發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明提供了為bace1抑制劑的化合物。本發(fā)明的單獨(dú)方面涉及包括所述化合物的藥物組合物以及這些化合物治療神經(jīng)變性和認(rèn)知障礙的用途。
背景技術(shù)：
癡呆是臨床綜合征，其特征在于無(wú)法通過(guò)正常衰老解釋的多個(gè)認(rèn)知區(qū)缺陷、功能顯著下降和無(wú)譫妄。另外，經(jīng)常存在神經(jīng)精神癥狀和病灶性神經(jīng)發(fā)現(xiàn)?；诓∫?qū)W，將癡呆進(jìn)一步分類。阿爾茨海默病(ad)是癡呆的最常見(jiàn)原因，其次是混合型ad和血管性癡呆、路易體癡呆(dlb)以及額顳葉癡呆。
β-淀粉樣沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)被認(rèn)為是與ad相關(guān)的主要病理性表征，ad由記憶、認(rèn)知、推理、判斷以及定向喪失表征。隨著疾病發(fā)展，還受影響的是運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)和語(yǔ)言能力，直到出現(xiàn)多種認(rèn)知功能的整體損害。β-淀粉樣沉積物主要是aβ肽的凝集體，該凝集體進(jìn)而作為β-成淀粉樣途徑的一部分是淀粉樣前體蛋白(app)蛋白水解的產(chǎn)物。aβ肽產(chǎn)生自由一種或多種γ-分泌酶在c-末端和β-分泌酶1(bace1)在n-末端切割app，該β-分泌酶1還稱為天冬氨酰蛋白酶2。bace1活性與從app生成aβ肽直接相關(guān)。
研究表明bace1的抑制妨礙aβ肽的產(chǎn)生。此外，bace1與其底物app共定位于高爾基體和胞吞區(qū)室中(威廉m(willemm)等人，細(xì)胞與發(fā)育生物學(xué)研討會(huì)(semin.celldev.biol)，2009，20，175-182)。小鼠敲除研究已經(jīng)證實(shí)了不存在淀粉樣蛋白肽形成，同時(shí)這些動(dòng)物是健康且能育的(大野m(ohnom)等人，疾病神經(jīng)生物學(xué)(neurobiol.dis.)，2007，26，134-145)。過(guò)量表達(dá)app的小鼠中bace1遺傳消除已經(jīng)證實(shí)了斑塊形成的不存在和認(rèn)知缺陷的逆轉(zhuǎn)(大野m(ohnom)等人，神經(jīng)元(neuron)；2004，41，27-33)。在散發(fā)性ad患者的腦中bace1水平升高了(漢佩爾(hampel)和沈(shen)，臨床與實(shí)驗(yàn)室研究斯堪的納維亞雜志(scand.j.clin.lab.invest.)2009，69，8-12)。
這些匯聚的發(fā)現(xiàn)表明，bace1的抑制可以作為用于治療ad以及aβ沉積的減少對(duì)其而言有益的障礙的治療靶標(biāo)。
阿斯利康公司(astrazeneca)于2012年10月通告了azd3839的發(fā)現(xiàn)，azd3839是一種用于治療ad的有效的bace1抑制劑臨床候選物(杰普遜，f.(jeppsson,f.)等人，生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)，2012，287，41245-41257)。導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)azd3839的努力被進(jìn)一步描述于吉恩曼，t.(ginman,t.)等人，藥物化學(xué)雜志(j.med.chem.)，2013，56，4181-4205中。吉恩曼(ginman)公開物描述了克服與azd3839的發(fā)現(xiàn)與鑒定相聯(lián)系的問(wèn)題。這些問(wèn)題涉及這些化合物的弱的血腦屏障穿透性和p-糖蛋白介導(dǎo)的外排，從而導(dǎo)致缺乏腦暴露。
吉恩曼(ginman)原稿假定腦暴露中的這些差異在很大程度上歸因于核心結(jié)構(gòu)并且提供了結(jié)構(gòu)活性關(guān)系數(shù)據(jù)，其中根據(jù)核心亞型，將報(bào)道的化合物的體外特性在四個(gè)表中給出。在表4中，描述了一系列含脒化合物，這些化合物從活性視角被認(rèn)為是令人感興趣的。然而，數(shù)據(jù)暗示含脒核心未展示出有利的血腦屏障穿透曲線。
來(lái)自豪夫邁·羅氏公司(hoffmann-laroche)和錫耶納生物技術(shù)(sienabiotech)的研究人員也報(bào)道了含脒化合物的發(fā)現(xiàn)(沃爾特林，t.j(woltering,t.j.)等人，生物有機(jī)化學(xué)與醫(yī)藥化學(xué)通訊(bioorg.med.chem.lett.)2013，23，4239-4243)。發(fā)現(xiàn)這些化合物(該文章中的化合物17和18)不具有任何體內(nèi)作用(野生型小鼠腦中沒(méi)有aβ40減少)。
與吉恩曼(ginman)等人和沃爾特林，t.j(woltering,t.j.)等人的教導(dǎo)相反，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一系列脒化合物，這些脒化合物是腦穿透性的。因此，本發(fā)明涉及具有bace1抑制活性的新穎化合物、涉及其制備、涉及其醫(yī)學(xué)用途并且涉及包括它們的藥物。
發(fā)明概述
本發(fā)明的目的是提供抑制bace1的化合物。因此，本發(fā)明涉及具有化學(xué)式i的化合物
其中ar選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基和異噁唑基，并且其中該ar任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素、cn、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c1-c6氟烷基或c1-c6烷氧基取代；并且
r1和r2獨(dú)立地是氫、鹵素、c1-c3氟烷基或c1-c3烷基；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在本發(fā)明的單獨(dú)實(shí)施例中，該化合物選自披露于實(shí)驗(yàn)部分的示例化合物中的一種。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明提供了一種治療患有神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙的受試者的方法，該方法包括向所述受試者給予治療有效量的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物是根據(jù)化學(xué)式ia的化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在一個(gè)實(shí)施例中，r1和r2獨(dú)立地是h或f，具體地r1是f并且r2是h，或r1和r2兩者均是f。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar任選地被一個(gè)或多個(gè)選自f、cl、cn、c1-c3烷基、c1-c3氟烷基或c1-c3烷氧基的取代基取代。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的苯基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的吡啶基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的嘧啶基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的吡嗪基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的咪唑基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的吡唑基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的噻唑基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的噁唑基。
在一個(gè)實(shí)施例中，ar是任選地經(jīng)取代的異噁唑基。
在一個(gè)實(shí)施例中，該化合物選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-(二氟甲基)-1h-吡唑-3-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基嘧啶-2-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氟吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氯吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氰基-3-甲基吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺
(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-溴吡啶酰胺
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
一個(gè)單獨(dú)的實(shí)施例涉及包括來(lái)自以上列表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例涉及治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的來(lái)自以上列表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及來(lái)自以上列表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙的藥物的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及來(lái)自以上列表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙的方法中使用。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及來(lái)自以上列表的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于在療法中使用。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明
本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)：具有化學(xué)式i的化合物是bace1的抑制劑，并且正因?yàn)槿绱丝捎糜谥委熛嚓P(guān)障礙。下文更加詳細(xì)地解釋本發(fā)明的某些方面，但是本說(shuō)明書不旨在是可以實(shí)施本發(fā)明的所有不同方式或可以添加到本發(fā)明中的所有特征的詳細(xì)編錄。因此，以下說(shuō)明旨在闡明本發(fā)明的一些實(shí)施例，并不旨在完全詳盡地說(shuō)明其所有排列、組合以及變化。
如在此所使用，術(shù)語(yǔ)“c1-c6烷基”是指具有從一個(gè)至六個(gè)(包含端值)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴。c1-c6烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基、正戊基和正己基。類似地，術(shù)語(yǔ)“c1-c3烷基”是指具有從一個(gè)至三個(gè)(包含端值)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴。此類取代基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基和正丙基。
同樣地，術(shù)語(yǔ)“c1-c6烷氧基”是指具有從一個(gè)至六個(gè)(包含端值)碳原子并且開放原子價(jià)在氧上的直鏈或支鏈飽和烷氧基基團(tuán)。c1-c6烷氧基的實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丁氧基、叔丁氧基和正己氧基?！癱1-c6烷氧基”任選地被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代。
如在此所使用，術(shù)語(yǔ)“c1-c6氟烷基”是指具有從一個(gè)至六個(gè)(包含端值)碳原子的被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的直鏈或支鏈飽和烴。c1-c6氟烷基的實(shí)例包括但不限于三氟甲基、五氟乙基、1-氟乙基、單氟甲基、二氟甲基、1,2-二氟乙基和3,4-二氟己基。類似地，術(shù)語(yǔ)“c1-c3氟烷基”是指具有從一個(gè)至三個(gè)(包含端值)碳原子、每個(gè)碳原子被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的直鏈或支鏈飽和烴。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語(yǔ)“c2-c6烯基”是指具有從兩個(gè)至六個(gè)碳原子和一個(gè)雙鍵的支鏈或非支鏈烯基，包括但不限于乙烯基、丙烯基和丁烯基。
術(shù)語(yǔ)“c2-c6-炔基”應(yīng)意指具有從兩個(gè)至六個(gè)碳原子和一個(gè)三鍵的支鏈或非支鏈炔基，包括但不限于乙炔基、丙炔基和丁炔基。
如在此所使用，當(dāng)應(yīng)用于本發(fā)明的化合物時(shí)，短語(yǔ)“有效量”旨在表示足以引起預(yù)期的生物效應(yīng)的量。當(dāng)應(yīng)用于本發(fā)明的化合物時(shí)，短語(yǔ)“治療有效量”旨在表示足以改善、減輕、穩(wěn)定、逆轉(zhuǎn)、減慢或延緩障礙或疾病狀態(tài)的進(jìn)展、或者該障礙或疾病的癥狀的進(jìn)展的該化合物的量。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了給予化合物組合的方法。在此類情況下，“有效量”是足以引起預(yù)期的生物效應(yīng)的此類組合中的本發(fā)明的化合物的量。
如在此所使用，術(shù)語(yǔ)“治療(treatment)”或“治療(treating)”意指改善或逆轉(zhuǎn)疾病或障礙的進(jìn)展或嚴(yán)重性、或者改善或逆轉(zhuǎn)這樣的疾病或障礙的一種或多種癥狀或副作用。如在此所使用，“治療(treatment)”或“治療(treating)”還意指抑制或阻斷，如延遲、阻止、限制、阻礙或妨礙疾病或障礙的系統(tǒng)、病癥或狀態(tài)的進(jìn)展。出于本發(fā)明的目的，“治療(treatment)”或“治療(treating)”進(jìn)一步意指一種用于獲得有益的或希望的臨床結(jié)果的方法，其中“有益的或希望的臨床結(jié)果”包括但不限于癥狀的緩解、障礙或疾病程度的減小、穩(wěn)定的(即沒(méi)有惡化的)疾病或障礙狀態(tài)、疾病或障礙狀態(tài)的延緩或減慢、疾病或障礙狀態(tài)的改善或減輕、以及疾病或障礙的緩解，不論是部分地或全部地。
本發(fā)明還提供了治療疾病或障礙的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰牟溉閯?dòng)物給予治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中該疾病或障礙是神經(jīng)變性或認(rèn)知疾病或障礙。
如上所討論，預(yù)期本發(fā)明的化合物在治療阿爾茨海默病中有用，這是由于它們對(duì)β-淀粉樣沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)的作用。這包括家族性阿爾茨海默病，其中患者的特定基因上攜帶突變，這些基因與aβ肽的產(chǎn)生密切相關(guān)。然而，重要的是注意到，aβ肽的凝集體不限于家族性阿爾茨海默病，而是類似地，更普遍的散發(fā)性阿爾茨海默病的一個(gè)重要的病理生理特征[分子細(xì)胞神經(jīng)科學(xué)(molcellneurosci)，66，3-11，2015]。
還認(rèn)為本發(fā)明的化合物在治療早期阿爾茨海默病中有用，即生物學(xué)和結(jié)構(gòu)改變已經(jīng)開始，但是該疾病的臨床表現(xiàn)還未變得明顯或未很好地發(fā)展的疾病階段。事實(shí)上，早期阿爾茨海默病可以在該疾病的任何臨床表現(xiàn)變得明顯之前開始多年。早期阿爾茨海默病包括前驅(qū)阿爾茨海默病、臨床前阿爾茨海默病和輕度認(rèn)知損害。盡管輕度認(rèn)知損害可能與阿爾茨海默病無(wú)關(guān)，但它通常是阿爾茨海默病的過(guò)渡階段或是因阿爾茨海默病而產(chǎn)生的。臨床前和前驅(qū)阿爾茨海默病是無(wú)癥狀期，并且典型地它們通過(guò)阿爾茨海默病相關(guān)的生物標(biāo)記的存在而診斷出來(lái)。在此背景下，認(rèn)為本發(fā)明的化合物在減緩早期阿爾茨海默病的進(jìn)展(例如，輕度認(rèn)知損害到阿爾茨海默病)中有用。還認(rèn)為本發(fā)明的化合物在治療記憶喪失、注意力不足以及與阿爾茨海默病相關(guān)的癡呆中有用。
除了阿爾茨海默病的連續(xù)體之外，其他疾病的特征在于β-淀粉樣沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。這包括例如21三體綜合癥，又稱為唐氏綜合癥。罹患唐氏綜合癥的患者具有一條額外的21號(hào)染色體，該染色體包含淀粉樣前體蛋白(app)的基因。這條額外的21號(hào)染色體導(dǎo)致app的過(guò)度表達(dá)，由此導(dǎo)致增高的aβ肽水平，最終引起發(fā)展阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(見(jiàn)于唐氏綜合癥患者中)[阿爾茨海默病和癡呆(alzheimer’s&dementia)，11，700-709，201]。大腦淀粉樣血管病的特征也在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管中β-淀粉樣沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)[藥理學(xué)報(bào)告(pharmacolreports)，67，195-203，2015]，并且正因?yàn)槿绱?，預(yù)期也可用本發(fā)明的化合物進(jìn)行治療。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種治療疾病的方法，該疾病選自阿爾茨海默病(家族性或散發(fā)性)、臨床前阿爾茨海默病、前驅(qū)阿爾茨海默病、輕度認(rèn)知損害、唐氏綜合癥和大腦淀粉樣血管病，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了抑制患者的bace1的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明還提供了抑制淀粉樣前體蛋白的β-分泌酶介導(dǎo)的裂解的方法，該方法包括向?qū)@樣的治療有需要的患者給予治療有效量的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另外的實(shí)施例中，本發(fā)明提供了具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造治療疾病的藥物的用途，該疾病選自阿爾茨海默病(家族性或散發(fā)性)、臨床前阿爾茨海默病、前驅(qū)阿爾茨海默病、輕度認(rèn)知損害、唐氏綜合癥或大腦淀粉樣血管病。
本發(fā)明還提供了具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制造用于抑制bace1的藥物中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步提供了具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制造用于抑制aβ肽的產(chǎn)生或積累的藥物的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了在一種治療疾病的方法中使用的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，該疾病選自阿爾茨海默病(家族性或散發(fā)性)、臨床前阿爾茨海默病、前驅(qū)阿爾茨海默病、輕度認(rèn)知損害、唐氏綜合癥或大腦淀粉樣血管病。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及在抑制bace1的方法中或在抑制aβ肽的產(chǎn)生或積累的方法中使用的具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另外的實(shí)施例中，本發(fā)明提供了適于以上治療和用途中的任一種的藥物制劑。
在一個(gè)實(shí)施例中，哺乳動(dòng)物是人類。
在一個(gè)實(shí)施例中，該患者是人類患者。
本發(fā)明的化合物證實(shí)于bace1的有效抑制劑的實(shí)例中，并且能夠降低大鼠腦和血漿中的aβ肽的水平，并且因此認(rèn)為在治療神經(jīng)變性和認(rèn)知障礙中，所述化合物是有用的，這些障礙的病理學(xué)特征包括aβ沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)，例如像阿爾茨海默病。將本發(fā)明的化合物與在治療此類疾病例如阿爾茨海默病中有用的另一治療范例組合會(huì)是有益的。
τ蛋白在神經(jīng)元中是豐富的。τ蛋白是可溶的并且高度磷酸化不穩(wěn)定的，并且結(jié)合微管蛋白，提供微管蛋白組件的調(diào)節(jié)和調(diào)制，即最終提供微管結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性。在最脫磷酸化狀態(tài)中，τ蛋白可以僅關(guān)聯(lián)微管蛋白，并且磷酸化/脫磷酸化充當(dāng)控制微管蛋白關(guān)聯(lián)的開關(guān)。磷酸化的τ構(gòu)成為阿爾茨海默病的標(biāo)志之一的神經(jīng)原纖維纏結(jié)的重要部分。所謂的τ假設(shè)表明靶向這些病理學(xué)纏結(jié)，它的主要成分是磷酸化的τ蛋白，作為用于阿爾茨海默病的治療范例。具體地，免疫療法(主動(dòng)的和被動(dòng)的這二者)已經(jīng)表明作為用來(lái)靶向τ神經(jīng)原纖維纏結(jié)的方式。在主動(dòng)免疫療法中，將病原性抗原注射入患者，并且先天免疫系統(tǒng)引發(fā)免疫應(yīng)答。這觸發(fā)了b細(xì)胞的成熟，產(chǎn)生針對(duì)給予的抗原的高親和力抗體。在被動(dòng)免疫療法中，通過(guò)輸注針對(duì)抗原的特異性抗體來(lái)避免觸發(fā)先天免疫系統(tǒng)。建議固有清除系統(tǒng)然后去除結(jié)合抗體的配體。存在對(duì)于靶向磷酸化的τ蛋白作為對(duì)阿爾茨海默病的治療的主動(dòng)和被動(dòng)免疫療法二者的功效的實(shí)質(zhì)證據(jù)[阿爾茨海默病&癡呆(alzheimer’s&dementia)，7(4，增刊)s480-481；神經(jīng)科學(xué)雜志(jneurosci)30，16559-16556，2010；神經(jīng)科學(xué)雜志(jneurosci)，27，9115-9129，2007]。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的兩種組分(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)在主動(dòng)或被動(dòng)τ免疫療法中有用的化合物。在被動(dòng)τ免疫療法中有用的所述化合物可以是針對(duì)磷酸化的τ蛋白的抗體。在主動(dòng)τ免疫療法中有用的所述化合物可以是τ蛋白氨基酸序列的片段，該片段當(dāng)注射進(jìn)患者體內(nèi)時(shí)，在所述患者體內(nèi)引起抗磷酸化的τ蛋白抗體的產(chǎn)生。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例所述的給予可以是同時(shí)的，或者在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)τ免疫療法中有用的化合物在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)τ免疫療法中有用的化合物，其在治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法中使用。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)τ免疫療法中有用的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
用來(lái)治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的另一范例是靶向aβ肽。已經(jīng)表明，可以通過(guò)靶向aβ肽的被動(dòng)抑或主動(dòng)免疫療法實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)[神經(jīng)科學(xué)雜志(jneurosci)，34，11621-11630，2014；神經(jīng)科學(xué)雜志(jneurosci)33，4923-4934，2013]。與本發(fā)明的化合物組合，這將嘗試經(jīng)由兩個(gè)不同途徑靶向相同病理學(xué)機(jī)制?？筧β抗體(直接注射進(jìn)患者體內(nèi)，抑或作為主動(dòng)免疫療法的結(jié)果在患者體內(nèi)產(chǎn)生)清除在腦中的aβ沉積物，同時(shí)aβ肽的積累被本發(fā)明的化合物阻斷或減少。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括給予治療有效量的以下兩種組分至對(duì)其有需要的患者：(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)在主動(dòng)或被動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的化合物。在被動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的所述化合物可以是抗aβ肽抗體，例如gantenerumab、茄尼醇單抗、aducanumab或克瑞珠單抗(crenezumab)。在主動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的所述化合物可以是當(dāng)注射進(jìn)患者體內(nèi)時(shí)，在所述患者體內(nèi)引起抗aβ肽抗體的aβ肽氨基酸序列的片段。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例所述的給予可以是同時(shí)的，或在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的化合物在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的化合物，用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和在主動(dòng)或被動(dòng)aβ肽免疫療法中有用的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
nmda(n-甲基-d-天冬氨酸)受體拮抗劑美金剛和乙酰膽堿酯酶抑制劑多奈哌齊、卡巴拉汀和加蘭他敏是用于治療阿爾茨海默病的批準(zhǔn)藥物。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的以下兩種組分：(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)nmda受體拮抗劑或乙酰膽堿酯酶抑制劑。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例的給予可以是同時(shí)的，或在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和nmda受體拮抗劑或乙酰膽堿酯酶抑制劑在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和nmda受體拮抗劑或乙酰膽堿酯酶抑制劑，其用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和nmda受體拮抗劑或乙酰膽堿酯酶抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體。
驚厥或癲癇活動(dòng)還與阿爾茨海默病(包括阿爾茨海默病的早期階段)相關(guān)聯(lián)，并且爭(zhēng)取使海馬活動(dòng)過(guò)度正常化的所述癲癇活動(dòng)的治療可以形成阿爾茨海默病治療范例的一部分[jama神經(jīng)病學(xué)(jamaneurol)，70，1158-1166，2013；神經(jīng)科學(xué)研究雜志(jneuroscires)，93，454，465，2015；神經(jīng)元(neuron)，74，647-474，2012；神經(jīng)精神病藥物學(xué)(neurepsychpharm)，35，1016-1025，2010；cns神經(jīng)科學(xué)和治療學(xué)(cnsneuroscither)，19，871-881，2013]。有用的抗癲癇藥包括nmda受體拮抗劑和離子通道調(diào)制劑，例如托吡酯、左乙拉西坦和拉莫三嗪。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的以下兩種組分：(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)抗癲癇藥。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例的給予可以是同時(shí)的，或在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗癲癇藥在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗癲癇藥，其在治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法中使用。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗癲癇藥以及藥學(xué)上可接受的載體。
不斷出現(xiàn)的證據(jù)表明，炎癥在阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制中具有因果作用，并且神經(jīng)炎癥并不是由不斷出現(xiàn)的β-淀粉樣沉積物和神經(jīng)原纖維纏結(jié)激活的被動(dòng)系統(tǒng)，而是有助于發(fā)病機(jī)制自身[柳葉刀神經(jīng)病學(xué)(lancetneurol)，14，388-405，2015；阿爾茨海默病雜志(jalzdis)，44，385-396，2015；神經(jīng)病學(xué)(neurol)，84，2161-2168，2015]。由此得出抗炎藥例如nsaid(非甾體類抗炎藥)、tnfα抑制劑例如依那西普和p38map激酶抑制劑例如vx-745(5-(2,6-二氯苯基)-2-((2,4-二氟苯基)硫代)-6h-嘧啶并[1,6-b]噠嗪-6-酮)可以在治療阿爾茨海默病中有用。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的以下兩種組分：(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)抗炎藥。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例的給予可以是同時(shí)的，或在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗炎藥在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗炎藥，其用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和抗炎藥以及藥學(xué)上可接受的載體。
此外，已經(jīng)證明τ蛋白聚集抑制劑例如trx-0237(也稱為亞甲藍(lán))和ssri(選擇性羥色胺再攝取抑制劑)例如西酞普蘭在治療阿爾茨海默病中的功效[行為藥理學(xué)(behavpharmacol)，26，353-368，2015；科學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)(scitranslmed)，6(236re4)，2014]。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默病的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呓o予治療有效量的以下兩種組分：(1)具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和(2)τ蛋白聚集抑制劑或ssri。根據(jù)本發(fā)明的這一實(shí)施例的給予可以是同時(shí)的，或在兩種組分的給予之間可以存在時(shí)間間隔。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和τ蛋白聚集抑制劑或ssri在制造用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的藥物中的用途。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和τ蛋白聚集抑制劑或ssri藥，其用于治療神經(jīng)變性或認(rèn)知障礙例如阿爾茨海默病的方法。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包括具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和τ蛋白聚集抑制劑或ssri藥以及藥學(xué)上可接受的載體。
藥學(xué)上可接受的鹽
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的鹽，典型地是藥學(xué)上可接受的鹽。此類鹽包括藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。酸加成鹽包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸的鹽。
適合的無(wú)機(jī)酸的代表性實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸以及類似物。適合的有機(jī)酸的代表性實(shí)例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、反丁烯二酸、乙醇酸、衣康酸、乳酸、甲烷磺酸(methanesulfonic)、馬來(lái)酸、蘋果酸、丙二酸、苯乙醇酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、丁二酸、甲烷磺酸(methanesulfonic)、乙烷磺酸、酒石酸、抗壞血酸、帕莫(pamoic)酸、雙亞甲基水楊酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、檸康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、edta、乙醇酸、對(duì)氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、茶堿乙酸以及8-鹵代茶堿(例如8-溴茶堿以及類似物)。藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸加成鹽或有機(jī)酸加成鹽的另外的實(shí)例包括在s.m.貝爾熱(s.m.berge)等人，藥物科學(xué)雜志(j.pharm.sci.)，1977，66，2中列出的藥學(xué)上可接受的鹽。
此外，本發(fā)明的化合物能以未溶劑化形式存在以及以與藥學(xué)上可接受的溶劑如水、乙醇等的溶劑化形式存在。
本發(fā)明的化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心并且意圖在于，作為分離的、純的或部分純化的光學(xué)異構(gòu)體的任何光學(xué)異構(gòu)體(即對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體)及其任何混合物(包括外消旋混合物)(即立體異構(gòu)體的混合物)都被包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在此背景下，應(yīng)該理解的是，當(dāng)指明對(duì)映異構(gòu)體形式時(shí)，則該化合物處于對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量，例如基本處于純的形式。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例涉及具有至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少96％、優(yōu)選至少98％的對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量的本發(fā)明的化合物。
可以通過(guò)已知方法將外消旋形式拆分為旋光對(duì)映體，例如通過(guò)用光學(xué)活性酸分離其非對(duì)映異構(gòu)鹽并且通過(guò)用堿處理來(lái)離析光學(xué)活性胺化合物?？梢岳缤ㄟ^(guò)分步結(jié)晶來(lái)實(shí)現(xiàn)此類非對(duì)映異構(gòu)體鹽的分離。適于此目的的光學(xué)活性酸可以包括但不限于d-或l-酒石酸、苯乙醇酸或樟腦磺酸。另一種用于將外消旋體拆分為旋光對(duì)映體的方法是基于在光學(xué)活性基質(zhì)上的色譜。本發(fā)明的化合物還可以通過(guò)從手性衍生化試劑(例如，手性烷基化或酰基化試劑)形成并色譜分離非對(duì)映異構(gòu)體衍生物，隨后裂解手性助劑來(lái)拆分。以上方法中的任一種都可以應(yīng)用于拆分本發(fā)明的化合物的旋光對(duì)映體自身或應(yīng)用于拆分合成的中間體的旋光對(duì)映體，然后可以通過(guò)在此描述的方法將其轉(zhuǎn)化為作為本發(fā)明的化合物的光學(xué)活性拆分的終產(chǎn)物。
可以使用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的用于拆分光學(xué)異構(gòu)體的另外的方法。此類方法包括由j.杰奎斯(j.jaques)、a.科勒特(a.collet)和s.維倫(s.wilen)在“對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體與拆分(enantiomers,racemates,andresolutions)”，約翰威利父子(johnwileyandsons)，紐約，1981中討論的那些。光學(xué)活性化合物還可以從光學(xué)活性起始材料制備。
藥物組合物
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明還提供了包含在實(shí)驗(yàn)部分中披露的特定化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明的化合物能以單劑量或多劑量形式單獨(dú)給予或與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑組合給予。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以用藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑以及任何其他已知的佐劑和賦形劑根據(jù)常規(guī)技術(shù)配制，這些常規(guī)技術(shù)是例如在以下中披露的技術(shù)：雷明頓：藥學(xué)科學(xué)與實(shí)踐(remington:thescienceandpracticeofpharmacy)，第22版，熱納羅(gennaro)編，馬克出版公司(mackpublishingco.)，伊斯頓，賓夕法尼亞州，2013。
用于經(jīng)口給予的藥物組合物包括固體劑型，例如膠囊、片劑、糖衣丸、丸劑、錠劑、粉劑以及顆粒劑。適當(dāng)時(shí)，根據(jù)本領(lǐng)域中熟知的方法，這些組合物可以制備為具有包衣，例如腸溶衣，或者它們可以被配制以提供活性成分的控制釋放，例如持續(xù)或長(zhǎng)久釋放。用于經(jīng)口給予的液體劑型包括溶液、乳液、懸浮液、糖漿以及酏劑。用于腸胃外給予的藥物組合物包括無(wú)菌水性及非水性可注射溶液、分散液、懸浮液或乳液以及欲在使用之前在無(wú)菌可注射溶液或分散液中重構(gòu)的無(wú)菌粉劑。其他適合的給予形式包括但不限于栓劑、噴霧劑、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、吸入劑、皮膚貼片以及植入物。
典型的經(jīng)口劑量范圍從每日約0.01mg/kg體重至約100mg/kg體重。
本發(fā)明的化合物通常以游離堿或以其藥學(xué)上可接受的鹽形式利用。具有化學(xué)式i的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽例如以常規(guī)方式通過(guò)用一摩爾當(dāng)量的藥學(xué)上可接受的酸處理具有化學(xué)式i的游離堿的溶液或懸浮液來(lái)制備。適合的有機(jī)酸及無(wú)機(jī)酸的代表性實(shí)例描述于上文。
適合的藥物載體包括惰性固體稀釋劑或填料、無(wú)菌水溶液以及不同有機(jī)溶劑。固體載體的實(shí)例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、環(huán)糊精、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸以及纖維素的低級(jí)烷基醚。液體載體的實(shí)例包括但不限于糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧化乙烯以及水。類似地，該載體或稀釋劑可以包括單獨(dú)或與蠟混合的本領(lǐng)域中已知的任何持續(xù)釋放物質(zhì)，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。通過(guò)組合具有化學(xué)式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體而形成的藥物組合物以多種適于所披露的給予途徑的劑型容易地給予。這些制劑可以方便地通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域已知的方法以單位劑型呈現(xiàn)。
若將固體載體用于經(jīng)口給予，則該制劑可以被壓片、以粉劑或丸粒形式置于硬明膠膠囊中或它可呈糖錠或錠劑形式。固體載體的量將廣泛變化，但將在每劑量單位從約25mg至約1g的范圍。若使用液體載體，則該制劑可以呈糖漿、乳液、軟明膠膠囊或無(wú)菌可注射液體(例如水性或非水性液體懸浮液或溶液)的形式。
實(shí)驗(yàn)部分
可以通過(guò)在以下反應(yīng)方案1-7和實(shí)例中所概述的方法制備具有化學(xué)式i的化合物(其中r1、r2和ar如上所定義)。在所描述的方法中，能夠使用其本身為本領(lǐng)域熟練的化學(xué)家已知或?qū)Ρ绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言可以是顯而易見(jiàn)的變體或修飾。此外，根據(jù)以下反應(yīng)方案和實(shí)例，用于制備本發(fā)明的化合物的其他方法對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將是容易顯而易見(jiàn)的。
例如，方案5描述了在合成本發(fā)明的化合物的過(guò)程中使用選擇性保護(hù)基團(tuán)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將能夠選擇用于具體反應(yīng)的適當(dāng)保護(hù)基團(tuán)。此外，在下文描述的合成方法中，對(duì)于例如氨基、酰胺基、酮基及羥基基團(tuán)的取代基而言，摻入保護(hù)和脫保護(hù)策略以合成具有化學(xué)式i的化合物可能是必要的。此類基團(tuán)保護(hù)和脫保護(hù)的方法在本領(lǐng)域是熟知的，并且可以發(fā)現(xiàn)于t.格林(t.green)等人，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(protectivegroupsinorganicsynthesis)，1991，第2版，約翰威利父子(johnwiley&sons)，紐約中。
對(duì)于能以兩種或更多種互變異構(gòu)體的混合物或兩種或更多種互變異構(gòu)體之間的平衡狀態(tài)存在的化合物而言，在方案中僅體現(xiàn)了一種互變異構(gòu)體，盡管它可能不是最穩(wěn)定的互變異構(gòu)體。對(duì)于能以對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體形式存在的化合物而言，指明了其幾何構(gòu)型；否則的話，該結(jié)構(gòu)表示立體異構(gòu)體的混合物。
使用以下方法獲得分析性lc-ms數(shù)據(jù)。
方法a：
在由以下各項(xiàng)組成的沃特斯(waters)aquityuplc-ms上運(yùn)行l(wèi)c-ms：包括柱管理器的沃特斯aquity、二元溶劑管理器、樣品組織器、pda檢測(cè)器(在254nm下操作)、els檢測(cè)器以及配備有以正離子模式操作的appi源的sq-ms。
lc-條件：柱是acquityuplcbehc181.7μm；2.1x150mm，在60℃下操作，其中二元梯度為0.6ml/min，該二元梯度由水+0.05％三氟乙酸(a)和乙腈+5％水+0.03％三氟乙酸(b)組成。梯度：0.00min：10％b；3.00min：99.9％b；3.01min：10％b；3.60min：10％b?？傔\(yùn)行時(shí)間：3.60min。
方法b：
在由以下各項(xiàng)組成的沃特斯(waters)aquityuplc-ms上運(yùn)行l(wèi)c-ms：包括柱管理器的沃特斯aquity、二元溶劑管理器、樣品組織器、pda檢測(cè)器(在254nm下操作)、els檢測(cè)器以及配備有以正離子模式操作的appi源的tq-ms。
lc-條件：柱是acquityuplcbehc181.7μm；2.1x50mm，在60℃下操作，其中二元梯度為1.2ml/min，該二元梯度由水+0.05％三氟乙酸(a)和乙腈+5％水+0.05％三氟乙酸(b)組成。梯度：0.00min：10％b；1.00min：100％b；1.01min：10％b；1.15min：10％b?？傔\(yùn)行時(shí)間：1.15min。
在brukeravanceav-iii-600儀器上在600mhz下或在brukeravanceav-iii-400儀器或varian400儀器上在400mhz下記錄1hnmr波譜。以相對(duì)ppm值表示化學(xué)位移值。以下縮寫用于nmr信號(hào)的多重性：s＝單峰，d＝雙重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，dd＝雙二重峰，ddd＝雙雙二重峰，dt＝雙三重峰，br＝寬峰并且m＝多重峰。
具有通式iv的化合物可以如方案1中所示制備。
方案1
其中r1如在化學(xué)式i下所定義，并且r3是氫或硝基基團(tuán)。
可以通過(guò)將具有通式ii的化合物與氧化劑(例如雙(乙酰氧基)碘苯)在堿(例如在甲醇中的氫氧化鉀)的溶液中反應(yīng)，然后將形成的二甲基縮酮脫保護(hù)來(lái)制備具有通式iii的化合物(方案1)。然后可以通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)⒒衔飅ii的羥基部分用氟取代來(lái)獲得具有通式iv的化合物。
具有通式x的化合物可以如方案2中所示制備。
方案2
其中r1和r2如在化學(xué)式i下所定義，r3是氫或硝基基團(tuán)，并且r4和r5是烷基基團(tuán)例如甲基或乙基。
可以通過(guò)將具有通式iv的化合物與亞磺酰胺(例如v)在路易斯酸(lewisacid)/脫水劑(例如四乙氧基鈦)的存在下反應(yīng)來(lái)制備具有通式vi的化合物(方案2)。在zn粉的存在下或在二乙基鋅和三(三苯基膦)銠(i)氯化物的存在下，用具有通式vii的化合物(例如溴二氟乙酸乙酯)處理具有通式vi的化合物給出具有通式viii的化合物。從具有通式viii的化合物通過(guò)用還原劑(例如二異丁基氫化鋁)處理來(lái)獲得具有通式ix的化合物。在一些情況下，化合物ix可與水合物形式處于平衡。在氯化鋰和堿(例如n,n-二異丙基乙胺)存在下，用如2-(二甲氧基磷?；?-乙酸甲酯的條件處理具有通式ix的化合物給出具有通式x的化合物。
具有通式xv的化合物可以如方案3中所示制備。
方案3
其中r1和r2如在化學(xué)式i下所定義，并且r5是烷基基團(tuán)例如甲基或乙基。
在催化劑(例如鈀碳)存在下，通過(guò)將具有通式x的化合物氫化來(lái)獲得具有通式xi的化合物。通過(guò)用酸(例如在甲醇中的鹽酸)處理具有通式xi的化合物，然后用堿(例如在甲醇中的三乙胺或碳酸鉀)處理來(lái)獲得具有通式xii的化合物?？梢允褂孟跛釋⒕哂型ㄊ絰ii的化合物(當(dāng)r3是氫時(shí))進(jìn)行硝化以給出具有通式xiii的化合物。將具有通式xiii的化合物的硝基基團(tuán)進(jìn)行還原，然后保護(hù)形成的苯胺部分(xiv)給出具有通式xv的化合物。
具有通式xv的化合物可以如方案4中所示制備。
方案4
其中r1和r2如在化學(xué)式i下所定義，并且r5是烷基基團(tuán)例如甲基或乙基。
在催化劑(例如鈀碳)存在下，通過(guò)將具有通式x的化合物(當(dāng)r3是硝基時(shí))氫化來(lái)獲得具有通式xi的化合物(當(dāng)r3是氨基基團(tuán)時(shí))。通過(guò)用酸(例如在甲醇中的鹽酸)處理具有通式xi的化合物(當(dāng)r3是氨基基團(tuán)時(shí))，然后用堿(例如在甲醇中的三乙胺或碳酸鉀)處理來(lái)獲得具有通式xiv的化合物，然后保護(hù)苯胺部分(xiv)給出具有通式xv的化合物。
具有通式xvii的化合物可以如方案5中所示制備。
方案5
其中r1和r2是如在化學(xué)式i下定義的。
用試劑(例如勞氏試劑(lawesson’sreagent，2,4-雙(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷雜環(huán)丁烷-2,4-二硫化物))處理具有通式xv的化合物，然后脫保護(hù)，給出具有通式xvii的化合物。
具有通式xvii的化合物可以如方案6中所示制備。
方案6
其中r1和r2是如在化學(xué)式i下所定義的。
用試劑(例如勞氏試劑(lawesson’sreagent，2,4-雙(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷雜環(huán)丁烷-2,4-二硫化物))處理具有通式xiii的化合物給出具有通式xxi的化合物。在催化劑(例如鈀碳)的存在下，可以通過(guò)用還原劑(例如連二亞硫酸鈉)或用氫還原具有通式xxi的化合物來(lái)獲得具有通式xvii的化合物。
具有通式i的化合物可以如方案7中所示制備。
方案7
其中r1、r2和ar是如在化學(xué)式i下所定義的。
可以通過(guò)使用本領(lǐng)域的熟練化學(xué)家已知的程序，將具有通式xvii的化合物與具有通式xviii的羧酸氯化物反應(yīng)或通過(guò)與具有通式xix的羧酸反應(yīng)來(lái)制備具有通式xx的化合物。用氨處理具有通式xx的化合物給出具有通式i的化合物。在一些情況下，添加氧化劑(例如叔丁基氫過(guò)氧化物)對(duì)于促進(jìn)反應(yīng)而言可能是必要的。
中間體的制備
中間體：2-(2-氟苯基)-2,2-二甲氧基乙-1-醇
在0℃下，以逐滴的方式，向氫氧化鉀(91.4g，1.63mol)在甲醇(1l)中的的混合物中添加1-(2-氟苯基)乙-1-酮(50g，362mmol)在甲醇(300ml)中的溶液。然后分批添加雙(乙酰氧基)碘苯(175g，543mmol)。在0℃下攪拌4小時(shí)后，通過(guò)添加水(500ml)將反應(yīng)淬滅。將混合物濃縮以去除甲醇，并且將水相用乙酸乙酯(700ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)相用鹽水(300ml)洗滌，經(jīng)na2so4干燥并濃縮。將粗產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化而直接用于下一步驟。
以類似的方法，從1-(2,3-二氟苯基)乙-1-酮制備2-(2,3-二氟苯基)-2,2-二甲氧基乙-1-醇。
中間體：1-(2-氟苯基)-2-羥基乙-1-酮
將2-(2-氟苯基)-2,2-二甲氧基乙-1-醇(粗品，362mmol)溶解于thf(450ml)和水(150ml)中。然后在室溫下，分批地添加對(duì)甲苯磺酸(125g，726mmol)。在添加后，將混合物回流攪拌5小時(shí)。添加水(150ml)和飽和nahco3以淬滅反應(yīng)，將混合物用乙酸乙酯(500ml，三次)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并且經(jīng)na2so4干燥。在減壓下去除溶劑后，將殘余物通過(guò)使用石油醚:乙酸乙酯＝20:1的柱色譜法進(jìn)行純化以給出1-(2-氟苯基)-2-羥基乙-1-酮(42g，76％產(chǎn)率，兩個(gè)步驟)。
以類似的方法，從2-(2,3-二氟苯基)-2,2-二甲氧基乙-1-醇制備1-(2,3-二氟苯基)-2-羥基乙-1-酮。
中間體：2-氟-1-(2-氟苯基)乙-1-酮
在0℃下，向1-(2-氟苯基)-2-羥基乙-1-酮(10g，64.88mmol)在二氯甲烷(200ml)中的溶液中滴加et3n(hf)3(10.46g，227.8mmol)和cf3(cf2)3so2f(29.4g，97.32mmol)，將該溶液在室溫下攪拌12小時(shí)。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)顯示沒(méi)有起始原料。將該混合物傾倒進(jìn)nahco3和冰的飽和溶液中，用二氯甲烷(200ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥，并且在減壓下濃縮。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法純化(用石油醚:乙酸乙酯＝1:0-10:1洗脫)以提供2-氟-1-(2-氟苯基)乙-1-酮(6g，產(chǎn)率：59％)。
以類似的方法，從1-(2,3-二氟苯基)-2-羥基乙-1-酮制備1-(2,3-二氟苯基)-2-氟乙-1-酮。
中間體：(r)-n-(2-氟-1-(2-氟苯基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺
向2-氟-1-(2-氟苯基)乙-1-酮(6g，38.43mmol)和ti(oet)4(17.53g，76.86mmol)在thf(100ml)中的溶液中添加(r)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(5.59g，46.12mmol)，將該溶液在70℃下攪拌12h。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)顯示沒(méi)有起始原料。將該混合物用水(200ml)淬滅，然后過(guò)濾并用乙酸乙酯(200ml，四次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法(用石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1洗脫)進(jìn)行純化以提供(r)-n-(2-氟-1-(2-氟苯基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(6.9g，產(chǎn)率：69％)。
以類似的方法，從1-(2,3-二氟苯基)-2-氟乙-1-酮制備(r)-n-(1-(2,3-二氟苯基)-2-氟亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。
中間體：(s)-3-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-2,2,4-三氟-3-(2-氟苯基)-丁酸乙酯
在-78℃下，向(r)-n-(2-氟-1-(2-氟苯基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(10g，38.6mmol)、三(三苯基膦)銠(i)氯化物(1.01g，1.2mmol)和2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(15.7g，77.1mmol)在無(wú)水thf(200ml)中的溶液中滴加et2zn(77.1ml，1m在己烷中，77.1mmol)，將溶液在0℃下在n2下攪拌1小時(shí)。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)顯示無(wú)(r)-n-(2-氟-1-(2-氟苯基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。將該混合物用水(100ml)淬滅，過(guò)濾并用乙酸乙酯(200ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法(用石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1洗脫)進(jìn)行純化以提供呈黃色油狀物的(s)-3-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-2,2,4-三氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(13g，產(chǎn)率：88％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.59-7.57(m,1h),7.44-7.42(m,1h),7.21(t,j＝7.6hz,1h),7.14-7.10(m,1h),5.52-5.37(m,1h),5.24-5.10(m,2h),4.35(q,j＝7.6hz,2h),1.36-1.23(m,12h)。
以類似的方法，從(r)-n-(1-(2,3-二氟苯基)-2-氟亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺制備(s)-3-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-3-(2,3-二氟苯基)-2,2,4-三氟丁酸乙酯。
中間體：(r)-2-甲基-n-((s)-1,3,3-三氟-2-(2-氟苯基)-4-氧代丁-2-基)丙烷-2-亞磺酰胺
在-78℃下，向(s)-3-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-2,2,4-三氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(12g，31.30mmol)在無(wú)水thf(200ml)中的溶液中滴加dibal-h(二異丁基氫化鋁)(62.6ml，1m在thf中，62.6mmol)。將該溶液在-78℃下在n2下攪拌2小時(shí)。將該混合物用水(100ml)淬滅，過(guò)濾并用乙酸乙酯(200ml，四次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮，以提供粗的(r)-2-甲基-n-((s)-1,3,3-三氟-2-(2-氟苯基)-4-氧代丁-2-基)丙烷-2-亞磺酰胺(10.6g)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。
以類似的方法，從(s)-3-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-3-(2,3-二氟苯基)-2,2,4-三氟丁酸乙酯制備(r)-n-((s)-2-(2,3-二氟苯基)-1,3,3-三氟-4-氧代丁-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺。
中間體：(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸甲酯
向n,n-二異丙基乙胺(4.8g，37.49mmol)和licl(1.6g，37.49mmol)在乙腈(200ml)中的混合物中添加2-(二甲氧基磷?；?-乙酸甲酯(7.9g，37.49mmol)，然后在0℃下將(r)-2-甲基-n-((s)-1,3,3-三氟-2-(2-氟苯基)-4-氧代丁-2-基)丙烷-2-亞磺酰胺(10.6g，31.24mmol)添加到該混合物中。允許將該混合物加溫至25℃并攪拌12小時(shí)。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)顯示沒(méi)有起始原料。在減壓下除去溶劑，將殘余物用乙酸乙酯(500ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠柱色譜法(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-1:1)進(jìn)行純化以提供(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸甲酯(8g，產(chǎn)率：75％，兩個(gè)步驟)。
以類似的方法，從(r)-n-((s)-2-(2,3-二氟苯基)-1,3,3-三氟-4-氧代丁-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺制備(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-5-(2,3-二氟苯基)-4,4,6-三氟己-2-烯酸甲酯亞磺酰胺。
中間體：(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己酸甲酯
向(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己-2-烯酸甲酯(8g，20.23mmol)在乙酸乙酯(1000ml)中的溶液中添加pd/c(5g，10％)。將該混合物在30℃下在50psi的h2下攪拌12h。lcms顯示沒(méi)有起始原料。將該混合物過(guò)濾并在減壓下濃縮以提供粗的(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己酸甲酯(8.04g)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。
以類似的方法，從(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-5-(2,3-二氟苯基)-4,4,6-三氟己-2-烯酸甲酯亞磺酰胺制備(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺酰基)氨基)-5-(2,3-二氟苯基)-4,4,6-三氟己酸甲酯。
中間體：(s)-5,5-二氟-6-(氟甲基)-6-(2-氟苯基)哌啶-2-酮
向(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-4,4,6-三氟-5-(2-氟苯基)己酸甲酯(8.0g，20.13mol)在甲醇(200ml)中的溶液中添加hcl/甲醇(100ml)，將該溶液在20℃下攪拌2h。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)顯示沒(méi)有起始原料。在減壓下除去溶劑，將殘余物溶解于二甲苯(200ml)中，然后向該溶液中添加et3n(5ml)。將該溶液在110℃下在n2下攪拌12h。在減壓下除去溶劑。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法(用石油醚:乙酸乙酯＝3:1-0:1洗脫)進(jìn)行純化以提供(s)-5,5-二氟-6-(氟甲基)-6-(2-氟苯基)哌啶-2-酮(4.1g，77％產(chǎn)率，經(jīng)兩個(gè)步驟)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.55-7.53(m,1h),7.48-7.46(m,1h),7.31-7.29(m,1h),7.20-7.17(m,1h),6.49(s,1h),5.25-5.22(m,1h),5.13-5.11(m,1h),2.75-2.71(m,2h),2.36-2.28(m,2h)。
以類似的方法，從(s)-5-(((r)-叔丁基亞磺?；?氨基)-5-(2,3-二氟苯基)-4,4,6-三氟己酸甲酯制備(s)-6-(2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮。
中間體：(s)-5,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-6-(氟甲基)哌啶-2-酮
將(s)-5,5-二氟-6-(氟甲基)-6-(2-氟苯基)哌啶-2-酮(3.5g，13.4mmol)溶解于tfa(23ml)中。將該溶液冷卻至0℃并且添加濃h2so4(5.5ml)。最后，經(jīng)5min滴加65％hno3(1.0ml，14.7mmol)。將該溶液在0℃下攪拌10min。lcms顯示沒(méi)有起始原料。將該溶液傾倒入50g冰上并使用5nnaoh堿化至ph>11。將懸浮液用乙酸乙酯(200ml)萃取，將合并的有機(jī)層用飽和nh4cl水溶液(50ml)和水(100ml)洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮以提供：(s)-5,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-6-(氟甲基)哌啶-2-酮(4g，98％產(chǎn)率)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ8.73(s,1h),8.41-8.34(m,2h),7.64-7.59(m,1h),5.35-5.20(m,1h),4.92-4.78(m,1h),2.57-2.50(m,2h),2.34-2.30(m,2h)。
以類似的方法，從(s)-6-(2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮制備(s)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮。
中間體：(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮
向(s)-5,5-二氟-6-(2-氟-5-硝基苯基)-6-(氟甲基)哌啶-2-酮(4g，13.06mmol)在乙酸乙酯(200ml)中的溶液中添加pd/c(2g，10％)，將該混合物在30℃下在50psi的h2下攪拌12h。lcms顯示沒(méi)有起始原料。將該混合物過(guò)濾并在減壓下濃縮以提供粗的(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-氟甲基)哌啶-2-酮(3.6g)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。
中間體：(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-氧代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯
向(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮(3.6g，13.03mmol)在無(wú)水二氯甲烷(100ml)和飽和nahco3水溶液(72ml)中的溶液中添加boc2o(8.53g，39.09mmol)，將該溶液在20℃下攪拌12小時(shí)。將該混合物用水(50ml)淬滅并用二氯甲烷(100ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法(石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)進(jìn)行純化以提供(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-氧代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.9g，94％產(chǎn)率，經(jīng)兩個(gè)步驟)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ9.51(s,1h),8.37(s,1h),7.66-7.65(m,1h),7.53(s,1h),7.16-7.11(m,1h),5.22(dd,j＝48.0,9.2hz,1h),4.69(dd,j＝48.0,9.2hz,1h),2.50-2.16(m,4h),1.46(s,9h)。
中間體：(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯
向(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-氧代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.3g，6.11mmol)在無(wú)水甲苯(50ml)中的溶液中添加勞氏試劑(2,4-雙(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二噻二磷雜環(huán)丁烷-2,4-二硫化物)(1.36g，3.36mmol)，將該溶液在90℃下在n2下攪拌12h。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)顯示沒(méi)有起始原料。將溶液用乙酸乙酯(50ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠柱色譜法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-3:1)進(jìn)行純化以提供(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.15g，產(chǎn)率：90％)。
中間體：(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮
向(s)-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.5g，14.02mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中添加hcl/甲醇(50ml)，將該溶液在20℃下攪拌2小時(shí)。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)顯示沒(méi)有起始原料。在減壓下除去溶劑，將殘余物溶解于二氯甲烷(50ml)中，使用飽和nahco3水溶液將該溶液堿化至ph＝7-8，將該溶液用二氯甲烷(100ml，三次)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥并在減壓下濃縮。將殘余物分散在二氯甲烷(20ml)中，然后過(guò)濾，將濾液在減壓下干燥以給出呈白色固體的(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮(1.74g)，1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ10.69(s,1h),6.92-6.87(m,1h),6.60-6.58(m,1h),6.51-6.49(m,1h),5.35-5.33(m,1h),5.23-5.18(m,2h),4.72(dd,j＝48.0,10.0hz,1h),3.29-2.92(m,2h),2.24-2.19(m,2h),[α]20,d＝-192(c＝0.1g/100ml,etoh)。
中間體：(s)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮
將勞氏試劑(0.81g，2.0mmol)添加到在甲苯(25ml)中的(s)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-酮(0.59g，1.82mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下攪拌過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并傾倒入飽和nahco3(水溶液)中。將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥并在真空中濃縮。將粗物質(zhì)經(jīng)硅膠快速色譜法(乙酸乙酯/庚烷)進(jìn)行純化以給出(s)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮(0.58g，65％純度，61％產(chǎn)率)。
中間體：(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮
將連二亞硫酸鈉(1.16g，6.65mmol)和碳酸鉀(0.459g，3.32mmol)溶解于水(5.00g，5ml，278mmol)中。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。滴加在乙醇(5ml)中的(s)-6-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮(0.58g，1.11mmol，65％純度)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加水。將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥并在真空中濃縮。將殘余物溶解于乙酸乙酯中并通過(guò)硅膠塞過(guò)濾并在真空中濃縮。將粗物質(zhì)經(jīng)由硅膠快速色譜法(乙酸乙酯/庚烷)進(jìn)行純化以給出(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮(105mg，35％)。
中間體：5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯
在氬氣下，將5-羥基吡啶甲酸甲酯(2.88g，18.81mmol)溶解于二甲基甲酰胺(108ml)中。添加碳酸鉀(7.20g，52.1mmol)并將橙色懸浮液在室溫下攪拌45分鐘。添加碘甲烷-d3(1.41ml，22.6mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。添加水。將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥，并在真空中濃縮，并通過(guò)硅膠柱色譜法(庚烷:乙酸乙酯)進(jìn)行純化以給出5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯。
中間體：5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸
將5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸甲酯(200mg，1.175mmol)溶解于水(1.5ml)和1,4-二噁烷(3ml)中。添加氫氧化鋰(70.4mg，2.94mmol)，并且將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)至約2ml，并且用二乙醚萃取。將有機(jī)相用1mnaoh萃取，并且用6nhcl(水溶液)將合并的水相酸化至ph2。在冰浴上冷卻混合物，并且形成沉淀物。收集沉淀物以給出5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸。
本發(fā)明的化合物的制備
實(shí)例1(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺(化合物1)
向5-氯吡啶甲酸(0.243g，1.540mmol)在dmf(12ml)中的溶液中添加hatu(1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸酯)(0.86g，2.3mmol)，將溶液攪拌5分鐘。然后添加(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-氟甲基)哌啶-2-硫酮(0.3g，1.026mmol)和dipea(n,n-二異丙基乙胺)(0.90ml，5.1mmol)。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。添加飽和氯化銨水溶液并且將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。將該混合物通過(guò)硅膠柱色譜法(庚烷:乙酸乙酯)進(jìn)行純化以提供(s)-5-氯-n-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺，將其溶解于在甲醇(12ml)中的7m氨中。將該混合物在50℃下攪拌過(guò)夜，在減壓下濃縮并通過(guò)硅膠柱色譜法(庚烷:乙酸乙酯)進(jìn)行純化以提供(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氯吡啶酰胺(0.23g，55％產(chǎn)率)。1hnmr(600mhz,dmso-d6)δ10.75(s,1h),8.80(dd,j＝2.4,0.6hz,1h),8.21(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),8.16(dd,j＝8.4,0.6hz,1h),7.89(ddd,j＝11.7,6.6,3.8hz,1h),7.86(dd,j＝6.6,2.4hz,1h),7.16(dd,j＝11.7,8.8hz,1h),6.10(s,2h),5.02-4.88(m,1h),4.79(dd,j＝45.9,8.8hz,1h),2.53-2.50(m,2h),2.18-1.97(m,2h)。lc-ms(m/z)415(mh+)；tr＝0.52分鐘(方法a)
以類似于實(shí)例1的方式制備以下化合物：
實(shí)例2(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氟吡啶酰胺(化合物2)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氟吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.85(s,1h),8.76(d,j＝2.8hz,1h),8.26(dd,j＝8.6,4.4hz,1h),8.15(m,1h),8.00(td,j＝8.7,2.8hz,2h),7.33(dd,j＝11.8,9.1hz,1h),5.15(ddd,j＝54.9,46.5,9.2hz,2h),2.58-2.46(m,2h),2.46-2.23(m,2h)。lc-ms(m/z)399.2(mh+)；tr＝0.49分鐘(方法b)
實(shí)例3(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(化合物3)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.71(s,1h),8.91(d,j＝1.3hz,1h),8.43(d,j＝1.3hz,1h),8.06(m,1h),7.98(m,1h),7.29(dd,j＝11.6,9.1hz,1h),5.11(ddd,j＝94.4,46.2,8.7hz,2h),4.03(s,3h),2.55-2.48(m,2h),2.42-2.19(m,2h)。lc-ms(m/z)412(mh+)；tr＝0.47分鐘(方法a)
實(shí)例4(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-1-(二氟甲基)-1h-吡唑-3-甲酰胺(化合物4)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和1-(二氟甲基)-1h-吡唑-3-甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.46(s,1h),8.42(d,j＝2.7hz,1h),8.04-7.76(m,3h),7.15(dd,j＝11.7,8.6hz,1h),7.02(d,j＝2.7hz,1h),6.16(s,2h),5.06-4.72(m,2h),2.54-2.49(m,2h),2.20-1.98(m,2h)。lc-ms(m/z)420(mh+)；tr＝0.46分鐘(方法a)
實(shí)例5(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酰胺(化合物5)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和2-(二氟甲基)噁唑-4-甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.54(s,1h),9.04(s,1h),7.93(s,1h),7.86(d,j＝4.8hz,1h),7.47-7.21(m,2h),5.04(dd,j＝94.5,46.0hz,2h),2.55-2.49(m,2h),2.24(dd,j＝68.4,4.9hz,2h)。lc-ms(m/z)421(mh+)；tr＝0.46分鐘(方法a)
實(shí)例6(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺(化合物6)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氰基吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.95(s,1h),9.21(dd,j＝2.0,0.8hz,1h),8.59(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),8.29(dd,j＝8.2,0.8hz,1h),8.03-7.90(m,2h),7.23(s,1h),4.97(dd,j＝94.5,45.1hz,2h),2.54-2.48(m,2h),2.29-2.03(m,2h)。lc-ms(m/z)406(mh+)；tr＝0.47分鐘(方法a)
實(shí)例7(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺(化合物7)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和2-甲基噁唑-4-甲酸制備。三氟乙酸鹽的1hnmr(600mhz,dmso)δ10.97(s,1h),10.38(s,1h),9.71(s,1h),9.16(s,1h),8.68(s,1h),8.09(m,1h),7.94(dd,j＝7.0,2.5hz,1h),7.32(dt,j＝12.1,9.0hz,1h),5.37-4.99(m,2h),3.10-2.96(m,2h),2.53(s,3h),2.49-2.31(m,2h)。lc-ms(m/z)385(mh+)；tr＝0.43分鐘(方法a)
實(shí)例8(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基嘧啶-2-甲酰胺(化合物8)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-甲氧基嘧啶-2-甲酸制備。三氟乙酸鹽的1hnmr(600mhz,dmso)δ10.89(s,1h),10.81(s,1h),9.67(s,1h),8.91(s,1h),8.74(s,2h),8.16(ddd,j＝8.9,4.0,2.7hz,1h),7.99(dd,j＝7.0,2.5hz,1h),7.36(dd,j＝12.1,9.0hz,1h),5.21(ddd,j＝55.4,45.9,10.0hz,2h),4.04(s,3h),3.11-2.97(m,2h),2.50-2.31(m,2h)。lc-ms(m/z)412(mh+)；tr＝0.42分鐘(方法a)
實(shí)例9(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺(化合物9)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-(二氟甲基)吡嗪-2-甲酸制備。三氟乙酸鹽的1hnmr(600mhz,dmso)δ11.14(s,1h),11.00(s,1h),9.72(s,1h),9.42(d,j＝1.2hz,1h),9.18(s,1h),9.11(s,1h),8.19(ddd,j＝8.9,3.9,2.7hz,1h),8.06(dd,j＝7.0,2.5hz,1h),7.40(dd,j＝12.0,9.0hz,1h),7.28(t,j＝53.9hz,1h),5.21(ddd,j＝55.5,46.0,10.0hz,2h),3.12-2.97(m,2h),2.51-2.32(m,2h)。lc-ms(m/z)432(mh+)；tr＝0.48分鐘(方法a)
實(shí)例10(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-2-甲基噁唑-4-甲酰胺(化合物10)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和2-甲基噁唑-4-甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.44(s,1h),8.67(s,1h),7.96(ddd,j＝12.2,6.6,2.6hz,1h),7.69-7.65(m,1h),6.17(s,2h),4.87(td,j＝46.0,8.9hz,2h),2.55-2.49(m,2h),2.52(s,3h),2.19-1.96(m,2h)。lc-ms(m/z)403(mh+)；tr＝0.46分鐘(方法a)
實(shí)例11(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(化合物11)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.77(s,1h),8.89(d,j＝1.2hz,1h),8.42(d,j＝1.2hz,1h),8.03(ddd,j＝12.0,6.6,2.4hz,1h),7.79-7.71(m,1h),6.18(s,2h),5.03-4.70(m,2h),4.02(s,3h),2.55-2.49(m,2h),2.23-1.95(m,2h)。lc-ms(m/z)430(mh+)；tr＝0.52分鐘(方法a)
實(shí)例12(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氟吡啶酰胺(化合物12)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氟吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.89(s,1h),8.74(d,j＝2.8hz,1h),8.24(dd,j＝8.7,4.6hz,1h),8.06(m,1h),7.99(td,j＝8.7,2.8hz,1h),7.76-7.72(m,1h),6.23(s,2h),4.98-4.81(m,2h),2.52-2.50(m,2h),2.22-1.97(m,2h)。lc-ms(m/z)417(mh+)；tr＝0.52分鐘(方法a)
實(shí)例13(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氯吡啶酰胺(化合物13)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氯吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.96(s,1h),8.79(d,j＝2.1hz,1h),8.22-8.14(m,2h),8.12-8.04(m,1h),7.75(s,1h),6.38(s,2h),5.04-4.80(m,2h),2.56-2.49(m,2h),2.11(m,2h)。lc-ms(m/z)433(mh+)；tr＝0.55分鐘(方法a)
實(shí)例14(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氰基吡啶酰胺(化合物14)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氰基吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ11.10(s,1h),9.22(d,j＝1.9hz,1h),8.60(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),8.30(dd,j＝13.0,4.9hz,1h),8.06(ddd,j＝12.0,6.6,2.5hz,1h),7.80-7.76(m,1h),6.18(s,2h),5.00-4.77(m,2h),2.51(dd,j＝3.5,1.7hz,2h),2.20-1.99(m,2h)。lc-ms(m/z)424(mh+)；tr＝0.49分鐘(方法b)
實(shí)例15(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡啶酰胺(化合物15)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-甲氧基吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.72(s,1h),8.40(d,j＝2.8hz,1h),8.13(d,j＝8.7hz,1h),8.05(ddd,j＝12.2,6.6,2.4hz,1h),7.73-7.68(m,1h),7.63(dd,j＝8.7,2.9hz,1h),6.15(s,2h),4.99-4.77(m,2h),3.94(s,3h),2.55-2.47(m,2h),2.20-1.98(m,2h)。lc-ms(m/z)429(mh+)；tr＝0.51分鐘(方法b)
實(shí)例16(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物16)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.72(s,1h),8.40(d,j＝2.8hz,1h),8.13(d,j＝8.7hz,1h),8.05(ddd,j＝12.2,6.6,2.6hz,1h),7.73-7.69(m,1h),7.62(dd,j＝8.7,2.9hz,1h),6.17(s,2h),5.00-4.75(m,2h),2.20-2.00(m,2h)。lc-ms(m/z)432.1(mh+)；tr＝0.54(方法b)
實(shí)例17(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4,5-二氟苯基)-5-氰基-3-甲基吡啶酰胺(化合物17)
從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-氰基-3-甲基吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.98(s,1h),9.00(dd,j＝1.9,0.6hz,1h),8.42(dd,j＝1.9,0.7hz,1h),8.12-7.99(m,1h),7.57(s,1h),6.19(s,2h),4.88(ddd,j＝54.2,46.8,8.0hz,2h),2.55(s,3h),2.24-1.99(m,2h)。lc-ms(m/z)438.1(mh+)；tr＝0.55(方法b)
實(shí)例18(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-(甲氧基-d3)吡啶酰胺(化合物18)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-(甲氧基-d3)吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.52(s,1h),8.39(d,j＝2.9hz,1h),8.13(d,j＝8.7hz,1h),7.92-7.88(m,1h),7.84(dd,j＝6.9,2.7hz,1h),7.61(dd,j＝8.7,2.9hz,1h),7.14(dd,j＝11.8,8.8hz,1h),6.11(s,2h),5.02-4.88(m,1h),4.79(dd,j＝46.0,8.9hz,1h),2.18-1.96(m,2h)。lc-ms(m/z)414.1(mh+)；tr＝0.49(方法b)
實(shí)例19(s)-n-(3-(6-氨基-3,3-二氟-2-(氟甲基)-2,3,4,5-四氫吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-溴吡啶酰胺(化合物19)
從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-溴吡啶甲酸制備。1hnmr(600mhz,dmso)δ10.74(s,1h),8.87(dd,j＝2.3,0.7hz,1h),8.33(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),8.08(dd,j＝8.4,0.6hz,1h),7.90(ddd,j＝8.7,4.0,2.9hz,1h),7.86(dd,j＝6.9,2.7hz,1h),7.15(dd,j＝11.8,8.8hz,1h),6.10(s,2h),4.95(ddd,j＝48.4,8.8,2.5hz,1h),4.79(dd,j＝46.0,8.9hz,1h),2.52-2.48(m,2h),2.18-1.95(m,2h)。lc-ms(m/z)459.1(mh+)；tr＝0.53(方法b)
立體化學(xué)
通過(guò)從庚烷和乙酸乙酯的混合物中重結(jié)晶(s)-5-溴-n-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺獲得晶體。通過(guò)所述晶體的x射線結(jié)晶學(xué)闡明了(s)-5-溴-n-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)顯示了(s)-5-溴-n-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的絕對(duì)構(gòu)型。如實(shí)例1所述從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮和5-溴吡啶甲酸開始制備(s)-5-溴-n-((3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺。
圖1：(s)-5-溴-n-(3-(2-(二氟甲基)-3,3-二氟-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺的x射線結(jié)構(gòu)
可以由此合理化本發(fā)明的示例化合物的絕對(duì)構(gòu)型。從(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮(其為本發(fā)明的示例化合物1-9和示例化合物18的起始原料)制備(s)-5-溴-n-(3-(3,3-二氟-2-(氟甲基)-6-硫代哌啶-2-基)-4-氟苯基)吡啶酰胺。從(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮制備本發(fā)明的其余示例化合物。通過(guò)與(s)-6-(5-氨基-2-氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮相同的方法制備(s)-6-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5,5-二氟-6-(氟甲基)哌啶-2-硫酮，因此必然具有相同的絕對(duì)和相對(duì)立體化學(xué)。
藥理學(xué)測(cè)試
bace1結(jié)合測(cè)定
基于spa的測(cè)定，使用從自由式hek293細(xì)胞(freestylehek293cell)重組表達(dá)并且隨后純化的、生物素化形式的人類bace1進(jìn)行結(jié)合測(cè)定。在白色透明底384板(康寧公司(corning)#3653)中于50mm乙酸鈉緩沖液(ph4.5)中運(yùn)行結(jié)合測(cè)定，該緩沖液包含50mmnacl和0.03％tween-20。將10nm(終濃度)放射性配體([3h]-n-((1s,2r)-1-芐基-3-環(huán)丙基氨基-2-羥基-丙基)-5-(甲烷磺?；?甲基-氨基)-n-((r)-1-苯基-乙基)-異酞酰胺)(購(gòu)自ge醫(yī)療基團(tuán)(gehealthcare)的trq11569)與給定濃度的測(cè)試化合物、6nm(終濃度)人類bace1和25μg鏈霉親和素涂布的pvt核spa珠粒(rpnq0007，ge醫(yī)療集團(tuán)生命科學(xué)部(gehealthcarelifesciences))混合，總體積為40μl。在測(cè)定中測(cè)試每種測(cè)試化合物的若干個(gè)濃度，用于確定ic50。將板在室溫下孵育一小時(shí)并且在wallactrilux計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。分別使用緩沖液和1μm(終濃度)的高親和力bace1參比抑制劑(s)-6-[3-氯-5-(5-丙-1-炔基-吡啶-3-基)-噻吩-2-基]-2-亞氨基-3,6-二甲基-四氫-嘧啶-4-酮確定總的和非特異性的結(jié)合。對(duì)于每種測(cè)試化合物，ic50值(介導(dǎo)放射性配體的特異性結(jié)合的50％抑制的濃度)從濃度-反應(yīng)曲線確定并用于從等式ki＝ic50/(1+l/kd)計(jì)算ki，其中l(wèi)和kd分別是用于測(cè)定的放射性配體的終濃度和放射性配體的解離常數(shù)。放射性配體的kd從飽和結(jié)合實(shí)驗(yàn)中確定。
表1：所選化合物的結(jié)合親和力
bace1有效性測(cè)定
如基于fret的測(cè)定使用可商購(gòu)的bace1試劑盒(美國(guó)生命技術(shù)公司(lifetechnologies)，p2985)進(jìn)行有效性測(cè)定。將2μl的10μm(終濃度)測(cè)試化合物和來(lái)自試劑盒的15μlbace1酶(終濃度3nm)在室溫下預(yù)孵育15分鐘，之后添加來(lái)自該試劑盒的15μl底物(250nm終濃度)，并且在室溫下再孵育90分鐘。隨后在pherastar(ex540/em590)中對(duì)測(cè)定板進(jìn)行讀數(shù)。將在測(cè)試化合物存在下觀察到的酶活性標(biāo)準(zhǔn)化為在緩沖液和10μm(終濃度)的高親和力的bace1參比抑制劑(s)-6-[3-氯-5(5-丙-1-炔基-吡啶-3-基)-噻吩-2-基]-2-亞氨基-3,6-二甲基-四氫嘧啶-4-酮分別存在下觀察到的酶活性。在10μm(終濃度)下評(píng)估測(cè)試化合物的有效性并且使用等式％抑制＝100％-以百分比計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)化酶活性，并且將該有效性定義為酶活性的百分比抑制。
表2：所選化合物的bace1活性
bace1抑制后，評(píng)價(jià)大鼠腦和血漿中的aβ肽水平。
動(dòng)物。
根據(jù)丹麥議會(huì)，所有大鼠護(hù)理和實(shí)驗(yàn)程序都被靈北(lundbeck)獸醫(yī)人員批準(zhǔn)。將大鼠以12/12-h光暗循環(huán)養(yǎng)護(hù)在屏障設(shè)施中并且任意給予食物和水。
首試大鼠的處理。
大約250g重的年輕成年雄性斯普拉-道來(lái)(spraguedawley)大鼠購(gòu)自查爾斯河公司(charlesriver)并且僅通過(guò)口服強(qiáng)飼(p.o)接受0-30mg/kg的運(yùn)載體(10％hpβcd+1mmeso4，ph2.5)或測(cè)試化合物(溶解于運(yùn)載體中)。以5ml/kg的體積給予化合物。對(duì)于每種處理?xiàng)l件，建立5-10只動(dòng)物的組群。
由獸醫(yī)人員密切監(jiān)測(cè)經(jīng)歷處理的動(dòng)物的任何中毒體征。監(jiān)測(cè)參數(shù)包括體重、體態(tài)、皮毛(coat)外觀的變化、無(wú)端行為的出現(xiàn)以及對(duì)外界刺激的遲鈍或夸大反應(yīng)。
組織收集。
在初次給藥后t＝180分鐘時(shí)，將動(dòng)物打昏并用鍘除刀斷頭。在將動(dòng)物斷頭后，將軀干血取樣于edta涂覆的管中。將血液在4℃下以2200g離心15分鐘并收集血漿并且將其冷凍在-80℃下。將血液等分用于aβelisa和dmpk分析。處死后立即取出腦并將其分為兩等份。將右半腦在干冰上快速冷凍并儲(chǔ)存在-80℃下。將左半部分解剖；其中額前腦用于進(jìn)行aβelisa并且剩余部分用于進(jìn)行dmpk分析。也將這些樣品在干冰上快速冷凍并儲(chǔ)存在-80℃下，直到分析使用。
組織加工。
在將皮層樣品用速度設(shè)定為5的小容量分散儀(t10基礎(chǔ)(basic)
均質(zhì)化后，將樣品的450μl等分試樣收集在1.5ml埃彭道夫管(eppendorftube)中并放置在濕冰上，將0.5％np-40(50ul)添加至所有樣品中并且然后將其在冰上孵育30min。這之后使用具有20khz勻聲的超聲勻漿器(sonoplushd2070，班德林電子(bandelinelectronic))(10脈沖設(shè)定在12％-13％功率)超聲處理所有樣品以提取所有aβ種類。然后，將樣品在4℃下以20000g離心(oledich157mprf微量離心機(jī))20分鐘。離心后，將285μl的上清液用移液管吸取進(jìn)600μl微管中并用15μl的1mtris-hcl緩沖液中和。
elisa方案。
使用wako294-62501人類/大鼠aβ淀粉樣蛋白(40)試劑盒進(jìn)行所有elisa分析。將如以上所描述產(chǎn)生的30μl血漿樣品或30μl的皮層上清液置于在濕冰上的600μl微管中。向其中添加30μl的8m脲(艾普力(applichem)a1049，9025)，以產(chǎn)生2倍稀釋。將血漿和皮層上清液兩者都在冰上孵育30min。標(biāo)準(zhǔn)品列制備自提供于試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)肽儲(chǔ)備物以及包含1.6m脲(200μl8m脲+800μl的標(biāo)準(zhǔn)稀釋物)和0.8m脲(400μl8m脲+3600μl標(biāo)準(zhǔn)稀釋物)的標(biāo)準(zhǔn)稀釋物。制備從100pmol/ml至0pmol/l的aβ40的連續(xù)2倍稀釋用于進(jìn)行測(cè)定。
在用脲孵育之后，通過(guò)添加5倍的來(lái)自試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)稀釋物進(jìn)一步稀釋所有樣品。這通過(guò)將240μl標(biāo)準(zhǔn)稀釋物添加至60μl樣品/脲混合物中然后將其充分混合來(lái)進(jìn)行。將100μl的每種稀釋樣品一式兩份地用移液管吸取進(jìn)elisa板的指定孔中。然后將板覆蓋并在4℃下孵育過(guò)夜。第二天，在使用之前將elisa試劑盒回到室溫。將孵育板用稀釋于milliq水中的20x洗滌溶液洗滌5次。將100μlhrp-偶聯(lián)物應(yīng)用于每個(gè)孔中，并且將板覆蓋且在4℃下孵育1hr。再次重復(fù)洗滌5次。將100μl3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(tmb)溶液應(yīng)用于每個(gè)孔中并且將板覆蓋并在室溫下于黑暗中孵育30分鐘。接下來(lái)，將100μl終止溶液應(yīng)用于每個(gè)孔中，并且在將終止溶液添加至孔中的30min內(nèi)，將板在分光光度計(jì)(實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)酶標(biāo)儀(labsystemsmultiscanascent))中于450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行讀數(shù)。
基于包含已知濃度的合成aβ40的標(biāo)準(zhǔn)品生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定樣品中的aβ肽濃度。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將意識(shí)到，二乙胺(dea)和脲萃取將分別釋放可溶性aβ和不可溶性aβ。由于elisa試劑盒是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的且廣泛使用，所以可接受的是只要對(duì)于每種測(cè)試化合物而言處理?xiàng)l件和測(cè)定條件相同，則測(cè)定應(yīng)該針對(duì)測(cè)試的化合物產(chǎn)生一致的穩(wěn)健數(shù)據(jù)并產(chǎn)生最小差異。
數(shù)據(jù)分析
為了確定樣品中的aβ40濃度，將裝載在板上的樣品的內(nèi)插值乘以20，以將當(dāng)dea、脲和中和溶液的體積累加時(shí)產(chǎn)生的稀釋考慮在內(nèi)。將值計(jì)算為與運(yùn)載體處理的動(dòng)物相比的aβ40的百分比變化。
腦和血漿樣品的生物分析
使用ultraperformance
裝置：
tecangenesisrsp200；biomeknxp，貝克曼庫(kù)爾特公司(beckmancoulter)；西格瑪公司(sigma)4k15離心機(jī)；acquityuplc，沃特斯公司(waters)；sciexapi4000tq，應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(appliedbiosystems)；ms軟件：analyst版本1.4.1
化學(xué)品
乙腈，hplc級(jí)，fluka公司，no.34967n；甲醇，hplc級(jí)，西格瑪-奧德里奇公司(sigma-aldrich)，批次9003s；甲酸，hplc級(jí)，riedel-de
樣品制備
通過(guò)將腦與水1:4(v/v):2-丙醇:dmso(50:30:20v/v/v)攪勻，隨后通過(guò)離心和收集上清液制備腦組織勻漿。使用hamilton機(jī)器制備校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)品和qc樣品。使用biomek機(jī)器將在乙腈(1ng/mlistd)中的150μlistd添加至25μl的校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)品、qc樣品和檢測(cè)樣品(血漿和腦組織勻漿)中。離心(6200g，4℃，20min)之后，將來(lái)自每個(gè)樣品的100μl上清液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新板并使用biomek機(jī)器(體內(nèi)轉(zhuǎn)移方法文件(methodfileinvivotransfer))將其與100μl水和0.1％甲酸混合。在快速離心(6200g，4℃，5min)之后，將這些樣品置于自動(dòng)取樣器中。
uplc-ms/ms分析
用在正離子電噴射離子化模式中的應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(appliedbiosystems)sciexapi4000儀器完成ms/ms檢測(cè)。以親代>子代質(zhì)荷比(m/z)檢測(cè)tc和istd。使用氮?dú)庾鳛殪F化器氣體和碰撞氣體。與血漿和腦分析物濃度線性相關(guān)的峰面積在1.00-1000ng/ml血漿以及5.00-5000ng/g腦的范圍內(nèi)(針對(duì)稀釋校正的)。如果血漿/腦樣品藥物濃度高于1000ng/ml或5000ng/g，該樣品在分析之前在空白血漿/空白腦組織勻漿中適當(dāng)稀釋。
色譜系統(tǒng)
分析柱：
沃特斯acquityuplchssc18sb(ph2-8)1.8μm，2.1x30mm。
流動(dòng)相a：0.1％水性甲酸或0.1％水性氫氧化銨
流動(dòng)相b：具有0.1％水性甲酸或0.1％水性氫氧化銨的乙腈。
弱洗劑：甲醇
強(qiáng)洗劑：乙腈/異丙醇/甲酸(50/50/2v/v/v)
流速：0.6ml/min
運(yùn)行時(shí)間：3min。
至廢料：0-0.5min
溫度：40℃
梯度：
將化合物11和15以10mg/kg口服強(qiáng)飼(p.o.)的劑量給予，并且在給藥后3小時(shí)收集腦和血漿樣品，并且如上文所描述測(cè)量以下暴露。
表3：化合物11的結(jié)果
表4：化合物15的結(jié)果
如表3和表4中所示，本發(fā)明的化合物能夠穿透血腦屏障并且顯示在cns中的功效。
mdck-mdr1測(cè)定
在mdck-mdr1細(xì)胞中評(píng)估測(cè)試化合物的滲透性，將這些細(xì)胞在96轉(zhuǎn)孔(transwell)板中培養(yǎng)至融合(4-6天)。用轉(zhuǎn)運(yùn)緩沖液(hbss+1％bsa)將測(cè)試化合物稀釋至0.5μm的濃度并應(yīng)用于細(xì)胞單層的頂側(cè)或基底外側(cè)。在37℃和5％co2下，在95％的相對(duì)濕度，經(jīng)60分鐘的孵育時(shí)間，對(duì)從a到b方向或b到a方向的測(cè)試化合物的滲透一式三份進(jìn)行確定。基于轉(zhuǎn)孔板的受體和供體孔中分析物/is的峰面積比，通過(guò)lc-ms/ms分析來(lái)量化測(cè)試化合物。
使用以下等式計(jì)算表觀滲透性系數(shù)papp(cm/s)：
papp＝(dcr/dt)xvr/(axc0)
其中dcr/dt是受體室中化合物的累積濃度作為時(shí)間的函數(shù)(μm/s)；vr是受體室中的溶液體積(頂側(cè)上0.05ml；基底外側(cè)上0.25ml)；a是運(yùn)輸?shù)谋砻婷娣e，即單層的面積為0.0804cm2；c0是供體室中的初始濃度(μm)。
當(dāng)流出比(pappba/pappab)≥2時(shí)，將化合物歸類為pgp底物。
表5：所選化合物的bace1活性
如表5中所示，本發(fā)明的大部分示例性化合物具有低于2的mdck-mdr1流出比并且因此可能能夠穿過(guò)血腦屏障(e克恩斯(ekerns)，l迪(ldi)，《類藥屬性：概念、結(jié)構(gòu)化設(shè)計(jì)和方法》(drug-likeproperties:concepts,structuredesignandmethods)(2008)愛(ài)思唯爾(elsevier))。