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哺乳動(dòng)物多能干細(xì)胞、其產(chǎn)生方法及其用途與流程

文檔序號(hào):11934274閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種哺乳動(dòng)物神經(jīng)源性成體多能干細(xì)胞(NEDAPS細(xì)胞),其特征在于表達(dá)Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4。

2.如權(quán)利要求1所述的NEDAPS細(xì)胞,其是分離的。

3.如權(quán)利要求1或2所述的NEDAPS細(xì)胞,其特征在于以下的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或全部:

(a)能夠分化為中胚層細(xì)胞類型,可選地,間充質(zhì)細(xì)胞類型;

(b)能夠分化為內(nèi)胚層細(xì)胞類型;

(c)能夠分化為外胚層細(xì)胞類型,可選地,神經(jīng)干細(xì)胞;

(d)具有能動(dòng)性;及

(e)在培養(yǎng)物中貼附在玻璃或塑料基底上。

4.如權(quán)利要求3所述的NEDAPS細(xì)胞,其中,所述間充質(zhì)細(xì)胞類型是(a)成骨細(xì)胞或(b)內(nèi)皮細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的NEDAPS細(xì)胞的群。

6.如權(quán)利要求5所述的群,其是分離的,可選地,所述群是至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%同質(zhì)的。

7.一種產(chǎn)生權(quán)利要求6所述的群的方法,其包括:

(a)離體培養(yǎng)暴露于NEDAPS細(xì)胞增殖條件的周圍神經(jīng);或

(b)在受試者體內(nèi)培養(yǎng)來(lái)自暴露于NEDAPS細(xì)胞增殖條件的周圍神經(jīng)的細(xì)胞,且

(i)可選地,在培養(yǎng)前獲取所述周圍神經(jīng);和

(ii)可選地,在獲取前,使所述周圍神經(jīng)暴露于NEDAPS細(xì)胞增殖條件。

8.如權(quán)利要求7所述的方法,其中,所述NEDAPS細(xì)胞增殖條件包括:

(a)使周圍神經(jīng)暴露于BMP2;

(b)使周圍神經(jīng)暴露于除BMP2以外的神經(jīng)炎性試劑;

(c)向周圍神經(jīng)施加創(chuàng)傷;

(d)(a)-(c)中的兩個(gè)的組合;或

(e)(a)-(c)中的三個(gè)的組合。

9.如權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述NEDAPS細(xì)胞增殖條件包括使周圍神經(jīng)暴露于BMP2,并且其中:

(a)所述周圍神經(jīng)在受試者體內(nèi)暴露于BMP2,可選地,其中:

(i)將BMP2直接施用至周圍神經(jīng),可選地,以10ng~1mg的量施用;

(ii)通過(guò)肌內(nèi)注射將BMP2施用至受試者,可選地,以10ng~1mg的量施用;或

(iii)使受試者暴露于導(dǎo)致BMP2局部產(chǎn)生的條件,可選地,其中,所述條件包括骨折、鈍挫傷、熱損傷或電擊;或

(b)通過(guò)在包含BMP2的培養(yǎng)基中培養(yǎng)周圍神經(jīng)而使周圍神經(jīng)離體暴露于BMP2,可選地,BMP2的濃度為5ng/ml~1mg/ml。

10.如權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述NEDAPS細(xì)胞增殖條件包括向周圍神經(jīng)施加創(chuàng)傷,可選地,其中,所述創(chuàng)傷是機(jī)械創(chuàng)傷、電刺激、超聲沖擊波或熱攻擊。

11.如權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述NEDAPS細(xì)胞增殖條件包括使周圍神經(jīng)暴露于除BMP2以外的神經(jīng)炎性試劑,可選地,其中,所述神經(jīng)炎性試劑是腫瘤壞死因子α、白介素-1β、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、組胺、白介素6或它們的組合物。

12.如權(quán)利要求7~11中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述周圍神經(jīng)是被破壞的,可選地,通過(guò)在培養(yǎng)周圍神經(jīng)或來(lái)自周圍神經(jīng)的細(xì)胞之前用蛋白酶(可選地,膠原蛋白酶或基質(zhì)金屬蛋白酶)進(jìn)行處理來(lái)破壞周圍神經(jīng)。

13.如權(quán)利要求7~12中任一項(xiàng)所述的方法,其中,所述周圍神經(jīng)是腓腸神經(jīng)、腓腸神經(jīng)的分支、手指或腳趾的固有指/趾神經(jīng)、閉孔神經(jīng)的薄束分支、前臂內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)的節(jié)段、前臂外側(cè)皮神經(jīng)、近端第三網(wǎng)絡(luò)空間神經(jīng)束或骨內(nèi)后神經(jīng),可選地,其中,所述神經(jīng)來(lái)自斷肢。

14.一種產(chǎn)生分化的細(xì)胞的群的方法,其包括使權(quán)利要求5或6所述的群或用權(quán)利要求7~13中任一項(xiàng)所述的方法產(chǎn)生的群暴露于分化條件。

15.如權(quán)利要求14所述的方法,其中:

(a)所述分化的細(xì)胞是中胚層細(xì)胞,且所述分化條件包括在中胚層分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群;

(b)所述分化的細(xì)胞是內(nèi)胚層細(xì)胞,且所述分化條件包括在內(nèi)胚層分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群;或

(c)所述分化的細(xì)胞是外胚層細(xì)胞,且所述分化條件包括在外胚層分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群。

16.如權(quán)利要求14所述的方法,其中:

(a)所述分化的細(xì)胞是成骨細(xì)胞,且所述分化條件包括在成骨性分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群;

(b)所述分化的細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞,且所述分化條件包括在內(nèi)皮分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群;或

(c)所述分化的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞,且所述分化條件包括在神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述群。

17.通過(guò)權(quán)利要求14~16中任一項(xiàng)所述的方法產(chǎn)生的分化的細(xì)胞的群。

18.一種治療需要組織再生的受試者的方法,其包括將適于所述組織再生的細(xì)胞群植入所述受試者,其中,所述細(xì)胞群:

(a)通過(guò)權(quán)利要求7~16中任一項(xiàng)所述的方法產(chǎn)生;或

(b)是權(quán)利要求5~6和17中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞的群,可選地,其中,所述細(xì)胞的群是受試者自體的。

19.一種治療需要基因治療的受試者的方法,其包括將通過(guò)引入受試者所需的基因而制造的重組的細(xì)胞群植入所述受試者,其中,所述細(xì)胞群:

(a)通過(guò)權(quán)利要求7~16中任一項(xiàng)所述的方法產(chǎn)生;或

(b)是權(quán)利要求5~6和17中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞的群,可選地,其中,所述細(xì)胞的群是受試者自體的。

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