本申請是2015年7月24日遞交的國際申請專利號為PCT/US2015/041915的中國國家階段申請，該國際專利申請根據(jù)35U.S.C.§119(e)聲明2014年7月24日遞交的美國臨時專利申請?zhí)枮?2/028,427的優(yōu)先權(quán)，該臨時專利及上述國際專利的全部內(nèi)容通過引用并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是關(guān)于用于治療或預(yù)防由某些細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)介導的疾病、病癥或醫(yī)學病狀的化合物、組合物及方法的領(lǐng)域。該類疾病包括各種癌癥。

背景技術(shù)：

細胞周期蛋白依賴性激酶為一組調(diào)控細胞分裂與增殖的蛋白激酶。細胞周期進程受細胞周期蛋白及其相關(guān)聯(lián)的細胞周期蛋白依賴性激酶控制，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4及CDK6，同時諸如CDK7、CDK8及CDK9的其他CDK對轉(zhuǎn)錄至關(guān)重要。CDK與細胞周期蛋白結(jié)合形成雜二聚復合物使其在絲胺酸及蘇胺酸殘基上的受質(zhì)磷酸化，其轉(zhuǎn)而引發(fā)細胞周期轉(zhuǎn)錄及進展所需的事件。由于不受控的細胞增殖為癌癥的特點，且大部分癌細胞展現(xiàn)CDK的失調(diào)，所以抑制CDK已成為多種癌癥的可能療法。對CDK具有不同程度選擇性的抑制劑已有報導；然而，對CDK4/6具有選擇性抑制劑目前被視為有前景的一類潛在抗癌劑或消炎劑，歸因于CDK 4/6二者在調(diào)控細胞增殖中的重要作用以及與抑制CDK家族的其他成員相關(guān)聯(lián)的毒性作用。

最近，若干類型的胺基嘧啶衍生物已被報導為選擇性CDK4/6抑制劑。參見，例如WO 2003/062236、WO 2007/140222及US 2010/0160340。此等類型的分子各自含有由2-胺基與芳基或雜芳基環(huán)系統(tǒng)結(jié)合的2-胺基嘧啶部分。對開發(fā)新的CDK 4/6抑制劑作為新穎抗癌劑及/或消炎劑的需求依然存在。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明系關(guān)于由2-胺基嘧啶取代的吲唑衍生物，其作為有效的選擇性CDK抑制劑，且適用于治療或預(yù)防經(jīng)由某些CDK(尤其CDK4及CDK6)介導的疾病、病癥或醫(yī)學病狀，例如多種類型的癌癥及炎癥相關(guān)的病狀。

本發(fā)明的一個方面系針對式(I)化合物：

或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中：

R¹選自下列基團：氫、直鏈或含有支鏈的C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；

R²及R³獨立地選自由下列基團：氫、直鏈或含有支鏈的C₁-C₈烷基、C₃-C₇環(huán)烷基、及環(huán)烷基甲基；

R⁴選自下列基團：氫、鹵素、直鏈或含有支鏈的C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；及

R⁵為氫或鹵素。

本發(fā)明的另一方面系針對醫(yī)藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，及一或多種醫(yī)藥學上可接受的賦形劑，例如佐劑、稀釋劑及/或載劑。

本發(fā)明的另一方面系針對治療經(jīng)由細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)中的至少一種(尤其CDK4、CDK6或其組合)介導的疾病、病癥或病狀的方法，包含向有此需要的個體施用治療有效量的式(I)化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥。

本發(fā)明的另一方面系針對治療經(jīng)由細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)中的至少一種(尤其CDK4、CDK6或其組合)介導的疾病、病癥或病狀的方法，包含向有此需要的個體施用治療有效量的醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含式(I)化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，及一種或多種醫(yī)藥學上可接受的賦形劑，例如佐劑、稀釋劑及/或載劑。

在一個實施例中，與一種或多種細胞周期蛋白依賴性激酶，尤其CDK4、CDK6或其組合相關(guān)聯(lián)的疾病、病癥或病狀包含癌癥，其可包括(但不限于)肺癌、尤其非小細胞肺癌(NSCLC)、乳癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、神經(jīng)膠母細胞瘤、套細胞淋巴瘤、慢性骨髓性白血病及急性骨髓性白血病，及其并發(fā)癥。

在另一實施例中，該等疾病、病癥或病狀包含與炎癥相關(guān)的疾病及病狀，例如關(guān)節(jié)炎，例如風濕性關(guān)節(jié)炎及囊腫性纖維化。

本發(fā)明的另一方面系針對抑制細胞增殖的方法，其包含用有效量的式(I)化合物或其鹽、溶劑合物、前藥或組合物處理該等細胞。

本發(fā)明的另一方面系針對抑制細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)，尤其CDK4、CDK6或其組合的方法，其包含用有效量的式(I)化合物或其鹽、溶劑合物、前藥或組合物處理該激酶。

本發(fā)明的另一方面系針對本發(fā)明的化合物的用途，其用于生物學及病理學現(xiàn)象中CDK的研究并用于新的激酶抑制劑的比較評價。

本發(fā)明的另一方面系針對根據(jù)本文所述的任何實施例的式(I)化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、前藥或組合物在制造供治療與CDK活性相關(guān)聯(lián)的疾病或病癥的藥物方面的用途。所述CDK活性較優(yōu)選為CDK4、CDK6的活性或其組合。

本發(fā)明的又一方面系針對合成實質(zhì)上如本文所揭示及所描述的式(I)化合物的方法。

鑒于以下實施方式及申請專利范圍結(jié)合該領(lǐng)域中一般已知的知識及技能，本發(fā)明的其他方面或優(yōu)點將為熟習此類技術(shù)人員顯而易知。

具體實施方式

本發(fā)明提供適用作為CDK抑制劑的新穎的2-胺基嘧啶取代的2H-吲唑衍生物。

在一個方面，本發(fā)明提供式(I)化合物：

或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中：

R¹選自下列基團：氫、C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；

R²及R³獨立地選自下列基團：氫、直鏈或分支鏈C₁-C₈烷基、C₃-C₇環(huán)烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基甲基；

R⁴選自由下列基團：氫、鹵素、直鏈或分支鏈C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；及

R⁵為氫或鹵素。

在此方面的一實施例中，R¹為C₁-C₆烷基。

在此方面的另一實施例中，R¹為甲基、乙基、丙基、或異丙基。

在此方面的另一實施例中，R²為C₁-C₆烷基、C₃-C₆環(huán)烷基、或C₃-C₆環(huán)烷基甲基。

在此方面的另一實施例中，R²為甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)丙基甲基、或環(huán)戊基甲基。

在此方面的另一實施例中，R³為C₁-C₆烷基或C₃-C₆環(huán)烷基。

在此方面的另一實施例中，R³為甲基、乙基、丙基、異丙基、或環(huán)丙基。

在某些實施例中，本發(fā)明提供式(I)化合物，其中R⁴取代基連接于吲唑部分的7位上，如式(Ia)中：

或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中：

R¹選自下列基團：氫、C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；

R²及R³獨立地選自下列基團：氫、C₁-C₈烷基、C₃-C₇環(huán)烷基、及環(huán)烷基甲基；

R⁴系選自下列基團：氫、鹵素、C₁-C₈烷基、及C₃-C₇環(huán)烷基；及

R⁵為氫或鹵素。

在此方面的另一實施例中，R⁴為氫或鹵素。

在此方面的另一實施例中，R⁵為氫或氟。

在此方面的另一實施例中，R¹為甲基或乙基；R²為異丙基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、或環(huán)戊基；R³為甲基或乙基；R⁴為氫或氟；且R⁵為氫或氟。

在此方面的某些優(yōu)選實施例中，R⁴取代基連接于吲唑部分的7位上，且R⁵為氟，特征為式(Ib)：

其中R⁴優(yōu)選為氫或鹵素；且當R⁴為鹵素時，其優(yōu)選為氯或氟，更佳為氟。

在此方面的某些優(yōu)選實施例中，本發(fā)明提供選自下列化合物：

或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中R¹、R²及R³各自在本文所述的任一實施例中定義。

在此方面的某些優(yōu)選實施例中，本發(fā)明提供表1(見下文)中所列的化合物，及其醫(yī)藥上可接受鹽、溶劑合物、及前藥。

在另一方面，本發(fā)明提供醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)本文所述的任一實施例的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)的化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，及一種或多種醫(yī)藥學上可接受的佐劑、稀釋劑及/或載劑。

在另一方面，本發(fā)明提供治療經(jīng)由至少一種細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的活性介導的疾病、病癥或病狀的方法，其包含向有此需要的個體施用治療有效量的根據(jù)本文所述的任一實施例的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)的化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥。

在此方面的一個實施例中，本發(fā)明提供治療經(jīng)由至少一種細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的活性介導的疾病、病癥或病狀的方法，其包含向有此需要的個體施用醫(yī)藥組合物，該組合物包含治療有效量的根據(jù)本文所述的任一實施例的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)的化合物，或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥，及一種或多種醫(yī)藥學上可接受的佐劑、稀釋劑及/或載劑。

在此方面的一個優(yōu)選實施例中，所述至少一種CDK為CDK4、CDK6或其組合。

在此方面的另一優(yōu)選實施例中，所述疾病或病癥為與癌癥或炎癥相關(guān)的疾病或病狀。

在此方面的另一優(yōu)選實施例中，所述與炎癥相關(guān)的疾病或病狀為關(guān)節(jié)炎，例如風濕性關(guān)節(jié)炎或囊腫性纖維化。

在此方面的另一優(yōu)選實施例中，所述癌癥系選自(但不限于)結(jié)直腸癌、乳癌、肺癌、尤其非小細胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、神經(jīng)膠母細胞瘤、套細胞淋巴瘤(MCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)，及其并發(fā)癥。

在此方面的另一實施例中，本發(fā)明的化合物可與第二治療劑結(jié)合施用與有此需要的個體。

在另一實施例中，該第二治療劑為不同的CDK抑制劑、人類表皮生長因子受體(例如，HER2)抑制劑、絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑(例如哺乳動物雷帕霉素靶(mTOR)抑制劑)、或表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑。

在另一方面，本發(fā)明提供抑制細胞增殖的方法，其包含用有效量的根據(jù)所述的任一實施例的式(I)化合物，或其鹽、溶劑合物、前藥、或其組合物處理該等細胞。抑制細胞增殖的方法可發(fā)生在活體內(nèi)(例如個體體內(nèi))，或活體外(例如含有個體增殖細胞的生物樣本中)。

在此方面的一個優(yōu)選實施例中，該等增殖細胞為癌細胞，例如(但不限于)結(jié)直腸癌、乳癌、肺癌、尤其非小細胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、神經(jīng)膠母細胞瘤、套細胞淋巴瘤(MCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)、或其并發(fā)癥的細胞。

在另一方面，本發(fā)明提供抑制細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)的方法，其包含用有效量的根據(jù)本文所述的任一實施例的式(I)化合物，或其鹽、溶劑合物、前藥、或其組合物處理該激酶。抑制CDK的方法可發(fā)生在活體內(nèi)(例如個體體內(nèi))，或活體外(例如含有個體增殖細胞的生物樣本中)。

在此方面的一個優(yōu)選實施例中，該細胞周期蛋白依賴性激酶為CDK4、CDK6或其組合。

在另一方面，本發(fā)明提供根據(jù)本文所述的任一實施例的式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、或(Ie)的化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、溶劑合物、前藥或其組合物的用途，其用于制造供治療與CDK活性相關(guān)聯(lián)的疾病或病癥的藥物。該CDK活性優(yōu)選為CDK4、CDK6或其組合的活性。

在此方面的一個實施例中，所述疾病或病癥系選自下列：結(jié)直腸癌、乳癌、肺癌、尤其非小細胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、神經(jīng)膠母細胞瘤、套細胞淋巴瘤(MCL)、慢性骨髓性白血病(CML)，及急性骨髓性白血病(AML)。

在此方面的另一實施例中，該疾病或病癥為炎癥相關(guān)的疾病或病狀，例如關(guān)節(jié)炎，尤其風濕性關(guān)節(jié)炎或囊腫性纖維化。

在另一方面，本發(fā)明提供制備式(I)化合物的方法，其包含將中間物E與中間物G進行偶合的步驟：

其中R¹至R⁵系根據(jù)本文所述的任一實施例所定義，且X³為Cl、Br或I。

在此方面的一個實施例中，該方法進一步包括將中間物C轉(zhuǎn)化為中間物D，且使該中間物D與嘧啶化合物H偶合以形成中間物E的步驟：

其中R^x及R^y獨立地為烷基、芳基、環(huán)烷基，或者合在一起形成亞烷基，各自視情況經(jīng)獨立地選自C₁-C₄烷基、鹵素或苯基的一個或多個取代基取代；且其中X¹、X²及X³各自獨立地為Cl、Br或I，條件為化合物H與中間物D相較于X³位置選擇性地在X²位置偶合，較佳具有大于90:10選擇率，更佳具有95:5選擇率，且最佳僅在X²位置。

在此方面的一個實施例中，該方法進一步包括將起始物質(zhì)S1轉(zhuǎn)化為中間物A及將中間物A轉(zhuǎn)化為中間物C的步驟：

其中X¹為Cl、Br、I或MeSO₃^-；且其中R²及R³如根據(jù)本文所述的任一實施例所定義。

在此方面的另一實施例中，該方法進一步包括將中間物A轉(zhuǎn)化為中間物C，或者包含將中間物A轉(zhuǎn)化為醇中間物B，隨后將該醇中間物B還原以形成中間物C的步驟：

其中R^2a及R^2b各自獨立地為氫、烷基、環(huán)烷基，或者合在一起形成亞烷基，使得形成于中間物C中的基團為根據(jù)本文所述的任一實施例所定義的R²。

在此方面的一個實施例中，該方法進一步包括形成中間物G的步驟，其經(jīng)由將吡啶醛化合物S2及哌嗪化合物S3偶合以形成中間物F，隨后將該中間物F轉(zhuǎn)化為中間物G：

其中X⁴系選自下列基團：Cl、Br、I、及-NO₂；且

其中中間物F至中間物G的該轉(zhuǎn)化包含:當X⁴為Cl、Br或I時，用NH₂置換X⁴；或者，當X⁴為-NO₂時，將硝基(-NO₂)還原為胺基(-NH₂)。

由本發(fā)明提供的化合物也適用于生物學及病理學現(xiàn)象中激酶的研究，對由該等激酶介導的轉(zhuǎn)導路徑的研究及對新的激酶抑制劑的比較評價。

除非另外說明，否則術(shù)語“烷基”，如本文所用，意欲包括分支鏈及直鏈飽和脂族烴基，其含有1至8個碳，較佳1至6個，更佳1至4個碳。該術(shù)語涵蓋(但不限于)甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、或其類似基團。

除非另外說明，否則術(shù)語“亞烷基”，如本文所用，系指自烷烴通過移除兩個氫原子而衍生的二價飽和脂族基團。實例包括(但不限于)亞甲基(-CH₂-)、亞乙基(-CH₂CH₂-)、亞丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、或其類似基團。

除非另外說明，否則術(shù)語“環(huán)烷基”，如本文所用，單獨的或作為另一基團的一部分，包括具有形成環(huán)的3至8個碳原子的飽和環(huán)烴基團。實例包括(但不限于)環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基及環(huán)己基。

除非另外說明，否則術(shù)語“芳基”，如本文所用，單獨的或作為另一基團的一部分，系指在環(huán)部分中含有6至10個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族基(例如苯基及萘基，包括1-萘基及2-萘基)。

“鹵基”或“鹵素”，如本文所用，系指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、及碘(I)。

此外，烷基、亞烷基、環(huán)烷基、及環(huán)烷基甲基視情況可獨立地進一步經(jīng)一個或多個，較佳1至3個取代基取代，該等取代基獨立地選自鹵素和C₁-C₄烷基。

本發(fā)明的化合物被普遍公認為有機堿，其能夠與酸(特定醫(yī)藥學上可接受的酸)反應(yīng)以形成醫(yī)藥上可接受的鹽。

如本文所用的術(shù)語“醫(yī)藥學上可接受的鹽”系指在合理醫(yī)學判斷的范疇內(nèi)適合與人類及較低等動物的組織接觸使用而無不當毒性、刺激、過敏反應(yīng)及其類似情況，且與合理益處/風險比相匹配的鹽類。醫(yī)藥上可接受的鹽已為此類技術(shù)中所熟知。參見，例如S.M.Berge等人，J.Pharm.Sci.,1977,66,1-19，其以引用的方式并入本文中。本發(fā)明化合物的醫(yī)藥學上可接受的鹽包括衍生自適合的無機及有機酸的鹽。醫(yī)藥學上可接受的無毒酸加成鹽的實例為胺基與無機酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸)或有機酸(例如乙酸、乙二酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的鹽，或由使用此類技術(shù)中所用的其他方法(例如離子交換)形成的鹽。其他醫(yī)藥學上可接受的鹽包括己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙堿酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似物。優(yōu)選的醫(yī)藥學上可接受的鹽包括氫氯酸鹽。

術(shù)語“溶劑合物”，如本文所用，意謂本發(fā)明化合物與化學計量或非化學計量的溶劑分子的物理性締合物。舉例而言，該化合物的一個分子與一個或多個，較佳1至3個，溶劑分子締合。也有可能化合物的多個分子(例如，1.5或2個)共用一個溶劑分子。此物理性締合可包括氫鍵結(jié)合。在某些情況下，溶劑合物將能夠作為結(jié)晶固體分離。溶劑合物中的溶劑分子可以有序排列及/或無序排列而存在。示例性溶劑合物包括(但不限于)水合物、乙醇合物、甲醇合物、及異丙醇合物。形成溶劑合物的方法在此類技術(shù)內(nèi)通常已知。

術(shù)語“前藥”，如本文所用，系指化合物在活體內(nèi)可經(jīng)轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生母化合物(例如通過在血液中水解)的衍生物。本發(fā)明中的前藥的常見實例包括(但不限于)活性胺化合物的酰胺或磷酰胺形式，例如，式(II)化合物：

其中R⁶為?；?例如，乙酰基、丙酰基、甲?；?或磷?；鵞例如-P(＝O)(OH)₂]；或者，當活性化合物中的R¹或R³為氫時，對應(yīng)酰胺或磷酰胺化合物可充當前藥。該等酰胺或磷酰胺前藥化合物可根據(jù)此項技術(shù)中已知的方法制備。

當用于療法中治療有效量的本發(fā)明化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物可作為化學原料施用為可能時，可使活性成分作為醫(yī)藥組合物呈遞。因此，本發(fā)明進一步提供醫(yī)藥組合物，其包括任何本發(fā)明的化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽或溶劑合物，及一或多種，較佳一至三種，醫(yī)藥學上可接受的載劑、稀釋劑或其他賦形劑。該(等)載劑、稀釋劑或其他賦形劑必須為可接受的，即與調(diào)配物的其他成分相容，且對所治療的個體無害。

術(shù)語“醫(yī)藥學上可接受”，如本文所用，系指在合理醫(yī)學判斷范疇內(nèi)適合與患者的組織接觸使用而無過量毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其他問題或并發(fā)癥，且與合理益處/風險率相匹配，且有效用于其預(yù)期用途的化合物、物質(zhì)、組合物及/或劑型的特性。

醫(yī)藥調(diào)配物可以每單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑型呈遞。通常，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物將每1至5天一次至每天約1-5次或者作為持續(xù)輸注進行給藥。該給藥可用作慢性或急性療法。可與載劑物質(zhì)組合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量將視所治療的病狀、病狀的嚴重程度、給藥時間、給藥途徑、所用化合物的排泄率、治療持續(xù)時間及患者的年齡、性別、體重及病狀而變化。較佳單位劑量調(diào)配物為含有活性成分的如上文所述的日劑量或子劑量或其合適分劑量的彼等調(diào)配物。一般而言，治療以實質(zhì)上少于化合物的最佳劑量的小劑量起始。此后，以小增量增加劑量直至達到該等情況下的最佳作用。一般而言，該化合物最宜以大體上得到有效結(jié)果而不造成實質(zhì)性有害或有毒副作用的濃度水平施用。

當本發(fā)明的組合物包含本發(fā)明的化合物與一種或多種，較佳一或兩種，附加治療劑或預(yù)防劑的組合時，該化合物及該附加劑均以通常大約在單藥療法療程中施用的劑量的10至150％之間，且更佳約10至80％的劑量水平。

醫(yī)藥調(diào)配物可適于通過任何合適途徑給藥，例如通過經(jīng)口(包括頰內(nèi)或舌下)、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括頰內(nèi)、舌下或經(jīng)皮)、陰道或非經(jīng)腸(包括皮下、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi)注射或輸注)途徑給藥。該等調(diào)配物可通過藥劑學技術(shù)中已知的任何方法(例如，通過將活性成分與載劑或賦形劑締合)來制備。經(jīng)口施用或通過注射施用較佳。

適于經(jīng)口施用的醫(yī)藥調(diào)配物可以離散單位形式呈遞，例如膠囊或片劑；散劑或顆粒；水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；可食用發(fā)泡體或起泡體；或水包油型液體乳液或油包水型乳液。

舉例來說，對于以片劑或膠囊的形式經(jīng)口施用，可將活性藥物組分與經(jīng)口、無毒、醫(yī)藥學上可接受的惰性載劑(例如乙醇、甘油、水、及其類似物)組合。通過將化合物粉碎至合適的精細大小且與同樣經(jīng)粉碎的醫(yī)藥載劑(比如可食用碳水化合物，例如淀粉或甘露糖醇)混合來制備散劑。亦可存在調(diào)味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。

通過制備如上所述的粉末混合物且填充成型明膠殼來制造膠囊。在填充操作之前，可將諸如膠態(tài)二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固態(tài)聚乙二醇的助滑劑及潤滑劑添加至粉末混合物中。亦可添加諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉的分散劑或助溶劑以改良攝取膠囊時藥物的可用性。

此外，當需要或必要時，亦可將合適的粘合劑、潤滑劑、分散劑及著色劑并入混合物中。適合的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(例如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇及其類似物。用于此等劑型中的潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉及其類似物。分散劑包括(但不限于)淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。例如通過制備粉末混合物、粒化或干壓、添加潤滑劑及分散劑且壓制成片劑來調(diào)配片劑。通過將適當粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基質(zhì)混合且視情況與粘合劑(例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯啶酮)、溶液阻滯劑(例如石蠟)、再吸收加速劑(例如四級鹽)及/或吸收劑(例如膨潤土、高嶺土或磷酸氫鈣)混合來制備粉末混合物。可通過以粘合劑(例如糖漿、淀粉糊、阿卡迪亞膠漿(acadia mucilage)或纖維素或聚合物質(zhì)的溶液)潤濕且迫使其穿過篩網(wǎng)來粒化粉末混合物。作為?；奶娲椒ǎ墒狗勰┗旌衔锎┻^壓錠機且結(jié)果為不完全成型的干壓物碎裂為顆粒?？山柚谔砑佑仓?、硬脂酸鹽、滑石或礦物油來潤滑顆粒以防止粘住片劑成型模。隨后，將經(jīng)潤滑的混合物壓縮成片劑。亦可將本揭示案的化合物與自由流動性惰性載劑組合且直接壓縮成片劑而不經(jīng)歷?；蚋蓧翰襟E?？商峁┯上x膠的密封涂層、糖或聚合物質(zhì)的涂層及蠟的拋光涂層組成的透明或不透明保護涂層?？蓪⑷玖咸砑又猎摰韧繉又幸詤^(qū)分不同單位劑量。

可以單位劑型制備諸如溶液、糖漿及酏劑的口服液體以使得給定量含有預(yù)定量的化合物。糖漿可通過將化合物溶解于經(jīng)適當調(diào)味的水溶液中來制備，而酏劑則經(jīng)由使用無毒媒劑來制備。亦可添加增溶劑及乳化劑(例如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調(diào)味添加劑(例如薄荷油或天然甜味劑，或糖精或其他人工甜味劑)及其類似物。

適當時，用于經(jīng)口施用的劑量單位調(diào)配物可經(jīng)微囊封。亦可制備調(diào)配物以例如通過涂布或包埋粒狀物于聚合物、蠟或其類似物中來延長或持續(xù)釋放。

應(yīng)了解，除以上特定提及的成分以外，考慮到所述調(diào)配物的類型，調(diào)配物亦可包括此類技術(shù)中已知的其他藥劑，例如適于經(jīng)口服用的那類調(diào)配物可包括調(diào)味劑。

術(shù)語“個體”或“患者”包括人類及其他哺乳動物，優(yōu)選為人類。

術(shù)語“治療有效量”系指當向個體給藥用于治療疾病時，足以實現(xiàn)針對該疾病的治療的化合物或組合物的量?！爸委熡行Я俊笨捎绕湟暬衔?、疾病及其嚴重程度及所治療的個體的年齡、體重或其他因素而變化。當應(yīng)用于單獨服用的個別活性成分時，該術(shù)語系指其單獨成分。當應(yīng)用于組合時，該術(shù)語系指無論連續(xù)或同時以組合方式施用，產(chǎn)生治療作用的活性成分的組合量。

在一些實施例中，術(shù)語“治療(treating)”或“治療(treatment)”系指：(i)抑制疾病、病癥或病狀，亦即遏制其發(fā)展；(ii)緩解疾病、病癥或病狀，亦即引起該疾病、病癥及/或病狀的消退；或(iii)在可能易患疾病、病癥及/或病狀但尚未診斷為患有其的個體體內(nèi)預(yù)防該疾病、病癥或病狀出現(xiàn)。因此，在一些實施例中，“治療(treating)”或“治療(treatment)”系指改善疾病或病癥，其可包括改善一或多個身體參數(shù)，盡管其難以被所治療的個體辨別。在一些實施例中，“治療(treating)”或“治療(treatment)”包括身體上(例如，可辨別癥狀的穩(wěn)定)或生理上(例如，身體參數(shù)的穩(wěn)定)或兩者來調(diào)節(jié)疾病或病癥。在又一些實施例中，“治療(treating)”或“治療(treatment)”包括延遲疾病或病癥的發(fā)作。

方法

縮寫

在本申請案中可使用以下縮寫：

B₂pin₂＝雙(頻哪醇根基)二硼

MeOH＝甲醇

LDA＝二異丙胺基鋰

LiHMDS＝雙(三甲基硅烷基)胺基鋰[LiN(SiMe₃)₂]

Pd(dppf)Cl₂＝[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)

Pd2(dba)₃＝參(二亞芐基丙酮)二鈀(0)

Xantphos＝4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃

nBu₃P＝三-正丁基膦

DCM＝二氯甲烷

THF＝四氫呋喃；

DIEA＝DIPEA＝二異丙基乙胺；

sat.＝飽和水溶液；

aq.＝水溶液

FCC＝使用二氧化硅的急驟管柱層析；

TFA＝三氟乙酸；

r.t.＝室溫；

DMF＝N,N-二甲基甲酰胺；

DMSO＝二甲亞碸；

DMA＝N,N-二甲基乙酰胺；

EtOAc＝乙酸乙酯；

h＝小時。

化學合成

式(I)化合物的合成

式(I)化合物的合成示例于一般合成流程1-4中：

1.吲唑中間物C的合成(流程1)

在膦(例如三丁基膦)存在的情況下使合適的5-鹵基-2-硝基苯甲醛起始物質(zhì)S1(X¹＝Cl、Br或I)與一級胺(R³NH₂)反應(yīng)以形成吲唑衍生物A(Genung,NE等人，Org.Lett.2014，16,3114-3117)，其轉(zhuǎn)而使用強堿(例如，LDA)在3位上去質(zhì)子化，接著與烷化試劑R²X(X＝例如，Cl、Br、I、或甲磺酸酯基)反應(yīng)以形成于適當位置帶有所要的R²、R³及R⁴的中間物C?；蛘撸墒谷ベ|(zhì)子化的化合物A與醛或酮反應(yīng)以形成醇加合物，將該醇加合物還原(例如，通過二烷基硅烷)以形成所要中間物C。

流程1

2.經(jīng)嘧啶取代的吲唑中間物E的合成(流程2)

在有催化劑(例如，鈀催化劑)的情況下使中間物C進行硼化反應(yīng)以形成硼酸鹽中間物D，使其與經(jīng)鹵素取代的嘧啶衍生物H偶合以形成5-(嘧啶-3-基)-吲唑中間物E。

流程2

3.2-胺基-5-哌嗪基甲基-吡啶中間物G的合成(流程3)

使經(jīng)6-鹵素或6-硝基取代的吡啶-3-甲醛起始物質(zhì)S2及經(jīng)1-R1-取代的哌嗪起始物質(zhì)S3進行還原胺化反應(yīng)以形成2-胺基-5-哌嗪基甲基-吡啶中間物F，其轉(zhuǎn)而經(jīng)由吡啶環(huán)上鹵素的取代或硝基的還原而轉(zhuǎn)化成2-胺基-5-哌嗪基甲基-吡啶中間物G。

流程3

4.式(I)化合物的合成(流程4)

在有催化劑(例如，鈀催化劑)的情況下，經(jīng)嘧啶取代的吲唑中間物E與2-胺基-5-哌嗪甲基-吡啶中間物G偶合提供式(I)的化合物。

流程4

實例

以下非限制性的實例進一步說明本發(fā)明的某些方面。此類化合物系根據(jù)上述一般合成流程制備。

實例1.N-(5-((4-乙基哌嗪-基))甲基)吡啶-2-基-5-氟-4-(3-異丙基-2-甲基-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺

化合物1的合成

作為所說明的實例，在流程5-7中分別描繪中間物E、中間物G及化合物1的合成。以下反應(yīng)流程中，單獨提供一些特定試劑或反應(yīng)條件以便更好理解，但該等特定試劑或條件并不代表任何限制。如熟悉此類技術(shù)者將會理解，可在各種方面使用多種對應(yīng)條件(例如試劑、溫度、催化劑及/或溶劑等)實現(xiàn)該反應(yīng)流程的任何特定步驟。

流程5

流程6

流程7

中間物A

在以惰性氮氛圍沖洗并保持的500mL圓底燒瓶內(nèi)置放5-溴-2-硝基苯甲醛(30.0g，130.4mmol，1.0當量)、甲胺(71.5mL，1.1當量)及丙-2-醇(300mL)。在80℃下攪拌所得溶液4小時。將混合物冷卻至室溫并添加三丁基膦(98mL，3.0當量)。在80℃下攪拌所得溶液12小時且隨后用500mL乙酸乙酯進行萃取。依次用300mL NH₄Cl(水溶液)及300mL鹽水洗滌所得混合物?；旌衔锝?jīng)無水硫酸鈉干燥并在真空下濃縮。將殘余物施加于硅膠管柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:4)溶離。由此產(chǎn)生32g呈紅色油狀的(粗產(chǎn)物)5-溴-2-甲基-2H-吲唑A：MS m/z MH⁺＝211。

中間物B

在以惰性氮氛圍沖洗并保持的1L三頸圓底燒瓶內(nèi)置放含5-溴-2-甲基-2H-吲唑A(32.0g，128.9mmol，1.0當量，85％)的四氫呋喃(300mL)。在-78℃下向該溶液中添加LDA(97.5mL，1.5當量，2M)。在0℃至5℃下攪拌溶液10分鐘，隨后冷卻至-78℃。向溶液中添加丙-2-酮(11.3g，194.7mmol，1.5當量)。在25℃下攪拌所得溶液12小時。隨后用100mL碳酸氫鈉水溶液淬滅反應(yīng)。用3×500mL乙酸乙酯萃取所得溶液且合并有機層，經(jīng)無水Na₂SO₄干燥并過濾。在真空下濃縮濾液并將殘余物施加于硅膠管柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:10至1:2)溶離。由此產(chǎn)生20g(58％)呈黃色油狀的2-(5-溴-2-甲基-2H-吲唑-3-基)丙-2-醇B：MS m/z M⁺＝269。

中間物C

在500mL圓底燒瓶內(nèi)置放2-(5-溴-2-甲基-2H-吲唑-3-基)丙-2-醇B(20.0g，74.3mmol，1.0當量)、三乙基硅烷(86.6g，744.4mmol，10.0當量)、三氟乙酸(85.0g，752.0mmol，10.0當量)及二氯甲烷(200mL)。在25℃下攪拌所得溶液12小時。在真空下濃縮所得混合物。用碳酸氫鈉(水溶液，2M)將溶液調(diào)整至pH 8。用3×100mL乙酸乙酯萃取所得溶液，且合并有機層并用1×100mL鹽水洗滌?；旌衔锝?jīng)無水Na₂SO₄干燥、過濾并在真空下濃縮。將殘余物施加于硅膠管柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:20至1:10)溶離。由此產(chǎn)生8g(43％)呈黃色油狀的5-溴-2-甲基-3-(丙-2-基)-2H-吲唑C：MS[M+1]⁺＝253及255，[M+CH₃CN+H]⁺＝294及296。

中間物D

在以惰性氮氛圍沖洗并保持的100mL圓底燒瓶內(nèi)置放5-溴-2-甲基-3-(丙-2-基)-2H-吲唑C(1.9g，7.5mmol，1.0當量)、4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷(2.3g，9.0mmol，1.2當量)、KOAc(1.47g，15.0mmol，2.0當量)、1,4-二惡烷(40mL)及水(10mL)。向該溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(612mg，0.75mmol，0.1當量)。在90℃下攪拌所得溶液12小時，并隨后冷卻至室溫，并在真空下濃縮。將殘余物施加于硅膠管柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:5)溶離。由此產(chǎn)生2.5g呈白色固體的(粗產(chǎn)物)2-甲基-3-(丙-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-2H-吲唑D：MS m/z MH⁺＝301。

中間物E

在以惰性氮氛圍沖洗并保持的100mL圓底燒瓶內(nèi)置放2-甲基-3-(丙-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-2H-吲唑D(2.5g，7.5mmol，1.0當量，90％)、2,4-二氯-5-氟嘧啶(1.7g，9.9mmol，1.2當量)、碳酸鉀(2.3g，16.7mmol，2.0當量)、1,4-二惡烷(40mL)及水(10mL)。向溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(680mg，0.83mmol，0.10當量)。在80℃下攪拌所得溶液2小時且隨后冷卻至室溫并在真空下濃縮。將殘余物施加于硅膠管柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1:2)溶離。由此產(chǎn)生1.2g(48％)呈灰白色固體狀的5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-(丙-2-基)-2H-吲唑E：MS m/z MH+＝305；1H NMR(300MHz,CDCl₃,ppm)：δ1.58(d,6H),3.48-3.57(m,1H),4.19(s,3H),7.24(d,1H),8.03-8.07(m,1H),8.47(d,1H),8.68(s,1H)。

中間物F

經(jīng)30分鐘向N-乙基哌嗪(7.7g，67.5mmol，1.1當量)及6-溴吡啶-3-甲醛(11.6g，62.5mmol，1.0當量)于150mL二氯甲烷中的溶液中逐份添加NaBH(OAc)₃(14.4g，68.0mmol，1.1當量)。攪拌反應(yīng)混合物48小時，隨后用CH₂Cl₂及過量2N NaOH(水溶液)稀釋。分離各層，并用CH₂Cl₂萃取水層。合并、干燥(Na₂SO₄)并濃縮CH₂Cl₂萃取物以產(chǎn)生呈油狀的1-(6-溴-吡啶-3-基甲基)-4-乙基-哌嗪F：MS m/z MH+＝285。

中間物G

將雙(三甲基硅烷基)胺基鋰(LiHMDS)(在THF中的1M溶液，12.7mL，12.7mmol，1.2當量)添加至中間物F(3.0g，10.6mmol，1.0當量)、二環(huán)已基膦基聯(lián)苯(0.227g，0.64mmol，0.06當量)及Pd₂(dba)₃(0.291g，0.32mmol，0.03當量)于15mL THF中的溶液中。在50℃下加熱混合物3小時，隨后冷卻至室溫，并經(jīng)由過濾介質(zhì)進行過濾。濃縮濾液并在CH₂Cl₂中溶解殘余物，并用10％HCl(水溶液)萃取兩次。合并HCl萃取物且用EtOAc洗滌，并用1.0N NaOH堿化水相，并隨后用CH₂Cl₂萃取四次。將有機萃取物合并、經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以產(chǎn)生1.2g呈茶色固體狀的5-(4-乙基-哌嗪基-1-基甲基)-吡啶-2-基胺G：MS m/z MH⁺＝221。

化合物1

5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-(丙-2-基)-2H-吲唑(E)(700mg，2.3mmol，1.3當量)、5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基吡啶-2-胺(G)(389mg，1.8mmol，1.0當量)、Cs2CO3(2.3g，7.2mmol，4.0當量)、Pd₂(dba)₃(0.164g，0.18mmol，0.1當量)及Xantphos(0.104g，0.18mmol，0.1當量)于10mL 1,4-二惡烷中的混合物用N₂脫氣，隨后加熱，同時在110℃下攪拌4小時。將混合物冷卻至室溫，隨后經(jīng)由過濾介質(zhì)過濾，并用CH₂Cl₂充分洗滌過濾墊。濃縮濾液并通過硅膠管柱層析使用CH₂Cl₂-2％NH₃/MeOH梯度純化殘余物以得到0.475g N-(5-((4-乙基哌嗪-基)甲基)吡啶-2-基-5-氟-4-(3-異丙基-2-甲基-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(1)。MS m/z MH+489；1H NMR(300MHz,CDCl₃,ppm):δ0.97(t,3H,J＝7.1Hz),1.51(d,2H,J＝7.0Hz),2.27-2.51(重疊m,10H),3.33(s,3H),3.54-3.68(m,1H),4.15(s,3H),7.64-8.71(重疊m,7H),10.00(s,1H)。

本發(fā)明的化合物1及其他所選實例(化合物2-31)列于表1中，其均系或可根據(jù)上述方法制備。

表1.化合物的所選實例

生物學分析

式(I)化合物為新穎CDK4/6抑制劑，其已或可根據(jù)如下所述程序評估其活性。

生物化學分析

將細胞周期蛋白D1添加至新制備的反應(yīng)緩沖液[20mM Hepes(pH 7.5)、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.02％Brij 35、0.02mg/mL BSA、0.1mM Na₃VO₄、2mM DTT、1％DMSO]中。將CDK4或CDK6傳遞至受質(zhì)溶液并輕輕地混合。用10μM起始的3倍稀釋以10劑量IC₅₀模式測試化合物。通過聲學技術(shù)(Echo550；納升范圍)將在DMSO中稀釋的化合物添加至激酶反應(yīng)混合物并在室溫下培育20分鐘。將33P-ATP(1μM)添加至反應(yīng)混合物中以起始反應(yīng)。在室溫下將激酶反應(yīng)物培育2小時。將反應(yīng)物點樣于P81離子交換紙上，并通過濾紙結(jié)合方法偵測激酶活性。使用四參數(shù)邏輯方程(GraphPad Prism)將曲線與非線性回歸曲線擬合。在此等條件下，在CDK4及CDK6分析中1的IC₅₀值經(jīng)測定為<1.0nM。

細胞分析

MCF7人類腫瘤細胞以90微升/孔的總體積接種于透明的聚苯乙烯96孔微量細胞培養(yǎng)盤(96孔平底盤，目錄號3997)中。在含濕氣培育箱中在37℃下在5％CO2及95％空氣中培育24小時后，將10μL于生長培養(yǎng)基中10倍連續(xù)稀釋的1一式雙份地添加至每一孔(10點劑量反應(yīng))。在含濕氣培育箱中在37℃下在5％CO₂及95％空氣的氛圍中培養(yǎng)72小時后，使經(jīng)接種細胞及Cell(Promega G7571)試劑達到室溫以平衡30分鐘。將100μL Cell試劑添加至每一孔中。震蕩盤兩分鐘且隨后靜置以平衡10分鐘。在Tecan GENios微量培養(yǎng)盤讀取器上讀取螢光之前，將介質(zhì)/Cell Titer試劑轉(zhuǎn)移至白色聚苯乙烯96孔微量細胞培養(yǎng)盤(96孔平底盤，目錄號3917)中。相對于未經(jīng)處理的對照孔計算細胞生長的抑制百分比。所有測試在每一濃度水準下一式兩份地進行。使用Prism 6.05通過使用以下四參數(shù)邏輯方程曲線擬合資料來估算測試藥劑的IC₅₀值：

其中最高值為對照吸光度的最大百分比，最低值為最高藥劑濃度下對照吸光度的最小百分比，Y為對照吸光度的百分比，X為藥劑濃度，IC₅₀為相較于對照細胞抑制50％細胞生長的藥劑的濃度，且n為曲線的斜率。在此等條件下，1的IC₅₀值經(jīng)測定為<2μM。

表2概述三種已報導的CDK4/6抑制劑32、33及34的生物化學及基于MCF7細胞的資料。該等資料在本文所述的分析條件下獲得。

表2.已知CDK4/6抑制劑的生物化學及細胞資料

<0.001

熟習此類技術(shù)者應(yīng)理解在不偏離本發(fā)明的精神的情況下可對本發(fā)明的化合物、組合物及/或方法進行很多及各種各樣的修改。因此，本文所述的本發(fā)明的各種實施例僅為例示性的，且并不代表以任何方式限制本發(fā)明的范疇。本文中所引用的所有參考文獻以全文引用的方式并入本文中。