技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供用結(jié)合集落刺激因子1受體(CSF1R)的抗體治療病狀的方法。所述方法包括但不限于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。

背景

集落刺激因子1受體(在本文中稱為CSF1R；在本領(lǐng)域中也稱為FMS，F(xiàn)IM2，C-FMS，M-CSF受體和CDl15)是一種具有酪氨酸激酶活性的具有N末端細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)和C末端細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的單跨膜受體。CSF1或白介素34配體(在本文中稱為IL-34；Lin等,Science 320：807-11(2008))配體結(jié)合于CSF1R會導(dǎo)致受體二聚化，上調(diào)CSF1R蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性，CSF1R酪氨酸殘基磷酸化和下游信號傳導(dǎo)事件。CSF1與IL-34兩者均刺激單核細(xì)胞存活，增殖和分化成巨噬細(xì)胞以及其它單核細(xì)胞性細(xì)胞譜系，如破骨細(xì)胞，樹突細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。

已發(fā)現(xiàn)許多腫瘤細(xì)胞分泌CSF1，其通過CSF1R活化單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞。已示出腫瘤中的CSF1水平與腫瘤中的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)水平相關(guān)。已發(fā)現(xiàn)較高水平的TAM與不良患者預(yù)后相關(guān)。此外，已發(fā)現(xiàn)在例如小鼠中的人乳癌異種移植物中，CSF1會促進(jìn)腫瘤生長和進(jìn)展成轉(zhuǎn)移態(tài)。參見例如Paulus等,Cancer Res.66:4349-56(2006)。此外，CSF1R在骨轉(zhuǎn)移中的溶骨性骨破壞中起作用。參見例如Ohno等,Mol.Cancer Ther.5:2634-43(2006)。

也已發(fā)現(xiàn)CSF1和它的受體涉及于各種炎癥性和自體免疫性疾病中。參見例如Hamilton,Nat.Rev.8:533-44(2008)。舉例來說，已發(fā)現(xiàn)來自受類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎折磨的關(guān)節(jié)的滑液內(nèi)皮細(xì)胞會產(chǎn)生CSF1，從而表明CSF1和它的受體在所述疾病中具有作用。在關(guān)節(jié)炎小鼠模型中，用抗體阻斷CSF1R活性會產(chǎn)生正性臨床效應(yīng)，包括骨和軟骨的破壞降低以及巨噬細(xì)胞數(shù)目減少。參見例如Kitaura等,J.Clin.Invest.115:3418-3427(2005)。

如巨噬細(xì)胞，小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和破骨細(xì)胞的成熟分化骨髓譜系促成如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化癥和骨喪失疾病的各種疾病的病理。分化骨髓譜系細(xì)胞源于周邊血液單核細(xì)胞中間體。CSF1R刺激促進(jìn)單核細(xì)胞自骨髓前體發(fā)育，單核細(xì)胞增殖和存活，以及周邊血液單核細(xì)胞分化成分化骨髓譜系細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞，小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和破骨細(xì)胞。因此，CSF1R刺激促進(jìn)分化骨髓譜系細(xì)胞的增殖，存活，活化和成熟，并且在病理環(huán)境中，CSF1R刺激促進(jìn)分化骨髓譜系細(xì)胞能夠介導(dǎo)疾病病理。

概述

在一些實(shí)施方案中，提供治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的人受試者施用有效量的結(jié)合集落刺激因子1受體(CSF1R)的抗體，其中所述抗體阻斷集落刺激因子1(CSF1)結(jié)合CSF1R且阻斷IL-34結(jié)合CSF1R，其中所述有效量足以在兩劑后將所述受試者中CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目減少至少50％達(dá)至少4周。在一些實(shí)施方案中，有效劑量介于0.2mg/kg和10mg/kg之間，或介于1和10mg/kg之間，或介于1和5mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，以每兩周或更久一次的給藥頻率施用所述抗體。

在一些實(shí)施方案中，提供治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者施用結(jié)合集落刺激因子1受體(CSF1R)的抗體，其中所述抗體阻斷集落刺激因子1(CSF1)結(jié)合CSF1R且阻斷IL-34結(jié)合CSF1R，其中以介于0.2mg/kg和10mg/kg之間的劑量和每兩周或更久一次的給藥頻率施用所述抗體。在一些實(shí)施方案中，所述給藥頻率為小于每兩周一次，每兩周一次，每三周一次，每四周一次，每個(gè)月一次，每五周一次，每六周一次，每七周一次，每兩個(gè)月一次，每三個(gè)月一次，或每年四次。在一些實(shí)施方案中，劑量介于1mg/kg和10mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，劑量介于3mg/kg和10mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括施用一劑所述抗體。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括施用兩劑所述抗體。在一些實(shí)施方案中，相隔至少一周，或相隔至少兩周施用所述劑。

在一些實(shí)施方案中，在施用至少一劑所述抗體之后，所述受試者中CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目減少至少50％。在一些實(shí)施方案中，CD16-單核細(xì)胞的數(shù)目沒有減少或減少不及20％。在一些實(shí)施方案中，所述受試者中CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目減少至少75％。在一些實(shí)施方案中，CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目減少至少50％達(dá)至少一周，至少兩周，至少三周，至少四周，至少五周，至少六周，至少七周，或至少八周。在一些實(shí)施方案中，所述CD16+單核細(xì)胞為CD16+外周血單核細(xì)胞。

在一些實(shí)施方案中，至少一種骨再吸收標(biāo)志物的水平在施用至少一劑所述抗體之后降低。在一些實(shí)施方案中，至少一種骨再吸收標(biāo)志物的水平降低至少20％。在一些實(shí)施方案中，至少一種骨再吸收標(biāo)志物的水平降低至少50％。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種骨再吸收標(biāo)志物選自CTx和TRAP5b。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種骨再吸收標(biāo)志物為CTx。

在一些實(shí)施方案中，在施用一劑后至少兩周，至少三周，至少四周，至少一個(gè)月，至少六周，或至少兩個(gè)月在來自所述受試者的血清中能檢測到所述抗體。在一些實(shí)施方案中，在施用一劑后至少四周，至少一個(gè)月，至少六周，或至少兩個(gè)月在來自所述受試者的血清中能檢測到所述抗體。在一些實(shí)施方案中，劑量介于3mg/kg和10mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，所述抗體在所述受試者中的半衰期大于2天。在一些實(shí)施方案中，所述抗體的半衰期大于4天。在一些實(shí)施方案中，所述抗體的半衰期大于15天。在一些此類實(shí)施方案中，劑量介于3mg/kg和10mg/kg之間。

在本文所述方法的任何實(shí)施方案中，抗體重鏈和/或抗體輕鏈可具有下面的結(jié)構(gòu)。

在一些實(shí)施方案中，重鏈包含與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列。在一些實(shí)施方案中，輕鏈包含與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列。在一些實(shí)施方案中，重鏈包含與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列，并且輕鏈包含與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列。

在一些實(shí)施方案中，HC CDR1，HC CDR2和HC CDR3包含一組選自以下的序列：(a)SEQ ID NO:15，16和17；(b)SEQ ID NO:21，22和23；以及(c)SEQ ID NO:27，28和29。在一些實(shí)施方案中，LC CDR1，LC CDR2和LC CDR3包含一組選自以下的序列：(a)SEQ ID NO:18，19和20；(b)SEQ ID NO:24，25和26；以及(c)SEQ ID NO:30，31和32。

在一些實(shí)施方案中，重鏈包含HC CDR1，HC CDR2和HC CDR3，其中所述HC CDR1，HC CDR2和HC CDR3包含一組選自以下的序列：(a)SEQ ID NO:15，16和17；(b)SEQ ID NO:21，22和23；以及(c)SEQ ID NO:27，28和29；并且輕鏈包含LC CDR1，LC CDR2和LC CDR3，其中所述LC CDR1，LC CDR2和LC CDR3包含一組選自以下的序列：(a)SEQ ID NO:18，19和20；(b)SEQ ID NO:24，25和26；以及(c)SEQ ID NO:30，31和32。

在一些實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含與SEQ ID NO:9至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:10至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(b)包含與SEQ ID NO:11至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:12至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(c)包含與SEQ ID NO:13至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:14至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(d)包含與SEQ ID NO:39至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:46至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(e)包含與SEQ ID NO:40至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:46至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(f)包含與SEQ ID NO:41至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:46至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(g)包含與SEQ ID NO:39至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:47至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(h)包含與SEQ ID NO:40至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:47至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(i)包含與SEQ ID NO:41至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:47至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；以及(j)包含與SEQ ID NO:42至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:48至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(k)包含與SEQ ID NO:42至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:49至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(l)包含與SEQ ID NO:42至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:50至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(m)包含與SEQ ID NO:43至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:48至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(n)包含與SEQ ID NO:43至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:49至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(o)包含與SEQ ID NO:43至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:50至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(p)包含與SEQ ID NO:44至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:51至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(q)包含與SEQ ID NO:44至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:52至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；(r)包含與SEQ ID NO:45至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:51至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈；或(s)包含與SEQ ID NO:45至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的重鏈和包含與SEQ ID NO:52至少95％，至少97％，至少99％或100％相同的序列的輕鏈。

在一些實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含具有序列SEQ ID NO:15的重鏈(HC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:16的HC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:17的HC CDR3的重鏈；和包含具有序列SEQ ID NO:18的輕鏈(LC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:19的LC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:20的LC CDR3的輕鏈；(b)包含具有序列SEQ ID NO:21的重鏈(HC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:22的HC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:23的HC CDR3的重鏈；和包含具有序列SEQ ID NO:24的輕鏈(LC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:25的LC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:26的LC CDR3的輕鏈；或(c)包含具有序列SEQ ID NO:27的重鏈(HC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:28的HC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:29的HC CDR3的重鏈；和包含具有序列SEQ ID NO:30的輕鏈(LC)CDR1，具有序列SEQ ID NO:31的LC CDR2，和具有序列SEQ ID NO:32的LC CDR3的輕鏈。

在一些實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含序列SEQ ID NO:53的重鏈和包含序列SEQ ID NO:60的輕鏈；(b)包含序列SEQ ID NO:53的重鏈和包含序列SEQ ID NO:61的輕鏈；或(c)包含序列SEQ ID NO:58的重鏈和包含序列SEQ ID NO:65的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)由序列SEQ ID NO:53組成的重鏈和由序列SEQ ID NO:60組成的輕鏈；(b)由序列SEQ ID NO:53組成的重鏈和由序列SEQ ID NO:61組成的輕鏈；或(c)由序列SEQ ID NO:58組成的重鏈和由序列SEQ ID NO:65組成的輕鏈。

在一些實(shí)施方案中，抗體為人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體選自Fab，F(xiàn)v，scFv，F(xiàn)ab’和(Fab’)₂。在一些實(shí)施方案中，抗體為嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體選自IgA，IgG和IgD。在一些實(shí)施方案中，抗體為IgG。在一些實(shí)施方案中，抗體為IgG4。在一些實(shí)施方案中，抗體為在至少一個(gè)IgG4重鏈恒定區(qū)中包含S241P突變的IgG4。

在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合人CSF1R和/或結(jié)合食蟹獼猴(cynomolgus)CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗體阻斷配體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗體可阻斷CSF1和/或IL-34結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗體阻斷CSF1與IL-34兩者結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗體抑制配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。在一些實(shí)施方案中，抗體抑制CSF1和/或IL-34誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合人CSF1R的親和力(K_D)小于1nM。在一些實(shí)施方案中，抗體在CSF1或IL-34存在下抑制單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)。

在一些實(shí)施方案中，提供一種包含結(jié)合CSF1R的抗體的藥物組合物。

在一些實(shí)施方案中，提供包含結(jié)合CSF1R的抗體的組合物，其用于治療人或動物的方法。在一些實(shí)施方案中，提供結(jié)合CSF1R的抗體和包含結(jié)合CSF1R的抗體的組合物，其用于治療人或動物中的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。

附圖簡述

圖1A-C顯示如實(shí)施例1中討論的人源化抗體huAb1至huAb16各自的人源化重鏈可變區(qū)的比對。加框殘基是人接受體序列中的變回相應(yīng)小鼠殘基的氨基酸。

圖2A-C顯示如實(shí)施例1中討論的人源化抗體huAb1至huAb16各自的人源化輕鏈可變區(qū)的比對。加框氨基酸是人接受體序列中的變回相應(yīng)小鼠殘基的殘基。

圖3A-B顯示如實(shí)施例2中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后人中血清huAb1(“FPA008”)的清除。

圖4顯示如實(shí)施例2中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后食蟹猴和人中血清huAb1(“FPA008”)的清除。

圖5A-B顯示如實(shí)施例3中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后(A)很可能接受安慰劑的CSF1低受試者和(b)很可能接受huAb1的CSF1高受試者中的血清CTx水平。

圖6A-B顯示如實(shí)施例3中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后(A)很可能接受安慰劑的CSF1低受試者和(b)很可能接受huAb1的CSF1高受試者中的血清TRAP5b水平。

圖7顯示如實(shí)施例4中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后每個(gè)劑量給藥分組(包括安慰劑和huAb1二者)中的受試者中對非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞的阻抑。

圖8顯示如實(shí)施例4中所述，以標(biāo)示的劑量單次施用之后每個(gè)劑量給藥分組(包括安慰劑和huAb1二者)中的受試者中的經(jīng)典CD16-單核細(xì)胞。

圖9A-B顯示很可能接受huAb1的受試者中的(A)血清CSF1水平和(B)血清IL34水平。

圖10顯示相隔兩周施用兩劑之后健康志愿者(三角形)和RA患者(空心圓圈)中huAb1隨時(shí)間的血清濃度。

圖11顯示兩劑huAb1(“FPA008”)之后健康志愿者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞的減少。

圖12顯示兩劑huAb1之后RA患者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞的減少。

詳述

提供治療病狀的方法，其包括施用結(jié)合CSF1R，并且阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體。如本文所討論，結(jié)合CSF1R，并且阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體有效治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)向人施用此類抗體減少食蟹猴中CD16+外周血單核細(xì)胞的數(shù)目，但是不影響CD16-外周血單核細(xì)胞數(shù)目。CD16+外周血單核細(xì)胞是高度炎癥性的單核細(xì)胞。參見例如Ziegler-Heitbrock,J.Leukocyte Biol.,2007,81∶584-592。雖然先前發(fā)現(xiàn)向食蟹猴施用此類抗體減少CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目，但是在人中觀察到的效果與在食蟹猴中的效果相比實(shí)質(zhì)性且出乎意料地延長。確實(shí)，以單劑僅1mg/kg，CD16+單核細(xì)胞數(shù)目受到實(shí)質(zhì)性阻抑達(dá)至少一周。以3mg/kg的劑量，CD16+單核細(xì)胞數(shù)目受到實(shí)質(zhì)性阻抑達(dá)至少四周，而單劑10mg/kg阻抑CD16+單核細(xì)胞數(shù)目達(dá)至少八周。而且，向人施用此類抗體還降低血清CTx水平且顯示朝向血清TRAP5b水平降低的趨勢，二者均為骨再吸收標(biāo)志物。總而言之，這些結(jié)果提示結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體會是以不太頻繁的劑量給藥對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效治療。

本文所用的章節(jié)標(biāo)題僅出于組織目的，并且不應(yīng)解釋為限制所述主題。本文引用的所有參考文獻(xiàn)(包括專利申請和公布)都以引用的方式整體并入。

定義

除非另外定義，否則與本發(fā)明關(guān)聯(lián)使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語將具有由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的含義。此外，除非另外為上下文所需，否則單數(shù)術(shù)語將包括復(fù)數(shù)，并且復(fù)數(shù)術(shù)語將包括單數(shù)。

與重組DNA，寡核苷酸合成，組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如電穿孔，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染)，酶促反應(yīng)以及純化技術(shù)關(guān)聯(lián)使用的示例性技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的。許多所述技術(shù)和程序尤其例如描述于Sambrook等Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))中。此外，用于化學(xué)合成，化學(xué)分析，藥物制備，配制和遞送以及患者治療的示例性技術(shù)在本領(lǐng)域中也是已知的。

在本申請中，除非另外陳述，否則使用“或”是指“和/或”。在多重附屬性權(quán)利要求的情形下，使用“或”僅交替回指一個(gè)以上先前獨(dú)立性或附屬性權(quán)利要求。此外，除非另外明確陳述，否則如“要素”或“組分”的術(shù)語涵蓋包含一個(gè)單元的要素和組分與包含一個(gè)以上亞單元的要素和組分兩者。

如根據(jù)本公開所用，除非另外指示，否則以下術(shù)語應(yīng)理解成具有以下含義：

術(shù)語“核酸分子”與“多核苷酸”可互換使用，并且是指核苷酸聚合物。所述核苷酸聚合物可含有天然和/或非天然核苷酸，并且包括但不限于DNA，RNA和PNA?！昂怂嵝蛄小笔侵笜?gòu)成核酸分子或多核苷酸的線性核苷酸序列。

術(shù)語“多肽”與“蛋白質(zhì)”可互換用于指代氨基酸殘基聚合物，并且不限于最小長度。所述氨基酸殘基聚合物可含有天然或非天然氨基酸殘基，并且包括但不限于由氨基酸殘基組成的肽，寡肽，二聚體，三聚體和多聚體。全長蛋白質(zhì)與其片段兩者均由所述定義涵蓋。術(shù)語也包括多肽的表達(dá)后修飾，例如糖基化，唾液酸化，乙?；姿峄?。此外，出于本發(fā)明的目的，“多肽”是指包括對天然序列的修飾，如缺失，添加和取代(在自然界中通常是保守性的)的蛋白質(zhì)，只要所述蛋白質(zhì)保持所需活性即可。這些修飾可為故意的，如通過定點(diǎn)突變誘發(fā)，或可為偶然的，如通過產(chǎn)生蛋白質(zhì)的宿主的突變或歸因于PCR擴(kuò)增的錯(cuò)誤。

術(shù)語“CSF1R”在本文中是指全長CSF1R，其包括N末端ECD，跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，有或無N末端前導(dǎo)序列。在一些實(shí)施方案中，CSF1R是具有氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的人CSF1R。

如本文所用的術(shù)語“CSF1R細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域”(“CSF1R ECD”)是指缺乏細(xì)胞內(nèi)和跨膜結(jié)構(gòu)域的CSF1R多肽。CSF1R ECD包括能夠結(jié)合CSF1R和/或IL-34的全長CSF1R ECD和CSF1R ECD片段。人全長CSF1R ECD在本文中定義為包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至512(即包括前導(dǎo)序列)或氨基酸20至512(即缺乏前導(dǎo)序列)。在一些實(shí)施方案中，人CSF1R ECD片段包含SEQ ID NO:2的氨基酸20至506(參見SEQ ID NO:5)。在一些實(shí)施方案中，人CSF1R片段在氨基酸507，508，509，510或511處結(jié)束。在一些實(shí)施方案中，食蟹獼猴CSF1R ECD包含序列SEQ ID NO:7(具有前導(dǎo)序列)或SEQ ID NO:7的氨基酸20至506(無前導(dǎo)序列)。

關(guān)于抗CSF1R抗體，術(shù)語“有活性的”或“活性”或“功能”及其語法變化形式用于指代抑制(阻斷性或拮抗性抗體)或模擬(激動性抗體)至少一種上述活性的能力。稱為“具有功能性”的抗體和抗體片段的特征在于具有所述性質(zhì)。

“免疫”活性僅是指能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生針對由天然或天然存在的CSF1R多肽所具有的抗原表位的抗體。

如本文所用的術(shù)語“抗體”是指包含重鏈的至少互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1，CDR2和CDR3以及輕鏈的至少CDR1，CDR2和CDR3的分子，其中所述分子能夠結(jié)合抗原。術(shù)語抗體包括但不限于能夠結(jié)合抗原的片段，如Fv，單鏈Fv(scFv)，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab’和(Fab’)₂。術(shù)語抗體也包括但不限于嵌合抗體，人源化抗體和如小鼠，人，食蟹獼猴等的各種物種的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含至少一個(gè)包含重鏈可變區(qū)和至少一部分重鏈恒定區(qū)的重鏈，以及至少一個(gè)包含輕鏈可變區(qū)和至少一部分輕鏈恒定區(qū)的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，抗體包含兩個(gè)重鏈，其中各重鏈包含重鏈可變區(qū)和至少一部分重鏈恒定區(qū)；以及兩個(gè)輕鏈，其中各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)和至少一部分輕鏈恒定區(qū)。如本文所用，單鏈Fv(scFv)或包含例如含有全部六個(gè)CDR(三個(gè)重鏈CDR和三個(gè)輕鏈CDR)的單一多肽鏈的任何其它抗體被視為具有重鏈和輕鏈。在一些所述實(shí)施方案中，重鏈?zhǔn)强贵w的包含三個(gè)重鏈CDR的區(qū)域，而輕鏈在抗體的包含三個(gè)輕鏈CDR的區(qū)域中。

如本文所用的術(shù)語“重鏈可變區(qū)”是指包含重鏈CDR1，框架(FR)2，CDR2，F(xiàn)R3和CDR3的區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，重鏈可變區(qū)也包含至少一部分FR1和/或至少一部分FR4。在一些實(shí)施方案中，重鏈CDR1對應(yīng)于Kabat殘基26至35；重鏈CDR2對應(yīng)于Kabat殘基50至65；并且重鏈CDR3對應(yīng)于Kabat殘基95至102。參見例如Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987和1991,NIH,Bethesda,Md.)；以及圖1。在一些實(shí)施方案中，重鏈CDR1對應(yīng)于Kabat殘基31至35；重鏈CDR2對應(yīng)于Kabat殘基50至65；并且重鏈CDR3對應(yīng)于Kabat殘基95至102。參見同上。

如本文所用的術(shù)語“重鏈恒定區(qū)”是指包含至少三個(gè)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域C_H1，C_H2和C_H3的區(qū)域。非限制性示例性重鏈恒定區(qū)包括γ，δ和α。非限制性示例性重鏈恒定區(qū)也包括ε和μ。各重恒定區(qū)對應(yīng)于抗體同種型。舉例來說，包含γ恒定區(qū)的抗體是IgG抗體，包含δ恒定區(qū)的抗體是IgD抗體，并且包含α恒定區(qū)的抗體是IgA抗體。此外，包含μ恒定區(qū)的抗體是IgM抗體，并且包含ε恒定區(qū)的抗體是IgE抗體。某些同種型可進(jìn)一步再分成子類。舉例來說，IgG抗體包括但不限于IgG1(包含γ₁恒定區(qū))，IgG2(包含γ₂恒定區(qū))，IgG3(包含γ₃恒定區(qū))和IgG4(包含γ₄恒定區(qū))抗體；IgA抗體包括但不限于IgA1(包含α₁恒定區(qū))和IgA2(包含α₂恒定區(qū))抗體；并且IgM抗體包括但不限于IgM1和IgM2。

在一些實(shí)施方案中，重鏈恒定區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)對抗體賦予所需特征的突變(或取代)，添加或缺失。一非限制性示例性突變是IgG4鉸鏈區(qū)(在恒定結(jié)構(gòu)域C_H1與C_H2之間)中的S241P突變，其使IgG4基序CPSCP變?yōu)轭愃朴贗gG1中的相應(yīng)基序的CPPCP。在一些實(shí)施方案中，那個(gè)突變導(dǎo)致IgG4抗體更穩(wěn)定。參見例如Angal等,Mol.Immunol.30:105-108(1993)；Bloom等,Prot.Sci.6:407-415(1997)；Schuurman等,Mol.Immunol.38∶1-8(2001)。

如本文所用的術(shù)語“重鏈”是指包含至少重鏈可變區(qū)的有或無前導(dǎo)序列的多肽。在一些實(shí)施方案中，重鏈包含至少一部分重鏈恒定區(qū)。如本文所用的術(shù)語“全長重鏈”是指包含重鏈可變區(qū)和重鏈恒定區(qū)的有或無前導(dǎo)序列的多肽。

如本文所用的術(shù)語“輕鏈可變區(qū)”是指包含輕鏈CDR1，框架(FR)2，CDR2，F(xiàn)R3和CDR3的區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)也包含F(xiàn)R1和/或FR4。在一些實(shí)施方案中，輕鏈CDR1對應(yīng)于Kabat殘基24至34；輕鏈CDR2對應(yīng)于Kabat殘基50至56；并且輕鏈CDR3對應(yīng)于Kabat殘基89至97。參見例如Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987和1991,NIH,Bethesda,Md.)；以及圖1。

如本文所用的術(shù)語“輕鏈恒定區(qū)”是指包含輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域C_L的區(qū)域。非限制性示例性輕鏈恒定區(qū)包括λ和κ。

如本文所用的術(shù)語“輕鏈”是指包含至少輕鏈可變區(qū)的有或無前導(dǎo)序列的多肽。在一些實(shí)施方案中，輕鏈包含至少一部分輕鏈恒定區(qū)。如本文所用的術(shù)語“全長輕鏈”是指包含輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的有或無前導(dǎo)序列的多肽。

如本文所用的“嵌合抗體”是指包含至少一個(gè)來自第一物種(如小鼠，大鼠，食蟹獼猴等)的可變區(qū)和至少一個(gè)來自第二物種(如人，食蟹獼猴等)的恒定區(qū)的抗體。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗體包含至少一個(gè)小鼠可變區(qū)和至少一個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗體包含至少一個(gè)食蟹獼猴可變區(qū)和至少一個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗體包含至少一個(gè)大鼠可變區(qū)和至少一個(gè)小鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗體的全部可變區(qū)都來自第一物種，并且嵌合抗體的全部恒定區(qū)都來自第二物種。

如本文所用的“人源化抗體”是指非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少一個(gè)氨基酸已被來自人可變區(qū)的相應(yīng)氨基酸置換的抗體。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體包含至少一個(gè)人恒定區(qū)或其片段。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體是Fab，scFv，(Fab’)₂等。

如本文所用的“CDR移植抗體”是指第一(非人)物種的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)已接枝于第二(人)物種的框架區(qū)(FR)上的人源化抗體。

如本文所用的“人抗體”是指在人中產(chǎn)生的抗體，在包含人免疫球蛋白基因的非人動物(如)中產(chǎn)生的抗體以及使用體外方法(如噬菌體展示)選擇的抗體，其中抗體譜系是基于人免疫球蛋白序列。

術(shù)語“前導(dǎo)序列”是指位于多肽的N末端的有助于多肽自哺乳動物細(xì)胞分泌的氨基酸殘基序列。前導(dǎo)序列可在多肽自哺乳動物細(xì)胞排出后裂解，從而形成成熟蛋白質(zhì)。前導(dǎo)序列可為天然或合成的，并且它們可與它們所連接的蛋白質(zhì)異源或同源。示例性前導(dǎo)序列包括但不限于抗體前導(dǎo)序列，例如像分別對應(yīng)于人輕鏈和重鏈前導(dǎo)序列的氨基酸序列SEQ ID NO:3和4。非限制性示例性前導(dǎo)序列也包括異源蛋白質(zhì)的前導(dǎo)序列。在一些實(shí)施方案中，抗體缺乏前導(dǎo)序列。在一些實(shí)施方案中，抗體包含至少一種可選自天然抗體前導(dǎo)序列和異源前導(dǎo)序列的前導(dǎo)序列。

術(shù)語“載體”用于描述可被工程化來含有一種或多種可在宿主細(xì)胞中增殖的克隆的多核苷酸的多核苷酸。載體可包括以下元件中的一個(gè)或多個(gè)：復(fù)制起點(diǎn)，一種或多種調(diào)控目標(biāo)多肽表達(dá)的調(diào)控序列(例如像啟動子和/或增強(qiáng)子)，和/或一種或多種可選擇標(biāo)記基因(例如像抗生素抗性基因和可用于比色測定中的基因，例如β-半乳糖苷酶)。術(shù)語“表達(dá)載體”是指用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)目標(biāo)多肽的載體。

“宿主細(xì)胞”是指可為或已為載體或分離的多核苷酸的接受者的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可為原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。示例性真核細(xì)胞包括哺乳動物細(xì)胞，如靈長類動物或非靈長類動物細(xì)胞；真菌細(xì)胞，如酵母；植物細(xì)胞；以及昆蟲細(xì)胞。非限制性示例性哺乳動物細(xì)胞包括但不限于NSO細(xì)胞，細(xì)胞(Crucell)，以及293和CHO細(xì)胞和它們的衍生物，分別如293-6E和DG44細(xì)胞。

如本文所用的術(shù)語“分離的”是指分子已與至少一些它通常在自然界中與之一起發(fā)現(xiàn)的組分分離。舉例來說，當(dāng)多肽與它被產(chǎn)生所處的細(xì)胞的至少一些組分分離時(shí)，它稱為“分離的”。當(dāng)在表達(dá)之后多肽由細(xì)胞分泌時(shí)，使含有所述多肽的上清液與產(chǎn)生它的細(xì)胞物理分離被視為“分離”所述多肽。類似地，多核苷酸在它不是它通常在自然界中被發(fā)現(xiàn)所處的較大多核苷酸(在DNA多核苷酸的情況下，例如像基因組DNA或線粒體DNA)的一部分，或例如在RNA多核苷酸的情況下，與它被產(chǎn)生所處的細(xì)胞的至少一些組分分離時(shí)稱為“分離的”。因此，在宿主細(xì)胞內(nèi)部的載體中含有的DNA多核苷酸可稱為“分離的”，只要那個(gè)多核苷酸在自然界中不見于那個(gè)載體中即可。

術(shù)語“受試者”與“患者”在本文中可互換用于指代人。在一些實(shí)施方案中，也提供治療其它哺乳動物的方法，所述哺乳動物包括但不限于嚙齒動物，猿，貓科動物，犬科動物，馬科動物，牛科動物，豬科動物，羊科動物，山羊科動物，哺乳動物實(shí)驗(yàn)室動物，哺乳動物家畜，哺乳動物體育動物和哺乳動物寵物。

如本文所用，“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”或“RA”是指一種可根據(jù)2000年修訂的美國風(fēng)濕病聯(lián)合會(American Rheumatism Association)RA分類準(zhǔn)則或任何類似準(zhǔn)則診斷的認(rèn)定疾病病況。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”是指一種特征主要在于關(guān)節(jié)的襯里(滑膜)炎癥的慢性自體免疫性疾病，其可導(dǎo)致關(guān)節(jié)損傷，從而導(dǎo)致慢性疼痛，功能喪失和失能。因?yàn)镽A可影響身體的多個(gè)器官，包括皮膚，肺和眼，所以它稱為全身性疾病。

術(shù)語“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”不僅包括活動性和早期RA，而且也包括初期RA，如下所定義。RA的生理指示包括盡管在RA中并非不變但為特征的對稱性關(guān)節(jié)腫脹。通常傾向于手近端指節(jié)間(PIP)關(guān)節(jié)以及掌指(MCP)，腕，肘，膝，踝和跖趾(MTP)關(guān)節(jié)的紡錘形腫脹且易于檢測到腫脹。關(guān)于被動性運(yùn)動的疼痛是關(guān)節(jié)炎癥的最靈敏測試，并且炎癥和結(jié)構(gòu)變形常限制受影響關(guān)節(jié)的運(yùn)動范圍。典型可見變化包括手指在MCP關(guān)節(jié)處的尺骨偏斜，過度伸展，或MCP和PIP關(guān)節(jié)過度彎曲，肘彎曲攣縮，和腕骨和趾半脫位?；加蠷A的受試者可對疾病改善性抗風(fēng)濕藥物(DMARD)和/或非類固醇消炎藥物(NSAID)具有抗性。非限制性示例性“DMARD”包括羥氯奎(hydroxycloroquine)，硫氮磺胺吡啶(sulfasalazine)，甲氨蝶呤(MTX)，來氟米特，依那西普(etanercept)，英夫利昔單抗(infliximab)(加經(jīng)口和皮下MTX)，咪唑硫嘌呤，D-青霉胺(D-penicillamine)，金鹽(經(jīng)口)，金鹽(肌肉內(nèi))，米諾環(huán)素(minocycline)，環(huán)孢靈(包括環(huán)孢靈A和表面環(huán)孢靈)，葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A)(Goodyear和Silverman,J.Exp.Med.,197(9):1125-1139(2003))，包括其鹽和衍生物等。根據(jù)本發(fā)明的其它療法候選者包括已由于毒性或功效不足而對先前或當(dāng)前用如依那西普，英夫利昔單抗，和/或阿達(dá)木單抗(adalimumab)的TNF抑制劑的治療經(jīng)受不充分反應(yīng)者。

患有“活動性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”的患者是指具有活動性而非潛伏性RA癥狀的患者?；加小霸缙诨顒有灶愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”的受試者是根據(jù)1987年修訂的ACR RA分類準(zhǔn)則診斷患有活動性RA至少8周但不長于4年的那些受試者。

患有“早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”的受試者是根據(jù)1987修訂的ACR RA分類準(zhǔn)則診斷患有RA至少8周但不長于4年的那些受試者。RA包括例如青少年發(fā)作RA，青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)或青少年RA(JRA)。

患有“初期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”的患者患有不完全滿足ACR RA診斷準(zhǔn)則的伴有RA特異性預(yù)后生物標(biāo)記(如抗CCP和共有表位)存在的早期多發(fā)性關(guān)節(jié)炎。他們包括呈現(xiàn)有多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，但尚未診斷有RA，并且處于接近顯現(xiàn)真正ACR準(zhǔn)則RA的高風(fēng)險(xiǎn)下(95％可能性)的具有陽性抗CCP抗體的患者。

“關(guān)節(jié)損傷”是以最廣泛意義使用,并且是指一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的任何部分(包括結(jié)締組織和軟骨)的損傷或部分或完全破壞，其中損傷包括任何病因的結(jié)構(gòu)和/或功能損傷，并且可或可不導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛/關(guān)節(jié)痛。它不加限制地包括與炎癥性關(guān)節(jié)疾病以及非炎癥性關(guān)節(jié)疾病相關(guān)或由炎癥性關(guān)節(jié)疾病以及非炎癥性關(guān)節(jié)疾病所致的關(guān)節(jié)損傷。這個(gè)損傷可由任何病狀，如自體免疫性疾病，尤其關(guān)節(jié)炎，并且最尤其RA引起。示例性此類病狀包括急性和慢性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(包括青少年發(fā)作RA，青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(JIA)，和青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(JRA))，及各階段，如類風(fēng)濕性滑膜炎，痛風(fēng)或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，急性免疫關(guān)節(jié)炎，慢性炎癥性關(guān)節(jié)炎，退化性關(guān)節(jié)炎，II型膠原蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎，傳染性關(guān)節(jié)炎，膿毒性關(guān)節(jié)炎，萊姆關(guān)節(jié)炎(Lyme arthritis)，增生性關(guān)節(jié)炎，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，斯蒂爾氏病(Still’s disease)，脊椎關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎，變形性關(guān)節(jié)炎，慢性原發(fā)性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，絕經(jīng)期關(guān)節(jié)炎，雌激素缺失關(guān)節(jié)炎，和強(qiáng)直性脊柱炎/類風(fēng)濕性脊柱炎)，除RA以外的風(fēng)濕性自體免疫性疾病，和RA繼發(fā)的顯著全省性累及(包括但不限于血管炎，肺纖維化或費(fèi)爾提氏綜合征(Felty’s syndrome))。出于本文目的，關(guān)節(jié)是(如動物的脊椎動物的)骨骼的元件與圍繞并支撐骨骼的部分的接觸點(diǎn)，并且包括但不限于例如髖，脊柱的脊椎之間的關(guān)節(jié)，脊柱與骨盆之間的關(guān)節(jié)(骶骼關(guān)節(jié))，肌腱和韌帶附著于骨的關(guān)節(jié)，肋骨與脊柱之間的關(guān)節(jié)，肩，膝，足，肘，手，手指，踝和趾，但尤其手和足中的關(guān)節(jié)。

術(shù)語“CD16+病癥”是指哺乳動物的CD16+單核細(xì)胞導(dǎo)致，介導(dǎo)或另外促成哺乳動物罹病的疾病。也包括減少CD16+單核細(xì)胞對疾病進(jìn)展具有改善作用的疾病。這個(gè)術(shù)語內(nèi)包括CD16+炎癥性疾病，傳染性疾病，免疫缺乏疾病，贅瘤形成等。在某些實(shí)施方案中，CD16+炎癥性疾病包括不響應(yīng)甲氨蝶呤療法的炎癥性疾病。在某些實(shí)施方案中，CD16+炎癥性疾病包括甲氨蝶呤抗性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，甲氨蝶呤抗性多發(fā)性硬化癥，甲氨蝶呤抗性狼瘡，甲氨蝶呤抗性炎癥性腸病，甲氨蝶呤抗性克隆氏病，甲氨蝶呤抗性哮喘和甲氨蝶呤抗性牛皮癬。在某些實(shí)施方案中，患有如甲氨蝶呤抗性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的甲氨蝶呤抗性疾病的患者稱為甲氨蝶呤不完全反應(yīng)者或甲氨蝶呤不充分反應(yīng)者。

可根據(jù)本發(fā)明治療的CD16+病癥的實(shí)例包括但不限于全身性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，青少年慢性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病變，全身性硬化癥(硬皮病)，特發(fā)性炎癥性肌病變(皮膚肌炎，多發(fā)性肌炎)，休格連氏綜合征(Sjogren′s syndrome)，全身性血管炎，類肉瘤病，自體免疫性溶血性貧血(免疫全部血球減少癥，陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿)，自體免疫性血小板減少癥(特發(fā)性血小板減少性紫癜，免疫介導(dǎo)的血小板減少癥)，甲狀腺炎(葛瑞夫氏病(Grave′s disease)，橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)，青少年淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎，萎縮性甲狀腺炎)，糖尿病，免疫介導(dǎo)的腎病(腎絲球腎炎，小管間質(zhì)性腎炎)，中樞和周邊神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病(如多發(fā)性硬化癥，特發(fā)性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病變或格林-巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome)以及慢性炎癥性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病變)，肝膽疾病(如傳染性肝炎(A，B，C，D，E型肝炎和其它非親肝性病毒性肝炎)，自體免疫性慢性活動性肝炎，原發(fā)性膽汁性硬化，肉芽腫性肝炎和硬化性膽管炎)，炎癥性腸病(IBD)(包括潰瘍性結(jié)腸炎，克隆氏病，麩質(zhì)敏感性腸病和惠普爾氏病(Whipple′s disease))，自體免疫性或免疫介導(dǎo)的皮膚疾病(包括大皰性皮膚疾病，多形性紅斑和接觸性皮炎)，牛皮癬，過敏性疾病(如哮喘，過敏性鼻炎，異位性皮炎，食物過敏和蕁麻疹)，肺免疫疾病(如嗜酸性球性肺炎，特發(fā)性肺纖維化和過敏性肺炎)，移植相關(guān)疾病(包括移植排斥和移植物抗宿主疾病)，纖維化(包括腎纖維化和肝纖維化)，心血管疾病(包括動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病)，與慢性腎病，心肌梗塞，和充血性心臟衰竭相關(guān)的心血管事件，糖尿病(包括II型糖尿病)，伴有機(jī)化性肺炎的閉塞性細(xì)支氣管炎(BOOP)，噬血細(xì)胞性綜合征，巨噬細(xì)胞活化綜合征，類肉瘤病和牙周炎。傳染性疾病包括病毒性疾病(如AIDS(HIV感染)，A，B，C，D和E型肝炎，皰疹等)，細(xì)菌感染，真菌感染，原蟲感染和寄生蟲感染。

如本文所用的“治療”是指治療性治療與目標(biāo)在于預(yù)防或減緩(減輕)靶向的病理病狀或病癥的防治性或預(yù)防性措施兩者。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語“治療”涵蓋任何施用或施用針對包括人的哺乳動物的疾病的治療劑，并且包括抑制或減緩疾病或疾病進(jìn)展；部分或完全減輕疾病，例如通過導(dǎo)致消退或恢復(fù)或修復(fù)喪失，失去或缺損功能；刺激低效過程；或?qū)е录膊∑脚_期的嚴(yán)重性降低。術(shù)語“治療”也包括減輕任何表型特征的嚴(yán)重性和/或降低那個(gè)特征的發(fā)生，程度或可能性。需要治療者包括已患有病癥者以及傾向于患有病癥者或待預(yù)防病癥者。

“長期”施藥是指與急性模式相反，以連續(xù)模式施用藥劑以便持續(xù)延長時(shí)期維持初始治療作用(活性)?！伴g歇”施藥是并非不中斷連續(xù)進(jìn)行，而是在本質(zhì)上是循環(huán)的治療。

術(shù)語“有效量”或“治療有效量”是指有效治療受試者的疾病或病癥的藥物量。在某些實(shí)施方案中，有效量是指在各種劑量下且持續(xù)必要時(shí)期，有效達(dá)成所需治療或防治結(jié)果的量。本發(fā)明的抗CSF1R抗體的治療有效量可根據(jù)如個(gè)體的疾病病況，年齡，性別和重量以及抗CSF1R抗體在個(gè)體中引發(fā)所需反應(yīng)的能力的因素而變化。治療有效量涵蓋治療有益作用勝過抗CSF1R抗體的任何毒性或不利作用的量。

“防治有效量”是指在各種劑量下且持續(xù)必要時(shí)期，有效達(dá)成所需防治結(jié)果的量。通常但非必定，因?yàn)榉乐蝿┝渴窃诩膊≈盎蛟缙谟糜谑茉囌咧?，所以防治有效量將小于治療有效量?/p>

“與一種或多種其它治療劑組合”施藥包括同時(shí)(并行)施藥和以任何順序連續(xù)施藥。

“藥學(xué)上可接受的載體”是指供與治療劑一起使用，共同構(gòu)成用于向受試者施用的“藥物組合物”的本領(lǐng)域中常規(guī)的無毒固體，半固體或液體填充劑，稀釋劑，囊封物質(zhì)，配制助劑或載體。藥學(xué)上可接受的載體應(yīng)在所用劑量和濃度下對接受者無毒，并且可與制劑的其它成分相容。藥學(xué)上可接受的載體應(yīng)適于所用制劑。舉例來說，如果治療劑待經(jīng)口施用，那么載體可為凝膠膠囊。如果治療劑待皮下施用，那么載體理想地應(yīng)對皮膚無刺激，并且不導(dǎo)致注射部位反應(yīng)。

抗CSF1R抗體

抗CSF1R抗體包括但不限于人源化抗體，嵌合抗體，小鼠抗體，人抗體和包含本文討論的重鏈和/或輕鏈CDR的抗體。

示例性人源化抗體

在一些實(shí)施方案中，提供結(jié)合CSF1R的人源化抗體。人源化抗體適用作治療分子，因?yàn)槿嗽椿贵w降低或消除對非人抗體的人免疫應(yīng)答(如人抗小鼠抗體(HAMA)應(yīng)答)，所述免疫應(yīng)答可導(dǎo)致對抗體治療劑的免疫應(yīng)答和治療劑有效性降低。

非限制性示例性人源化抗體包括本文所述的huAb1至huAb16。非限制性示例性人源化抗體也包括包含選自huAb1至huAb16的抗體的重鏈可變區(qū)和/或選自huAb1至huAb16的抗體的輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例性人源化抗體包括包含選自SEQ ID NO:39至45的重鏈可變區(qū)和/或選自SEQ ID NO:46至52的輕鏈可變區(qū)的抗體。示例性人源化抗體也包括但不限于包含選自0301，0302和0311的抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，和/或輕鏈CDR1，CDR2和CDR3的人源化抗體。

在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含選自0301，0302和0311的抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3和/或輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。非限制性示例性人源化抗CSF1R抗體包括包含選自：SEQ ID NO:15，16和17；SEQ ID NO:21，22和23；以及SEQ ID NO:27，28和29的重鏈CDR1，CDR2和CDR3集合的抗體。非限制性示例性人源化抗CSF1R抗體也包括包含選自：SEQ ID NO:18，19和20；SEQ ID NO:24，25和26；以及SEQ ID NO:30，31和32的輕鏈CDR1，CDR2和CDR3集合的抗體。

非限制性示例性人源化抗CSF1R抗體包括包含表1中的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，以及輕鏈CDR1，CDR2和CDR3集合(以SEQ ID NO示出；對于序列，參見表8)的抗體。表1的各行示出一示例性抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，以及輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。

表1：重鏈和輕鏈CDR

其它示例性人源化抗體

在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈，并且其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈，其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈；和含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合CSF1R。

如本文所用，可使用例如計(jì)算機(jī)程序確定特定多肽是否與某一氨基酸序列例如至少95％相同。當(dāng)確定特定序列是否與參照序列例如95％相同時(shí)，同一性百分比是歷經(jīng)參照氨基酸序列的全長加以計(jì)算。

在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)本文討論的CDR。也就是說，在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)選自本文討論的重鏈CDR1，本文討論的重鏈CDR2，本文討論的重鏈CDR3，本文討論的輕鏈CDR1，本文討論的輕鏈CDR2和本文討論的輕鏈CDR3的CDR。此外，在一些實(shí)施方案中，人源化抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)基于本文討論的CDR的突變CDR，其中所述突變CDR相對于本文討論的CDR包含1，2，3或4個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是保守性氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為特定CDR序列選擇一個(gè)或多個(gè)適合保守性氨基酸取代，其中預(yù)測所述適合保守性氨基酸取代不顯著改變包含突變CDR的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性人源化抗CSF1R抗體也包括與本文所述的抗體競爭結(jié)合CSF1R的抗體。因此，在一些實(shí)施方案中，提供與選自Fab 0301，0302和0311；和那些Fab的二價(jià)(即具有兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈)抗體形式的抗體競爭結(jié)合CSF1R的人源化抗CSF1R抗體。

示例性人源化抗體恒定區(qū)

在一些實(shí)施方案中，本文所述的人源化抗體包含一個(gè)或多個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自IgA，IgG和IgD的同種型。在一些實(shí)施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人源化抗體包含人IgG恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人源化抗體包含人IgG4重鏈恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，本文所述的人源化抗體在人IgG4恒定區(qū)中包含S241P突變。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人源化抗體包含人IgG4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

對重鏈恒定區(qū)的選擇可決定抗體在體內(nèi)是否將具有效應(yīng)物功能。在一些實(shí)施方案中，所述效應(yīng)物功能包括抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)，并且可導(dǎo)致抗體所結(jié)合的細(xì)胞被殺死。在包括治療一些癌癥的方法的一些治療方法中，細(xì)胞殺死可為合乎需要的，例如當(dāng)抗體結(jié)合支持腫瘤的維持或生長的細(xì)胞時(shí)?？芍С帜[瘤的維持或生長的示例性細(xì)胞包括但不限于腫瘤細(xì)胞自身，有助于血管結(jié)構(gòu)向腫瘤募集的細(xì)胞，以及提供支持或促進(jìn)腫瘤生長或腫瘤存活的配體，生長因子或反受體的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG1重鏈或人IgG3重鏈的抗CSF1R抗體。

在一些治療方法中，效應(yīng)物功能可不合乎需要。舉例來說，在一些實(shí)施方案中，可合乎需要的是用于治療RA的抗體不具有效應(yīng)物功能。因此，在一些實(shí)施方案中，被開發(fā)用于治療癌癥的抗CSF1R抗體可不適用于治療RA。因此，在一些實(shí)施方案中，缺乏顯著效應(yīng)物功能的抗CSF1R抗體用于治療RA。在一些實(shí)施方案中，用于治療RA的抗CSF1R抗體包含人IgG4或IgG2重鏈恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，IgG4恒定區(qū)包含S241P突變。

可通過任何方法使抗體人源化。非限制性示例性人源化方法包括例如美國專利號5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370；Jones等,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature 332：323-27(1988)；Verhoeyen等,Science 239：1534-36(1988)；以及美國公布號US 2009/0136500中所述的方法。

如上所指示，人源化抗體是非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少一個(gè)氨基酸已被來自人框架區(qū)中的相應(yīng)位置的氨基酸置換的抗體。在一些實(shí)施方案中，非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少2個(gè)，至少3個(gè)，至少4個(gè)，至少5個(gè)，至少6個(gè)，至少7個(gè)，至少8個(gè)，至少9個(gè)，至少10個(gè)，至少11個(gè)，至少12個(gè)，至少15個(gè)或至少20個(gè)氨基酸被來自一個(gè)或多個(gè)人框架區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)位置的氨基酸置換。

在一些實(shí)施方案中，用于取代的一些相應(yīng)人氨基酸來自不同人免疫球蛋白基因的框架區(qū)。也就是說，在一些所述實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)非人氨基酸可被來自第一人抗體的人框架區(qū)的相應(yīng)氨基酸置換或由第一人免疫球蛋白基因編碼，一個(gè)或多個(gè)非人氨基酸可被來自第二人抗體的人框架區(qū)的相應(yīng)氨基酸置換或由第二人免疫球蛋白基因編碼，一個(gè)或多個(gè)非人氨基酸可被來自第三人抗體的人框架區(qū)的相應(yīng)氨基酸置換或由第三人免疫球蛋白基因編碼等。此外，在一些實(shí)施方案中，用于在例如FR2的單一框架區(qū)中進(jìn)行取代的全部相應(yīng)人氨基酸無需來自同一人框架。然而，在一些實(shí)施方案中，用于取代的全部相應(yīng)人氨基酸都來自同一人抗體或由同一人免疫球蛋白基因編碼。

在一些實(shí)施方案中，通過用相應(yīng)人框架區(qū)置換一個(gè)或多個(gè)整個(gè)框架區(qū)來使抗體人源化。在一些實(shí)施方案中，選擇與所置換的非人框架區(qū)具有最高同源性程度的人框架區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述人源化抗體是CDR移植抗體。

在一些實(shí)施方案中，在CDR移植之后，一個(gè)或多個(gè)框架氨基酸變回小鼠框架區(qū)中的相應(yīng)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行所述“回復(fù)突變”以保留一個(gè)或多個(gè)似乎促成一個(gè)或多個(gè)CDR的結(jié)構(gòu)和/或可涉及于抗原接觸中和/或似乎涉及于抗體的總體結(jié)構(gòu)完整性中的小鼠框架氨基酸。在一些實(shí)施方案中，在CDR移植之后，對抗體的框架區(qū)進(jìn)行10個(gè)或10個(gè)以下，9個(gè)或9個(gè)以下，8個(gè)或8個(gè)以下，7個(gè)或7個(gè)以下，6個(gè)或6個(gè)以下，5個(gè)或5個(gè)以下，4個(gè)或4個(gè)以下，3個(gè)或3個(gè)以下，2個(gè)或2個(gè)以下，1個(gè)或0個(gè)回復(fù)突變。

在一些實(shí)施方案中，人源化抗體也包含人重鏈恒定區(qū)和/或人輕鏈恒定區(qū)。

示例性嵌合抗體

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體是嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)非人可變區(qū)和至少一個(gè)人恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體的全部可變區(qū)都為非人可變區(qū)，并且抗CSF1R抗體的全部恒定區(qū)都為人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗體的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)是小鼠可變區(qū)。嵌合抗體的人恒定區(qū)無需與非人恒定區(qū)具有相同同種型，如果存在非人恒定區(qū)，那么應(yīng)置換。嵌合抗體例如討論于美國專利號4,816,567；以及Morrison等Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-55(1984)中。

非限制性示例性嵌合抗體包括包含選自0301，0302和0311的抗體的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的嵌合抗體。其它非限制性示例性嵌合抗體包括包含選自0301，0302和0311的抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，和/或輕鏈CDR1，CDR2和CDR3的嵌合抗體。

非限制性示例性嵌合抗CSF1R抗體包括包含以下各對重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體：SEQ ID NO:9和10；SEQ ID NO:11和12；以及SEQ ID NO:13和14。

非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含以上在表1中示出的一組重鏈CDR1，CDR2和CDR3，以及輕鏈CDR1，CDR2和CDR3的抗體。

其它示例性嵌合抗體

在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈，其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈，其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈；以及含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合CSF1R。

在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)本文討論的CDR。也就是說，在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)選自本文討論的重鏈CDR1，本文討論的重鏈CDR2，本文討論的重鏈CDR3，本文討論的輕鏈CDR1，本文討論的輕鏈CDR2和本文討論的輕鏈CDR3的CDR。此外，在一些實(shí)施方案中，嵌合抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)基于本文討論的CDR的突變CDR，其中所述突變CDR相對于本文討論的CDR包含1，2，3或4個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是保守性氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為特定CDR序列選擇一個(gè)或多個(gè)適合保守性氨基酸取代，其中預(yù)測所述適合保守性氨基酸取代不顯著改變包含突變CDR的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性嵌合抗CSF1R抗體也包括與本文所述的抗體競爭結(jié)合CSF1R的嵌合抗體。因此，在一些實(shí)施方案中，提供與選自Fab 0301，0302和0311；和那些Fab的二價(jià)(即具有兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈)抗體形式的抗體競爭結(jié)合CSF1R的嵌合抗CSF1R抗體。

示例性嵌合抗體恒定區(qū)

在一些實(shí)施方案中，本文所述的嵌合抗體包含一個(gè)或多個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自IgA，IgG和IgD的同種型。在一些實(shí)施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實(shí)施方案中，本文所述的嵌合抗體包含人IgG恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的嵌合抗體包含人IgG4重鏈恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，本文所述的嵌合抗體在人IgG4恒定區(qū)中包含S241P突變。在一些實(shí)施方案中，本文所述的嵌合抗體包含人IgG4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

如上所指示，效應(yīng)物功能是否合乎需要可取決于抗體所意圖的特定治療方法。因此，在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG1重鏈恒定區(qū)或人IgG3重鏈恒定區(qū)的嵌合抗CSF1R抗體。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能不合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG4或IgG2重鏈恒定區(qū)的嵌合抗CSF1R抗體。

示例性人抗體

可通過任何適合方法制備人抗體。非限制性示例性方法包括在包含人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因小鼠中制備人抗體。參見例如Jakobovits等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551-55(1993)；Jakobovits等,Nature 362:255-8(1993)；Lonberg等,Nature 368:856-9(1994)；以及美國專利號5,545,807；6,713,610；6,673,986；6,162,963；5,545,807；6,300,129；6,255,458；5,877,397；5,874,299；和5,545,806。

非限制性示例性方法也包括使用噬菌體展示文庫制備人抗體。參見例如Hoogenboom等,J.Mol.Biol.227:381-8(1992)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-97(1991)；以及PCT公布號WO 99/10494。

在一些實(shí)施方案中，人抗CSF1R抗體結(jié)合具有序列SEQ ID NO:1的多肽。示例性人抗CSF1R抗體也包括與本文所述的抗體競爭結(jié)合CSF1R的抗體。因此，在一些實(shí)施方案中，提供與選自Fab 0301，0302和0311和那些Fab的二價(jià)(即具有兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈)抗體形式的抗體競爭結(jié)合CSF1R的人抗CSF1R抗體。

在一些實(shí)施方案中，人抗CSF1R抗體包含一個(gè)或多個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自IgA，IgG和IgD的同種型。在一些實(shí)施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人抗體包含人IgG恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人抗體包含人IgG4重鏈恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，本文所述的人抗體在人IgG4恒定區(qū)中包含S241P突變。在一些實(shí)施方案中，本文所述的人抗體包含人IgG4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG1重鏈恒定區(qū)或人IgG3重鏈恒定區(qū)的人抗CSF1R抗體。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能不合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG4或IgG2重鏈恒定區(qū)的人抗CSF1R抗體。

其它示例性抗CSF1R抗體

示例性抗CSF1R抗體也包括但不限于包含例如一個(gè)或多個(gè)本文所述的CDR序列的小鼠，人源化，人，嵌合和工程化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的輕鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的重鏈可變區(qū)和本文所述的輕鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的重鏈CDR1，CDR2和CDR3。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含本文所述的重鏈CDR1，CDR2和CDR3以及本文所述的輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的重鏈可變區(qū)。非限制性示例性抗CSF1R抗體也包括包含選自人源化抗體huAb1至huAb16的抗體的重鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含含有選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列的重鏈可變區(qū)的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的輕鏈可變區(qū)。非限制性示例性抗CSF1R抗體也包括包含選自人源化抗體huAb1至huAb16的抗體的輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含含有選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列的輕鏈可變區(qū)的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。非限制性示例性抗CSF1R抗體也包括包含選自人源化抗體huAb1至huAb16的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含以下各對重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體：SEQ ID NO:9和10；SEQ ID NO:11和12；和SEQ ID NO:13和14；SEQ ID NO:39和40；SEQ ID NO:41和42；SEQ ID NO:43和44；SEQ ID NO:45和46；SEQ ID NO:47和48；SEQ ID NO:49和50；以及SEQ ID NO:51和52。非限制性示例性抗CSF1R抗體也包括包含以下各對重鏈和輕鏈的抗體：SEQ ID NO:33和34；SEQ ID NO:35和36；以及SEQ ID NO:37和38。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3。非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含選自：SEQ ID NO:15，16和17；SEQ ID NO:21，22和23；以及SEQ ID NO:27，28和29的重鏈CDR1，CDR2和CDR3集合的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含選自：SEQ ID NO:18，19和20；SEQ ID NO:24，25和26；以及SEQ ID NO:30，31和32的輕鏈CDR1，CDR2和CDR3集合的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含選自Fab 0301，0302和0311的抗體的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，以及輕鏈CDR1，CDR2和CDR3。

非限制性示例性抗CSF1R抗體包括包含以上在表1中示出的重鏈CDR1，CDR2和CDR3，以及輕鏈CDR1，CDR2和CDR3集合的抗體。

其它示例性抗體

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈，其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈，其中所述抗體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含含有與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的重鏈；以及含有與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合CSF1R。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)本文討論的CDR。也就是說，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)選自本文討論的重鏈CDR1，本文討論的重鏈CDR2，本文討論的重鏈CDR3，本文討論的輕鏈CDR1，本文討論的輕鏈CDR2和本文討論的輕鏈CDR3的CDR。此外，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體包含至少一個(gè)基于本文討論的CDR的突變CDR，其中所述突變CDR相對于本文討論的CDR包含1，2，3或4個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是保守性氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為特定CDR序列選擇一個(gè)或多個(gè)適合保守性氨基酸取代，其中預(yù)測所述適合保守性氨基酸取代不顯著改變包含突變CDR的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性抗CSF1R抗體也包括與本文所述的抗體競爭結(jié)合CSF1R的抗體。因此，在一些實(shí)施方案中，提供與選自Fab 0301，0302和0311和那些Fab的二價(jià)(即具有兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈)抗體形式的抗體競爭結(jié)合CSF1R的抗CSF1R抗體。

示例性抗體恒定區(qū)

在一些實(shí)施方案中，本文所述的抗體包含一個(gè)或多個(gè)人恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自IgA，IgG和IgD的同種型。在一些實(shí)施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實(shí)施方案中，本文所述的抗體包含人IgG恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的抗體包含人IgG4重鏈恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，本文所述的抗體在人IgG4恒定區(qū)中包含S241P突變。在一些實(shí)施方案中，本文所述的抗體包含人IgG4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

如上所指示，效應(yīng)物功能是否合乎需要可取決于抗體所意圖的特定治療方法。因此，在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG1重鏈恒定區(qū)或人IgG3重鏈恒定區(qū)的抗CSF1R抗體。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能不合乎需要時(shí)，選擇包含人IgG4或IgG2重鏈恒定區(qū)的抗CSF1R抗體。

示例性抗CSF1R重鏈可變區(qū)

在一些實(shí)施方案中，提供抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)是小鼠可變區(qū)，人可變區(qū)或人源化可變區(qū)。

抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)包含重鏈CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3和CDR3。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)還包含重鏈FR1和/或FR4。非限制性示例性重鏈可變區(qū)包括但不限于具有選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:15，21和27的序列的CDR1。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:16，22和28的序列的CDR2。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:17，23和29的序列的CDR3。

非限制性示例性重鏈可變區(qū)包括但不限于包含選自：SEQ ID NO:15，16和17；SEQ ID NO:21，22和23；以及SEQ ID NO:27，28和29的CDR1，CDR2和CDR3集合的重鏈可變區(qū)。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈包含與選自SEQ ID NO:9，11，13，和39至45的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列，其中所述重鏈連同輕鏈一起能夠形成結(jié)合CSF1R的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈包含至少一個(gè)本文討論的CDR。也就是說，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈包含至少一個(gè)選自本文討論的重鏈CDR1，本文討論的重鏈CDR2和本文討論的重鏈CDR3的CDR。此外，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體重鏈包含至少一個(gè)基于本文討論的CDR的突變CDR，其中所述突變CDR相對于本文討論的CDR包含1，2，3或4個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是保守性氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為特定CDR序列選擇一個(gè)或多個(gè)適合保守性氨基酸取代，其中預(yù)測所述適合保守性氨基酸取代不顯著改變包含突變CDR的重鏈的結(jié)合性質(zhì)。

在一些實(shí)施方案中，重鏈包含重鏈恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，重鏈包含人重鏈恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自IgA，IgG和IgD的同種型。在一些實(shí)施方案中，人重鏈恒定區(qū)是IgG恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，重鏈包含人igG4重鏈恒定區(qū)。在一些所述實(shí)施方案中，人IgG4重鏈恒定區(qū)包含S241P突變。

在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能合乎需要時(shí)，重鏈包含人IgG1或IgG3重鏈恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)效應(yīng)物功能較不合乎需要時(shí)，重鏈包含人IgG4或IgG2重鏈恒定區(qū)。

示例性抗CSF1R輕鏈可變區(qū)

在一些實(shí)施方案中，提供抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)是小鼠可變區(qū)，人可變區(qū)或人源化可變區(qū)。

抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)包含輕鏈CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3和CDR3。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)還包含輕鏈FR1和/或FR4。非限制性示例性輕鏈可變區(qū)包括具有選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:18，24和30的序列的CDR1。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:19，25和31的序列的CDR2。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自SEQ ID NO:20，26和32的序列的CDR3。

非限制性示例性輕鏈可變區(qū)包括但不限于包含選自：SEQ ID NO:18，19和20；SEQ ID NO:24，25和26；以及SEQ ID NO:30，31和32的CDR1，CDR2和CDR3集合的輕鏈可變區(qū)。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈包含與選自SEQ ID NO:10，12，14，和46至52的序列至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％相同的可變區(qū)序列，其中所述輕鏈連同重鏈一起能夠形成結(jié)合CSF1R的抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈包含至少一個(gè)本文討論的CDR。也就是說，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈包含至少一個(gè)選自本文討論的輕鏈CDR1，本文討論的輕鏈CDR2和本文討論的輕鏈CDR3的CDR。此外，在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體輕鏈包含至少一個(gè)基于本文討論的CDR的突變CDR，其中所述突變CDR相對于本文討論的CDR包含1，2，3或4個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代是保守性氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為特定CDR序列選擇一個(gè)或多個(gè)適合保守性氨基酸取代，其中預(yù)測所述適合保守性氨基酸取代不顯著改變包含突變CDR的輕鏈的結(jié)合性質(zhì)。

在一些實(shí)施方案中，輕鏈包含人輕鏈恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人輕鏈恒定區(qū)選自人κ和人λ輕鏈恒定區(qū)。

示例性其它CSF1R結(jié)合分子

在一些實(shí)施方案中，提供結(jié)合CSF1R的其它分子。所述分子包括但不限于非典型骨架，如抗運(yùn)載蛋白(anti-calin)，纖維連接蛋白(adnectin)，錨蛋白重復(fù)序列(ankyrin repeat)等。參見例如Hosse等,Prot.Sci.15:14(2006)；Fiedler,M.和Skerra,A.,“Non-Antibody Scaffolds,”第467-499頁,Handbook of Therapeutic Antibodies,Dubel,S.編,Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2007。

抗CSF1R抗體的示例性性質(zhì)

在一些實(shí)施方案中，具有上述結(jié)構(gòu)的抗體以小于1nM的結(jié)合親和力(K_D)結(jié)合CSF1R，阻斷CSF1和/或IL-34結(jié)合CSF1R，并且抑制由CSF1和/或IL-34誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體結(jié)合CSF1R的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(CSF1R-ECD)。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體對CSF1R的結(jié)合親和力(K_D)小于1nM，小于0.5nM，小于0.1nM或小于0.05nM。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體的K_D在0.01與1nM之間，在0.01與0.5nM之間，在0.01與0.1nM之間，在0.01與0.05nM之間，或在0.02與0.05nM之間。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體阻斷配體結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體阻斷IL-34結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體阻斷CSF1與IL-34兩者結(jié)合CSF1R。在一些實(shí)施方案中，阻斷配體結(jié)合的抗體結(jié)合CSF1R的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。使用實(shí)施例7中所述的測定，當(dāng)抗體使配體對CSF1R的可檢測結(jié)合的量降低至少50％時(shí)，它被視為“阻斷配體結(jié)合CSF1R”。在一些實(shí)施方案中，使用實(shí)施例7中所述的測定，抗體使配體對CSF1R的可檢測結(jié)合的量降低至少60％，至少70％，至少80％或至少90％。在一些所述實(shí)施方案中，據(jù)稱抗體阻斷配體結(jié)合至少50％，至少60％，至少70％等。

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體抑制配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體抑制CSF1誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體抑制IL-34誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體抑制CSF1誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化與IL-34誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化兩者。使用實(shí)施例6中所述的測定，當(dāng)抗體使可檢測配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化的量降低至少50％時(shí)，它被視為“抑制配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化”。在一些實(shí)施方案中，使用實(shí)施例6中所述的測定，抗體使可檢測配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化的量降低至少60％，至少70％，至少80％或至少90％。在一些所述實(shí)施方案中，據(jù)稱抗體抑制配體誘導(dǎo)的CSF1R磷酸化至少50％，至少60％，至少70％等。

在一些實(shí)施方案中，抗體在CSF1和/或IL-34存在下抑制單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)。使用實(shí)施例10中所述的測定，當(dāng)抗體在CSF1和/或IL-34存在下使單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)的量降低至少50％時(shí)，它被視為“抑制單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)”。在一些實(shí)施方案中，使用實(shí)施例10中所述的測定，抗體在CSF1和/或IL-34存在下使單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)的量降低至少60％，至少70％，至少80％或至少90％。在一些所述實(shí)施方案中，據(jù)稱抗體抑制單核細(xì)胞增殖和/或存活反應(yīng)至少50％，至少60％，至少70％等。

示例性抗體綴合物

在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體綴合于標(biāo)記物和/或細(xì)胞毒性劑。如本文所用，標(biāo)記物是有助于檢測抗體和/或有助于檢測抗體所結(jié)合的分子的部分。非限制性示例性標(biāo)記物包括但不限于放射性同位素，熒光基團(tuán)，酶促基團(tuán)，化學(xué)發(fā)光基團(tuán)，生物素(biotin)，表位標(biāo)簽，金屬結(jié)合標(biāo)簽等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)預(yù)定應(yīng)用選擇適合標(biāo)記。

如本文所用，細(xì)胞毒性劑是降低一種或多種細(xì)胞的增殖能力的部分。當(dāng)細(xì)胞例如因?yàn)榻?jīng)受細(xì)胞凋亡或另外死亡，不能通過細(xì)胞周期繼續(xù)前進(jìn)和/或不能分裂，細(xì)胞分化等而致使細(xì)胞增殖能力變得較小時(shí)，所述細(xì)胞的增殖能力降低。非限制性示例性細(xì)胞毒性劑包括但不限于放射性同位素，毒素和化學(xué)治療劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)預(yù)定應(yīng)用選擇適合細(xì)胞毒性劑。

在一些實(shí)施方案中，使用體外化學(xué)方法使標(biāo)記和/或細(xì)胞毒性劑綴合于抗體。非限制性示例性化學(xué)綴合方法在本領(lǐng)域中是已知的，并且包括可自例如Thermo Scientific Life Science Research Produces(先前是Pierce；Rockford,IL)，Prozyme(Hayward,CA)，SACRI Antibody Services(Calgary,Canada)，AbD Serotec(Raleigh,NC)等商購獲得的服務(wù)，方法和/或試劑。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)標(biāo)記和/或細(xì)胞毒性劑是多肽時(shí)，所述標(biāo)記和/或細(xì)胞毒性劑可與至少一個(gè)抗體鏈一起自同一表達(dá)載體表達(dá)以產(chǎn)生包含融合于抗體鏈的所述標(biāo)記和/或細(xì)胞毒性劑的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)預(yù)定應(yīng)用選擇適用于使標(biāo)記和/或細(xì)胞毒性劑綴合于抗體的方法。

示例性前導(dǎo)序列

為使一些分泌蛋白質(zhì)大量表達(dá)并分泌，來自異源蛋白質(zhì)的前導(dǎo)序列可為合乎需要的。在一些實(shí)施方案中，前導(dǎo)序列選自分別是輕鏈和重鏈前導(dǎo)序列的SEQ ID NO:3和4。在一些實(shí)施方案中，采用異源前導(dǎo)序列可為有利的，因?yàn)楫?dāng)前導(dǎo)序列在分泌過程期間于ER中移除時(shí)，所得成熟多肽可保持不變。添加異源前導(dǎo)序列可為表達(dá)并分泌一些蛋白質(zhì)所需。

某些示例性前導(dǎo)序列例如描述于由新加坡國立大學(xué)生物化學(xué)系(Department of Biochemistry,National University of Singapore)維護(hù)的在線前導(dǎo)序列數(shù)據(jù)庫(Leader sequence Database)中。參見Choo等,BMC Bioinformatics,6：249(2005)；以及PCT公布號WO 2006/081430。

編碼抗CSF1R抗體的核酸分子

提供包含編碼抗CSF1R抗體的一個(gè)或多個(gè)鏈的多核苷酸的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，核酸分子包含編碼抗CSF1R抗體的重鏈或輕鏈的多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，核酸分子包含編碼抗CSF1R抗體的重鏈的多核苷酸與編碼抗CSF1R抗體的輕鏈的多核苷酸兩者。在一些實(shí)施方案中，第一核酸分子包含編碼重鏈的第一多核苷酸，并且第二核酸分子包含編碼輕鏈的第二多核苷酸。

在一些所述實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈?zhǔn)亲砸粋€(gè)核酸分子表達(dá)，或自兩個(gè)單獨(dú)核酸分子表達(dá)為兩個(gè)單獨(dú)多肽。在一些實(shí)施方案中，如當(dāng)抗體是scFv時(shí)，單一多核苷酸編碼包含連接在一起的重鏈與輕鏈兩者的單一多肽。

在一些實(shí)施方案中，編碼抗CSF1R抗體的重鏈或輕鏈的多核苷酸包含編碼在翻譯時(shí)位于重鏈或輕鏈的N末端的前導(dǎo)序列的核苷酸序列。如上所討論，前導(dǎo)序列可為天然重鏈或輕鏈前導(dǎo)序列，或可為另一異源前導(dǎo)序列。

可使用本領(lǐng)域中常規(guī)的重組DNA技術(shù)構(gòu)建核酸分子。在一些實(shí)施方案中，核酸分子是適于在所選宿主細(xì)胞中表達(dá)的表達(dá)載體。

抗CSF1R抗體表達(dá)和產(chǎn)生

載體

提供包含編碼抗CSF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈的多核苷酸的載體。也提供包含編碼抗CSF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈的多核苷酸的載體。所述載體包括但不限于DNA載體，噬菌體載體，病毒載體，反轉(zhuǎn)錄病毒載體等。在一些實(shí)施方案中，載體包含編碼重鏈的第一多核苷酸序列和編碼輕鏈的第二多核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈自載體表達(dá)為兩個(gè)單獨(dú)多肽。在一些實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈表達(dá)為單一多肽的一部分，例如像當(dāng)抗體是scFv時(shí)。

在一些實(shí)施方案中，第一載體包含編碼重鏈的多核苷酸，并且第二載體包含編碼輕鏈的多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，第一載體和第二載體以類似量(如類似摩爾量或類似質(zhì)量)轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，摩爾比或質(zhì)量比介于5:1與1:5之間的第一載體和第二載體轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，使用編碼重鏈的載體與編碼輕鏈的載體的介于1:1與1:5之間的質(zhì)量比。在一些實(shí)施方案中，使用編碼重鏈的載體與編碼輕鏈的載體的1:2的質(zhì)量比。

在一些實(shí)施方案中，選擇針對多肽在CHO或CHO源性細(xì)胞中或在NSO細(xì)胞中的表達(dá)加以優(yōu)化的載體。示例性所述載體例如描述于Running Deer等,Biotechnol.Prog.20:880-889(2004)中。

在一些實(shí)施方案中，選擇用于在包括人的動物中體內(nèi)表達(dá)抗CSF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈的載體。在一些所述實(shí)施方案中，多肽的表達(dá)受控于以組織特異性方式起作用的啟動子。舉例來說，肝特異性啟動子例如描述于PCT公布號WO 2006/076288中。

宿主細(xì)胞

在各種實(shí)施方案中，抗CSF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈可在如細(xì)菌細(xì)胞的原核細(xì)胞中；或在如真菌細(xì)胞(如酵母)，植物細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞的真核細(xì)胞中表達(dá)。所述表達(dá)可例如根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序來進(jìn)行。可用于表達(dá)多肽的示例性真核細(xì)胞包括但不限于COS細(xì)胞，包括COS 7細(xì)胞；293細(xì)胞，包括293-6E細(xì)胞；CHO細(xì)胞，包括CHO-S和DG44細(xì)胞；細(xì)胞(Crucell)；以及NSO細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈可在酵母中表達(dá)。參見例如美國公布號US 2006/0270045A1。在一些實(shí)施方案中，基于特定真核宿主細(xì)胞能夠?qū)笴SF1R重鏈和/或抗CSF1R輕鏈進(jìn)行所需翻譯后修飾來對它進(jìn)行選擇。舉例來說，在一些實(shí)施方案中，CHO細(xì)胞產(chǎn)生唾液酸化程度高于293細(xì)胞中產(chǎn)生的相同多肽的多肽。

將一個(gè)或多個(gè)核酸引入所需宿主細(xì)胞中可通過任何方法來達(dá)成，所述方法包括但不限于磷酸鈣轉(zhuǎn)染，DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，電穿孔，轉(zhuǎn)導(dǎo)，感染等。非限制性示例性方法例如描述于Sambrook等,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,第3版Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)中?？筛鶕?jù)任何適合方法使核酸短暫或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染于所需宿主細(xì)胞中。

在一些實(shí)施方案中，可根據(jù)任何適合方法在已用一種或多種編碼多肽的核酸分子工程化或轉(zhuǎn)染的動物中體內(nèi)產(chǎn)生一種或多種多肽。

純化抗CSF1R抗體

可通過任何適合方法純化抗CSF1R抗體。所述方法包括但不限于使用親和力基質(zhì)或疏水性相互作用色譜。適合親和配體包括CSF1R ECD和結(jié)合抗體恒定區(qū)的配體。舉例來說，蛋白質(zhì)A，蛋白質(zhì)G，蛋白質(zhì)A/G或抗體親和柱可用于結(jié)合恒定區(qū)，并且純化抗CSF1R抗體。疏水性相互作用色譜(例如丁基或苯基柱)也可適于純化一些多肽。許多純化多肽的方法在本領(lǐng)域中是已知的。

無細(xì)胞產(chǎn)生抗CSF1R抗體

在一些實(shí)施方案中，在無細(xì)胞系統(tǒng)中產(chǎn)生抗CSF1R抗體。非限制性示例性無細(xì)胞系統(tǒng)例如描述于Sitaraman等,Methods Mol.Biol.498:229-44(2009)；Spirin,Trends Biotechnol.22:538-45(2004)；Endo等,Biotechnol.Adv.21：695-713(2003)中。

治療組合物和方法

使用抗CSF1R抗體治療疾病的方法

本文提供用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體治療CD16+病癥的方法。本文提供用結(jié)合CSF1R和阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。

在一些實(shí)施方案中，提供治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其中所述方法包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者施用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體，如選自huAb1至huAb16的抗體。在一些實(shí)施方案中，提供治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，其中所述方法包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者施用抗體huAb1。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括施用至少一劑所述抗體，其中劑量介于0.2mg/kg和10mg/kg之間，如介于1mg/kg和10mg/kg或3mg/kg和10mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，所述抗體在單劑1mg/kg后在約2周中，在單劑3mg/kg后在約6周后，及在單劑10mg/kg后在約12周后自血清清除。施用單劑huAb1的人中自血清的清除顯著且出乎意料地比接受相同劑量的食蟹猴中自血清的清除要慢。在一些實(shí)施方案中，較慢的清除速率容許抗體不太頻繁的給藥。在一些實(shí)施方案中，可每兩周一次或以更低頻率施用所述抗體。例如，在一些實(shí)施方案中，可每兩周一次，每三周一次，每四周一次，每個(gè)月一次，每五周一次，每六周一次，每七周一次，每兩個(gè)月一次，每三個(gè)月一次，或每年四次施用所述抗體。

在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用之后的半衰期大于2天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用之后的半衰期大于4天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用之后的半衰期大于15天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用約1.0mg/kg的一劑之后的半衰期大于2天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用約3.0mg/kg的一劑之后的半衰期大于4天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用約10mg/kg的一劑之后的半衰期大于15天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用約10mg/kg的一劑之后的半衰期大于18天。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用介于1mg/kg和10mg/kg之間的一劑之后的半衰期介于2天和25天之間。在一些實(shí)施方案中，huAb1在向人受試者施用介于3mg/kg和10mg/kg之間的一劑之后的半衰期介于4天和25天之間。

在一些實(shí)施方案中，提供減少CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目的方法，其中所述方法包括向CD16+單核細(xì)胞增多的受試者施用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體，如選自huAb1至huAb16的抗體。在一些實(shí)施方案中，所述受試者具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在一些實(shí)施方案中，施用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體不減少CD16-單核細(xì)胞的數(shù)目。在一些實(shí)施方案中，在向受試者施用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體時(shí)，CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目減少的程度比CD16-單核細(xì)胞的數(shù)目要大。在一些實(shí)施方案中，CD16+單核細(xì)胞的數(shù)目在施用至少一劑所述抗體，如huAb1之后減少至少20％，至少30％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，或至少90％。在一些實(shí)施方案中，CD16-單核細(xì)胞的數(shù)目減少不及30％，不及20％，或不及10％。在一些實(shí)施方案中，在施用一劑所述抗體之后CD16+單核細(xì)胞數(shù)目的減少持續(xù)至少一周，至少兩周，至少三周，至少四周，至少五周，至少6周，至少七周，或至少八周。在一些實(shí)施方案中，所述CD16+單核細(xì)胞為CD16+外周血單核細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述CD16-單核細(xì)胞為CD16-外周血單核細(xì)胞。

在一些實(shí)施方案中，提供減輕與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的骨再吸收的方法，其中所述方法包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者施用結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體，如選自huAb1至huAb16的抗體。在一些實(shí)施方案中，提供減輕與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的骨再吸收的方法，其中所述方法包括向具有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者施用抗體huAb1。在一些實(shí)施方案中，減輕骨再吸收包括減少受到類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎侵襲的關(guān)節(jié)中破骨細(xì)胞的數(shù)目。

在一些實(shí)施方案中，骨再吸收可通過測定來自受試者的血漿中的CTx和/或TRAP5b的水平加以測量，其中CTx和/或TRAP5b的水平升高指示受試者中的骨再吸收升高。因此，在一些實(shí)施方案中，CTx和/或TRAP5b的水平降低指示骨再吸收降低。在某些情況下，可在用結(jié)合CSF1R的抗體治療之前和之后測定CTx和/或TRAP5b水平，和/或可在整個(gè)治療過程期間定期測定以監(jiān)測治療在降低骨喪失方面的有效性。可使用本領(lǐng)域中的任何方法，包括但不限于ELISA(包括FAICEA或片段吸附免疫捕捉酶促測定；參見例如TRAP5b測定,TECOmedical Group,Sissach,Switzerland)來測定CTx和/或TRAP5b水平。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合CSF1R并阻斷CSF1和IL-34配體結(jié)合的抗體，如huAb1的施用降低至少一種骨再吸收標(biāo)志物，如例如CTx和/或TRAP5b。在一些實(shí)施方案中，骨再吸收標(biāo)志物的血清水平降低至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，或至少75％。在一些實(shí)施方案中，在施用一劑所述抗體之后骨再吸收標(biāo)志物的血清水平的降低持續(xù)至少一周，至少兩周，至少三周，至少四周，至少五周，至少6周，至少七周，或至少八周。

施藥途徑和載體

在各種實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體可通過各種途徑體內(nèi)施用，所述途徑包括但不限于經(jīng)口，動脈內(nèi)，胃腸外，鼻內(nèi)，肌肉內(nèi)，心內(nèi)，室內(nèi)，氣管內(nèi)，經(jīng)頰，經(jīng)直腸，腹膜內(nèi)，皮內(nèi)，表面，經(jīng)皮和鞘內(nèi)或另外通過植入或吸入。主題組合物可配制成固體，半固體，液體或氣體形式的制劑；包括但不限于片劑，膠囊，粉末，顆粒劑，軟膏劑，溶液，栓劑，灌腸劑，注射液，吸入劑和氣霧劑。編碼抗CSF1R抗體的核酸分子可涂布于金微粒上，并且通過如文獻(xiàn)(參見例如Tang等,Nature 356:152-154(1992))中所述的粒子轟擊裝置或“基因槍”皮內(nèi)遞送。可根據(jù)預(yù)定應(yīng)用選擇適當(dāng)制劑和施藥途徑。

在各種實(shí)施方案中，以具有廣泛多種藥學(xué)上可接受的載體的制劑形式提供包含抗CSF1R抗體的組合物(參見例如Gennaro,Remington:The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons:Drugfacts Plus,第20版(2003)；Ansel等,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版,Lippencott Williams and Wilkins(2004)；Kibbe等,Handbook of Pharmaceutical Excipients,第3版,Pharmaceutical Press(2000))。包括媒介物，佐劑和稀釋劑的各種藥學(xué)上可接受的載體是可用的。此外，如pH調(diào)整劑和緩沖劑，張力調(diào)整劑，穩(wěn)定劑，濕潤劑等的各種藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)也是可用的。非限制性示例性載體包括鹽水，緩沖鹽水，右旋糖，水，甘油，乙醇及其組合。

在各種實(shí)施方案中，可通過將抗CSF1R抗體溶解，混懸或乳化于水性或非水性溶劑，如植物油或其它油，合成脂族酸甘油酯，高級脂肪酸的酯，或丙二醇中；并且必要時(shí)與常規(guī)添加劑，如增溶劑，等張劑，混懸劑，乳化劑，穩(wěn)定劑和防腐劑一起來配制用于注射，包括皮下施藥的包含抗CSF1R抗體的組合物。在各種實(shí)施方案中，可例如使用加壓可接受的推進(jìn)劑(如二氯二氟甲烷，丙烷，氮?dú)獾?配制用于吸入的組合物。在各種實(shí)施方案中，組合物也可如與生物可降解或非生物可降解聚合物一起配制成持續(xù)釋放微膠囊。一非限制性示例性生物可降解制劑包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。一非限制性示例性非生物可降解制劑包括聚甘油脂肪酸酯。制備所述制劑的某些方法例如描述于EP 1 125 584 A1中。

也提供包含一個(gè)或多個(gè)各自含有一劑或多劑抗CSF1R抗體的容器的醫(yī)藥包裝和試劑盒。在一些實(shí)施方案中，提供單位劑量，其中所述單位劑量含有預(yù)定量的包含抗CSF1R抗體，有或無一種或多種其它藥劑的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述單位劑量是供應(yīng)于用于注射的單次使用預(yù)填充注射器中。在各種實(shí)施方案中，單位劑量中含有的組合物可包含鹽水，蔗糖等；緩沖劑，如磷酸鹽等；和/或在穩(wěn)定且有效pH范圍內(nèi)配制?；蛘撸谝恍?shí)施方案中，組合物可以可在添加適當(dāng)液體(例如無菌水)后復(fù)原的凍干粉末形式提供。在一些實(shí)施方案中，組合物包含一種或多種抑制蛋白質(zhì)聚集的物質(zhì)，包括但不限于蔗糖和精氨酸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含肝素(heparin)和/或蛋白多糖。

藥物組合物是以有效治療或防治特定適應(yīng)癥的量施用。治療有效量通常取決于所治療受試者的重量，他的或她的身體或健康狀況，待治療病狀的廣泛性或所治療受試者的年齡。一般來說，抗CSF1R抗體可以在每劑每千克體重約10μg至每千克體重約100mg的范圍內(nèi)的量施用。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體可以在每劑每千克體重約50μg至每千克體重約5mg的范圍內(nèi)的量施用。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體可以在每劑每千克體重約100μg至每千克體重約10mg的范圍內(nèi)的量施用。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體可以在每劑每千克體重約100μg至每千克體重約20mg的范圍內(nèi)的量施用。在一些實(shí)施方案中，抗CSF1R抗體可以在每劑每千克體重約0.5mg至每千克體重約20mg的范圍內(nèi)的量施用。

抗CSF1R抗體組合物可按需要向受試者施用?？捎杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員，如主治醫(yī)師基于以下考慮決定施藥頻率：所治療病狀，所治療受試者的年齡，所治療病狀的嚴(yán)重性，所治療受試者的一般健康狀況等。在一些實(shí)施方案中，向受試者施用有效劑量的抗CSF1R抗體一次或多次。在各種實(shí)施方案中，每兩周一次，每三周一次，每四周一次，每個(gè)月一次，每五周一次，每六周一次，每七周一次，每兩個(gè)月因此，每三個(gè)月一次，每年四次，或以更低頻率向受試者施用有效劑量的抗CSF1R抗體。向受試者施用有效劑量的抗CSF1R抗體至少一次。在一些實(shí)施方案中，可多次施用有效劑量的抗CSF1R抗體，包括持續(xù)至少一個(gè)月，至少六個(gè)月或至少一年的時(shí)期。

組合療法

可單獨(dú)或與其它治療模式一起施用抗CSF1R抗體。它們可在其它治療模式之前，大致上與其它治療模式同時(shí)或在其它治療模式之后提供，所述治療模式例如手術(shù)，化學(xué)療法，放射療法或施用生物制劑，如另一治療抗體。對于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，抗CSF1R抗體可與其它治療劑一起施用，所述治療劑例如甲氨蝶呤；抗TNF劑(如Remicade(英夫利昔單抗)，Humira(阿達(dá)木單抗)，Simponi(戈利木單抗)和Enbrel(依那西普))；糖皮質(zhì)素，如潑尼松(prednisone)；來氟米特；咪唑硫嘌呤；JAK抑制劑，如CP 590690；SYK抑制劑，如R788；抗IL-6抗體；抗IL-6R抗體，如托珠單抗(tocilizumab)；抗CD-20抗體，如利妥昔單抗(rituximab)；抗CD19抗體；抗GM-CSF抗體；抗GM-CSF-R抗體；IL-1受體拮抗劑，如阿那白滯素(anakinra)；CTLA-4拮抗劑，如阿巴西普(abatacept)；免疫抑制劑，如環(huán)孢靈。

實(shí)施例

以下討論的實(shí)例僅意圖例示本發(fā)明，并且不應(yīng)視為以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例不意圖表示以下實(shí)驗(yàn)是進(jìn)行的全部或僅有實(shí)驗(yàn)。已努力確保關(guān)于所用數(shù)值(例如量，溫度等)的準(zhǔn)確性，但應(yīng)考慮一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另外指示，否則份是重量份，分子量是重量平均分子量，溫度是以攝氏度計(jì)，并且壓力是大氣壓或接近大氣壓。

實(shí)施例1：人源化抗CSF1R抗體

先前開發(fā)各種人源化抗CSF1R抗體。參見例如PCT公布號WO2011/140249。

與親本嵌合抗體可變區(qū)的序列和人接受體可變框架區(qū)的序列比對的人源化重鏈可變區(qū)和人源化輕鏈可變區(qū)各自的序列示出于圖1(重鏈)和圖2(輕鏈)中。對人源化可變區(qū)序列相對于人接受體可變框架區(qū)序列的變化加框。各可變區(qū)的各CDR示出于加框區(qū)域中，并且在加框序列上方標(biāo)記為“CDR”。

下表6示出抗體huAb1至huAb16的人源化重鏈和人源化輕鏈的全序列。那些抗體各自的人源化重鏈和人源化輕鏈的名稱和SEQ ID No示出于表3中。

表3：huAb1至huAb16的人源化重鏈和輕鏈

如先前所述測試16個(gè)人源化抗體與人，食蟹獼猴和小鼠CSF1R ECD的結(jié)合。參見例如PCT公布號WO 2011/140249。發(fā)現(xiàn)抗體結(jié)合人CSF1R ECD與食蟹獼猴CSF1R ECD兩者，但不結(jié)合小鼠CSF1R ECD。也發(fā)現(xiàn)人源化抗體會阻斷CSF1和IL-34結(jié)合人CSF1R與小鼠CSF1R兩者，并且抑制在CHO細(xì)胞中表達(dá)的人CSF1R的CSF1誘導(dǎo)和IL-34誘導(dǎo)的磷酸化。參見例如PCT公布號WO 2011/140249。

先前測定結(jié)合人CSF1R ECD的k_a，k_d和K_D，并且示出于表4中。參見例如PCT公布號WO 2011/140249。

表4：人源化抗體對人CSF1R的結(jié)合親和力

實(shí)施例2：HuAb1在食蟹猴和人中的藥動學(xué)

已經(jīng)在食蟹猴中進(jìn)行的3項(xiàng)靜脈內(nèi)(IV)研究中調(diào)查了huAb1的藥動學(xué)(PK)。研究的劑量范圍為單次給藥后的3-150mg/kg和重復(fù)給藥后的3-150mg/kg。輸注的持續(xù)時(shí)間為30分鐘。重復(fù)給藥研究中的給藥間隔為一周一次，每只動物接受總共4劑。

食蟹猴中單次30分鐘IV輸注huAb1后的PK概況特征在于快速的分布，接著是更慢的終末期，以huAb1自血漿加速消減結(jié)束，與靶物介導(dǎo)的清除一致。

在靶物介導(dǎo)的清除之外，快速的減少可能部分由于抗huAb1抗體。然而，單劑施用相似的嵌合抗CSF1R抗體在沒有能力發(fā)起ADA應(yīng)答的SCID小鼠中顯示相似的概況。對于觀察到的最大血漿濃度(C_max)，更低劑量組在輸注結(jié)束時(shí)發(fā)生，而150mg/kg劑量組在輸注結(jié)束后0.5-1小時(shí)時(shí)發(fā)生。加速終末下降之前的半衰期(t_1/2)范圍為1-12天。C_max和AUC_∞隨劑量升高而升高，而C_max在測試的所有劑量水平與劑量成比例升高。AUC_∞升高在3mg/kg至10mg/kg是大于與劑量成比例的，而在10mg/kg至150mg/kg是與劑量成比例的。

以20mg/ml的濃度在含有20mM L-組氨酸，142mM L-精氨酸，和0.01％聚山梨酯20的pH 6.3緩沖液中配制HuAb1或安慰劑。將成年健康志愿者受試者隨機(jī)化至每個(gè)劑量分組(每個(gè)分組8名受試者；6人接受藥物，2人接受安慰劑)。劑量分組為單劑0.2mg/kg，1mg/kg，3mg/kg和10mg/kg huAb1或安慰劑。在30分鐘里通過IV輸注施用HuAb1或安慰劑，接著是觀察期。在對受試者施用研究藥物后對他們約束72小時(shí)以進(jìn)行評估及確保服從關(guān)于限制飲酒和劇烈運(yùn)動的方案特定指引。

輸注開始視為時(shí)間零點(diǎn)。在下面的相對于輸注開始的時(shí)間點(diǎn)收集血液樣品用于測定huAb1的血清濃度：

t＝0小時(shí)(h)(可以直至給藥前60分鐘收集)，

t＝25(輸注開始后25分鐘)，

t＝30分鐘(輸注結(jié)束)，

t＝35分鐘(自輸注開始起35分鐘，等同于自輸注結(jié)束起5分鐘)，

t＝45(自輸注開始起45分鐘，等同于自輸注結(jié)束起15分鐘)，

t＝60(自輸注開始起60分鐘，等同于自輸注結(jié)束起30分鐘)。

此后，相對于輸注開始在第2，4，8，24，36，48，和72小時(shí)，然后在研究第8，15，22，29，57和85天進(jìn)行收集。

如下通過ELISA測定受試者中huAb1的均值血清濃度。在測定稀釋劑(含有1％牛伽馬球蛋白，0.3M NaCl，和0.05％Tween20的PBS)中最少1∶30稀釋樣品。將人CSF1R-Fc(人CSF1受體胞外域與人IgG1Fc的融合蛋白)包被到ELISA板上。使用標(biāo)準(zhǔn)方法，將來自冷凍的血清樣品的HuAb1捕捉到板上并使用辣根過氧化物酶綴合的小鼠抗人IgG4抗體檢測。該分析的結(jié)果顯示于圖3。圖3A顯示血清huAb1對以周計(jì)的時(shí)間的對數(shù)圖。圖3B顯示相同數(shù)據(jù)的線性圖。這些數(shù)據(jù)提示huAb1會在13周后自10mg/kg分組中的受試者清除。非線性PK概況與靶物介導(dǎo)的清除一致。表5顯示huAb1在每個(gè)劑量的計(jì)算清除(CL)和半衰期。數(shù)值為6名受試者中的均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表5：huAb1在人受試者中的清除(CL)和半衰期

*加速終末清除之前的一級消除半衰期

在人中觀察到的藥動學(xué)實(shí)質(zhì)性且出乎意料地不同于在食蟹猴中觀察到的藥動學(xué)。如圖4中所示，huAb1在人中的清除比在食蟹猴中的清除要慢得多。

實(shí)施例3：huAb1阻抑CTx和TRAP5b骨再吸收標(biāo)志物

已經(jīng)顯示施用huAb1引起CSF1R配體，CSF1和IL-34顯著升高。利用該升高將盲試樣品分類入很可能的(likely)huAb1分組和很可能的安慰劑分組，這使用商品化ELISA(R&D Systems，Minneapolis，MN)測定來自所述受試者的血清中CSF1和/或IL-34的水平來進(jìn)行。參見圖9。將樣品分入它們的很可能的分組后，測量血清CTx來測定huAb1是否有效阻抑這種骨再吸收標(biāo)志物。還使用商品化ELISA(IDS Serum CrossLaps ELISA)測量血清CTx。血清樣品是先前冷凍的。

該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于圖5。在圖5A(是CSF1低受試者，因而是很可能的安慰劑分組)中，血清CTx水平在標(biāo)示的三個(gè)劑量實(shí)質(zhì)性不變(該圖中的n＝2表示每個(gè)分組有2名受試者)。在圖5B(是CSF1高受試者，因而是很可能的huAb1分組)中，血清CTx水平以劑量依賴性方式受到阻抑，指示huAb1可阻抑骨再吸收(該圖中的n＝6表示每個(gè)分組有6名受試者)。

還測量血清TRAP5b水平以測定huAb1是否有效阻抑TRAP5b水平，它也是骨再吸收標(biāo)志物。使用商品化ELISA(MicroVue Bone Health Trap5b Assay，REF 8033，Quidel)測量血清TRAP5b。血清樣品是先前冷凍的。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于圖6。在圖6A(是CSF1低受試者，因而是很可能的安慰劑分組)中，血清TRAP5b水平在標(biāo)示的三種劑量實(shí)質(zhì)性不變(該圖中的n＝2表示每個(gè)分組有2名受試者)。在圖6B(是CSF1高受試者，因而是很可能的huAb1分組)中，血清TRAP5b水平趨于更低，提示huAb1可阻抑這種骨再吸收標(biāo)志物(該圖中的n＝6表示每個(gè)分組有6名受試者)。

實(shí)施例4：huAb1在人中阻抑CD16+單核細(xì)胞

先前證明HuAb1在食蟹猴中阻抑CD16+單核細(xì)胞水平，同時(shí)CD16-單核細(xì)胞水平保持實(shí)質(zhì)性不變。如下通過流式細(xì)胞術(shù)測定每個(gè)劑量水平的八名受試者(6名接受huAb1的受試者和2名接受安慰劑的受試者)每人中的CD16+單核細(xì)胞水平。將全血收集入血液收集管(Streck)并在收集48小時(shí)內(nèi)分析。用抗CD45，抗CD14，抗CD16(均來自BD Biosciences)和抗HLA-DR(R&D Systems)單克隆抗體對75μL血液染色。添加計(jì)數(shù)珠(Life Technologies)來測定細(xì)胞的絕對數(shù)。在FACSCanto^TM II(BD Biosciences)上運(yùn)行樣品并使用FlowJo軟件(Tree Star Inc.)分析。將作為CD45+HLA-DR+SSC^intCD14+細(xì)胞鑒定的單核細(xì)胞細(xì)分成作為經(jīng)典(CD14++CD16-)，中間(CD14++CD16+)，和非經(jīng)典(CD14+CD16++)鑒定的3個(gè)單核細(xì)胞子集并對每μL血液清點(diǎn)。

該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于圖7。在每個(gè)分組中以不同量的時(shí)間觀察到實(shí)質(zhì)性降低的非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平。在0.2mg/kg，六名很可能的huAb1受試者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平降低不及一周。在1mg/kg，六名很可能的huAb1受試者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平降低至少一周。在3mg/kg，六名很可能的huAb1受試者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平降低至少四周。最后，在10mg/kg，六名很可能的huAb1受試者中非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平在八周研究期中降低。這些結(jié)果提示不太頻繁的huAb1劑量給藥可發(fā)揮長效阻抑CD16+單核細(xì)胞。還記錄到中間CD16+單核細(xì)胞的相似減少(數(shù)據(jù)未顯示)。

還測定經(jīng)典CD16-單核細(xì)胞水平。如圖8中所示，CD16-單核細(xì)胞水平的變化在所有劑量給藥水平的六名很可能的huAb1受試者和很可能的安慰劑受試者之間沒有差異。

實(shí)施例5：HuAb1在健康志愿者和RA患者中的藥動學(xué)

以20mg/ml的濃度在含有20mM L-組氨酸，142mM L-精氨酸，和0.01％聚山梨酯20的pH 6.3緩沖液中配制HuAb1。兩名成年健康志愿者和三名RA患者相隔14天接受兩劑3mg/kg huAb1。在30分鐘里通過靜脈內(nèi)輸注施用HuAb1，接著是觀察期。輸注開始視為時(shí)間零點(diǎn)。

如段落[0190]所述，通過ELISA測定健康志愿者中huAb1的血清濃度。使用不同的包被劑使用相同的測定法測量RA患者中huAb1的血清濃度。用于來自RA患者的樣品的包被劑，人CSF1R-Fc蛋白質(zhì)，是與小鼠IgG1Fc融合的人CSF1受體胞外域。來自健康志愿者和RA患者二者的分析結(jié)果顯示于圖10?？招膱A圈和實(shí)心三角形分別代表來自健康志愿者和RA患者的數(shù)據(jù)。虛線和實(shí)線分別用于健康志愿者和RA患者的組均值。出于為圖形展示計(jì)算組均值的目的，量化下限(LLOQ)以下的數(shù)據(jù)視為零。對于3mg/kg雙劑分組中的HuAb1血清濃度，在第一劑施用之后，健康志愿者直至大約12周為可測量，而RA患者直至8周且可能比8周更久為可測量(基于至今測量的數(shù)據(jù)點(diǎn))。

實(shí)施例6：huAb1減少RA患者中的CD16+單核細(xì)胞

測定兩名相隔14天接受兩劑3mg/kg huAb1的健康志愿者每人中的CD16+單核細(xì)胞水平。還測定三名相隔14天接受兩劑3mg/kg huAb1的RA患者每人中的CD16+單核細(xì)胞水平。將全血收集入血液收集管并如實(shí)施例4中所述分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖11和12。在健康志愿者中，直至第一劑huAb1(“FPA008”)后6周觀察到實(shí)質(zhì)性降低的非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平。參見圖11。在RA患者中，直至第一劑huAb1后2周觀察到實(shí)質(zhì)性降低的非經(jīng)典CD16+單核細(xì)胞水平。參見圖12。

序列表

表6提供本文討論的某些序列。除非另外指示，否則所有多肽和抗體序列都在無前導(dǎo)序列下加以示出。

表6：序列和描述

序列表

<110> 戊瑞治療有限公司（FIVE PRIME THERAPEUTICS, INC.）

<120> 用結(jié)合集落刺激因子1受體(CSF1R)的抗體治療病狀的方法

<130> 01134-0031-00PCT

<150> US 62/015,710

<151> 2014-06-23

<160> 95

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 953

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 1

Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly

1 5 10 15

Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp

20 25 30

Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser

35 40 45

Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg

50 55 60

Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu

65 70 75 80

Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val

85 90 95

Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp

100 105 110

Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro

115 120 125

Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr

130 135 140

Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala

145 150 155 160

Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val

165 170 175

Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu

180 185 190

Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser

195 200 205

Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys

210 215 220

Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys

225 230 235 240

Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn

245 250 255

Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met

260 265 270

Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln

275 280 285

Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val

290 295 300

Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu

305 310 315 320

Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr

325 330 335

Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu

340 345 350

Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly

355 360 365

Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu

370 375 380

Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys

385 390 395 400

Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser

405 410 415

Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp

420 425 430

Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr

435 440 445

Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr

450 455 460

Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile

465 470 475 480

Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu Phe Leu Phe

485 490 495

Thr Pro Val Val Val Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu Leu Leu Leu

500 505 510

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro Lys Tyr Gln

515 520 525

Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser Tyr Thr Phe

530 535 540

Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu Phe Pro Arg

545 550 555 560

Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala Phe Gly Lys

565 570 575

Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp Ala Val Leu

580 585 590

Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala Asp Glu Lys

595 600 605

Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu Gly Gln His

610 615 620

Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly Gly Pro Val

625 630 635 640

Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Phe Leu

645 650 655

Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser Pro Gly Gln

660 665 670

Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu Glu Lys Lys

675 680 685

Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val Asp Thr Tyr

690 695 700

Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser Phe Ser Glu

705 710 715 720

Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu Arg Asp Leu

725 730 735

Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe Leu Ala Ser

740 745 750

Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val Leu Leu Thr

755 760 765

Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile

770 775 780

Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg Leu Pro Val

785 790 795 800

Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr Thr Val Gln

805 810 815

Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu

820 825 830

Gly Leu Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Leu Val Asn Ser Lys Phe Tyr Lys

835 840 845

Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe Ala Pro Lys

850 855 860

Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu Pro Thr His

865 870 875 880

Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu Gln Ala Gln

885 890 895

Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser Ser Ser Arg

900 905 910

Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu Glu Ser Ser

915 920 925

Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala Gln Pro Leu

930 935 940

Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys

945 950

<210> 2

<211> 972

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His

1 5 10 15

Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val

20 25 30

Lys Pro Gly Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val

35 40 45

Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly

50 55 60

Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala

85 90 95

Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala

100 105 110

Gln Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu

115 120 125

Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg

130 135 140

Gly Arg Pro Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His

145 150 155 160

Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln

165 170 175

Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg

180 185 190

Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val

195 200 205

Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys

210 215 220

Ser Ala Ser Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn

225 230 235 240

Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg

245 250 255

Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His

260 265 270

Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser

275 280 285

Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser

290 295 300

Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn

305 310 315 320

Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp

325 330 335

Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala

340 345 350

Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu

355 360 365

Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg

370 375 380

Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr

385 390 395 400

Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr

405 410 415

Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu

420 425 430

Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln

435 440 445

Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His

450 455 460

Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn

465 470 475 480

Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp

485 490 495

Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu

500 505 510

Phe Leu Phe Thr Pro Val Val Val Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu

515 520 525

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro

530 535 540

Lys Tyr Gln Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser

545 550 555 560

Tyr Thr Phe Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu

565 570 575

Phe Pro Arg Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala

580 585 590

Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp

595 600 605

Ala Val Leu Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala

610 615 620

Asp Glu Lys Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu

625 630 635 640

Gly Gln His Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly

645 650 655

Gly Pro Val Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu

660 665 670

Asn Phe Leu Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser

675 680 685

Pro Gly Gln Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu

690 695 700

Glu Lys Lys Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val

705 710 715 720

Asp Thr Tyr Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser

725 730 735

Phe Ser Glu Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu

740 745 750

Arg Asp Leu Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe

755 760 765

Leu Ala Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val

770 775 780

Leu Leu Thr Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala

785 790 795 800

Arg Asp Ile Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg

805 810 815

Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr

820 825 830

Thr Val Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile

835 840 845

Phe Ser Leu Gly Leu Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Leu Val Asn Ser Lys

850 855 860

Phe Tyr Lys Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe

865 870 875 880

Ala Pro Lys Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu

885 890 895

Pro Thr His Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu

900 905 910

Gln Ala Gln Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser

915 920 925

Ser Ser Arg Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu

930 935 940

Glu Ser Ser Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala

945 950 955 960

Gln Pro Leu Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys

965 970

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 3

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly

20

<210> 4

<211> 19

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 4

Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys

1 5 10 15

Val Leu Ser

<210> 5

<211> 487

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 5

Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly

1 5 10 15

Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp

20 25 30

Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser

35 40 45

Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg

50 55 60

Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu

65 70 75 80

Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val

85 90 95

Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp

100 105 110

Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro

115 120 125

Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr

130 135 140

Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala

145 150 155 160

Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val

165 170 175

Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu

180 185 190

Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser

195 200 205

Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys

210 215 220

Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys

225 230 235 240

Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn

245 250 255

Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met

260 265 270

Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln

275 280 285

Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val

290 295 300

Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu

305 310 315 320

Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr

325 330 335

Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu

340 345 350

Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly

355 360 365

Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu

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Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys

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Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser

405 410 415

Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp

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Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr

435 440 445

Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr

450 455 460

Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile

465 470 475 480

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485

<210> 6

<211> 719

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 6

Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly

1 5 10 15

Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp

20 25 30

Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser

35 40 45

Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg

50 55 60

Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu

65 70 75 80

Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val

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Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp

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Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro

115 120 125

Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr

130 135 140

Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala

145 150 155 160

Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val

165 170 175

Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu

180 185 190

Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser

195 200 205

Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys

210 215 220

Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys

225 230 235 240

Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn

245 250 255

Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met

260 265 270

Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln

275 280 285

Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val

290 295 300

Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu

305 310 315 320

Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr

325 330 335

Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu

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Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys

385 390 395 400

Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser

405 410 415

Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp

420 425 430

Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr

435 440 445

Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr

450 455 460

Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile

465 470 475 480

Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

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515 520 525

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595 600 605

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<400> 7

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65 70 75 80

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Lys Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu

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Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Leu Arg

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145 150 155 160

Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Gly Gln Asp Tyr Gln

165 170 175

Cys Ser Ala Leu Met Gly Ser Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg

180 185 190

Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val

195 200 205

Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys

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Ser Ala Ser Asn Ile Asp Val Asp Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn

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Thr Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Arg Ser Asp Phe His Asp Asn Arg

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260 265 270

Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser

275 280 285

Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asp Leu Ser

290 295 300

Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn

305 310 315 320

Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp

325 330 335

Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala

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485 490 495

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<212> PRT

<213> 食蟹猴（Macaca cynomolgus）

<400> 8

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Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Gly Pro Glu Leu Val Val

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Lys Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val

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Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Leu Arg

130 135 140

Gly Arg Pro Leu Leu Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His

145 150 155 160

Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Gly Gln Asp Tyr Gln

165 170 175

Cys Ser Ala Leu Met Gly Ser Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg

180 185 190

Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val

195 200 205

Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys

210 215 220

Ser Ala Ser Asn Ile Asp Val Asp Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn

225 230 235 240

Thr Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Arg Ser Asp Phe His Asp Asn Arg

245 250 255

Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Ser Leu Gly Gln Val Asp Phe Gln His

260 265 270

Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser

275 280 285

Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asp Leu Ser

290 295 300

Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn

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Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp

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Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala

340 345 350

Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu

355 360 365

Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg

370 375 380

Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr

385 390 395 400

Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Ser Ile Asn Gly Ser Gly Thr

405 410 415

Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu

420 425 430

Gln Cys Ala Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln

435 440 445

Val Trp Val Asp Pro His Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe Gln

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Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Ala Glu Thr Leu Glu His Asn

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Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp

485 490 495

Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala Arg Gly Ser Glu Pro Lys Ser

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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

530 535 540

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

545 550 555 560

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580 585 590

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Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

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740

<210> 9

<211> 122

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 9

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn

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Tyr Met Ile Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

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<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 10

Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Asn Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

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65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Leu Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Leu Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 11

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Asp Val Thr Val Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Tyr Phe Asp Gly Thr Phe Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Ile Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 12

<211> 111

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 12

Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 13

<211> 122

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 13

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Met Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Val Val Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Thr Thr Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ala Leu Tyr His Ser Asn Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Lys Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 111

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 14

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 15

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn Tyr Met Ile

1 5 10

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<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 16

Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 17

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 17

Glu Ser Pro Tyr Phe Ser Asn Leu Tyr Val Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 18

<211> 15

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 18

Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Asn Tyr Met Asn

1 5 10 15

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 19

Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 20

His Leu Ser Asn Glu Asp Leu Ser Thr

1 5

<210> 21

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 21

Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe Asn Ile His

1 5 10

<210> 22

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 22

Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Asp Val Thr Val Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 23

<211> 12

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 23

Tyr Phe Asp Gly Thr Phe Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 15

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 24

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Leu Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 25

Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 26

Gln Gln Ser Lys Glu Leu Pro Trp Thr

1 5

<210> 27

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 27

Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr Asn Met His

1 5 10

<210> 28

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 28

Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Val Val Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 29

Ala Leu Tyr His Ser Asn Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Ser

1 5 10

<210> 30

<211> 15

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 30

Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser His Met Asn

1 5 10 15

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 31

Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 32

Gln Gln Gly Asn Glu Asp Pro Trp Thr

1 5

<210> 33

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: cAb 0301 重鏈

<400> 33

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn

20 25 30

Tyr Met Ile Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Pro Tyr Phe Ser Asn Leu Tyr Val Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

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His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

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Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

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Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

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Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 34

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: cAb 0301 輕鏈

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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

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65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Leu Ser Asn

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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Asn Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Asp Val Thr Val Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

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275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

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420 425 430

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<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

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Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

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Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

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130 135 140

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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

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180 185 190

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210 215

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

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Lys

<210> 38

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: cAb 0311 輕鏈

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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

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Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

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<212> PRT

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<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

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<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0302-H2 重鏈 可變區(qū)

<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

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<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

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<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 45

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<210> 47

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: h0301-L1 輕鏈 可變區(qū)

<400> 47

Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 48

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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<210> 49

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 49

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

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Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

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<210> 50

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 50

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

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50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

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Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 51

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0311-L0 輕鏈 可變區(qū)

<400> 51

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

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35 40 45

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<210> 52

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 63

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0302-L1 輕鏈

<400> 63

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1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 64

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0302-L2 輕鏈

<400> 64

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 65

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0311-L0 輕鏈

<400> 65

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

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Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn

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Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

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130 135 140

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145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 66

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: H0311-L1 輕鏈

<400> 66

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

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130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 67

<211> 158

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 67

Glu Glu Val Ser Glu Tyr Cys Ser His Met Ile Gly Ser Gly His Leu

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Gln Ser Leu Gln Arg Leu Ile Asp Ser Gln Met Glu Thr Ser Cys Gln

20 25 30

Ile Thr Phe Glu Phe Val Asp Gln Glu Gln Leu Lys Asp Pro Val Cys

35 40 45

Tyr Leu Lys Lys Ala Phe Leu Leu Val Gln Asp Ile Met Glu Asp Thr

50 55 60

Met Arg Phe Arg Asp Asn Thr Pro Asn Ala Ile Ala Ile Val Gln Leu

65 70 75 80

Gln Glu Leu Ser Leu Arg Leu Lys Ser Cys Phe Thr Lys Asp Tyr Glu

85 90 95

Glu His Asp Lys Ala Cys Val Arg Thr Phe Tyr Glu Thr Pro Leu Gln

100 105 110

Leu Leu Glu Lys Val Lys Asn Val Phe Asn Glu Thr Lys Asn Leu Leu

115 120 125

Asp Lys Asp Trp Asn Ile Phe Ser Lys Asn Cys Asn Asn Ser Phe Ala

130 135 140

Glu Cys Ser Ser Gln Gly His Glu Arg Gln Ser Glu Gly Ser

145 150 155

<210> 68

<211> 222

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 68

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1 5 10 15

Val Thr Gly Phe Leu Arg Asp Lys Leu Gln Tyr Arg Ser Arg Leu Gln

20 25 30

Tyr Met Lys His Tyr Phe Pro Ile Asn Tyr Lys Ile Ser Val Pro Tyr

35 40 45

Glu Gly Val Phe Arg Ile Ala Asn Val Thr Arg Leu Gln Arg Ala Gln

50 55 60

Val Ser Glu Arg Glu Leu Arg Tyr Leu Trp Val Leu Val Ser Leu Ser

65 70 75 80

Ala Thr Glu Ser Val Gln Asp Val Leu Leu Glu Gly His Pro Ser Trp

85 90 95

Lys Tyr Leu Gln Glu Val Gln Thr Leu Leu Leu Asn Val Gln Gln Gly

100 105 110

Leu Thr Asp Val Glu Val Ser Pro Lys Val Glu Ser Val Leu Ser Leu

115 120 125

Leu Asn Ala Pro Gly Pro Asn Leu Lys Leu Val Arg Pro Lys Ala Leu

130 135 140

Leu Asp Asn Cys Phe Arg Val Met Glu Leu Leu Tyr Cys Ser Cys Cys

145 150 155 160

Lys Gln Ser Ser Val Leu Asn Trp Gln Asp Cys Glu Val Pro Ser Pro

165 170 175

Gln Ser Cys Ser Pro Glu Pro Ser Leu Gln Tyr Ala Ala Thr Gln Leu

180 185 190

Tyr Pro Pro Pro Pro Trp Ser Pro Ser Ser Pro Pro His Ser Thr Gly

195 200 205

Ser Val Arg Pro Val Arg Ala Gln Gly Glu Gly Leu Leu Pro

210 215 220

<210> 69

<211> 25

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 70

<211> 14

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 70

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

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<210> 71

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 71

Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

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Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 72

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<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 72

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 73

<211> 25

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 73

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 74

<211> 14

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 74

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 75

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 75

Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 76

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 77

<211> 25

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 77

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 78

<211> 14

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 78

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 79

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 79

Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 80

<211> 11

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 80

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 81

<211> 23

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 81

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 82

<211> 15

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 82

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 83

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 83

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 84

<211> 10

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 84

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 85

<211> 23

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 85

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 86

<211> 15

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 86

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 87

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 87

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 88

<211> 10

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 88

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 89

<211> 23

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 89

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 90

<211> 15

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 90

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 91

<211> 32

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 91

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 92

<211> 10

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 92

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 93

<211> 719

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 93

Ala Pro Val Ile Glu Pro Ser Gly Pro Glu Leu Val Val Glu Pro Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Ser Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp

20 25 30

Gly Pro Ile Ser Pro Tyr Trp Thr Leu Asp Pro Glu Ser Pro Gly Ser

35 40 45

Thr Leu Thr Thr Arg Asn Ala Thr Phe Lys Asn Thr Gly Thr Tyr Arg

50 55 60

Cys Thr Glu Leu Glu Asp Pro Met Ala Gly Ser Thr Thr Ile His Leu

65 70 75 80

Tyr Val Lys Asp Pro Ala His Ser Trp Asn Leu Leu Ala Gln Glu Val

85 90 95

Thr Val Val Glu Gly Gln Glu Ala Val Leu Pro Cys Leu Ile Thr Asp

100 105 110

Pro Ala Leu Lys Asp Ser Val Ser Leu Met Arg Glu Gly Gly Arg Gln

115 120 125

Val Leu Arg Lys Thr Val Tyr Phe Phe Ser Pro Trp Arg Gly Phe Ile

130 135 140

Ile Arg Lys Ala Lys Val Leu Asp Ser Asn Thr Tyr Val Cys Lys Thr

145 150 155 160

Met Val Asn Gly Arg Glu Ser Thr Ser Thr Gly Ile Trp Leu Lys Val

165 170 175

Asn Arg Val His Pro Glu Pro Pro Gln Ile Lys Leu Glu Pro Ser Lys

180 185 190

Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Thr

195 200 205

Asn Ala Glu Val Gly Phe Asn Val Ile Leu Lys Arg Gly Asp Thr Lys

210 215 220

Leu Glu Ile Pro Leu Asn Ser Asp Phe Gln Asp Asn Tyr Tyr Lys Lys

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Val Arg Ala Leu Ser Leu Asn Ala Val Asp Phe Gln Asp Ala Gly Ile

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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His Ala Asp Ala Tyr Pro Ser Ile Gln His Tyr Asn Trp Thr Tyr Leu

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Gly Pro Phe Phe Glu Asp Gln Arg Lys Leu Glu Phe Ile Thr Gln Arg

325 330 335

Ala Ile Tyr Arg Tyr Thr Phe Lys Leu Phe Leu Asn Arg Val Lys Ala

340 345 350

Ser Glu Ala Gly Gln Tyr Phe Leu Met Ala Gln Asn Lys Ala Gly Trp

355 360 365

Asn Asn Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu Val Ser

370 375 380

Val Thr Trp Met Pro Val Asn Gly Ser Asp Val Leu Phe Cys Asp Val

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Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Ser Val Thr Trp Met Glu Cys Arg Gly His

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420 425 430

His Pro Glu Val Leu Ser Gln Lys Pro Phe Asp Lys Val Ile Ile Gln

435 440 445

Ser Gln Leu Pro Ile Gly Thr Leu Lys His Asn Met Thr Tyr Phe Cys

450 455 460

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465 470 475 480

Ser Leu Gly Gln Ser Lys Gln Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His

485 490 495

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

515 520 525

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530 535 540

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

545 550 555 560

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

565 570 575

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

580 585 590

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

595 600 605

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

610 615 620

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

625 630 635 640

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

645 650 655

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

660 665 670

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

675 680 685

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

690 695 700

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710 715

<210> 94

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的: 人 IgG4 S241P

<400> 94

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 95

<211> 107

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 95

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105