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本申請(qǐng)要求根據(jù)35u.s.c.§119(e)的提交于2014年12月23日的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/096,077的權(quán)益，其通過援引并入本文。

背景技術(shù)：

us專利號(hào)7,592,360(授權(quán)日2009年9月22日)公開了化合物(i)：

或(3s,4r)-3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸4-甲基芐基酯(在專利‘360中稱為(3s,4r)-4-甲基芐基3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸酯，并且在別處稱為mk-0657或cerc-301)。作為n-甲基-d-天門冬氨酸受體亞單位2b(nmda-glun2b或nr2b)的有效選擇性拮抗劑，化合物(i)首先被研發(fā)用于治療帕金森病(addyetal.，j.clin.psychopharmacol.，49:856-864(2009))?；衔?i)在罹患治療抗性重度抑郁癥的患者的初步研究顯示，在17項(xiàng)漢密爾頓(hamilton)抑郁評(píng)定量表和貝克(beck)抑郁自評(píng)問卷中顯示抗抑郁的作用(ibrahimetal.，j.clin.psychopharmacol.，32(4):551-557(2012))。由于研究的小樣本，不能從研究的初步數(shù)據(jù)中得到關(guān)于化合物(i)的潛在功效或安全性的確定性結(jié)論。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的主題提供化合物(i)的某些多晶型，

和包含化合物(i)或所述多晶型的藥物組合物，以及使用或制備所述組合物和藥物組合物的方法。

已發(fā)現(xiàn)化合物(i)可以多種晶型(多晶型)存在。已發(fā)現(xiàn)一種特別的晶型，形式ii，其相比于其他晶型，為更加熱力學(xué)穩(wěn)定且從而可能更適合于批量制備和處理。已開發(fā)有效且經(jīng)濟(jì)的方法大規(guī)模、高純度地制備化合物(i)和形式ii。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，形式ii已顯示出在治療抑郁癥上的安全性和有效性，且當(dāng)微?；瘯r(shí)，相比于非微粒化的形式ii，具有改善的吸收。

本發(fā)明的一方面提供一種化合物，其是化合物(i)的基本上純的晶型ii，其顯示出以下項(xiàng)的至少一種：

(i)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖包含約5.9和8.8度的2θ角的峰；

(ii)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖基本上如圖1a所示；

(iii)使用甲醇作為稀釋劑獲得的紫外吸收光譜圖基本上如圖2所示；

(iv)紅外光譜圖基本上如圖3所示；

(v)在約600mhz下在cd3cn中的質(zhì)子核磁共振譜圖基本上如圖4所示；

(vi)在約150mhz下在cd3cn中的¹³c核磁共振譜圖基本上如圖5所示；

(vii)熱重分析曲線基本上如圖6所示；以及

(viii)差示掃描量熱圖基本上如圖7所示。

在此也提供如圖1b描述的化合物(i)的晶型i。

本發(fā)明的另一方面提供本發(fā)明的藥物組合物，其包含x90粒度為約10μm或更小的化合物(i)的顆粒。化合物(i)的適合的顆粒例如包括微米顆粒和納米顆粒。

本發(fā)明的另一方面提供治療對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的方法。該方法包括向有此需要的患者給藥有效量的本發(fā)明的化合物或藥物組合物。

本發(fā)明的另一方面提供治療自殺意念的方法，其包括向患有、懷疑患有或已診斷患有自殺意念的患者給藥化合物(i)的形式i或ii。

本發(fā)明的另一方面提供靶向于在細(xì)胞上表達(dá)的n-甲基-d-天門冬氨酸(nmda)受體亞單位2b(glun2b)的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的本發(fā)明的化合物或藥物組合物。

本發(fā)明的另一方面提供降低化合物(i)的吸收速率的方法，其包括向有此需要的患者與食物一起給藥有效量的本發(fā)明的化合物(i)，其中該化合物基本上在與給予食物同時(shí)、或至多給予食物后約2小時(shí)、或至多給予食物前約30分鐘給藥。

本發(fā)明的另一方面提供制備化合物(i)、衍生物及相關(guān)的中間體的方法。

本發(fā)明的另一方面提供制備化合物(i)的方法：

(i)使化合物(8)與三氟甲磺酸酐反應(yīng)生成三氟甲磺酸酯；

(ii)使上述三氟甲磺酸酯與氨反應(yīng)生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)與2-氯嘧啶反應(yīng)生成化合物(i)。

本發(fā)明的另一方面提供制備化合物(i)的形式ii的方法。在水中懸浮純化的化合物(i)的形式i充足的時(shí)間或加熱固體的形式i，由此可容易地完成向形式ii的轉(zhuǎn)化。

附圖簡(jiǎn)述

圖1a示出化合物(i)的晶型ii的x-射線粉末衍射圖。

圖1b示出化合物(i)的晶型i和晶型ii的x-射線粉末衍射圖。

圖2示出化合物(i)的晶型ii的紫外吸收光譜圖。

圖3示出化合物(i)的晶型ii的紅外光譜圖。

圖4示出化合物(i)的晶型ii的質(zhì)子核磁共振譜圖。

圖5示出化合物(i)的晶型ii的¹³c核磁共振譜圖。

圖6示出化合物(i)的晶型ii的熱重分析曲線。

圖7示出化合物(i)的晶型ii的差示掃描量熱圖。

圖8示出化合物(i)的晶型ii在大鼠中相比于其活動(dòng)效應(yīng)的抗抑郁效應(yīng)的劑量應(yīng)答曲線。

圖9示出化合物(i)的晶型ii在大鼠中的對(duì)高血壓作用的劑量應(yīng)答曲線。

圖10a示出化合物(i)的晶型ii在健康的人中在禁食狀態(tài)下的藥代動(dòng)力學(xué)特征(血漿濃度)。

圖10b示出化合物(i)的晶型ii在健康的人中在進(jìn)食或禁食下藥代動(dòng)力學(xué)的差異。

圖11示出在化合物(i)的單口服劑量對(duì)收縮壓的影響。

圖12示出在具有或不具有哌唑嗪下化合物(i)的單口服劑量對(duì)收縮壓的影響。

圖13示出在給藥24小時(shí)后化合物(i)和氯胺酮對(duì)大鼠強(qiáng)制游泳測(cè)試的影響(*p<0.05，相比于載體組～p>0.05)。

具體實(shí)施方式

定義

除非明確另有說明，文中所使用的以下術(shù)語具有以下表示的含義。

“微?；敝割w粒的直徑在微米的范圍。制備微粒化的顆粒的方法包括基于摩擦的技術(shù)，例如研磨(如噴射研磨)和碾磨，以及基于超臨界流體的技術(shù)，例如超臨界溶液的快速膨脹法(ress)、超臨界反溶劑法(sas)和氣體飽和溶液制粒法(pgss)。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)顆粒是由噴射研磨微?；摹?/p>

“粒度”指如由激光衍射粒度分析確定的，例如使用分析儀如malvern、sympatec、microtac或horibe完成的活性藥物成分(api)例如化合物(i)或化合物(i)的形式(ii)的顆粒尺寸。

“x90”指對(duì)應(yīng)于90體積％的篩下物累計(jì)分布的粒度。

“x50”指對(duì)應(yīng)于50體積％的篩下物累計(jì)分布的粒度。

“x10”指對(duì)應(yīng)于10體積％的篩下物累計(jì)分布的粒度。

“平均粒度”或“平均ps”包括d43粒度。

“d43”指依據(jù)體積平均直徑或debroukere平均值計(jì)算的粒度。

“藥學(xué)上可接受的賦形劑”指非其自身作為治療劑，用作載體、稀釋劑、輔料、粘合劑和/或媒介以將治療劑遞送至患者或者添加至藥物組合物中以改善其操作或儲(chǔ)存特性的或者允許或促進(jìn)化合物或藥物組合物形成用以給藥的單元?jiǎng)┬偷娜魏挝镔|(zhì)。藥學(xué)上可接受的賦形劑在藥學(xué)領(lǐng)域中是已知的且公開于例如remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第21版(lippincottwilliams&wilkins，baltimore，md，2005)和handbookofpharmaceuticalexcipients，americanpharmaceuticalassociation，washington，d.c.，(例如分別出版于1986、1994和2000年的第1版、第2版和第3版)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)知曉，藥學(xué)上可接受的賦形劑可提供各種功能且可描述為濕潤(rùn)劑、緩沖劑、懸浮劑、潤(rùn)滑劑、乳劑、崩解劑、吸收劑、防腐劑、表面活性劑、著色劑、調(diào)味劑和甜味劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑的實(shí)例包括但不限于(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、醋酸纖維素、羥丙基甲基纖維素和羥丙基纖維素；(4)粉末狀黃芪膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，例如可可脂及栓劑蠟；(9)油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原的水；(17)等滲鹽水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)ph緩沖溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；以及(22)在藥物制劑中使用的其他無毒的可相容的物質(zhì)。

“單位劑型”指適合作為單位劑量用于人類或動(dòng)物的物理離散單位。各單位劑型可包含經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生期望的效果的預(yù)定量的治療劑。

“患者”指動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物，包括但不限于人類。因此，本文公開的方法可用于人類治療和獸醫(yī)應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，患者是哺乳動(dòng)物。在其他實(shí)施方案中，患者是人類。

“有效量”或“治療有效量”指基于功效及潛在毒性的參數(shù)和本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)產(chǎn)生期望的效果如治療或預(yù)防病癥的化合物或藥物組合物的量。有效量可以以例如每天或每周1次、2次、3次、4次或更多劑量給藥。

“治療”指達(dá)到或獲得有益的或期望的結(jié)果，例如臨床結(jié)果。在一些實(shí)施方案中，有益的或期望的結(jié)果是下述的任何一種或多種：抑制或遏制病癥的發(fā)作或發(fā)展、減少病癥的嚴(yán)重性、減少與病癥相關(guān)的癥狀的數(shù)目或嚴(yán)重性、改善罹患病癥的患者的生活質(zhì)量、減少治療病癥的另一種需要的藥物的劑量、增強(qiáng)患者服用另一種藥物對(duì)病癥的效果以及延長(zhǎng)患有病癥的患者的存活期。例如，在重度抑郁癥(mdd)的情況下，治療可包括mdd的至少一個(gè)可測(cè)量指標(biāo)或癥狀的臨床的顯著降低?？蓽y(cè)量指標(biāo)包括腦電波圖(eeg)慢波活動(dòng)(swa)及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)。mdd的嚴(yán)重程度可以例如使用montgomery-asberg抑郁等級(jí)量表(madrs)、漢密爾頓抑郁等級(jí)量表(ham-d或hrsd，例如ham-d17)、貝克抑郁自評(píng)問卷(bdi)、vas-抑郁癥、漢密爾頓焦慮等級(jí)量表(ham-a)、簡(jiǎn)明精神病等級(jí)量表-陽性癥狀(bprs)、臨床醫(yī)師專用分裂狀態(tài)量表(cadss)、楊氏狂躁等級(jí)量表(ymrs)、snaithhamilton快感量表-經(jīng)修改評(píng)分系統(tǒng)(shaps-m)、wechsler抑郁等級(jí)量表、raskin抑郁等級(jí)量表、抑郁癥狀問卷(ids)、抑郁癥狀快速問卷(qids)或本領(lǐng)域中已知用于mmd評(píng)級(jí)的任何其他量表來評(píng)定。

“預(yù)防”指減小患者罹患該患者沒有患有但有風(fēng)險(xiǎn)罹患病癥的可能性?！坝酗L(fēng)險(xiǎn)”指患者具有一種或多種風(fēng)險(xiǎn)因子，其是與病癥的罹患相關(guān)的測(cè)量參數(shù)且在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。具有一種或多種風(fēng)險(xiǎn)因子的患者相比于沒有這樣的風(fēng)險(xiǎn)因子的患者具有更高的罹患該病癥的可能性。

“輔劑”指與至少一種額外的治療結(jié)合使用的化合物或藥物組合物。作為輔劑，化合物或藥物組合物可改善至少一種另外的治療的療效，例如通過完成對(duì)至少一種另外的治療的快速應(yīng)答，減少病癥的嚴(yán)重性，減少與病癥相關(guān)的癥狀的數(shù)目或嚴(yán)重性，或減少至少一種另外的治療的劑量。輔劑可與至少一種另外的治療劑一起以單一的組合物給藥，或以獨(dú)自的組合物(的形式)基本上同時(shí)或在不同的時(shí)間分別給藥。

“對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答”的病癥包括如下任何病癥，其中給藥n-甲基-d-天門冬氨酸受體亞單位2b(nr2b)拮抗劑治療或預(yù)防該病癥，這樣的術(shù)語為本文所定義。在此，通過nmdanr2b拮抗劑給藥癥狀減弱的病癥是對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥。對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的實(shí)例包括帕金森病、神經(jīng)性疼痛(例如皰疹后遺神經(jīng)痛、神經(jīng)損傷、痛(dynias)、外陰疼痛、幻肢痛、根部撕裂、疼痛性糖尿病神經(jīng)病變、疼痛性創(chuàng)傷單神經(jīng)病變、疼痛性多發(fā)性神經(jīng)病變、中樞性疼痛綜合征和手術(shù)后疼痛綜合征、乳房切除術(shù)后綜合征、剖胸術(shù)后綜合征、殘端疼痛)、骨骼及關(guān)節(jié)疼痛(例如骨關(guān)節(jié)炎)、反覆性運(yùn)動(dòng)疼痛、牙痛、癌癥疼痛、肌筋膜疼痛(肌肉損傷、纖維肌痛)、手術(shù)期間疼痛(一般手術(shù)、婦科手術(shù))、慢性疼痛、痛經(jīng)、以及與心絞痛相關(guān)的疼痛，和各種來源的炎性痛(例如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕病、腱鞘炎及痛風(fēng))、頭痛、偏頭痛和叢集性頭痛、精神分裂癥、中風(fēng)、創(chuàng)傷性腦損傷、阿茲海默癥、大腦局部缺血、肌肉萎縮性側(cè)索硬化、亨廷頓氏病、感覺神經(jīng)性聽力損失、耳鳴、青光眼、由癲癇發(fā)作或由神經(jīng)毒素度化或由葡萄糖和/或氧氣對(duì)腦的損傷引起的神經(jīng)損傷、由視通路的神經(jīng)退化引起的視力損失、下肢不寧綜合征、多系統(tǒng)萎縮、非血管性頭痛、慢性(或慢性持續(xù)性)、亞慢性或急性咳嗽、原發(fā)性痛覺過敏、繼發(fā)性痛覺過敏、原發(fā)性觸模痛、繼發(fā)性觸摸痛、或由中樞敏感化引起的其他疼痛、運(yùn)動(dòng)障礙(例如伴隨正常劑量的l-多巴的副作用)、抑郁癥(例如重度抑郁癥(mdd)、和難治性抑郁癥(mdd)、與創(chuàng)傷和壓力相關(guān)的病癥(例如急性壓力癥和創(chuàng)傷后壓力癥(ptsd))、具有抑郁特征的躁郁癥、焦慮癥和強(qiáng)迫癥以及相關(guān)病癥。關(guān)于抑郁癥、躁郁癥、焦慮癥和強(qiáng)迫癥基相關(guān)病癥和其他病癥的額外的實(shí)例參見diagnosticandstatisticalmanualofmentaldisorders，第5版(americanpsychiatricassociation，arlington，va，2013)。

“抗高血壓劑”指降低血壓的任何藥劑?？垢哐獕簞┑膶?shí)例包括鈣離子通道阻斷劑、血管收縮素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ace抑制劑)、血管收縮素ii受體拮抗劑(a-ii拮抗劑)、利尿劑、β-腎上腺素能受體阻斷劑(β-阻斷劑)、血管擴(kuò)張劑及α-腎上腺素能受體阻斷劑(α-阻斷劑)。

“間歇給藥”指在全部例如24小時(shí)時(shí)間段或7天時(shí)間段中或根據(jù)需求以不規(guī)律時(shí)間段給藥。

“使…反應(yīng)”指在適合的條件下結(jié)合或混合兩種或更多種藥劑以制備所指示的或期望的產(chǎn)品。所指示的或期望的產(chǎn)品可不必直接得自于使所述藥劑反應(yīng)；使所述藥劑反應(yīng)可產(chǎn)生一種或多種中間體，其最終導(dǎo)致形成所指示的或期望的產(chǎn)品。

“重結(jié)晶”指純化步驟，其中固體化合物以適合溶劑溶解且再結(jié)晶以提供更高純度的固體。再結(jié)晶的類型包括單一溶劑、多個(gè)溶劑、熱過濾和播晶種。

“漿化”指化合物的晶體懸浮于適當(dāng)溶劑中，攪拌懸浮液且分離所述晶體的純化過程。

“例如”具有與“例如但不限于”相同的含義。類似地，“包括”具有與“包括但不限于”相同的含義，而“包含”具有與“包含但不限于”相同的含義。

“在約x與約y之間”指值在約x和約y之間，包括約x和約y。

除了在實(shí)施例中或另外指出，本文中所使用的表達(dá)成分的數(shù)量、反應(yīng)條件等的所有的數(shù)目均應(yīng)理解為由術(shù)語“約”修飾。因此，除非有相反的指示，這樣的數(shù)目是可取決于想要獲得的期望的性能而改變的近似值。最低吸納度地，且不試圖限制將等效物原則應(yīng)用于權(quán)利要求的范圍，各數(shù)值參數(shù)應(yīng)根據(jù)有效位數(shù)的數(shù)目和一般舍入技術(shù)來理解。

盡管闡述本發(fā)明主題的廣泛范疇的數(shù)值范圍和參數(shù)為近似值，但盡可能精確地報(bào)道實(shí)施例中闡述的數(shù)值。然而任何數(shù)值均固有地包含由其對(duì)應(yīng)測(cè)試測(cè)量中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差必然引起的某些誤差。

化合物

已發(fā)現(xiàn)化合物(i)可以多種結(jié)晶或多晶型存在。至今已識(shí)別的化合物(i)的多晶型為：形式i、形式ii和形式iii。形式i是由針狀顆粒(棒狀)組成，而形式ii具有似片狀的形貌。已測(cè)定形式iii僅為多晶型混合物。化合物(i)的多晶型或其多晶型中的任何(一種)均未在美國(guó)專利號(hào)7,592,360中公開。

三種多晶型中熱力學(xué)最穩(wěn)定的形式ii是白色結(jié)晶粉末。該形式是熔點(diǎn)為123-124℃的無水物。形式i和iii已顯示出均以固體狀態(tài)和以含水懸液熱轉(zhuǎn)化成形式ii。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供化合物(i)的晶型ii

展現(xiàn)出以下項(xiàng)中的至少一種：

(i)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖包含約5.9和8.8度的2θ角的峰；

(ii)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖基本上如圖1a所示；

(iii)使用甲醇作為稀釋劑獲得的紫外吸收光譜圖基本上如圖2所示；

(iv)紅外光譜圖基本上如圖3所示；

(v)在約600mhz下在cd3cn中的質(zhì)子核磁共振譜圖基本上如圖4所示；

(vi)在約150mhz下在cd3cn中的¹³c核磁共振譜圖基本上如圖5所示；

(vii)熱重分析曲線基本上如圖6所示；以及

(viii)差示掃描量熱圖基本上如圖7所示。

在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物(i)的晶型ii是基本上純的?！盎旧霞兊摹敝富衔?i)的晶型ii為至少約90重量％純或不含包括其他多晶型的雜質(zhì)的分離形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約95重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約96重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約97重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約98重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99.5重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99.6重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99.7重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99.8重量％純。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的基本上純的晶型ii是至少約99.9重量％純。純度百分比可由本領(lǐng)域中已知的的任何方法來評(píng)定，例如氣相色譜(gc)、柱色譜(cc)、液相色譜(lc)、高壓液相色譜(hplc)、薄層色譜(tlc)、質(zhì)譜(ms)和/或高分辨率質(zhì)譜(hrms)。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出包含約5.9和8.8度的2θ角的峰的x-射線粉末衍射圖，其2θ角分別對(duì)應(yīng)于約14.9和10.0埃的晶格面距(d-spacing)。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖1a所示的x-射線粉末衍射圖。在另一實(shí)施方案中，該化合物還顯示出以下項(xiàng)中的至少一種：基本上如圖2示出的紫外吸收光譜圖，基本上如圖3示出的紅外光譜圖，基本上如圖4示出的質(zhì)子核磁共振譜圖，基本上如圖5示出的¹³c核磁共振譜圖，基本上如圖6示出的熱重分析曲線，以及基本上如圖7示出的差示掃描量熱圖。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖2所示的紫外吸收光譜圖。在另一實(shí)施方案中，該紫外吸收光譜圖包含在約236±2nm處的最大吸收。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖3所示的紅外光譜圖。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖4所示的質(zhì)子核磁共振譜圖。在另一實(shí)施方案中，該質(zhì)子核磁共振譜圖包含基本上列于表1的峰。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖5所示的¹³c核磁共振譜圖。在另一實(shí)施方案中，該¹³c核磁共振譜圖包含基本上列于表2的峰。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖6所示的熱重分析曲線。在另一實(shí)施方案中，該熱重分析曲線對(duì)應(yīng)于直至約250℃的約0.16％的重量損失。

在另一實(shí)施方案中，該化合物顯示出基本上如圖7所示的差示掃描量熱圖。在另一實(shí)施方案中，該差示掃描量熱圖包含在溫度約124℃處的吸熱峰。

本發(fā)明還提供如圖1b描述的化合物(i)的晶型i。形式i的純度可至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％，至少約90％或至少約95％。

藥物組合物

本發(fā)明的另一方面提供包含有效量的如上述任一實(shí)施方案的化合物(i)的晶型ii的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物(i)的晶型ii是如上述任一實(shí)施方案的基本上純的。本文也提供包含有效量的如文中描述的化合物(i)的晶型i的藥物組合物。

本發(fā)明的另一方面提供包含有效量的x90粒度為約10μm或更低的微粒形式的化合物(i)的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，x90粒度是約8μm以下。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約6μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約5μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約1-10μm。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約2-8μm。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約3-6μm。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約4-5μm。在另一實(shí)施方案中，x90粒度是約4.5μm。x90粒度的其他示例性實(shí)施方案包括約4μm、約3.5μm、約3μm、約2.5μm、約2μm、約1.5μm、約1μm、約0.9μm、約0.8μm、約0.7μm、約0.6μm、約0.5μm、約0.4μm、約0.3μm、約0.2μm以及約0.1μm。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是晶型ii。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是基本上純的晶型ii。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是晶型i。

本發(fā)明的另一方面提供包含有效量的x50粒度為約5μm或更低的微粒形式的化合物(i)的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，x50粒度是約4μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約3μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約2μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約1-5μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約1-4μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約1-3μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約1-2μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約2μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約1.9μm。

本發(fā)明的另一方面提供包含有效量的x10粒度為約2μm或更低的微粒形式的化合物(i)的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，x10粒度是約1μm或更低。在另一實(shí)施方案中，x10粒度是約0.1-1μm。在另一實(shí)施方案中，x10粒度是約0.1-0.9μm。在另一實(shí)施方案中，x10粒度是約0.5-0.9μm。在另一實(shí)施方案中，x10粒度是約0.7-0.8μm。在另一實(shí)施方案中，x10粒度是約0.8μm。在另一實(shí)施方案中，x50粒度是約7.9μm。

在本文公開的藥物組合物的實(shí)施方案中，藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑的實(shí)例包括以上描述的那些，例如載體、表面活性劑、增稠或乳化劑、固體粘合劑、分散或懸浮助劑、增溶劑、著色劑、調(diào)味劑、包衣、崩解劑、潤(rùn)滑劑、甜味劑、防腐劑、等張力劑及其任意組合。藥學(xué)上可接受的賦形劑的選擇和使用在例如remington：thescienceandpracticeofpharmacy，第21版(lippincottwilliams&wilkins，baltimore，md，2005)中有教導(dǎo)。

在本文公開的藥物組合物的一些實(shí)施方案中，藥物組合物還包含至少一種額外的活性劑。這樣的活性劑的實(shí)例包括：(1)非甾體抗炎劑；(2)cox-2抑制劑；(3)緩激肽b1受體拮抗劑；(4)鈉通道阻斷劑和拮抗劑；(5)一氧化氮合成酶(nos)抑制劑；(6)甘氨酸位點(diǎn)拮抗劑；(7)鉀通道開放劑；(8)ampa/紅藻氨酸受體拮抗劑；(9)鈣通道拮抗劑；(10)gaba-a受體調(diào)節(jié)劑(例如gaba-a受體激動(dòng)劑)；(11)基體金屬蛋白酶(mmp)抑制劑；(12)血栓溶解劑；(13)類阿片藥物例如嗎啡；(14)嗜中性粒細(xì)胞抑制因子(nif)；(15)l-多巴；(16)卡比多巴；(17)左旋多巴/卡比多巴；(18)多巴胺激動(dòng)劑如溴麥角環(huán)肽、培高利特、普拉克索、羅匹尼羅；(19)抗膽堿藥物；(20)金剛烷胺；(21)卡比多巴；(22)兒茶酚o-甲基轉(zhuǎn)移酶(comt)抑制劑如恩他卡朋及托卡朋；(23)單胺氧化酶b(mao-b)抑制劑；(24)阿片制劑激動(dòng)劑或拮抗劑；(25)5ht受體激動(dòng)劑或拮抗劑；(26)nmda受體激動(dòng)劑或拮抗劑；(27)nk1拮抗劑；(28)選擇性血清素再吸收抑制劑(ssri)以及選擇性血清素和去甲腎上腺素再吸收抑制劑(ssnri)；(29)三環(huán)抗抑郁藥物；(30)去甲腎上腺素調(diào)節(jié)劑；(31)鋰；(32)丙戊酸鹽；(33)d-絲氨酸；(34)neurontin(加巴噴丁)；(35)止咳藥；(36)抗組胺劑(例如第一代抗組胺劑)；(37)解充血?jiǎng)?38)祛痰劑；(39)粘液溶解劑；(40)退熱劑；(41)鎮(zhèn)痛劑。

在本文公開的藥物組合物的一些實(shí)施方案中，藥物組合物還包含抗高血壓劑。在一些實(shí)施方案中，抗高血壓劑是α1-腎上腺素受體拮抗劑或α2-腎上腺素受體拮抗劑。α1-腎上腺素受體拮抗劑的非限制性實(shí)例包括多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明及其代謝物和其類似物。α2-腎上腺素受體拮抗劑的非限制性實(shí)例包括可樂定、胍那芐、胍諾沙芐及其代謝物和其類似物。

藥物組合物可以制備為任何適合的單位劑型。例如，藥物組合物可以經(jīng)調(diào)配以固體或液體的形式給藥，包括適用于以下的藥物組合物：(1)例如以灌藥、片劑(例如目的是經(jīng)頰、舌下及全身性吸收者，包括經(jīng)包膠的片劑)、膠囊(例如干式填充的硬明膠、軟明膠或經(jīng)包膠的膠囊)、囊片、大丸劑、粉劑、藥囊、顆粒劑、糊劑、口腔噴霧劑、糖錠、口含錠、丸粒、糖漿、懸浮液、酏劑、液體、脂質(zhì)體、乳液和微乳液形式口服給藥；(2)由例如無菌溶液或懸浮液形式皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或硬膜外注射的腸胃外給藥。此外，藥物組合物可經(jīng)調(diào)配以用于立即、持續(xù)、延長(zhǎng)、延遲或控制釋放。

在一個(gè)實(shí)施方案中，調(diào)配藥物組合物以口服給藥。在另一實(shí)施方案中，藥物組合物為片劑或膠囊的形式。在另一實(shí)施方案中，藥物組合物為片劑的形式。在另一實(shí)施方案中，藥物組合物為膠囊的形式。在另一實(shí)施方案中，配制立即釋放的片劑或膠囊。在另一實(shí)施方案中，配制持續(xù)、延長(zhǎng)、延遲或控制釋放的片劑或膠囊。

片劑可以通過任選地與一種或多種助劑壓縮或模制制備。壓縮片劑可通過在合適的機(jī)器中壓縮任選地與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動(dòng)形式的如粉末或顆粒的化合物(i)來制備。模制片劑可以通過在合適的機(jī)器中用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)的粉末化合物的混合物模壓來制備。片劑可任選地進(jìn)行包衣或刻痕且可經(jīng)調(diào)配以提供持續(xù)、延長(zhǎng)、延遲或可控釋放的化合物(i)。配制此等持續(xù)、延長(zhǎng)、延遲或可控釋放的組合物的方法是本領(lǐng)域中已知的且公開于已授權(quán)的美國(guó)專利中，包括但不限于美國(guó)專利號(hào)4,369,174、4,842,866及其引用的參考文獻(xiàn)?？墒褂冒逻f送化合物至腸道(見例如美國(guó)專利號(hào)6,638,534、5,217,720、6,569,457及其引用的參考文獻(xiàn))。除了片劑，可配制其他劑型例如膠囊、顆粒及凝膠膠囊，以提供持續(xù)、延長(zhǎng)、延遲或可控釋放的化合物(i)。

在另一實(shí)施方案中，配制藥物組合物用于腸胃外給藥。適合腸胃外給藥的藥物組合物的實(shí)例包括無菌注射水溶液和無菌注射非水溶液，各包含例如抗氧劑、緩沖液、抑菌劑和/或使得制劑與預(yù)期接受者的血液等張的溶質(zhì)；以及含水無菌懸浮液和非水無菌懸浮液，其各自包含例如懸浮劑和/或增稠劑。所述制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿或小瓶中，且可儲(chǔ)存在冷凍干燥(凍干)條件下，在使用前僅需要立即加入無菌液體載體例如水。在一個(gè)實(shí)施方案中，配制藥物組合物用于靜脈給藥。

在另一實(shí)施方案中，化合物(i)或化合物i的晶型(i)或(ii)的有效量是約1mg-200mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約4mg-16mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約4mg-12mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約4mg-8mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約8mg-20mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約12mg-20mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約16mg-20mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約8mg-20mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約8mg-16mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約8mg-12mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約12mg-20mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約12mg-16mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約4mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約8mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約12mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約16mg。在另一實(shí)施方案中，有效量是約20mg。

結(jié)合本文的實(shí)施例，在此還提供包含上述公開的化合物(i)及輔助藥劑的套組。在示例性實(shí)施方案中，該套組包含化合物(i)和選自以下的一種或多種輔助藥劑：選擇性血清素再吸收抑制劑(ssri)、選擇性血清素和去腎上腺素再攝取抑制劑(ssnri)、三環(huán)抗抑郁藥物、去甲腎上腺素調(diào)節(jié)劑、止咳劑、抗組胺劑、解充血?jiǎng)㈧钐祫?、粘液溶解劑、退熱劑、?zhèn)痛劑以及抗高血壓劑。在一些實(shí)施方案中，兩種或更多種成分(化合物(i)和輔助藥劑)可同時(shí)給藥。

在一些實(shí)施方案中，該套組可包含抗高血壓劑作為輔助藥劑。在一些實(shí)施方案中，抗高血壓劑是α1-腎上腺素受體阻斷劑。α1-腎上腺素受體拮抗劑的非限制性實(shí)例包括多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明、其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽及其類似物。

在一些實(shí)施方案中，這些藥劑可依次給藥。特定的給藥模式和給藥方案可通過本領(lǐng)域普通技人員(例如實(shí)習(xí)醫(yī)師)無須過多的實(shí)驗(yàn)即可確定。

使用方法

本發(fā)明的另一方面提供治療或預(yù)防對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的化合物(i)的晶型i或ii或者包含化合物(i)的晶型i或ii的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法是治療對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥。在另一實(shí)施方案中，晶型ii如上述任何實(shí)施方案所描述是基本上純的。

在另一實(shí)施方案中，對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥是抑郁癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是重度抑郁癥(mdd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是難治性抑郁癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是具有抑郁特征的躁郁癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是焦慮癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是創(chuàng)傷后壓力癥(ptsd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是具有自殺意念的抑郁癥、mdd或trmdd。

在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物與食物一起給藥。在另一實(shí)施方案中，該化合物或藥物組合物不與食物一起給藥。

本發(fā)明也提供靶向于在細(xì)胞上表達(dá)的n-甲基-d-天門冬氨酸(nmda)受體亞單位2b(glun2b)的方法，其通過向有此需要的個(gè)體給藥治療有效量的化合物i的形式i或形式ii，使得時(shí)間足以使所述化合物結(jié)合至glun2b。如上述所解釋，glun2b在各種各樣的疾病中起到關(guān)鍵作用，所述疾病包括精神分裂癥、中風(fēng)、創(chuàng)傷性腦損傷、阿茲海默癥、大腦局部缺血、肌肉萎縮性側(cè)索硬化、亨廷頓氏病、感覺神經(jīng)性聽力損失、耳鳴、青光眼、由癲癇發(fā)作或由神經(jīng)毒素毒化或由葡萄糖和/或氧氣對(duì)腦的損傷引起的神經(jīng)損傷、由視通路的神經(jīng)退化引起的視力損失、下肢不寧綜合征、多系統(tǒng)萎縮、非血管性頭痛、慢性(或慢性持續(xù)性)、亞慢性或急性咳嗽、原發(fā)性痛覺過敏、繼發(fā)性痛覺過敏、原發(fā)性異常性痛、繼發(fā)性異常性痛、或由中樞敏感化引起的其他疼痛、運(yùn)動(dòng)障礙(例如伴隨正常劑量的l-多巴的副作用)、抑郁癥(例如重度抑郁癥(mdd)、和難治性抑郁癥(mdd)、與創(chuàng)傷和壓力相關(guān)的病癥(例如急性壓力癥和創(chuàng)傷后壓力癥(ptsd))、具有抑郁特征的雙相障礙、焦慮癥和強(qiáng)迫癥以及相關(guān)病癥。通過用化合物i(形式i或ii)拮抗glun2b，本發(fā)明提供治療glun2b相關(guān)疾病的新穎的方法。

本發(fā)明的另一方面提供治療或預(yù)防對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的微粒形式的化合物(i)(形式i或形式ii)，該微粒形式的x90、x50或x10粒度如上文所述任何實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法是治療對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是上述任何實(shí)施方案中描述的晶型ii。在另一實(shí)施方案中，晶型ii是如上述任何實(shí)施方案中描述的基本上純的。在另一實(shí)施方案中，對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥是抑郁癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是重度抑郁癥(mdd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是難治性抑郁癥(trmdd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是具有自殺意念的抑郁癥、mdd或trmdd。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物與食物一起給藥。在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物不與食物一起給藥。

本發(fā)明的另一方面提供治療或預(yù)防自殺意念的方法，其包括向具有或疑似具有或已經(jīng)患有自殺意念的患者給藥有效量的化合物(i)(形式i或ii)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法是治療自殺意念。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是微粒形式的并具有如上文任何實(shí)施方案所述的x90、x50或x10粒度。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是如上文任何實(shí)施方案所述的晶型ii。在另一實(shí)施方案中，晶型ii是如上文任何實(shí)施方案所述的基本上純的。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是如上文任何實(shí)施方案所述的晶型i。

在另一實(shí)施方案中，在給藥所述化合物前，所述患者已被診斷患有自殺意念約4周。在另一實(shí)施方案中，該患者還被診斷患有抑郁癥。在另一實(shí)施方案中，該患者還被診斷患有重度抑郁癥(mdd)。在另一實(shí)施方案中，該患者還被診斷患有難治性抑郁癥(trmdd)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物與食物一起給藥。在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物不與食物一起給藥。

本發(fā)明的另一方面提供降低化合物(i)的吸收速率的方法，包括與食物一起給藥有效量的化合物(i)(形式i或形式ii)至有此需要的患者，其中化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約2小時(shí)、或至多給予食物前約30分鐘給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物(i)是微粒形式的并具有如上文任何實(shí)施方案所述的x90、x50或x10粒度。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是如上文任何實(shí)施方案所述的晶型ii。在另一實(shí)施方案中，晶型ii是如上文任何實(shí)施方案所述的基本上純的。

在另一實(shí)施方案中，相比于包括不與食物一起給藥化合物(i)的方法，上述方法導(dǎo)致更低的cmax或更高的tmax。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約90分鐘、或至多給予食物前約15分鐘給藥。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約60分鐘、或至多給予食物前約10分鐘給藥。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)給藥。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或藥物組合物可通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的任何可接受的模式給藥，例如口服或腸胃外。術(shù)語“腸胃外”包括但不限于皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、由骨內(nèi)注射和由輸注技術(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物口服給藥。在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物腸胃外給藥。在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物靜脈給藥。

在本文提供的任何方法中，所述方法可還包括監(jiān)測(cè)患者的血壓，且若測(cè)得高血壓，則向該患者給藥抗高血壓劑。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或藥物組合物可與至少一種另外的上述公開的活性劑組合使用。該化合物或藥物組合物可與至少一種另外的上述公開的活性劑一起以單個(gè)組合物給藥或以獨(dú)立組合物在基本上相同或不同的時(shí)間內(nèi)(例如：依次)分別給藥。這樣的活性劑的實(shí)例包括：(1)非甾體抗炎劑；(2)cox-2抑制劑；(3)緩激肽b1受體拮抗劑；(4)鈉通道阻斷劑和拮抗劑；(5)一氧化氮合成酶(nos)抑制劑；(6)甘氨酸位點(diǎn)拮抗劑；(7)鉀通道開放劑；(8)ampa/紅藻氨酸受體拮抗劑；(9)鈣通道拮抗劑；(10)gaba-a受體調(diào)節(jié)劑(例如gaba-a受體激動(dòng)劑)；(11)基體金屬蛋白酶(mmp)抑制劑；(12)血栓溶解劑；(13)類阿片藥物例如嗎啡；(14)嗜中性粒細(xì)胞抑制因子(nif)；(15)l-多巴；(16)卡比多巴；(17)左旋多巴/卡比多巴；(18)多巴胺激動(dòng)劑如溴麥角環(huán)肽、培高利特、普拉克索、羅匹尼羅；(19)抗膽堿藥物；(20)金剛烷胺；(21)卡比多巴；(22)兒茶酚o-甲基轉(zhuǎn)移酶(comt)抑制劑如恩他卡朋及托卡朋；(23)單胺氧化酶b(mao-b)抑制劑；(24)阿片制劑激動(dòng)劑或拮抗劑；(25)5ht受體激動(dòng)劑或拮抗劑；(26)nmda受體激動(dòng)劑或拮抗劑；(27)nk1拮抗劑；(28)選擇性血清素再吸收抑制劑(ssri)以及選擇性血清素和去甲腎上腺素再吸收抑制劑(ssnri)；(29)三環(huán)抗抑郁藥物；(30)去甲腎上腺素調(diào)節(jié)劑；(31)鋰；(32)丙戊酸鹽；(33)d-絲氨酸；和(34)neurontin(加巴噴丁)；(35)止咳藥；(36)抗組胺劑(例如第一代抗組胺劑)；(37)解充血?jiǎng)?38)祛痰劑；(39)粘液溶解劑；(40)退熱劑；(41)鎮(zhèn)痛劑。在一些實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物與下述至少一種另外的活性劑一起給藥：止咳藥、第一代抗組胺劑、解充血?jiǎng)?、祛痰劑、粘液溶解劑、退熱劑、?zhèn)痛劑。

在一些實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物作為選擇性血清素再吸收抑制劑(ssri)以及選擇性血清素和去甲腎上腺素再吸收抑制劑(ssnri)的佐劑給藥。ssri和ssnri的實(shí)例包括苯奈達(dá)林、間氯哌嗪、西酞普蘭、度洛西汀、依托哌酮、非莫西汀、氟西汀、氟伏沙明、吲達(dá)品、茚氯秦、米那普侖、奈法唑酮、奧沙氟生(oxaflazone)、帕羅西汀、普羅林坦、利坦色林、舍曲林、坦度螺酮、文拉法辛和齊美定(zimeldine)。在另一實(shí)施方案中，所述方法改善ssri或ssnri在治療或預(yù)防對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的功效。在另一實(shí)施方案中，所述方法減少患者對(duì)ssri或ssnri的治療應(yīng)答所花費(fèi)的時(shí)間。在另一實(shí)施方案中，所述方法減少患者會(huì)另外需要的ssri或ssnri的劑量。在另一實(shí)施方案中，所述方法減少病癥的嚴(yán)重性或與病癥有關(guān)的癥狀的數(shù)目或嚴(yán)重性。在另一實(shí)施方案中，所述病癥是抑郁癥。在另一實(shí)施方案中，該病癥是重度抑郁癥(mdd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是難治性抑郁癥(trmdd)。在另一實(shí)施方案中，該病癥是具有自殺意念的抑郁癥、mdd或trmdd。所述佐劑可與至少一種另外的治療劑一起以單一的組合物給藥，或以獨(dú)自的組合物(的形式)基本上同時(shí)或在不同的時(shí)間分別給藥。

在本發(fā)明提供的任何的方法中，化合物(i)(形式i或形式ii)可與抗高血壓劑結(jié)合給藥。化合物(i)的使用可與升高的血壓相關(guān)聯(lián)，其可能歸因于由去甲狀腺素循環(huán)介導(dǎo)的周邊小動(dòng)脈的α1-腎上腺素能緊張度增加。由于相比于高血壓的其他常見原因如心臟刺激、動(dòng)脈壁肥大、鹽潴留和體液過載，其與小動(dòng)脈血管收縮有關(guān)，血壓的升高大多為暫時(shí)的。

因此，在一些實(shí)施例中，所述抗高血壓劑是阻斷周邊α1-腎上腺素能受體的α1-腎上腺素受體。α1-腎上腺素受體拮抗劑的非限制性實(shí)例包括但不限于多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明及其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽及其類似物。這些藥劑對(duì)α1-腎上腺素受體亞型(α1a、α1b、α1d)是高度選擇性的。當(dāng)用大劑量給藥時(shí)，其并不抑制α2-腎上腺素受體(α2a、α2b、α2c)、β-腎上腺素受體(β1、β2、β3)或其他受體例如乙酰膽堿(蕈毒堿)、多巴胺及5-羥基色胺(5-ht，血清素)受體。在一些實(shí)施方案中，所述抗高血壓劑是減少中樞腎上腺素能流出物的α2-腎上腺素受體拮抗劑。該α2-腎上腺素受體拮抗劑的非限制性實(shí)例包括可樂定、胍那芐、胍諾沙芐，其代謝物及其類似物?；衔?i)和所述抗高血壓劑可以同時(shí)給藥或分別給藥。這些藥劑刺激α2-腎上腺素受體且抑制腦干血管舒縮中樞介導(dǎo)的去甲腎上腺素釋放。

其他適合的抗高血壓劑包括鈣離子通道阻斷劑、利尿劑和血管收縮素轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制劑。鈣離子通道阻斷劑的非限制性實(shí)例包括地爾硫、氨氯地平、維拉帕米、地爾硫、硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、桂利嗪、尼索地平及其藥學(xué)上可接受的鹽。利尿劑的非限制性實(shí)例包括噻嗪類利尿劑、保鉀(potassium-sparing)利尿劑、環(huán)利尿劑及其藥學(xué)上可接受的鹽。血管收縮素轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制劑的非限制性實(shí)例包括阿拉普利、貝那普利、貝那普利拉、卡托普利、西羅普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪達(dá)普利、賴諾普利、莫西普利、莫福普利(moveltopril)、培哚普利、喹那普利、喹那普利拉(quinaprilat)、雷米普利、雷米普利拉、螺普利、替莫普利、群多普利、佐芬普利及其藥學(xué)上可接受的鹽。

本文所述的抗高血壓劑可以任何適合的形式使用。實(shí)例包括甲磺酸多沙唑嗪、鹽酸哌唑嗪和鹽酸特拉唑嗪。

由于血壓暫時(shí)升高與去甲腎上腺素循環(huán)介導(dǎo)的周邊小動(dòng)脈的α1-腎上腺素能緊張性增加有關(guān)，故阻斷α1-腎上腺素受體或α2-腎上腺素受體能有效緩解血壓效應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所述抗高血壓劑的活性成分基本上由α1-腎上腺素受體拮抗劑、α2-腎上腺素受體拮抗劑或二者組成。在一些實(shí)施方案中，該抗高血壓劑的活性成分基本上由α1-腎上腺素受體拮抗劑組成。以上描述的α1-腎上腺素受體拮抗劑或α2-腎上腺素受體拮抗劑可在化合物(i)的給藥前、化合物(i)的給藥期間或化合物(i)給藥后給藥。在示例性的實(shí)施方案中，所述抗高血壓劑是在化合物(i)給藥前1、2、5、10、15、20、30、60、100分鐘時(shí)給藥。在另一實(shí)施方案中，所述抗高血壓劑是在化合物(i)給藥后1、2、5、10、15、20、30、60、100分鐘時(shí)給藥。在一些實(shí)施方案中，所述抗高血壓劑是與化合物(i)給藥大致相同的時(shí)間或依次給藥。在一些實(shí)施方案中，所述α1-腎上腺素受體拮抗劑或α2-腎上腺素受體拮抗劑僅在上述時(shí)間框架里給藥以控制化合物(i)的暫時(shí)血壓效應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所述α1-腎上腺素受體拮抗劑或α2-腎上腺素受體拮抗劑在化合物(i)給藥的5、10、20、30或60分鐘內(nèi)給藥。

抗高血壓劑的有效量或單位劑量可為約0.001-100mg/kg體重。在一些示例性實(shí)施方案中，有效量會(huì)是約0.5-2500mg，而在一些其他實(shí)施方案中為約5-50mg。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或藥物組合物可間歇給藥。在一些實(shí)施方案中，所述化合物、輔助藥劑、藥劑的組合或藥物組合物可每天獨(dú)立地給藥一次、兩次、三次、四次或更多次。在一些實(shí)施方案中，所述化合物、輔助藥劑、藥劑的組合或藥物組合物可獨(dú)立地每1、2、3、4、5、6、7、10、14、15、10或30天給藥一次。

在本文提供的任何方法中，化合物(i)的有效量或單位劑量可為每日、每周或間歇地約1-2000mg。對(duì)于每日給藥，有效量可分為兩次、三次或更多次以便一天多次給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約1-60mg/天。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約4-20mg/天。在另一實(shí)施方案中，有效量是約4-8mg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約4mg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約8mg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約16mg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量是約20mg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量間歇地是約4-60mg。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量在24小時(shí)時(shí)間段內(nèi)間歇地是約4-60mg。在另一個(gè)實(shí)施方案中，有效量在24小時(shí)時(shí)間段內(nèi)間歇地是約4-20mg/天。在另一實(shí)施方案中，有效量在24小時(shí)時(shí)間段內(nèi)間歇地是約4-8mg/天。

化合物(i)在本發(fā)明描述的任何方法中可間歇給藥。如圖13所示，在給藥化合物(i)24小時(shí)后顯示出在不動(dòng)、攀爬和游泳上的顯著的效果。因此，可間歇給藥化合物(i)以實(shí)現(xiàn)持續(xù)的治療效果。在一些實(shí)施方案中，治療有效量或單位劑量的化合物(i)間歇地在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天期間是約4-2000mg。間歇給藥的實(shí)例包括治療有效量或單位劑量地在每1、2、3、4、5、7、10、14、15、20、或30的時(shí)間段給藥一次約1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400或500mg的化合物(i)。在一些實(shí)施方案中，化合物(i)基本上以形式ii存在。在另一實(shí)施方案中，這樣的有效量或單位劑量是每天、每7天、每2周、每3周或每個(gè)月給藥一次。在另一實(shí)施方案中，有效量在7天的時(shí)間段間歇地是約8-200mg。在另一實(shí)施方案中，有效量在7天的時(shí)間段間歇地是約12-60mg。在另一實(shí)施方案中，有效量在7天的時(shí)間段間歇地是約16-60mg。有在另一實(shí)施方案中，效量在7天的時(shí)間段間歇地是約20-60mg。

在化合物(i)給藥的天數(shù)間可存在約1-30天的間隔。取決于疾病狀況，治療應(yīng)答和治療階段，該間隔的長(zhǎng)度可相應(yīng)地變化。例如，各間隔可獨(dú)立地為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天長(zhǎng)。在示例性實(shí)施方案中，在第一天初始給藥所述化合物后，可在第三天的第二次給藥前間隔2天，隨后可在第三次給藥前間隔6天。

在本文公開的方法的一些實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物以基于體重的劑量給藥。因此，在一些實(shí)施方案中，有效量是每天或間歇地約0.01-1mg/kg。

對(duì)于靜脈給藥可調(diào)整劑量水平。在這樣的情況下，所述化合物或藥物組合物可以以約0.01-100μg/kg/min的量給藥。

在一些實(shí)施方案中，給藥方案包括第一起始階段和第二維持階段。在第一階段的劑量用以達(dá)到期望的治療水平，而第二階段的劑量提供可持續(xù)的治療療效。第一起始階段的每日劑量可以為多于、少于或等于維持階段的劑量。各階段的化合物(i)的有效量可以是例如每天或間歇地約4-60mg。所述化合物或藥物組合物在各階段期間可獨(dú)立地在給藥日給藥1次、2次、3次、4次或更多次。起始階段的長(zhǎng)度可為1天至1周或1個(gè)月的任何適合的時(shí)間段，包括例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或15天。維持階段可持續(xù)數(shù)天至數(shù)年或長(zhǎng)至所需。在示例性實(shí)施方案中，起始階段和維持階段的間歇給藥方案獨(dú)立地包括每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每10天、每2周或每月給藥所述化合物。起始階段和維持階段的有效量是獨(dú)立地選自以上關(guān)于每日或間歇給藥的范圍或值。

在以上每一個(gè)階段，可進(jìn)行劑量和給藥方案的調(diào)整。該調(diào)整將取決于具體的情況(例如，是否容易患所治療的疾病或病癥，疾病的嚴(yán)重性或預(yù)期嚴(yán)重性，或患者的年紀(jì)或一般健康狀況)，甚至前述范圍以外的劑量可為合適的。例如，第一階段可以以相比于給藥方案剩余的劑量更高的日劑量開始。給藥也可包括耐受階段，其中按一定劑量將所述化合物給藥至個(gè)體且持續(xù)足以使個(gè)體/患者耐受該劑量而不顯示任何副作用的時(shí)間段。隨后該劑量可在所選時(shí)間間隔下增加直到完成治療劑量。醫(yī)師或具有一般技能的其他衛(wèi)生保健專業(yè)人士能夠確定特定情況下的特定劑量。

本發(fā)明的這些組合物可包含立即釋放、持續(xù)或延長(zhǎng)釋放、延遲釋放組分，或其組合。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的公開知道藥物或藥理學(xué)組合物的制備。制劑和給藥的一般技術(shù)見“remington：thescienceandpracticeofpharmacy，twentiethedition,”lippincottwilliams&wilkins，philadelphia，pa。片劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、糖衣藥丸、凝膠、漿料、軟膏、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑和氣溶膠是此等制劑的實(shí)例。例如延長(zhǎng)或改進(jìn)釋放的口服制劑可通過本領(lǐng)域中已知的方法制備。藥物組合物的延長(zhǎng)釋放形式可以是基質(zhì)片劑或膠囊組合物。

本發(fā)明的另一方面提供增加化合物(i)之生物利用度的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的化合物(i)、或包含化合物(i)的藥物組合物，其中所述化合物(i)是以微粒形式具有如上文任何實(shí)施方案所述的x90、x50或x10粒度。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是如上文任何實(shí)施方案所述的晶型ii。在另一實(shí)施方案中，晶型ii是如上文任何實(shí)施方案所述的基本上純的。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)是如上文任何實(shí)施方案所述的晶型i。

在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥x90粒度為約10μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥x90粒度為約11μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥x90粒度為約12μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥x90粒度為約13μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥x90粒度為約14μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥d43粒度為約10μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥d43粒度為約11μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥d43粒度為約12μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥d43粒度為約13μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。在另一實(shí)施方案中，該方法與包括給藥d43粒度為約14μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物與食物一起給藥。在另一實(shí)施方案中，所述化合物或藥物組合物不與食物一起給藥。

制備方法

本發(fā)明的另一方面提供在過渡金屬催化加氫條件下化合物a轉(zhuǎn)化為化合物b的方法：

其中r'是

1).oh；

2).nh2或

3).nhhet，其中het是包含1或2個(gè)氮環(huán)原子的5或6元雜芳環(huán)、噻唑基或噻二唑基，nh連接至het環(huán)上氮鄰位的碳上，且het是任選地被1或2個(gè)取代基取代，各取代基獨(dú)立地為c1-4烷基、氟、氯、溴或碘。

化合物a的實(shí)例包括：

除bn(芐基)和bz(苯甲?；?外，也可使用其他保護(hù)基團(tuán)來制備化合物a的類似物。

各種過渡金屬，包括例如鈀和釕，可用作催化劑。催化劑可從過渡前體絡(luò)合物和適合的配體來制備。例如，釕的前體絡(luò)合物包括[(cod)]rhcl]2和使用陽離子型otf^-和bf4^-鹽的類似絡(luò)合物。適合的配體包括例如josiphos和walphos：

在一些實(shí)施方案中，化合物a可以以酸例如hcl鹽、甲苯磺酸(tsa)鹽和甲磺酸(msa)鹽的形式存在。在加氫反應(yīng)中可使用各種溶劑，包括兩種或多種溶劑的共溶劑。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在無需過多實(shí)驗(yàn)的情況下能夠確定精確條件，例如催化劑與底物的比例以及配體的量。

已研發(fā)新的方法大規(guī)模制備高純度的化合物(i)和化合物(i)的晶型i或ii。本發(fā)明提供的方法在多方面不同于美國(guó)專利號(hào)7,592,360和pct國(guó)際公開號(hào)wo2006/069287中公開的方法，包括反應(yīng)物的類型和量、中間體、反應(yīng)條件、以及包括或省略特定步驟。例如，在‘360專利及‘287pct公開中公開的方法均沒有包括將化合物(i)的形式i轉(zhuǎn)化為形式ii的步驟。此外，本文提供的方法使用中間化合物(8)

‘360專利中公開的方法使用中間體(±)-((cis)-3-氟-1-{[(4-甲基芐基)氧基]羰基}哌啶-4-基)乙酸

此外，本文提供的方法使用與‘287pct公開中所引用的不同的反應(yīng)物、反應(yīng)物的量和反應(yīng)條件。

本發(fā)明的一方面提供制備化合物(i)的方法，其包括：

(i)使化合物(8)與三氟甲磺酸酐反應(yīng)，生成三氟甲磺酸酯；

(ii)使三氟甲磺酸酯與氨反應(yīng)生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)與2-氯嘧啶反應(yīng)，生成化合物(i)的形式i。

在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括向化合物(i)的形式i播以化合物(i)的形式ii的晶種。

在另一實(shí)施方案中，該方法還包括使化合物(6)與羰基二咪唑和化合物(7)反應(yīng)，以生成化合物(8)。

在另一實(shí)施方案中，該方法還包括用氫氣經(jīng)鈀使化合物(5)脫芐基以生成化合物(6)。

在另一實(shí)施方案中，該方法還包括在氫氣氣氛下用氯(1,5-環(huán)辛二烯)銠的二聚體還原化合物(4)以生成化合物(5)。

在另一實(shí)施方案中，該方法還包括純化化合物(i)。在另一實(shí)施方案中，純化包括漿化或重結(jié)晶。在另一實(shí)施方案中，化合物(i)的形式i通過在適合的溶劑中例如乙酸乙酯或包含乙酸乙酯和庚烷的共溶劑中重結(jié)晶而進(jìn)行純化。

化合物(i)的形式i可以不同的方式轉(zhuǎn)化為形式ii。在一些實(shí)施方案中，固體狀態(tài)的化合物(i)的形式i被加熱至高于室溫期望的時(shí)間段。促進(jìn)這樣的轉(zhuǎn)化的示例性溫度包括約50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、105℃、110℃、115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃和150℃。在一些實(shí)施方案中，該溫度為約90-135℃，包括所有子范圍。在一些更多示例性實(shí)施例中，該溫度是約100-105℃、100-110℃或100-115℃。加熱可保持一段時(shí)間，例如約1分鐘-30小時(shí)，包括所有的子范圍。示例性的加熱時(shí)長(zhǎng)包括約10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、5小時(shí)、10小時(shí)和24小時(shí)。

化合物(i)的形式ii也可通過形式i在適合的溶劑或共溶劑中漿化獲得?？墒┯脭嚢杌蚣訜?。在示例性實(shí)施方案中，化合物(i)的形式i可在室溫下懸浮于水溶超過24小時(shí)。若需要，該時(shí)間可進(jìn)一步延長(zhǎng)以使得完成形式i向形式ii的完全轉(zhuǎn)化。

在化合物(i)的形式i的轉(zhuǎn)化后，可用常規(guī)步驟分離形式ii。在一些實(shí)施方案中，該分離包括過濾和/或用適合的溶劑洗滌。

形式ii的大規(guī)模生產(chǎn)可通過向形式i播以形式ii的晶種來實(shí)現(xiàn)。播晶種是誘導(dǎo)結(jié)晶材料從小的目標(biāo)形式的晶體生長(zhǎng)的重要步驟?？墒褂脝蝹€(gè)溶劑或多個(gè)溶劑的體系播晶種及晶體生長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，該體系包含甲醇和乙酸的共溶劑。

實(shí)施例

以下呈現(xiàn)的實(shí)施例是說明性的且不應(yīng)用以限制本發(fā)明目標(biāo)的范圍。

實(shí)施例1：化合物(i)和晶型ii的制備

流程i

本文所用的縮寫指代如下：

acn＝乙腈

acoh＝乙酸

bnbr＝芐基溴

cdi＝1,1'-羰基二咪唑

darcog＝活性炭

dcm＝二氯甲烷

dipa＝二異丙胺

dmf＝二甲基甲酰胺

etoac＝乙酸乙酯

hcl＝氯化氫

iproac＝乙酸異丙酯

meoh＝甲醇

nabh4＝硼氫化鈉

nacl＝氯化鈉

naoh＝氫氧化鈉

nh3＝氨

pd/c＝鈀/碳

[rhcodcl]2＝氯(1,5-環(huán)辛二烯)銠(i)二聚體(也稱為氯化1,5-環(huán)辛二烯銠(i)二聚體、二氯化雙(1,5-環(huán)辛二烯)二銠(i)、二-μ-氯雙[(1,2,5,6-η)-1,5-環(huán)辛二烯]二銠、氯化銠(i)1,5-環(huán)辛二烯絡(luò)合物二聚體，以及[rh(cod)cl]2)

rt＝室溫

thf＝四氫呋喃

步驟1

用lda處理化合物i且隨后與dmf反應(yīng)以制備原位的醛中間體，其用nabh4還原以產(chǎn)生化合物2。通過重結(jié)晶完成化合物2的純化。

步驟2

化合物2與芐基溴反應(yīng)生成化合物3。

步驟3

用nabh4還原化合物3以生成化合物4，其為hcl鹽。通過重結(jié)晶完成化合物4的純化。

步驟4

在氫氣氛下使用walphos不對(duì)稱還原化合物4制備化合物5。

步驟5

隨后化合物5在使用氫氣經(jīng)鈀的另一還原步驟中脫保護(hù)(脫芐基)以生成化合物6。

步驟6

化合物6與4-甲基芐基醇(化合物7)和羰基二咪唑偶合以制備化合物8。

步驟7

隨后將化合物8轉(zhuǎn)化成原位三氟甲磺酸酯，其與氨進(jìn)一步反應(yīng)以生成化合物9。

步驟8

化合物9與氯嘧啶反應(yīng)以制備形式i的化合物(i)或(3s,4r)-3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸4-甲基芐基酯的粗產(chǎn)物。在形式i的化合物(i)中加入化合物(i)的形式ii晶種。在darcog60存在下漿化并隨后重結(jié)晶，由此進(jìn)行純化，制備純化的形式ii，其經(jīng)共研磨形成期望的粒度分布。

實(shí)施例2：x-射線粉末衍射

使用x射線粉末衍射(xrpd)表征化合物(i)的晶型ii(圖1a)。xrpd圖對(duì)應(yīng)表示為高度結(jié)晶的形式ii的無水形式。除了形式ii，化合物(i)可作為表示為形式i的另外的無水多晶型存在。這些相的xrpd圖顯示于圖1b中。在室溫下向甲基-叔-丁基醚中加入約等比例的兩種無水相，由此進(jìn)行漿化實(shí)驗(yàn)。從漿料中過濾的固體的xrpd顯示出相轉(zhuǎn)變?yōu)樾问絠i。從加熱形式i至115℃回收的固體的xrpd分析顯示相轉(zhuǎn)變?yōu)樾问絠i?；谶@些實(shí)驗(yàn)，形式ii是室溫至121℃之間的熱力學(xué)穩(wěn)定的形式。

實(shí)施例3：紫外吸收光譜

使用cary300biouv-vis分光光度計(jì)以及甲醇作為稀釋劑獲得如圖2所示的化合物(i)的晶型ii的紫外(uv)吸收光譜。光譜通過236±2nm處的最大值表征。

實(shí)施例4：紅外透射光譜

使用nicoletnexus670ftir光譜儀由atr附件獲得如圖3所示的化合物(i)的晶型ii的紅外(ir)透射光譜。

實(shí)施例5：質(zhì)子核磁共振譜

使用在600.13mhz的頻率下操作的brukerdrx-600核磁共振(nmr)光譜儀獲得如圖4所示的化合物(i)的晶型ii的質(zhì)子核磁共振(¹hnmr)譜。樣品濃度約為3.1％(w/v)于cd3cn中。參比化合物為chd2cn(1.94ppm)。在0℃獲得光譜以使得在環(huán)境溫度下寬的信號(hào)銳化。按照以下化合物(i)的編號(hào)結(jié)構(gòu)式的信號(hào)分配提供于表1。

表1.¹hnmr信號(hào)分配

*多重性：s＝單峰；d＝二重峰；br＝寬峰；t＝三重峰；m＝多重峰；o＝重疊；j＝以赫茲為單位的耦合常數(shù)。

在溶液中，l-001067743-005k以氨基甲酸酯旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的1:1混合物存在。除了由(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)標(biāo)注外，分配經(jīng)分組。

^#2.26ppm處的信號(hào)歸因于h2o。

^$在3.36ppm處的多重峰歸屬為低含量未知物。

實(shí)施例6：¹³c核磁共振譜

使用在150.90mhz的頻率下操作的brukerdrx-600nmr光譜儀獲得如圖5所示的化合物(i)的晶型ii的核磁共振(¹³cnmr)譜。樣品濃度約為3.1％(w/v)于cd3cn中。參比化合物為cd3cn(1.39ppm為cd3基團(tuán)，118.45ppm處觀察到–cn基團(tuán)。在0℃獲得光譜以使得在環(huán)境溫度下寬的信號(hào)銳化。按照以下化合物(i)的編號(hào)結(jié)構(gòu)式的信號(hào)分配提供于表2。

表2.¹³cnmr信號(hào)分配

實(shí)施例7：熱重分析曲線

在氮?dú)饬飨?，在加熱速率?0℃/分鐘下獲得化合物(i)的形式ii的熱重(tg)分析曲線。直到150℃觀察到0.04％的重量損失。在150℃以上的進(jìn)一步的重量損失歸因于分解。

實(shí)施例8：差示掃描量熱法

在氮?dú)饬飨?，在加熱速率?0℃/分鐘下在曲卷盤中獲得化合物(i)的形式ii的差示掃描量熱(dsc)曲線。dsc曲線呈現(xiàn)出熔融吸熱峰，其外推起始溫度為121℃，峰值溫度為123℃，且熱焓為112.7j/g。

實(shí)施例9：粒度評(píng)估

評(píng)估微?；幕衔?i)的晶型ii的樣品的粒度以及粒度分析方法的研發(fā)。

使用配備有rodos/m分配模塊、vibri振動(dòng)進(jìn)料器和r2鏡頭的sympatechelos/kf粒度分析儀獲得粒度信息。將微?；幕衔?i)的形式ii的100±10mg樣品轉(zhuǎn)移至vibri中且均勻散布以確保一致的進(jìn)給速率。使用25％的進(jìn)料率和3.0bar的進(jìn)料壓力進(jìn)行分析。觸發(fā)條件如下：時(shí)基-100ms；開始-c.opt≥1.0％；有效–始終；停止-5s，c.opt≤1.0％或10s即時(shí)。使用sympatec的windox5軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果提供于表3中。

表3.微?；男问絠i的x10、x50和x90粒度

基于研發(fā)，認(rèn)為適合于微粒化的化合物(i)的樣品的常規(guī)粒度分析的方法參數(shù)如下：

實(shí)施例10：粒度對(duì)藥物吸收的影響

為了測(cè)試粒度(ps)對(duì)吸收的影響，在90-mg/kg劑量下進(jìn)行猴研究以比較在0.5％甲基纖維素中懸浮液形式的未研磨的化合物(i)以及經(jīng)噴射研磨的化合物(i)。向雄性恒河猴給藥在0.5％基纖維素中懸浮液形式的未研磨的和經(jīng)噴射研磨的化合物(i)的晶型ii。在給藥前約1小時(shí)給猴進(jìn)食。如表4所示，相對(duì)于平均ps為14μm的未研磨形式ii，平均ps為4.5μm的經(jīng)噴射研磨的形式ii增加1.43倍的藥物暴露。

表4.在已進(jìn)食的雄性恒河猴中的粒度影響

*在給藥前給約1小時(shí)給猴進(jìn)食10塊餅干。

**使用原料藥物粉末測(cè)量ps。

實(shí)施例11：nmda-glun2b受體的親和力

在室溫(或37℃)下在96孔微量滴定板中在包含150mmnacl的20mmhepes緩沖液(ph7.4)中進(jìn)行放射性配體結(jié)合分析，最終分析體積為1.0ml。在二甲基亞砜(dmso)中制備化合物(i)的晶型ii10mm且用dmso連續(xù)稀釋以產(chǎn)生各20μl濃度相差3倍的10個(gè)溶液(mosseretal.，2003)。使用n-(3-氯芐基)-4-碘benzimidamide(最終濃度10μm)評(píng)估非特異性結(jié)合，且通過加入dmso(最終濃度2％)測(cè)量總結(jié)合。將表達(dá)人類glun1a/glun2b受體的l(tk-)細(xì)胞膜(最終濃度40pm)和[³h]-[(e)-n1-(2-甲氧基芐基)-肉桂脒](最終濃度1nm)加入至微量滴定板的所有孔中。在室溫(或37℃)下培養(yǎng)3h(24h或48h后，通過packardgf/b過濾器過濾樣品(在0.05％聚乙烯亞胺[pei；sigmap-3143]中預(yù)浸)且每次用1ml冷的20mmhepes緩沖液沖洗。在過濾器板真空干燥后，加入50μlpackardmicroscint-20且在packardtopcount中測(cè)定結(jié)合放射活性。

也使用全腦勻漿(大鼠)、額葉皮質(zhì)勻漿(狗和恒河猴)及顳葉皮質(zhì)勻漿(人類)進(jìn)行與上文所述類似的在l(tk-)細(xì)胞中表達(dá)的克隆的人類受體的結(jié)合實(shí)驗(yàn)。

形式ii有效地抑制放射性配體([³h]化合物-2)結(jié)合至在l(tk-)細(xì)胞中表達(dá)的人類nmda-glun1a/glun2b受體以及所有測(cè)試物種(大鼠、狗、恒河猴、人類)的腦組織勻漿。使用人類顳葉皮質(zhì)勻漿測(cè)定的形式ii的結(jié)合親和力分別在室溫和37℃下得到3.1nm(0.0031μm)和8.1nm(0.0081μm)的ki值。在其他物種中的研究結(jié)果與人類的數(shù)據(jù)一致(表5)。

表5.在l(tk-)膜中表達(dá)的人類glun1a/glun2b受體和腦組織勻漿的結(jié)合親和力

數(shù)值為幾何平均值。

實(shí)施例12：nmda受體的功能活性和選擇性

測(cè)量對(duì)鈣流入表達(dá)glun1a/glun2b或glun1a/glun2a人類受體的l(tk-)細(xì)胞中的抑制，以確定化合物(i)抑制nmda受體功能的ic50。

將glun1a/glun2b(或glun1a/glun2a)受體轉(zhuǎn)染的l(tk-)細(xì)胞以每孔3×10⁴個(gè)細(xì)胞鋪板于96孔型式的板上，并使其在正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基(具有丙酮酸鈉、4500mg葡萄糖、青霉素/鏈霉素、谷氨酰胺、10％胎牛血清和0.5mg/ml遺傳霉素的dulbecco改良eagle培養(yǎng)基)中生長(zhǎng)1天。在500μm氯胺酮存在下通過加入10nm地塞米松誘導(dǎo)glun1a/glun2b(glun1a/glun2a)在這些細(xì)胞中的表達(dá)16-24h。在dmso中制備化合物(i)的晶型ii且連續(xù)地用dmso稀釋以產(chǎn)生10個(gè)濃度相差3倍的溶液。稀釋dmso溶液250倍至分析緩沖液(包含20mmhepes、2mmcacl2、0.1％牛血清蛋白以及250μm丙磺舒的不含mg²⁺hanks平衡鹽溶液)，由此制備96孔藥物板。誘導(dǎo)后，將細(xì)胞用分析緩沖液沖洗2次(labsystem細(xì)胞清洗器；3-倍稀釋液保留100μl)且在包含pluronicf-127和100μm氯胺酮的分析緩沖液中在37℃下負(fù)載鈣熒光指示劑fluo-3am進(jìn)行1h。細(xì)胞隨后用分析緩沖液沖洗8次，在各孔中保留100μl緩沖液。在flipr(熒光成像板讀取器；moleculardevices，sunnyvale，ca)中使用488nm的激發(fā)和530nm處的發(fā)射立即測(cè)量熒光強(qiáng)度。在開始記錄熒光強(qiáng)度后的5秒，加入50μl激動(dòng)劑溶液(40μm谷氨酸/甘氨酸；最終濃度10μm)且在1分鐘后，當(dāng)熒光信號(hào)穩(wěn)定時(shí)，從藥物板中加入50μl形式ii和對(duì)照溶液，并另記錄熒光強(qiáng)度30分鐘。

形式ii抑制鈣流入激動(dòng)劑刺激的nmda-glun1a/glun2bl(tk-)細(xì)胞，其ic50為3.6nm(0.0036μm)，但在高達(dá)30,000nm(30μm)的濃度下對(duì)鈣流入激動(dòng)劑刺激的nr1a/nr2a細(xì)胞沒有影響。結(jié)果證明形式ii是包含glun2b亞單位的nmda受體的有效的高選擇性拮抗劑。

實(shí)施例13：大鼠及猴(體內(nèi))的單次劑量藥代動(dòng)力學(xué)(口服和iv)

使用重量約250–280g的雄性sprague-dawley大鼠(n＝8；n＝4口服和n＝4靜脈內(nèi)[iv])以及約6.0–8.8kg的雄性恒河猴(n＝4，互換)進(jìn)行pk研究。在大鼠中，以推注形式給藥2mg/kg(0.4ml/kg)的化合物(i)的晶型ii的iv劑量，并通過灌胃給藥15mg/kg(5ml/kg)的口服劑量。在猴中，以緩慢推注的形式給藥2mg/kg(0.1ml/kg)的化合物(i)的晶型ii的iv劑量，并通過鼻胃管給藥15mg/kg(5ml/kg)的口服劑量。在給藥前及給藥后0.083(僅ivonly)、0.25、0.50、1、2、4、6、8、10、24、48、72和96h連續(xù)采集血液樣品。使用加熱的噴霧器界面在陽離子模式通過lc/ms/ms分析在大鼠和猴血漿內(nèi)的形式ii的濃度。定量的下限是2.5ng/ml(約0.00697μm)。

表6總結(jié)pk參數(shù)。在口服給藥至大鼠和猴后，形式ii快速被吸收(對(duì)大鼠tmax<1h，而對(duì)猴約2h)，并且在兩物種中顯示出良好的生物利用度(大鼠60％，且猴50％)。在iv給藥后評(píng)估分布體積(vdss)，并在大鼠中超過體內(nèi)體內(nèi)水總量(meanvdss＝3.1l/kg)且在猴中為中等的(平均vdss＝2.9l/kg)。在iv給藥后在兩個(gè)物種中都顯示出高血漿清除率(clp)(在大鼠中平均clp＝28.4ml/min/kg以及在猴中平均clp＝15.1ml/min/kg)。在iv劑量后計(jì)算半衰期(t1/2)，相比于大鼠(平均t1/2＝1.7h)，在猴中有更長(zhǎng)的半衰期(平均t1/2＝4.2h)。

表6.在2和15mg/kg劑量下在口服(po)和靜脈內(nèi)(iv)給藥期間大鼠及猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)

^a數(shù)據(jù)以平均值(s.d.)形式呈現(xiàn)

^a在iv和po給藥后基于auc0–∞(劑量歸一化)值(非互換型研究設(shè)計(jì))

^c在iv和po給藥后基于auc0–∞(劑量歸一化)值(互換型研究設(shè)計(jì))

auc，曲線下面積；clp，總血漿清除率；cmax，藥物的最大血漿濃度；tmax，到達(dá)cmax的時(shí)間；t1/2，半衰期；vdss，穩(wěn)態(tài)的分布體積。

實(shí)施例14：急性抑郁癥模型-強(qiáng)迫游泳測(cè)試

將幼年、成年雄性sprague-dawley大鼠隨機(jī)分配在治療組中，并給藥載體(0.5％mc/0.02％sls)、溶解于無菌水中的參照化合物地昔帕明(20mg/kg；三環(huán)抗抑郁劑；sigma，lot#078k1326)、或懸浮于0.5％mc/0.02％sls中的化合物(i)的晶型ii(0.1、0.3、1、3、10和30mg/kg)，在第一天(給藥)2次(在適應(yīng)之后；測(cè)試前～24h，且在暗循環(huán)之前)及在第2天1次(地昔帕明，測(cè)試前30分鐘；及形式ii及載體，測(cè)試前45分鐘)。

由透明的丙烯酸構(gòu)建各強(qiáng)迫游泳室(高，40cm；直徑，20.3cm)。大鼠在包含23℃±1℃的水的筒中進(jìn)行一個(gè)15分鐘階段的給藥前游泳測(cè)試，隨后在約24h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性5分鐘(游泳)階段。在適應(yīng)期間水為16cm深，而在測(cè)試中為30cm深。每5s記錄每個(gè)個(gè)體的不動(dòng)、攀爬和游泳行為，總計(jì)每個(gè)個(gè)體記錄60個(gè)數(shù)。當(dāng)動(dòng)物不能保持使其鼻子保持在水面上的姿勢(shì)時(shí)，將其直接從水中移除并從研究中排除。在完成游泳測(cè)試進(jìn)程后采集血液且分析血漿中形式ii的濃度。

相比于載體對(duì)照，形式ii(1、3、10和30mg/kg)的不動(dòng)頻率顯著降低且顯著增加游泳行為(對(duì)于1、3和30mg/kg，p<0.01；對(duì)于10mg/kg，p<0.05)(圖8)，但是除了劑量為3mg/kg(p<0.05)外，沒有影響攀爬行為。相比于載體對(duì)照，地昔帕明(20mg/kg)顯著降低不動(dòng)(p<0.001)且顯著增加攀爬行為(p<0.01)，在游泳行為中沒有變化。在大鼠中在取樣時(shí)形式ii血漿水平約為15、120、390、1420、4700和14110nm，分別對(duì)應(yīng)于約5、29、56、83、94和98％ro。增加游泳頻率及減少不動(dòng)的ed50分別為～0.3和0.7mg/kg，對(duì)應(yīng)于～30％和50％的ro。

實(shí)施例15:急性抑郁癥模型-運(yùn)動(dòng)分析

為了證明在強(qiáng)迫游泳測(cè)試中形式ii的影響不是由于活動(dòng)水平的常規(guī)的增加，大鼠在口服給藥形式ii后進(jìn)行運(yùn)動(dòng)分析。將成年雄性sprague-dawley大鼠(n＝42)隨機(jī)分配在至治療組中(載體或0.1、0.3、1、3、10和30mg/kg的化合物(i)；n＝6/組)。在亮循環(huán)期間，在光電池監(jiān)測(cè)的籠具中(hamiltonkinder，sandiego，ca)評(píng)定運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。各籠由不銹鋼框架圍繞的標(biāo)準(zhǔn)塑料大鼠籠(24×45.5cm)組成。紅外光電池光束位于框架長(zhǎng)軸兩端以測(cè)量行進(jìn)的走動(dòng)距離。第二套光束放在地板上且用于測(cè)量直立活動(dòng)。通過電腦系統(tǒng)記錄光電池光束的中斷。在測(cè)試中頂部過濾器放置于測(cè)試封閉體的頂部。大鼠通過口服灌胃給藥載體或測(cè)試化合物，在第1天2次(在測(cè)試前約24h及在暗循環(huán)前)且在第2天1次(在放置于運(yùn)動(dòng)籠中進(jìn)行60分鐘測(cè)試之前45分鐘)。在5分鐘的頻段中捕捉運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。

在第一個(gè)5分鐘測(cè)試期間(時(shí)間與強(qiáng)迫游泳測(cè)試的時(shí)間相關(guān))，與載體對(duì)照相比，形式ii(1、3、10和30mg/kg)顯著增加行進(jìn)距離(對(duì)于1和3mg/kg，p<0.01；對(duì)于10和30mg/kg，p<0.001)。60分鐘的測(cè)試總計(jì)，相比于載體對(duì)照，形式ii(1、3、10和30mg/kg)顯著增加行進(jìn)距離(對(duì)于1mg/kg，p<0.01；對(duì)于3、10和30mg/kg，p<0.001)。運(yùn)動(dòng)活動(dòng)增加的ed50是～2mg/kg，轉(zhuǎn)譯成～75％ro，其高于游泳頻率增加的和不動(dòng)減少的ed50。對(duì)于0.1和0.3mg/kg劑量組沒有觀察到運(yùn)動(dòng)影響(圖8)。

實(shí)施例16：長(zhǎng)期測(cè)試大鼠的血壓概況

使用6只(n＝6)大鼠研究化合物(i)的晶型ii對(duì)全身性血壓和心率的影響。給藥單次口服灌胃劑量(體積：5ml/kg)。在給藥前，記錄24小時(shí)基線。記錄化合物(i)的晶型ii的影響24小時(shí)。使用3個(gè)劑量(0.3、1和3mg/kg)的化合物(i)的晶型ii和相應(yīng)的載體組(每組n＝6)進(jìn)行l(wèi)atin方。在latin方完成后，評(píng)估兩個(gè)額外劑量濃度(0.6和10mg/kg，每組n＝3)。

使用三(3)只大鼠研究mk-801(地佐環(huán)平)的影響。在第1天，在給藥前記錄基線讀數(shù)24h。在第2天，向大鼠給藥0.9％生理鹽水的單次靜脈(尾靜脈)推注劑(體積～0.2ml)且連續(xù)監(jiān)控(通過遙測(cè))至少24h。在第3天，向大鼠給藥mk-801的單次靜脈(尾靜脈)推注劑(200μg/kg；體積～0.2ml)且連續(xù)監(jiān)控(通過遙測(cè))至少24h。

為了探究化合物(i)的晶型ii的潛在的機(jī)理，化合物(i)的晶型ii與不同的藥理學(xué)上的抑制劑聯(lián)合給藥。在化合物(i)的晶型ii(1mg/kg)給藥前30分鐘給藥阿替洛爾(β1阻斷劑，1mg/kg，iv推注)和哌唑嗪(α1腎上腺素能受體拮抗劑，200μg/kg，iv推注)。所有的iv劑量由尾靜脈穿刺給藥人工制約的大鼠。應(yīng)注意載體對(duì)照組也給藥。

單次口服灌胃劑量后1小時(shí)，化合物(i)的晶型ii引起平均動(dòng)脈壓(map)劑量依賴性增加(對(duì)于0.3、0.6、1、3和10mg/kg分別為4.2±0.9、6.8±1.2、15.7±3.2、17.1±2.3和19.1±2.4mmhg)。在劑量范圍內(nèi)心率(hr)也增加。但是，這些劑量依賴性效應(yīng)不是顯而易見的，因?yàn)樵?和10mg/kg時(shí)觀察到明顯較大但類似的效應(yīng)(例如在0.3、0.6和1mg/kg時(shí)15±10和10±15，和34±13bpm相比于3和10mg/kg時(shí)66±9和71±25bpm)(圖9)。因此，化合物(i)的晶型ii(當(dāng)作為單次劑量口服給藥時(shí))引起與mk-801(公認(rèn)的nmda拮抗劑)一致的(即使在較低程度上明顯)血液動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。后者的發(fā)現(xiàn)對(duì)于化合物(i)的晶型ii是出人意料的。

大鼠的活動(dòng)(由遙測(cè)記錄)遵循與心率反應(yīng)類似的趨勢(shì)。即，3和10mg/kg劑量具有相比于較低劑量更大的影響(在0.3、0.6和1mg/kg時(shí)0.012±0.025、0.003±0.033和0.049±0.037相比于在3和10mg/kg時(shí)0.174±0.048和0.232±0.057)。值得關(guān)注的是，在給藥后第一個(gè)3.5小時(shí)期間血液動(dòng)力學(xué)變化與活動(dòng)水平線性相關(guān)(如遙測(cè)記錄所估算)；特別地，活動(dòng)是hr(r²＝0.67)的極好的預(yù)報(bào)器，且因此化合物(i)的晶型ii的興奮性影響可解釋在大鼠中觀察到的hr的增加(特別是在較高劑量水平下)。

為了研究化合物(i)的晶型ii-藥用血液動(dòng)力學(xué)變化的潛在的機(jī)理，化合物(i)的晶型ii與阿替洛爾(β1ar阻斷劑，1mg/kg)或哌唑嗪(α1ar拮抗劑，200μg/kg)聯(lián)合給藥。如預(yù)期，阿替洛爾最低程度地影響map(-3.3±3.1mmhg)但顯著降低hr(-87±11bpm)，而哌唑嗪降低map(18±2mmhg)但最低限度地降低(-9±24bpm)。在這些設(shè)定中(即β1ar或α1ar阻斷)，給藥化合物(i)的晶型ii(1mg/kgpo)且給藥后1h研究血液動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。在β1ar阻斷的動(dòng)物中，當(dāng)相比于阻斷前的值，化合物(i)的晶型ii(1mg/kg)對(duì)map(5.8±4.8mmhg)和hr(-7±17bpm)的影響可忽略；但是，給藥后hr的確增加53±17bpm。在α1ar阻斷設(shè)定中，相比于阻斷前的值(即，基線)化合物(i)的晶型ii(1mg/kg)增加hr(118±20bpm)但缺乏map變化(-3.8±2.0bpm)；但是在給藥下map的確增加(11.3±2.0mmhg)。

表7.化合物(i)的晶型ii單次口服灌胃給藥1小時(shí)后全身性血液動(dòng)力學(xué)峰值變化；以由受時(shí)間控制的基線減去載體的變化的形式呈現(xiàn)

數(shù)值是平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝6)，*n＝3.

實(shí)施例17：人類藥代動(dòng)力學(xué)研究

將24個(gè)健康、青年男性個(gè)體分配至3個(gè)順序治療組(a、b和c)中的1組。對(duì)于每組的8個(gè)個(gè)體，2個(gè)個(gè)體接受安慰劑，并向6個(gè)個(gè)體給藥單次上升的口服劑量的化合物(i)的晶型ii，在各劑量之間存在最少7天的清除期：組a(0.1、0.2、0.5、1和2mg)；組b(2、4、8和15mg，且4mg與食物一起)；以及組c(15和20mg)。給藥前以及給藥0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12、18、24、30、48和72h后采集血液樣品。使用反相高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)(merckresearchlaboratories)分析血漿樣品的形式ii濃度。分析的范圍是0.5-500nm(0.180-180ng/ml)。

形式ii快速被吸收(圖10a)，其中在所有禁食劑量中平均tmax在1h內(nèi)，而在4-20mg劑量范圍內(nèi)的最終消除半衰期為約12-17h。在研究的劑量范圍內(nèi)，cmax和auc以與劑量成比例的方式呈現(xiàn)。4mg劑量為在禁食及進(jìn)食狀態(tài)下給藥。在進(jìn)食狀態(tài)下給藥使得tmax延遲約1h且cmax減少約56％，但不影響吸收的整體程度(auc)(圖10b，表8)。

表8.在健康男性志愿者中血漿藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

數(shù)據(jù)呈現(xiàn)為平均值(s.d.)

auc，曲線下面積；cmax，藥物最大血漿濃度；tmax,至cmax的時(shí)間；t1/2,半衰期。

實(shí)施例18：安全藥理學(xué)研究

在一連串安全藥理學(xué)研究中評(píng)估化合物(i)的形式ii對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)的功能的潛在影響，其中所述研究包括體外人類ether-a-go-go相關(guān)基因(humanether-a-go-go-relatedgene，herg)分析和在大鼠、狗和猴的體內(nèi)研究。在大鼠內(nèi)測(cè)試15、75和225mg/kg單劑量對(duì)cns的影響。

在若干研究中測(cè)試形式ii對(duì)心血管系統(tǒng)的影響。在體內(nèi)和體外測(cè)試潛在的qtc影響。形式ii體外抑制herg電流，其ic50為約13μm(4660ng/ml)。在通過增加的速率連續(xù)iv輸注90分鐘給藥麻醉狗中，盡管在輸注結(jié)束時(shí)形式ii的濃度為約74μm(25450ng/ml)，形式ii不影響心率或任何ecg參數(shù)，包括qtc間期。向有意識(shí)、受椅子制約的猴給藥單次口服劑量15、75和150mg/kg且在給藥后監(jiān)測(cè)6h，即使在最高劑量水平血漿濃度峰約為15μm(5375ng/ml)，在任何劑量水平上形式ii均沒有影響心率或ecg。

在狗和猴中測(cè)試血液動(dòng)力學(xué)影響。在向麻醉的狗以增加的速率連續(xù)iv輸注90分鐘給藥中，形式ii不影響心率、動(dòng)脈血壓或股動(dòng)脈血流量。但是，在向有意識(shí)、受椅子制約的猴給藥單次口服劑量15、75和150mg/kg且在給藥后監(jiān)測(cè)6h，形式ii使得收縮壓(12–15mmhg)、舒張壓(7–10mmhg)和平均動(dòng)脈壓(9–12mmhg)產(chǎn)生非依賴性增加。在這些劑量水平上，cmax分別為約3、9和15μm(1075、3225和5375ng/ml)。

在大鼠和狗中研究呼吸的影響。以15、75和225mg/kg單次口服給藥形式ii在雄性大鼠中產(chǎn)生呼吸刺激，反映于增加的呼吸速率、潮氣量及每分鐘通氣量的增加和penh(氣道阻力的指標(biāo))的減少。在以15mg/kg給藥5-6h后呼吸功能恢復(fù)至基線，但在以≥75mg/kg給藥后6h監(jiān)測(cè)結(jié)束時(shí)仍在變化。在向麻醉的狗以3mg/kg劑量iv輸注5分鐘且間隔監(jiān)控60分鐘中，形式ii不影響肺內(nèi)壓、峰值呼氣流、氣道阻力、肺順應(yīng)性、潮氣量、呼吸速率或血液ph、pco2或po2。在輸注結(jié)束時(shí)形式ii的血漿濃度約為30μm(10600ng/ml)，而在輸注后60分鐘約為4μm(1250ng/ml)。

實(shí)施例19：大鼠中的神經(jīng)毒性

向4組24只sprague-dawley鼠(12/性別)以10ml/kg的劑量經(jīng)口服灌胃給藥單次劑量的載體(0.5％甲基纖維素[mc]和0.02％月桂基硫酸鈉[sls]于去離子水中)或10、30或100mg/kg的化合物(i)的晶型ii。以2ml/kg的劑量體積通過皮下注射向另外一組12只雄性大鼠單次給藥10mg/kg的(5s,10r)-(+)-5-甲基-10,11-二氫-5h-二苯并-[a,d]環(huán)庚烯-5,10-亞胺馬來酸鹽；nbf，中性緩沖福爾馬林(“mk-801”，nmda受體的非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑；陽性對(duì)照)。在各組中每一性別的6只大鼠在給藥后4-6h殺死并進(jìn)行尸體解剖，而各組剩余的大鼠在給藥3天后(第4天)殺死并進(jìn)行尸體解剖。存活時(shí)的觀測(cè)結(jié)果和測(cè)量包括體重和臨床觀察。殺死時(shí)麻醉大鼠且灌注固定。在尸體解剖時(shí)，采集腦用于組織病理學(xué)評(píng)估。

以預(yù)定尸體解剖間隔(給藥后4-6h或第4天)殺死在形式ii和mk-801評(píng)定組中的動(dòng)物。所有的動(dòng)物用異氟醚/氧氣混合物麻醉，然后通過左心室用含肝素化0.001％亞硝酸鈉的生理鹽水灌注。生理鹽水沖洗后用10％中性緩沖的福爾馬林(nbf)灌注。采集腦，稱重且儲(chǔ)存于10％nbf中。

將腦切成2mm的冠狀切片以在各動(dòng)物的3個(gè)區(qū)塊產(chǎn)生多個(gè)切片。以下腦區(qū)域染色：新皮質(zhì)、舊皮質(zhì)、基底核、邊緣系統(tǒng)、丘腦/下丘腦、中腦區(qū)、小腦、腦橋區(qū)和延髓。將給藥后4-6小時(shí)處死的和給藥后3天處死的所有動(dòng)物的所有腦切片包埋在石蠟中，用5μm切片，用蘇木精和伊紅染色且用顯微鏡檢查。對(duì)于在第4天(給藥后3天)處死的大鼠，來自區(qū)域1和2的連續(xù)切片用fluoro-jadeb(增加評(píng)估腦神經(jīng)元退化靈敏性的染色劑)和神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(用于星型神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)的染色劑)染色且用顯微鏡檢查。另外3組大鼠(每組4只雄性和3只磁性)以同樣的方式用形式ii口服給藥，且獲得24h連續(xù)血液樣品且分析化合物(i)的血漿濃度和評(píng)估全身性暴露。

在任何劑量水平或時(shí)間點(diǎn)沒有與形式ii相關(guān)的形態(tài)學(xué)影響。在大鼠中，形式ii的單次劑量(10、30和100mg/kg)在所有檢查的腦區(qū)中沒有產(chǎn)生液泡形成或壞死。在這些劑量中，平均cmax分別約為4、14和26μm(1433、5018和9319ng/ml)。相反地，所有給藥mk-801(10mg/kg)的動(dòng)物在扣帶回神經(jīng)元中具有液泡形成和壞死，與之前的報(bào)道一致(fixetal.，brainres，696:194-204(1995))。在4-6h時(shí)間點(diǎn)，用mk-801處理的動(dòng)物(6只雄性；第5組)在大腦皮質(zhì)扣帶回區(qū)的皮質(zhì)層3和4中均具有許多液泡的神經(jīng)元。mk-801處理的雄性的外觀與之前公開的描述完全一致。受影響的神經(jīng)元的特征在于許多緊密堆積的略微不同的填充細(xì)胞質(zhì)的液泡。在4-6h時(shí)間點(diǎn)，載體對(duì)照和形式ii處理的動(dòng)物在扣帶回的任何神經(jīng)元中均沒有任何細(xì)胞質(zhì)液泡的跡象。

在第4天，所有用mk-801(6只雄性；第5組)處理的動(dòng)物在大腦皮質(zhì)扣帶回區(qū)的皮質(zhì)層3和4中均具有壞死的神經(jīng)元。mk-801處理的雄性的外觀與之前公開的描述完全一致(fixetal.，1996)。使用fluoro-jadeb染色，在所有的第4天經(jīng)mk-801處理的動(dòng)物中容易目測(cè)到壞死的神經(jīng)元。在mk-801處理的動(dòng)物中，神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白染色(免疫組織化學(xué))的切片顯示在扣帶回區(qū)顯示非常輕微的染色增加。在第4天，載體對(duì)照和形式ii處理的動(dòng)物在扣帶回中均沒有任何壞死神經(jīng)元的跡象。

實(shí)施例20：在健康個(gè)體中的藥效學(xué)影響

在患者研究中進(jìn)行隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、平行劑量組(分組)以研究在健康個(gè)體中化合物(i)的晶型ii的藥效學(xué)(pd)影響。

研究設(shè)計(jì)為三部分的順序研究。研究的順序性確保在健康人群和比較人群(中年及老年)中進(jìn)行到更高劑量(部分2和3)之前在青年、健康的人群中首先研究劑量范圍(部分1)。出于該研究的目的，“青年”指?jìng)€(gè)體為18-45歲，“中年”指?jìng)€(gè)體為46-64歲，而“老年”指?jìng)€(gè)體為65歲以上。

部分1:

在長(zhǎng)達(dá)21天的篩選期間(第-23天至-3天)，將16名健康的男性和女性個(gè)體隨機(jī)分配至表9所示的劑量組。

表9.部分1平行劑量組(第1-7天給藥)

*隨機(jī)分組為分層的，使得三名男性個(gè)體和3名女性個(gè)體隨機(jī)分至各劑量組。

注：在第-1天(匹配時(shí)間的基線天)，所有的個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑。

各平行劑量組為性別平衡的(約相等數(shù)目的男性和女性)。隨機(jī)分組的個(gè)體在第1-8天居于指定的地點(diǎn)。在第-1天，個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑片劑且進(jìn)行動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)(abpm)和安全性評(píng)估以建立匹配時(shí)間的基線。在第1-7天，個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受研究藥物且進(jìn)行安全的藥代動(dòng)力學(xué)(pk)的和藥效學(xué)(pd)的評(píng)估。在第8-11天，進(jìn)行隨訪pk和安全性評(píng)估。

安全性評(píng)估包括臨床醫(yī)師專用的分裂狀態(tài)量表(cadss)，哥倫比亞-自殺嚴(yán)重程度等級(jí)量表(c-ssrs)，伴隨用藥，不良事件(ae)和生命跡象評(píng)估。在pk評(píng)估中，獲取和分析血液樣品以確定pk參數(shù)例如cmax、tmax、auc0-24、和t1/2。pd評(píng)估包括abpm、血漿腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(bdnf)測(cè)量和心境狀態(tài)量表(poms)評(píng)估。由于bdnf水平已顯示出與重度抑郁癥(mdd)的嚴(yán)重性相關(guān)且對(duì)抗抑郁劑治療的應(yīng)答而改變，在此研究中測(cè)量bdnf水平作為藥物活性的生物標(biāo)志物。

部分1安全性回顧：

在完成部分1后，回顧第-1天至第8天的安全性數(shù)據(jù)。做出進(jìn)行部分2或可替代的給藥方案(例如通過改變劑量水平、給藥間隔和進(jìn)食狀態(tài)的任意組合)的決定。

部分2：

在長(zhǎng)達(dá)21天的篩選期間(第-23天至第-3天)，將16名個(gè)體(8名健康、青年男性和女性個(gè)體，以及8名健康中年男性和女性個(gè)體)隨機(jī)分配至劑量組，如表10所示。

表10.部分2平行劑量組(第1-7天給藥)

*隨機(jī)分組為分層的，使得相等數(shù)目的男性和女性個(gè)體隨機(jī)分至各劑量組。**給藥方案可基于部分1的安全性回顧的結(jié)果改變。方案可通過改變劑量水平、給藥間隔或進(jìn)食狀態(tài)的任意組合改變；或重復(fù)劑量水平改變。

計(jì)劃的劑量水平可基于部分1的安全性回顧的結(jié)果改變。在青年個(gè)體中最大劑量是16mg且在中年個(gè)體中最大劑量是12mg。

注：在第-1天(匹配時(shí)間的基線天)，所有的個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑。

如在部分1中，在第-1天，隨機(jī)分組的個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑給藥且進(jìn)行匹配時(shí)間的基線abpm和安全性評(píng)估，隨后在第8-11天，進(jìn)行每日一次給藥的藥物研究且進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)(pk)的和藥效學(xué)(pd)的評(píng)估，且在第8-11天，進(jìn)行隨訪pk和安全性評(píng)估。各平行劑量組為性別平衡的(約相等數(shù)目的男性和女性)。

部分2安全性回顧:

在完成部分2后，回顧從第-1天至第8天的安全性數(shù)據(jù)。做出進(jìn)行部分3和可替代的給藥方案的決定。

部分3：

在長(zhǎng)達(dá)21天的篩選期間(第-23天至第-3天)，將16名個(gè)體(8名健康、青年男性和女性個(gè)體，以及8名健康老年男性和女性個(gè)體)隨機(jī)分配至劑量組，如表11所示。

表11.part3平行劑量組(第1-7天給藥)

*隨機(jī)分組為分層的，使得相等數(shù)目的男性和女性個(gè)體隨機(jī)分至各劑量組。**給藥方案可基于部分2的安全性回顧的結(jié)果改變。方案可通過改變劑量水平、給藥間隔或進(jìn)食狀態(tài)的任意組合改變；或重復(fù)劑量水平改變。

計(jì)劃的劑量水平可基于部分2的安全性回顧的結(jié)果改變。在青年個(gè)體中最大劑量是20mg且在中年個(gè)體中最大劑量是16mg。

注：在第-1天(匹配時(shí)間的基線天)，所有的個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑。

如在部分1和部分2中，在第-1天，隨機(jī)分組的個(gè)體在進(jìn)食狀態(tài)接受安慰劑給藥且進(jìn)行匹配時(shí)間的基線abpm和安全性評(píng)估，隨后在第1-7天，進(jìn)行每日一次給藥的藥物研究且進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)(pk)的和藥效學(xué)(pd)的評(píng)估，然后在第8-11天，進(jìn)行隨訪pk和安全性評(píng)估。各平行劑量組為性別平衡的(約相等數(shù)目的男性和女性)。

第3部分完成后，回顧從第-1天至第8天的安全性數(shù)據(jù)。做出是否增加另外的給藥組以探究可替代的給藥方案或重復(fù)方案的決定。

隨后對(duì)所有的數(shù)據(jù)分析pd效果、pk概況、安全性和耐受性以及年齡和性別對(duì)pk、血壓和其他安全參數(shù)如ae的影響。

在重復(fù)化合物(i)的晶型ii的日劑量后，在研究第5天達(dá)到穩(wěn)態(tài)給藥前的化合物(i)的晶型ii的血漿濃度。化合物(i)的晶型ii為經(jīng)口可生物利用的，其平均tmax值在第1天為2.00-3.00小時(shí)，且在給藥第7天為1.50-3.00小時(shí)。在第1天和第7天，cmax和auc值在化合物(i)的晶型ii的8-20mg研究劑量范圍內(nèi)以約與劑量成比例的方式增加。在第7天化合物(i)的晶型ii的平均血漿濃度在中年和老年小組中分別在給藥后2-24小時(shí)比青年小組高約20-40％，而女性個(gè)體在給藥后2-24小時(shí)比于男性個(gè)體高約20％。

在第7天，平均t1/2為約17-25小時(shí)，平均表觀口服清除率值為約3-4l/h，且平均表觀分布體積為約83-116l。在7天化合物(i)的晶型ii的每日給藥下觀察適度積累，因?yàn)橛^察到的積累指數(shù)平均為約1.6-1.9且穩(wěn)態(tài)積累指數(shù)平均為1.1。平均第7天比第1天的cmax的比率為1.3-1.4。

與青年個(gè)體相比，在中年和老年個(gè)體中觀察到pk參數(shù)的臨床適度的差異，且相比于男性個(gè)體，在女性個(gè)體中觀察到pk參數(shù)的臨床適度的差異。在第7天，相比于青年組，在中年和老年小組平均cmax值高出約30％。在第1天，相比于青年組，在中年和老年小組平均auc值高出約25％-37％且相比于男性個(gè)體，女性個(gè)體的平均auc值高出約6％-29％。在第7天，相比于青年組，老年組的平均auc值高出約48％-74％，且相比于男性個(gè)體，女性個(gè)體的平均auc值高出約19％-38％。在第7天，相比于青年組，在中年和老年組中表觀口服清除率值分別低約平均18％和30％，且相比于男性個(gè)體，女性個(gè)體的表觀口腔清除率值低約平均15％。在第7天，在中年和老年組中平均t1/2約為20-28小時(shí)且相比于青年組，分別高出約27％和38％。在第7天，女性個(gè)體的平均t1/2約為21-24小時(shí)，且相比于男性個(gè)體，女性個(gè)體的平均t1/2約高出16％。

表12.青年個(gè)體的化合物(i)的晶型ii依據(jù)劑量和天數(shù)的血漿藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的總結(jié)

表13.在12mg劑量下青年、中年和老年個(gè)體的化合物(i)的晶型ii依據(jù)劑量和天數(shù)的血漿藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的總結(jié)

表14.匯集的化合物(i)的晶型ii的所有劑量的依據(jù)性別和天數(shù)的化合物(i)的晶型ii的血漿藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的總結(jié)

化合物(i)的晶型ii對(duì)動(dòng)脈血壓的影響如下。簡(jiǎn)而言之，與安慰劑相比，在化合物(i)的晶型ii的所有劑量下，平均24小時(shí)和日間收縮壓(sbp)和舒張壓(dbp)升高，在第4天觀察到最大增加，除了20mg劑量的化合物(i)的晶型ii在第4天-第7天進(jìn)一步升高以外。化合物(i)的晶型ii對(duì)平均夜間sbp和dbp的影響較小且較少一致地觀察到?；衔?i)的晶型ii對(duì)血壓的影響出現(xiàn)相似且與年齡小組無關(guān)。在第7天，化合物(i)的晶型ii對(duì)sbp的影響在女性中相比于男性呈現(xiàn)出略微更明顯。但是整體上化合物(i)的晶型ii在男性和女性中表現(xiàn)出類似的對(duì)bp的影響。

在本研究中血漿bdnf測(cè)量存在高度變化性。然而，與安慰劑組相比，在16和20mg兩個(gè)較高劑量下似乎存在平均7天bdnf值增加的趨勢(shì)。

實(shí)施例21：在患有mdd和自殺意念的個(gè)體中的抗抑郁效果

進(jìn)行隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、順序平行研究以評(píng)估化合物(i)的晶型ii在治療7天后的抗抑郁效果。

在長(zhǎng)達(dá)14天的篩選期間，約135名個(gè)體(男性和女性，18-70歲，盡管目前用ssri或snri穩(wěn)定的治療，仍患有mmd且經(jīng)歷嚴(yán)重的抑郁發(fā)作，最近具有主動(dòng)自殺意念)以如表15所示的不等分布隨機(jī)分配至三個(gè)治療順序中的一個(gè)。

表15.治療順序

隨機(jī)個(gè)體參加兩個(gè)治療期(第1期和第2期)且隨訪安全性評(píng)估。在第1期，個(gè)體在第0天接受其研究藥物的第一次給藥且進(jìn)行安全性、pk和功效評(píng)估。在第4天(±1天)，個(gè)體進(jìn)行給藥前安全性、pk和效力評(píng)估，隨后為給藥程序以及給藥后安全性和功效評(píng)估。在第7天(±1天)，個(gè)體進(jìn)行安全性、pk和效力評(píng)估，從而完成第1期。在完成第1期研究評(píng)估時(shí)，個(gè)體在同一天(第7天±1天)接受其第2期的第一次研究藥物給藥且進(jìn)行給藥后安全性和效力評(píng)估。在第11、14、21和28天(±1天)，個(gè)體進(jìn)行給藥前安全性、pk和效力評(píng)估，隨后進(jìn)行給藥程序以及給藥后安全性和效力評(píng)估。在第35天(±1天)，個(gè)體進(jìn)行安全性、pk和效力評(píng)估，從而結(jié)束第2期。在第49天(±2天)，個(gè)體進(jìn)行隨訪安全性評(píng)估。

效力基于以下評(píng)估：

●mdd：ham-d17，臨床總體印象-嚴(yán)重程度(cgi-s)以及臨床總體印象-改進(jìn)(cgi-i)；

●自殺傾向：貝克自殺意念量表(bssi)；

●生物標(biāo)志物：血漿bdnf；及

●基因型：bdnf多形現(xiàn)象。

安全性基于以下評(píng)估：

●生命跡象(半伏臥血壓、心率和口腔體溫)；

●在各時(shí)間點(diǎn)重復(fù)三次進(jìn)行血壓測(cè)量(在5分鐘內(nèi))且確定平均值；

●12導(dǎo)聯(lián)心電圖(ecg)；

●臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試(血液學(xué)、臨床化學(xué)和尿分析)

●體檢

●不良事件(ae)評(píng)估

●哥倫比亞-自殺嚴(yán)重程度等級(jí)量表(c-ssrs，“基線/篩選”版本和“自上次問診”版本)

●簡(jiǎn)明精神病等級(jí)量表(bprs)

●伴隨用藥評(píng)估

評(píng)估安全性、pk和效力數(shù)據(jù)(例如ham-d17中自基線的變化，ham-d17應(yīng)答的持續(xù)時(shí)間，至符合ham-d17應(yīng)答者準(zhǔn)則(自基線減少≥50％)的時(shí)間、bssi評(píng)分及自基線的變化、bdnf水平及自基線的變化、cgi-s和cgi-i評(píng)分、血壓及自基線的變化，以及化合物(i)的晶型ii的最低濃度)，以評(píng)價(jià)化合物(i)的晶型ii的抗抑郁效果，以及其作為輔助治療劑對(duì)患有mdd的個(gè)體的安全性和耐受性、其作為輔助療法對(duì)自殺意念的效果、其對(duì)特定抑郁癥狀的效果、其對(duì)血漿bdnf的效果、對(duì)加載劑量的需要、在患有mdd的個(gè)體中抗抑郁效果開始與血漿bdnf之間的關(guān)系、在患有mdd的個(gè)體中基線癥狀與應(yīng)答速率和量值之間的關(guān)系、以及具有bdnfval66val的個(gè)體相對(duì)于具有val66met多形現(xiàn)象的個(gè)體的抗抑郁效果的差異。

實(shí)施例22：在患有mdd的個(gè)體中的抗抑郁效果

進(jìn)行隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、順序平行研究以評(píng)估在單次劑量的治療后單次劑量的化合物(i)的晶型ii的抗抑郁效果。

在長(zhǎng)達(dá)14天的篩選期間，約60名個(gè)體(男性和女性，18-65歲，診斷患有無精神病特征的mdd且用ssri或snri進(jìn)行穩(wěn)定的治療)以如表16所示的不等分布隨機(jī)分配至三個(gè)治療順序中的一個(gè)。

表16.治療順序

隨機(jī)個(gè)體參加兩個(gè)治療期(第1期和第2期)且隨訪安全性和效力評(píng)估。在第1期第0天，個(gè)體進(jìn)行基線評(píng)估，接受其第1期的研究藥物，且進(jìn)行給藥后安全性、pk和效力評(píng)估。在第1期的第1天，個(gè)體進(jìn)行額外的安全性、pk和效力評(píng)估，在此之后個(gè)體重新隨機(jī)分組至第2期治療順序。在第2期的第3天，個(gè)體進(jìn)行基線評(píng)估，接受其第2期藥物，且進(jìn)行給藥后安全性、pk和效力評(píng)估。在第2期的第4天，個(gè)體進(jìn)行額外的安全性、pk和效力評(píng)估。在第2期后，在第6天、第10天(±1天)和第17天(±1天)個(gè)體進(jìn)行隨訪安全性和效力評(píng)估。

評(píng)估安全性、pk和效力數(shù)據(jù)以評(píng)估單次劑量的化合物(i)的晶型ii的抗抑郁效果，以及其作為輔助治療在患有mdd的個(gè)體治療中的安全性和耐受性，其對(duì)特定抑郁癥狀的影響，在患有mdd的個(gè)體中的抗抑郁效果和血漿bdnf的關(guān)系，在患有mdd的個(gè)體中的基線癥狀與應(yīng)答速率及量值之間的關(guān)系，以及具有bdnfval66val的個(gè)體相對(duì)于具有val66met多形現(xiàn)象的個(gè)體的抗抑郁效果的差異。

實(shí)施例23：化合物(i)的血液動(dòng)力學(xué)效應(yīng)的研究

為了研究其全身性血液動(dòng)力學(xué)效應(yīng)，化合物(i)以0.3、0.6、1、3和10mg/kg的劑量單次口服灌胃給藥至6只(n＝6)長(zhǎng)期遙測(cè)大鼠(在給藥前至少7天植入)，且記錄全身性血壓和心率值(圖11)。將血液動(dòng)力學(xué)效應(yīng)與以0.2mg/kg的劑量靜脈給予(在0.9％生理鹽水中的)地佐環(huán)平(mk-801)相比。在各動(dòng)物中，給藥化合物(i)或載體(0.5％mc/0.02％sls)的單次口服灌胃劑量(體積：5ml/kg)。在給藥前(僅載體)和每次口服給藥后進(jìn)行24小時(shí)記錄。在另一系列研究中，將化合物(i)(1mg/kg)與α1-腎上腺素能受體拮抗劑哌唑嗪(α1-腎上腺素能受體拮抗劑，200μg/kg，iv推注)聯(lián)合給藥以闡明高血壓的潛在機(jī)理。分析數(shù)據(jù)且與基線比較，相對(duì)于24小時(shí)給藥前載體對(duì)照校正。

有意識(shí)地遙測(cè)大鼠的研究證明當(dāng)口服給藥時(shí)，化合物(i)使動(dòng)脈血壓短暫升高，且在0.3-1mg/kg之間呈劑量依賴性方式，且此效應(yīng)在1-10mg/kg時(shí)處于平臺(tái)期。值得關(guān)注的是，血壓效應(yīng)的ed50類似于強(qiáng)迫游泳測(cè)試的ed50。使用化合物(i)的血液動(dòng)力學(xué)的變化幅度顯著低于mk-801(廣譜nmda受體拮抗劑)。此外，化合物(i)在0.3和0.6mg/kg劑量時(shí)適當(dāng)?shù)卦黾有穆是以?-10mg/kg之間按劑量比例增加hr。另外，在運(yùn)動(dòng)活動(dòng)等級(jí)與心率變化之間觀測(cè)到強(qiáng)相關(guān)(r²＝0.67)。心率的改變可通過化合物(i)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮效應(yīng)部分解釋。在大鼠中化合物(i)的運(yùn)動(dòng)效應(yīng)的研究中也觀察到相似的劑量依賴性移動(dòng)效應(yīng)(在1-10mg/kg之間與劑量成比例)。

如圖12所示，在具有或不具有哌唑嗪時(shí)，探究化合物(i)的單次劑量對(duì)收縮壓的影響。該研究顯示α1-腎上腺素能阻斷提供避免化合物(i)介導(dǎo)的血壓升高的保護(hù)。α1-腎上腺素受體在引起血管收縮及后負(fù)荷增加的血管平滑肌神經(jīng)支配中起主要作用。交感神經(jīng)系統(tǒng)的腎上腺素能神經(jīng)傳導(dǎo)素--去甲腎上腺素通過結(jié)合至血管中的這些腎上腺素受體而產(chǎn)生其血管效應(yīng)。給予阻斷周邊α1-腎上腺素能受體的藥劑例如哌唑嗪喹唑啉化合物有效阻斷且可用于治療化合物(i)的血壓效應(yīng)。此外，在以高達(dá)20mg的劑量口服給予化合物(i)的人類研究中，初步血液動(dòng)力學(xué)觀測(cè)結(jié)果為收縮和舒張血壓的暫時(shí)升高，其中最大值和最小值傾向于與tmax及再分布時(shí)間相關(guān)。尚未觀察到心率增加至臨床上或統(tǒng)計(jì)學(xué)上的任何顯著程度。在缺少心率增加的情況下血壓的增加表明化合物(i)的血管收縮效應(yīng)(α1-腎上腺素能活性)，其中對(duì)心肌收縮性或收縮變力性影響有限(幾乎沒有至沒有β1-腎上腺素能效應(yīng))。用α1-激動(dòng)劑直接誘導(dǎo)或用增加去甲腎上腺素活性的藥物間接誘導(dǎo)動(dòng)物和人類α1-腎上腺素能系統(tǒng)的緊張性增加可容易且安全地用阻斷血管中α1-腎上腺素能受體的藥劑或α1-腎上腺素能阻斷劑抵消。

實(shí)施例24：給藥24h后化合物(i)和氯胺酮對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳測(cè)試中的行為的影響

本研究旨在使用強(qiáng)迫游泳測(cè)試評(píng)估化合物(i)的形式ii在雄性sprague-dawley鼠中抗抑郁效應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。在進(jìn)行該測(cè)試的嚙齒動(dòng)物中臨床上有效的抗抑郁化合物減少不動(dòng)時(shí)間且增加游泳。大鼠接受化合物(i)(10mg/kg，p.o.)或氯胺酮(10mg/kg，i.p.)且在24h后進(jìn)行測(cè)試。如圖13所示，氯胺酮和化合物(i)的形式ii在此行為程序中顯著減少不動(dòng)且增加游泳時(shí)間(p<0.05)。數(shù)據(jù)代表平均值±sem。與氯胺酮類似，這些數(shù)據(jù)與化合物(i)的長(zhǎng)期持續(xù)抗抑郁效應(yīng)一致。

實(shí)施例25：片劑的制備

步驟1：準(zhǔn)備碾壓

分配和去塊：

1.將以下組分分配至單獨(dú)容器中：

a.微晶纖維素(ph102)

b.單水合乳糖(310)

c.交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(ac-di-)

d.硬脂酸鎂(植物來源)

e.化合物(i)的晶型ii

2.除硬脂酸鎂外的所有成分通過20目手工篩去塊。硬脂酸鎂通過60目手工篩去塊。

混合和碾壓前潤(rùn)滑

1.將所述成分按以下次序裝載于v型混合器中：

a.約一半微晶纖維素

b.化合物(i)的晶型ii

c.剩余一半微晶纖維素

d.材料在30rpm下混合8.5分鐘

2.隨后加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，接著為單水合乳糖且在30rpm下混合17分鐘。

3.將硬脂酸鎂加入v-混合器中且另外在30rpm下混合4.5分鐘。

4.混合物放于低密度聚乙烯(ldpe)袋中。

步驟2:制備碾壓顆粒

碾壓：

1.將混合物手動(dòng)載入料斗中。調(diào)整進(jìn)料器螺桿和碾壓機(jī)參數(shù)以產(chǎn)生期望密度的帶狀物。在預(yù)設(shè)時(shí)間間隔下記錄參數(shù)。

2.將該帶狀物收集于雙層ldpe袋中。

3.帶狀物調(diào)和。評(píng)估產(chǎn)生帶狀物密度的帶狀物厚度、重量和長(zhǎng)度。

研磨

通過裝配有圓孔(直徑，0.039)和圓形葉輪的comil在800±300rpm下研磨所收集的帶狀物。

碾壓后潤(rùn)滑

將顆粒裝載于v型混合器中，隨后(加入)去塊的硬脂酸鎂且在30rpm下混合4.5分鐘。

步驟3：制備成品片劑

制片

將所述混合物手工裝入料斗中。調(diào)節(jié)模具填充量和壓縮參數(shù)(壓制速度、填充深度、壓縮前厚度設(shè)定、壓縮厚度設(shè)定及強(qiáng)制進(jìn)料器速度)，以產(chǎn)生具有目標(biāo)重量和和硬度的片劑。所有的成品片劑收集于雙層ldpe袋中。

片劑的組成于表17提供。

表17.片劑的組成

具體實(shí)施方案

1.一種化合物，其為基本上純的化合物(i)的晶型ii，

展現(xiàn)以下中至少一項(xiàng)：

(i)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖包含約5.9和8.8度的2θ角的峰；

(ii)通過使用銅kα輻射獲得的x-射線粉末衍射圖基本上如圖1a所示；

(iii)使用甲醇作為稀釋劑獲得的紫外吸收光譜圖基本上如圖2所示；

(iv)基本上如圖3所示的紅外光譜圖；

(v)在約600mhz下的在cd3cn中的質(zhì)子核磁共振譜圖基本上如圖4所示；

(vi)在約150mhz下的在cd3cn中的¹³c核磁共振譜圖基本上如圖5所示；

(vii)基本上如圖6所示的熱重分析曲線；以及

(viii)基本上如圖7所示的差示掃描量熱圖。

2.如實(shí)施方案1的化合物，其中所述化合物顯示出包含2θ角為約5.9和8.8度的峰的x射線粉末衍射圖，其分別對(duì)應(yīng)于約14.9和10.0埃的晶格面距。

3.實(shí)施方案1或2的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖1a所示的x-射線粉末衍射圖。

4.實(shí)施方案2和3之一的化合物，其中所述化合物還顯示出以下項(xiàng)的至少一種：基本上如圖2示出的紫外吸收光譜圖，基本上如圖3示出的紅外光譜圖，基本上如圖4示出的質(zhì)子核磁共振譜圖，基本上如圖5示出的¹³c核磁共振譜圖，基本上如圖6示出的熱重分析曲線，以及基本上如圖7示出的差示掃描量熱圖。

5.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖2所示的紫外吸收光譜圖。

6.實(shí)施方案5的化合物，其中所述紫外吸收光譜圖包含在約236±2nm處的最大吸收。

7.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖3所示的紅外光譜圖。

8.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖4所示的質(zhì)子核磁共振譜圖。

9.實(shí)施方案8的化合物，其中所述質(zhì)子核磁共振譜圖包含基本上如表1所列的峰。

10.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖5所示的¹³c核磁共振譜圖。

11.實(shí)施方案10的化合物，其中所述¹³c核磁共振譜圖包含基本上如表2所列的峰。

12.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖6所示的熱重分析曲線。

13.實(shí)施方案12的化合物，其中所述熱重分析曲線對(duì)應(yīng)于直至約250℃的約0.16％的重量損失。

14.實(shí)施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物顯示出基本上如圖7所示的差示掃描量熱圖。

15.實(shí)施方案14的化合物，其中所述差示掃描量熱圖包含在溫度約124℃處的吸熱峰。

16.一種藥物組合物，其包含有效量的實(shí)施方案1-15之一的化合物。

17.實(shí)施方案16的藥物組合物，其還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。

18.實(shí)施方案16和17之一的藥物組合物，其中所述化合物(i)是x90粒度為約10μm或更低的微粒形式。

19.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約8μm或更低。

20.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約6μm或更低。

21.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約5μm或更低。

22.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約1-10μm之間。

23.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約2-8μm之間。

24.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約3-6μm之間。

25.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約4-5μm之間。

26.實(shí)施方案18的藥物組合物，其中x90粒度為約4.5μm之間。

27.實(shí)施方案16-26之一的藥物組合物，其中所述藥物組合物配制為口服給藥的劑型。

28.實(shí)施方案27的藥物組合物，其中所述藥物組合物是片劑或膠囊的形式。

29.一種治療對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的實(shí)施方案1-15之一的化合物或?qū)嵤┓桨?6-28之一的藥物組合物。

30.實(shí)施方案29的方法，其中所述病癥是抑郁癥。

31.實(shí)施方案29的方法，其中所述病癥是重度抑郁癥。

32.實(shí)施方案29的方法，其中所述病癥是難治性重度抑郁癥。

33.實(shí)施方案29-32之一的方法，其中所述化合物作為血清素再吸收抑制劑或血清素以及去甲腎上腺素再吸收抑制劑的輔劑給藥。

34.實(shí)施方案29-33之一的方法，其中所述化合物為間歇給藥。

35.實(shí)施方案29-34之一的方法，其中所述有效量是每日或間歇地為約4-60mg。

36.實(shí)施方案29-35之一的方法，其中所述化合物不與食物一起給藥。

37.實(shí)施方案29-35之一的方法，其中所述化合物與食物一起給藥。

38.一種藥物組合物，其包含化合物(i)的顆粒，

其具有約10μm或更低的x90粒度。

39.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約8μm或更低。

40.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約6μm或更低。

41.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約5μm或更低。

42.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約1-10μm。

43.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約2-8μm。

44.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約3-6μm。

45.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約4-5μm。

46.實(shí)施方案38的藥物組合物，其中所述x90粒度為約4.5μm。

47.實(shí)施方案38-46之一的藥物組合物，其還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。

48.實(shí)施方案38-47之一的藥物組合物，其中所述藥物組合物配制為口服給藥的劑型。

49.實(shí)施方案38-47之一的藥物組合物，其中所述藥物組合物是片劑或膠囊的形式。

50.實(shí)施方案38-49之一的藥物組合物，其中所述化合物(i)為如實(shí)施方案1-15之一所表征的晶型ii。

51.一種提高化合物(i)的生物利用度的方法，

其包括向有此需要的患者給藥有效量的實(shí)施方案38-50之一的藥物組合物。

52.實(shí)施方案51的方法，其中所述方法與包括給藥x90粒度為約10μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

53.實(shí)施方案51的方法，其中所述方法與包括給藥x90粒度為約11μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

54.實(shí)施方案51的方法，其中所述方法與包括給藥x90粒度為約12μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

55.實(shí)施方案51的方法，其中所述方法與包括給藥x90粒度為約13μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

56.實(shí)施方案51的方法，其中所述方法與包括給藥x90粒度為約14μm或更高的化合物(i)的方法相比產(chǎn)生更大的曲線下面積。

57.一種治療對(duì)nr2b拮抗劑應(yīng)答的病癥的方法，其包括向有此需要的患者給藥有效量的實(shí)施方案38-50之一的藥物組合物。

58.實(shí)施方案57的方法，其中所述病癥是抑郁癥。

59.實(shí)施方案57的方法，其中所述病癥是重度抑郁癥。

60.實(shí)施方案57的方法，其中所述病癥是難治性重度抑郁癥。

61.實(shí)施方案57-60之一的方法，其中所述化合物作為血清素再吸收抑制劑或血清素以及去甲腎上腺素再吸收抑制劑的輔劑給藥。

62.一種治療自殺意念的方法，其包括向患有、疑似患有或已經(jīng)診斷具有自殺意念的患者給藥有效量的化合物(i)

(i)。

63.實(shí)施方案62的方法，其中所述患者在給藥所述化合物前約4周內(nèi)已經(jīng)被診斷具有自殺意念。

64.實(shí)施方案62和63之一的方法，其中所述患者還被診斷具有抑郁癥。

65.實(shí)施方案62和63之一的方法，其中所述患者還被診斷具有重度抑郁癥。

66.實(shí)施方案62和63之一的方法，其中所述患者還被診斷具有難治性重度抑郁癥。

67.實(shí)施方案62-66之一的方法，其中所述化合物(i)為如實(shí)施方案1-15之一所表征的晶型ii。

68.實(shí)施方案62-67之一的方法，其中所述化合物(i)為如實(shí)施方案38-50之一所表征的藥物組合物。

69.實(shí)施方案51-68之一的方法，其中所述化合物(i)或藥物組合物不與食物一起給藥。

70.實(shí)施方案51-68之一的方法，其中所述化合物(i)或藥物組合物與食物一起給藥。

71.一種降低化合物(i)的吸收速率的方法，

其包括向有此需要的患者與食物一起給藥有效量的所述化合物(i)，其中所述化合物基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約2小時(shí)、或至多給予食物前約30分鐘給藥。

72.實(shí)施方案71的方法，其中所述方法與包括不與食物一起給藥化合物(i)的方法相比，導(dǎo)致更低的cmax或更高的tmax。

73.實(shí)施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約90分鐘、或至多給予食物前約15分鐘給藥。

74.實(shí)施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)、或至多給予食物后約60分鐘、或至多給予食物前約10分鐘給藥。

75.實(shí)施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(i)基本上在與給予食物的同時(shí)給藥。

76.實(shí)施方案71-75之一的方法，其中所述化合物口服給藥。

77.實(shí)施方案71-76之一的方法，其中所述化合物為如實(shí)施方案1-15之一所表征的晶型ii。

78.實(shí)施方案71-77之一的方法，其中所述化合物為如實(shí)施方案38-50之一所表征的藥物組合物。

79.實(shí)施方案51-78之一的方法，其中所述有效量是每日或間歇地約4-60mg。

80.實(shí)施方案29-38和51-79之一的方法，還包括監(jiān)測(cè)患者的血壓；且若檢測(cè)到高血壓，則向該患者給藥抗高血壓劑。

81.一種制備化合物(i)的方法

其包括：

(i)使化合物(8)與三氟甲磺酸酐反應(yīng)生成三氟甲磺酸酯

(ii)使所述三氟甲磺酸酯與氨反應(yīng)生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)與2-氯嘧啶反應(yīng)生成化合物(i)的晶型i。

82.實(shí)施方案81的方法，還包括向化合物(i)的晶型i播以化合物(i)的晶型ii的晶種。

83.實(shí)施方案81或82的方法，還包括使化合物(6)與羰基二咪唑和化合物(7)反應(yīng)，以生成化合物(8)。

84.實(shí)施方案82的方法，其還包括用氫氣經(jīng)鈀使化合物(5)脫芐基以生成化合物(6)。

85.實(shí)施方案84的方法，其還包括在氫氣氣氛下用氯(1,5-環(huán)辛二烯)銠的二聚體還原化合物(4)以生成化合物(5)。

86.實(shí)施方案81-85之一的方法，還包括純化化合物(i)。

87.實(shí)施方案86的方法，其中所述純化包含漿化或重結(jié)晶。

88.實(shí)施方案85的方法，其中所述純化包括漿化，隨后重結(jié)晶。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)清楚上述主題的具體實(shí)施方案可指向任何組合形式的一種或多種上下文指出的實(shí)施方案。

雖然本發(fā)明已出于清楚理解的目的而以說明及示例的方式詳細(xì)公開，但本領(lǐng)域技術(shù)人員容易得知在不背離本發(fā)明的真正精神和范疇的情況下進(jìn)行各種改變且可取代等效物。因此，描述及實(shí)例不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。

本文公開的所有的參考文獻(xiàn)、公開、專利和專利申請(qǐng)通過整體援引并入本文。