zhì)，且β-淀粉可能會成為(不太惰性的)空間填充物。腎臟因?yàn)槟I囊而無法變大，所以活細(xì)胞的數(shù)量變少，且它們被纖維化組織替代。如果死亡細(xì)胞被清除，組織萎縮，而且NO/O₂的比例又下降，且毛細(xì)血管又變稀薄。這就形成以下疾病的惡性循環(huán)：終末期腎病、充血性心力衰竭/心臟肥大、原發(fā)性膽汁性肝硬化、阿爾茨海默病、動脈粥樣硬化、發(fā)炎性腸病、瘢痕增生、和以雷諾現(xiàn)象開始并以全身性硬化和原發(fā)性干燥綜合癥結(jié)束的多種結(jié)締組織疾病，其中還觀察到毛細(xì)血管稀薄。Ferrini等人已表明，由于用L-NAME造成的NOS的慢性抑制引起的基礎(chǔ)NO水平的降低導(dǎo)致了心臟和腎臟的全面纖維化。(Antifibrotic Role of Inducible Nitric Oxide Synthase.Nitirc Oxide：Biology and Chemistry第6卷，第3期，第283-294頁(2002)。)可能是低基礎(chǔ)NO導(dǎo)致了纖維性肥大。

在某些方面，應(yīng)該了解，毛細(xì)血管稀薄影響受試者控制食欲的能力。在老人和動物的腦中觀察到毛細(xì)血管稀薄。毛細(xì)血管稀薄與循環(huán)生長因子(包括胰島素樣生長因子-1)的下降相關(guān)。成人腦中的神經(jīng)形成與血管生成相配合。因?yàn)槟X調(diào)節(jié)許多穩(wěn)態(tài)功能，為控制腦成分，毛細(xì)血管間的擴(kuò)散長度增加可“理解”為那些物質(zhì)的血液濃度不足。腦中葡萄糖的通量相當(dāng)接近正常代謝需求，其中葡萄糖通量只比葡萄糖消耗大50至75％，且跨血腦屏障的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體可以是飽和的，甾類特異性的，且不依賴于能量或離子梯度。胃口的大部分調(diào)節(jié)通過腦介導(dǎo)，且毛細(xì)血管稀薄可導(dǎo)致“營養(yǎng)物質(zhì)”(或與“營養(yǎng)物質(zhì)”成比例的標(biāo)記化合物)的充足血液濃度被解讀為不充足。這可能是肥胖癥的一個(gè)原因。

根據(jù)某些方面，應(yīng)該了解，毛細(xì)血管稀薄可以是非胰島素依賴型糖尿病的原因。非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)也稱為代謝綜合征或2型糖尿病，特征為胰島素抗性。身體對胰島素的敏感性降低，且胰島素水平增加?；加蠳IDDM的人具有高血液葡萄糖、高血液三甘油酯，通常很肥胖，有高血壓，且通常具有大量內(nèi)臟脂肪。

NIDDM伴有其它癥狀，毛細(xì)血管稀薄可能為原因。在研究40名患有或未患NIDDM、肥胖癥(BMI 29)和消瘦病(lean)(BMI 24)(每種10名)的男性時(shí)，Konrad等人報(bào)道，對于未患NIDDM的消瘦男性、未患NIDDM的肥胖男性、患有NIDDM的消瘦男性、患有NIDDM的肥胖男性，休息時(shí)的血液乳酸水平分別為1.78、2.26、2.42和2.76(mM/L)。(A-Lipoic acid treatment decreases serum lactate and pyruvate concentrations and improves glucose effectiveness in lean and obese patients with type 2 diabetes.Diabetes Care 22：280-287，1999.)乳酸是無氧糖酵解的量度。當(dāng)O₂不足以通過氧化磷酸化生成ATP時(shí)，細(xì)胞可通過無氧糖酵解產(chǎn)生ATP。無氧糖酵解的產(chǎn)物之一是乳酸，乳酸必須從細(xì)胞排出，否則pH下降，且功能受損。血液乳酸通常在運(yùn)動研究中測到，其中增加暗示了可完成最大氧化工作的工作負(fù)荷。在休息時(shí)較高的乳酸水平將指示休息時(shí)無氧糖酵解增加，這與毛細(xì)血管稀薄相一致。

原發(fā)性膽汁性肝硬化與雷諾現(xiàn)象、瘙癢癥、干燥綜合癥、骨質(zhì)疏松、門靜脈血壓過高、神經(jīng)病和胰功能不全相關(guān)，且肝功能異常與風(fēng)濕性疾病相關(guān)。肝酶升高是肝炎癥的癥狀，肝酶升高是作為“無癥狀”原發(fā)性膽汁性肝硬化的早期癥狀觀察到。因此，本文所述細(xì)菌可用于治療肝炎癥。

Torre等人已經(jīng)報(bào)道，阿爾茨海默病(AD)是微血管疾病，伴隨著低灌注激發(fā)的神經(jīng)性退化，這部分是由一氧化氮不足導(dǎo)致的。(Review：Evidence that Alzheimer’s disease is a microvascular disorder：the role of constitutive nitric oxide，Brain Research Reviews 34(2000)119-136。)因此，本文所述細(xì)菌可用于治療AD。

與高血壓相關(guān)的不利健康影響也可以是低基礎(chǔ)NO的結(jié)果。對血管舒張的反應(yīng)下降也與低基礎(chǔ)NO相一致。NO是從來源擴(kuò)散到傳感器位置的可擴(kuò)散分子，NO在傳感器位置具有信號傳遞效果。因?yàn)镹O水平低，每個(gè)NO來源必須產(chǎn)生較多NO來生成與某一距離的某一強(qiáng)度相等的NO信號。NO在三個(gè)維度擴(kuò)散，且所述擴(kuò)散范圍內(nèi)的全部體積必須提升至將在傳感器位置給出適當(dāng)信號的水平。這可在來源處和來源與傳感器之間導(dǎo)致較高NO水平。接近來源的NO高NO的不利局部效果可由過低NO背景引起。有一些證據(jù)表明實(shí)際上發(fā)生這種情況。在大鼠胰島中，Henningsson等人已報(bào)道，用L-NAME抑制NOS通過誘導(dǎo)iNOS增加總NO生產(chǎn)。(Chronic blockade of NO synthase paradoxically increases islet NO production and modulates islet hormone release.Am J Physiol Endocrinol Metab 279：E95-E107，2000.)通過增加NOS活性增加NO將只能在一定限度下起作用。當(dāng)NOS被活化但未供應(yīng)足夠四氫生物體喋呤(BH4)或L-精氨酸時(shí)，其“解偶聯(lián)”并生成超氧化物(O2-)而非NO。這種O₂^-隨即可以破壞NO。試圖以超過供應(yīng)BH4或L-精氨酸的速率生產(chǎn)NO反而降低NO水平。這可導(dǎo)致正反饋，低的NO水平由于NOS的刺激而變得更糟糕，且解偶聯(lián)的NOS生成大量的O₂^-，造成局部活性氧物質(zhì)(ROS)損傷，如在動脈粥樣硬化、終末期腎病、阿爾茲海默病和糖尿病中所觀察到的那樣。

本文所述細(xì)菌也可以用于延遲衰老跡象。熱量限制延長壽命，且Holloszy報(bào)道，限制食物攝入至隨意對照的70％，將靜坐大鼠的壽命從858天延長至1,051天，延長幾乎25％。(Mortality rate and longevity of food restricted exercising male rats：a reevaluation.J.Appl.Physiol.82(2)：399-403，1997.)熱量限制與延長壽命之間的聯(lián)系已被確立，然而，原因機(jī)制并不清楚。Lopez-Torres等人報(bào)道，檢查大鼠中肝線粒體酶表明，H₂O₂的生產(chǎn)由于與熱量限制相關(guān)的復(fù)合物I活性降低而減少。(Influence Of Aging And Long-Term Caloric Restriction On Oxygen Radical Generation And Oxidative DNA Damage In Rat Liver Mitochondria.Free Radical Biology&Medicine第32卷第9期第882-8899頁，2002。)H₂O₂是由O₂^-歧化產(chǎn)生，它是在呼氣作用期間由線粒體生產(chǎn)的主要ROS。Kushareva等人和其他人提出，O₂^-的主要來源是復(fù)合物I，它通過來自復(fù)合物III(琥珀酸鹽還原位點(diǎn))的電子逆流催化NAD/NADH氧化還原對。提出的老化自由基理論假定，自由基對細(xì)胞DNA、抗氧化劑系統(tǒng)和DNA修復(fù)系統(tǒng)的傷害隨著年齡累積，且當(dāng)關(guān)鍵系統(tǒng)的損傷到無法修復(fù)的程度，隨即死亡。(The Free Radical Theory of Aging Matures.Physiol.Rev.78：547-581，1998.)

作為另一機(jī)制，Vasa等人已經(jīng)證實(shí)，NO激活端粒酶并延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老。(Nitric Oxide Activates Telomerase and Delays Endothelial Cell Senescence.Circ Res.2000；87：540-542.)低基礎(chǔ)NO將通過解除細(xì)胞色素氧化酶抑制來增加基礎(chǔ)代謝速率。增加的基礎(chǔ)代謝還將增加細(xì)胞再生和生長速率。毛細(xì)血管稀薄通過誘導(dǎo)慢性缺氧可增加自由基損傷，且還可增加細(xì)胞再生，且因此通過兩種機(jī)制加速老化。

在一些方面，應(yīng)該了解自養(yǎng)氨氧化細(xì)菌可產(chǎn)生過敏和自身性免疫疾病的保護(hù)方面。最為人所知的自身免疫疾病可能是1型糖尿病，它是由通過免疫系統(tǒng)破壞胰腺中的產(chǎn)胰島素細(xì)胞引起的。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)也與自身性免疫疾病相關(guān)，其中陽性自體免疫抗體的數(shù)量與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的次數(shù)呈正相關(guān)。全身性硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性肝炎和各種風(fēng)濕病是自身性免疫疾病的其它實(shí)例。觀察到，施用AOB減少過敏、枯草熱，如WO/2005/030147中所述。

AOB借以對過敏和自身性免疫疾病發(fā)揮保護(hù)作用的一個(gè)機(jī)制是通過產(chǎn)生一氧化氮，主要是通過調(diào)節(jié)抑制NF-KB和防止免疫細(xì)胞活化和誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。NF-KB是上調(diào)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，且這些基因中的許多與炎癥和免疫反應(yīng)相關(guān)，包括導(dǎo)致釋放細(xì)胞因子、趨化因子和各種粘附因子。這些各種免疫因子導(dǎo)致免疫細(xì)胞遷移到它們的釋放位點(diǎn)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。已顯示，組成型NO生產(chǎn)通過防止IKBα降解穩(wěn)定IKBα(NF-KB的抑制劑)而抑制NF-KB。

Xu等人已證實(shí)，施用NO供體防止大鼠中實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎的發(fā)展。(SIN-1，a Nitric Oxide Donor，Ameliorates Experimental Allergic Encephalomyelitis in Lewis Rats in the Incipient Phase：The Importance of the Time Window.The Joumal of Immunology，2001，166：5810-5816.)在此研究中，已證實(shí)，施用NO供體減少巨噬細(xì)胞浸潤中樞神經(jīng)系統(tǒng)，減少血液單核細(xì)胞增生，并增加血液單核細(xì)胞凋亡。所有這些結(jié)果都被認(rèn)為降低了誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的程度和嚴(yán)重性。

低基礎(chǔ)NO可通過以下機(jī)制導(dǎo)致自閉癥，所述機(jī)制為由于基礎(chǔ)一氧化氮不足，不足以在腦中形成新的連接。盡管不希望限制于理論，但在一些實(shí)施方案中，通過NO調(diào)節(jié)神經(jīng)連接的形成。在這些情況下，任何降低NO擴(kuò)散范圍的條件都可以減小可經(jīng)歷連接的腦要素的體積尺寸。在低基礎(chǔ)NO水平條件下發(fā)育的腦可布置在小體積要素中，因?yàn)镹O的有效范圍減小。

自閉癥個(gè)體中呈現(xiàn)的其它癥狀也可以將低NO指定為病因，包括音高辨別增加、腸道紊亂、免疫系統(tǒng)異常、腦血流量減少、腦葡萄糖消耗增加、血漿乳酸增加、依附障礙和哼唱。這些癥狀中的每一種都可以歸因于低基礎(chǔ)NO水平。

Takashi Ohnishi等人已經(jīng)報(bào)道，自閉癥個(gè)體的血流量減少。Takashi Ohnishi等人，Abnormal regional cerebral blood flow in childhood autism.Brain(2000)，123，1838-1844.J.M.Rumsey等人已報(bào)道，自閉癥個(gè)體的葡萄糖消耗增加。Rumsey JM，Duara R，Grady C，Rapoport JL，Margolin RA，Rapoport SI，Cutler NR.自閉癥的腦代謝。用正電子發(fā)射斷層掃描測量靜息腦葡萄糖利用率。Arch Gen Psychiatry，1985年5月；42(5)：448-55(摘要)。D.C.Chugani已報(bào)道，自閉癥個(gè)體的血漿乳酸水平增加。Chugani DC等人，Evidence of altered energy metabolism in autistic children。Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry.1999年5月；23(4)：635-41。出現(xiàn)這些效果可能是腦中毛細(xì)血管稀薄的結(jié)果，腦中毛細(xì)血管稀薄可減少血流量和O₂供應(yīng)，使得腦的一些代謝負(fù)荷可通過糖酵解而非氧化磷酸化產(chǎn)生。

已經(jīng)由B.A.Klyachko等人證明一氧化氮通過離子通道的cGMP修飾增加后超極化而增加神經(jīng)元的興奮性。Vitaly A.Klyachko等人，cGMP-mediated facilitation in nerve terminals by enhancement of the spike aner hyperpolarization.Neuron，第31卷，1015-1025，2001年9月27日。C.Sandie等人已經(jīng)表明，抑制NOS減少吃驚。Carmen Sandi等人，Decreased spontaneous motor activity and startle response in nitric oxide synthase inhibitor-treated rats.European Joumal of Pharmacology277(1995)89-97。已經(jīng)利用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和那不勒斯高興奮(NHE)大鼠建立注意力缺陷多動障礙(ADHD)模型。Raffaele Aspide等人已經(jīng)表明，這兩個(gè)模型在急性NOS抑制期間的注意力缺陷加劇。Raffaele Aspide等人，Non-selective attention and nitric oxide in putative animal models of attention-deficit hyperactivity disorder.Behavioral Brain Research 95(1998)123-133。因此，本文的細(xì)菌可用于治療ADHD。

M.R.Dzoljic還表明抑制NOS可抑制睡眠。M.R.Dzoljic，R.de Vries，R.van Leeuwen.Sleep and nitric oxide：effects of 7-nitro indazole，inhibitor of brain nitric oxide synthase.Brain Research 718(1996)145-150。G.Zoccoli已經(jīng)報(bào)道，當(dāng)NOS受到抑制時(shí)，睡眠期間的多個(gè)生理作用被改變，包括眼球快速運(yùn)動和腦循環(huán)的睡眠-清醒區(qū)別。G.Zoccoli等人，Nitric oxide inhibition abolishes sleep-wake differences in cerebral circulation.Am.J.Physiol.Heart Circ Physiol 280：H2598-2606，2001。L.Kapas等人已表明，NO供體促進(jìn)非-REM睡眠，然而，這些增加比NO供體的持續(xù)時(shí)間持續(xù)長得多的時(shí)間，暗示可能是反彈效應(yīng)。Levente Kapas等人Nitric oxide donors SIN-1 and SNAP promote nonrapid-eye-movement sleep in rats.Brain Research Bullitin，第41卷，第5期，第293-298頁，1996。M.Rosaria等人，Central NO facilitates both penile erection and yawning。Maria Rosaria Melis and Antonio Argiolas。Role of central nitric oxide in the control of penile erection and yawning。Prog Neuro-Psychopharmacol&Biol.Phychiat.1997，第21卷，第899-922頁。P.Tani等人已報(bào)道，失眠常見于患有亞斯伯格氏綜合征(Asperger’s)的成人中。Pekka Tani等人，Insomnia is a frequent finding in adults with Asperger′s syndrome。BMC Psychiatry 2003，3：12.Y.Hoshino還在自閉癥兒童中觀察到睡眠障礙。Hoshino Y，Watanabe H，Yashima Y，Kaneko M，Kumashiro H.An investigation on sleep disturbance of autistic children.Folia Psychiatr Neurol Jpn.1984；38(1)：45-51.(摘要)K.A.Schreck等人觀察到，睡眠障礙的嚴(yán)重性與自閉癥癥狀的嚴(yán)重性相關(guān)。Schreck KA等人，Sleep problems as possible predictors of intensified symptoms of autism.Res Dev Disabil.2004 Jan-Feb；25(1)：57-66.(摘要)。因此，本文的細(xì)菌可用于治療失眠。

W.D.Ratnasooriya等人報(bào)道，抑制雄性大鼠中的NOS減少性交前活動，減少性欲，并降低能育性。W.D.Ratnasooriya等人，Reduction in libido and fertility of male rats by administration of the nitric oxide(NO)synthase inhibitor N-nitro-L-arginine methyl ester.International journal of andrology，23：187-191(2000)。

許多看似截然不同的以AT耗竭和最終器官衰竭為特征的病癥實(shí)際上可能是由nitropenia“引起”，由基礎(chǔ)一氧化氮的全身缺乏引起。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在心臟中時(shí)，結(jié)果是擴(kuò)張型心肌病。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在腦中時(shí)，結(jié)果是白質(zhì)高信號、阿爾茨海默病、血管性抑郁、血管性癡呆、帕金森氏癥和路易體癡呆。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在腎臟中時(shí)，結(jié)果為終末期腎病，當(dāng)這種情況出現(xiàn)在肝臟中時(shí)，結(jié)果為原發(fā)性膽汁性肝硬化。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在肌肉中時(shí)，結(jié)果為纖維肌痛、海灣戰(zhàn)爭綜合征或慢性疲勞綜合征。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在腸中時(shí)，結(jié)果為缺血性腸病。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在胰臟中時(shí)，結(jié)果為首先2型糖尿病，接著為胰臟慢性炎癥，接著為胰臟的自身免疫攻擊(或胰臟癌)，接著為l型糖尿病。當(dāng)這種情況出現(xiàn)在結(jié)締組織中時(shí)，結(jié)果為全身性硬化。

在終末期腎病放入殘腎模型中，部分腎被移除，(無論是外科手術(shù)或是毒素)，這樣增加對剩余部分的代謝負(fù)荷。生成超氧化物以降低NO，并增加O₂擴(kuò)散至腎線粒體中。長期超負(fù)荷導(dǎo)致進(jìn)行性腎毛細(xì)血管稀薄和進(jìn)行性腎衰竭。在急性腎衰竭中，給人透析可讓腎“休息”，并允許其恢復(fù)。在由橫紋肌溶解(將肌紅蛋白釋放至血流中的肌肉損傷)誘導(dǎo)的急性腎衰竭中，腎損傷是以缺血性損傷為特征。肌紅蛋白清除NO，就如同血紅蛋白一樣，且將在腎臟中引起血管收縮，導(dǎo)致局部缺血。肌紅蛋白也將誘導(dǎo)局部一氧化氮匱乏和一連串事件，導(dǎo)致進(jìn)一步ATP耗竭。

在一些方面，低NO水平導(dǎo)致線粒體生物體發(fā)生減少。在減少的線粒體密度下生產(chǎn)相同ATP將導(dǎo)致O₂消耗增加，或基礎(chǔ)代謝速率加快。在許多病狀中觀察到加快的基礎(chǔ)代謝速率，包括：鐮狀細(xì)胞性貧血、充血性心力衰竭、糖尿病、肝硬化、克羅恩病、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、肥胖癥、終末期腎病、阿爾茨海默病和慢性阻塞性肺病。

雖然一定程度增加的O₂消耗可被高效利用，但在這些病狀中的許多中，解偶聯(lián)蛋白也向上調(diào)節(jié)，表明至少部分增加的代謝速率是由低效率引起。解偶聯(lián)蛋白已知被上調(diào)的病狀包括肥胖癥和糖尿病。

隨著較少線粒體將O₂消耗至較低O₂濃度，驅(qū)動O₂擴(kuò)散的O₂梯度較大，所以O(shè)₂擴(kuò)散路徑長度可增加，導(dǎo)致毛細(xì)血管稀薄，在擴(kuò)張型心肌病、高血壓、2型糖尿病和腎性高血壓中觀察到毛細(xì)血管稀薄。

銅，不管作為Cu2+或血漿銅藍(lán)蛋白(CP)(主要的含銅血清蛋白，在成人血清中以0.38g/L存在，也就是0.32％的Cu，且包含94％的血清銅)催化從NO和含硫巰基基團(tuán)(RSH)形成S-NO-硫醇。血漿的Cu含量是可變的，且在感染條件下增加。Berger等人報(bào)道，燒傷滲出物的Cu和Zn含量相當(dāng)多，1/3皮膚燒傷的患者在7天內(nèi)損失20至40％正常身體Cu和5至10％的Zn含量。(Cutaneous copper and zinc losses in burns.Bums.1992年10月；18(5)：373-80.)如果患者皮膚被AOB寄居，包含AOB需要的尿素和Fe、Cu和Zn的傷口滲出物將被轉(zhuǎn)化為NO和亞硝酸鹽，通過iNOS大大增補(bǔ)NO的局部生產(chǎn)，而不消耗代謝激發(fā)傷口中的來源(諸如O₂和L-精氨酸)。預(yù)期，傷口表面上的AOB造成的高NO和亞硝酸鹽生產(chǎn)會抑制感染，特別抑制厭氧細(xì)菌如梭菌感染，所述厭氧細(xì)菌導(dǎo)致破傷風(fēng)、氣性壞疽和肉毒中毒。

除非另有指示，否則本公開的實(shí)施可采用本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)的常規(guī)免疫學(xué)、分子生物體學(xué)方法和重組DNA技術(shù)。文獻(xiàn)中全面闡釋此類技術(shù)。參見例如Sambrook等人Molecular Cloning：A Laboratory Manual(最新版本)；和Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人編，最新版本)。

引用并入

本文所提及的所有出版物和專利在此通過引用整體并入，正如每個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠幻鞔_地和單獨(dú)地指定為通過引用并入一樣。

雖然已討論了本公開的特定實(shí)施方案，但上述說明是闡述性的而非限制性的。在回顧本說明書和以下權(quán)利要求書后，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，本公開的很多變化將變得明顯。應(yīng)該參考權(quán)利要求書以及其等效權(quán)利要求的完整范圍和說明書以及此類變型，確定本發(fā)明的完整范圍。

某些實(shí)施方案是在以下權(quán)利要求書范圍內(nèi)。