本發(fā)明涉及新的肽化合物、其制備方法，和所述新的肽化合物的用途。
背景技術(shù)：
：衍生自微生物的生理活性物質(zhì)已經(jīng)成為抗生素、抗真菌劑和抗癌藥物的來源，并已被開發(fā)為用于治療各種疾病的新藥或者成為新藥開發(fā)的模板。衍生自微生物的抗生素的實(shí)例是兩性霉素、紅霉素、鏈霉素、四環(huán)素和萬古霉素。此外，從鏈霉菌屬(其為放線菌屬)分離的達(dá)托霉素(deptomycin)在2013年被(fda)批準(zhǔn)為下一代抗生素。來自微生物的抗癌藥物的實(shí)例是多柔比星、博來霉素、光輝霉素、新制癌菌素、噴司他丁和埃博霉素。因此，從細(xì)菌衍生的生理活性物質(zhì)的研究在抗菌劑、抗真菌劑和抗癌藥的開發(fā)中是非常重要的。為了篩選與現(xiàn)有物質(zhì)結(jié)構(gòu)不同的生理活性物質(zhì)，最近研究的一個(gè)策略是在地理和系統(tǒng)發(fā)育的特定環(huán)境中研究天然產(chǎn)物。雖然容易得到的土壤微生物和陸地植物在長時(shí)間內(nèi)已被廣泛地研究用于天然產(chǎn)物，但是對(duì)微生物或海洋來源的研究相對(duì)不積極。海洋覆蓋了地球表面的約70％，而海洋本身則被視為大部分未被探索的充滿機(jī)遇的空間。雖然海洋微生物的多樣性尚未得到充分的確定，但到目前為止，這一領(lǐng)域的研究很少，據(jù)信只有1％的海洋微生物被培養(yǎng)或識(shí)別出來。因此，考慮到新結(jié)構(gòu)的抗生素和抗癌藥物的發(fā)展，有必要選擇產(chǎn)生有用的生理活性物質(zhì)的海洋微生物，并探索和開發(fā)生產(chǎn)新化合物的這種海洋微生物。因此，在選擇和研究新的海洋真菌時(shí)發(fā)現(xiàn)了新的菌株。此外，在研究新菌株的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)新菌株能夠生產(chǎn)新的肽化合物，其也因此被發(fā)現(xiàn)具有抗癌活性，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的詳細(xì)描述技術(shù)問題提供了新的肽化合物及其異構(gòu)體、衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽。此外，提供了產(chǎn)生所述肽化合物的曲霉屬的菌株f452。此外，提供了產(chǎn)生所述肽化合物的方法。此外，提供了用于預(yù)防或者治療癌癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含肽化合物。此外，提供了預(yù)防或者治療癌癥的方法。技術(shù)方案根據(jù)一個(gè)方面，提供了包含脂肽和苯甲酮的新的肽化合物或者所述肽化合物的異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽。根據(jù)另一方面，提供了產(chǎn)生所述肽化合物的曲霉屬的菌株f452。根據(jù)另一方面，提供了產(chǎn)生所述肽化合物的方法。根據(jù)另一方面，提供了藥物組合物，其包含肽化合物或者所述肽化合物的異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽。根據(jù)另一方面，提供了預(yù)防或者治療癌癥的方法，所述方法使用所述肽化合物或者所述肽化合物的衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的有利效果包含脂肽和苯甲酮的新肽具有抗癌活性，并因此可用于預(yù)防或者治療各種類型的癌癥。此外，可使用低價(jià)格的大量培養(yǎng)基提供高收率的肽化合物。附圖說明圖1a和1b分別顯示了asperphenina和asperpheninb的結(jié)構(gòu)式；圖2為顯示了培養(yǎng)曲霉菌屬菌株f452的培養(yǎng)基的圖像；圖3a為顯示了根據(jù)asperpheninb濃度的各細(xì)胞周期的rko細(xì)胞比率(％)的圖，以及圖3b和3c為各自顯示在2.5μm和5μm的濃度時(shí)根據(jù)asperpheninb培育時(shí)間的細(xì)胞周期的rko細(xì)胞比率(％)的圖；圖4為顯示了根據(jù)asperpheninb濃度，活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡或者壞死的細(xì)胞、或者壞死細(xì)胞的比率(％)的圖；圖5a和5b各自為根據(jù)asperpheninb濃度和asperpheninb在5μm濃度時(shí)的培育時(shí)間(以小時(shí)計(jì))的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的免疫印跡圖像；圖6a和6b各自為根據(jù)asperpheninb濃度和asperpheninb在5μm濃度時(shí)的培育時(shí)間(以小時(shí)計(jì))的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的免疫印跡圖像；圖7a至7c各自為顯示了asperpheninb和其它抗癌藥物的組合或者僅其它抗癌藥物的細(xì)胞生存力(％)的圖；和圖8為顯示了在將4mg/kg或者8mg/kgasperpheninb給藥至小鼠之后根據(jù)天數(shù)的小鼠的腫瘤體積的圖。最佳實(shí)施方式本發(fā)明的一個(gè)方面提供了包含脂肽和苯甲酮的肽化合物或者所述肽化合物的異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明中使用的術(shù)語"肽化合物"是指包含肽的化合物。肽是這樣的化合物：其中兩個(gè)或者更多個(gè)氨基酸通過一個(gè)氨基酸的羧基和另一氨基酸的氨基之間的肽鍵連接。根據(jù)構(gòu)成肽的氨基酸的數(shù)目，所述肽可為二肽、三肽、四肽等。具有約10個(gè)以下肽鍵的肽被稱為寡肽，以及具有多個(gè)肽鍵的肽被稱為多肽。本發(fā)明所用的術(shù)語“異構(gòu)體”是指與另一分子具有相同分子式但具有分子中的組成原子的連接或空間排列不同的化合物。異構(gòu)體可以包括例如結(jié)構(gòu)異構(gòu)體和立體異體體。本發(fā)明所用的術(shù)語“衍生物”是指通過將化合物的一部分結(jié)構(gòu)取代為另一結(jié)構(gòu)或原子基團(tuán)而獲得的化合物。本發(fā)明所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指化合物的無機(jī)鹽和有機(jī)加成鹽。本發(fā)明所用的術(shù)語“脂肽”是指包括與肽連接的脂質(zhì)的物質(zhì)。脂肽可以包括通過酰胺鍵連接到肽的脂質(zhì)。酰胺鍵也稱為肽鍵，并且是一個(gè)分子的氨基和另一個(gè)分子的羧基連接的共價(jià)鍵。所述脂質(zhì)可為取代的或者未取代的c12-c20烷基、取代的或者未取代的c2-c20烯基或者取代的或者未取代的c2-c20炔基。所述烷基可為c2-c20烷基、c5-c20烷基或者c10-c15烷基。所述烷基可包括12個(gè)碳。所述烯基可為c2-c20烯基、c5-c20烯基、c10-c20烯基或者c10-c15烯基。所述炔基可為c2-c20炔基、c5-c20炔基、c10-c20炔基或者c10-c15炔基。本發(fā)明中使用的表達(dá)"取代的"是指有機(jī)化合物中的氫原子被另一原子團(tuán)取代以形成衍生物。在這里，“取代基”為被引入的原子基團(tuán)。所述取代基可為例如羥基、鹵素原子、c1-c20烷基、c2-c20烯基、c2-c20炔基、c1-c20雜烷基、c6-c20芳基、c6-c20芳基烷基、c6-c20雜芳基或者c6-c20雜芳基烷基、硝基、氰基、氨基、脒基、肼基、腙基、羧基或者其鹽、磺酸或者其鹽或者磷酸或者其鹽。所述肽可包含兩個(gè)、三個(gè)或者四個(gè)或者更多個(gè)氨基酸。所述肽可為例如包含三個(gè)氨基酸的三肽。所述肽可包括例如n末端-天冬酰胺(asp)-谷氨酰胺(gln)-亮氨酸(leu)-c末端。所述肽可包括一個(gè)或者多個(gè)β-氨基酸。氨基酸可包含氨基、羧基和該氨基酸特有的側(cè)鏈。20種類型的標(biāo)準(zhǔn)生物氨基酸具有連接至羧基的α碳的氨基，而β-氨基酸具有連接至羧基的β碳的氨基。其中的側(cè)鏈連接至與胺相鄰的碳的β-氨基酸為β3-氨基酸，以及其中的側(cè)鏈連接至與羧基相鄰的碳的β-氨基酸為β2-氨基酸。所述β-氨基酸可為β-亮氨酸。所述β-氨基酸可為β3-亮氨酸。所述苯甲酮可為二苯基甲酮，其為具有式(c6h5)2co的有機(jī)化合物。所述苯甲酮可為例如被1個(gè)、2個(gè)或者3個(gè)或者更多個(gè)羥基取代的化合物。例如，所述苯甲酮可為這樣的化合物：其中至少一個(gè)選自第5號(hào)碳、第9號(hào)碳和第13號(hào)碳的碳被羥基取代。所述脂肽和所述苯甲酮可經(jīng)酮連接基連接。例如，所述苯甲酮可連接至所述脂肽的c-末端。所述肽化合物可由式1表示，[式1]在式1中，r1可為取代的或者未取代的c1-c20烷基、取代的或者未取代的c1-c20烯基或者取代的或者未取代的c1-c20炔基，其中r1可選擇性地為未取代的或者被羥基取代，r2、r3和r4可各自獨(dú)立地選自氫、羥基、鹵素基團(tuán)、氰基、-c(＝o)ra、-c(＝o)ora、-oco(ora)、-c＝n(ra)、-sra、-s(＝o)ra、-s(＝o)2ra、-pra、取代的或者未取代的c1-c20烷基、取代的或者未取代的c1-c20烷氧基、取代的或者未取代的c2-c20烯基、取代的或者未取代的c2-c20炔基、c2-c20烯烴氧化物基團(tuán)、取代的或者未取代的c3-c30環(huán)烷基、取代的或者未取代的c6-c30芳基、取代的或者未取代的c6-c30芳基氧基、取代的或者未取代的c6-c30雜芳基或者其組合，以及r5可為取代的或者未取代的苯甲酮。烷基、烯基、炔基和所述取代以及所述苯甲酮與上述相同。所述肽化合物可為由式2表示的化合物，[式2]由該式表示的化合物可為由式3或者4表示的化合物或者其異構(gòu)體、衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽，[式3][式4]本發(fā)明的一個(gè)方面提供了曲霉屬的菌株f452(登記號(hào)：kctc12688bp)，所述菌株產(chǎn)生包含脂肽和苯甲酮的肽化合物。所述脂肽、所述苯甲酮和所述肽化合物與上述相同。所述菌株可包括其突變株。所述突變株可例如通過天然突變株或者人工突變株所產(chǎn)生。所述人工突變株可通過物理誘變?cè)?如紫外線)或者化學(xué)誘變?cè)?如堿化合物)所導(dǎo)致。所述菌株可包括其孢子、菌體或者培養(yǎng)物。所述菌株可從海洋沉積物分離或者衍生。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了產(chǎn)生包含脂肽和苯甲酮的肽化合物的方法，所述方法包括培養(yǎng)曲霉屬的菌株f452(登記號(hào)：kctc12688bp)以制備培養(yǎng)基；和從所述培養(yǎng)基分離包含脂肽和苯甲酮的肽化合物。所述方法可包括培養(yǎng)曲霉屬的菌株f452(登記號(hào)：kctc12688bp)以制備培養(yǎng)基。所述曲霉屬的菌株f452與上述相同。所述培養(yǎng)可為在液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株。所述培養(yǎng)基可包含instantocean。所述培養(yǎng)基可包含碳源，例如葡萄糖、大米、淀粉糖漿、糊精、淀粉、糖蜜、動(dòng)物油或植物油。所述培養(yǎng)基可以包含氮源，諸如酵母提取物、胨、麥麩、大豆油粉、小麥、麥芽、棉籽粉、魚粉、玉米漿、肉汁、硫酸銨、硝酸鈉或尿素。如果需要，所述培養(yǎng)基可包含食鹽、鉀、鎂、鈷、氯、磷酸、硫酸或者刺激其它離子的產(chǎn)生的無機(jī)鹽。所述培養(yǎng)基可包含例如instantocean、酵母提取物、胨和大米。所述培養(yǎng)可以是在有氧條件下進(jìn)行的搖動(dòng)培養(yǎng)或者靜置培養(yǎng)。進(jìn)行培養(yǎng)的溫度可為例如約20℃至約37℃或者約25℃至約30℃或者可為27℃。培養(yǎng)所需的時(shí)間可為例如1天至2個(gè)月、1周至2個(gè)月、2周至2個(gè)月、1個(gè)月至2個(gè)月或者6周。所述方法可包括從培養(yǎng)基分離肽化合物，所述肽化合物包含脂肽和苯甲酮。所述脂肽、所述苯甲酮，和所述肽化合物與上述相同。從培養(yǎng)基分離所述肽化合物可包括對(duì)培養(yǎng)基實(shí)施濃縮、離心、過濾或者色譜法。例如，可將培養(yǎng)基用乙酸乙酯、水或者其組合萃取。根據(jù)極性，可將得到的濃縮物通過色譜法分離成8個(gè)級(jí)分。所述色譜法可為例如反相快速色譜法，其使用例如水、乙腈或其組合作為移動(dòng)相。所述級(jí)分可通過使用反相快速色譜法拆分，由此得到8個(gè)級(jí)分。在得到的級(jí)分中，用水/乙腈混合溶液(其以50:50的體積比混合)洗脫的級(jí)分能夠通過使用高效液相色譜(hplc)分離所述肽化合物。所述hplc使用水/甲醇混合溶液(其以70:30的體積比率混合)作為移動(dòng)相，并且可通過使用反相半制備性hplc實(shí)施。分離的肽化合物可具有約80％、約90％或者約99％或者更多的純度。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于預(yù)防或者治療癌癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含肽化合物或者所述肽化合物的異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽，所述肽化合物包含脂肽和苯甲酮。所述脂肽、所述苯甲酮、所述肽化合物、所述異構(gòu)體、所述衍生物，和所述藥學(xué)上可接受的鹽與上述相同。所述癌癥可包括例如肝內(nèi)膽管癌、肝癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌、睪丸癌、骨髓增生異常綜合征、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、口腔癌、蕈樣真菌病、急性髓細(xì)胞樣白血病、慢性髓細(xì)胞樣白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性淋巴母細(xì)胞性白血病、基底細(xì)胞癌、卵巢上皮癌、卵巢胚細(xì)胞瘤、男性乳腺癌、腦瘤、垂體腺瘤、多發(fā)性骨髓瘤、膽囊癌、膽道癌、結(jié)腸癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、脈絡(luò)膜黑色素瘤、vater壺腹癌、膀胱癌、腹膜癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、非小細(xì)胞肺癌、舌癌、星形細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌、小兒腦瘤、小兒淋巴瘤、小兒白血病、小腸腫瘤、腦膜瘤、食管癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎盂和輸尿管癌、腎癌、惡性軟組織腫瘤、惡性骨瘤、惡性淋巴瘤、惡性間皮瘤、惡性黑色素瘤、眼瘤、陰部癌癥、尿道腫瘤、原發(fā)來源不明癌、胃淋巴瘤、胃癌、胃良性腫瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、willms腫瘤、乳腺癌、肉瘤、陰莖癌、咽癌、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮肉瘤、前列腺癌、轉(zhuǎn)移性腦瘤、直腸癌、直腸良性腫瘤、陰道癌、脊髓腫瘤、前庭神經(jīng)鞘瘤、胰腺癌、涎腺瘤、扁桃體癌、鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌、肺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、皮膚癌、肛門癌、喉癌或其組合。所述癌癥可為例如肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、肝癌或者乳腺癌。本發(fā)明所用的術(shù)語“預(yù)防”是指通過施用組合物抑制疾病或延遲發(fā)作的任何行動(dòng)。本發(fā)明所用的術(shù)語“治療”是指通過施用組合物來改善或減輕疾病癥狀的任何行動(dòng)。藥物組合物可以進(jìn)一步包括具有抗癌活性的已知活性成分。這種已知的活性成分可以是抗癌藥物。所述抗癌藥物可為依立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、依托泊甙、紫杉醇或其組合。當(dāng)還包含所述抗癌藥物時(shí)，所述藥物組合物可為單一組合物或者獨(dú)立組合物。所述藥物組合物還可包含載體、賦形劑或者稀釋劑。這種載體、賦形劑或者稀釋劑可為例如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、甲基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸鎂或者礦物油。根據(jù)常規(guī)方法，藥物組合物可以以口服制劑(如粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、混懸劑、乳劑和糖漿劑)、氣霧劑、外用制劑、栓劑或無菌注射溶液劑的形式配制。在制劑中，可使用常用的稀釋劑或者賦形劑，如填料、膨脹劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑和表面活性劑。關(guān)于藥物組合物，用于口服的固體制劑可以是片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑或膠囊劑。固體制劑可以進(jìn)一步包括賦形劑。這種賦形劑可為例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖或者明膠。此外，所述固體制劑還可包括潤滑劑，例如硬脂酸鎂或者滑石。關(guān)于藥物組合物，用于口服的液體制劑可為混懸劑、溶液劑、乳劑或者糖漿劑。所述液體制劑可包含水或者液體石蠟。所述液體制劑可包含賦形劑，例如濕潤劑、增甜劑、空氣清新劑或者防腐劑。關(guān)于藥物組合物，用于腸胃外給藥的制劑可以是無菌水溶液、非水溶液、混懸劑、乳劑、凍干劑或栓劑。非水溶液或者混懸劑可包含植物油或者酯。植物油可包括例如丙二醇、聚乙二醇或者橄欖油。酯可包括例如油酸乙酯。栓劑的基質(zhì)可為witepsol、macrogol、tween61、可可紙(cacaopaper)、月桂精或者甘油明膠。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了預(yù)防或者治療癌癥的方法，所述方法包括將用于預(yù)防或者治療癌癥的藥物組合物給藥于個(gè)體，所述藥物組合物包含肽化合物或者所述肽化合物的異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽，所述肽化合物包含脂肽和苯甲酮。所述脂肽、所述苯甲酮、所述肽化合物、所述異構(gòu)體、所述衍生物、所述藥學(xué)上可接受的鹽、癌癥、預(yù)防、治療和藥物組合物與上述相同。個(gè)體可以是哺乳動(dòng)物，包括大鼠、小鼠、狗、牛、猴和人。所述肽化合物的優(yōu)選劑量根據(jù)患者的狀況和體重、疾病程度、藥物形式和給藥途徑及時(shí)間而變化，但可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員進(jìn)行適當(dāng)選擇。然而，所述肽化合物的給藥量例如可為約0.0001mg/kg至約100mg/kg或者約0.001mg/kg至約100mg/kg，每天一次或者數(shù)次?；诳偨M合物的總重量，所述肽化合物在藥物組合物中的含量可為約0.0001wt％至約10wt％或者約0.001wt％至約1wt％。所述肽化合物的藥物劑型可為所述肽化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的形式。所述肽化合物可單獨(dú)使用或者與其它藥物活性化合物組合使用。藥物組合物可以以各種途徑給予哺乳動(dòng)物，所述哺乳動(dòng)物包括大鼠、小鼠、狗、牛、馬、猴和人。給藥方法可以是例如口服、直腸或靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、宮內(nèi)或腦室內(nèi)注射。所述方法還可包括將抗癌藥物給藥于個(gè)體。所述肽化合物、其異構(gòu)體、衍生物或者藥學(xué)上可接受的鹽可與所述抗癌藥物同時(shí)、單獨(dú)或者順序給藥。例如，可以在將肽化合物或肽化合物的異構(gòu)體，衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽給予個(gè)體后，再向個(gè)體施用抗癌藥。以下，參照所附的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的說明。然而，這些實(shí)施例僅用于說明的目的，并且不應(yīng)被解釋為以任何方式限制本發(fā)明構(gòu)思的范圍。實(shí)施例1.asperphenina和asperpheninb的分離和鑒別1-1.分離曲霉屬(曲霉屬)的菌株f452為了篩選產(chǎn)生具有抗癌活性的物質(zhì)的菌株，從熱帶海洋沉積物中分離菌株f452。分離菌株f452的全基因組，并使用聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)克隆18s核糖體dna序列。分析18s核糖體dna的核酸序列(seqidno:1)。作為核酸序列分析的結(jié)果，所述菌株f452被鑒定為與花斑曲霉(aspergillusversicolor)系統(tǒng)性相似的新菌株。所述菌株f452被命名為曲霉屬的菌株f452，然后于2014年10月13日(登記號(hào)：kctc12688bp)存放在保藏機(jī)構(gòu)。1-2.培養(yǎng)曲霉屬的菌株f452將所述曲霉屬的菌株f452在無菌的ypg固體培養(yǎng)基(每1l蒸餾水含5g酵母提取物、5g胨、10g葡萄糖、16g瓊脂，和24.8ginstant(aquariumsystems))中培養(yǎng)，然后在27℃的溫度進(jìn)行數(shù)天的原代培養(yǎng)。將在原代培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的菌株f452在無菌的ypg液體培養(yǎng)基(每1l蒸餾水含5g酵母提取物、5g胨、10g葡萄糖，和24.8ginstant(aquariumsystems))中培養(yǎng)，然后在27℃的溫度進(jìn)行7天的次級(jí)培養(yǎng)，同時(shí)以150rpm搖晃。將10ml次級(jí)培養(yǎng)物在固體大米培養(yǎng)基(每500ml蒸餾水含200g大米(organicaco.,ltd.,icheonrice,gyeonggi-do)、2.5g酵母提取物、2.5g胨、12.4ginstant(aquariumsystems))中培養(yǎng)，然后在27℃的溫度進(jìn)行6周的三代培養(yǎng)。1-3.asperphenina和asperpheninb的分離和純化得到三代培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基(在實(shí)施例1-2中在其中培養(yǎng)了菌株f452)，然后將每100g得到的固體培養(yǎng)基在1l乙酸乙酯(daejungchemicals&metalsco.,ltd.)浸漬1天。將該操作一共重復(fù)三次。將由此得到的乙酸乙酯通過濾紙(advantec)過濾，將濾液減壓，由此除去作為溶劑的乙酸乙酯。重復(fù)這種操作，得到25g粗萃取物。向粗萃取物添加200ml甲醇(daejungchemicals&metalsco.,ltd.)，然后將甲醇層減壓，由此得到11.4g甲醇萃取物。根據(jù)反相色譜法(merck,c18,700g,反相)，將由此得到的甲醇萃取物分成8個(gè)級(jí)分。在5個(gè)級(jí)分中使用的洗脫劑通過以下方法使用：從以60:40的體積比混合的水/乙腈(burdick&jackson)溶液每次減少5％的水。使用100％甲醇(daejungchemicals&metalsco.,ltd.)、丙酮(daejungchemicals&metalsco.,ltd.)和乙酸乙酯(daejungchemicals&metalsco.,ltd.)拆分最終級(jí)分，由此得到各級(jí)分。根據(jù)液體色譜(lc)-質(zhì)譜(ms)并基于氫核磁共振譜，對(duì)使用以50:50的體積比混合的水/乙腈溶液拆分的級(jí)分3進(jìn)行分析。使用了agilent1200serieslc(agilenttechnologies)和6130seriesms的lc/ms被用來鑒別級(jí)分的組成。在這里，使用由thermo-finnigancompany制造的ltq-orbitrapesi-ms質(zhì)譜儀得到質(zhì)譜，其以質(zhì)荷比(m/z)形式表示。根據(jù)對(duì)lc-ms和氫核磁共振譜的分析，已經(jīng)證實(shí)，所述菌株的培養(yǎng)基含有新的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其被命名為asperphenin。使用具有折射率(ri)檢測(cè)器(shodex)的c18反相半制備性hplc(粒子直徑為5μm，250mmx10mm(長度x粒子內(nèi)徑)，洗脫速率為2ml/min)將級(jí)分3分離。用于分離的移動(dòng)相為以70:30的體積比混合的水/甲醇溶液，且進(jìn)行反相半制備性hplc達(dá)約一個(gè)半小時(shí)。因此，得到50.0mgasperphenina和46.0mgasperpheninb。1-4.asperphenina和asperpheninb的物理化學(xué)表征分析asperphenina和asperpheninb呈淡黃色，在室溫穩(wěn)定，并且良好地溶解在溫和有機(jī)溶劑(moderateorganicsolvent)如甲醇和丙酮中?；诤舜殴舱褡V、紅外和紫外光譜數(shù)據(jù)、旋光粉末和高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)測(cè)定asperphenina和asperpheninb的結(jié)構(gòu)。使用由brukercompany制造的500mhznmr并以dmso-d6作為溶劑得到核磁共振譜(1hnmr,13cnmr)。使用由thermo-finnigancompany制造的ltq-orbitrapesi-ms質(zhì)譜儀得到質(zhì)譜，并且以質(zhì)荷比(m/z)形式表示。使用由jascocompany制造的ft-ir-4200光譜儀得到紅外光譜。使用由hitachicompany制造的u-3010uv/vis光譜儀得到紫外光譜。使用由jascocompany制造的p-1020旋光計(jì)得到旋光粉末。通過核磁共振譜確定的asperphenina和asperpheninb中每個(gè)的結(jié)構(gòu)定位如下面在表1和2中所示。[asperphenina](1)分子式：c42h61n5o11(2)分子量：811(3)顏色：淡黃色(4)旋光粉末：-24.7(c1.0,甲醇,25℃)(5)紅外吸收帶(純)：3309,1671波數(shù)(6)1h-nmr(dmso-d6,600mhz)：見表1(7)13c-nmr(dmso-d6,150mhz)：見表1[表1]asperphenina的核磁共振譜的化學(xué)位移值[asperpheninb](1)分子式：c42h61n5o11(2)分子量：811(3)顏色：淡黃色(4)旋光粉末：-18.4(c1.0,甲醇,25℃)(5)紅外吸收帶(純)：3309,1671波數(shù)(6)1h-nmr(dmso-d6,600mhz)：見表2(7)13c-nmr(dmso-d6,150mhz)：見表2[表2]asperpheninb的核磁共振譜的化學(xué)位移值根據(jù)核磁共振譜分析的asperphenina和asperpheninb各自的結(jié)構(gòu)通過下面的化學(xué)式表示。asperphenina:asperpheninb:實(shí)施例2.asperphenina和asperpheninb的抗癌活性2-1.鑒別asperphenina和asperpheninb的抗癌活性關(guān)于肺癌細(xì)胞系a549(koreancelllinebank)、結(jié)腸癌細(xì)胞系hct116(atcc)、胃癌細(xì)胞系snu638(koreancelllinebank)、肝癌細(xì)胞系sk-hep-1(koreancelllinebank)，和乳腺癌細(xì)胞系mda-mb-231(koreancelllinebank)，使用硫氰酸胺b(srb)測(cè)定(其為測(cè)量細(xì)胞生存的方法)測(cè)量asperphenin的細(xì)胞凋亡效果。具體地，在96孔微量培養(yǎng)板的每一孔中培育濃度為3.5x104個(gè)細(xì)胞/ml的190μl細(xì)胞懸浮液。將0.8μm、4μm、20μm或者100μmasperphenin添加至細(xì)胞培養(yǎng)基，并在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)72小時(shí)。在培育之后，將50μl50％(v/v)三氯乙酸溶液(sigmaaldrich)添加至每一孔，然后在4℃的溫度培育30分鐘，由此將細(xì)胞固定至三氯乙酸。將固定的細(xì)胞用水洗滌五次，然后在空氣中干燥。接下來，將含有1％(v/v)乙酸(duksan)的80μl0.4％(w/v)srb水溶液(sigmaaldrich)添加至每一孔中，在室溫培育1小時(shí)以使其中的細(xì)胞染色，并將染色的細(xì)胞用水洗滌并干燥。通過將200μl10mmtris(ph10.0)(sigmaaldrich)添加至每一孔，將細(xì)胞溶解，然后通過在515nm測(cè)量其吸光度來計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)目?；诨罴?xì)胞的數(shù)目計(jì)算將細(xì)胞生長抑制至50％的化合物濃度，即，50％抑制濃度(ic50)，并將結(jié)果在表3中示出。在這里，使用依托泊甙(sigmaaldrich)作為陽性對(duì)照。[表3]asperphenina和asperpheninb的細(xì)胞生長抑制濃度(ic50,μm)a549hct116snu638sk-hep-1mda-mb-231asperphenina14.61.75.82.33.1asperpheninb41.82.611.73.06.0依托泊甙0.71.90.80.610.6如表3中所示，asperphenina針對(duì)肺癌、結(jié)腸癌、胃癌和乳腺癌的細(xì)胞系呈現(xiàn)強(qiáng)的細(xì)胞抑制效果。asperpheninb針對(duì)除了細(xì)胞系a549以外的結(jié)腸癌、胃癌、肝癌和乳腺癌的細(xì)胞系呈現(xiàn)強(qiáng)的細(xì)胞抑制效果。具體地，與作為陽性對(duì)照的依托泊甙相比，asperphenina和asperpheninb針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系hct116均呈現(xiàn)類似抗癌活性或者較好的抗癌活性。2-2.鑒定asperpheninb針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系的抗癌活性如表3中所示，已經(jīng)證實(shí)是否asperpheninb不僅針對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系hct116具有細(xì)胞生長抑制效果，而且對(duì)其它結(jié)腸癌細(xì)胞系也具有細(xì)胞生長抑制效果。如實(shí)施例2-1中所述，由結(jié)腸癌細(xì)胞系hct116(atcc)、hct15(koreancelllinebank)、ls174t(koreancelllinebank)、rko(atcc)和sw480(atcc)計(jì)算細(xì)胞生長抑制濃度(ic50,μm)，且結(jié)果在表4中示出。在這里，使用紫杉醇(sigmaaldrich)作為陽性對(duì)照。[表4]asperpheninb針對(duì)癌細(xì)胞的生長抑制值(ic50)hct15hct116ls174trkosw480asperpheninb(μm)7.204.051.841.1731.35紫杉醇(nm)>1000.420.460.21>100如表4中所示，除了細(xì)胞系sw480，asperpheninb強(qiáng)烈抑制4個(gè)結(jié)腸癌細(xì)胞系的細(xì)胞生長，并且更具體地，asperpheninb針對(duì)細(xì)胞系rko呈現(xiàn)最強(qiáng)抑制效果。2-3.測(cè)量由asperpheninb導(dǎo)致的結(jié)腸細(xì)胞系的細(xì)胞周期變化通過流式細(xì)胞儀證實(shí)了asperpheninb對(duì)于結(jié)腸癌細(xì)胞系rko的細(xì)胞周期的影響。將rko細(xì)胞(atcc)在含有10％(v/v)fbs的培養(yǎng)基中稀釋至1x105個(gè)細(xì)胞/ml，然后在60mm培養(yǎng)皿中培育。將培育的細(xì)胞在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)約24小時(shí)。將培養(yǎng)的細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)洗滌一次，并將所述培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基替代。將終濃度為0.625μm、1.25μm、2.5μm、5μm或者10μm的asperpheninb添加至培養(yǎng)的細(xì)胞，然后將細(xì)胞在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)。在一段時(shí)間之后，收集附著至培養(yǎng)皿的細(xì)胞和未附著至培養(yǎng)基的細(xì)胞。將收集的細(xì)胞用pbs洗滌一次，然后用1ml冷的70％(v/v)乙醇洗滌。將細(xì)胞在4℃的溫度培育約12小時(shí)以固定細(xì)胞。在除去70％(v/v)乙醇之后，將固定的細(xì)胞用pbs洗滌一次。將濃度為50μg/ml的500μlrnasea(sigmaaldrich)添加至細(xì)胞，并將細(xì)胞在室溫培育約30分鐘。將終濃度為50μg/ml的碘化丙啶(pi)添加至細(xì)胞，然后將細(xì)胞在室溫在反應(yīng)物呈遮光狀態(tài)的條件下培育約30分鐘。將用pi染色的細(xì)胞通過使用bdfacscalibur流式細(xì)胞儀(由bdbiosciences制造)進(jìn)行細(xì)胞周期分析?；诹魇郊?xì)胞儀的結(jié)果，計(jì)算在sub-g1、g0/g1、s和g2/m階段的細(xì)胞比率。在這里，使用未添加asperpheninb的細(xì)胞作為陰性對(duì)照。當(dāng)將rko細(xì)胞在asperpheninb的存在下培育48小時(shí)時(shí)，在圖3a和表5中示出取決于asperpheninb濃度的細(xì)胞比率(％)。當(dāng)將rko細(xì)胞在濃度為2.5μm和5μm的asperpheninb的存在下培育時(shí)，在圖3b和3c以及表6中示出取決于培育時(shí)間的細(xì)胞比率(％)。[表5][表6]如圖3a和表5中所示，在將rko細(xì)胞和asperpheninb培育48小時(shí)的情況中，與對(duì)照相比，在sub-g1階段的細(xì)胞隨asperphenin的濃度增加，而在g0/g1和s階段的細(xì)胞隨asperphenin的濃度減少。相比于用低濃度asperpheninb處理的對(duì)照，在g2/m階段的細(xì)胞增加，并且相比于用高濃度asperpheninb處理的對(duì)照，在g2/m階段的細(xì)胞減少。此外，如圖3b和3c和表6中所示，在sub-g1和g2/m階段的細(xì)胞隨著asperpheninb的處理時(shí)間而改變。在用濃度為2.5μm或者5μm的asperpheninb處理約24小時(shí)的情況下，在g2/m階段的細(xì)胞與對(duì)照相比增加。在濃度為2.5μm或者5μm的asperpheninb被處理約48小時(shí)的情況下，在g2/m階段的細(xì)胞與用濃度為2.5μm或者5μm的asperpheninb處理約24小時(shí)的情況相比減少。在用asperpheninb處理0至24小時(shí)期間未發(fā)生變化的sub-g1階段細(xì)胞比率增加。已經(jīng)證實(shí)，直到用asperpheninb處理24小時(shí)，在g2/m階段中的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞周期停滯，但是在用asperpheninb處理48小時(shí)之后，誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。2-4.測(cè)量由asperpheninb誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在細(xì)胞系rko中使用膜聯(lián)蛋白v-fitc細(xì)胞凋亡測(cè)量試劑盒(由dpharmingen制造)證實(shí)了由asperpheninb導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡過程。如實(shí)施例2-3中所述，將濃度為0.625μm、1.25μm、2.5μm、5μm或者10μm的asperpheninb添加至rko細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)以得到細(xì)胞。將300μl1x結(jié)合緩沖液添加至所得細(xì)胞，并充分混合在一起。然后，將5μl膜聯(lián)蛋白v和5μlpi添加至100μl細(xì)胞混合物，并在遮光狀態(tài)下在室溫反應(yīng)15分鐘。將400μl1x結(jié)合緩沖液添加至反應(yīng)物，使用facscalibur流式細(xì)胞儀(bdfacscalibur,bdbiosciences)分析細(xì)胞凋亡。基于流式細(xì)胞儀的結(jié)果，計(jì)算未染色細(xì)胞(即，活細(xì)胞)、被膜聯(lián)蛋白v染色的細(xì)胞(即，在早期階段凋亡的細(xì)胞)、被pi和膜聯(lián)蛋白v兩者染色的細(xì)胞(即，在晚期階段凋亡的細(xì)胞或者壞死的細(xì)胞)或者僅被pi染色的細(xì)胞(即，壞死的細(xì)胞)的比率。作為陰性對(duì)照，使用未添加asperpheninb的細(xì)胞。當(dāng)將rko細(xì)胞在asperpheninb的存在下培育48小時(shí)時(shí)，在圖4中示出了取決于asperpheninb的濃度的細(xì)胞比率(％)。如圖4中所示，與對(duì)照的比率相比，早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡或者壞死的細(xì)胞的比率增加。在這里，與對(duì)照的比率相比，壞死細(xì)胞的比率增加。由此證實(shí)，asperpheninb誘導(dǎo)rko結(jié)腸癌細(xì)胞系的凋亡和壞死。2-5.評(píng)價(jià)asperpheninb對(duì)于細(xì)胞周期相關(guān)蛋白和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響如實(shí)施例2-3中所述，按以下方式得到細(xì)胞：將濃度為0.625μm、1.25μm、2.5μm、5μm或者10μm的asperpheninb添加至rko細(xì)胞，然后培養(yǎng)48小時(shí)。然而，按以下方式得到細(xì)胞：將濃度為5μm的asperpheninb添加至rko細(xì)胞，然后培養(yǎng)0至48小時(shí)。然后，從所得細(xì)胞得到蛋白質(zhì)。關(guān)于細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，使用抗-p-細(xì)胞周期蛋白b1(ser147)抗體(cellsignalingtechnology)、抗-細(xì)胞周期蛋白b1抗體(santacruz)、抗-p-cdc2(tyr15)抗體(cellsignalingtechnology)、抗-cdc2抗體(santacruz)，和抗-β-肌動(dòng)蛋白抗體(santacruz)對(duì)其境內(nèi)性免疫印跡。通過免疫印跡得到的圖像在圖5a和5b中示出。如圖5a中所示，當(dāng)將rko細(xì)胞在asperpheninb的存在下培育48小時(shí)時(shí)，非活性p-cdc2(tyr15)蛋白的表達(dá)以濃度依賴性方式增加。在用2.5μmasperpheninb處理的細(xì)胞中，非活性p-細(xì)胞周期蛋白b1(ser147)蛋白的表達(dá)增加。在用5μm和10μmasperpheninb處理的細(xì)胞中，p-細(xì)胞周期蛋白b1(ser147)蛋白和細(xì)胞周期蛋白b1蛋白的表達(dá)減少。此外，如圖5b中所示，當(dāng)將細(xì)胞用5μmasperpheninb處理時(shí)，p-cdc2(tyr15)蛋白的表達(dá)以時(shí)間依賴性方式增加，且p-細(xì)胞周期蛋白b1(ser147)的表達(dá)在約24小時(shí)時(shí)最高。由此證實(shí)，asperpheninb在rko結(jié)腸癌細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)因子的表達(dá)。此外，關(guān)于細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，使用抗-atm抗體(cellsignalingtechnology)、抗-p-chk(thr68)抗體(cellsignalingtechnology)、抗-chk抗體(cellsignalingtechnology)、抗-p-h2ax抗體(cellsignalingtechnology)、抗-p53抗體(santacruz)、抗-bax抗體(santacruz)、抗-bid抗體(cellsignalingtechnology)、抗-半胱天冬酶-8抗體(cellsignalingtechnology)、抗-半胱天冬酶-3抗體(cellsignalingtechnology)、抗-半胱天冬酶-9抗體(cellsignalingtechnology)、抗-裂解的parp抗體(bdbiosciences)，和抗-β-肌動(dòng)蛋白抗體(santacruz)進(jìn)行免疫印跡。通過免疫印跡得到的圖像在圖6a和6b中示出。如圖6a中所示，當(dāng)將rko細(xì)胞在asperpheninb的存在下培育48小時(shí)時(shí)，atm蛋白的表達(dá)以濃度依賴性方式增加，而chk2和h2ax(其為atm蛋白的亞調(diào)節(jié)因子)被磷酸化，從而被活化。p53蛋白的表達(dá)以濃度依賴性方式增加，從而導(dǎo)致bax表達(dá)增加。此外，asperpheninb誘導(dǎo)了聚(adp-核糖)聚合酶(parp)(其為bid、半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-3的底物)的裂解。如圖6b中所示，當(dāng)將細(xì)胞用5μmasperpheninb處理時(shí)，細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)蛋白和標(biāo)志蛋白如p-chk2(thr68)、p-h2ax(ser139)、裂解的半胱天冬酶-8、裂解的半胱天冬酶-9、裂解的半胱天冬酶-3和parp的表達(dá)在被處理48小時(shí)的細(xì)胞組中增加。p53和bax的表達(dá)以時(shí)間依賴性方式增加。因此證實(shí)，asperpheninb調(diào)節(jié)rko結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的表達(dá)。2-6.由asperpheninb導(dǎo)致的活性氧(ros)的產(chǎn)生ros能夠在細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，因此，檢查了是否通過asperpheninb在細(xì)胞中產(chǎn)生了ros。具體地，如實(shí)施例2-3中所述，將濃度為2.5μm、5μm或者10μm的asperpheninb添加至rko細(xì)胞。在將rko細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)之后，收集細(xì)胞。此外，制備細(xì)胞組作為對(duì)比組，其中將5mmn-乙?；腚装彼?nac)(sigmaaldrich)(其為抗氧化劑)添加至5μm和10μmasperpheninb中，而將其中不含asperpheninb和nac的細(xì)胞組作為對(duì)照。然后，將終濃度為20μm的2',7'-二氯熒光素二乙酸鹽(dcfh-da)(sigmaaldrich)添加至細(xì)胞培養(yǎng)基，然后在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)30分鐘。收集附著至細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞和未附著至細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞兩者，用冷的pbs洗滌兩次，然后再次懸浮在1mlpbs中以通過使用bdfacscalibur流式細(xì)胞儀(由bdbiosciences制造)測(cè)量2',7'-二氯熒光素(dcf)的強(qiáng)度?；赿cf的強(qiáng)度，計(jì)算產(chǎn)生ros的細(xì)胞的比率，其結(jié)果在表7中示出。[表7]藥物產(chǎn)生ros的細(xì)胞的比率無藥物處理(對(duì)照)5.95％2.5μmasperpheninb8.14％5μmasperpheninb13.86％10μmasperpheninb14.26％5μmasperpheninb+5mmnac1.41％10μmasperpheninb+5mmnac2.55％如表7中所示，當(dāng)將rko細(xì)胞在asperpheninb的存在下培育24小時(shí)時(shí)，相比于對(duì)照中ros的產(chǎn)量，ros的產(chǎn)量增加約2.4倍。然而，由asperpheninb導(dǎo)致的ros產(chǎn)生被nac(其為抗氧化劑)抑制。由此證實(shí)，asperpheninb在rko結(jié)腸癌細(xì)胞中誘導(dǎo)ros產(chǎn)生。2-7.asperpheninb與其它抗癌藥物組合的給藥體外檢查asperpheninb與其它抗癌藥物組合給藥的效果。將在含10％(v/v)fbs的培養(yǎng)基中稀釋的rko細(xì)胞在96孔微量培養(yǎng)板的每一孔中培育，使得每一孔包括7x103個(gè)細(xì)胞，然后將細(xì)胞在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)約24小時(shí)。在所述含10％(v/v)fbs的培養(yǎng)基中，將依立替康(sigmaaldrich)、5-氟尿嘧啶(sigmaaldrich)或者吉西他濱(sigmaaldrich)與asperpheninb以1:1的比率混合，然后將混合物添加至培養(yǎng)的細(xì)胞。然后，將細(xì)胞在37℃的溫度在5％co2的條件下培養(yǎng)48小時(shí)。細(xì)胞生存根據(jù)srb測(cè)定測(cè)得，并將測(cè)得的細(xì)胞生存結(jié)果在圖7a至7c中示出。圖7a示出在僅使用濃度為1.25μm至10μm的依立替康的情況中(●)和在使用依立替康和2.5μmasperpheninb的組合的情況中(■)的細(xì)胞生存(％)。圖7b示出在僅使用濃度為1nm至100nm的吉西他濱的情況中(●)或者在使用吉西他濱和8μmasperpheninb的組合的情況中(■)的細(xì)胞生存(％)。圖7c示出在使用濃度為0.1μm至10μm的5-氟尿嘧啶(●)或者5-氟尿嘧啶和8μmasperpheninb的組合(■)的情況中的細(xì)胞生存(％)。此外，組合給藥的效果根據(jù)方程1測(cè)得，其結(jié)果在表8中示出。[方程1]組合給藥的效果＝d1/(dx)1+d2/(dx)2d1：在組合給藥中具有預(yù)期效果的asperpheninb的濃度d2：在組合給藥中具有預(yù)期效果的其它抗癌藥物的濃度(dx)1：在僅給藥asperpheninb中具有預(yù)期效果的asperpheninb的濃度(dx)2：在僅給藥其它抗癌藥物中具有預(yù)期效果的其它抗癌藥物的濃度當(dāng)計(jì)算的組合給藥效果為<1、＝1和>1時(shí)，分別意味著具有協(xié)同效果、加和效果和拮抗效果。[表8]如圖7a至7c和表8中所示，與單獨(dú)給藥依立替康、5-氟尿嘧啶或者吉西他濱的情況相比，在與asperpheninb組合給藥的情況下細(xì)胞生長抑制的效果增加。2-8.在腫瘤異種移植小鼠模型中驗(yàn)證asperpheninb的抗癌效果asperpheninb的抗癌效果在移植了人結(jié)腸癌細(xì)胞系的腫瘤異種移植小鼠模型中被驗(yàn)證。具體地，將rko細(xì)胞以3.5x106個(gè)細(xì)胞/150μl的濃度皮下注射至裸鼠(centrallab.aminolinc.,無毛小鼠，其無胸腺并且在出生時(shí)具有干燥胡須)的右肋。在注射rko細(xì)胞14天之后，當(dāng)腫瘤尺寸達(dá)到60mm3時(shí)，將4mg/kg或者8mg/kgasperpheninb進(jìn)行腹膜內(nèi)給藥，一周三次，即，總共21天(n＝5)。以3至4天的間隔，使用數(shù)字卡尺測(cè)量腫瘤尺寸21天。在這里，使用未給藥asperpheninb的裸鼠(n＝5)作為對(duì)照。腫瘤體積根據(jù)方程2計(jì)算，以及腫瘤生長抑制比率根據(jù)方程3基于計(jì)算的腫瘤體積計(jì)算。[方程2]腫瘤體積(mm3)＝(長度)×(寬度)×(高度)×π/6[方程3]腫瘤生長抑制比率(％)＝[1-(asperpheninb治療組中的最終平均腫瘤體積)/(對(duì)照中的最終平均腫瘤體積)]×100在給藥asperpheninb之后，在圖8中示出取決于天數(shù)的小鼠的腫瘤體積(mm3)(●：對(duì)照；■：給藥4mg/kgasperpheninb；▲：給藥8mg/kgasperpheninb；*：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.005)，以及在表9中示出計(jì)算的腫瘤生長抑制比率。[表9]給藥組4mg/kgasperpheninb8mg/kgasperpheninb抑制比率(％)38.968.7如表8和9中所示，在給藥asperpheninb的組中觀察到化合物濃度依賴性方式的對(duì)腫瘤生長的抑制。保存機(jī)構(gòu)的名稱：微生物資源中心(國際)登記號(hào)：kctc12688bp登記日期：2014年10月13日序列表<110>首爾大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)<120>新的肽化合物、其制備方法及其用途<130>gx-050805-pct<160>1<170>kopatentin2.0<210>1<211>572<212>dna<213>人工序列<220><223>曲霉屬f452的18srdna<400>1tccgtaggtgaacctgcggaaggatcattactgagtgcgggctgcctccgggcgcccaac60ctcccacccgtgactacctaacactgttgcttcggcggggagccctctcgggggcgagcc120gccggggactactgaacttcatgcctgagagtgatgcagtctgagtctgaatatacaatc180agtcaaaactttcaacaatggatctcttggttccggcatcgatgaagaacgcagcgaact240gcgataagtaatgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgagtctttgaacgcacattgc300gccccctggcattccggggggcatgcctgtccgagcgtcattgctgcccatcaagcccgg360cttgtgtgttgggtcgtcgtcccccccccgggggacgggcccgaaaggcagcggcggcac420cgtgtccggtcctcgagcgtatggggctttgtcacccgctcgatttagggccggccgggc480gccagccgacgtctccaaccattttttcttcaggttgacctcggatcaggtagggatacc540cgctgaacttaagcatatcaataagcggagga572當(dāng)前第1頁12