相關(guān)申請的交叉參照本申請要求2014年9月17日提交的美國申請第62/051,898號和2014年9月18日提交的美國申請第62/052,457號的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，這兩個申請均全文結(jié)合在此供參考，如同在本文中完全闡述一般。本發(fā)明涉及新穎c-20類固醇化合物、其組合物及用于治療、最小化和/或預(yù)防創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)的用途，所述創(chuàng)傷性腦損傷包括重度tbi、中度tbi及輕度tbi，包括震蕩。
背景技術(shù)：
：：現(xiàn)今認(rèn)為，在美國，每年有超過150萬的人經(jīng)歷創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)。在罹患tbi的人中，認(rèn)為至少約75％承受輕度創(chuàng)傷性腦損傷或mtbi，相較于中度或重度tbi而言。盡管此等損傷定義為輕度，但mtbi可引起長期或永久性障礙及失能。許多mtbi患者難以恢復(fù)常規(guī)日常活動且可能持續(xù)數(shù)周或數(shù)月不能恢復(fù)工作。除這些損傷的人員傷亡之外，mtbi每年花費美國約$170億。參見《美國國會關(guān)于輕度創(chuàng)傷性腦損傷的報告：預(yù)防嚴(yán)重公眾健康問題的步驟(reporttocongressonmildtraumaticbraininjuryintheunitedstates：stepstopreventaseriouspublichealthproblem)》，2003年9月，可在http：//www.cdc.govincipc/pub-res/mtbi/mtbireport.pdf獲得。也參見http：//www.cdc.gov/traumaticbraininjury/get_the_facts.html；faulm，xul，waldmm，coronadovg.《美國創(chuàng)傷性腦損傷：急診室門診、住院治療和死亡(traumaticbraininjuryintheunitedstates：emergencydepartmentvisits，hospitalizations，anddeaths.)》atlanta(ga)：疾病控制與預(yù)防中心(centersfordiseasecontrolandprevention)，國家損傷預(yù)防與控制中心(nationalcenterforinjurypreventionandcontrol)；2010；thurmand，alversonc，dunnk，guerreroj，sniezekj.美國創(chuàng)傷性腦損傷：公眾健康展望(traumaticbraininjuryintheunitedstates：apublichealthperspective.)《頭部創(chuàng)傷康復(fù)雜志(jheadtraumarehabil)》，14(6)：602-615(1999)；損傷預(yù)防和控制：創(chuàng)傷性腦損傷，美國的創(chuàng)傷性腦損傷(injuryprevention&control：traumaticbraininjury，traumaticbraininjuryintheunitedstates)：背景說明資料，可在疾病控制與預(yù)防中心在http：//www.cdc.gov/traumaticbraininjury/get_the_facts.html及http：//www.cdc.gov/traumaticbrainlnjury/index.html獲得；國家出院調(diào)查(nationalhospitaldischargesurvey；nhds)，2010；全國醫(yī)院門診醫(yī)療調(diào)查(nationalhospitalambulatorymedicalcaresurvey；nhamcs)，2010；國家生命統(tǒng)計系統(tǒng)(nationalvitalstatisticssystem；nvss)，2010；以及finkelsteine，corsop，millert及合作人.《損傷在美國的發(fā)病率和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)(theincidenceandeconomicburdenofinjuriesintheunitedstates)》.紐約(ny)：牛津大學(xué)出版社(oxforduniversitypress)；2006；以及coronado，mcguire，faul，sugerman，pearson.《tbi的流行病學(xué)和預(yù)防(theepidemiologyandpreventionoftbi)》(出版中)2012。在美國軍事人員中，tbi也是極其重要的健康問題，尤其對于伊拉克自由行動(operationiraqifreedom；oif)及持久自由行動(operationenduringfreedom；oef)的退伍軍人而言。根據(jù)國防部(departmentofdefense；dod)發(fā)布的由國防與退伍軍人腦損傷中心(defenseandveteransbraininjurycenter；dvbic)對監(jiān)視資料作出的分析，僅2011年就有33,149名美國軍事人員經(jīng)診斷患有tbi。此數(shù)目包括陸軍、海軍、海軍陸戰(zhàn)隊、空軍和來自國民警衛(wèi)隊(nationalguard)的現(xiàn)役及預(yù)備役部隊的服務(wù)人員(sm)。參見美國國防部：http：//www.health.mil/research/tbi_numbers.aspx。美國退伍軍人事務(wù)部(va)估計，從2001年10月1日oef開始到2011年12月31日，在向va醫(yī)療中心尋求護(hù)理的771,874名退伍軍人中，總共有59,218名退伍軍人就可能與tbi有關(guān)的病狀接受評估或治療。參見美國退伍軍人事務(wù)部，2012，可在http：//www.publichealth.va.govidocsiepidemiology/healthcare-iutilization-report-fy2012-qtr1.pdf獲得。tbi是非退化性、非先天性腦損傷，其可以起因于頭部撞擊、沖擊或震動或穿透性頭部損傷，所述穿透性頭部損傷破壞正常的腦功能，可能引起永久性或暫時性認(rèn)知、身體及心理社會功能的障礙，伴隨著相關(guān)的意識減弱或意識狀態(tài)改變。并非所有對頭部的沖擊或震動都會引起tbi。tbi的嚴(yán)重程度可在“輕度”至“重度”范圍內(nèi)。“輕度tbi”的特征是精神狀態(tài)或意識的簡單改變，然而“重度tbi”的特征是在損傷之后長時間無意識或記憶喪失。參見http：//www.cdc.govitraumaticbraininjury/get_thefacts.html。也參見疾病控制與預(yù)防中心(cdc)，國家損傷預(yù)防與控制中心.《美國國會關(guān)于輕度創(chuàng)傷性腦損傷的報告：預(yù)防嚴(yán)重公眾健康問題的步驟》.atlanta(ga)：疾病控制與預(yù)防中心，2003。格拉斯哥昏迷量表(glasgowcomascale；gcs)定義損傷48小時內(nèi)tbi的嚴(yán)重程度。因此，如本文中所用，中度到重度腦損傷定義如下：●中度腦損傷定義為引起20分鐘到6小時的意識喪失且格拉斯哥昏迷量表為9到12的腦損傷。參見http：//www.traumaticbraininjury.com/symptoms-of-tbi/severe-tbi-symptoms/；●重度腦損傷定義為引起超過6小時的意識喪失且格拉斯哥昏迷量表為3到8的腦損傷。參見http：//www.traumaticbraininjury.com/symptoms-of-tbi/severe-tbi-symptoms/；●輕度創(chuàng)傷性腦損傷(mildtraumaticbraininjury；mtbi)定義為頭部有力運動或引起精神狀態(tài)簡單改變(混亂、迷失方向或喪失記憶)的撞擊或意識喪失小于30分鐘的結(jié)果。雖然mri及cat掃描通常為正常的，但輕度tbi患者可維持意識或會經(jīng)歷持續(xù)數(shù)秒或數(shù)分鐘的意識喪失。輕度tbi的其他癥狀包括頭痛、混亂、思考困難、頭暈、眩暈、視力模糊或眼疲勞、耳鳴、口臭、疲勞或嗜睡、沮喪、睡眠模式改變、行為或情緒波動、記憶問題、集中度、注意力或思考。參見http：//www.traumaticbraininjury.com/symptoms-of-tbi/mild-tbi-symptoms/。中度或重度tbi患者可存在這些相同癥狀，但還可存在惡化或不消失的頭痛、反復(fù)嘔吐或惡心、抽搐或癲癇、無法睡醒、眼睛的一個或兩個瞳孔擴散、口齒不清、四肢無力或麻木、協(xié)調(diào)性喪失及混亂增加、坐立不安或躁動。參見http：//www.ninds.nih.gov/disorders/tbi/tbi.htm?，F(xiàn)今，每年發(fā)生的大多數(shù)tbi為輕度tbi，通常稱作震蕩。參見http：//www.cdc.gov/traumaticbraininjury/get_the_facts.html。也參見疾病控制與預(yù)防中心(cdc)，國家損傷預(yù)防與控制中心.《美國國會關(guān)于輕度創(chuàng)傷性腦損傷的報告：預(yù)防嚴(yán)重公眾健康問題的步驟》.atlanta(ga)：疾病控制與預(yù)防中心；2003。也參見損傷預(yù)防和控制：創(chuàng)傷性腦損傷，美國的創(chuàng)傷性腦損：背景說明資料，可在疾病控制與預(yù)防中心在http：//www.cdc.gov/traumaticbraininjury/get_the_facts.html獲得。也參見http：//www.cdc.govitraumaticbraininjury/index.html。因此，目前認(rèn)為震蕩是創(chuàng)傷性腦損傷的最常見類型。震蕩是由對頭部的撞擊、沖擊或震動所引起的伴隨著暫時性腦功能喪失的一類創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)。震蕩還可因身體下落或?qū)ι眢w的沖擊，引起頭部及腦部來回快速地晃動或移動而發(fā)生。參見http：//www.cdc.goviconcussion/pdf/fact_sheet_concusstbi-a.pdf。也參見在http：//www.cdc.goviconcussion/pdf/fact_sheet_concusstbi-a.pdf的關(guān)于震蕩及腦損傷的事實。震蕩定義為外傷誘發(fā)的腦功能暫時紊亂且涉及復(fù)雜的病理生理過程，且為mtbi的子集，其一般受自我限制且在腦損傷譜的不太嚴(yán)重的一端。參見harmonkg等人：美國醫(yī)學(xué)學(xué)會關(guān)于運動醫(yī)學(xué)的立場聲明：體育中的震蕩(americanmedicalsocietyforsportsmedicinepositionstatement：concussioninsport).《英國運動醫(yī)學(xué)雜志(brjsportsmed.)》47(3)：184(2013年2月)。據(jù)估計，在美國在競技運動及娛樂活動期間每年發(fā)生多達(dá)380萬震蕩；然而，多達(dá)50％震蕩可能未報道。參見harmonkg等人：美國醫(yī)學(xué)學(xué)會關(guān)于運動醫(yī)學(xué)的立場聲明：體育中的震蕩.《英國運動醫(yī)學(xué)雜志》47(3)：184(2013年2月)。此外，在美國，在足球中震蕩為大商業(yè)。鑒于以下事實：存在約1,700名nfl運動員、約66,000名踢高校足球的學(xué)生運動員、其他約110萬高中足球運動員及約250,000名參與波普·華納足球賽(popwarnerfootball)的青年，所以存在對尋找降低與震蕩相關(guān)的風(fēng)險的解決方案的需求，“……其可怕的后果有規(guī)律地將體育版撕成兩半。且提供診斷工具及震蕩治療的一批公司正渴望向其出售平和的心態(tài)?！眳⒁妏eterkeating：震蕩測試可能不是萬能藥-impact向成千上萬的人出售測試和培訓(xùn)，但程序有效性存在一些問題(concussiontestmaynotbepanacea-impactsellstestsandtrainingtothousands，butsomequestionprogram′svalidity)，《espn雜志(espnthemagazine)》，2012年8月12可在http：//espn.go.com/espn/otl/story//id/8297794/neuropsychological-testing-concussions-not-panacea獲得。根據(jù)疾病控制與預(yù)防中心，大多數(shù)震蕩患者迅速且完全地恢復(fù)。然而，對于一些人而言，癥狀可持續(xù)數(shù)天、數(shù)周或更久。總體而言，老年人、幼兒及青少年的恢復(fù)會較慢。過去已有震蕩的那些人還具有患上另一震蕩的風(fēng)險，且可發(fā)現(xiàn)，若其患上另一震蕩，則需要較長時間來恢復(fù)。震蕩癥狀通常歸為以下四類：參見http：//www.cdc.gov/concussion/pdf/fact_sheet_concusstbl-a.pdf。術(shù)語輕度腦損傷、輕度創(chuàng)傷性腦損傷(mtbi)、輕度頭部損傷(mho)、輕微頭部創(chuàng)傷及震蕩可互換地使用。參見國家損傷預(yù)防與控制中心.《美國國會關(guān)于輕度創(chuàng)傷性腦損傷的報告：預(yù)防嚴(yán)重公眾健康問題的步驟》，ga：疾病控制與預(yù)防中心(2003)，petchprapain，winkelmanc：輕度創(chuàng)傷性腦損傷：決定因素和后續(xù)的生活品質(zhì)(mildtraumaticbraininjury：determinantsandsubsequentqualityoflife).文獻(xiàn)綜述(areviewoftheliterature).《神經(jīng)科學(xué)護(hù)理雜志(journalofneurosciencenursing)》，39(5)：260-72(2007)。也參見可在http：//onf.org/system/attachments/60/original/guidelines_for_mildtraumatic_brain_injury_and_persistent_symptoms獲得的關(guān)于輕度創(chuàng)傷性腦損傷及持續(xù)癥狀的指南(guidelinesformildtraumaticbraininjuryandpersistentsymptoms)。雖然術(shù)語“震蕩”仍然與“mhi”或“mtbi”可互換地用于運動文獻(xiàn)中，但實際上一般臨床醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)現(xiàn)在使用“mtbi”。參見barthjt，varneynr，ruchinskasra，francisjp：輕度頭部損傷：運動醫(yī)學(xué)中的新領(lǐng)域(mildheadinjury：thenewfrontierinsportsmedicine).于varneynr，robertsrj.輕度創(chuàng)傷性腦損傷的評價和治療(theevaluationandtreatmentofmildtraumaticbraininjury).hillsdale，newjersey：美國勞侖斯·艾爾伯協(xié)會(lawrenceerlbaumassociates).第85-6頁.(1999)；以及http：//en.wikipedia.org/wiki/concussion。盡管如此，盡管所述術(shù)語可互換使用，但“震蕩”仍為“mtbi”的子集。參見harmonkg等人：美國醫(yī)學(xué)學(xué)會關(guān)于運動醫(yī)學(xué)的立場聲明：體育中的震蕩.《英國體育醫(yī)學(xué)雜志》47(3)：184(2013年2月)。孕酮是c-21類固醇激素。孕酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：孕酮為助孕素，且其是天然存在的主要人類助孕素之一。孕酮參與人類及其他物種的雌性月經(jīng)周期、妊娠及胚胎發(fā)生。孕酮由哺乳動物的卵巢自然地產(chǎn)生，但也可由一些植物及酵母產(chǎn)生。19-去甲孕酮為c-20類固醇激素。19-去甲孕酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：相信19-去甲孕酮為具有鹽皮質(zhì)激素特性且對孕酮受體具有高親和力的強效助孕素。參見parisj，botellaj，fournaup，bonnetp，thevenotr：鹽皮質(zhì)激素效應(yīng)在19-去甲孕酮衍生物中的消失：結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系(extinctionofmineralocorticoideffectsin19-norprociesteronederivatives：structure-activityrelationships)；《藥理學(xué)和實驗治療學(xué)雜志(j.pharmacol.exp.ther.)》243(1)：288-91(1987)；及botella，j.等人：19-去甲孕酮衍生物在大鼠子宮中的結(jié)構(gòu)-活性和結(jié)構(gòu)-親和力關(guān)系(structure-activityandstructure-affinityrelationshipsof19-nor-progesteronederivativesinratuterus).《內(nèi)分泌學(xué)研究雜志(jendocrinologicalinvestigation)》.13(11)：905-910(1990)。19-去甲孕酮是以生物相關(guān)量產(chǎn)生于腎上腺外組織中的19-去甲-皮質(zhì)類固醇家族成員。已知此類類固醇的含量在人類高血壓的某些病況中增加且可能致病。參見melbyjc，dalesl，holbrookm，griffinggt：實驗和人類高血壓中的19-去甲皮質(zhì)類固醇(19-nor-corticosteroidsinexperimentalandhumanhypertension).《臨床與實驗高血壓(clinexphypertensa)》；4(9-10)：1851-67(1982)。孕酮及其類似物的用途具有諸多醫(yī)學(xué)應(yīng)用，用以處理急性情況及處理天然孕酮含量的長期下降。孕酮的其他用途包括例如預(yù)防早產(chǎn)、用于控制無卵性出血、用于增加皮膚彈性及骨強度以及用于治療多發(fā)性硬化癥?，F(xiàn)今認(rèn)為，孕酮可適用于治療創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)，其可引起細(xì)胞學(xué)、形態(tài)學(xué)及功能結(jié)果方面的實質(zhì)性及持續(xù)的改善。參見schumacherm，weill-engerers，lierep等人：神經(jīng)系統(tǒng)的正常和病理性衰老中的類固醇激素和神經(jīng)類同醇(steroidhormonesandneurosteroidsinnormalandpathologicalagingofthenervoussystem).《神經(jīng)生物學(xué)進(jìn)展(progneurobiol)》；71：3-29(2003)。舉例而言，已報道，在腦損傷之后投與孕酮可限制腦損壞，減少神經(jīng)組織丟失，且改善功能恢復(fù)。參見gosscw，hoffmansw，steindg.腦損傷之后的行為效應(yīng)和解剖學(xué)關(guān)系：孕酮劑量反應(yīng)研究(behavioraleffectsandanatomiccorrelatesafterbraininjury：aprogesteronedose-responsestudy).《藥理學(xué)、生物化學(xué)和行為(pharmacolbiochembehay)》.76：231-42(2003)。還已報道，孕酮可通過抑制炎癥因子(tnf-α及il-13)且隨后減少腦水腫來減少創(chuàng)傷性腦損傷之后的不良結(jié)果。參見pan，d.等人：《生物醫(yī)學(xué)和環(huán)境科學(xué)(biomedenvironsci)》.20：432-438(2007)；及jiang，c.等人：《炎癥研究(inflammres)》.58：619-624(2009)。再者，已報道，經(jīng)孕酮處理的大鼠可證實在創(chuàng)傷性腦損傷之后，神經(jīng)功能嚴(yán)重程度評分(針對運動及認(rèn)知功能的測試)改善。參見roof，r.l.等人：《恢復(fù)神經(jīng)學(xué)和神經(jīng)科學(xué)(restorneurolneurosci.)》4：425-427(1992)。此外，已報道，孕酮可有效地緩解兩個性別的嚙齒動物在損傷之后的水腫(djebaili，m.等人：《神經(jīng)創(chuàng)傷雜志(jneurotrauma.)》22，106-118(2005))。損傷之后，投與孕酮或其衍生物別孕烯醇酮(allopregnanolone；allo)還引起細(xì)胞死亡因子(卡斯蛋白酶-3(caspase-3))及神經(jīng)膠樣變性(gfap)的存在減少，cutler，s.m.等人：《神經(jīng)創(chuàng)傷雜志》24：1475-1486(2007)；vanlandingham，j.w.等人：《神經(jīng)科學(xué)通信(neuroscilett)》.425：94-98(2007)；wright，d.w.等人：《急診醫(yī)學(xué)年報(annemergmed.)》49：391-402，402e391-392(2007)。也參見《用于治療創(chuàng)傷性腦損傷的孕酮(protectiii)(progesteroneforthetreatmentoftraumaticbraininjury(protectiii))》，clinicaltrials.gov識別符：nct00822900及http：//acutecareresearch.org/studies/current/progesterone-treatment-tbi-protect-iii；《對靜脈內(nèi)孕酮在重度創(chuàng)傷性腦損傷(synapse)患者中的功效和安全研究(efficacyandsafetystudyofintravenousprogesteroneinpatientswithseveretraumaticbraininjury(synapse))》，clinicaltrials.gov識別符：nct01143064；《鈍器創(chuàng)傷性腦損傷的孕酮治療(progesteronetreatmentofblunttraumaticbraininjury)》，clinicaltrials.gov識別符：nct00048646；《研究創(chuàng)傷性腦損傷患者中的損傷嚴(yán)重程度和結(jié)果的血液測試(bloodteststostudyinjuryseverityandoutcomeintraumaticbraininjurypatients(bioprotect))》，clinicaltrials.gov識別符：nct01730443。進(jìn)一步參見http：//www.protectiii.com/；及http：//em.emory.edu/protect/；及http：//clinicaltrials.qov/show/nct00822900的protecttmiii。也參見http：//www.sciencedaily.com/releases/2010/02/100219204407.htm的《iii期臨床試驗中所測試的用于創(chuàng)傷性腦損傷的孕酮(progesteronefortraumaticbraininjurytestedinphaseiiiclinicaltrial)》。再者，參見http：//synapse-trial.com/downloads/premaorphan.pdf的《bhr制藥公司研究用的創(chuàng)傷性腦損傷療法接受歐洲藥物管理局孤立藥品標(biāo)識(bhrpharmainvestigationaltraumaticbraininjurytreatmentreceiveseuropeanmedicinesagencyorphanmedicinalproductdesignation)》。最近，已報道“……給予雄性及雌性實驗室大鼠及小鼠的孕酮可跨越血腦屏障……且減少tbi后的水腫程度……；減少脂質(zhì)過氧化及異前列烷(isoprostanes)，其轉(zhuǎn)而促進(jìn)損傷后缺血病狀……；產(chǎn)生代謝物，所述代謝物減少促凋亡且增加抗凋亡酶……及促炎基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)……；影響與解決水腫有關(guān)的水孔蛋白的表達(dá)……；在不同的大腦缺血模型中，顯著減少壞死性細(xì)胞死亡面積且改善行為結(jié)果……；保護(hù)損傷部位遠(yuǎn)側(cè)通常會死的神經(jīng)元……；增強患有脫髓鞘病癥的幼齡及老齡大鼠中寡樹突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的髓鞘再生……；且在兩邊內(nèi)側(cè)額葉皮層損傷之后，產(chǎn)生認(rèn)知、感官及空間學(xué)習(xí)效能的顯著節(jié)省……孕酮已在22種不同損傷模型中顯示出具有有利影響；多篇廣泛綜述論述這些資料……迄今為止，大多數(shù)關(guān)于孕酮及其代謝物的研究一直集中于tbi的治療……此研究路線源于當(dāng)研究人員……已發(fā)現(xiàn)在幼齡成年雄性及雌性大鼠中的內(nèi)側(cè)額葉皮層的兩側(cè)挫傷損傷之后，相比于僅給予媒劑注射的對照，用孕酮處理5天顯著改善空間學(xué)習(xí)及感官效能。通過超過30年的研究，最近已首次成功地完成了tbi治療方面的臨床試驗。由國家神經(jīng)病癥和中風(fēng)研究所(nationalinstituteofneurologicaldisordersandstroke；ninds)贊助的關(guān)于孕酮在治療中度至重度成年人tbi的這項2a期單中心臨床試驗……已發(fā)現(xiàn)在損傷之后靜脈內(nèi)給予孕酮3天的患者的死亡率小于給予實踐護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)但無激素的對照個體的一半(13.6％對比30.4％)。孕酮組中的中度受傷患者的三十日功能結(jié)果明顯優(yōu)于安慰劑組的那些結(jié)果[且]……，國家衛(wèi)生研究院(nationalinstitutesofhealth)指定的資料安全監(jiān)測委員會發(fā)現(xiàn)，在此試驗中沒有可歸因于孕酮治療的嚴(yán)重不良事件。經(jīng)檢查患有重度tbi的159名中國患者的第二獨立隨機化雙盲研究給予孕酮的肌肉內(nèi)注射歷時5天。研究者報道在損傷之后30天及6個月，關(guān)于發(fā)病率及死亡率的有利結(jié)果非常類似，同樣不存在由所述治療引起的任何嚴(yán)重不良事件……”參見d.g.stein及i.sayeed：《孕酮值得考慮為腦損傷的療法嗎？(isprogesteroneworthconsiderationasatreatmentforbraininjury？)》ajr(194)：20-22(2010年1月)。在2010年的大約6月份，bhr制藥公司開始了研究(孕酮的神經(jīng)保護(hù)活性在重度外傷性腦損傷中的研究)，用于研究靜脈內(nèi)孕酮輸注配制物的有效性。參見http：//www.synapse-trial.comi；http：//www.besinscriticalcare.conn/progesterone-research/；及http：//em.emory.edu/protect/。盡管如此，據(jù)報道，“bhr-100必須在tbi的八小時內(nèi)投與且連續(xù)地輸注五天……獨立于研究的資料安全監(jiān)測委員會(dataandsafetymonitoringboard；dsmb)已經(jīng)發(fā)布關(guān)于研究療程的試驗安全性資料的六份分析，每次都推斷應(yīng)該持續(xù)直至其預(yù)期完成……dsmb在2013年1月對來自400名synapse患者的原始六個月功效資料進(jìn)行了正式的期中分析，得出的結(jié)論是，無理由因無效而停止研究……[且]研究得到美國腦損傷協(xié)會(americanbraininjuryconsortium；abic)及歐洲腦損傷協(xié)會(europeanbraininjuryconsortium；ebic)的認(rèn)可”。參見http：//www.besinscriticalcare.conn/progesterone-research/。也參見http：//www.prnewswire.conninews-releases/bhr-pharnna-synapse-trial-dsnnb-data-analyses-determine-no-safety-issues-study-should-continue-to-conclusion-187277871.htnnl的《bhr制藥公司的試驗dsmb資料分析確定了無安全問題；研究應(yīng)該繼續(xù)到結(jié)束(bhrpharmatrialdsmbdataanalysesdeterminenosafetyissues；studyshouldcontinuetoconclusion)》。19-去甲孕酮及其類似物可具有醫(yī)學(xué)應(yīng)用。舉例而言，相信此類化合物促進(jìn)軸突脫髓鞘。參見hussainr，ei-etrm，gacio，rakotomamoniyj，macklinwb，kumarn，sitruk-warer，schumacherm，ghoumariam：“孕酮和乙酸烯諾孕酮促進(jìn)了軸突髓鞘再生：孕酮受體的作用(progesteroneandnestoronefacilitateaxonremyelination：aroleforprogesteronereceptors)”，《內(nèi)分泌學(xué)(endocrinology)》，152(10)：3820-31(2011)。另外，此類化合物已經(jīng)研究作為潛存口服避孕藥。參見例如mueckao，sitruk-warer.：“諾美孕酮乙酸酯，一種用于口服避孕新穎的新穎孕激素(nomegestrolacetate，anovelprogestogenfororalcontraception)”，steroids，76(6)：531-9(2011)。額外有用活性可包括抑制細(xì)胞凋亡。參見dressingge，pangy，donqj，thomasp.：“大西洋黃花魚顆粒層/卵泡膜細(xì)胞共培養(yǎng)物中通過mpra進(jìn)行的孕激素信號傳導(dǎo)和其涉及孕激素對細(xì)胞凋亡的抑制(progestinsignalingthroughmprainatlanticcroakergranulosa/thecacellcoculturesanditsinvolvementinprogestininhibitionofapoptosis)”，endocrinology_151，(12)：5916-26(2010)。孕酮以非天然存在的對映異構(gòu)體形式(稱為對映體孕酮)存在：相信在降低細(xì)胞死亡、腦腫脹及炎癥方面，對映體孕酮具有與天然孕酮相同的功效，然而在某些條件下，對映異構(gòu)體的抗氧化活性是外消旋體的三倍。類似地，相信對映體孕酮具有較小的性副作用，如抑制精子形成；抑制睪固酮向二氫睪固酮的轉(zhuǎn)化；睪丸、附睪及萊氏細(xì)胞(leydigcell)的大小減??；且無如天然孕酮可能見到的高凝風(fēng)險。此外，對映體孕酮的效用已描述于2012年10月5日提交且名稱為“預(yù)防性和急性后期使用孕酮和/或其對映異構(gòu)體用于治療輕度創(chuàng)傷性腦損傷的鼻遞送機構(gòu)(nasaldeliverymechanismforprophylaticandpost-acuteuseforprogesteroneand/oritsenantiomerforuseintreatmentofmildtraumaticbraininjuries)”的美國專利申請第13/645,881號、2012年10月12日提交且名稱為“預(yù)防性和急性后期使用孕酮和其對映異構(gòu)體用于改善與震蕩有關(guān)的結(jié)果(prophylacticandpost-acuteuseofprogesteroneanditsenantiomertobetteroutcomesassociatedwithconcussion)”的美國專利申請第13/645,854號和2012年10月12日提交且名稱為“預(yù)防性和急性后期第15天使用孕酮和其對映異構(gòu)體用于治療創(chuàng)傷性腦損傷(prophylacticandpost-15acuteuseofprogesteroneinconjunctionwithitsenantiomerforuseintreatmentoftraumaticbraininjuries)”的美國專利申請第13/645,925號中，所述申請每一者的全部內(nèi)容及揭示內(nèi)容以其全文引用的方式并入本文中。也參見vanlandingham等人：孕酮的對映異構(gòu)體充當(dāng)創(chuàng)傷性腦損傷之后的分子神經(jīng)保護(hù)劑(theenantiomerofprogesteroneactsasamolecularneuroprotectantaftertraumaticbraininjury)，《神經(jīng)藥理學(xué)(neuropharmacology)》，51：1078-1085(2006)。由于與長期孕酮治療相關(guān)的副作用，因此相信孕酮不適合長期慢性投與來治療超出激素取代療法及避孕范圍的適應(yīng)癥，。盡管目前認(rèn)為，靜脈內(nèi)孕酮可適用于治療中度至重度創(chuàng)傷性腦損傷(tbi)，但美國群體(包括在軍隊服務(wù)的人員)中的mtbi是公共健康問題，當(dāng)前的民用及軍隊監(jiān)視系統(tǒng)低估了其量級及影響。毫無疑問，需要大量研究來確定包括震蕩的mtbi的完全量級，從而鑒別可預(yù)防且可修改的風(fēng)險因素，研發(fā)且測試策略來減少民事及軍隊生活中的mtbi，且改善承受這些損傷的人的健康及社會結(jié)果及生活品質(zhì)。因此，需要新穎的有效mtbi療法，其可便利地按需要投與，具有組織特異性和/或不誘發(fā)副作用，如通常與孕酮或生殖系統(tǒng)相關(guān)的副作用。技術(shù)實現(xiàn)要素：簡言之，相信本發(fā)明經(jīng)由發(fā)現(xiàn)某些新穎c-20類固醇化合物克服了與輕度創(chuàng)傷性腦損傷(mtbi)治療現(xiàn)狀相關(guān)的諸多缺陷及缺點，即對映-19-去甲孕酮、組合物及相信可有效治療mtbi(包括震蕩，其子組)的使用方法，其可根據(jù)規(guī)定的治療方案投與或便利地按需要投與。非常值得注意的是，相信本發(fā)明的c-20類固醇化合物和/或其組合物具有組織特異性和/或不誘發(fā)副作用，如與孕酮或生殖系統(tǒng)相關(guān)的副作用。獨特地，本發(fā)明的c-20類固醇化合物和/或其組合物可便利地按需要通過任何投藥途徑，特定言之，局部，例如經(jīng)鼻、經(jīng)頰和/或舌下投與以傳遞有效量，從而有效地和/或預(yù)防性地治療和或預(yù)防m(xù)tbi。甚至更值得注意的是，相信如本發(fā)明涵蓋的c-20類固醇化合物及其組合物在腦中用于治療mtbi具有組織特異性和/或不誘發(fā)通常與孕酮或生殖系統(tǒng)相關(guān)的副作用。一般而言，本發(fā)明的c-20類固醇化合物具有如下式i所示的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)：其中x為o、n或s；y為o、n或s；或yr98r10不存在；r1、r2、r5及r6獨立地是h、c1-c6烷基、鹵素、or12、nr13r14、sr15、sor16或so2r17；r4是h或c1-c6烷基；r4連同r3及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；或r4及r7一起形成雙鍵；r3是h或c1-c6烷基；r3連同r4及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r3不存在；r7為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r7及r4一起形成雙鍵；r8是h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；r8連同r9及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r8不存在；r9是h或c1-c6烷基；r9連同r8及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；r9及r11一起形成雙鍵；r10為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r10及r11一起形成雙鍵；r11是h或c1-c6烷基；或r11及r19一起形成雙鍵；r11及r9一起形成雙鍵；r12、r13、r14、r15、r16及r17獨立地是h、c(o)-c1-c6烷基或c1-c6烷基；且虛線表示單鍵或雙鍵的存在，其中單鍵的價數(shù)通過氫補全。更特定言之，如式i中所描繪的本發(fā)明c-20類固醇化合物具有天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型。此外，如式i中所示的本發(fā)明c-20類固醇化合物可以是外消旋化合物。再者，如式i所圖示的本發(fā)明c-20類固醇化合物可具有與天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型相反的立體化學(xué)構(gòu)型。本發(fā)明所涵蓋的一種優(yōu)選c-20類固醇化合物是對映-19-去甲孕酮。對映-19-去甲孕酮的分子式為c20h28o2且摩爾質(zhì)量是300.435g/mol。對映-19-去甲孕酮的化學(xué)名稱包括對映-19-去甲孕甾-4-烯-3,20-二酮。對映-去甲孕酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：根據(jù)本發(fā)明，相信式i的c-20類固醇化合物適用于治療、最小化和/或預(yù)防神經(jīng)元損壞，如涉及tbi的各種損傷引起的神經(jīng)元損壞，不論tbi為輕度、中度或重度。根據(jù)本發(fā)明的特別優(yōu)選的療法是用對映-19-孕酮治療mtbi，包括震蕩。根據(jù)本發(fā)明，式i的c-20類固醇化合物可以單一治療劑形式投與。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋，式i的c-20類固醇化合物可經(jīng)由投藥途徑投與，所述投藥途徑包括例如經(jīng)口、舌下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、經(jīng)眼、經(jīng)耳、鼻內(nèi)、局部、經(jīng)皮及經(jīng)直腸投藥途徑。本發(fā)明進(jìn)一步設(shè)想，式i的c-20化合物可配制成新穎組合物或混合物且以例如片劑、膠囊、囊形片、囊片、散劑、顆粒、液體、溶液、懸浮液、分散液、集結(jié)粒、珠粒、滴眼劑、凝膠、乳膏、軟膏、油膏、香膏、洗劑或栓劑形式投與。再者，本發(fā)明設(shè)想式i的c-20類固醇化合物可以配制物形式投與，所述配制物經(jīng)吞咽、注射、輸注、吸入、經(jīng)皮或局部施加，如施加于皮膚、眼、耳、鼻、粘膜或任何其他膜或插入直腸中。盡管如此，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解，本發(fā)明所涵蓋的用于治療tbi(特定言之，mtbi)的優(yōu)選投藥途徑為經(jīng)鼻、吸入或注射投藥途徑。應(yīng)進(jìn)一步了解，本發(fā)明的以上
發(fā)明內(nèi)容并不意欲描述本發(fā)明的各揭示實施例或每一實施方案。所述說明進(jìn)一步例示說明性實施例。在整個說明書的若干位置處，經(jīng)由實例提供指導(dǎo)，所述實例可以各種組合形式使用。在各情況下，所述實例僅作為代表性群組且不應(yīng)解釋為獨占式實例。具體實施方式通過展示且提供本發(fā)明的較完整理解及其所伴隨的諸多優(yōu)點，給出關(guān)于本發(fā)明的新穎c-20類固醇化合物、其組合物及制造與使用方法的以下詳細(xì)說明及實例。如本發(fā)明及所附申請專利范圍的描述中所用，除非上下文另外清楚地指明，否則單數(shù)形式“一(a)”、“一個(an)”及“所述(the)”可互換使用且還希望包括復(fù)數(shù)形式且在各含義內(nèi)。此外，如本文中所用，“和/或”是指且涵蓋所列項中的一或多項的任何及所有可能組合，如同當(dāng)以替代的(“或”)解釋時缺乏組合一樣。如本文中所用，“至少一個”意謂所列要素中的“一或多個”。術(shù)語“烷基”是指僅由碳及氫原子組成、不含不飽和度、具有一個至八個碳原子且通過單鍵連接至分子其余部分的直烴或分支烴鏈基，說明性地如甲基、乙基、正丙基1-甲基乙基(異丙基)、正丁基、正戊基及1，1-二甲基乙基(第三丁基)。術(shù)語“環(huán)烷基”表示3個至12個碳原子的非芳族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基，且多環(huán)環(huán)烷基的實例包括全氫萘基、金剛烷基及降冰片烷基橋連環(huán)基或螺雙環(huán)基，例如螺(4，4)壬-2-基。如本文中所用的術(shù)語“離去基”或“l(fā)g”是指在涉及所述基團(tuán)的化學(xué)反應(yīng)過程中離去的任何基團(tuán)且包括(但不限于)例如鹵素、溴苯磺酸酯基、甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基、對硝基苯甲酸酯基、膦酸酯基。如本文中所用的術(shù)語“有效量”意謂本發(fā)明的c-20類固醇化合物(特定言之，對映-19-去甲孕酮)用于治療、最小化和/或預(yù)防創(chuàng)傷性腦損傷(包括重度、中度和/或輕度tbi，包括震蕩)的任何量或劑量濃度。如本文中所用的有效量還意謂美國食品藥物管理局(foodanddrugadministration；fda)或其他政府機構(gòu)或法庭認(rèn)為可有效地治療、最小化和/或預(yù)防創(chuàng)傷性腦損傷(包括重度、中度和/或輕度tbi，包括震蕩)的任何量或劑量。除非另外明確說明，否則單數(shù)形式希望包括復(fù)數(shù)形式且適當(dāng)時同樣可在本文中互換使用且在各含義內(nèi)。除非另外指出，否則所有術(shù)語的大寫形式及非大寫形式在各含義內(nèi)。除非另外指明，否則應(yīng)了解，涵蓋本說明書及申請專利范圍中所用的表示成分、反應(yīng)條件等數(shù)量、比率及數(shù)字特性的所有數(shù)字以便能夠在所有情況下由術(shù)語“約”修飾。除非另外指明，否則本文中的所有份數(shù)、百分比、比率等按重量計。還應(yīng)了解，本文中所提及和/或引用的任何及所有文章、專利、專利公開、研究、摘要、網(wǎng)站等均特此以其全文引用的方式并入本文中。應(yīng)進(jìn)一步了解，如本文中所用的術(shù)語“tbi”、“mtbi”及“震蕩”具有上文所闡述的含義。通用制備方法本發(fā)明的此實施例中所用的c-20類固醇化合物的制備中所采用的特定方法視希望制備的特定化合物而定。如特定取代基的選擇因素在本發(fā)明的特定化合物的制備中將遵循的路徑中起一定作用。在一些情況下，那些因素可由一般技術(shù)人員容易識別。根據(jù)本發(fā)明，用于合成本發(fā)明c-20類固醇化合物的以下一般制備方法在以下所呈現(xiàn)的反應(yīng)流程/路徑及實例中較詳細(xì)地進(jìn)行描述。根據(jù)可用于合成本發(fā)明的某些c-20類固醇化合物及合成參與本發(fā)明的某些c-20類固醇化合物合成的某些中間體中的某些合成轉(zhuǎn)化，參見例如j.march.《高等有機化學(xué)(advancedorganicchemistry)》，第4版；johnwiley：newyork(1992)；r.c.larock.《綜合有機轉(zhuǎn)化(comprehensiveorganictransformations)》，第2版；wiley-vch：newyork(1999)；f.a.carey；r.j.sundberg.《高等有機化學(xué)》，第2版；plenumpress：newyork(1984)；t.w.greene；p.g.m.wuts.《有機合成中的保護(hù)基(protectivegroupsinorganicsynthesis)》，第3版；johnwiley：newyork(1999)；l.s.hegedus.《復(fù)雜有機分子合成中的過渡金屬(transitionmetalsinthesynthesisofcomplexorganicmolecules)》，第2版；universitysciencebooks：millvalley，ca(1994)；l.a.paquette編，《有機合成試劑百科全書(theencyclopediaofreagentsfororganicsynthesis)》；johnwiley：newyork(1994)；a.r.katritzky；o.meth-cohn；c.w.rees編，《綜合有機官能基轉(zhuǎn)化(comprehensiveorganicfunctionalgrouptransformations)》；pergamonpress：oxford，uk(1995)；g.wilkinson；f.ga.stone；e.w.abel編，《綜合有機金屬化學(xué)(comprehensiveorganometallicchemistry)》；pergamonpress：oxford，uk(1982)；b.m.trost；i.fleming.《綜合有機合成(comprehensiveorganicsynthesis)》；pergamonpress：oxford，uk(1991)；a.r.katritzky；c.w.rees編，《綜合雜環(huán)化學(xué)(comprehensiveheterocylicchemistry)》；pergamonpress：oxford，uk(1984)；a.r.katritzky；c.w.rees；e.f.v.scriven編，《綜合雜環(huán)化學(xué)ii(comprehensiveheterocylicchemistryii)》；pergamonpress：oxford，uk(1996)；及c.hansch；p.g.sammes；j.b.taylor編，《綜合醫(yī)藥化學(xué)(comprehensivemedicinalchemistry)》：pergamonpress：oxford，uk(1990)，其中每一者以全文引用的方式并入本文中。此外，合成方法及相關(guān)專題的反復(fù)綜述包括《有機反應(yīng)(organicreactions)》；johnwiley：newyork；《有機合成(organicsyntheses)》；johnwiley：newyork；《有機合成用的試劑(reagentsfororganicsynthesis)》：johnwiley：newyork；《天然產(chǎn)物合成大全(thetotalsynthesisofnaturalproducts)》；johnwiley：newyork；《藥物合成中的有機化學(xué)(theorganicchemistryofdrugsynthesis)》；johnwiley：newyork；《有機合成年度報告(annualreportsinorganicsynthesis)》；academicpress：sandiegoca；及《有機化學(xué)方法(methodenderorganischenchemie)》(houben-weyl)；thieme：stuttgart，germany。此外，合成轉(zhuǎn)化數(shù)據(jù)庫包括化學(xué)摘要(chemicalabstracts)，其中的每一者以全文引用的方式并入本文中且可使用cas在線或scifinder，handbuchderorganischenchemie(beilstein)對其進(jìn)行搜索，且可使用spotfire及reaccs對其進(jìn)行搜索。在一個實施例中，本發(fā)明提供具有式i化學(xué)結(jié)構(gòu)的c-20類固醇化合物：或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽、酯、前藥或共晶，其中，x為o、n或s；y為o、n或s；或yr8r10不存在；r1、r2、r5及r6獨立地是h、c1-c6烷基、鹵素、or12、nr13r14、sr15、sor16或so2r17；r4是h或c1-c6烷基；r4連同r3及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；或r4及r7一起形成雙鍵；r3是h或c1-c6烷基；r3連同r4及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r3不存在；r7為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r7及r4一起形成雙鍵；r8是h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；r8連同r9及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r8不存在；r9是h或c1-c6烷基；r9連同r8及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；r9及r11一起形成雙鍵；r10為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r10及r11一起形成雙鍵；r11是h或c1-c6烷基；或r11及r10一起形成雙鍵；r11及r9一起形成雙鍵；r12、r13、r14、r15、r16及r17獨立地是h、c(o)-c1-c6烷基或c1-c6烷基；以及虛線表示單鍵或雙鍵的存在，其中單鍵的價數(shù)通過氫補全。在一些實施例中，式i的c-20類固醇化合物具有天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實施例中，式i的c-20類固醇化合物為外消旋化合物。在其他實施例中，式i的c-20類固醇化合物具有與天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型相反的立體化學(xué)構(gòu)型。在另一實施例中，本發(fā)明提供具有式ii化學(xué)結(jié)構(gòu)的c-20類固醇化合物：其中，x為o、n或s；y為o、n或s；或yr8r10不存在；r1、r2、r5及r6獨立地是h、c1-c6烷基、鹵素、or12、nr13r14、sr15、sor16或s02r17；r4是h或c1-c6烷基；r4連同r3及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；或r4及r7一起形成雙鍵；r3是h或c1-c6烷基；r3連同r4及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r3不存在；r7為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r7及r4一起形成雙鍵；r8是h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；r8連同r9及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r8為c1-c6不存在；r9是h或烷基；r9連同r9及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；r9及r11一起形成雙鍵；r10為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r19及r11一起形成雙鍵；r11是h或c1-c6烷基；或r11及r19一起形成雙鍵；r11及r9一起形成雙鍵；r12、r13、r14、r15、r16及r17獨立地是h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；且虛線表示單鍵或雙鍵的存在，其中單鍵的價數(shù)通過氫補全。在一些實施例中，式ii的c-20類固醇化合物具有天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實施例中，式ii的c-20類固醇化合物是外消旋化合物。在其他實施例中，式ii的c-20類固醇化合物具有與天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型相反的立體化學(xué)構(gòu)型。在又另一實施例中，本發(fā)明提供具有式iii化學(xué)結(jié)構(gòu)的c-20類固醇化合物：其中：x為o、n或s；y為o、n或s；或yr8r10不存在；r4是h或c1-c6烷基；r4連同r3及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；或r4及r7一起形成雙鍵；r3是h或c1-c6烷基；r3連同r4及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r3不存在；r7為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r7及r4一起形成雙鍵；r8是h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；r8連同r9及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r8不存在；r9是h或c1-c6烷基；r9連同r8及y一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；r9及r11一起形成雙鍵；r10為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r10及r11一起形成雙鍵，r11是h或c1-c6烷基；或r11及r10一起形成雙鍵；r11及r9一起形成雙鍵；以及虛線表示單鍵或雙鍵的存在，其中單鍵的價數(shù)通過氫補全。在一些實施例中，式iii的c-20類固醇化合物具有天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實施例中，式iii的c-20類固醇化合物是外消旋化合物。在其他實施例中，式iii的c-20類固醇化合物具有與天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型相反的立體化學(xué)構(gòu)型。在又另一實施例中，本發(fā)明提供具有式iv化學(xué)結(jié)構(gòu)的c-20類固醇化合物：其中：x為o、n或s；y為o、n或s；或yr8r10不存在；r4是h或c1-c6烷基；r4連同r3及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)；或r4及r7一起形成雙鍵；r3是h或c1-c6烷基；r3連同r4及x一起形成含有1-2個氮、氧或硫原子的任選地被取代的5員至6員雜環(huán)，或r3不存在；r7為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r7及r4一起形成雙鍵；r8為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；r10為不存在、h、c(o)-c1-c6烷基、c1-c6烷基；或r19及r11一起形成雙鍵；以及r11是h或c1-c6烷基；或r11及r10一起形成雙鍵；r11及r9一起形成雙鍵；以及虛線表示單鍵或雙鍵的存在，其中單鍵的價數(shù)通過氫補全。在一些實施例中，式iv的c-20類固醇化合物具有天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型。在其他實施例中，式iv的c-20類固醇化合物是外消旋化合物。在其他實施例中，式iv的c-20類固醇化合物具有與天然類固醇的立體化學(xué)構(gòu)型相反的立體化學(xué)構(gòu)型。在一個實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物a：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物b：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物c：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物d：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物e：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物f：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是以下化合物：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物h：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物i：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物j：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物k：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物l：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物m：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物n：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物o：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物p：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物q：在另一實施例中，式i的c-20類固醇化合物是化合物r：在另一實施例中，以化合物a至r為代表的式i的c-20類固醇化合物以單一立體異構(gòu)體形式存在，其中任何中心處的立體化學(xué)未指明且可以是r或s。根據(jù)本發(fā)明，相信式i-iv的c-20類固醇化合物適用于治療、最小化和/或預(yù)防神經(jīng)元損壞，如涉及腦的各種損傷(如創(chuàng)傷性腦損傷(tbi))引起的神經(jīng)元損壞，不論所述tbi為輕度(包括震蕩)、中度或重度創(chuàng)傷性腦損傷。優(yōu)選地，相信式i-iv的c-20類固醇化合物適用于治療和/或預(yù)防m(xù)tbi。在另一實施例中，相信式i-iv的c-20類固醇化合物適用于治療和/或預(yù)防震蕩。根據(jù)本發(fā)明，按70kg患者計，式i-iv的c-20類固醇化合物(特定言之，對映-19去甲孕酮)可以約0.05mg/kg到16mg/kg、優(yōu)選約0.05mg/kg到約4mg/kg且甚至更優(yōu)選地約0.16mg/kg到約0.65mg/kg或約1.13mg/kg到約45.2mg/kg范圍內(nèi)的劑量投與，用于治療、最小化和/或預(yù)防tbi，包括重度tbi、中度tbi、輕度tbi及震蕩，優(yōu)選輕度tbi且甚至更優(yōu)選震蕩。雖然優(yōu)選較高劑量范圍，但仍然應(yīng)了解，本發(fā)明涵蓋如本文中所用的用于治療、最小化和/或預(yù)防tbi(包括重度tbi、中度tbi、輕度tbi及震蕩，優(yōu)選輕度tbi且甚至更優(yōu)選震蕩)的任何有效量。進(jìn)一步涵蓋，本發(fā)明式i-iv的c-20類固醇化合物可經(jīng)由多種投藥途徑投與，所述投藥途徑包括例如經(jīng)口、舌下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、腹內(nèi)、經(jīng)眼、經(jīng)耳、鼻內(nèi)、局部、經(jīng)皮、皮下及經(jīng)直腸投藥途徑。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋，在一些實施例中，所述c-20類固醇化合物可配制成例如組合物或混合物且以選自以下各者的劑型投與：例如片劑、膠囊、膠囊錠、囊片、散劑、顆粒、液體、溶液、懸浮液、分散液、集結(jié)粒、珠粒、滴眼劑、凝膠、乳膏、軟膏、油膏、香膏、洗劑或栓劑。在其他實施例中，本發(fā)明涵蓋，所述c-20類固醇化合物可以配制物形式投與，所述配制物經(jīng)吞咽、注射、輸注、吸入、經(jīng)皮或局部施用，如施用于皮膚、眼、耳、鼻、肺、粘膜或任何其他膜，或插入直腸中。盡管如此，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解，如本發(fā)明涵蓋的用于治療和/或預(yù)防tbi(特定言之，輕度tbi及震蕩)的優(yōu)選投藥途徑為局部，例如經(jīng)鼻或吸入，或注射投藥途徑。在一個實施例中，本發(fā)明提供一種式i-iv的c-20類固醇化合物，其經(jīng)由選自經(jīng)口、舌下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)眼、鼻內(nèi)、經(jīng)皮、皮下及經(jīng)直腸途徑投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物經(jīng)口投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物舌下投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物通過注射投與，如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物經(jīng)眼或經(jīng)耳投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物鼻內(nèi)投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物經(jīng)皮投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物皮下投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物經(jīng)直腸投與。在另一實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物局部投與，包括通過吸入投與。在一個實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物以選自以下各者的配制物形式投與：片劑、膠囊、膠囊錠、囊片、散劑、溶液、懸浮液、滴眼劑、乳膏、軟膏、洗劑、凝膠或栓劑。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，含有式i-iv的活性劑的配制物可任選地含有共同治療劑及非活性賦形劑。另外，一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，液體配制物含有溶劑且所述溶劑可以是水性溶劑或有機溶劑。在一個實施例中，式i-iv的c-20類固醇化合物以配制物形式投與，所述配制物經(jīng)吞咽、注射、輸注、吸入、局部施加于如皮膚、眼、粘膜或其他膜及肺，或插入直腸中。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，一些配制物旨在用于特定投藥途徑，而其他配制物可用于多種投藥途徑。舉例而言，溶液配制物可經(jīng)注射、輸注、腹膜內(nèi)沉積、皮下沉積、施加于眼、經(jīng)噴霧或施加至鼻中或以霧化液體或懸浮液形式吸入?；蛘?，片劑、膠囊、膠囊錠及囊片旨在用于吞咽。另外，栓劑旨在用于插入直腸中，而乳膏、軟膏及洗劑意欲用于局部應(yīng)用。本發(fā)明的用于制造式i-iv的c-20類固醇化合物的本發(fā)明方法展示于流程1到15中。在某些情況下，列舉試劑及溶劑。這些試劑及溶劑具有例示性且不希望限于所示的特定試劑或溶劑。流程1流程1表示經(jīng)由兩種替代性方法形成化合物(9)。在流程1中，使(1)與(2)反應(yīng)以產(chǎn)生(3)。化合物(2)的制備描述于yamauchi，noriaki；natsubori，yoshiaki；murae，tatsushi《日本化學(xué)學(xué)會公告(bulletinofthechemicalsocietyofjapan)》(2000)，73(11)，2513-2519中。使(3)經(jīng)歷立體選擇性閉環(huán)以形成(4)。隨后(4)可轉(zhuǎn)化成(9)：通過選擇性保護(hù)羰基以形成(5)(如bosch，m.p.；camps，f.；coll，j.；guerrero，t.；tatsuoka，t.；meinwald，j.《有機化學(xué)雜志(j.org.chem.)》1986，51，773中所述)，繼之同時進(jìn)行環(huán)雙鍵的氫化和芐基醚的裂解以形成(6)，且用亞硫酰氯消除其中的羥基；或通過同時進(jìn)行環(huán)雙鍵的氫化和芐基醚的裂解以形成(7)，繼之用亞硫酰氯消除其中的羥基以形成(8)，且保護(hù)羰基(如bosch，m.p.；camps，f.；coll，j.；guerrero，t.；tatsuoka，t.；meinwald，j.《有機化學(xué)雜志》1986，51，773中所述)。流程2流程2表示由(1)與丁-3-烯-2-酮(43)的組合形成流程1的化合物(9)的替代方案。使(1)與(43)反應(yīng)以形成(44)，使(44)經(jīng)歷立體選擇性閉環(huán)反應(yīng)以形成(45)。隨后選擇性地保護(hù)(45)以形成(46)(bosch，m.p.；camps，f.；coll，j.；guerrero，t.；tatsuoka，t.；meinwald，j.《有機化學(xué)雜志》1986，51，773)，使(46)經(jīng)歷伯利茲-希爾曼反應(yīng)(baylis-hillmanreaction)以形成(47)(薩蒂亞納拉亞納反應(yīng)(satyanarayanareaction)(basavaiah，d.；rao，a.j.；satyanarayana，t.《化學(xué)評論(chem.rev.)》2003，103，811)。使(47)經(jīng)歷劉易斯酸(lewisacid)促進(jìn)還原，產(chǎn)生流程1的化合物(9)?；蛘撸?47)發(fā)生氫化而得到(47a)。醇的后續(xù)活化及消去產(chǎn)生流程1的化合物(9)。在某些實施例中，(47a)到(9)的轉(zhuǎn)化及類似反應(yīng)可利用a1203作為試劑。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，b-羥基酮的活化及后續(xù)消去反應(yīng)(如流程2中所述)可在包括(但不限于)以下的多種條件下完成：koh、甲磺酰氯與二異丙基乙胺、對甲苯磺酰氯與二甲胺基吡啶、dcc、吡錠鹽酸鹽、氧化鋁。流程3流程3表示通過經(jīng)取代的2-乙基-2-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷與3-側(cè)氧基丁酸乙酯反應(yīng)形成化合物(10)的一步法。在某些實施例中，且不限于此，離去基r是-ots、-oms、-otf、-c1、-br或-i。在其它實施例中，離去基r是-ots、-br或-i。在其它實施例中，離去基r是-br。流程4流程4表示由(9)與(10)的組合形成化合物(14)。在流程4中，使(9)與(10)反應(yīng)以形成(11)，(11)發(fā)生氫化以形成(12)。隨后脫除(12)的雙重保護(hù)基且環(huán)化以形成(13)，對(13)進(jìn)行選擇性地再保護(hù)以形成(14)(tsunoda，t.；suzuki，m.；noyori，r.《四面體快報(tetrahedronlett.)》1980，21，1357)。流程5流程5表示由流程4的化合物(14)形成對映-19-去甲孕酮。在流程5中，使(14)與第三丁醇鉀及溴化乙基三苯基鏻反應(yīng)，繼之進(jìn)行硼氫化及氧化以形成對映體孕酮。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，縮酮保護(hù)基的水解可在氧化之前或在氧化之后進(jìn)行。一般技術(shù)人員將進(jìn)一步認(rèn)識到，存在適用于將醇氧化成酮的諸多反應(yīng)條件及試劑且pcc的替代物包括(但不限于)斯文(swern)、kmno4、戴斯-馬丁(dess-martin)、tempo及ibx。流程6流程6表示3-羥基戊-4-烯酸第三丁酯(48)經(jīng)由還原而形成化合物(15)(batt，frederic及fache，fabienne，《歐洲有機化學(xué)雜志(europeanjournaloforganicchemistry)》，2011(30)，6039-6055，s6039/1-s6039/46；2011)、形成甲苯磺酸酯及用甲氧基甲基醚(methoxymethylether；mom)保護(hù)基保護(hù)以形成(49)。隨后使(49)與3-側(cè)氧基丁酸乙酯(50)在堿存在下反應(yīng)以形成(15)。流程7流程7表示由流程1的(9)與流程6的(15)組合形成對映-19-去甲孕酮。在流程7中，使(9)與(15)發(fā)生羅賓遜環(huán)化(robinsonannulation)反應(yīng)以形成(16)，使(16)經(jīng)歷伯奇還原(birchreduction)或選擇性氫化反應(yīng)以形成(17)。同時除去(17)的mom醚及縮酮以形成(18)，隨后使(18)經(jīng)歷雙重維蒂希反應(yīng)(wittigreaction)以形成(19)。隨后使(19)經(jīng)歷閉環(huán)復(fù)分解反應(yīng)以形成(20)，使(20)經(jīng)歷硼氫化反應(yīng)以形成(21)。(21)的雙重氧化促使對映-19-去甲孕酮形成。流程8流程8表示自來自流程1的(1)與經(jīng)甲氧基甲基醚保護(hù)的化合物(23)的組合形成對映-19-去甲孕酮。使(1)與(23)反應(yīng)以形成(24)，使(24)經(jīng)歷立體選擇性環(huán)化反應(yīng)以形成(25)。隨后選擇性地保護(hù)(25)以形成(26)(tsunoda，t.；suzuki，m.；noyori，r.《四面體快報》1980，21，1357)，使(26)與溴化乙基三苯基鏻經(jīng)歷維蒂希反應(yīng)以形成(27)。同時水解(27)的mom醚及縮酮以形成(28)，隨后使(28)經(jīng)歷劉易斯酸促進(jìn)還原以形成(29)中的環(huán)外雙鍵(das，biswanath；banerjee，joydeep；chowdhury，nikhil；majhi，anjoy；holla，harish，《合成有機化學(xué)快報(synlett)》(2006)，(12)，1879-1882)。使(29)與來自流程3的(10)經(jīng)歷羅賓遜環(huán)合以形成(30)，使(30)經(jīng)歷伯奇還原或選擇性氫化以形成(31)。使(31)經(jīng)歷硼氫化反應(yīng)以形成(32)。通過串聯(lián)醇醛環(huán)化對(32)的縮酮進(jìn)行水解，形成(33)。(33)的氧化產(chǎn)生對映-19-去甲孕酮。在某些實施例中，用氫化及β消除2步工序替換劉易斯酸促進(jìn)還原。流程9流程9表示自流程8形成對映-19-去甲孕酮的替代方案。如所展示，如流程8中所描述來制備化合物(25)。繼續(xù)，選擇性地保護(hù)化合物(25)以產(chǎn)生縮醛化合物(34)(tsunoda，t.；suzuki，m.；noyori，r.《四面體快報》1980，21，1357)，立體選擇性地還原(34)以形成羥基化合物(35)。通過立體化學(xué)的反轉(zhuǎn)使(35)溴化以形成(36)，用乙烯基陰離子使(36)經(jīng)歷親核置換及立體化學(xué)的反轉(zhuǎn)以形成(37)。同時水解(37)的mom醚及縮酮以形成(38)，隨后使(38)經(jīng)歷劉易斯酸促進(jìn)還原以形成(39)中的環(huán)外雙鍵(das，biswanath；banerjee，joydeep；chowdhury，nikhil；majhi，anjoy；holla，harish，《合成有機化學(xué)快報》(2006)，(12)，1879-1882)。經(jīng)由羅賓遜環(huán)合使(39)與流程3中形成的化合物(10)反應(yīng)以形成(40)，使(40)經(jīng)歷伯奇還原或選擇性氫化以形成(41)。(41)經(jīng)歷瓦克爾氧化(wackeroxidation)，形成(42)。(42)的串聯(lián)縮酮水解及醇醛環(huán)化產(chǎn)生對映-19-去甲孕酮。在某些實施例中，用氫化及β消除2步工序替換劉易斯酸促進(jìn)還原。流程10流程10表示流程9中所展示的化合物(23)的制備。此化學(xué)方法改編自相關(guān)化合物的制備方案(batt，f.；fache，f.《歐洲有機化學(xué)雜志》2011，6039)。如所展示，將化合物(48)還原為化合物(50)(流程6)。隨后將化合物(51)的一級羥基(batt，f.；fache，f.《歐洲有機化學(xué)雜志》2011，6039)選擇性地轉(zhuǎn)化成對應(yīng)的甲氧基甲基醚(52)。隨后氧化化合物(52)以形成化合物(23)。流程10a流程10a表示流程10中所展示的化合物(23)的制備的替代方案。此化學(xué)方法改編自相關(guān)化合物的制備方案(batt，f.；fache，f.《歐洲有機化學(xué)雜志》2011，6039)。如所展示，將丙二醇轉(zhuǎn)化成其單甲氧基甲基醚化合物(55)。隨后氧化自由羥基以形成化合物(56)的醛。隨后將醛轉(zhuǎn)化成烯丙醇化合物(57)。隨后氧化化合物(57)以形成化合物(23)。流程11流程11表示流程1中所展示的化合物(2)的制備。此化學(xué)方法改編自相關(guān)化合物的制備方案(batt，f.；fache，f.eur.j.org.chem.2011，6039)且表示yamauchi，noriaki；natsubori，yoshiaki；murae，tatsushi《日本化學(xué)學(xué)會公告》(2000)，73(11)，2513-2519中所描述的合成的替代方案。如所展示，將化合物(51)的一級羥基(batt，f.；fache，f.《歐洲有機化學(xué)雜志》2011，6039)選擇性地轉(zhuǎn)化成對應(yīng)的芐基醚(58)。隨后氧化化合物(58)以形成化合物(2)。流程11a流程11a表示流程11中所展示的化合物(2)的制備的替代方案。此化學(xué)方法改編自相關(guān)化合物的制備方案(batt，f.；fache，f.《歐洲有機化學(xué)雜志》2011，6039)且表示yamauchi，noriaki；natsubori，yoshiaki；murae，tatsushi《日本化學(xué)學(xué)會公告》(2000)，73(11)，2513-2519中所描述的合成的替代方案。如所展示，將丙二醇轉(zhuǎn)化成其單芐基醚化合物(59)。隨后氧化自由羥基以形成化合物(60)的醛。隨后將醛轉(zhuǎn)化成烯丙醇化合物(61)。隨后氧化化合物(61)以形成化合物(2)。流程12流程12提供如流程4中所述的化合物(14)的替代性合成。所述合成包括將化合物(62)轉(zhuǎn)化成化合物(65)且將對映-19-去甲睪固酮(化合物67)轉(zhuǎn)化成二氧雜環(huán)戊烷縮酮化合物(68)的工序。特定言之，對(45)進(jìn)行還原及保護(hù)以形成(62)。使(62)經(jīng)歷伯利茲-希爾曼反應(yīng)以形成(63)，進(jìn)一步還原(63)以形成(64)。使(64)經(jīng)歷消除反應(yīng)以形成(65)中的雙鍵。使(65)與來自流程3的化合物(10)反應(yīng)以形成(66)，使(66)氫化及環(huán)化以形成對映-19-去甲睪固酮(67)。隨后對對映-19-去甲睪固酮(67)進(jìn)行縮酮保護(hù)及還原以形成(14)。在某些實施例中，在單一步驟中實現(xiàn)化合物(63)至化合物(65)的轉(zhuǎn)化，所述步驟包括劉易斯酸促進(jìn)還原。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，如流程12中所描述的那些者的β-羥基酮的活化及后續(xù)消除反應(yīng)可在包括(但不限于)以下的各種條件下完成：koh、甲磺酰氯與二異丙基乙胺、對甲苯磺酰氯與二甲胺基吡啶、dcc、吡錠鹽酸鹽、氧化鋁。流程12a流程12a提供化合物(62)向化合物(65)的替代性轉(zhuǎn)化。如所展示，用碳酸甲基鎂(mmc)處理化合物(62)，形成羧化產(chǎn)物化合物(63a)。對化合物(63a)的烯烴進(jìn)行催化氫化還原，形成化合物(64a)。最后在甲醛存在下脫羧，形成化合物(65)。在一些實施例中，化合物(63a)向化合物(64a)的轉(zhuǎn)化及化合物(64a)向化合物(65)的轉(zhuǎn)化為截然不同的且分開的合成步驟。在其它實施例中，化合物(63a)向化合物(64a)的轉(zhuǎn)化及化合物(64a)向化合物(65)的轉(zhuǎn)化串聯(lián)進(jìn)行。一般技術(shù)人員將認(rèn)識到，存在適用于雙鍵至單鍵的還原的諸多催化劑，包括(但不限于)鈀/碳、鉑/碳、氫氧化鈀/碳、鈀、鉑及阮尼鎳(raneynickel)。流程13流程13表示來自化合物(13)(流程4)的替代接續(xù)方案且視(13)至乙基烯醇醚化合物(70)的轉(zhuǎn)化、繼之以維蒂希反應(yīng)而定，產(chǎn)生化合物(71)。此類反應(yīng)大體上由antimo等人，[《類固醇(steroids)》77(2012)250-254]所述。此工序可通過(71)的初始硼烷氧化、繼之以烯醇醚的水解及氧化以形成(72)來完成?；蛘撸紫仁?71)水解，繼之以硼烷氧化，得到化合物(73)。流程14流程14表示流程13的替代方案且利用還原硅烷化來保護(hù)(13)的烯酮以形成(74)。此類保護(hù)大體上描述于iwao等人[《四面體快報》49(1972)5085-5038]及horiguchi等人[《美國化學(xué)學(xué)會雜志(journaloftheamericanchemicalsociety)》111(16)(1989)6259-6265]中。在將(75)硼烷氧化為(77)之后，醇的氧化及烯酮的氧化脫除保護(hù)基產(chǎn)生對映-19-去甲孕酮。此類脫除保護(hù)基大體上由yoshihiko等人[《有機化學(xué)雜志(journaloforganicchemistry)》43(5)(1978)1011-1013]描述?；蛘撸紫葘⒐柰榛┐济?75)氧化轉(zhuǎn)化成(76)，繼之以硼烷氧化成化合物(73)?；钚灾虚g體可采用本發(fā)明方法中所述的特定方法制備多個有用的中間體。在某些實施例中，中間體具有與其在制備對對映體孕酮方面的有用性分開且除此之外的活性。特定言之，在某些實施例中，活性中間化合物具有治療創(chuàng)傷性腦損傷的活性。在某些方面中，本發(fā)明提供一種用于治療創(chuàng)傷性腦損傷的方法，其包括向有需要的患者投與治療有效量的活性中間化合物。這些活性中間化合物包括(但不限于)在以上所示中間體中的每一者中，雙鍵可圍繞環(huán)系統(tǒng)遷移，特定言之遷移至第二環(huán)中。舉例而言，中間體b-3可表示為實例縮寫及前綴語由此項技術(shù)中具通常知識的有機化學(xué)家使用的縮寫的綜合列表呈現(xiàn)于acs風(fēng)格指南(第三版)或有機化學(xué)雜志(journaloforganicchemistry)的作者指南中。所述清單中含有的縮寫及由此項技術(shù)中具通常知識的有機化學(xué)家采用的所有縮寫以引用的方式并入本文中。出于本發(fā)明的目的，化學(xué)元素根據(jù)元素周期表(theperiodictableoftheelements)，cas版本，化學(xué)及物理學(xué)手冊(handbookofchemistryandphysics)，第67版，1986-87來鑒別，其中的每一者以全文引用的方式并入本文中。更特定言之，當(dāng)在整個本發(fā)明中使用以下縮寫時，其具有以下含義：atm大氣壓brs寬單峰buchi旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器labortechnikagc攝氏度cdcl3氘化三氯甲烷celite硅藻土過濾劑corp.d雙重峰dd雙重峰的雙重峰dibal-h氫化二異丁基鋁dcm二氯甲烷dmi二甲基-2-咪唑啶酮g公克h小時1hnmr質(zhì)子核磁共振hplc高效液相色譜j耦合常數(shù)(nmr光譜分析)l公升lah氫化鋰鋁lg離去基mmoll-1(摩爾濃度)m多重峰mhz兆赫茲min分鐘ml毫升pm微摩爾濃度mol摩爾濃度ms質(zhì)譜、質(zhì)譜分析m/z質(zhì)荷比n當(dāng)量l-1(當(dāng)量濃度)nbsn-溴代丁二酰亞胺nmon-甲基嗎啉-n-氧化物nmr核磁共振ph氫離子濃度的負(fù)對數(shù)q四重峰rbf圓底燒瓶r.t室溫rt滯留時間(hplc)rt室溫s單峰t三重峰the四氫呋喃tlc薄層色譜tscl甲苯磺酰氯以下實例中所報道的產(chǎn)率百分比是基于以最低摩爾量使用的起始組分?？諝饧皾衩粢后w與溶液經(jīng)由注射器或套管轉(zhuǎn)移，且經(jīng)由橡膠隔墊引入反應(yīng)容器中。商業(yè)級試劑及溶劑不經(jīng)進(jìn)一步提純即使用。術(shù)語“在減壓下濃縮”是指在約15mmhg下使用buchi旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器或等效設(shè)備。所有溫度均未經(jīng)校正以攝氏度(℃)報道。在預(yù)涂布玻璃底硅膠60af-254250pm板上進(jìn)行薄層色譜(thinlayerchromatography；tlc)。使用以下程序中的一或多者證實本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)。nmr當(dāng)如以下程序中指示時得到各化合物的nmr光譜。所得nmr光譜與所示結(jié)構(gòu)一致。在300mhzbrucker光譜儀上進(jìn)行常規(guī)一維nmr光譜分析。將樣品溶解于氘化溶劑中。化學(xué)位移在ppm標(biāo)度上記錄且關(guān)于適當(dāng)溶劑信號提及，如對于1h光譜而言，dmso-d6為2.49ppm，cd3cn為1.93ppm，cd3od為3.30ppm，cd2cl2為5.32ppm且cdcl3為7.26ppm。材料在執(zhí)行本發(fā)明化學(xué)方法時所用的設(shè)備包括(但不限于)以下各者：●低溫真空泵-鄭州長城實驗設(shè)備有限公司(zhengzhouchangchengexperimentalequipmentco.，ltd)(型號dlsb-10/20)●旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器-上海振杰實驗設(shè)備有限公司(shanghaizhenjieexperimentalequipmentco.，ltd)(型號re-52cs)●油泵-上海真空泵廠(shanghaivacuumpumpfactory)(型號2xz-4)●機械攪拌器-北京世紀(jì)予華實驗設(shè)備有限公司(beijingshijiyuhuaexperimentalequipmentco.，ltd)(型號dw-3-300)●真空干燥烘箱-北京聯(lián)合科儀實驗設(shè)備有限公司(beijinglianhekeyiexperimentalequipmentco.，ltd)(型號dzf-6020)●lcms-安捷倫(agilent)(型號1200-6100)●gcms-安捷倫(型號7890a-5975c)●gc-安捷倫(型號7890a)●對掌性hplc-島津(shimadzu)(型號lc-20at)●nmr-布魯克(bruker)(型號avanceb1300)●液相色譜-安捷倫(型號g1322a)●高溫油浴-sms(型號00508)●電子天平-lbtec(型號xs205du)除非另外規(guī)定，否則實驗處理中所用的化學(xué)品及溶劑購自西格瑪奧德里奇(sigmaaldrich)、飛世爾科技(fisherscientific)或emd，且所用溶劑為acs或hplc級，其中兩個等級可互換使用。關(guān)于tlc分析，使用二氧化硅60凝膠玻璃底tlc板。實例1-制備化合物3(流程1)將2-甲基-1，3-戊二酮(1g，1.2當(dāng)量)溶解于無水乙腈(40ml)中且添加5-芐氧基-戊-1-烯-2-酮(1.5g，1.0當(dāng)量)，隨后添加三乙胺(50mg，0.05當(dāng)量)。反應(yīng)物在25-30℃下攪拌12小時，之后將反應(yīng)物濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/5)上提純殘余物，得到呈無色油狀的化合物3(1.8g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.10(s，3h)，1.90(t，2h)，2.50(t，2h)，2.65(t，2h)，2.70-2.90(m，4h)，3/0(t，2h)，4.50(s，2h)，7.25-7.4(m，5h)。ms(m++1)303.1。實例2-制備化合物46(流程2)在氮氣下合并2-乙基-2-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷(120ml)與化合物45(20g，1.0當(dāng)量)。添加乙二醇(1.2ml，0.14當(dāng)量)，隨后添加對甲苯磺酸(390mg，0.02當(dāng)量)。反應(yīng)物在25-30℃下攪拌96小時直至化合物45的濃度如由hplc所量測小于20％。添加乙酸乙酯(100ml)且所得混合物用水(2×100ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/20)上提純殘余物，產(chǎn)生呈無色油狀的化合物46(8g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.20-1.35(m，7h)，1.60-1.70(m，1h)，1.90-2.00(m，1h)，2.10-2.80(m，6h)，3.85-4.05(m，4h)，5.85(s，1h)。ms(m++1)209.1。實例3-制備化合物47(流程2)將化合物46(8.0g，1.0當(dāng)量)添加至1，4-二惡烷(40ml)與水(34ml)的混合物中。隨后添加甲醛(3.1g，1.0當(dāng)量)，隨后添加1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(dabco，8.5g，1.0當(dāng)量)。反應(yīng)物在25-30℃下攪拌120小時，之后添加乙酸乙酯(100ml)?；旌衔镉盟?2×100ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(10％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，得到呈無色油狀的化合物47(5g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.25(m)，1.65(m，1h)，1.95(m，1h)，2.15-2.80(m)，3.90-4.05(m)，5.80(s，1h)。實例4-制備化合物47a(流程2)在氮氣氛圍下將化合物47(2g)溶解于無水四氫呋喃(thf，200ml)中。添加10％pd/c(200mg)且在氫氣氛圍下置放反應(yīng)物。反應(yīng)物在-10-0℃下攪拌40小時，之后通過過濾移除pd/c。濃縮濾液至干燥且在硅膠(10％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，得到呈無色油狀的化合物47a(1.6g)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：60.95-1.15(m，1h)，1.55-2.10(m)，2.50(t，2h)，2.40-2.50(m，1h)，2.70-2.80(q，1h)，3.15-3.30(m，1h)，3.65-3.90(m)，4.35(dd，1h)。ms(m++1)241.1。實例5-制備化合物9(流程2)將化合物47a(300mg，1.0當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(dcm，3ml)中且添加三乙胺(tea；3.0當(dāng)量)。將混合物在氮氣下冷卻至-10℃且逐滴添加甲磺酰氯(1.2當(dāng)量)。在10-20℃下繼續(xù)攪拌4小時，之后添加甲苯(3ml)，隨后添加1，8-二氮雜雙環(huán)十一-7-烯(dbu；3.0當(dāng)量)。在25-30℃下再繼續(xù)攪拌40小時，之后反應(yīng)物用水(2×3ml)洗滌、經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/10)上提純殘余物，得到呈無色油狀的化合物9(100mg)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：1.00(s，3h)，1.40-1.60(m，2h)，1.70-2.00(m，4h)，2.30-2.55(m，2h)，2.80(m，1h)，3.80-3.95(m，4h)，5.20(s，1h)，5.70(s，1h)。ms(m++1)223.1。實例6-制備化合物10(流程3)在氮氣下置放氫化鈉(426mg，1.2當(dāng)量)且冷卻至0℃。添加四氫呋喃(thf，10ml)，隨后添加六甲基磷酰胺(hmpa；326mg，0.25當(dāng)量)。添加乙酰乙酸乙酯(1ml，1.0當(dāng)量)且在0℃下攪拌混合物10分鐘。添加正丁基鋰(2.5m，3.6ml，1.1當(dāng)量)且在0℃下再攪拌混合物10分鐘。添加溴化2-(2-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-基)乙基(1.6g，1.0當(dāng)量)且在0℃下攪拌反應(yīng)物30分鐘。反應(yīng)物用草酸水溶液(10％，20ml)淬滅且用二氯甲烷(dcm，3×20ml)洗滌。另外用碳酸氫鈉飽和水溶液(30ml)及鹽水(30ml)洗滌有機相。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/30)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的化合物10(600mg)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：1.25(t，3h)，1.30(s，3h)，1.60-1.80(m，4h)，2.60(t，2h)，3.45(s，2h)，3.90-4.00(m，4h)，4.15-4.25(q，2h)。實例7-制備化合物11(流程4)將化合物9(500mg，1.0當(dāng)量)溶解于甲醇(15ml)中且添加化合物10(715mg，1.3當(dāng)量)。添加甲醇鈉(0.2當(dāng)量)且在30℃下攪拌混合物16小時。添加氫氧化鈉水溶液(5m，5.0當(dāng)量)且在30℃下再攪拌反應(yīng)物4小時。隨后利用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器移除甲醇。隨后添加水(5ml)且用甲苯(2×3ml)洗滌混合物。將水相冷卻至0℃且用鹽酸水溶液(6n)酸化至ph6。用乙酸乙酯洗滌混合物且將有機萃取物濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/10)上提純殘余物，得到呈無色油狀的化合物11(150mg)。ms(m++1)377.1。實例8-制備對映-19-去甲孕酮(流程5)(a)維蒂希反應(yīng)在氮氣下，將溴化乙基三苯基鏻(2.8g，3當(dāng)量)及第三丁醇鉀(1.0g，3.0當(dāng)量)合并于無水第三丁醇(10ml)中。將混合物加熱至75-80℃，持續(xù)20分鐘，之后添加化合物14(1.0g，1當(dāng)量)。在75-80℃下攪拌反應(yīng)物3小時，之后將其冷卻至20-25℃且用鹽水(20ml)淬滅。用乙酸乙酯(3×20ml)洗滌所得混合物。經(jīng)合并的有機萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(10％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，以90％產(chǎn)率得到所要維蒂希產(chǎn)物。ms(m++1)329.3(b)硼烷水合在氮氣氛圍下置放來自部分(a)的維蒂希產(chǎn)物(1.0g，1當(dāng)量)且將其溶解于無水四氫呋喃(thf，100ml)中。添加硼烷-thf復(fù)合物(1m，于thf中，3.0ml，1當(dāng)量)且在20-25℃下攪拌反應(yīng)物3小時。隨后將反應(yīng)物濃縮至干燥且添加氫氧化鈉溶液(10％，于水中，50ml)，隨后添加過氧化氫溶液(30％，于水中，0.5ml)。在20-25℃下再攪拌所得混合物1小時，之后添加水(100ml)。隨后用二氯甲烷(2×100ml)洗滌混合物且用鹽水(50ml)洗滌經(jīng)合并的有機萃取物。濃縮有機相，得到粗醇，其不經(jīng)提純即用于以下步驟中。(c)縮酮水解將來自步驟(b)的粗產(chǎn)物(2.0g，1當(dāng)量)溶解于丙酮(20ml)中且添加鹽酸(30％，于水中，20ml)。反應(yīng)物在20-25℃下攪拌30分鐘，之后將反應(yīng)物濃縮至干燥。將殘余物溶解于乙酸乙酯(50ml)中且添加水(30ml)。在劇烈攪拌5分鐘之后，分離各相且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×25ml)及鹽水(25ml)洗滌有機相。隨后將有機相濃縮至干燥且在硅膠(10％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，以45％總產(chǎn)率自維蒂希產(chǎn)物得到所要烯酮。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：65.70(s，1h)，4.15(d，1h)，3.40-3.50(m，1h)，2.40-2.45(m，1h)，2.10-2.35(m，5h)，1.70-1.85(m，4h)，1.50-1.60(m，2h)，1.40-1.50(m，1h)，1.25-1.35(m，1h)，1.15-1.25(m，2h)，0.90-1.15(m，7h)，1.85-1.95(m，1h)，0.65(s，3h)。ms(m++1)303.2。(d)氧化成對映-19-去甲孕酮在氮氣下，將乙酸鈉(1.20g，10當(dāng)量)、氯鉻酸吡錠(pcc，1.90g，4當(dāng)量)及來自步驟(c)的烯酮(0.5g，1當(dāng)量)與二氯甲烷(50ml)合并。在20-25℃下攪拌混合物3小時，之后對其進(jìn)行過濾。用二氯甲烷洗滌濾餅且將經(jīng)合并的濾液濃縮至干燥。在硅膠(30％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，以90％產(chǎn)率得到對映-19-去甲孕酮。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：65.70(s，1h)，2.55-2.60(t，1h)，2.40-2.50(m，1h)，2.10-2.35(m，5h)，2.05(s，3h)，1.95-2.05(m，1h)，1.70-1.90(m，2h)，1.10-1.70(m，9h)，0.90-1.10(m，1h)，0.75-0.90(m，1h)，0.60(s，3h)。ms(m++1)301.1。實例9-制備化合物48(流程6)如由batt等人(《歐洲有機化學(xué)雜志》，2011，6039-6055)所述來制備化合物48。實例10-制備化合物49(流程6)如由batt等人(《歐洲有機化學(xué)雜志》，2011，6039-6055)所述，使用氫化鋰鋁將化合物48(100g)還原至對應(yīng)的醇。在氮氣下，將所得二醇(1g，1.0當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(dcm，10ml)中。添加三乙胺(2.0當(dāng)量)且將所得混合物冷卻至0℃。緩慢地添加對甲苯磺酰氯(1.0當(dāng)量)且在0℃下攪拌反應(yīng)物30分鐘。用水(10ml)洗滌所得混合物，之后將所述混合物用無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/10)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的所要一級甲苯磺酸酯(500mg)。在氮氣下，將所得一級甲苯磺酸酯(100mg，1.0當(dāng)量)溶解于dcm(10ml)中。添加二異丙基乙胺(diea；1.2當(dāng)量)且將混合物冷卻至0℃。逐滴添加甲氧基甲基氯(1.0當(dāng)量)且自0-25℃攪拌反應(yīng)物2小時，之后用水(10ml)洗滌所述反應(yīng)物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/20)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的所要化合物49(60mg)。實例11-制備化合物24(流程9)將2-甲基-1，3-環(huán)戊二酮(3.0g，1.2當(dāng)量)與化合物23(3.1g，1.0當(dāng)量)及乙腈(acn，30ml)合并。添加三乙胺(tea，110mg，0.05當(dāng)量)且在25℃下攪拌反應(yīng)物4小時。隨后添加二氯甲烷(dcm，100ml)且用鹽酸水溶液(2×30ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(2×30ml)洗滌混合物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/30)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的化合物24(2.6g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.10(s，3h)，1.90(t，2h)，2.50(t，2h)，2.65(t，2h)，2.70-2.90(m，4h)，3.35(s，3h)，3.75(t，2h)，4.60(s，2h)。實例12-制備化合物52，即5-甲氧基甲氧基-戊-1-烯-3-醇(流程10)如由batt等人(《歐洲有機化學(xué)雜志》，2011，6039-6055)所述，使用氫化鋰鋁將化合物48(100g)還原至對應(yīng)的醇。在氮氣下，將所得二醇(13g，1當(dāng)量)添加至環(huán)己烷(26ml)、二氯甲烷(dcm，13ml)及二異丙基乙胺(diea，18g，1.1當(dāng)量)的混合物中。逐滴添加甲氧基甲基氯(1當(dāng)量)且在20℃下攪拌反應(yīng)物12小時。隨后添加dcm(100ml)且用鹽酸水溶液(2m，30ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(2×30ml)洗滌混合物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(10％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的主要mom醚(化合物52，4g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.75-1.95(m，2h)，3.35(s，3h)，3.65-3.80(m，2h)，4.30-4.35(m，1h)，4.65(s，2h)，5.10-5.15(m，1h)，5.25-5.30(m，1h)，5.85-5.95(m，1h)。實例13-制備化合物23，即5-甲氧基甲氧基-戊-1-烯-3-酮(流程10)在氮氣下，將化合物52(3.5g，1.0當(dāng)量)溶解于二甲亞砜(dmso；20ml)中。添加2-二氧碘基苯甲酸(ibx；9.8g，1.5當(dāng)量)且在20℃下攪拌反應(yīng)物12小時。添加dcm(100ml)且用亞硫酸鈉飽和水溶液(30ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(30ml)洗滌所得混合物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/30)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的所要化合物23(3.1g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：62.90(t，2h)，3.35(s，3h)，3.90(t，2h)，4.65(s，2h)，5.90(d，1h)，6.20-6.45(m，2h)。實例14-制備化合物55(流程10a)，即3-甲氧基甲基-丙-1-醇合并環(huán)己烷(180ml)、二氯甲烷(90ml)及二異丙基乙胺(34g，1.1當(dāng)量)且添加丙烷-1，3-二醇(20g，1.0當(dāng)量)。逐滴添加甲氧基甲基氯(20.9g，0.99當(dāng)量)，將內(nèi)部反應(yīng)溫度維持在20℃。在20℃下攪拌反應(yīng)物12小時，之后添加二氯甲烷(100ml)。混合物用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×30ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/5)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的化合物55(5g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.80-1.90(m，2h)，3.40(s，3h)，3.70(t，2h)，3.80(t，2h)，4.65(s，2h)。實例15-制備化合物56(流程10a)，即3-甲氧基甲基丙醛將化合物55(1g，1.0當(dāng)量)溶解于二甲亞砜(10ml)中且添加2-二氧碘基苯甲酸(ibx，3.5g，1.5當(dāng)量)。在20℃下攪拌反應(yīng)物12小時，之后用亞硫酸鈉飽和水溶液(20ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(20ml)洗滌所述反應(yīng)物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/20)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的化合物56(0.3g，60％純度)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.80-1.90(m，2h)，3.40(s，3h)，3.70(t，2h)，3.80(t，2h)，4.65(s，2h)。實例16-制備化合物2(流程11)化合物2由yamauchi等人(《日本化學(xué)學(xué)會公告》，2001，2513-2519)報道。用于制備化合物2的流程11工序改編自batt等人(《歐洲有機化學(xué)雜志》，2011，6039-6055)。實例17-制備化合物2(流程11a)在氮氣下，將丙二醇(500g)與芐基溴(100g，1.0當(dāng)量)合并。添加氫氧化鈉(28g，1.2當(dāng)量)且在20℃下攪拌混合物4小時。隨后添加乙酸乙酯(800ml)且用水(500ml)洗滌混合物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥，得到呈黃色油狀的所要粗制3-芐氧基丙醇(100g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.85-1.90(m，2h)，3.65(t，2h)，3.80(t，2h)，4.25(t，1h)，4.55(s，2h)，7.25-7.40(m，5h)。在氮氣下，將粗制3-芐氧基丙醇(100g，1.0當(dāng)量)與二甲亞砜(dmso，500ml)及四氫呋喃(thf，500ml)合并。添加2-二氧碘基苯甲酸(ibx；253g，1.5當(dāng)量)且在20℃下攪拌反應(yīng)物12小時。隨后添加乙酸乙酯(1500ml)且用亞硫酸鈉飽和水溶液(500ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(500ml)洗滌混合物。有機相用無水硫酸鈉洗滌，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/20)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的所要3-芐氧基丙醛(30g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：62.70(m，2h)，3.80(t，2h)，4.55(s，2h)，7.25-7.40(m，5h)，9.80(s，1h)在氮氣下，將3-芐氧基丙醛(30g，1.0當(dāng)量)溶解于thf中且冷卻至0℃。添加溴化乙烯基鎂(1m，220ml，1.2當(dāng)量)且在0℃下攪拌反應(yīng)物1小時。隨后添加氯化銨飽和水溶液(100ml)且用二氯甲烷(dcm，3×100ml)萃取混合物。有機萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥，得到粗制5-芐氧基-戊-1-烯-3-醇。1hnmr(300mhz，cdcl3)：61.75-1.99(m，2h)，3.60-3.75(m，2h)，4.30-4.40(m，1h)，4.50(s，2h)，4.70(s，1h)，5.10-5.15(m，1h)，5.25-5.30(m，1h)，5.80-5.95(m，1h)，7.25-7.40(m，5h)。在氮氣下，將此物質(zhì)溶解于dmso(120ml)及thf(120ml)中且添加ibx(65g，1.5當(dāng)量)。在20℃下攪拌混合物12小時，之后添加乙酸乙酯(500ml)。用亞硫酸鈉飽和水溶液(200ml)及碳酸氫鈉飽和水溶液(200ml)洗滌所得混合物。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠(乙酸乙酯/己烷1/20)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的所要5-芐氧基-戊-1-烯-3-酮(12.7g)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：62.95(t，2h)，3.80(t，2h)，4.55(s，3h)，5.85(d，1h)，6.20-6.40(m，2h)，7.20-7.40(m，5h)。實例18-制備化合物62(流程12)將化合物45(300g)溶解于二氯甲烷(2.4l)及乙醇(600ml)中。將混合物冷卻至-15℃且逐份添加硼氫化鈉(20.85g)，同時將反應(yīng)溫度維持在-15℃下。通過lcms監(jiān)測反應(yīng)直至化合物45的含量＜0.5％為止。用乙酸(170ml)淬滅反應(yīng)物且添加甲醇(300ml)。將所得混合物濃縮至其初始體積的25％且再添加甲醇(300ml)。在濃縮至其初始體積的25％之后，添加最后一部分甲醇(300ml)且將混合物濃縮至干燥。添加二氯甲烷(1.5l)且攪拌混合物20分鐘，之后對其進(jìn)行過濾且用二氯甲烷(600ml)洗滌濾餅。將經(jīng)合并的濾液濃縮至干燥，得到所要粗制醇(328g)。將此粗物質(zhì)溶解于二氯甲烷(3.28l)中且冷卻至-50℃。添加醚合三氟化硼(83.1ml)及磷酸(36.9ml)且在-50℃下攪拌混合物30分鐘。隨后在-45℃下添加異丁烯(2.3kg)。在-40℃下攪拌混合物1小時，之后將其升溫至室溫。在此時間段期間通過lcms監(jiān)測反應(yīng)直至醇含量＜10％為止。隨后在劇烈攪拌下添加氫氧化銨水溶液(13％，2.3l)。分離各層且用二氯甲烷(1.6l)洗滌水相。用氯化銨飽和水溶液(1.6l)及鹽水(1.6l)洗滌經(jīng)合并的有機相。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在硅膠上提純殘余物，得到呈淡黃色固體狀的所要化合物62(180g，44.3％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：65.75(s，1h)，3.60(t，1h)，2.65-2.75(m，1h)，2.45-2.55(m，1h)，2.30-2.40(m，2h)，1.95-2.05(m，2h)，1.65-1.85(m，2h)，1.20(s，9h)，1.10(s，3h)。實例19-制備化合物63(流程12)將化合物62(10g，1當(dāng)量)與1，4-二惡烷(50ml)及水(50ml)合并。添加甲醛(37％，于水中，3.7g，1當(dāng)量)，隨后添加1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(dabco，5.0g，1當(dāng)量)。在25-30℃下攪拌反應(yīng)物40小時且通過lcms監(jiān)測直至化合物63的含量＞60％為止。隨后用異丙醇/二氯甲烷(1/3，2×150ml)萃取反應(yīng)物。經(jīng)合并的有機相用無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(25％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，得到呈黃色油狀的化合物63(3.15g，27.6％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)：64.35(t，1h)，3.95-4.05(m，2h)，3.55-3.65(m，1h)，2.60-2.70(dd，1h)，2.50-2.60(m，1h)，2.45-2.50(m，1h)，2.20-2.25(dd，1h)，1.85-2.00(m，2h)，1.65-175(m，2h)，1.15(s，9h)，1.00(s，3h)。實例20-制備化合物63a(流程12a)在氮氣氛圍下，將化合物62(50公克)與碳酸甲基鎂(mmc，2m，于二氯甲烷中，400ml)合并。在氮氣鼓泡通過反應(yīng)物的情況下，將混合物加熱至115℃，持續(xù)30分鐘。在115℃下攪拌反應(yīng)物1小時，通過hplc監(jiān)測直至化合物63a的含量＞60％為止。隨后將反應(yīng)物冷卻至10℃且在快速攪拌下逐滴添加至濃鹽酸(220ml)與冰(700g)的混合物中。分離各層且用甲基第三丁基醚(mtbe，500ml，隨后250ml)洗滌水層(ph＝3)。向經(jīng)合并的有機層中添加水(250ml)且在添加10％碳酸鈉水溶液時，將ph調(diào)整至10。分離各層，且用水(250ml)洗滌有機相。在添加10％鹽酸水溶液時，將經(jīng)合并的萃取物水溶液的ph調(diào)整至3。在室溫下攪拌所得混合物30分鐘直至氣體逸出停止。所得固體通過過濾收集且用水(50ml)洗滌。收集固體且將其于石油醚(150ml)中制成漿料，持續(xù)3小時。所述固體通過過濾收集且用石油醚(50ml)洗滌。在真空烘箱中在30℃下干燥所得固體5小時，得到呈淡黃色固體狀的化合物63a(30.2g，50.4％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：612.6-13.6(br，1h)，3.65-3.70(dd，1h)，3.10-3.40(m，2h)，2.60-2.85(m，2h)，2.00-2.15(m，2h)，1.75-1.95(m，2h)，1.20(s，12h)。實例21-制備化合物65(流程12a)在氮氣氛圍下，將化合物63a(10g)溶解于無水四氫呋喃(100ml)中。添加無水10％鈀/碳(1g)且將混合物冷卻至5-10℃。通過依序抽成真空且用氮氣再填充，使經(jīng)冷卻的混合物脫氣三次。在第三次抽成真空之后，用氫氣填充反應(yīng)容器。在氫氣氛圍下在5-10℃下攪拌混合物1小時且通過lcms監(jiān)測直至反應(yīng)完成為止。在氫化完成后，添加甲醛水溶液(37％，20ml)，隨后添加哌啶(0.3g，0.10當(dāng)量)。在5-10℃下再攪拌混合物1小時且通過lcms監(jiān)測直至反應(yīng)完成為止。在反應(yīng)完成后，添加鹽水(25ml)及冰(25g)且繼續(xù)攪拌15分鐘。分離各層且用碳酸氫鈉飽和水溶液(50ml)及鹽水(50ml)洗滌有機相。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾且濃縮至干燥。在0℃下，將殘余物于甲醇(5ml)中制成漿料，持續(xù)10分鐘。過濾后，分離出呈白色固體狀的化合物65(5g，56.3％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：66.95(s，1h)，5.00(s，1h)，3.55-3.65(dd，1h)，2.45-2.60(m，2h)，2.35-2.45(m，1h)，2.05-2.15(m，1h)，1.95-2.05(m，1h)，1.55-1.80(m，4h)，1.15(s，9h)，0.80(s，3h)。實例22-制備化合物66(流程12)將化合物10(17.7g，1.2當(dāng)量)溶解于甲醇(75ml)中且添加甲醇鈉溶液(30％，于甲醇中，1.5g，0.2當(dāng)量)在氮氣下，將混合物冷卻至5-10℃。將化合物65(10g，1當(dāng)量)溶解于甲醇(25ml)中且將所得溶液經(jīng)2小時逐滴添加至化合物10溶液中，同時將反應(yīng)溫度維持在介于0-5℃之間。在20-25℃下攪拌反應(yīng)物隔夜，之后添加氫氧化鈉(5m，于水中，20ml)。再攪拌反應(yīng)物2小時，之后在真空下移除甲醇。添加水(100ml)及甲苯(20ml)且攪拌混合物15分鐘。分離各層且用乙酸將水相的ph調(diào)整至3。隨后用乙酸乙酯(100ml及50ml)洗滌水溶液混合物。將經(jīng)合并的有機萃取物濃縮至干燥且在真空中將殘余物加熱至80℃，持續(xù)3小時以完成脫羧。在硅膠(5％乙酸乙酯/己烷)上提純所得殘余物，得到呈淡黃色固體狀的所要化合物66(10g，60％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-de)：63.8-3.9(m，4h)，3.45(t，1h)，2.65-2.75(m，1h)，2.20-2.50(m，6h)，1.85-1.95(m，2h)，1.75-1.80(m，1h)，1.10-1.65(m，8h)，1.25(s，3h)，1.10(s，9h)，0.80(s，3h)。實例23-制備化合物67(對映-19-去甲睪固酮，流程12)將化合物66(10g，1當(dāng)量)溶解于乙醇(100ml)中且添加三乙胺(10ml)。添加無水10％鈀/碳(1.0g)。使混合物在真空中脫氣且用氮氣氛圍填充。此脫氣及饋入氮氣的方法總共重復(fù)3次。在第三次脫氣之后，向反應(yīng)物中饋入氫氣。將反應(yīng)物加熱至30℃，持續(xù)6小時。隨后添加鹽酸(6m，于水中，40ml)且將反應(yīng)物加熱至回流，再持續(xù)2小時。將反應(yīng)物冷卻至20-25℃且過濾。收集濾液且在真空下移除乙醇。用二氯甲烷(3×100ml)洗滌所得水溶液混合物。將經(jīng)合并的洗液濃縮至干燥且在硅膠(25％乙酸乙酯/己烷)上提純殘余物，得到呈淡黃色固體狀的所要化合物67(4.70g，66.8％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，cdcl3)：65.85(s，1h)，3.65-3.70(t，1h)，2.35-2.50(m，2h)，2.20-2.35(m，3h)，2.05-2.15(m，2h)，1.80-1.90(m，3h)，1.40-1.70(m，4h)，1.20-1.40(m，3h)，0.95-1.20(m，3h)，0.80-0.90(m，1h)，0.80(s，3h)。ms(m++1)275.1。實例24-制備化合物68(流程12)將67(100g，1當(dāng)量)與乙二醇(312.2g，13.8當(dāng)量)、對甲苯磺酸(1.25g，0.02當(dāng)量)及甲苯(3l)合并于配備有迪安-斯達(dá)克(dean-stark)捕獲總成的5l燒瓶中。在氮氣氛圍下，將混合物加熱至回流。維持回流3小時且在此時間段期間每一小時通過tlc(50％乙酸乙酯/石油醚)監(jiān)測反應(yīng)直至消耗掉所有起始物質(zhì)為止。隨后將反應(yīng)物冷卻至20-25℃且傾入碳酸氫鈉飽和水溶液(1.5l)中。分離各層且用二氯甲烷(2×1l)洗滌水相。經(jīng)合并的有機層用無水硫酸鈉干燥、過濾且濃縮至干燥。在硅膠(石油醚/乙酸乙酯100：1至20：1，含0.5％三乙胺)上提純粗產(chǎn)物，得到關(guān)于烯烴位置呈異構(gòu)體混合物形式的化合物68(96.5g，83.2％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso)：65.75(s，0.2h)，5.20-5.45(m，0.3h)，4.40-4.50(m，1h)，3.80-3.90(m，4h)，3.40-3.50(m，1h)，2.00-2.25(m，2h)，1.75-2.00(m，5h)，1.45-1.75(m，6h)，1.30-1.40(m，1h)，1.00-1.30(m，6h)，0.65(s，3h)。實例25-制備化合物14(流程12)在氮氣氛圍下，將化合物68(96.5g，1當(dāng)量)與乙腈(386ml)合并。添加2-二氧碘基苯甲酸(ibx，170g，2當(dāng)量)且將反應(yīng)物加熱至50-55℃，持續(xù)3小時。在此時間期間，每一小時通過tlc(50％乙酸乙酯/石油醚)監(jiān)測反應(yīng)直至消耗掉起始物質(zhì)為止。隨后將反應(yīng)物冷卻至20-25℃且通過過濾移除所得固體。用乙腈(2×193ml)洗滌濾餅且濃縮經(jīng)合并的濾液，得到粗產(chǎn)物。在硅膠(石油醚/乙酸乙酯100∶1至20∶1，含0.5％三乙胺)上提純粗產(chǎn)物，得到關(guān)于烯烴位置呈異構(gòu)體混合物形式的化合物14(86.5g，87.1％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso)：65.75(s，0.2h)，5.25-5.40(m，0.3h)，3.80-3.90(m，4h)，2.35-2a5(m，1h)，1.80-2.30(m，8h)，1.45-1.80(m，6h)，1.10-1.45(m，5h)，0.80(s，3h)。實例26-prv-002的腹膜內(nèi)投與減弱具有創(chuàng)傷性腦損傷的大鼠模型的運動及認(rèn)知缺陷此研究的目的為評估在創(chuàng)傷性腦損傷之后，用孕酮的對映異構(gòu)體類似物prv-002處理的大鼠的運動及認(rèn)知功能。使約六周齡的雄性史泊格多利大鼠(sprague-dawleyrat)接受中線皮質(zhì)撞擊以誘發(fā)創(chuàng)傷性腦損傷。大鼠在損傷后15分鐘、6小時及24小時接受媒劑溶液(45％環(huán)糊精)、prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg的腹膜內(nèi)注射。不經(jīng)歷撞擊或處理的假處理組用作對照。使用稱為神經(jīng)評分(neuroscore)的神經(jīng)行為組評估損傷后24小時及48小時的運動功能。使用莫氏水迷津(morriswatermaze；mwm)-記憶評分評定損傷后48小時的認(rèn)知功能。游動靠近莫氏水迷津的壁(趨觸性)所耗費的時間用于評估空間擷取缺陷及潛在tbi誘發(fā)的焦慮。在損傷之后經(jīng)媒劑處理的大鼠中觀察到顯著的運動及認(rèn)知缺陷。用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理受損傷的大鼠展示出在損傷后48小時，神經(jīng)評分-運動效能顯著改善。通過mwm-記憶評分及趨觸行為中所耗費的時間對認(rèn)知缺陷進(jìn)行量度，在用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的大鼠中，所述認(rèn)知缺陷還得到改善。這些發(fā)現(xiàn)為prv-002治療震蕩及創(chuàng)傷性腦損傷的潛在臨床使用提供支持。方法動物使用六周齡且體重介于225-275g之間的在損傷時的雄性史泊格多利大鼠(charlesriver，wilmington，ma)。將大鼠圈養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)塑料玻璃籠中且用0700燈維持12-12光周期。食物及水可隨意獲得。損傷在手術(shù)之前，經(jīng)由吸入5％異氟烷的初始誘導(dǎo)對大鼠進(jìn)行麻醉。對大鼠的頭皮進(jìn)行刮毛且用70％異丙醇溶液及10％必妥碘(betadine)溶液進(jìn)行清潔。在手術(shù)期間，在2.5％異氟烷下在速率為500-1000ml/min的氧氣下維持麻醉。將大鼠的頭部固定于立體定位裝置中且作出內(nèi)側(cè)切口且用大鋼夾沿著額骨向后拉頭皮。通過采用可移除式6mm圓形鉆頭的微型馬達(dá)鉆移除一塊6mm圓形頭骨。使用精細(xì)的彎曲的尖頭鑷子移除在內(nèi)側(cè)額葉皮層(medialfrontalcortex；mfc)上方的骨骼，保持硬腦膜完整。使用具有3mm金屬撞擊器的電控制損傷裝置產(chǎn)生創(chuàng)傷性腦損傷。將活塞置于硬腦膜上。自活塞至轉(zhuǎn)換器信號的電信號校正置放。活塞隨后用于產(chǎn)生深度3mm的挫傷。對創(chuàng)傷性腦損傷實施操作的研究員廣泛地使用此程序，且其代表最一致且可復(fù)制的損傷形式之一。在損傷之后，用4-0單絲縫合線封閉組織。將手術(shù)后的大鼠置放于經(jīng)加熱的恢復(fù)籠中且使其在恢復(fù)之后返回至其飼養(yǎng)籠(homecage)。處理將大鼠隨機地置放于以下四個處理組之一中：1)假損傷組(假處理組)、2)經(jīng)媒劑處理的損傷組(媒劑)、3)經(jīng)prv-0024mg/kg處理的損傷組(prv-0024mg/kg)或4)經(jīng)prv-00216mg/kg處理的損傷組。在損傷后15分鐘、6小時及24小時，大鼠接受媒劑溶液(含45％環(huán)糊精的無菌水)或prv-002溶液(將prv-002粉末溶解于45％環(huán)糊精溶液中)的腹膜內(nèi)注射。神經(jīng)評分使用稱為神經(jīng)評分的神經(jīng)行為組在損傷后24小時及48小時執(zhí)行運動功能的測試。使大鼠暴露于四個神經(jīng)行為測試系列且觀察異常的扭動行為。針對左前肢及右前肢在前肢伸展任務(wù)及前肢爪置放方面、左后肢及右后肢在后肢彎曲方面以及左側(cè)及右側(cè)的側(cè)面推進(jìn)測試，大鼠接受自+4未受損傷至(-)無功能的評分。若未觀察到扭動，則大鼠將評分為正常+1，且若存在扭動，則大鼠將評分為異常(-)。總的可能評分為33。測試準(zhǔn)則如下：前肢伸展通過大鼠的尾巴使其懸吊且測定朝向地面的前肢伸展。分別對左前肢及右前肢進(jìn)行評分?！?4正常：大鼠的兩個前肢均完全且同等程度地朝向地面伸展○+3略微受損：存在輕微的前肢彎曲○+2中度受損：存在中度前肢彎曲○+1重度受損：存在重度前肢彎曲○-無功能：前肢保持卷起靠近身體。側(cè)面推進(jìn)在自由行走期間，輕輕地向左側(cè)及右側(cè)推大鼠且測定針對側(cè)面推進(jìn)的抗性的減少量。對大鼠的左側(cè)及右側(cè)進(jìn)行評分?！?4正常：當(dāng)將大鼠推向各側(cè)面時，其應(yīng)該同等程度地進(jìn)行抵抗?！?3略微地受損：大鼠維持中度抗性○+2中度受損：大鼠維持輕微抗性○+1重度受損：當(dāng)推大鼠時，其不抵抗○-無功能：當(dāng)推大鼠時，其不抵抗且在其側(cè)面跌倒。前肢爪置放通過大鼠的尾巴使其懸吊且伴隨著輕微擺動，觀察大鼠用右爪及左爪抓握物體的能力。分別對左前肢及右前肢進(jìn)行評分?！?4正常：大鼠可用兩只爪強有力地抓握物體○+3略微地受損：大鼠微弱地抓握物體，且爪錯位○+2中度受損：大鼠虛弱且不能維持物體的抓握○+1重度受損：大鼠不能抓握物體○-無功能：大鼠不嘗試抓握物體后肢彎曲通過大鼠的尾巴固持大鼠且使其后肢抬離地面。測定右肢及左肢的后肢彎曲?！?4正常：大鼠具有正常的后肢伸展，無交叉或展開○+3略微地受損：后肢略微偏離正常伸展，后肢略微抱攏或展開○+2中度受損：后肢中度交叉或展開○+1重度受損：嚴(yán)重偏離正常伸展，伴隨著后肢嚴(yán)重交叉或展開○-無功能：后肢交叉或展開，無正常伸展或功能扭動當(dāng)將大鼠懸吊時，觀察是否存在扭動○+1正常：無扭動○-異常：扭動莫氏水迷津-記憶評分在損傷之前，訓(xùn)練大鼠尋找浸沒于圓形水池中的位置a中的隱藏的逃脫平臺。在損傷之后四十八小時，自所述池移除所述平臺且給予所述大鼠在所述池中的兩個60秒試驗。未受損傷的假處理組(正常)動物將記得平臺的位置且耗費其大部分時間游過區(qū)域a且在所述區(qū)域周圍游動。腦受損動物的記憶因tbi而受損，通常在所述池圍繞隨機地游動，未記住隱藏平臺的位置。量測在自逃脫平臺區(qū)域(分別為區(qū)域a、b及c)向外呈輻射狀的同心環(huán)中游動所耗費的時間量且用其計算記憶評分。使用以下方程式計算莫氏水迷津記憶評分：(區(qū)域a×20)+(區(qū)域b×5)+(區(qū)域c)＝記憶評分，其中區(qū)域a、b及c為大小遞增的環(huán)形空間，其涵蓋且圍繞先前容納逃脫平臺的區(qū)域。莫氏水迷津-趨觸性趨觸性為大鼠“靠壁(wallhugging)”或在貯槽邊緣周圍游動所耗費的時間量的量度。量測在趨觸性區(qū)域中行進(jìn)所耗費的時間且其表明受損傷的動物的高焦慮及空間擷取缺陷。統(tǒng)計分析使用單因子變異數(shù)分析(one-wayanalysisofvariance；anova)來評估m(xù)wm記憶評分及mwm趨觸性的群組差異。必要時，使用費雪保護(hù)的最小顯著差(fisher′sprotectedleastsignificantdifferences；plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。使用克魯斯凱-沃利斯檢驗(kruskall-wallistest)分析神經(jīng)評分資料，從而評估群組差異。必要時，使用曼-惠特尼u檢驗(mann-whitneyutest)執(zhí)行成對比較。結(jié)果神經(jīng)評分執(zhí)行克魯斯凱-沃利斯檢驗來評估在損傷后24小時及48小時的關(guān)于中值神經(jīng)評分的群組差異。這些檢驗未能揭示在損傷后24小時的顯著差異[x2(3，n＝32)＝4.218，p＝0.239](圖1)，但確實揭示了在損傷后48小時的顯著群組差異[x2(3，n＝32)＝16.066，p＝0.001](圖2)。使用曼-惠特尼u檢驗對24小時(表1)及48小時(表2)時間點執(zhí)行成對比較。用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的大鼠相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，在損傷后48小時具有顯著較佳的運動效能。圖1.如通過神經(jīng)評分所量測，在損傷后24小時未觀察到運動功能的顯著差異。表1.神經(jīng)評分成對比較-損傷后24小時圖2.用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的大鼠相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，在損傷后48小時具有顯著較佳的運動效能。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。表2.神經(jīng)評分成對比較-損傷后48小時媒劑prv-0024mg/kgprv-00216mg/kg假處理組u＝1.0，p＝0.004＊u＝19.5，p＝0.829u＝28.0，p＝0.452媒劑u＝0.0，p＝0.002＊u＝0.0，p＝0.001＊prv-0024mg/kgu＝35.5，p＝0.580*表示顯著差異，p＜0.05莫氏水迷津-記憶評分使用單因子變異數(shù)分析(anova)來評估m(xù)wm記憶評分的群組差異。使用費雪保護(hù)的最小顯著差(plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。分析揭示在mwm任務(wù)的試驗1[f(3，32)＝3.863，p0.019]及試驗2[f(3，32)＝3.580，p＝0.026]期間記憶評分的顯著群組差異。事后分析顯示，在mwm任務(wù)的兩個試驗期間，相比于假處理組、經(jīng)prv-0024mg/kg及prv-00216mg/kg處理的大鼠，經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠具有顯著較差的認(rèn)知功能(圖3)。圖3.在損傷后48小時的莫氏水迷津任務(wù)的試驗1(上圖)及試驗2(下圖)期間，用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理顯著減弱tbi相關(guān)的認(rèn)知缺陷。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。莫氏水迷津-在趨觸行為中所耗費的時間使用單因子變異數(shù)分析(anova)來評估在mwm任務(wù)期間在趨觸行為中所耗費的時間的群組差異。使用費雪保護(hù)的最小顯著差(plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。分析揭示在mwm任務(wù)的試驗1[f(3，32)＝3.329，p＝0.033]及試驗2[f(3，32)＝4.7665，p＝0.008]期間在趨觸行為中所耗費的時間的顯著群組差異。事后分析顯示，在mwm任務(wù)的兩個試驗期間，相比于假處理組、經(jīng)prv-0024mg/kg及prv-00216mg/kg處理的大鼠，經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠在趨觸行為中耗費顯著較多時間(圖4)。圖4.在損傷后48小時，在莫氏水迷津任務(wù)的試驗1(上圖)及試驗2(下圖)期間，相比于假處理組、經(jīng)prv-0024mg/kg處理或經(jīng)prv-00216mg/kg處理的大鼠，經(jīng)媒劑處理的大鼠在趨觸行為中耗費顯著較多時間。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。論述神經(jīng)評分、mwm-記憶評分及mwm-在趨觸行為中所耗費的時間均揭示在實驗性創(chuàng)傷性腦損傷之后，經(jīng)媒劑處理的大鼠的顯著運動及認(rèn)知缺陷。雖然在損傷后24小時未見到神經(jīng)評分的顯著群組差異，但經(jīng)prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的48h大鼠顯示出tbi誘發(fā)的運動功能缺陷的顯著減弱。如通過mwm-記憶評分所量測，在損傷后48小時，經(jīng)prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的大鼠顯示出tbi誘發(fā)的認(rèn)知缺陷改善。在水迷津任務(wù)期間，相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠，經(jīng)prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理的大鼠在趨觸性區(qū)域中耗費較少時間，表明空間擷取缺陷減小。在趨觸行為中所耗費的時間減少還可說明，在tbi之后用prv-0024mg/kg或prv-00216mg/kg處理可誘導(dǎo)抗焦慮作用。此研究結(jié)果揭示出prv-002在大鼠的tbi的皮質(zhì)撞擊模型中抵抗tbi誘發(fā)的運動及認(rèn)知缺陷方面的功效。這些發(fā)現(xiàn)聯(lián)合研究prv-002在減弱tbi的細(xì)胞培養(yǎng)模型中的神經(jīng)退化及死亡方面的作用的先前工作為此化合物治療人類的震蕩及tbi的用途提供支持。研究在實驗性腦損傷之后用媒劑溶液或prv-002處理的大鼠的腦中蛋白質(zhì)表現(xiàn)的改變的研究將有助于闡明此化合物借以發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機制。實例27-prv-002的鼻內(nèi)投與減弱具有創(chuàng)傷性腦損傷的大鼠模型的運動及認(rèn)知缺陷此研究的目的為評估在創(chuàng)傷性腦損傷之后，經(jīng)由鼻內(nèi)投與孕酮對映異構(gòu)體的類似物prv-002進(jìn)行處理的大鼠的運動及認(rèn)知功能。在治療研究開始之前，使用經(jīng)伊凡氏藍(lán)(evansblue)染料標(biāo)記的prv002執(zhí)行解剖評估以測定經(jīng)由微型霧化器對比手動吸液管使用鼻內(nèi)投藥的化合物的最佳鼻內(nèi)/腦內(nèi)滲透。事后評估確定了關(guān)于最大鼻粘膜滲透，微型霧化器優(yōu)于吸液管技術(shù)的明顯優(yōu)勢。使約六周齡的雄性史泊格多利大鼠接受中線皮質(zhì)撞擊以誘發(fā)創(chuàng)傷性腦損傷。大鼠在損傷后15分鐘、6小時及24小時經(jīng)由微型霧化器接受媒劑溶液(45％環(huán)糊精)、prv-0020.05mg/kg(n＝4)、prv-0020.01mg/kg(n＝11)、prv0021mg/kg(n＝4)或prv0024mg/kg(n＝3)的鼻內(nèi)投與。不經(jīng)歷撞擊或不接受處理的假處理組用作對照。使用稱為神經(jīng)評分的神經(jīng)行為組評估損傷后24小時及48小時的運動功能。使用莫氏水迷津(mwm)-記憶評分評定損傷后48小時的認(rèn)知功能。游動靠近莫氏水迷津的壁(趨觸性)所耗費的時間用于評估空間擷取缺陷及潛在tbi誘發(fā)的焦慮。在損傷之后經(jīng)媒劑處理的腦損傷大鼠中觀察到顯著的運動及認(rèn)知缺陷。經(jīng)鼻內(nèi)4mg/kgprv002處理的腦損傷大鼠顯示，在損傷/處理后48小時測試的認(rèn)知功能(創(chuàng)傷后記憶)顯著改善。在鼻內(nèi)接受prv002(4mg/kg)的腦受損動物中，在趨觸行為中所耗費的時間還顯著減少。在經(jīng)prv002(0.1mg/kg)或prv002(4mg/kg)處理的動物中，在損傷后24小時的創(chuàng)傷后運動缺陷顯著改善。截止損傷后48小時，當(dāng)相比于腦損傷經(jīng)媒劑處理的動物時，經(jīng)prv002(0.05mg/kg)、prv002(0.1mg/kg)或prv002(4mg/kg)處理的腦受損動物。這些發(fā)現(xiàn)為prv-002治療震蕩及創(chuàng)傷性腦損傷的潛在臨床使用提供支持。方法動物使用六周齡且在損傷時體重介于225-275g之間的雄性史泊格多利大鼠(charlesriver，wilmington，ma)。將大鼠圈養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)塑料玻璃籠中且用0700燈維持12-12光周期。食物及水可隨意獲得。創(chuàng)傷性腦損傷模型在手術(shù)之前，經(jīng)由吸入5％異氟烷的初始誘導(dǎo)對大鼠進(jìn)行麻醉。對大鼠的頭皮進(jìn)行刮毛且用70％異丙醇溶液及10％必妥碘溶液進(jìn)行清潔。在手術(shù)期間，在2.5％異氟烷下在速率為500-1000ml/min的氧氣下維持麻醉。將大鼠的頭部固定于立體定位裝置中且作出內(nèi)側(cè)切口且用大鋼夾沿著額骨向后拉頭皮。通過采用可移除式6mm圓形鉆頭的微型馬達(dá)鉆移除一塊6mm圓形頭骨。使用精細(xì)的彎曲的尖頭鑷子移除在內(nèi)側(cè)額葉皮層(mfc)上方的骨骼，保持硬腦膜完整。使用具有3mm金屬撞擊器的電控制損傷裝置產(chǎn)生創(chuàng)傷性腦損傷。將活塞置于硬腦膜上。自活塞至轉(zhuǎn)換器信號的電信號校正置放?；钊S后用于產(chǎn)生深度3mm的挫傷。此程序由對創(chuàng)傷性腦損傷進(jìn)行作業(yè)的研究員廣泛使用，且代表最一致且可復(fù)制的損傷形式之一。在損傷之后，用4-0單絲縫合線封閉組織。將手術(shù)后的大鼠置放于經(jīng)加熱的恢復(fù)籠中且使其在恢復(fù)之后返回至其飼養(yǎng)籠。處理將大鼠隨機地置放于以下四個處理組之一中：1)假損傷組(假處理組-無tbi的麻醉及手術(shù)切口)、2)腦損傷的經(jīng)媒劑處理的損傷組(媒劑)或tbi繼之以鼻內(nèi)(in)投與prv002(0.05mg/kg，n＝4)、prv002(0.1mg/kg，n＝11)、prv002(1mg/kg，n＝4)或prv002(4mg/kg，n＝3)。在損傷后15分鐘、6小時及24小時，使用微型霧化器使實驗個體接受媒劑溶液(含45％環(huán)糊精的無菌水)或prv-002溶液(將prv-002粉末溶解于45％環(huán)糊精溶液中)的鼻內(nèi)噴霧。神經(jīng)評分使用稱為神經(jīng)評分的神經(jīng)行為組在損傷后24小時及48小時執(zhí)行運動功能的測試。使大鼠暴露于四個神經(jīng)行為測試系列且觀察異常的扭動行為。針對左前肢及右前肢在前肢伸展任務(wù)及前肢爪置放方面、左后肢及右后肢在后肢彎曲方面以及左側(cè)及右側(cè)的側(cè)面推進(jìn)測試，大鼠接受自+4未受損傷至(-)無功能的評分。若未觀察到扭曲，則大鼠將評分為正常+1，且若存在扭動，則大鼠評分為異常(-)?？偟目赡茉u分為33。測試準(zhǔn)則如下：前肢伸展通過大鼠的尾巴使其懸吊且測定朝向地面的前肢伸展。分別對左前肢及右前肢進(jìn)行評分?！?4正常：大鼠的兩個前肢均完全且同等程度地朝向地面伸展○+3略微受損：存在輕微的前肢彎曲○+2中度受損：存在中度前肢彎曲○+1重度受損：存在重度前肢彎曲○-無功能：前肢保持卷起靠近身體。側(cè)面推進(jìn)在自由行走期間，輕輕地將大鼠推向左側(cè)及右側(cè)且測定針對側(cè)面推進(jìn)的抗性的減少量。對大鼠的左側(cè)及右側(cè)進(jìn)行評分?！?4正常：當(dāng)將大鼠推向各側(cè)面時，其應(yīng)該同等程度地進(jìn)行抵抗。○+3略微地受損：大鼠維持中度抗性○+2中度受損：大鼠維持輕微抗性○+1重度受損：當(dāng)推大鼠時，其不抵抗○-無功能：當(dāng)推大鼠時，其不抵抗且在其側(cè)面跌倒。前肢爪置放通過大鼠的尾巴使其懸吊且伴隨著輕微擺動，觀察大鼠用右爪及左爪抓握物體的能力。分別對左前肢及右前肢進(jìn)行評分。○0+4正常：大鼠可用兩只爪強有力地抓握物體○0+3略微地受損：大鼠微弱地抓握物體，且爪錯位○0+2中度受損：大鼠虛弱且不能維持物體的抓握○o+1重度受損：大鼠不能抓握物體○o-無功能：大鼠不嘗試抓握物體后肢彎曲通過大鼠的尾巴固持大鼠且使其后肢抬離地面。測定右肢及左肢的后肢彎曲?！?+4正常：大鼠具有正常的后肢伸展，無交叉或展開○o+3略微地受損：后肢略微偏離正常伸展，后肢略微抱攏或展開○o+2中度受損：后肢中度交叉或展開○0+1重度受損：嚴(yán)重偏離正常伸展，伴隨著后肢嚴(yán)重交叉或展開○-無功能：后肢交叉或展開，無正常伸展或功能扭動當(dāng)將大鼠懸吊時，觀察是否存在扭動○+1正常：無扭動○-異常：扭動認(rèn)知：莫氏水迷津-記憶評分趨觸性在損傷之前，訓(xùn)練大鼠尋找浸沒于圓形水池中的位置a中的隱藏的逃脫平臺。在損傷之后四十八小時，自所述池移除所述平臺且給予所述大鼠在所述池中的兩個60秒試驗。未受損傷的假處理組(正常)動物將記得平臺的位置且耗費其大部分時間游過區(qū)域a且在所述區(qū)域周圍游動。腦受損動物的記憶因tbi而受損，通常在所述池圍繞隨機地游動，未記住隱藏平臺的位置。量測在自逃脫平臺區(qū)域(分別為區(qū)域a、b及c)向外呈輻射狀的同心環(huán)中游動所耗費的時間量且用其計算記憶評分。使用以下方程式計算莫氏水迷津記憶評分：(區(qū)域a×20)(區(qū)域b×+區(qū)域c＝-記憶評分，其中區(qū)域a、b及c為大小遞增的環(huán)形空間，其涵蓋且圍繞先前容納逃脫平臺的區(qū)域。莫氏水迷津-趨觸性趨觸性為大鼠“靠壁”或在貯槽邊緣周圍游動所耗費的時間量的量度。量測在趨觸性區(qū)域中行進(jìn)所耗費的時間且其表明受損傷的動物的高焦慮及空間擷取缺陷。統(tǒng)計分析使用單因子變異數(shù)分析(anova)來評估m(xù)wm記憶評分及mwm趨觸性的群組差異。必要時，使用費雪保護(hù)的最小顯著差(plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。使用克魯斯凱-沃利斯檢驗分析神經(jīng)評分資料，從而評估群組差異。必要時，使用曼-惠特尼u檢驗執(zhí)行成對比較。結(jié)果使用吸液管進(jìn)行鼻內(nèi)投藥，在鼻粘膜中觀察不到伊凡氏藍(lán)染料。使用微型霧化器觀察到優(yōu)良的鼻內(nèi)滲透。認(rèn)知莫氏水迷津-記憶評分使用單因子變異數(shù)分析(anova)來評估m(xù)wm記憶評分的群組差異。使用費雪保護(hù)的最小顯著差(plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。分析揭示在mwm任務(wù)的試驗1[f(5，31)＝4.433，p＝0.005](圖1，上圖)期間，但不在試驗2[f(5，31)＝0.928，p＝0.479](圖1，下圖)期間，記憶評分的顯著群組差異。事后分析顯示，在試驗1期間，相比于經(jīng)prv-0024mg/kg處理的大鼠，所有群組具有顯著較低的記憶評分。圖1.在莫氏水迷津任務(wù)的試驗1(上圖)期間，相比于所有其它群組，經(jīng)prv-0024mg/kg處理的受損大鼠具有顯著較佳的認(rèn)知效能。在莫氏水迷津任務(wù)的試驗2(下圖)期間，未觀察到的認(rèn)知效能的顯著群組差異。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。莫氏水迷津-在趨觸行為中所耗費的時間使用單因子變異數(shù)分析(anova)來評估在mwm任務(wù)期間在趨觸行為中所耗費的時間的群組差異。使用費雪保護(hù)的最小顯著差(plsd)檢驗來執(zhí)行成對比較的事后分析。分析揭示在mwm任務(wù)的試驗1[f(5，31)＝1.857，p＝0.137](圖2，上圖)及試驗2[f(5，31)＝3.103，p＝0.025](圖2，下圖)期間，在趨觸行為中所耗費的時間的顯著群組差異。事后分析顯示，相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，假處理組及經(jīng)prv-0024mg/kg處理的大鼠在趨觸行為中耗費顯著較少時間。圖2.在莫氏水迷津任務(wù)的試驗1(上圖)期間，在趨觸行為中所耗費的時間方面未觀察到顯著群組差異。在莫氏水迷津任務(wù)的試驗2(下圖)期間，相比于經(jīng)媒劑處理的受損大鼠，未受損傷(假處理組)及經(jīng)prv-0024mg/kg處理的大鼠在趨觸行為中耗費顯著較少時間。另外，在試驗2期間，相比于假處理組大鼠，經(jīng)prv-0020.05mg/kg處理的大鼠在趨觸行為中耗費顯著較多時間。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。運動功能神經(jīng)評分執(zhí)行克魯斯凱-沃利斯檢驗來評估在損傷后24小時及48小時的關(guān)于中值神經(jīng)評分的群組差異。這些測試揭示在損傷后24小時[x2(3，n＝32)＝13.529，p＝0.019](圖3)及在損傷后48小時[x2(3，n＝32)＝18.153，p＝0.003](圖4)的顯著差異。使用曼-惠特尼u檢驗對24小時(表1)及48小時(表2)時間點執(zhí)行成對比較。在損傷后24小時，相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，經(jīng)prv-0020.1mg/kg或prv-0024mg/kg處理的大鼠具有顯著改善的運動功能。在損傷后24小時，所有prv-002處理組均具有并非顯著不同于假處理組大鼠的運動效能評分(表1)。在損傷后48小時，相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，假處理組大鼠及經(jīng)prv-0020.05mg/kg、prv-0020.1mg/kg或prv-0024mg/kg處理的大鼠具有顯著較佳的運動功能。在損傷后48小時，相比于假處理組大鼠，經(jīng)prv-0020.05mg/kg及prv-0021mg/kg處理的大鼠具有顯著較差的效能(表2)。神經(jīng)評分-損傷后24h圖3.在損傷后24小時，相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，經(jīng)prv-0020.1mg/kg或prv-0024mg/kg處理的大鼠具有顯著改善的運動功能。所有prv-002處理組均具有并非顯著不同于假處理組大鼠的運動效能評分。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。表1.神經(jīng)評分-損傷后24小時*表示顯著差異，p＜0.05神經(jīng)評分-損傷后48h圖4.在損傷后48小時，相比于經(jīng)媒劑處理的大鼠，假處理組大鼠及經(jīng)prv-0020.05mg/kg、prv-0020.1mg/kg或prv-0024mg/kg處理的大鼠具有顯著較佳的運動功能。在損傷后48小時，相比于假處理組大鼠，經(jīng)prv-0020.05mg/kg及prv-0021mg/kg處理的大鼠具有顯著較差的效能。*表示相比于經(jīng)媒劑處理的受損傷大鼠的顯著差異，p＜0.05。表2.神經(jīng)評分-損傷后48小時*表示顯著差異，p＜0.05論述神經(jīng)評分、mwm-記憶評分及mwm-在趨觸行為中所耗費的時間均揭示在實驗性創(chuàng)傷性腦損傷之后，腦受損的經(jīng)媒劑處理的大鼠的顯著運動及認(rèn)知缺陷。經(jīng)鼻內(nèi)4mg/kgprv002處理的腦受損大鼠顯示，在損傷/處理后48小時測試的認(rèn)知功能(創(chuàng)傷后記憶)顯著改善。在鼻內(nèi)接受prv002(4mg/kg)的腦受損動物中，在趨觸行為中所耗費的時間還顯著減少。在趨觸行為中所耗費的時間的減少量還可說明，在tbi之后用prv-002鼻內(nèi)處理可誘導(dǎo)抗焦慮作用。在經(jīng)prv002(0.1mg/kg)或prv002(4mg/kg)處理的動物中，在損傷后24小時的創(chuàng)傷后運動缺陷顯著改善。截止損傷后48小時，當(dāng)相比于腦受損的經(jīng)媒劑處理的動物時，腦受損的經(jīng)prv002(0.05mg/kg)、prv002(0.1mg/kg)或prv002(4mg/kg)處理的動物顯示顯著改善的運動功能。此研究結(jié)果揭示出prv-002在大鼠的tbi的皮質(zhì)撞擊模型中抵抗tbi誘發(fā)的運動及認(rèn)知缺陷方面的功效。這些觀察結(jié)果聯(lián)合顯示在全身性(腹膜內(nèi))投與prv002之后認(rèn)知及運動功能改善的先前研究以及研究prv-002在減弱tbi的細(xì)胞培養(yǎng)模型中的神經(jīng)退化及死亡方面的作用的研究為此化合物治療人類的震蕩及tbi的用途提供支持。研究在實驗性腦損傷之后用媒劑溶液或prv-002處理的大鼠的腦中蛋白質(zhì)表現(xiàn)的改變的研究聯(lián)合mri研究將有助于闡明此化合物借以在tbi之后在受損傷的腦中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機制。實例28根據(jù)實例26及27使用的對映-19-去甲孕酮(prv-002)溶液的實例.*-在室溫下o/n之后未觀察到沉淀。prv-002于35.8％2-羥丙基-6-環(huán)糊精中的表觀溶解度是約23mg/ml。通過向約1ml35.8％2-羥丙基-p-環(huán)糊精中添加約30mgprv-001化合物制備prv-002溶液。在混合約60分鐘之后，溶液為混濁的。隨后向約1mlprv-002-環(huán)糊精混合物中添加約0.1ml約35.8％2-羥丙基-p-環(huán)糊精。在混合約120分鐘之后，溶液為混濁的。向約1.1mlprv-002-環(huán)糊精混合物中再添加0.1ml約35.8％2-羥丙基-p-環(huán)糊精且保持混合隔夜(o/n)。次日，所得溶液明顯較澄清，但仍然混濁。隨后向約1.2mlprv-002-環(huán)糊精混合物中再添加約0.1ml約35.8％2-羥丙基-p-環(huán)糊精。約35.8％2-羥丙基-p-環(huán)糊精的另一約0.3ml(0.1+0.1+0.1)等分試樣的添加僅略微地改善prv-002溶液的澄清度。相信，prv-002為約23mg/ml溶液且輕微濁度是某種假象。參考文獻(xiàn)清單1.stein等人的美國公開第us2005/0187188號，其于2005年8月25日公開且名稱為“治療創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的方法(methodsforthetreatmentofatraumaticcentralnervoussysteminjury)”2.hoffman等人的美國公開第us2007/0078117號，其于2007年4月5日公開且名稱為“治療創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的方法”3.hoffman等人的美國公開第us2008/0318914號，其于2008年12月25日公開且名稱為“治療創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的方法”4.stein等人的美國公開第us2009/0221544號，其于2009年9月3日公開且名稱為“通過遞減投藥方案來治療創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的方法(methodsforthetreatmentofatraumaticcentralnervoussysteminjuryviaataperedadministrationprotocol)”5.hoffman等人的美國公開第us2009/0325920號，其于2009年12月31日公開且名稱為“治療創(chuàng)傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的方法”6.stein等人的美國公開第us2011/0306579號，其于2011年12月15日公開且名稱為“使用神經(jīng)保護(hù)性類固醇和維生素d的神經(jīng)保護(hù)方法(methodsofneuroprotectionusingneuroprotectivesteroidsandavitamind)”7.r.j.auchus等人，“孕酮的對映異構(gòu)體(對映體-孕酮)是人類細(xì)胞色素p450c17及p450c21的競爭性抑制劑(theenantiomerofprogesterone(ent-progesterone)i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