本發(fā)明涉及人乳低聚糖(“hmo”)的混合物、制備該混合物的方法以及該混合物在人健康中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：hmo已經(jīng)成為近年來極為關(guān)注的課題，因?yàn)槠湓谌擞袡C(jī)體中發(fā)生的許多生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。哺乳動(dòng)物乳汁包含這些復(fù)合低聚糖中的至少130種(urashima等人，milkoligosaccharides，novabiomedicalbooks，newyork，2011，isbn：978-1-61122-831-1)。此前，hmo的唯一來源是主要包含水、以及55-70g/l乳糖、24-59g/l脂質(zhì)、約13g/l蛋白質(zhì)、5-15g/lhmo和約1.5g/l礦物質(zhì)的哺乳動(dòng)物乳汁。然而，在過去十年中，開發(fā)用于合成這些低聚糖的方法的努力顯著增加，因?yàn)槠湓谠S多人生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。在這方面，已經(jīng)開發(fā)出通過微生物發(fā)酵、酶法、化學(xué)合成或這些技術(shù)的組合來制備hmo的方法。例如，通過化學(xué)方法，可如wo2011/100980和wo2013/044928中所述制備lnnt，可如wo2012/155916和wo2013/044928中所述合成lnt，可如wo2013/091660中所述制備lnt和lnnt的混合物，可如wo2010/115934和wo2010/115935中所述制備2’-fl，可如wo2013/139344中所述制備3-fl，且可如wo2010/100979中所述制備6’-sl及其鹽。作為生物技術(shù)方法的實(shí)例，wo01/04341和wo2007/101862描述了如何使用基因改造的大腸桿菌(e.coli)制備任選由巖藻糖或唾液酸取代的核心人乳低聚糖。wo2012/158517和wo2013/154725描述了包含3-fl、2’-fl和dfl的益生元組合物并且wo2012/112777的描述了在基因改造的大腸桿菌中制備的3-fl、2’-fl、dfl和乳糖的混合物。作為酶法的一個(gè)實(shí)例，可如ep-a-577580中所述制備唾液酸化低聚糖。還已經(jīng)致力于開發(fā)用于酶合成hmo低聚糖的混合物，而不必如wo2012/156897和wo2012/156898中所述合成混合物的所有低聚糖組分的方法。這些方法已經(jīng)提供了包含多種不同低聚糖的反應(yīng)混合物。然而，仍在尋求更好的用于合成hmo的混合物的方法。有證據(jù)表明，人消化道中稱為微生物組(microbiome)的微生物的定居群落在健康和疾病中起著重要作用。當(dāng)微生物組的正常組成失去平衡時(shí)，人宿主可能會(huì)遭受后果。最近的研究涉及到例如癌癥、肥胖、炎性腸病、銀屑病、哮喘、以及甚至可能是自閉癥的多種疾病中的微生物組的失衡。據(jù)信hmo積極地調(diào)節(jié)微生物組，并且將它們用于此目的越來越感興趣。然而，hmo的顯著多樣性，加上缺乏可得性，已經(jīng)阻礙對(duì)各個(gè)hmo的特定功能的研究。明確需要特定的hmo或hmo的組合從而以期望的方式調(diào)節(jié)微生物組，以便解決特定的人健康問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一方面涉及一種hmo的混合物，其基本上由以下組成：-組分a，其為3-fl或dfl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，以及-組分d，其：當(dāng)組分a為3-fl時(shí)為乳糖，或當(dāng)組分a為dfl時(shí)為2’-fl，其條件是如果組分b為2’-fl，則組分a為3-fl。優(yōu)選地，在第一方面的hmo混合物中，組分a為dfl。本發(fā)明的第二方面涉及一種hmo的混合物，其基本上由以下組成：-3-fl，-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，以及-組分f，其當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i。本發(fā)明的第三方面涉及一種用于制備根據(jù)第一方面的hmo的混合物的方法，其通過在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使組分a和組分b進(jìn)行反應(yīng)以制備包含組分a、b、c和d的反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明的第四方面涉及一種用于獲得hmo的混合物的方法，該hmo的混合物基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其當(dāng)組分c為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分c為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分c為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分c為2’-fl時(shí)為dfl，優(yōu)選第二方面的混合物，該方法包括以下步驟：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使3-fl和組分b進(jìn)行反應(yīng)，以制備包含3-fl、乳糖和組分b和c的反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。本發(fā)明的第五方面涉及一種用于治療細(xì)菌感染的抗感染組合物。該組合物包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl，或者-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者該組合物基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，以及-乳糖。這些抗感染組合物中的每一種都包含多種具有新的性質(zhì)和生物活性組合的不同hmo。具體來說，各種組合物可以增加人微生物組中的雙歧桿菌(bifidobacterium)豐度(abundance)和barnesiella豐度。優(yōu)選地，各種組合物可以減少人微生物組中的厚壁菌(firmicutes)豐度，特別是梭狀芽孢桿菌(clostridia)。各種組合物也可用于治療和/或降低人廣泛范圍的細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明的第六方面涉及一種調(diào)節(jié)人微生物組以增加雙歧桿菌豐度和barnesiella豐度的方法，優(yōu)選通過減少厚壁菌豐度，特別是梭狀芽孢桿菌。本發(fā)明的第七方面涉及一種預(yù)防或治療人細(xì)菌感染的方法，特別是抗生素耐藥性細(xì)菌感染。第六和第七方面的方法各自包括向人施用：i)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者ii)一種組合物，其基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；以及-乳糖；或者iii)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-巖藻糖基化組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。具體實(shí)施方式根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)令人意外地發(fā)現(xiàn)，hmo的混合物可以提供用于通過微生物組的特定調(diào)節(jié)來治療細(xì)菌感染的抗感染組合物。該混合物增加微生物組的雙歧桿菌豐度和barnesiella豐度。該混合物還減少微生物組的厚壁菌豐度；特別是梭狀芽孢桿菌。在其微生物組中具有增加的雙歧桿菌和barnesiella豐度的人對(duì)廣泛范圍的感染具有更強(qiáng)的抵抗力，并且從這些感染(包括抗生素耐藥性感染)中恢復(fù)得更快。據(jù)信這種改善的抵抗力是由于微生物組的變化。歸因于這種混合物的微生物中厚壁菌尤其是梭狀芽孢桿菌的減少提供了額外的健康益處。本發(fā)明的第一方面第一方面為一種hmo的混合物，其基本上由以下組成：-組分a，其為3-fl或dfl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，以及-組分d，其：當(dāng)組分a為3-fl時(shí)為乳糖，或當(dāng)組分a為dfl時(shí)為2’-fl，其條件是如果組分b為2’-fl，則組分a為3-fl。在該第一方面的混合物的優(yōu)選實(shí)施方式中，組分a為3-fl。更優(yōu)選(3-fl+組分b)相對(duì)于組分c的摩爾比為0.8-9.50，并且乳糖與組分c的摩爾比為約1。甚至更優(yōu)選的是，3-fl與組分b的摩爾比為0.07-7.7。特別是在基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的混合物中，3-fl與2’-fl的摩爾比為0.05-7.7。在該第一方面的混合物的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，組分a為3-fl，并且組分b為lnt或lnnt。優(yōu)選地，3-fl與組分c的摩爾比和組分b與組分c的摩爾比中之一不大于2。根據(jù)該第一方面，特別優(yōu)選的是：i)基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo的混合物，并且其中：-(3-fl+lnt)相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-ii的摩爾比和lnt與lnfp-ii的摩爾比中之一不大于2；和ii)基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo的混合物，并且其中：-(3-fl+lnnt)相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-iii的摩爾比和lnnt與lnfp-iii的摩爾比中之一不大于2。在第一方面的混合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，組分a為3-fl，并且組分b為lnfp-i或2’-fl。優(yōu)選地，3-fl與組分c的摩爾比和組分b與組分c的摩爾比中之一不大于2，且/或3-fl與組分b的摩爾比為0.07-7.7。特別優(yōu)選的是基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo的混合物。優(yōu)選地，在該hmo混合物中：-(3-fl+lnfp-i)相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為約1；并且更優(yōu)選在該混合物中：-3-fl與lndfh-i的摩爾比和lnfp-i與lndfh-i的摩爾比中之一不大于2。同樣根據(jù)該第一方面，特別優(yōu)選的是基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo的混合物。優(yōu)選地，在該混合物中：-(3-fl+2’-fl)相對(duì)于dfl的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于dfl的摩爾比為約1。更優(yōu)選地，該混合物中3-fl與2’-fl的摩爾比為0.05-7.7或0.07-7.7。還更優(yōu)選地，3-fl與dfl的摩爾比或2’-fl與dfl的摩爾比不大于2。在第一方面的混合物的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，組分a為dfl。優(yōu)選地，組分c相對(duì)于(dfl+組分b)的摩爾比為至少1：10，優(yōu)選為至少1：7，更優(yōu)選為至少1：5，甚至更優(yōu)選為至少1：3。還優(yōu)選地，dfl相對(duì)于組分b的摩爾比為0.17-6，優(yōu)選為0.25-4，更優(yōu)選為約1。該第一方面的混合物可以基本上由2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)nfp-ii相對(duì)于(dfl+lnt)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中dfl相對(duì)于lnt的摩爾比為0.17-6，優(yōu)選為0.25-4，更優(yōu)選為約1。還優(yōu)選地，該混合物中2’-fl相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1。第一方面的混合物也可以基本上由2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)nfp-iii相對(duì)于(dfl+lnnt)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中dfl相對(duì)于lnnt的摩爾比為0.17-6，優(yōu)選為0.25-4，更優(yōu)選為約1。還優(yōu)選地，該混合物中2’-fl相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1。第一方面的混合物也可以基本上由2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)ndfh-i相對(duì)于(dfl+lnfp-i)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中dfl相對(duì)于lnfp-i的摩爾比為0.17-6，優(yōu)選為0.25-4，更優(yōu)選為約1。還優(yōu)選地，該混合物中2’-fl相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為約1。本發(fā)明的第二方面第二方面為一種hmo的混合物，其基本上由以下組成：-3-fl，-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，以及-組分f，其當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i。優(yōu)選地，組分f相對(duì)于(3-fl+組分e)的摩爾比為至少1：10，優(yōu)選為至少1：7，更優(yōu)選為至少1：5，甚至更優(yōu)選為至少1：3，且/或3-fl相對(duì)于組分e的摩爾比為0.05-21，優(yōu)選為0.13-7.7，更優(yōu)選為約1。第二方面的混合物可以基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)nfp-ii相對(duì)于(3-fl+lnt)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中3-fl相對(duì)于lnt的摩爾比為0.05-21，優(yōu)選為0.13-7.7，更優(yōu)選為約1。第二方面的混合物也可以基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)nfp-iii相對(duì)于(3-fl+lnnt)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中3-fl相對(duì)于lnnt的摩爾比為0.05-21，優(yōu)選為0.13-7.7，更優(yōu)選為約1。第二方面的混合物也可以基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成。優(yōu)選該hmo混合物中l(wèi)ndfh-i相對(duì)于(3-fl+lnfp-i)的摩爾比為至少1：10，更優(yōu)選為至少1：7，甚至更優(yōu)選為至少1：5，特別是1：3。還優(yōu)選該hmo混合物中3-fl相對(duì)于lnfp-i的摩爾比為0.05-21，優(yōu)選為0.13-7.7，更優(yōu)選為約1。本發(fā)明的第三方面第三方面為用于獲得包括其優(yōu)選的和更優(yōu)選的實(shí)施方式的本發(fā)明的第一方面的混合物的方法，包括以下步驟：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使組分a和組分b進(jìn)行反應(yīng)，以制備包含組分a、b、c和d的反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶?？梢砸猿Ｒ?guī)方式除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，例如通過使反應(yīng)混合物變性，然后離心或超濾。在進(jìn)行本發(fā)明第三方面的方法中，組分a供體、組分b受體、α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶、水性溶劑和孵育緩沖液(例如50mmna3po4或100mmkhpo4)的具體相對(duì)濃度不是關(guān)鍵的。在這方面，該方法可以適當(dāng)?shù)卦谑覝?例如15-50℃、優(yōu)選20-37℃)下在ph為6-8、優(yōu)選6.5-7下進(jìn)行15分鐘至24小時(shí)。以dfl為組分a進(jìn)行的第三方面的方法該方法包括：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使作為供體的dfl和作為受體的組分b以1：5至5：1、優(yōu)選為1：3至3：1、更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于dfl和組分b的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約60％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少30％。本發(fā)明的hmo混合物可以通過這種方法通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理dfl和lnt以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使dfl和lnt以優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、再甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于dfl與lnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約60％、優(yōu)選為至少15％、更優(yōu)選為至少20％、甚至更優(yōu)選為至少25％、還更優(yōu)選為至少30％。然后將所制備的包含lnfp-ii、2’-fl、未反應(yīng)的dfl、lnt和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物進(jìn)行常規(guī)純化步驟以除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過變性然后離心或超濾來除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，以制備基本上由dfl、lnt、lnfp-ii和2’-fl組成的混合物。在以“當(dāng)…進(jìn)行[...]方法時(shí)”開始的以下語句中，表述“可以制備”等同于表述“獲得”。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20～50％進(jìn)行本發(fā)明的方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-13并且dfl與lnt的摩爾比為0.33-6的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-8并且dfl與lnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-12并且dfl與lnt的摩爾比為0.2-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-8并且dfl與lnt的摩爾比為0.33-3的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-4.67并且dfl與lnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-18并且dfl與lnt的摩爾比為0.23-4.33的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-13并且dfl與lnt的摩爾比為0.38-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-8并且dfl與lnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnt的摩爾比為2.5-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-13并且dfl與lnt的摩爾比為1-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-13并且dfl與lnt的摩爾比為0.38-1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnt的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnt的摩爾比為0.2-0.41的hmo混合物。本發(fā)明的hmo混合物也可以通過這種方法通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理dfl供體和lnnt以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使dfl和lnnt以優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、再甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于dfl與lnnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約60％、優(yōu)選為至少15％、更優(yōu)選為至少20％、甚至更優(yōu)選為至少25％、還更優(yōu)選為至少30％。然后將所制備的包含lnfp-iii、2’-fl、未反應(yīng)的dfl、lnnt和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物進(jìn)行常規(guī)純化步驟以除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過變性，然后離心或超濾來除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，以制備基本上由dfl、lnnt、lnfp-iii和2’-fl組成的混合物。在以“當(dāng)…進(jìn)行[...]方法時(shí)”開始的以下語句中，表述“可以制備”等同于表述“獲得”。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-50％進(jìn)行本發(fā)明的方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-13并且dfl與lnnt的摩爾比為0.33-6的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-8并且dfl與lnnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-12并且dfl與lnnt的摩爾比為0.2-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii摩爾比為2-8并且dfl與lnnt的摩爾比為0.33-3的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-4.67并且dfl與lnnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-18并且dfl與lnnt的摩爾比為0.23-4.33的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-13并且dfl與lnnt的摩爾比為0.38-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-8并且dfl與lnnt的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnnt的摩爾比為2.5-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-13并且dfl與lnnt的摩爾比為1-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-13并且dfl與lnnt的摩爾比為0.38-1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnnt的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnnt的摩爾比為0.2-0.41的hmo混合物。本發(fā)明的hmo混合物也可以通過這種方法通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理dfl和lnfp-i以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使dfl和lnfp-i以優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于dfl與lnfp-i的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約60％、優(yōu)選為至少15％、更優(yōu)選為至少20％、甚至更優(yōu)選為至少25％、還更優(yōu)選為至少30％。然后將所制備的包含lndfh-i、2’-fl、未反應(yīng)的dfl、lnfp-i和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物進(jìn)行常規(guī)純化步驟以除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過變性，然后離心或超濾來除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，以制備基本上由dfl、lnfp-i、lndfh-i和2’-fl組成的混合物。在以“當(dāng)…進(jìn)行[...]方法時(shí)”開始的以下語句中，表述“可以制備”等同于表述“獲得”。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-50％進(jìn)行本發(fā)明的方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-13并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.33-6的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-8并且dfl與lnfp-i的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-12并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.2-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-8并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.33-3的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-4.67并且dfl與lnfp-i的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-18并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.23-4.33的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-13并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.38-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-8并且dfl與lnfp-i的摩爾比為1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnfp-i的摩爾比為2.5-5的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-13并且dfl與lnfp-i的摩爾比為1-2.67的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為20-40％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-13并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.38-1的hmo混合物。當(dāng)以dfl與lnfp-i的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為30-50％進(jìn)行該方法時(shí)，可以制備(dfl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為4-11.3并且dfl與lnfp-i的摩爾比為0.2-0.41的hmo混合物。以3-fl作為組分a進(jìn)行的第三方面的方法另外可選地，第三方面的方法可以在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，以3-fl作為供體且組分b作為受體以1：5至5：1、優(yōu)選為1：3至3：1、更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比來進(jìn)行，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl和組分b的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約80％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。然后將所制備的反應(yīng)混合物進(jìn)行常規(guī)純化步驟以除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過變性，然后離心或超濾來除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。在第三方面的另外可選方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和lnfp-i或2’-fl以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使3-fl和lnfp-i或2’-fl以1：3至3：1、優(yōu)選為1：2至2：1、更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與lnfp-i或2’-fl的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，處理摩爾比優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還甚至更優(yōu)選為1：1的3-fl和lnfp-i來容易地獲得，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與lnfp-i的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，處理摩爾比優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還甚至更優(yōu)選為1：1的3-fl和2’-fl來容易地獲得，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與2’-fl的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約70％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少35％、甚至更優(yōu)選為至少40％、還更優(yōu)選為至少50％。在第三方面的另外可選方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和lnt或lnnt以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使3-fl和lnt或lnnt以1：3至3：1、優(yōu)選為1：2至2：1、更優(yōu)選為1：1的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與lnt或lnnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，處理摩爾比優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的3-fl和lnt來容易地獲得，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與lnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％，該hmo混合物基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物，并且其中：-(3-fl+lnt)相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-ii的摩爾比和lnt與lnfp-ii的摩爾比中之一不大于2。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式中，hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶，處理摩爾比優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的3-fl和lnnt來獲得，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl與lnnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％，該hmo混合物基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成，并且其中：-(3-fl+lnnt)相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-iii的摩爾比和lnnt與lnfp-iii的摩爾比中之一不大于2。本發(fā)明的第四方面第四方面為一種用于獲得hmo的混合物的方法，所述hmo的混合物基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，優(yōu)選為第二方面的混合物，包括其優(yōu)選的和更優(yōu)選的實(shí)施方式，所述方法包括以下步驟：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使作為供體的3-fl和作為受體的組分b進(jìn)行反應(yīng)以制備反應(yīng)混合物，然后從反應(yīng)混合物中除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過變性，然后離心或超濾來除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。例如可以通過級(jí)聯(lián)超濾和/或納濾將乳糖從3-fl、組分b和組分c中分離，或可以首先用乳糖酶處理乳糖以將其降解成葡萄糖和半乳糖，然后可以將它們通過超濾和/或納濾從3-fl、組分b和組分c中分離。在進(jìn)行本發(fā)明第四方面的方法中，3-fl供體、組分b受體、α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶、水性溶劑和孵育緩沖液(例如50mmna3po4或100mmkhpo4)的具體相對(duì)濃度并不是關(guān)鍵的。在這方面，該方法可以適當(dāng)?shù)卦谑覝?例如15-50℃、優(yōu)選20-37℃)下在ph為6-8、優(yōu)選6.5-7下進(jìn)行15分鐘至24小時(shí)。該方法優(yōu)選包括以下步驟：在α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的存在下，使3-fl和組分b以1：5至5：1、優(yōu)選為1：3至3：1、更優(yōu)選為1：2至2：1、甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl和組分b的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約80％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。在第四方面的方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和lnt以制備反應(yīng)混合物，然后如上所述從反應(yīng)混合物中除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使3-fl和lnt以優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl和lnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約70％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少35％、甚至更優(yōu)選為至少40％、還更優(yōu)選為至少50％。然后可以如上所述從所制備的包含lnfp-ii、乳糖、未反應(yīng)的3-fl、lnt和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶和乳糖。在第四方面的方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和lnnt以制備反應(yīng)混合物，然后如上所述從反應(yīng)混合物中除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使3-fl和lnnt以1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl和lnnt的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約70％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少35％、甚至更優(yōu)選為至少40％、還更優(yōu)選為至少50％。然后如上所述可以從所制備的包含lnfp-iii、乳糖、未反應(yīng)的3-fl、lnnt和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶和乳糖。在第四方面的方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和lnfp-i以制備反應(yīng)混合物，然后如上所述從反應(yīng)混合物中除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶來容易地獲得。該方法優(yōu)選包括以下步驟：使3-fl和lnfp-i以優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還甚至更優(yōu)選為1：1的摩爾比與α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶接觸，所述α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶對(duì)于3-fl和lnfp-i的反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率為至少10％至多約70％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少35％、甚至更優(yōu)選為至少40％、還更優(yōu)選為至少50％。然后如上所述可以從所制備的包含lndfh-i、乳糖、未反應(yīng)的3-fl、lnfp-i和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物中除去α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶和乳糖。在第四方面的方法的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物可以通過用α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶處理3-fl和2’-fl受體以制備包含dfl、乳糖、未反應(yīng)的3-fl、2’-fl和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的反應(yīng)混合物來容易地獲得。然后如上所述將混合物進(jìn)行常規(guī)純化步驟以除去乳糖和α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。所獲得的該hmo混合物中dfl相對(duì)于(3-fl+2’-fl)的摩爾比優(yōu)選為至少1：10、更優(yōu)選為至少1：7、甚至更優(yōu)選為至少1：5、特別是1：3。該hmo混合物中3-fl相對(duì)于2’-fl的摩爾比優(yōu)選為0.05-21，更優(yōu)選為0.13-7.7，甚至更優(yōu)選為約1。本發(fā)明特別優(yōu)選的第三和第四方面在以“當(dāng)…進(jìn)行[...]方法時(shí)”開始的以下語句中，表述“可以制備”等同于表述“獲得”。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-6.6并且3-fl與lnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-3.8并且3-fl與lnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-8并且3-fl與lnt的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-5.5并且3-fl與lnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-3并且3-fl與lnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-6并且3-fl與lnt的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-4并且3-fl與lnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為0.8-2并且3-fl與lnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為1.3-8并且3-fl與lnt的摩爾比為0.17-6。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-6.6并且3-fl與lnt的摩爾比為0.25-3.5。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為1.3-3并且3-fl與lnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為5：1至3：1并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-10并且3-fl與lnt的摩爾比為5-21。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-8并且3-fl與lnt的摩爾比為2.5-7.7。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnt的摩爾比為1-3.3。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnt的摩爾比為0.3-1。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為2-8并且3-fl與lnt的摩爾比為0.13-0.4。當(dāng)以3-fl與lnt的摩爾比為1：3至1：5并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnt)與lnfp-ii的摩爾比為3-10并且3-fl與lnt的摩爾比為0.05-0.2。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-6.6并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-3.8并且3-fl與lnnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-8并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-5.5并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-3并且3-fl與lnnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-6并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-4并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為0.8-2并且3-fl與lnnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為1.3-8并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.17-6。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-6.6并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.25-3.5。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為1.3-3并且3-fl與lnnt的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為5：1至3：1并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-10并且3-fl與lnnt的摩爾比為5-21。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-8并且3-fl與lnnt的摩爾比為2.5-7.7。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnnt的摩爾比為1-3.3。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.3-1。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為2-8并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.13-0.4。當(dāng)以3-fl與lnnt的摩爾比為1：3至1：5并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnnt)與lnfp-iii的摩爾比為3-10并且3-fl與lnnt的摩爾比為0.05-0.2。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-6.6并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-3.8并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-8并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-5.5并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-3并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-6并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-4并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為0.8-2并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為1.3-8并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.17-6。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-6.6并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.25-3.5。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為1.3-3并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為5：1至3：1并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-10并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為5-21。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-8并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為2.5-7.7。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為1-3.3。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.3-1。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為2-8并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.13-0.4。當(dāng)以3-fl與lnfp-i的摩爾比為1：3至1：5并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo混合物，其中(3-fl+lnfp-i)與lndfh-i的摩爾比為3-10并且3-fl與lnfp-i的摩爾比為0.05-0.2?；旧嫌?-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物可以通過分別進(jìn)行第三或第四方面的方法來獲得，3-fl和2’-fl的摩爾比優(yōu)選為1：5至5：1、更優(yōu)選為1：3至3：1、甚至更優(yōu)選為1：2至2：1、還更優(yōu)選為1：1，并且α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)化率為至少35％至多約70％、優(yōu)選為至少40％、更優(yōu)選為至少50％。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-6.6并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-3.8并且3-fl與2’-fl的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-8并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-5.5并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-3并且3-fl與2’-fl的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-6并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.13-7.7。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-4并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.2-4.5。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為50-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為0.8-2并且3-fl與2’-fl的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為3：1至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為1.3-8并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.17-6。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為2：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為2-6.6并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.25-3.5。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：1并且轉(zhuǎn)化率為40-60％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為1.3-3并且3-fl與2’-fl的摩爾比為1。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為5：1至3：1并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為3-10并且3-fl與2’-fl的摩爾比為5-21。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為3：1至2：1并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為2-8，并且3-fl與2’-fl的摩爾比為2.5-7.7。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為2：1至1：1并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與2’-fl的摩爾比為1-3.3。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：1至1：2并且轉(zhuǎn)化率為35-55％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為1.6-6.6并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.3-1。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：2至1：3并且轉(zhuǎn)化率為40-70％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為2-8并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.13-0.4。當(dāng)以3-fl與2’-fl的摩爾比為1：3至1：5并且轉(zhuǎn)化率為50-80％進(jìn)行第三或第四方面的方法時(shí)，可以分別制備基本上由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo混合物或基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo混合物，其中(3-fl+2’-fl)與dfl的摩爾比為3-10并且3-fl與2’-fl的摩爾比為0.05-0.2。適用于進(jìn)行本發(fā)明的第三和第四方面的α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶在下面的段落中，表述“可攜帶”與表述“任選攜帶”等同，并且表述“可以被取代”與表述“任選被取代”等同。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶”優(yōu)選是指任何野生型或工程化的巖藻糖苷酶，其能夠?qū)r藻糖殘基轉(zhuǎn)移至式2的受體中的葡萄糖的3-位，轉(zhuǎn)移至式1、1a或1b的受體中的n-乙?；?乳糖胺基中、優(yōu)選末端n-乙?；?乳糖胺基中的n-乙?；?葡糖胺的3-位，或者轉(zhuǎn)移至式1、1a或1b的受體中乳-n-二糖基中、優(yōu)選末端乳-n-二糖基中的n-乙?；?葡糖胺的4-位，其中式1和式2的化合物如下：其中r1為巖藻糖基或h，r2選自n-乙酰基-乳糖胺基和乳-n-二糖基，其中n-乙?；?乳糖胺基可攜帶包括一個(gè)或多個(gè)n-乙?；?乳糖胺基和/或一個(gè)或多個(gè)乳-n-二糖基的糖殘基；任意n-乙?；?乳糖胺基和乳-n-二糖基可以被一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，r3為h或n-乙酰基-乳糖胺基，其任選被包括一個(gè)或多個(gè)n-乙酰基-乳糖胺基和/或一個(gè)或多個(gè)乳-n-二糖基的糖殘基取代；任意n-乙酰基-乳糖胺基和乳-n-二糖基可以被一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，且每個(gè)r4獨(dú)立地為唾液酸基或h，其條件是r1或r4中的至少一個(gè)不為h；并且式1a和1b的化合物如下：其中r1如上所定義，r2a為n-乙酰基-乳糖胺基，其任選被包括一個(gè)n-乙?；?乳糖胺基和/或一個(gè)乳-n-二糖基的糖殘基取代；任意n-乙?；?乳糖胺基和乳-n-二糖基可以被一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，但優(yōu)選不含唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基，r3a為h或n-乙?；?乳糖胺基，其任選被乳-n-二糖基取代；任意n-乙?；?乳糖胺基和乳-n-二糖基可以被一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，但優(yōu)選不含唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基，r2b為乳-n-二糖基，其任選被唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，但優(yōu)選不含唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基，且r3b為h或n-乙?；?乳糖胺基，其任選被一個(gè)或兩個(gè)n-乙?；?乳糖胺基和/或一個(gè)乳-n-二糖基取代；任意n-乙?；?乳糖胺基和乳-n-二糖基可以被一個(gè)或多個(gè)唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基取代，但優(yōu)選不含唾液酸殘基和/或巖藻糖殘基。優(yōu)選地，式1a和1b的化合物具有以下連接鍵和修飾中的一個(gè)或多個(gè)：-式1a中r2a的糖殘基中的n-乙?；?乳糖胺基通過1-3糖苷間鍵連接到另一個(gè)n-乙?；?乳糖胺基，-式1a中r2a的糖殘基中的乳-n-二糖基通過1-3糖苷間鍵連接到n-乙?；?乳糖胺基，-式1a中r3a的糖殘基中的乳-n-二糖基通過1-3糖苷間鍵連接到n-乙?；?乳糖胺基，-式1b中r3b的糖殘基中的n-乙?；?乳糖胺基通過1-3或1-6糖苷間鍵連接到另一個(gè)n-乙?；?乳糖胺基，以及-式1b中r3b的糖殘基中的乳-n-二糖基通過1-3糖苷間鍵連接到n-乙酰基-乳糖胺基。α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶優(yōu)選選自根據(jù)ec3.2.1.111所分類的具有巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶活性的α-l-巖藻糖苷酶，比如來自長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種(bifidobacteriumlongumsubsp.infantis)atcc15697的α1-3/4巖藻糖苷酶，如美國(guó)專利8361756中seqidno.18(本申請(qǐng)的seqidno.1)的蛋白質(zhì)所示，和其它與來自長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種atcc15697的α1-3/4巖藻糖苷酶的56至345位氨基酸的同一性為至少60％、優(yōu)選為至少70％、更優(yōu)選為至少80％、特別是至少90％的巖藻糖苷酶。這些其它巖藻糖苷酶的實(shí)例列于下表1。重要的是，α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶的巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶活性大于其水解活性。在或反應(yīng)的過程中，組分c或組分f的水解可在某一時(shí)間點(diǎn)變得顯著，因?yàn)榻M分c或組分f的濃度增加，然后分別降解成組分b或組分e，以及巖藻糖。為了制備本發(fā)明的hmo混合物，應(yīng)該在產(chǎn)生顯著的產(chǎn)物水解之前停止反應(yīng)。這個(gè)時(shí)間點(diǎn)可以通過公知的酶動(dòng)力學(xué)測(cè)量來容易地測(cè)定。用于制備本發(fā)明的hmo混合物的特別優(yōu)選的α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶是沒有水解活性或至少具有顯著降低的水解活性的α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶。這樣的酶可以通過在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置改變主要是野生型α1-3/4巖藻糖苷酶的氨基酸序列來制備，使得突變的氨基酸序列產(chǎn)生改善的巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶活性和/或降低的水解活性。根據(jù)本發(fā)明，α1-3/4巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶優(yōu)選：i)至少在us8361756的seqidno.18的以下一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置具有突變：134、135、168、170、174、216、221、236、237、244、245、282和413，優(yōu)選在至少一個(gè)或多個(gè)以下氨基酸位置具有突變：134、135、174、216、221、282和413；從而ii)對(duì)于以下反應(yīng)提供至少10％至多70％、優(yōu)選為至少20％、更優(yōu)選為至少35％、甚至更優(yōu)選為40-50％的轉(zhuǎn)化率：-3-fl供體與lnt受體，或-3-fl供體與lnnt受體，或-3-fl供體與lnfp-i受體，或-3-fl供體與2’-fl受體，或-dfl供體與lnt受體，或-dfl供體與lnnt受體，或-dfl供體與lnfp-i受體。本發(fā)明的第五方面本發(fā)明的第五方面為一種用于治療細(xì)菌感染的抗感染組合物。該組合物包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-dfl，-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl；或包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-巖藻糖基化組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者該組合物基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，-巖藻糖基化組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，以及-乳糖。優(yōu)選地，抗感染組合物基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl，或抗感染組合物基本上由以下組成：-dfl，-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。特別優(yōu)選的抗感染組合物選自：-基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii或由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo的混合物，優(yōu)選其中：-(3-fl+lnt)相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-ii的摩爾比和lnt與lnfp-ii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii或由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo的混合物，優(yōu)選其中：-(3-fl+lnnt)相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-iii的摩爾比和lnnt與lnfp-iii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i或由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo的混合物，優(yōu)選其中：-(3-fl+lnfp-i)相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為約1，特別是基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物；或者-基本上由3-fl、2’-fl和dfl或由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo的混合物，優(yōu)選其中：-(3-fl+2’-fl)相對(duì)于dfl的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于dfl的摩爾比為約1；或者-基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo的混合物，優(yōu)選其中：-dfl相對(duì)于(3-fl+2’-fl)的摩爾比為至少1：10、優(yōu)選為至少1：7、更優(yōu)選為至少1：5、特別是1：3；且/或-3-fl相對(duì)于2’-fl的摩爾比為0.05-21、優(yōu)選為0.13-7.7、更優(yōu)選為約1；或者-包括2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii的hmo的混合物，優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-包括2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii的hmo的混合物，優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-包括2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i的hmo的混合物，優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物。本發(fā)明的抗感染組合物可以是藥物組合物。藥物組合物可以包含藥學(xué)上可接受的載體，例如磷酸緩沖鹽溶液、乙醇在水中的混合物、水和乳液如油/水或水/油乳液，以及各種潤(rùn)濕劑或賦形劑。藥物組合物還可以包含其他材料，當(dāng)將其施用于患者時(shí)不產(chǎn)生不良反應(yīng)、過敏反應(yīng)或其他不希望的反應(yīng)。載體和其它材料可以包括溶劑、分散劑、涂層、吸收促進(jìn)劑、控釋劑、和一種或多種惰性賦形劑，比如淀粉、多元醇、成粒劑、微晶纖維素、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑和崩解劑。如果需要，抗感染組合物的片劑劑量可以通過標(biāo)準(zhǔn)的水性或非水性技術(shù)進(jìn)行包衣。本發(fā)明的抗感染組合物可以口服給藥，例如，作為包含預(yù)定量的第一混合物的片劑、膠囊或小丸劑，或作為包含預(yù)定濃度的第一混合物的粉末劑或顆粒劑，或包含預(yù)定濃度的第一混合物的在水性或非水性液體中的凝膠、糊劑、溶液、混懸液、乳劑、糖漿、大丸劑、藥糖劑或膏劑?？诜o藥的組合物可以包括粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、調(diào)味劑和保濕劑?？诜o藥的組合物如片劑可以任選地進(jìn)行包衣，并且可以配制成對(duì)其中的第一混合物提供持續(xù)、延遲或控制釋放。本發(fā)明的抗感染組合物還可以通過直腸栓劑、氣溶膠管、鼻胃管或直接輸注到胃腸道或胃中施用。本發(fā)明的抗感染藥物組合物還可以包括治療劑如抗病毒劑、抗生素、益生菌、止痛劑和抗炎劑。對(duì)于患者這些組合物的合適劑量可以基于如患者的免疫狀態(tài)、體重和年齡等因素以常規(guī)方式來確定。在一些情況下，劑量的濃度將與人母乳中組合物發(fā)現(xiàn)的hmo的濃度相似。所需量通常在每天約200mg至約20g的范圍內(nèi)，在某些實(shí)施方式中為每天約300mg至約15g、每天約400mg至約10g，在某些實(shí)施方式中為每天約500mg至約10g，在某些實(shí)施方式中為每天約1g至約10g。合適的劑量方案可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來確定。本發(fā)明的抗感染組合物也可添加到營(yíng)養(yǎng)組合物中。例如，它們可以添加到嬰兒配方、營(yíng)養(yǎng)組合物、補(bǔ)液溶液、或老年人或免疫受損個(gè)體的膳食維持或補(bǔ)充。大量營(yíng)養(yǎng)素如可食用脂肪、碳水化合物和蛋白質(zhì)也可以包括在這種抗感染組合物中?？墒秤弥景ɡ缫佑?、大豆油和單甘油酯和甘油二酯。碳水化合物包括例如葡萄糖、可食用乳糖和水解玉米淀粉。蛋白質(zhì)包括例如大豆蛋白、乳清和脫脂乳。維生素和礦物質(zhì)(例如鈣、磷、鉀、鈉、氯、鎂、錳、鐵、銅、鋅、硒、碘和維生素a、e、d、c和b復(fù)合物)也可以包括在這種抗感染組合物中。本發(fā)明的第六方面本發(fā)明的第六方面為一種調(diào)節(jié)人微生物組以增加雙歧桿菌豐度和barnesiella豐度的方法。優(yōu)選地，該方法減少厚壁菌豐度，特別是梭狀芽孢桿菌。該方法包括向人施用：i)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者ii)一種組合物，其基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；以及-乳糖；或者iii)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。優(yōu)選基本上由以下組成的組合物：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者基本上由以下組成的組合物：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。用于調(diào)節(jié)人微生物組的特別優(yōu)選的方法包括向人施用：-3-fl、lnt和lnfp-ii，優(yōu)選基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii或由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnt)相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-ii的摩爾比和lnt與lnfp-ii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-3-fl、lnnt和lnfp-iii，優(yōu)選基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii或由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnnt)相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-iii的摩爾比和lnnt與lnfp-iii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-3-fl、lnfp-i和lndfh-i，優(yōu)選基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i或由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnfp-i)相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為約1，特別是基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物；或者-3-fl、2’-fl和dfl，優(yōu)選基本上由3-fl、2’-fl和dfl或由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+2’-fl)相對(duì)于dfl的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于dfl的摩爾比為約1，特別是基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物。本發(fā)明的第七方面本發(fā)明的七個(gè)方面為一種預(yù)防或治療人細(xì)菌感染、特別是抗生素耐藥性細(xì)菌感染的方法。該方法包括向人施用，i)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-巖藻糖基化組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者ii)一種組合物，其基本上由以下組成：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；以及-乳糖；或者iii)一種組合物，其包括，優(yōu)選基本上由以下組成：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。優(yōu)選基本上由以下組成的組合物：-3-fl，-組分b，其為lnt、lnnt、lnfp-i或2’-fl，以及-組分c，其：當(dāng)組分b為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分b為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分b為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，或當(dāng)組分b為2’-fl時(shí)為dfl；或者基本上由以下組成的組合物：-dfl-組分e，其為lnt、lnnt或lnfp-i，-組分f，其：當(dāng)組分e為lnt時(shí)為lnfp-ii，或當(dāng)組分e為lnnt時(shí)為lnfp-iii，或當(dāng)組分e為lnfp-i時(shí)為lndfh-i，以及-2’-fl。用于預(yù)防或治療人細(xì)菌感染的特別優(yōu)選的方法包括向人施用：-3-fl、lnt和lnfp-ii，優(yōu)選基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii或由3-fl、lnt、lnfp-ii和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnt)相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-ii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-ii的摩爾比和lnt與lnfp-ii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-3-fl、lnnt和lnfp-iii，優(yōu)選基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii或由3-fl、lnnt、lnfp-iii和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnnt)相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lnfp-iii的摩爾比為約1，其條件是3-fl與lnfp-iii的摩爾比和lnnt與lnfp-iii的摩爾比中之一不大于2，特別是基本上由3-fl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-3-fl、lnfp-i和lndfh-i，優(yōu)選基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i或由3-fl、lnfp-i、lndfh-i和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+lnfp-i)相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于lndfh-i的摩爾比為約1，特別是基本上由3-fl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物；或者-3-fl、2’-fl和dfl，優(yōu)選基本上由3-fl、2’-fl和dfl或由3-fl、2’-fl、dfl和乳糖組成的hmo的混合物，更優(yōu)選其中：-(3-fl+2’-fl)相對(duì)于dfl的摩爾比為0.8-9.5，并且-乳糖相對(duì)于dfl的摩爾比為約1，特別是基本上由3-fl、2’-fl和dfl組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii組成的hmo的混合物；或者-2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i，優(yōu)選包括2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i的hmo的混合物，更優(yōu)選基本上由2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i組成的hmo的混合物。雖然已經(jīng)參照優(yōu)選實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以進(jìn)行各種修改。在本說明書中，除非有明確的相反說明，當(dāng)符合所述條件的兩者中任一個(gè)或兩個(gè)時(shí)，從操作者的意義上使用“或者/或(or)”一詞以還原真實(shí)意義，而不是操作者的僅需要符合條件中的一個(gè)的“異或(exclusiveor)”?！鞍?comprising)”一詞用于“包含(including)”的意義，而不是意指“由…組成”。以上承認(rèn)的所有在先的教導(dǎo)并入本文以供參考。不應(yīng)將本文承認(rèn)的任何在先公開的文件視為認(rèn)可或表示其教導(dǎo)在澳大利亞或其他地方在其公開日期為公知常識(shí)。實(shí)施例在下面的實(shí)施例中，長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種atcc15697的突變體用于制備本發(fā)明的混合物；突變的位置參考本申請(qǐng)的seqidno.1，其與us8361756的seqidno.18相同。實(shí)施例1在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，[3-fl]＝200mm，[lnt]＝200mm，酶提取物＝0.5mg/ml。hplc條件：使用56％乙腈和44％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了所得到的混合物的組成。乳糖與lnfp-ii等摩爾。實(shí)施例2使用w135f-a174n-n274a-e413突變體進(jìn)行與實(shí)施例1相同的測(cè)試，不同之處在于3-fl：lnt比率從3：1至1：3變化，并且酶提取物為0.05mg/ml。下表示出了所得到的混合物的組成。乳糖與lnfp-ii等摩爾。沒有檢測(cè)到巖藻糖。實(shí)施例3在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，[3-fl]＝200mm，[lnnt]＝200mm。hplc條件：使用56％乙腈和44％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了對(duì)于2mg/ml的酶提取物所得到的混合物的組成。乳糖與lnfp-iii等摩爾。下表示出了對(duì)于0.5mg/ml的酶提取物所得到的混合物的組成。乳糖與lnfp-iii等摩爾。實(shí)施例4使用多點(diǎn)突變體進(jìn)行與實(shí)施例3相同的測(cè)試。下表示出了對(duì)于0.5mg/ml的酶提取物所得到的混合物的組成。乳糖與lnfp-iii等摩爾。實(shí)施例5在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，[3-fl]＝200mm，[lnfp-i]＝200mm，酶提取物＝0.5mg/ml。hplc條件：使用56％乙腈和44％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了所得到的混合物的組成。乳糖與lndfh-i等摩爾。在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，30℃，140μl)中進(jìn)行另一個(gè)測(cè)試，[3-fl]＝50mm，[lnfp-i]＝50mm，酶提取物＝10μl。下表示出了所得到的混合物的組成。乳糖與lndfh-i等摩爾。實(shí)施例6在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，150μl)中進(jìn)行與實(shí)施例5相同的測(cè)試，[3-fl]＝100mm，[lnfp-i]＝50mm，酶提取物＝10μl粗提物。hplc如實(shí)施例5。下表示出了220分鐘后所得到的混合物的組成。乳糖與lndfh-i等摩爾。實(shí)施例7在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，[3-fl]＝200mm，[2’-fl]＝200mm，酶提取物＝0.5mg/ml。hplc條件：使用56％乙腈和44％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了所得到的混合物的組成。乳糖與dfl等摩爾。實(shí)施例8在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，使用w135f-a174n-n274a-e413r突變體，[dfl]＝200mm，[lnt]＝200mm，酶提取物＝0.1mg/ml或0.25mg/ml。hplc條件：使用66％乙腈和34％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1.1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了所得到的混合物的組成。酶提取物：0.1mg/ml時(shí)間(h)lnfp-ii轉(zhuǎn)化率dfl(mol％)lnt(mol％)lnfp-ii(mol％)2’-fl(mol％)110％45％45％5％5％215％42.5％42.5％7.5％7.5％524％38％38％12％12％827％36.5％36.5％13.5％13.5％酶提取物：0.25mg/ml時(shí)間(h)lnfp-ii轉(zhuǎn)化率dfl(mol％)lnt(mol％)lnfp-ii(mol％)2’-fl(mol％)0.510％45％45％5％5％116％42％42％8％8％220％40％40％10％10％528％36％36％14％14％828％36％36％14％14％實(shí)施例9在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，使用w135f-a174n-n274a-e413r突變體，[dfl]＝200mm，[lnnt]＝200mm，酶提取物＝0.1mg/ml或0.25mg/ml。hplc條件：使用66％乙腈和34％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1.1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫下表示出了所得到的混合物的組成。酶提取物：0.1mg/ml時(shí)間(h)lnfp-iii轉(zhuǎn)化率dfl(mol％)lnnt(mol％)lnfp-iii(mol％)2’-fl(mol％)17％46.5％46.5％3.5％3.5％211％44.5％44.5％5.5％5.5％519％40.5％40.5％9.5％9.5％821％39.5％39.5％10.5％10.5％酶提取物：0.25mg/ml時(shí)間(h)lnfp-iii轉(zhuǎn)化率dfl(mol％)lnnt(mol％)lnfp-iii(mol％)2’-fl(mol％)0.58％46％46％4％4％112％44％44％6％6％217％41.5％41.5％8.5％8.5％524％38％38％12％12％825％37.5％37.5％12.5％12.5％實(shí)施例10在磷酸鈉緩沖液(50mm，ph＝6.5，37℃，200μl)中進(jìn)行測(cè)試，使用w135f-a174n-n274a-e413r突變體，[dfl]＝200mm，[lnfp-i]＝200mm，酶提取物＝0.1mg/ml或0.25mg/ml。hplc條件：使用66％乙腈和34％水，使用tskgelamide80(tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速為1.1ml/min。通過cad和/或uv檢測(cè)在195nm處檢測(cè)底物和產(chǎn)物的洗脫。下表示出了所得到的混合物的組成。酶提取物：0.1mg/ml酶提取物：0.25mg/ml實(shí)施例11在該研究中招募總共80名男性和女性患者參加。經(jīng)篩查訪問和測(cè)試(run-in)期1-2周后，選擇患者并隨機(jī)分為8組，每組10名患者。將7組每組施用包含5克的以下組合物之一的治療產(chǎn)品：i)lnt、3-fl和lnfp-ii，ii)lnnt、3-fl和lnfp-iii，iii)lnfp-i、3-fl和lndfh-i，iv)3-fl、2’-fl和dfl，v)2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii，vi)2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii，或vii)2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i，且將1組施用安慰劑產(chǎn)品(2克葡萄糖)，均施用8周。治療產(chǎn)品和安慰劑在單位劑量容器中呈粉末形式。如果患者年滿18周歲，則有資格參加。所有招募的患者都能夠并愿意了解并遵守研究程序。如果有以下情況，則將患者排除：患者在篩查訪問前一個(gè)月內(nèi)已經(jīng)參加了臨床研究；患者在篩查測(cè)試中具有臨床上與參加研究有關(guān)的異常結(jié)果；患者正患有嚴(yán)重的疾病，如惡性腫瘤、糖尿病、嚴(yán)重冠心病、腎臟疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病或嚴(yán)重的精神疾病或任何可能混淆研究結(jié)果的病癥；在研究前使用高劑量的益生菌補(bǔ)充劑(允許使用酸奶)3個(gè)月；在研究前服用抗生素藥物3個(gè)月；在研究前2周內(nèi)定期服用任何可能干擾癥狀評(píng)估的藥物；和懷孕或泌乳。在篩查訪問時(shí)，登記病史和伴隨藥物，并收集血液樣本用于安全性分析。分發(fā)糞便樣本試劑盒。要求患者將樣本保存在冰箱中，直到下一次訪問。在第二次訪問時(shí)，檢查資格標(biāo)準(zhǔn)，并且將合格的受試者隨機(jī)分配到試驗(yàn)中的三組(arms)。收集糞便樣本并分發(fā)用于新樣本的裝置。使患者熟悉互動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)啟用系統(tǒng)(interactiveinternetenabledsystem)，每天記錄數(shù)據(jù)，并提供給治療或?qū)φ债a(chǎn)品。提醒受試者在研究過程中不要改變他們慣常的飲食。收集血液樣本用于生物標(biāo)志物研究。將糞便樣本儲(chǔ)存在-80℃直到分析。將糞便樣本進(jìn)行16srna測(cè)序分析。該研究進(jìn)行8周，患者每天服用安慰劑或治療產(chǎn)品。患者被指示在早晨與早餐一起服用產(chǎn)品。通過互動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)啟用系統(tǒng)監(jiān)控順應(yīng)性(compliance)?；颊哌€使用系統(tǒng)記錄：-bristol糞便形態(tài)分類(bristolstoolformscale)(bsf)信息，-癥狀信息如腹痛、腹部不適、腹部絞痛、腹脹和腹部飽脹感，-額外的胃腸癥狀評(píng)定量表(gastrointestinalsymptomratingscale)(gsrs)信息。該調(diào)查問卷包括覆蓋五個(gè)方面(腹痛、消化不良、反流、腹瀉、便秘)的15項(xiàng)，并使用七級(jí)李克特量表(seven-gradedlikertscale)。在研究結(jié)束時(shí)，每個(gè)病人都有醫(yī)療團(tuán)隊(duì)的退出訪問。如前所述收集和分析糞便樣本和血液樣本。糞便分析表明，治療患者的雙歧桿菌和barnesiella的豐度增加，厚壁菌、特別是梭狀芽孢桿菌的豐度減少。實(shí)施例12各自單獨(dú)地安置80只7周齡的c57bl/6j雌性小鼠以避免小鼠之間的污染并提供給經(jīng)輻照的食物和水。將小鼠分為8組，每組10只小鼠，7組治療組和1組安慰劑組。在飲用水中用氨芐青霉素(0.5g/l)處理小鼠，每3天更換一次。1周后，停止將氨芐青霉素加入到飲用水中。此后，將以下組合物中的一種以40mg/ml的總濃度加入到7個(gè)治療組中的每一組的飲用水中：i)lnt、3-fl和lnfp-ii，ii)lnnt、3-fl和lnfp-iii，iii)lnfp-i、3-fl和lndfh-i，iv)3-fl、2’-fl和dfl，v)2’-fl、dfl、lnt和lnfp-ii，vi)2’-fl、dfl、lnnt和lnfp-iii，或vii)2’-fl、dfl、lnfp-i和lndfh-i。對(duì)照組給予純水。每天給予新鮮的水，并且所有小鼠都可以自由接近飲用水。以嚙齒動(dòng)物食物喂養(yǎng)小鼠，并每天給予新鮮的食物。在氨芐青霉素處理結(jié)束兩天后，各組小鼠用萬古霉素耐藥性屎腸球菌(enterococcusfaecium)菌株(vre)通過口服強(qiáng)飼法進(jìn)行感染。通過在具有萬古霉素的enterococcosel瓊脂平板上鋪種系列稀釋的糞便丸粒，而在不同的時(shí)間點(diǎn)測(cè)定vre水平。通過外觀識(shí)別vre菌落，并通過革蘭氏染色確認(rèn)。對(duì)賦予萬古霉素耐藥性的vana基因進(jìn)行pcr，用于確認(rèn)感染小鼠中vre的存在。監(jiān)測(cè)小鼠2周，然后將其安樂死。在將小鼠安樂死之前獲得新鮮的糞便丸粒。將樣本立即冷凍并儲(chǔ)存在-80℃。使用96孔powersoildna分離試劑盒(mo-bio)提取dna。在pcr期間每個(gè)板最少一個(gè)樣本-孔保持為空，以用作陰性對(duì)照。使用附帶的illumina適配器用正向引物s-d-bact-0341-b-s-17和反向引物s-d-bact-0785-a-a-21(klindworth等人，nucleicacidsres.41,e1(2013))進(jìn)行pcr。這些是靶向v3-v4區(qū)域的通用的細(xì)菌16srdna引物。使用以下pcr程序：98℃進(jìn)行30秒，25×(98℃進(jìn)行10秒，55℃進(jìn)行20秒，72℃進(jìn)行20秒)，72℃進(jìn)行5分鐘。通過將產(chǎn)物在1％瓊脂糖凝膠上跑膠來驗(yàn)證擴(kuò)增。在使用nexteraindexkitv2(illumina)的套式pcr中加入條形碼，使用以下pcr程序：98℃進(jìn)行30秒，8×(98℃進(jìn)行10秒，55℃進(jìn)行20秒，72℃進(jìn)行20秒)，72℃進(jìn)行5分鐘。通過將產(chǎn)物在1％瓊脂糖凝膠上跑膠來驗(yàn)證引物的附著。使用sequalprepnormalizationplatekit對(duì)來自套式pcr的產(chǎn)物進(jìn)行歸一化和合并。通過蒸發(fā)濃縮合并的文庫(kù)，并使用qubithighsensitivityassaykit(thermofisherscientific)在qubit熒光計(jì)上測(cè)量合并的文庫(kù)的dna濃度。使用用于2×300bp配對(duì)末端測(cè)序的miseqreagentkitv3(illumina)在miseq桌面測(cè)序儀上進(jìn)行測(cè)序。使用64位版本的usearch(edgar，2013)用于序列數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析。在hmo處理的小鼠中，vre定植在14天內(nèi)降至不可檢測(cè)的水平。vre的密度在5天內(nèi)降低。未治療的小鼠在結(jié)腸中繼續(xù)存在大量的vre。小鼠的治療組也顯示出紫單胞菌科(porphyromonadaceae)、特別是barnesiella的豐度。序列表<110>格禮卡姆股份公司<120>hmo的混合物<130>p19428wo<150>ep15163044.9<151>2015-04-09<150>ep15163045.6<151>2015-04-09<150>ep15163047.2<151>2015-04-09<150>ep15155450.8<151>2015-02-17<150>ep15155454.0<151>2015-02-17<150>ep15155457.3<151>2015-02-17<150>ep15155460.7<151>2015-02-17<150>ep14190374.0<151>2014-10-24<160>1<170>bissap1.3.2<210>1<211>478<212>prt<213>長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種（bifidobacteriumlongumsubsp.infantis）<400>1metasnasnproalaaspalaglyileasnleuasntyrleualaasn151015valargproserserargglnleualatrpglnargmetglumettyr202530alapheleuhispheglymetasnthrmetthraspargglutrpgly354045leuglyhisgluaspproalaleupheasnproargasnvalaspval505560aspglntrpmetaspalaleuvalalaglyglymetalaglyvalile65707580leuthrcyslyshishisaspglyphecysleutrpproserargleu859095thrarghisthrvalalaserserprotrparggluglylysglyasp100105110leuvalarggluvalsergluseralaargarghisglyleulysphe115120125glyvaltyrleuserprotrpaspargthrgluglusertyrglylys130135140glylysalatyraspaspphetyrvalglyglnleuthrgluleuleu145150155160thrglntyrglyproilepheservaltrpleuaspglyalaasngly165170175gluglylysasnglylysthrglntyrtyrasptrpaspargtyrtyr180185190asnvalileargserleuglnproaspalavalileservalcysgly195200205proaspvalargtrpalaglyasnglualaglyhisvalargaspasn210215220glutrpservalvalproargargleuargseralagluleuthrmet225230235240glulysserglnglngluaspaspalaserphealathrthrvalser245250255serglnaspaspaspleuglyserargglualavalalaglytyrgly260265270aspasnvalcystrptyrproalagluvalaspthrserileargpro275280285glytrpphetyrhisglnsergluaspasplysvalmetseralaasp290295300glnleupheaspleutrpleuseralavalglyglyasnserserleu305310315320leuleuasnileproproserprogluglyleuleualagluproasp325330335valglnserleulysglyleuglyargargvalserglupheargglu340345350alaleualaservalargcysglualaargthrserseralaserala355360365alaalaalahisleuvalaspglyasnargaspthrphetrpargpro370375380aspalaaspaspalaalaproalailethrleuthrleuproglnpro385390395400thrthrileasnalailevalilegluglualailegluhisglygln405410415argilegluhisleuargvalthrglyalaleuproaspglythrglu420425430argvalleuglyglnalaglythrvalglytyrargargileleuarg435440445pheaspaspvalgluvalserservalthrleuhisvalaspglyser450455460argleualaprometileserargalaalaalavalargile465470475當(dāng)前第1頁12