本發(fā)明涉及核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、生物體成分定量用陣列器件及生物體成分解析試劑盒。

本申請(qǐng)基于2014年11月4日在日本提出申請(qǐng)的日本特愿2014-224639號(hào)和2015年2月6日在日本提出申請(qǐng)的日本特愿2015-022624號(hào)主張優(yōu)先權(quán)，在此援引其內(nèi)容。

背景技術(shù)：

以往已知通過對(duì)生物體分子進(jìn)行解析來進(jìn)行疾病或體質(zhì)的診斷。例如已知利用單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism：snp)解析進(jìn)行的體質(zhì)診斷、使用體細(xì)胞突變解析進(jìn)行的抗癌劑的給藥判斷、利用病毒的蛋白質(zhì)或dna解析進(jìn)行的感染癥對(duì)策等。

例如教示了：在癌癥的治療藥中，通過在egfr-tki(酪氨酸激酶抑制劑)的給藥前后對(duì)突變型egfr(表皮生長(zhǎng)因子受體)的拷貝數(shù)進(jìn)行定量，可以成為治療效果的指標(biāo)。一直以來進(jìn)行使用實(shí)時(shí)pcr的定量，但已知檢查中使用的核酸總量變化會(huì)對(duì)定量性造成影響，現(xiàn)在開發(fā)了核酸的總量不會(huì)影響定量性的數(shù)字pcr技術(shù)。

數(shù)字pcr技術(shù)是指如下的技術(shù)：將pcr反應(yīng)試劑和核酸的混合物分成多個(gè)微小液滴，對(duì)這些微小液滴進(jìn)行以混合物中的核酸中成為檢測(cè)對(duì)象的核酸為模板的pcr擴(kuò)增，從而由含模板核酸的微小液滴檢測(cè)由pcr擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光等信號(hào)，求出微小液滴總數(shù)中檢測(cè)到信號(hào)的微小液滴的比例，由此對(duì)試樣中的核酸進(jìn)行定量。

例如在專利文獻(xiàn)1及非專利文獻(xiàn)1中示出了：通過在具有微少量容積的微小空間內(nèi)進(jìn)行酶反應(yīng)，利用數(shù)字pcr可以進(jìn)行生物體物質(zhì)檢查。

作為數(shù)字pcr中使用的微小液滴的制作方法，已知通過用密封液將試劑和核酸的混合物分割來制作微小液滴的方法；在基板上開的孔中放入試劑和核酸的混合物之后用密封液將孔密封，從而制作微小液滴的方法等。另外，專利文獻(xiàn)2中公開了為了用少量的試劑在短時(shí)間內(nèi)獲取大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)而在微腔室內(nèi)制造乳液的方法。

數(shù)字pcr中，按照1個(gè)微小液滴中存在的模板核酸達(dá)到1個(gè)或0個(gè)的方式，對(duì)pcr反應(yīng)試劑和核酸的混合物進(jìn)行稀釋。數(shù)字pcr中，為了提高核酸擴(kuò)增的感度、并且為了對(duì)多個(gè)微小液滴同時(shí)進(jìn)行核酸擴(kuò)增，優(yōu)選各微小液滴的體積小。例如在非專利文獻(xiàn)1中公開了按照各孔的容積達(dá)到6nl的方式形成的微陣列狀反應(yīng)容器。另外，專利文獻(xiàn)2中公開了如下方法：對(duì)在流路內(nèi)形成有多個(gè)深度為3μm、直徑為5μm的孔的微陣列向流路內(nèi)流過試樣而將試樣導(dǎo)入各孔中之后，利用密封液將流路內(nèi)的剩余試劑擠出，從而將試樣導(dǎo)入到各孔內(nèi)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特表2003-511009號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本專利第4911592號(hào)公報(bào)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：plosone，3(8)，e2876，(2008)

非專利文獻(xiàn)2：labonachip，doi：10.1039/c21c40632b，(2012)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明要解決的技術(shù)問題

但是，上述非專利文獻(xiàn)1、2所公開的技術(shù)中，當(dāng)在孔內(nèi)進(jìn)入氣泡時(shí)，需要將氣泡從各孔中除去，為了進(jìn)行精度良好的定量分析，需要繁瑣的操作。

本發(fā)明鑒于上述事實(shí)而完成，本發(fā)明的目的在于提供在孔內(nèi)難以進(jìn)入氣泡的核酸導(dǎo)入方法(生物體成分導(dǎo)入方法)、以及利用簡(jiǎn)便的操作即可進(jìn)行精度良好的定量分析的核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、生物體成分核酸定量用陣列器件及生物體成分解析試劑盒。

用于解決技術(shù)問題的方法

本發(fā)明第一方式的生物體成分定量用陣列器件具備：具有多個(gè)孔的基材部；與所述基材部之間具有空隙且按照將所述多個(gè)孔的開口部分覆蓋的方式置于所述基材部上的蓋部；連通于所述基材部與所述蓋部之間的所述空隙的注入口部；以及形成在遠(yuǎn)離所述注入口部的位置上且連通于所述基材部與所述蓋部之間的所述空隙的排出口部，通過在所述基材部與所述蓋部之間填充水性溶液之后，將含有生物體成分的液體從所述注入口部導(dǎo)入到所述基材部與所述蓋部之間的所述空隙內(nèi)，從而將所述水性溶液中位于所述多個(gè)孔外的剩余溶液從所述排出口部排出，所述生物體成分通過擴(kuò)散移動(dòng)至所述水性溶液中位于所述多個(gè)孔內(nèi)的孔填充水性溶液中。

還可具備填充在所述基材部與所述蓋部之間的所述水性溶液。

所述多個(gè)孔和所述蓋部的至少任一個(gè)還可具有透光性。

還可以所述多個(gè)孔具有電極，所述基材部具有連接于所述電極的布線和用于將所述布線連接于檢測(cè)電路的連接器。

還可以在從所述基材部的厚度方向進(jìn)行觀察時(shí)不與所述注入口部及所述排出口部重疊的區(qū)域內(nèi)設(shè)定有具有所述多個(gè)孔、進(jìn)行信號(hào)放大反應(yīng)的區(qū)域。

還可以進(jìn)一步具備與所述排出口部相連通、液體從所述基材部與所述蓋部之間的所述空隙通過所述排出口部流入并儲(chǔ)存的廢液容器部。

還可以在從所述基材部的厚度方向進(jìn)行觀察時(shí)不與所述注入口部、所述廢液容器部及所述排出口部重疊的區(qū)域內(nèi)設(shè)定有具有所述多個(gè)孔、進(jìn)行信號(hào)放大反應(yīng)的區(qū)域。

本發(fā)明第二方式的生物體成分解析試劑盒具備上述方式的生物體成分定量用陣列器件、針對(duì)所述生物體成分的檢測(cè)反應(yīng)試劑、以及能夠從所述注入口部送液至所述基材部與所述蓋部之間的油性密封液，所述水性溶液是不含核酸的緩沖液。

本發(fā)明第三方式的核酸導(dǎo)入方法為向在流路內(nèi)形成多個(gè)孔且在所述流路內(nèi)及所述多個(gè)孔內(nèi)填充有水性溶液的核酸定量用陣列器件中的所述流路內(nèi)送液含有模板核酸的混合液，使送液至所述流路內(nèi)的混合液擴(kuò)散至所述多個(gè)孔內(nèi)的所述水性溶液中。

還可以通過將油性密封液送液至所述流路內(nèi)、利用所述油性密封液將所述多個(gè)孔內(nèi)的所述混合液及所述水性溶液密封，從而將所述多個(gè)孔制成多個(gè)獨(dú)立的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器。

還可以所述混合液含有信號(hào)放大反應(yīng)試劑，在所述核酸檢測(cè)反應(yīng)容器內(nèi)進(jìn)行信號(hào)放大反應(yīng)，對(duì)所述核酸檢測(cè)反應(yīng)容器內(nèi)進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。

所述信號(hào)放大反應(yīng)還可以是酶反應(yīng)。

所述酶反應(yīng)還可以是等溫反應(yīng)。

所述酶反應(yīng)還可以是侵入(invader)反應(yīng)。

所述信號(hào)檢測(cè)還可以通過與所述核酸檢測(cè)反應(yīng)容器內(nèi)的所述模板核酸的有無相對(duì)應(yīng)的熒光、發(fā)光、ph變化、吸光度變化及電位變化中的至少1個(gè)的檢測(cè)來進(jìn)行。

本發(fā)明第四方式的生物體成分解析方法是使用了上述第三方式的核酸檢測(cè)方法的生物體成分解析方法，其中，所述混合液含有成為解析對(duì)象物質(zhì)的dna、rna、mirna、mrna或蛋白質(zhì)中的任一者，具有針對(duì)所述解析對(duì)象物質(zhì)的特異性標(biāo)記能力的標(biāo)記物質(zhì)以所述模板核酸含有在該標(biāo)記物質(zhì)中或者所述模板核酸能夠結(jié)合于該標(biāo)記物質(zhì)的狀態(tài)、含有在所述混合液和所述水性溶液中的至少任一者中。

所述標(biāo)記物質(zhì)還可以含有與所述模板核酸不同的dna鏈、酶、粒子、抗體及脂質(zhì)體中的至少1個(gè)。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明的上述方式，可以提供在孔內(nèi)難以進(jìn)入氣泡的核酸導(dǎo)入方法(生物體成分導(dǎo)入方法)以及利用簡(jiǎn)單的操作即可進(jìn)行精度良好的定量分析的核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件及生物體成分解析試劑盒。

附圖說明

圖1為本發(fā)明第1實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒的立體圖。

圖2為圖1的a-a線的截面圖。

圖3為用于說明該生物體成分解析試劑盒的作用的圖。

圖4為用于說明該生物體成分解析試劑盒的作用的圖。

圖5為表示本發(fā)明第2實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒中的核酸定量用陣列器件的基材部的示意圖。

圖6為本發(fā)明第3實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒中的核酸定量用陣列器件的俯視圖。

圖7為圖6的b-b線的截面圖。

圖8為表示該實(shí)施方式(第3實(shí)施方式)的變形例(變形例1)的構(gòu)成的截面圖。

圖9為表示該實(shí)施方式的其它變形例(變形例2)的構(gòu)成的截面圖。

圖10為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其它變形例(變形例3)的構(gòu)成的截面圖。

圖11為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其它變形例(變形例4)的構(gòu)成的截面圖。

圖12為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其它變形例(變形例5)的構(gòu)成的俯視圖。

圖13為圖12的c-c線的截面圖。

圖14為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其它變形例(變形例6)的構(gòu)成的俯視圖。

圖15為圖14的d-d線的截面圖。

圖16為表示圖14的d-d線的截面的立體圖。

圖17為表示該變形例(變形例6)的間隔構(gòu)件的俯視圖。

圖18a為表示間隔構(gòu)件的其他構(gòu)成的俯視圖。

圖18b為表示間隔構(gòu)件的其他構(gòu)成的俯視圖。

圖18c為表示間隔構(gòu)件的其他構(gòu)成的俯視圖。

圖19為具備該實(shí)施方式的其他變形例(變形例6)的微小孔陣列層的基材部的俯視圖。

圖20為表示該變形例(變形例6)的其他變形例的構(gòu)成例的截面圖。

圖21為表示該構(gòu)成例的立體圖。

圖22為表示該構(gòu)成例的間隔構(gòu)件的俯視圖。

圖23為表示該變形例的另一個(gè)其他構(gòu)成例的截面圖。

圖24為表示該構(gòu)成例的立體圖。

圖25為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例7)的構(gòu)成的截面圖。

圖26為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例8)的構(gòu)成的俯視圖。

圖27為圖26的e-e線的截面圖。

圖28為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例9)的構(gòu)成的截面圖。

圖29為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例10)的構(gòu)成的截面圖。

圖30為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例11)的構(gòu)成的截面圖。

圖31為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例12)的構(gòu)成的截面圖。

圖32a為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例13)的構(gòu)成的立體圖。

圖32b為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例13)的構(gòu)成的6面圖。

圖33a為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例14)的構(gòu)成的立體圖。

圖33b為表示該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例14)的構(gòu)成的6面圖。

圖34為用于說明該實(shí)施方式的另一個(gè)其他變形例(變形例15)的作用的圖。

圖35為表示本發(fā)明實(shí)施例的生物體成分解析結(jié)果的照片。

具體實(shí)施方式

(第1實(shí)施方式)

對(duì)本發(fā)明第1實(shí)施方式的核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、生物體成分定量用陣列器件及生物體成分解析試劑盒進(jìn)行說明。圖1為本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒的立體圖。圖2為圖1的a-a線的截面圖。圖3及圖4為用于說明本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒的作用的圖。

本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1是作為用于對(duì)生物體成分進(jìn)行定量的陣列器件(生物體成分定量用陣列器件)的一例、具備可對(duì)核酸進(jìn)行定量的陣列器件(核酸定量用陣列器件2)的試劑盒。

首先對(duì)具備本實(shí)施方式的核酸定量用陣列器件2的生物體成分解析試劑盒1的構(gòu)成進(jìn)行說明。圖1所示的本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1是以可選擇dna、rna、mirna、mrna、蛋白質(zhì)、外來體、脂質(zhì)體及細(xì)胞中的任一者的物質(zhì)為解析對(duì)象物質(zhì)的試劑盒。具體地說，本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1是定量地對(duì)生物體成分所含的解析對(duì)象物質(zhì)的濃度進(jìn)行測(cè)定的試劑盒。

本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1具備圖1及圖2所示的核酸定量用陣列器件2、檢測(cè)反應(yīng)試劑11(參照?qǐng)D3)、以及與核酸定量用陣列器件2一起使用的油性密封液12(參照?qǐng)D4)。

如圖1及圖2所示，核酸定量用陣列器件2具備具有多個(gè)孔6的基材部3、蓋部7、注入口部8、排出口部9和水性溶液10。

如圖2所示，基材部3具備基板4和微小孔陣列層5。

基板4是由實(shí)質(zhì)上透明的材料形成的板狀構(gòu)件?；?的材質(zhì)例如為樹脂或玻璃。具體地說，基板4還可以由聚苯乙烯或聚丙烯形成。基板4只要是具有利用搬送核酸定量用陣列器件2的裝置或者操作者的手工作業(yè)進(jìn)行處理時(shí)不會(huì)破損的程度的剛性即可。

微小孔陣列層5是并列形成有多個(gè)貫通孔5a的層。微小孔陣列層5的層厚為3μm，在微小孔陣列層5與蓋部7之間空有100μm的空隙。形成于微小孔陣列層5的各貫通孔5a是直徑為5μm、中心線方向的長(zhǎng)度為3μm的圓柱形狀(貫通孔5a的直徑為5μm、中心線方向的長(zhǎng)度為3μm時(shí)，由1個(gè)貫通孔5a形成的微小空間的容量約為100毫微微升(fl))。

各貫通孔5a的容積可以適當(dāng)?shù)卦O(shè)定，作為一例，各貫通孔5a的容積為10微微升以下。各貫通孔5a之間的中心線間的距離只要是比各貫通孔5a的直徑大即可。各貫通孔5a按照在微小孔陣列層5上形成三角格子狀的方式而排列。另外，各貫通孔5a的排列方法并無特別限定。

通過微小孔陣列層5上形成的貫通孔5a和基板4的表面4a，在基材部3上構(gòu)成以基板4為底面部6a的有底筒狀的孔6。

微小孔陣列層5的材質(zhì)可以是樹脂或玻璃等。微小孔陣列層5的材質(zhì)可以與基板4的材質(zhì)相同，也可以與基板4的材質(zhì)不同。另外，微小孔陣列層5還可以與基板4以相同材料一體化。另外，微小孔陣列層5還可以與基板4以相同材料一體成型。作為由樹脂構(gòu)成的微小孔陣列層5的材質(zhì)的例子，可舉出環(huán)烯烴聚合物、硅、聚丙烯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚醋酸乙烯酯、氟樹脂、無定形氟樹脂等。

其中，作為微小孔陣列層5的例子示出的這些材質(zhì)不過是個(gè)例子，微小孔陣列層5的材質(zhì)并非限定于這些材質(zhì)。

例如，可以在玻璃的基板4上使用作為疏水性樹脂的環(huán)烯烴聚合物形成微小孔陣列層5。這種構(gòu)成中，由于玻璃基板4的表面為親水性的，因此在利用侵入反應(yīng)進(jìn)行加熱、對(duì)試樣進(jìn)行分析時(shí)，易于在孔6內(nèi)保持親水性的試樣。

另外，微小孔陣列層5如果由疏水性樹脂等疏水性材料形成，由于作為檢測(cè)對(duì)象的生物體分子的疏水性部位易于吸附及保持在疏水性的微小孔陣列層5上，因此生物體分子可效率良好地被微小孔陣列層5捕獲、孔6中的生物體分子的檢測(cè)變得容易。

此外，本實(shí)施方式中的疏水性定義為接觸角試驗(yàn)中與水的接觸角處于70°以上的范圍。

另外，作為實(shí)施方式中使用的材料的與水的接觸角之一例，環(huán)烯烴聚合物(cop)與水的接觸角為85°、作為疏水性樹脂的cytop與水的接觸角為110°左右。

其中，接觸角試驗(yàn)使用液滴法。

另外，微小孔陣列層5還可以被著色。當(dāng)微小孔陣列層5被著色時(shí)，在孔6內(nèi)進(jìn)行使用熒光、發(fā)光、吸光度等光的測(cè)定時(shí)，可減輕來自于接近成為測(cè)定對(duì)象的孔6的其他孔6的光的影響。

微小孔陣列層5通過對(duì)層疊于基板4上的整面圖案實(shí)施刻蝕、壓花形成或切削等加工而成型貫通孔5a。另外，當(dāng)將微小孔陣列層5與基板4一體成型時(shí)，相當(dāng)于微小孔陣列層5的貫通孔5a的部分通過對(duì)基板4實(shí)施刻蝕、壓花形成或切削等加工來形成。

蓋部7按照在基材部3與蓋部7之間具有空隙、將多個(gè)孔6的開口部分覆蓋的方式置于基材部3上?；牟?與蓋部7之間成為各種液體流過的流路。本實(shí)施方式中，各種液體從注入口部8朝向排出口部9流過基材部3與蓋部7之間。

圖1所示的注入口部8具有連通于基材部3與蓋部7之間的空隙的管路形狀。本實(shí)施方式中，在蓋部7上形成注入口部8。此外，注入口部8也可以形成在基材部3上。

排出口部9在遠(yuǎn)離注入口部8的位置處連通于基材部3與蓋部7之間的空隙。本實(shí)施方式中，在基材部3及蓋部7中，按照液體從沿著液體的流路方向進(jìn)行測(cè)定時(shí)最遠(yuǎn)離注入口部8的部分中的基材部3與蓋部7的空隙漏出的方式構(gòu)成排出口部9。

此外，排出口部9可以按照在遠(yuǎn)離注入口部8的位置處具有連接于基材部3與蓋部7之間的空隙的管路形狀的方式、形成在基材部3或蓋部7上并被密封。此時(shí)，可以防止存在于基材部3與蓋部7之間的液體通過排出口部9蒸發(fā)。排出口部9的密封可以利用堵住排出口部9的密封件或塞子來進(jìn)行。

如圖2所示，水性溶液10填充在基材部3與蓋部7之間。

水性溶液10是具有能夠與含有解析對(duì)象物質(zhì)的試樣混合的組成的液體。本實(shí)施方式中，水性溶液10是不含核酸的緩沖液。其中，水性溶液10填滿在各孔6內(nèi)即可。即，基材部3與蓋部7之間的流路部分的一部分或全部還可以被氣體填滿。

檢測(cè)反應(yīng)試劑11(參照?qǐng)D3、4)是用于針對(duì)與解析對(duì)象物質(zhì)有關(guān)的模板核酸進(jìn)行生物化學(xué)反應(yīng)的試劑。針對(duì)模板核酸的生物化學(xué)反應(yīng)例如是在模板核酸存在的條件下引起信號(hào)放大的反應(yīng)。本實(shí)施方式的檢測(cè)反應(yīng)試劑11是使針對(duì)模板核酸的酶反應(yīng)發(fā)生的試劑。檢測(cè)反應(yīng)試劑11例如可根據(jù)能夠檢測(cè)核酸的方法進(jìn)行選擇。例如，invader(注冊(cè)商標(biāo))法、taqman(注冊(cè)商標(biāo))法或熒光探針法或其他方法中使用的試劑可作為本實(shí)施方式的檢測(cè)反應(yīng)試劑11含有在生物體成分解析試劑盒1中。

油性密封液12(參照?qǐng)D4)是能夠從注入口部(參照?qǐng)D1)送液至基材部3與蓋部7之間的溶液。油性密封液12可以從不與含解析對(duì)象物質(zhì)的試樣混合的材料中選擇。本實(shí)施方式的油性密封液12為礦物油。

接著，作為本發(fā)明第1實(shí)施方式的核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法及生物體成分解析方法，示出使用了本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1的核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法及生物體成分解析方法，同時(shí)示出本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1的作用。

本實(shí)施方式中，在生物體成分解析試劑盒1的使用前的狀態(tài)下，在如圖2所示預(yù)先在基材部3與蓋部7之間填充有水性溶液10的狀態(tài)下，將注入口部8(參照?qǐng)D1)和排出口部9(參照?qǐng)D1)這兩者水密地密封。因此，處于基材部3與蓋部7之間的水性溶液10在注入口部8或排出口部9開放之前被封入在基材部3與蓋部7之間。

本實(shí)施方式中，由于各孔6的容積非常小，因此若在制造核酸定量用陣列器件2時(shí)在各孔6內(nèi)填滿水性溶液10，則在使用生物體成分解析試劑盒1之前，即便是多少的振動(dòng)等傳遞至核酸定量用陣列器件2，各孔6內(nèi)的水性溶液10(孔填充水性溶液)也難以被替換成空氣。

另外，本實(shí)施方式中，若在制造生物體成分解析試劑盒1(核酸定量用陣列器件2)時(shí)預(yù)先在各孔6內(nèi)填充水性溶液10，則使用者在使用生物體成分解析試劑盒1時(shí)，不需要自生物體成分解析試劑盒1進(jìn)行脫氣的工序，因此使用者可以簡(jiǎn)單地使用生物體成分解析試劑盒1。

使用生物體成分解析試劑盒1時(shí)，作為前處理，利用公知的溶劑適當(dāng)?shù)貙⒑薪馕鰧?duì)象物質(zhì)的試樣稀釋。試樣的稀釋率可以以公知的數(shù)字pcr中的稀釋率作為參照。另外，對(duì)含有解析對(duì)象物質(zhì)的試樣進(jìn)行稀釋的溶劑優(yōu)選是能夠與各孔6內(nèi)所填滿的水性溶液10(孔填充水性溶液)混合的組成。另外，在對(duì)含有解析對(duì)象物質(zhì)的試樣進(jìn)行稀釋的工序中，以規(guī)定的濃度混合檢測(cè)反應(yīng)試劑11。

以下示出解析對(duì)象物質(zhì)為核酸、以成為解析對(duì)象物質(zhì)的核酸為模板核酸、利用侵入法進(jìn)行信號(hào)放大反應(yīng)的例子。其中，模板核酸可以是生物體產(chǎn)生的核酸，也可以是pcr(聚合酶鏈反應(yīng))產(chǎn)物等人工物。另外，模板核酸還可以是能夠捕獲生物體物質(zhì)的抗體或者標(biāo)記有抗體的珠粒中的標(biāo)記核酸。此外，當(dāng)水性溶液10中含有檢測(cè)反應(yīng)試劑11的一部分或全部時(shí)，上述前處理中的檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合的一部分或全部是不需要的。

首先，開放圖1所示的注入口部8及排出口部9，利用例如分配移液管等將含模板核酸的試樣和侵入反應(yīng)用的檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x通過注入口部8送液至基材部3與蓋部7之間的空隙。試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x按照將多個(gè)孔6全部覆蓋的方式、在基材部3與蓋部7之間的空隙內(nèi)擴(kuò)散(參照?qǐng)D3)。另外，通過將試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x送液至基材部3與蓋部7之間的空隙，水性溶液10從排出口部9被排出。此外，此時(shí)，當(dāng)試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x為與水性溶液10不同的顏色時(shí)，可以容易地把握將試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x送液至基材部3與蓋部7之間的哪個(gè)部分。

如圖3所示，在由基材部3和蓋部7構(gòu)成的流路上，配置有由基板4和微小孔陣列層5形成的多個(gè)孔6。填滿在多個(gè)孔6內(nèi)的水性溶液10(孔填充水性溶液)維持在保持于各孔6的內(nèi)表面的狀態(tài)。因此，試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x不是與填滿于多個(gè)孔6內(nèi)的水性溶液10相調(diào)換、而是成為混合液x層疊在水性溶液10上的狀態(tài)。但是，由于水性溶液10與混合液x能夠相互間容易地混合，因此在成為混合液x層疊在水性溶液10上的狀態(tài)之后，混合液x中的溶質(zhì)向水性溶液10(孔填充水性溶液)中擴(kuò)散。

接著，如圖4所示，將油性密封液12從注入口部8(參照?qǐng)D1)送液至由基材部3和蓋部7構(gòu)成的流路內(nèi)。油性密封液12通過在混合液x擴(kuò)散至水性溶液10的狀態(tài)下將多個(gè)孔6內(nèi)的液體(孔填充水性溶液)密封，將多個(gè)孔6制成多個(gè)獨(dú)立的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a。另外，油性密封液12將在基材部3與蓋部7之間的空隙內(nèi)位于多個(gè)孔6外部的液體從排出口部9擠出。

通過上述前處理中的試樣稀釋，存在于每一個(gè)核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a中的模板核酸變?yōu)?個(gè)或0個(gè)。試樣的濃度過高時(shí)，還有每一個(gè)核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a中有多個(gè)模板核酸進(jìn)入的可能性。

本實(shí)施方式中，將侵入反應(yīng)用的檢測(cè)反應(yīng)試劑11和模板核酸根據(jù)模板核酸的濃度密封在孔6內(nèi)(核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a內(nèi))。在此狀態(tài)下，利用62℃的烘箱對(duì)核酸定量用陣列器件2孵育規(guī)定時(shí)間。通過用62℃的烘箱對(duì)核酸定量用陣列器件2孵育規(guī)定時(shí)間，在核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a內(nèi)，侵入反應(yīng)中等溫(等溫反應(yīng))地進(jìn)行的信號(hào)放大優(yōu)選地進(jìn)行。

接著，在預(yù)先規(guī)定的時(shí)間之后，將孔6內(nèi)(核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a內(nèi))密封有侵入反應(yīng)用檢測(cè)反應(yīng)試劑11及模板核酸的核酸定量用陣列器件2從烘箱中取出，測(cè)量具有熒光的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a數(shù)及具有該熒光的核酸的熒光量。另外，本實(shí)施方式中，核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a的熒光的有無可以將相對(duì)于自發(fā)熒光、超過規(guī)定s/n比的熒光量作為閾值。另外，本實(shí)施方式中，若利用侵入法進(jìn)行的信號(hào)放大優(yōu)選地進(jìn)行、在各核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a內(nèi)信號(hào)達(dá)到飽和，則具有熒光的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a中的熒光量難以產(chǎn)生大的不均。

如以上所說明，本實(shí)施方式的核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1中，通過將含模板核酸的液體從注入口部8導(dǎo)入到基材部3與蓋部7之間的空隙中，將水性溶液10中處于多個(gè)孔6外的多余溶液從排出口部9排出，模板核酸通過擴(kuò)散移動(dòng)至水性溶液10中處于多個(gè)孔6內(nèi)的水性溶液10(孔填充水性溶液10)中。因此，根據(jù)本實(shí)施方式的核酸導(dǎo)入方法、核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1，模板核酸向各孔6移動(dòng)時(shí)，各孔6內(nèi)難以進(jìn)入氣泡。

另外，本實(shí)施方式中由于各孔6內(nèi)進(jìn)入氣泡的可能性極低，因此根據(jù)本實(shí)施方式的核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1，可以將能夠檢測(cè)核酸的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a的數(shù)量因氣泡的存在而產(chǎn)生不均的可能性抑制在較低。進(jìn)而，當(dāng)各孔6的容積極小時(shí)，可以在無視孔6內(nèi)的氣泡的體積下考慮核酸檢測(cè)反應(yīng)的進(jìn)行在各孔6中不均的可能性，但本實(shí)施方式中，由于不需要考慮孔6內(nèi)存在氣泡的可能性，因而不需要將氣泡從孔6中除去的操作，利用簡(jiǎn)單的操作即可進(jìn)行精度良好的定量分析。

此外，本實(shí)施方式中，除了熒光的檢測(cè)以外，還可以應(yīng)用將可見光的發(fā)光、顯色等作為信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)系統(tǒng)。

另外，為了解析蛋白質(zhì)，也可以適用本實(shí)施方式的構(gòu)成。解析蛋白質(zhì)時(shí)，預(yù)先利用dna鏈等核酸對(duì)特異地結(jié)合于目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子進(jìn)行修飾。此時(shí)，通過進(jìn)行以修飾中使用的dna鏈等核酸為模板核酸的侵入法的寡核苷酸設(shè)計(jì)，可以按照本實(shí)施方式的信號(hào)檢測(cè)順序來解析目標(biāo)蛋白質(zhì)的有無。成為解析對(duì)象物質(zhì)的物質(zhì)例如可以是dna、rna、mirna、mrna或蛋白質(zhì)中的任一者。此時(shí)，利用本實(shí)施方式的核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1定量的物質(zhì)是修飾中使用的dna鏈等核酸，從而被該核酸修飾的物質(zhì)被間接地定量。另外，對(duì)特異地結(jié)合于目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子進(jìn)行修飾的物質(zhì)并非限定于dna鏈，只要是產(chǎn)生用于檢測(cè)的信號(hào)的物質(zhì)即可。例如，可舉出熒光珠粒或hpr(辣根過氧化物酶)等。

進(jìn)而，還可以利用本實(shí)施方式的核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1對(duì)被上述模板核酸修飾了的物質(zhì)成為標(biāo)記物質(zhì)而特異性地結(jié)合的物質(zhì)(成為結(jié)合對(duì)象的物質(zhì))進(jìn)行解析。此時(shí)，被上述模板核酸修飾了的物質(zhì)可以含有與模板核酸不同的dna鏈、酶、粒子、抗體及脂質(zhì)體中的至少一個(gè)。

此外，通過代替上述模板核酸，在孔6內(nèi)將含有發(fā)生熒光、可見光或顯色反應(yīng)的生物體來源物質(zhì)的液體從注入口部8導(dǎo)入至基材部3與蓋部7之間的空隙中，從而可以對(duì)該生物體來源物質(zhì)進(jìn)行定量。

例如，作為解析對(duì)象物質(zhì)被定量的生物體來源物質(zhì)的例子可舉出脂質(zhì)體、外來體、細(xì)胞。通過對(duì)特異性存在于這些生物體來源物質(zhì)中的物質(zhì)進(jìn)行熒光標(biāo)記等標(biāo)記，可以對(duì)這些生物體來源物質(zhì)進(jìn)行定量。作為進(jìn)行這種標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)，可舉出構(gòu)成要素中含有特異性結(jié)合于成為解析對(duì)象物質(zhì)的生物體來源物質(zhì)的低分子配體或抗體等的物質(zhì)。

另外，還可以代替通過模板核酸對(duì)解析對(duì)象物質(zhì)進(jìn)行定量、而是使用本實(shí)施方式的生物體成分定量用陣列器件對(duì)成為解析對(duì)象的生物體來源物質(zhì)本身產(chǎn)生的信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，由此進(jìn)行生物體來源物質(zhì)的定量。

作為這種生物體來源物質(zhì)的一例，可舉出將含有用于表達(dá)熒光蛋白的啟動(dòng)子及目標(biāo)基因等的熒光蛋白表達(dá)盒通過轉(zhuǎn)基因組裝到染色體及其他基因區(qū)域等中而得到的細(xì)胞；或者保持包含上述熒光蛋白表達(dá)盒的質(zhì)粒等的細(xì)胞。

例如，通過使促進(jìn)對(duì)熒光蛋白表達(dá)盒的轉(zhuǎn)錄的規(guī)定試劑和上述細(xì)胞在孔6內(nèi)成為混合狀態(tài)來表達(dá)熒光蛋白，可以對(duì)發(fā)出熒光的細(xì)胞進(jìn)行定量。熒光蛋白表達(dá)盒還可構(gòu)建成對(duì)應(yīng)于熒光蛋白以外的基因的表達(dá)來進(jìn)行表達(dá)的報(bào)告基因的表達(dá)盒。此時(shí)，可以利用來自報(bào)告基因來源的熒光蛋白的熒光，使用本實(shí)施方式的生物體成分定量用陣列器件，對(duì)在孔6內(nèi)發(fā)生了對(duì)應(yīng)于細(xì)胞外配位基的存在等信號(hào)傳達(dá)而表達(dá)規(guī)定基因的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳達(dá)的細(xì)胞進(jìn)行定量。

如此，被油性密封液12密封的孔6成為用于對(duì)來自生物體來源物質(zhì)的信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)的獨(dú)立的信號(hào)檢測(cè)容器，可以進(jìn)行生物體來源物質(zhì)的定量。

通過利用上述的定量方法，作為生物體來源物質(zhì)，也可對(duì)生物體內(nèi)存在的病毒或細(xì)胞進(jìn)行定量。另外，還可以定性地對(duì)存在的有無進(jìn)行確認(rèn)。

此外，本實(shí)施方式的生物體成分定量用陣列器件還可以對(duì)并不是生物體成分的物質(zhì)進(jìn)行定量。例如，本實(shí)施方式的生物體成分定量用器件還可以作為病毒粒子定量用器件來使用。

另外，還可以代替本實(shí)施方式公開的侵入法，采用與侵入法不同的、利用使用了信號(hào)放大反應(yīng)試劑的酶反應(yīng)進(jìn)行的信號(hào)放大。該信號(hào)放大反應(yīng)試劑可以與上述實(shí)施方式同樣地混合在含有解析對(duì)象物質(zhì)的試樣中。

此外，本實(shí)施方式中公開了多個(gè)孔6的底面部6a和蓋部7這兩者由實(shí)質(zhì)上透明的材料形成的例子，但只要多個(gè)孔6的底面部6a和蓋部7中的至少1個(gè)具有透光性即可進(jìn)行多個(gè)孔6內(nèi)的熒光、發(fā)光、吸光度等光學(xué)檢測(cè)。

另外，本實(shí)施方式中公開了在含有模板核酸的試樣為水性(極性)時(shí)優(yōu)選的構(gòu)成，但當(dāng)含有模板核酸的試樣為油性(非極性)時(shí)，優(yōu)選代替水性溶液10而采用含有有機(jī)溶劑等的非極性密封液。進(jìn)而，當(dāng)含有模板核酸的試樣為油性(非極性)時(shí)，為了將孔6密封，優(yōu)選代替本實(shí)施方式所示的油性密封液12而采用極性的置換液。這些溶液的選擇要考慮含有模板核酸的試樣在溶劑中的溶解容易性以及根據(jù)模板核酸及解析對(duì)象物的穩(wěn)定性所選擇的溶劑的種類。例如，含有模板核酸的試樣為水溶液時(shí)，作為密封液可以選擇礦物油，在含有模板核酸的試樣以礦物油作為溶劑時(shí)，密封液可以選擇水或水性緩沖液等。

核酸由于是極性分子，因此對(duì)非極性溶劑是難溶性的，但例如以蛋白質(zhì)或脂質(zhì)作為解析對(duì)象物質(zhì)時(shí)，在使得用于解析對(duì)象物質(zhì)定量的標(biāo)記核酸結(jié)合于解析對(duì)象物質(zhì)的狀態(tài)下，優(yōu)選除了考慮標(biāo)記核酸對(duì)溶劑的溶解性之外還要考慮解析對(duì)象物質(zhì)對(duì)溶劑的溶解性。此時(shí)，含有模板核酸(標(biāo)記核酸)的試樣有時(shí)用非極性溶劑進(jìn)行稀釋。

(第2實(shí)施方式)

接著，對(duì)本發(fā)明的第2實(shí)施方式進(jìn)行說明。圖5為表示本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒中的核酸定量用陣列器件的基材部的示意圖。此外，在以下各實(shí)施方式中，與上述第1實(shí)施方式所公開的構(gòu)成要素相同的構(gòu)成要素帶有與第1實(shí)施方式相同的符號(hào)，將重復(fù)的說明省略。

圖5所示的本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1a與上述第1實(shí)施方式的構(gòu)成不同之處在于：在孔6內(nèi)，代替上述第1實(shí)施方式的核酸定量用陣列器件2而具備能夠進(jìn)行電化學(xué)測(cè)定的核酸定量用陣列器件2a。

本實(shí)施方式的核酸定量用陣列器件2a具有第1實(shí)施方式所公開的基材部3、孔6、蓋部7、水性溶液10、注入口部8及排出口部9。

進(jìn)而，本實(shí)施方式的多個(gè)孔6在底面部6a上具有電極20。進(jìn)而，本實(shí)施方式的基材部3具有連接于孔6內(nèi)的電極20的布線21和用于將布線21連接于檢測(cè)電路的連接器22。

電極20例如可以對(duì)孔6內(nèi)的溶液的電位變化或電阻的變動(dòng)進(jìn)行檢測(cè)。

布線21及連接器22通過在基材部3上例如印刷等來形成。若舉出一例，布線21及連接器22按照被夾持在基板4與微小孔陣列層5之間的方式在基板4的外表面上進(jìn)行圖案形成。

電極20、布線21及連接器22的材質(zhì)并無特別限定。

本實(shí)施方式中，使用孔6的底面部6a的電極20，以對(duì)應(yīng)于有無模板核酸存在的ph變化或電位變化作為信號(hào)，可以進(jìn)行核酸的定量。

(第3實(shí)施方式)

接著，對(duì)本發(fā)明的第3實(shí)施方式進(jìn)行說明。圖6為本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒中的核酸定量用陣列器件的俯視圖。圖7為圖6的b-b線的截面圖。

圖6所示的本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1b具有第1實(shí)施方式所公開的基材部3、具有孔的微小孔陣列層5、蓋部7、水性溶液10、注入口部8及排出口部9。進(jìn)而，本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1b進(jìn)一步具備與排出口部9相連通的廢液容器部31。

廢液容器部31具有液體從基材部3與蓋部7之間的空隙通過排出口部9流入并儲(chǔ)存的空間，配設(shè)在蓋部7的外部。本實(shí)施方式中，代替第1實(shí)施方式所公開的蓋部7而具有形成有注入口部8、排出口部9及廢液容器部31的蓋部7a。

另外，本實(shí)施方式中，代替第1實(shí)施方式所公開的核酸定量用陣列器件2而具有多個(gè)(本實(shí)施方式中為96個(gè))的獨(dú)立的核酸定量用陣列器件2b1、2b2、……b96。核酸定量用陣列器件2b1、2b2、……b96排列成正方格子狀地相互間連接。多個(gè)獨(dú)立的核酸定量用陣列器件2b1、b2、……b96通過連接基材部3和蓋部7a的間隔構(gòu)件32而水密性地隔開。本實(shí)施方式的間隔構(gòu)件32按照基材部3的微小孔陣列層5與蓋部7a之間的空隙大小達(dá)到100μm的方式來保持微小孔陣列層5和蓋部7a。本實(shí)施方式的間隔構(gòu)件32具有將注入口部8和排出口部9連接、將微小孔陣列層5的各貫通孔5a包圍的貫通孔32a。

本實(shí)施方式中，由于自排出口部9排出的各種液體儲(chǔ)存在廢液容器部31中，因此廢液處理容易。

此外，本實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1b也可沒有水性溶液10。

此外，也可以由排出口部9注入各種液體，將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例1)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例1進(jìn)行說明。圖8是表示本變形例的構(gòu)成6的截面圖。

如圖8所示，本變形例中，當(dāng)在基材部3的厚度方向上將基材部3定義為下側(cè)、蓋部7a定義為上側(cè)時(shí)，注入口部8的注入口開口端8a的位置位于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠下的位置。進(jìn)而，排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a位于較廢液容器部31的底面更靠上的位置。

本變形例中，將各種液體從注入口開口端8a送液直至液體從排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a進(jìn)入到廢液容器部31內(nèi)之后，若開放注入口開口端8a，則在注入口部8和排出口部9的各自液面的高度因重力而達(dá)到一致的過程中，以位于排出口部9內(nèi)的液量為上限，液體從注入口開口端8a發(fā)生逆流。因此，即便是注入口開口端8a附近具有氣泡，該氣泡也會(huì)因液體的逆流而流動(dòng)，從注入口開口端8a被擠出至外面。本變形例中，在注入口部8的附近，在基材部3與蓋部7a之間難以滯留氣泡。

進(jìn)而，本變形例中，由于排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a位于較廢液容器部31的底面更靠上的位置，因此進(jìn)入到廢液容器部31內(nèi)的液體難以通過排出口部9逆流至基材部3與蓋部7a之間的空隙中。

(變形例2)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例2進(jìn)行說明。圖9為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖9所示，本變形例中，當(dāng)在基材部3的厚度方向上將基材部3定義為下側(cè)、蓋部7a定義為上側(cè)時(shí)，注入口部8的注入口開口端8a的位置處于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠上的位置。本變形例中，將各種液體從注入口開口端8a送液直至液體從排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a進(jìn)入到廢液容器部31內(nèi)之后，若開放注入口開口端8a，則在注入口部8和排出口部9的各自液面的高度因重力而達(dá)到一致的過程中，處于注入口部8的液體進(jìn)一步進(jìn)入到基材部3與蓋部7a之間的空隙。另外，通過注入口部8將試樣和檢測(cè)反應(yīng)試劑11的混合液x及油性密封液12送液至基材部3與蓋部7a之間的空隙中時(shí)，自排出口部9擠出至廢液容器部31的液體的一部分因?yàn)橹亓Χ鴷?huì)從排出口部9返回至基材部3與蓋部7a之間的空隙，但由于與位于注入口部8內(nèi)的液體的質(zhì)量相對(duì)抗，由此可抑制液體自廢液容器部31的逆流。

(變形例3)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例3進(jìn)行說明。圖10為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖10所示，本變形例中，排出口部9的開口面積小于注入口部8的開口面積。

將排出口部9的開口面積設(shè)定為能夠獲得若不施加來自注入口部8的送液壓力則液體無法通過排出口部9的程度的管路阻力的面積。排出口部9的具體的開口面積可以根據(jù)假設(shè)自排出口部9排出的液體的組成來決定。

本變形例中，在自注入口部8送液時(shí)，液體能夠從基材部3與蓋部7a之間的空隙通過排出口部9移動(dòng)至廢液容器部31，在從注入口部8向該空隙的送液結(jié)束之后，不會(huì)發(fā)生通過了排出口部9的液體的流動(dòng)。因此，本變形例中，可抑制液體從廢液容器部31向基材部3與蓋部7a之間的空隙的逆流。

此外，也可以將各種液體從排出口部9注入、將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例4)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例4進(jìn)行說明。圖11為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖11所示，本變形例中，與上述第3實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1b相比，構(gòu)成廢液容器部31的底面31a的部位更厚。進(jìn)而，本變形例中，與上述變形例1同樣，當(dāng)在基材部3的厚度方向上將基材部3定義為下側(cè)、蓋部7a定義為上側(cè)時(shí)，注入口部8的注入口開口端8a的位置位于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠下的位置。本變形例中，通過注入口部8的注入口開口端8a的位置位于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠下的位置，發(fā)揮與上述變形例1相同的效果。另外，注入口部8的注入口開口端8a的位置也可位于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠上的位置。此時(shí)，本變形例發(fā)揮與上述變形例2相同的效果。

本變形例中，從基材部3厚度方向上的下側(cè)(下面)(圖11中符號(hào)d1所示的方向)進(jìn)行熒光、發(fā)光或顯色等檢測(cè)時(shí)，由于構(gòu)成廢液容器部31的底面31a的部位厚，因此可以緩和來自積存在廢液容器部31內(nèi)的廢液的熒光或廢液自身顏色等的影響。

此外，還可以將各種液體從排出口部9注入、將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例5)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例5進(jìn)行說明。圖12為表示本變形例的構(gòu)成的俯視圖。圖13為圖12的c-c線的截面圖。

本變形例的生物體成分解析試劑盒1c中，在設(shè)置于注入口部8與排出口部9之間、在基材部3的厚度方向上不與廢液容器部31重疊的區(qū)域a1中，可以進(jìn)行反應(yīng)及檢測(cè)。該區(qū)域a1中設(shè)置有能夠從基材部3的厚度方向的下側(cè)(下面)(圖13中符號(hào)d1所示的方向)或從基材部3的厚度方向的上側(cè)(上面)(圖13中符號(hào)d2所示的方向)進(jìn)行熒光、發(fā)光或顯色等的檢測(cè)的區(qū)域。

本變形例中，可以在不受到廢液的有無或廢液量的影響的情況下進(jìn)行微小孔陣列層5中的熒光、發(fā)光或顯色等的檢測(cè)。

另外，還可以將各種液體從排出口部9注入、將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例6)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例6進(jìn)行說明。圖14為表示本變形例的構(gòu)成的俯視圖。圖15為圖14的d-d線的截面圖。圖16為表示圖14的d-d線的截面的立體圖。圖17為表示本變形例的間隔構(gòu)件32的俯視圖。圖18a、圖18b及圖18c為表示間隔構(gòu)件32的其他構(gòu)成的俯視圖。圖19為具備本變形例的微小孔陣列層5的基材部3的俯視圖。

從圖14～圖16所示可知，本變形例的生物體成分解析試劑盒1d中，與上述變形例5同樣，按照可以在不受到廢液的有無或廢液量的影響的情形下進(jìn)行微小孔陣列層5中的熒光、發(fā)光或顯色等檢測(cè)的方式，在注入口部8與排出口部9之間具有按照在基材部3的厚度方向上不與廢液容器部31重疊的方式配置有微小孔陣列層5的區(qū)域a1。

另外，本變形例中，注入口部8形成為漏斗狀，可以順暢地引導(dǎo)用于向注入口部8注入液體的移液管吸頭等。注入口部8的位置也可對(duì)應(yīng)于現(xiàn)有96孔板中的各孔的中央位置。即，本變形例中，還可以在96孔板的各孔中央位置(96處)中的48處配置有注入口部8。由此，可以容易地使其對(duì)應(yīng)現(xiàn)有elisa裝置的分配動(dòng)作。

另外，連接于廢液容器部31的排出口部9與上述變形例1同樣，按照排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a位于較廢液容器部31的底面更靠上的位置的方式進(jìn)行成型。

如圖17所示，間隔構(gòu)件32將圖15所示的注入口部8與排出口部9連接，產(chǎn)生能夠?qū)⒃噭┑纫后w儲(chǔ)存在注入口部8與排出口部9之間的空隙。

另外，如圖18a及圖18b所示，間隔構(gòu)件32只要具有對(duì)應(yīng)于注入口部8的位置的入口部32x、對(duì)應(yīng)于排出口部9的位置的出口部32z、及將入口部32x與出口部32z連接的流路部32y即可，并非限定于圖17所示的構(gòu)造。

例如，作為間隔構(gòu)件32的其他構(gòu)成例示于圖18a中的構(gòu)成中，按照將不與廢液容器部31重疊的區(qū)域a1(參照?qǐng)D19)中的2個(gè)連接的方式設(shè)置流路部32y。

另外，例如作為間隔構(gòu)件32的其他構(gòu)成例示于圖18b的構(gòu)成中，在中間夾著不與廢液容器部31重疊的區(qū)域a1(參照?qǐng)D19)的情況下設(shè)置入口部32x，在與入口部32x相反的位置上設(shè)置流路部32y的一端，將流路部32y的另一端拉回至入口部32x側(cè)，出口部32z位于入口部32x的附近。

另外，如圖18c所示，在間隔構(gòu)件32中注入口部8的附近還可形成有用于保持固體狀試劑的凹處32a。在該凹處中可以保持有待在檢測(cè)馬上開始之前進(jìn)行混合的各種試劑。試劑等液體通過注入口部8流過，從而配置于凹處的試劑溶解到該液體中，由此可以發(fā)生反應(yīng)。

本變形例中，在位于注入口部8與排出口部9之間的大致長(zhǎng)方形狀的區(qū)域a1(參照?qǐng)D15)內(nèi)可以檢測(cè)熒光、顯色或發(fā)光的反應(yīng)。

如圖14及圖19所示，本變形例中，可以在微小孔陣列層5中最多48處發(fā)生互不相同的反應(yīng)。另外，在微小孔陣列層5中能夠發(fā)生互不相同的反應(yīng)的上限并非限定于48處。

另外，蓋部7a及間隔構(gòu)件32的形狀并非限定于上述形狀。

例如，如圖20～圖22所示，注入口部8及排出口部9可以均為漏斗狀。

另外，如圖23及圖24所示，可以注入口部8的內(nèi)表面由多個(gè)平面構(gòu)成，注入口部8形成為錐狀，按照向基材部3側(cè)逐漸變小、變窄的方式(按照注入口部8的直徑減小的方式)來構(gòu)成。

此外，還可以將各種液體從排出口部9注入，將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例7)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例7進(jìn)行說明。圖25為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖25所示，本變形例中，注入口部8具有漏斗狀。注入口部8的內(nèi)部形狀按照液體不會(huì)因毛細(xì)管現(xiàn)象而貯存在注入口部8的方式較大地構(gòu)成。本變形例中，通過將試劑等液體滴加到注入口部8中，利用試劑等液體的自重對(duì)試劑等液體進(jìn)行送液。

例如，將含有檢測(cè)對(duì)象物或試劑等的液體通過注入口部8利用該液體的自重進(jìn)行送液之后，如果將比重高于該液體的油層疊在注入口部8上，則在油因自重從注入口部8流至排出口部9的過程中，可以將微小孔陣列層5的各孔6(參照第1實(shí)施方式)分別地密封。

本變形例中，當(dāng)含有檢測(cè)對(duì)象物或試劑等的液體的比重大致為1時(shí)，油的比重可以例如為1.8左右。

(變形例8)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例8進(jìn)行說明。圖26為表示本變形例的構(gòu)成的俯視圖。圖27為圖26的e-e線的截面圖。

如圖26及圖27所示，在本變形例的生物體成分解析試劑盒1e中，在注入口部8側(cè)也構(gòu)成有廢液容器部31。構(gòu)成在注入口部8側(cè)的廢液容器部31可以在將液體從排出口部9送液至注入口部8側(cè)時(shí)、對(duì)從注入口部8溢出的液體進(jìn)行儲(chǔ)存。

本變形例中，可以實(shí)施將含有檢測(cè)對(duì)象物或試劑等的液體從注入口部8送液、之后將油從排出口部9送液的使用方法。將油從排出口部9送液時(shí)，從注入口部8溢出的試劑及油儲(chǔ)存在設(shè)置于注入口部8側(cè)的廢液容器部31中。儲(chǔ)存于設(shè)置在注入口部8側(cè)的廢液容器部31中的液體不會(huì)與儲(chǔ)存在設(shè)置于排出口部9側(cè)的廢液容器部31中的液體發(fā)生混合。

此外，還可以將各種液體從排出口部9注入，將剩余的液體從注入口部8排出。

(變形例9)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例9進(jìn)行說明。圖28為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖28所示，本變形例的不同之處在于：在上述第3實(shí)施方式的生物體成分解析試劑盒1b中，蓋部7a是由不透光的材料構(gòu)成的。此時(shí)，在基材部3的厚度方向上自下側(cè)對(duì)熒光、發(fā)光或顯色進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，不容易受到積存在廢液容器部31中的廢液的影響。

另外，本變形例中，蓋部7a還可以由選擇性地不透過特定波長(zhǎng)的光的材料構(gòu)成。本變形例中的不透過可以是對(duì)特定波長(zhǎng)的光進(jìn)行吸收，也可以是對(duì)特定波長(zhǎng)的光進(jìn)行反射。例如，蓋部7a可以具有雖透過可見光但紫外線不透過等的構(gòu)成。此時(shí)，蓋部7a為用于檢測(cè)熒光的激發(fā)光會(huì)透過、但由該激發(fā)光產(chǎn)生的熒光則不透過。其結(jié)果是，在基材部3的厚度方向上從下側(cè)(下面)照射激發(fā)光且從下側(cè)(下面)觀察熒光時(shí)，難以受到廢液容器部31內(nèi)的液體的影響，還可進(jìn)行以透過蓋部7a的可見光為照明光的明視野的觀察。

(變形例10)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例10進(jìn)行說明。圖29為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

如圖29所示，本變形例中，蓋部7a具有用于使進(jìn)入微小孔陣列層5與蓋部7a之間的氣泡移動(dòng)至蓋部7a外的過濾器33。過濾器33具有能夠使氣體透過但無法使液體透過的構(gòu)造。

另外，本變形例中與上述第3實(shí)施方式同樣地設(shè)置注入口部8及排出口部9。

本變形例中，將設(shè)置在蓋部7a的過濾器33配置在注入口部8的下游且注入口部8的附近。由此，混入到試劑或油等中的氣泡在到達(dá)微小孔陣列層5中用于檢測(cè)的區(qū)域之前即被過濾器33捕獲。

(變形例11)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例11進(jìn)行說明。圖30為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

本變形例中，代替上述變形例10所公開的過濾器33而在蓋部7a上形成有用于儲(chǔ)存氣泡的凹處33a。

形成于蓋部7a的凹處33a的位置與上述變形例10同樣，優(yōu)選為注入口部8的下游且注入口部8的附近。即便是這種構(gòu)成，也可發(fā)揮與上述變形例10相同的效果。

另外，本變形例中，相比較于具備上述變形例10所公開的過濾器33的情況，還可以效率良好地將較大的氣泡捕獲。

(變形例12)

接著，對(duì)本實(shí)施方式的變形例12進(jìn)行說明。圖31為表示本變形例的構(gòu)成的截面圖。

本變形例中具有抵接于注入口部8的注入口開口端8a且形成有能夠?qū)⒁埔汗芪^40插入到注入口部8的貫通孔34a的轉(zhuǎn)接頭34。

轉(zhuǎn)接頭34在與對(duì)試劑或油進(jìn)行送液時(shí)所使用的移液管吸頭40相組合的狀態(tài)下進(jìn)行使用。轉(zhuǎn)接頭34的外形形狀并無特別限定。本實(shí)施方式的轉(zhuǎn)接頭34的外形形狀是在轉(zhuǎn)接頭34上安裝了移液管吸頭40時(shí)、朝向移液管吸頭40的前端直徑逐漸減小的圓錐臺(tái)狀。

本變形例中，例如當(dāng)在移液管吸頭40上安裝轉(zhuǎn)接頭34、將移液管吸頭40的前端插入到注入口部8中時(shí)，轉(zhuǎn)接頭34抵接于注入口開口端8a。由此，將蓋部7a向基材部3側(cè)擠壓。其結(jié)果是，通過蓋部7a與基材部3之間的空隙的容積減少，位于蓋部7a與基材部3之間的液體從注入口部8及排出口部9稍有漏出。此時(shí)，當(dāng)注入口部8的注入口開口端8a附近具有氣泡時(shí)，通過將氣泡從注入口開口端8a擠出，在移液管吸頭40內(nèi)的試劑或油的送液時(shí)，難以將位于注入口開口端8a附近的氣泡卷入。

(變形例13)

接著，對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式的變形例13進(jìn)行說明。圖32a為表示本變形例的生物體成分解析試劑盒1f的構(gòu)成的立體圖。另外，圖32b中示出了生物體成分解析試劑盒1f的俯視圖1f1(相當(dāng)于蓋部7a的俯視圖7aa)、a-a截面的截面圖1f2、b-b截面的截面圖1f3和側(cè)視圖1f4以及密封構(gòu)件101的俯視圖及蓋部7a的底面圖7ab。

如圖32a和32b所示，本變形例的生物體成分解析試劑盒1f與上述變形例6同樣，按照可以在不受廢液的有無或廢液量的影響的情況下進(jìn)行微小孔陣列層5的熒光、發(fā)光或顯色等的檢測(cè)的方式，在注入口部8與排出口部9之間具有按照在基材部3的厚度方向上不與廢液容器部31重疊的方式配置有微小孔陣列層5的區(qū)域a1。

另外，本變形例中，注入口部8形成為漏斗狀，可以順暢地引導(dǎo)用于向注入口部8注入液體的移液管吸頭等。

另外，連接于本變形例的廢液容器部31的排出口部9如圖32a和圖32b所示，與注入口部8同樣地排出口部9為漏斗狀，排出口部9具有能夠順暢地引導(dǎo)移液管吸頭等的形狀。

本變形例中，與變形例8同樣，可以實(shí)施將含檢測(cè)對(duì)象物或試劑等的液體從注入口部8送液之后、將油從排出口部9送液的使用方法。

將含有檢測(cè)對(duì)象物或試劑等的液體從注入口部8注入之后，液體通過排出口部9從蓋部7a與基材部3之間的空隙流入至廢液容器部31。由于廢液容器部31和排出口部9周邊存在液體，因此在使用移液管等將油從排出口部9注入時(shí)，空氣難以混入到蓋部7a與基材部3之間的空隙的液體中。

即，根據(jù)本變形例，在將油注入到蓋部7a與基材部3之間的空隙的液體時(shí)，易于防止空氣的混入。

因此，根據(jù)本變形例，在液體的注液時(shí)即將氣泡進(jìn)入到填充于蓋部7a與基材部3之間的空隙的液體中的可能性降低，因而能夠以簡(jiǎn)單的操作進(jìn)行精度良好的定量分析。

如圖32b所示，密封構(gòu)件101與其他變形例中的間隔構(gòu)件32同樣，將圖32b所示的注入口部8與排出口部9連接，產(chǎn)生能夠在注入口部8與排出口部9之間儲(chǔ)存試劑等液體的空隙。

另外，與圖18a及圖18b所示的間隔構(gòu)件32同樣，密封構(gòu)件101只要具有對(duì)應(yīng)于注入口部8的位置的入口部、對(duì)應(yīng)于排出口部9的位置的出口部及連接入口部和出口部的流路部即可，并非限于圖32b所示的構(gòu)造。

本變形例中，可以在位于注入口部8與排出口部9之間的大致長(zhǎng)方形狀的區(qū)域a1(參照?qǐng)D32b)內(nèi)對(duì)熒光、顯色或發(fā)光的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。

此外，還可以將圖32a和圖32b所示的一列式的試劑盒中的“1個(gè)注入口部8、1個(gè)區(qū)域a1、1個(gè)排出口部9和1個(gè)廢液容器部31”作為1個(gè)單元進(jìn)行使用。即，本變形例的生物體成分解析試劑盒1f可以作為一列式的試劑盒進(jìn)行使用，也可以從該一列式的試劑盒中切割出各個(gè)單元、作為單獨(dú)的分析試劑盒進(jìn)行使用。

另外，圖32a中示出了一列式的試劑盒，但如其他的變形例所示，本變形例的生物體成分解析試劑盒1f也可具有96孔式的形狀。此時(shí)，注入口部8的位置也可對(duì)應(yīng)于現(xiàn)有的96孔板的各孔的中央位置。即，本變形例中，還可以在96孔板的各孔的中央位置(96處)中的48處配置注入口部8。由此，可以使其容易地對(duì)應(yīng)現(xiàn)有elisa裝置的分配動(dòng)作。

另外，圖32b中示出了密封構(gòu)件101與基板4和微小孔陣列層5所形成的基材部3單獨(dú)設(shè)置的構(gòu)成，但也可以具有密封構(gòu)件101和基材部3一體形成的構(gòu)成。

(變形例14)

接著，對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式的變形例14進(jìn)行說明。圖33a為表示本變形例的生物體成分解析試劑盒1g的構(gòu)成的立體圖。另外，圖33b中示出了生物體成分解析試劑盒1g的俯視圖1g1(相當(dāng)于蓋部7a的俯視圖7aa)、a-a截面的截面圖1g2、左側(cè)視圖1g3和右側(cè)視圖1g4、密封構(gòu)件101的俯視圖及蓋部7a的底面圖7ab。

如圖33a和33b所示，本變形例的生物體成分解析試劑盒1g與上述變形例6同樣，按照可以在不受到廢液的有無或廢液量的影響的情況下進(jìn)行微小孔陣列層5的熒光、發(fā)光或顯色等檢測(cè)的方式，在注入口部8與排出口部9之間具有按照在基材部3的厚度方向上不與廢液容器部31重疊的方式配置有微小孔陣列層5的區(qū)域a1。

另外，本變形例中，注入口部8形成為漏斗狀，可以順暢地導(dǎo)引用于向注入口部8注入液體的移液管吸頭等。

如圖33b所示，本變形例中，當(dāng)在基材部3的厚度方向上將基材部3定義為下側(cè)、蓋部7a定義為上側(cè)時(shí)，注入口部8的注入口開口端8a的位置位于較排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a更靠下的位置。進(jìn)而，排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a位于較廢液容器部31的底面更靠上的位置。

本變形例中，將各種液體從注入口開口端8a進(jìn)行送液直至液體從排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a進(jìn)入至廢液容器部31內(nèi)之后，如果開放注入口開口端8a，則在注入口部8與排出口部9的各自液面的高度因重力而達(dá)到一致的過程中，以位于排出口部9內(nèi)的液量為上限，液體從入口開口端8a發(fā)生逆流。因此，即便在注入口開口端8a附近有氣泡，該氣泡因液體的逆流而流動(dòng)，從注入口開口端8a被擠出到外部。本變形例中，在注入口部8的附近，在基材部3與蓋部7a之間難以滯留氣泡。

進(jìn)而，本變形例中，由于排出口部9的廢液容器部側(cè)開口端9a位于較廢液容器部31的底面更靠上的位置，因此進(jìn)入廢液容器部31內(nèi)的液體難以通過排出口部9逆流至基材部3與蓋部7a之間的空隙。

此外，本變形例的生物體成分解析試劑盒1g中，按照廢液容器部31的容積比試劑和油的注入量的總量還大的方式來形成廢液容器部31。因而，當(dāng)注入試劑和油時(shí)，沒有液體從廢液容器部31漏出至生物體成分解析試劑盒1g外部的顧慮。

如圖33b所示，密封構(gòu)件101與上述第13變形例同樣，將圖33b所示注入口部8與排出口部9連接，在注入口部8與排出口部9之間產(chǎn)生能夠儲(chǔ)存試劑等液體的空隙。

另外，與第13變形例同樣，密封構(gòu)件101只要具有對(duì)應(yīng)于注入口部8的位置的入口部、對(duì)應(yīng)于排出口部9的位置的出口部及連接入口部和出口部的流路部即可，并非限定于圖33b所示的構(gòu)造。

本變形例中，可以在位于注入口部8與排出口部9之間的大致長(zhǎng)方形狀的區(qū)域a1(參照?qǐng)D33b)內(nèi)對(duì)熒光、顯色或發(fā)光的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。

此外，還可以將圖33a和圖33b所示一列式的試劑盒中的“1個(gè)注入口部8、1個(gè)區(qū)域a1、1個(gè)排出口部9和1個(gè)廢液容器部31”作為1個(gè)單元進(jìn)行使用。即，本變形例的生物體成分解析試劑盒1g可以作為一列式的試劑盒進(jìn)行使用，也可以從該一列式的試劑盒中切割出各個(gè)單元、作為單獨(dú)的分析試劑盒進(jìn)行使用。

另外，圖33a中示出了一列式的試劑盒，但如其他的變形例所示，試劑盒也可具有96孔式的形狀。此時(shí)，注入口部8的位置也可對(duì)應(yīng)于現(xiàn)有的96孔板的各孔的中央位置。即，本變形例中，還可以在96孔板的各孔的中央位置(96處)中的48處配置注入口部8。由此，可以使其容易地對(duì)應(yīng)現(xiàn)有elisa裝置的分配動(dòng)作。

另外，圖33b中示出了密封構(gòu)件101與基板4和微小孔陣列層5所形成的基材部3單獨(dú)設(shè)置的構(gòu)成，但也可以具有密封構(gòu)件101和基材部3一體形成的構(gòu)成。

(變形例15)

接著，對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式的變形例15進(jìn)行說明。圖34為用于說明本變形例的作用的圖。

上述變形例13和14中示出了也可將一列式的試劑盒切割成各個(gè)單元進(jìn)行使用，但如圖34所示，也可使用將基材部3和密封構(gòu)件101一體形成、具有杯狀、管狀的容器103。

此時(shí)，可以不形成流路、而是在分批式容器103中填滿液體的狀態(tài)下進(jìn)行將核酸等生物體成分102導(dǎo)入至孔6的操作和檢測(cè)操作。

另外，還可在容器103中設(shè)置多個(gè)孔6。

在使用圖34所示的分批式容器103時(shí)，如果在制造工序時(shí)預(yù)先將水性溶液10填充在孔6中，則試劑盒的使用者在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行分析試驗(yàn)時(shí)，作為檢測(cè)對(duì)象的核酸等生物體成分102擴(kuò)散到孔6內(nèi)，將生物體成分102導(dǎo)入到孔6內(nèi)，能夠進(jìn)行檢測(cè)。

另一方面，在制造工序中未預(yù)先將水性溶液10填充到孔6中時(shí)，試劑盒的使用者在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行分析試驗(yàn)時(shí)，難以對(duì)進(jìn)入孔6內(nèi)的氣泡進(jìn)行脫氣。

因此，本變形例中，優(yōu)選在制造工序時(shí)將水性溶液10預(yù)先填充到孔6中。

此外，本變形例的核酸等生物體成分的導(dǎo)入操作、檢測(cè)及觀察等分析操作可以與上述實(shí)施方式同樣地實(shí)施。

此外，上述實(shí)施方式的生物體成分的導(dǎo)入方法中作為一例示出了核酸的導(dǎo)入方法，但也可以是含有dna、rna、mirna、mrna、蛋白質(zhì)、外來體、脂質(zhì)體及細(xì)胞等的生物體成分的導(dǎo)入方法。

本實(shí)施方式的生物體成分的導(dǎo)入方法可以與上述核酸導(dǎo)入方法同樣地進(jìn)行，生物體成分并非僅限定于核酸。

另外，同樣地，上述實(shí)施方式的核酸檢測(cè)方法、生物體成分解析方法、生物體成分定量用陣列器件及生物體成分解析試劑盒中也可以以含有dna、rna、mirna、mrna、蛋白質(zhì)、外來體、脂質(zhì)體及細(xì)胞等的生物體成分等為對(duì)象，分析對(duì)象并非限定于上述實(shí)施方式。

實(shí)施例

接著，示出實(shí)施例詳細(xì)地說明本發(fā)明的上述實(shí)施方式的核酸導(dǎo)入方法(生物體成分導(dǎo)入方法)、生物體成分解析方法、核酸定量用陣列器件2及生物體成分解析試劑盒1。此外，下述實(shí)施例為適用本發(fā)明的具體的一例，對(duì)本發(fā)明并沒有任何限定。

＜核酸定量用陣列器件的制作＞

在0.5mm厚的玻璃制基板4上旋涂疏水性樹脂cytop(注冊(cè)商標(biāo))(旭硝子制)，在180℃下使其熱固化3小時(shí)，使用光刻技術(shù)制作具有100萬個(gè)直徑為5μm的孔的基材部3。通過對(duì)cytop(注冊(cè)商標(biāo))進(jìn)行旋涂而形成在基板4上的層通過光刻法而成型，由此形成上述實(shí)施方式所公開的微小孔陣列層5。通過對(duì)cytop(注冊(cè)商標(biāo))進(jìn)行旋涂而形成在基板4上的層的厚度為3μm。

接著，按照與基材部3的空隙達(dá)到100μm的方式，將作為蓋部7的蓋玻璃設(shè)置在基材部3上?；牟?與蓋部7之間配設(shè)有由膠帶構(gòu)成的間隔物。進(jìn)而，向基材部3與蓋部7之間送液作為置換液的不含核酸的水性液體，在直徑為5μm的孔和基材部3與蓋部7之間的空隙的全部中都填滿水性液體。本實(shí)施例中，水性液體的組成是20μmmopsph7.5、15mmnacl、6.25mmmgcl2。

＜試樣與檢測(cè)反應(yīng)試劑的混合液的送液＞

將侵入反應(yīng)試劑(2μm等位基因探針、1μm侵入寡核苷酸、1μmfam標(biāo)記臂、20μmmopsph7.5、15mmnacl、6.25mmmgcl2、50u/μlcleavase(注冊(cè)商標(biāo)))和人工合成dna混合，將該混合液x送液至基材部3與蓋部7之間的空隙。這里，關(guān)于人工合成dna的濃度，按照1分子進(jìn)入形成于基材部3上的直徑5μm的1個(gè)孔的方式、按照人工合成dna的濃度達(dá)到30pm的方式，將人工合成dna添加到混合液x中。

直徑為5μm、高度為3μm的圓柱的微小孔為59fl的體積，依據(jù)泊松分布假設(shè)的話，推測(cè)在30pm的人工合成dna濃度下，進(jìn)入到100萬個(gè)微小孔中65％的微小孔。對(duì)侵入反應(yīng)試劑和人工合成dna的混合物進(jìn)行送液后，作為油性密封液12，將fc-40(sigma)送液至基材部3與蓋部7之間的空隙中，將直徑為5μm的孔密封，從而構(gòu)成100萬個(gè)獨(dú)立的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a。

＜熒光強(qiáng)度的測(cè)定＞

接著，使用62℃的烘箱對(duì)具有100萬個(gè)獨(dú)立的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a的本實(shí)施例的核酸定量用陣列器件2進(jìn)行孵育，15分鐘后取出，利用熒光顯微鏡進(jìn)行拍攝，對(duì)各孔的熒光強(qiáng)度進(jìn)行觀察。這里，反應(yīng)后的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a使用熒光顯微鏡(zeiss公司、ax10)、光源(lej公司、fluoarc001.26ausablewithhbo10)、傳感器(hamamatsuphotonics公司、em-ccdc9100)、濾光器(奧林巴斯公司、u-mniba2)、解析軟件(hamamatsuphotonics公司、aquacosmos2.6：曝光時(shí)間488ms、em增益120、補(bǔ)償0、binning×1)進(jìn)行拍攝，計(jì)算相對(duì)于自發(fā)熒光具有充分的s/n比地發(fā)出熒光的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a的數(shù)量。

圖35為表示本實(shí)施例的生物體成分解析結(jié)果的照片。本實(shí)施例中，如圖35所示，從核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a的總數(shù)中約65％的核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a觀察到因侵入反應(yīng)產(chǎn)生的熒光發(fā)光。這與基于上述泊松分布的推測(cè)是一致的，顯示了：對(duì)核酸檢測(cè)反應(yīng)容器6a優(yōu)選地放入侵入反應(yīng)試劑和人工合成dna，進(jìn)行侵入反應(yīng)，獲得了對(duì)應(yīng)于人工合成dna濃度的測(cè)量結(jié)果。

以上，參照附圖及實(shí)施例詳述了本發(fā)明的實(shí)施方式，但具體的構(gòu)成并非限定于該實(shí)施方式，還包含不脫離本發(fā)明主旨的范圍的設(shè)計(jì)變更等。

符號(hào)說明

1、1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g生物體成分解析試劑盒

2、2a、2b1～2b96核酸定量用陣列器件

3基材部

4基板

4a基板的表面

5微小孔陣列層

5a貫通孔

6孔

6a底面部

6a核酸檢測(cè)反應(yīng)容器

7、7a蓋部

8注入口部

8a注入口開口端

9排出口部

9a廢液容器部側(cè)開口端

10水性溶液

11檢測(cè)反應(yīng)試劑

12油性密封液

20電極

21布線

22連接器

31廢液容器部

32間隔構(gòu)件

32a貫通孔

33過濾器

34轉(zhuǎn)接頭

40移液管吸頭

101密封構(gòu)件

102生物體成分

103容器