本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及新型五環(huán)三萜類衍生物及其制備方法與在制藥中的用途，尤其涉及五環(huán)三萜類衍生物作為cetp抑制劑在預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化及高脂血癥中的用途。

背景技術(shù)：

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，as)易發(fā)生在大、中動(dòng)脈，如心臟血管，引起供血組織缺血缺氧，出現(xiàn)如冠心病、心肌梗塞以及外周血管病等臨床癥狀和體征，它是產(chǎn)生心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。高脂血癥是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和危及人類健康的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(chd)的主要危險(xiǎn)因素之一，降低血脂可以降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生率。

大量流行病學(xué)研究表明，as的發(fā)生與血漿中高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)水平呈負(fù)相關(guān)，而與血漿中低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)以及極低密度脂蛋白膽固醇(vldl-c)水平呈正相關(guān)(n.engl.j.med..1989，321：1311；circulation1992，85：2025)。hdl一方面可以抑制膽固醇酯在巨噬細(xì)胞內(nèi)累積，阻止其轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞；另一方面它可以將動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)泡沫細(xì)胞里膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟分解，從而促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(rct)過程，防止as的形成。

1985年，koizumi等發(fā)現(xiàn)一個(gè)因基因突變至膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(cetp)缺乏的家系，hdl水平升高，同時(shí)冠心病發(fā)病率明顯下降，并且發(fā)現(xiàn)如果抑制cetp活性，能有效提高血漿內(nèi)hdl-c的水平，因此抑制cetp活性成為治療動(dòng)脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)。cetp是由476個(gè)氨基酸組成的一種疏水性的血漿糖蛋白，它是rct過程中的關(guān)鍵酶之一，將膽固醇酯(ce)由抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的hdl顆粒轉(zhuǎn)運(yùn)至促動(dòng)脈粥樣硬化形成的ldl及vldl顆粒，同時(shí)將甘油三酯從ldl及vldl逆向轉(zhuǎn)運(yùn)給hdl，凈效應(yīng)是提高了ldl-c水平，降低了hdl-c水平(j.lipidres.1993，34：1225)。此外，cetp也介導(dǎo)膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)至巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞，因此是一個(gè)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因子。所以當(dāng)cetp受到抑制時(shí)，apoa-i和apoa-ii的分解代謝受阻，hdl水平升高，加速了膽固醇通過hdl向肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)，降低了as及高脂血癥形成的風(fēng)險(xiǎn)。

自上20世紀(jì)90年代至今，輝瑞、羅氏、默克和禮來(lái)等大型制藥公司在開發(fā)以cetp為靶標(biāo)的降脂藥物領(lǐng)域展開了激烈競(jìng)爭(zhēng)，并報(bào)道了大量不同結(jié)構(gòu)類型的小分子cetp抑制劑，但到目前為止世界范圍內(nèi)還沒有一種cetp抑制劑成功上市，pfizer公司的torcetrapib由于 嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如頭痛、血壓升高及心血管毒性，且致死率高于對(duì)照組，其iii期臨床試驗(yàn)在2006年底被迫終止。而roche的dalcetrapib由于“缺乏有意義的臨床療效”，其iii期臨床試驗(yàn)在2012年終止。elililly公司的evacetrapib由于仍舊不能有效減少心腦血管不良事件發(fā)生于2015年10月終止iii期臨床試驗(yàn)。目前處在臨床三期試驗(yàn)階段的cetp抑制劑只有merck公司的anacetrapib，其結(jié)果預(yù)計(jì)在2017年內(nèi)完成，但其是否能真正改善的膽固醇水平、降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)仍然未知。因此，臨床上迫切需要開發(fā)安全、有效、可控的新型cetp小分子抑制劑。

綜上所述，cetp是高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的重要治療靶點(diǎn)，其抑制劑具有重要的開發(fā)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于設(shè)計(jì)、合成新型的含有五環(huán)三萜骨架的cetp抑制劑，以開發(fā)療效好、副作用小的抗高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化藥物。

本發(fā)明公開了一系列齊墩果酸或熊果酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，所述衍生物如通式i的化合物：

其中r¹為甲基或氫；r²為甲基或氫；r³為甲基或氫；

r⁴為氟、氯、溴、碘、三氟甲基或甲基；

r⁵為甲基、乙基、異丙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基或甲氧甲基；

r⁶為甲基、乙基、丙基、異丙基或叔丁基；

n＝1，2，3，4；

本發(fā)明通式i的化合物優(yōu)選r¹為甲基或氫；r²為甲基或氫；r³為甲基或氫；

r⁴為三氟甲基或甲基；r⁵為甲基、乙基、環(huán)丙基或甲氧甲基；r⁶為甲基、乙基、丙基或異丙基；n＝1，2，3，4；

本發(fā)明通式i的化合物更優(yōu)選r¹為甲基或氫；r²為甲基或氫；r³為甲基或氫；

本發(fā)明通式i的化合物優(yōu)選r⁴為三氟甲基；

本發(fā)明通式i的化合物更優(yōu)選r⁵為乙基；

本發(fā)明通式i的化合物更優(yōu)選r⁶為乙基；

本發(fā)明通式i的化合物更優(yōu)選n＝1，2，3。

本發(fā)明優(yōu)選的化合物如下：

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙酰基)氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸；

3β-(4-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸；

3β-(5-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸；

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙酰基)氧基-12-熊果烯-28-酸；

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基-12-熊果烯-28-酸；

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-12-熊果烯-28-酸。

本發(fā)明的另一目的是提供了一系列齊墩果酸或熊果酸衍生物式i化合物的制備方法，如下反應(yīng)式：

具體包括下列步驟

(1)式ii化合物與式v化合物在堿性條件下加熱，發(fā)生親核取代反應(yīng)，制得式iii化合 物；所采用的堿性溶劑選自吡啶、哌啶、n-甲基嗎啉、二異丙基乙胺、四甲基乙二胺，優(yōu)選吡啶；采用的溫度選自于60℃～200℃，優(yōu)選110℃～160℃；

(2)式iii化合物與式vi化合物縮合生成化合物iv；所采用的活化試劑選自草酰氯、氯化亞砜、羰基二咪唑、氯甲酸酯，優(yōu)選氯化亞砜；采用的溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、甲苯、1，2-二氯乙烷、乙腈、n，n-二甲基甲酰胺或二甲亞砜中的一種或多種的混合溶劑，優(yōu)選二氯甲烷；采用的溫度選自-20℃～60℃，優(yōu)選0℃～30℃；

(3)式iv化合物在適當(dāng)?shù)臈l件下脫除保護(hù)基；r⁷為羥基保護(hù)基，適當(dāng)?shù)牧u基保護(hù)基對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，包括芐基、對(duì)甲氧基芐基、芐氧羰基、苯甲酰基、甲基苯甲?；?duì)氯苯甲?；?、乙?；?、異丁?；?、甲磺酰基、對(duì)甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯甲基等，優(yōu)選r⁶為芐基；采用的溫度選自20℃～100℃，優(yōu)選溫度為25℃～50℃。

在上述反應(yīng)式中，r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶如上述式i化合物中所定義。

本發(fā)明的又一目的是提供了一系列齊墩果酸或熊果酸衍生物式i化合物在制藥中的用途。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明式i化合物對(duì)cetp具有較好的抑制效果，已達(dá)到納摩爾級(jí)別；其次，式i化合物的基本母核來(lái)源于天然產(chǎn)物中的五環(huán)三萜，原料價(jià)廉易得，在成藥的安全性上較普通的小分子化合物風(fēng)險(xiǎn)更小，具有更高的應(yīng)用開發(fā)價(jià)值。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以用于制備抗動(dòng)脈粥樣硬化或治療高脂血癥藥物。

本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管疾病的藥物組合物，其中含有治療有效量的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體。所述藥物組合物可以是普通片劑或膠囊、緩釋片劑或膠囊、控釋片劑或膠囊、顆粒劑、散劑、糖漿劑、口服液、注射劑等制劑學(xué)上常規(guī)的制劑形式。

附圖說明

圖1化合物i-5的核磁共振氫譜；

圖2所述衍生物通式i。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例具體說明本發(fā)明的內(nèi)容。在本發(fā)明中，以下所述的實(shí)施例是為了更好的闡述本發(fā)明，并不是用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-1)

步驟一

室溫下，將齊墩果酸芐酯ii-1(200mg)溶于無(wú)水甲苯(3ml)中，加入丙二酸環(huán)(亞)異丙酯v-1(78mg)，升溫至120℃，回流8小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，倒入水(20ml)中，乙酸乙酯(10mlx3)萃取水相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1)得淡黃色粘稠液體丙二酸齊墩果酸芐酯單酯(iii-1)106mg，收率46％。

步驟二

將化合物iii-1(100mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(1ml)備用；將中間體vi(58mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(44mg)，再將上述制得的化合物iii-1的酰氯溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)得淡黃色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸芐酯(iv-1)78mg，收率50％。

步驟三

將化合物iv-1(60mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(2ml)的混合溶劑中，加入20％氫氧化鈀/碳(12mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用乙酸乙酯(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得無(wú)色粘稠液體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙酰基)氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-1)33mg，收率61％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.67-7.64(m，1h)，7.61(s，1h)，7.51-7.49(m，1h)，7.43(s，1h)，5.28(s，1h)，5.13-5.11(m，1h)， 4.62-4.59(m，1h)，4.53-4.49(m，1h)，4.27-4.22(m，2h)，3.53-3.40(m，2h)，2.84-2.80(m，1h)，2.54-2.48(s，1h)，1.14(s，3h)，0.95(s，3h)，0.93(s，3h)，0.91(s，3h)，0.91(s，3h)，0.88(s，3h)。

實(shí)施例2

3β-(4-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-2)

步驟一

室溫下，將齊墩果酸芐酯ii-1(200mg)溶于無(wú)水吡啶(3ml)中，先后加入丁二酸酐v-2(180mg)與4-二甲氨基吡啶(45mg)，升溫至130℃，回流7小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，分別加水(20ml)與二氯甲烷(10ml)，先用1.0m鹽酸(10mlx2)洗滌，然后有機(jī)相依次用水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1)得白色固體丁二酸齊墩果酸芐酯單酯(iii-2)230mg，收率98％。

步驟二

將化合物iii-2(100mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(1ml)備用；將中間體vi(63mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(45mg)，再將上述制得的化合物iii-1的酰氯溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)得淡黃色固體3β-(4-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸芐酯(iv-2)103mg，收率67％。

步驟三

將化合物iv-2(100mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(2ml)的混合溶劑中，加入20％氫氧化鈀/碳(20mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?2小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用甲醇(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝80∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-2)(55mg)，收率60％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.59-7.56(m，1h)，7.49-7.48(m，2h)，6.17(d，j＝8.7hz，1h)，5.27(s，1h)，5.08-5.01(m，1h)，4.56-4.43(m，2h)，4.29-4.16(m，2h)，2.84-2.45(m，6h)，1.14(s，3h)，0.93(s，3h)，0.90(s，3h)，0.88(s，3h)，0.86(s，3h)，0.84(s，3h)，0.75(s，3h)。

實(shí)施例3

3β-(5-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-3)

步驟一

室溫下，將齊墩果酸芐酯ii-1(200mg)溶于無(wú)水吡啶(3ml)中，先后加入戊二酸酐v-3(208mg)與4-二甲氨基吡啶(45mg)，升溫至130℃，回流15小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，分別加水(20ml)與二氯甲烷(10ml)，先用1.0m鹽酸(10mlx2)洗滌，然后有機(jī)相依次用水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)得白色固體戊二酸齊墩果酸芐酯單酯(iii-3)222mg，收率92％。

步驟二

將化合物iii-3(82mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(1ml)備用；將中間體vi(50mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(36mg)，再將上述制得的化合物iii-3的酰氯 溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸芐酯(iv-3)74mg，收率60％。

步驟三

將化合物iv-3(75mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(1ml)的混合溶劑中，加入濕重10％鈀碳(15mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?0小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用甲醇(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)得3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊酰基)氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-3)50mg，收率74％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.60-7.58(m，1h)，7.49-7.46(m，1h)，7.40(s，1h)，5.98(d，j＝6.0hz，1h)，5.26(s，1h)，5.11-5.03(m，1h)，4.54-4.46(m，2h)，4.28-4.16(m，2h)，2.84-2.78(m，1h)，2.53-2.30(m，6h)，1.12(s，3h)，0.93(s，3h)，0.92(s，3h)，0.89(s，3h)，0.87(s，3h)，0.86(s，3h)，0.74(s，3h)。

實(shí)施例4

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙?；?氧基-12-熊果烯-28-酸(i-4)

步驟一

室溫下，將熊果酸芐酯ii-2(500mg)溶于無(wú)水甲苯(6ml)中，加入丙二酸環(huán)(亞)異丙酯v-1(263mg)，升溫至120℃，回流8小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，倒入水(20ml)中，乙酸乙酯(10mlx3)萃取水相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得 粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得淡黃色粘稠液體丙二酸熊果酸芐酯單酯(iii-4)520mg，收率89％。

步驟二

將化合物iii-4(185mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(2ml)備用；將中間體vi(102mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(74mg)，再將上述制得的化合物iii-4的酰氯溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?2小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)得淡黃色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙酰基)氧基-12-熊果烯-28-酸芐酯(iv-4)109mg，收率40％。

步驟三

將化合物iv-4(90mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(2ml)的混合溶劑中，加入20％氫氧化鈀/碳(15mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?2小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用甲醇(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-3-氧代丙?；?氧基-齊墩果烷-12-烯-28-酸(i-4)48mg，收率59％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.68-7.64(m，1h)，7.61(s，1h)，7.52-7.49(m，1h)，7.44(s，1h)，5.25(s，1h)，5.17-5.09(m，1h)，4.65-4.60(m，1h)，4.54-4.47(m，1h)，4.31-4.19(m，2h)，3.54-3.41(m，2h)，2.58-2.49(m，1h)，2.22-2.18(m，1h)，1.09(s，3h)，0.97(s，3h)，0.91(s，3h)，0.88(s，6h)，0.86(s，3h)，0.79(s，3h)。

實(shí)施例5

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁?；?氧基-12-熊果烯-28-酸(i-5)

步驟一

室溫下，將熊果酸芐酯ii-2(200mg)溶于無(wú)水吡啶(3ml)中，先后加入丁二酸酐v-2(180mg)與4-二甲氨基吡啶(45mg)，升溫至130℃，回流7小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，分別加水(20ml)與二氯甲烷(10ml)，先用1.0m鹽酸(10mlx2)洗滌，然后有機(jī)相依次用水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得白色固體丁二酸齊墩果酸芐酯單酯(iii-5)226mg，收率97％。

步驟二

將化合物iii-5(100mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(1ml)備用；將中間體vi(63mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(45mg)，再將上述制得的化合物iii-5的酰氯溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)氧基-12-熊果烯-28-酸芐酯(iv-5)108mg，收率70％。

步驟三

將化合物iv-5(100mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(2ml)的混合溶劑中，加入20％氫氧化鈀/碳(20mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?6小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用甲醇(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝100∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-4-氧代丁?；?氧基-12-熊果烯-28-酸(i-5)66mg，收率73％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.60-7.58(m，1h)，7.50-7.48(m，2h)，6.23(d，j＝9.0hz，1h，)，5.24(s，1h)，5.06-5.04(m，1h)，4.56-4.46(m， 2h)，4.29-4.13(m，2h)，2.76-2.60(m，4h)，2.54-2.45(m，1h)，2.20-2.17(m，1h)1.08(s，3h)，0.95(s，3h)，0.88(s，3h)，0.86(s，6h)，0.84(s，3h)，0.77(s，3h)。

實(shí)施例6

3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-12-熊果烯-28-酸(i-6)

步驟一

室溫下，將熊果酸芐酯ii-2(300mg)溶于無(wú)水吡啶(4ml)中，先后加入戊二酸酐v-3(310mg)與4-二甲氨基吡啶(67mg)，升溫至130℃，回流13小時(shí)；將反應(yīng)液降至室溫，分別加水(20ml)與二氯甲烷(10ml)，先用1.0m鹽酸(10mlx2)洗滌，然后有機(jī)相依次用水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1)得白色固體戊二酸熊果酸芐酯單酯(iii-6)300mg，收率83％。

步驟二

將化合物iii-6(82mg)溶于干燥的氯化亞砜(2ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除反應(yīng)液中剩余的氯化亞砜，再溶于無(wú)水二氯甲烷(1ml)備用；將中間體vi(50mg)溶于無(wú)水二氯甲烷，將反應(yīng)液降至0℃，先加入三乙胺(36mg)，再將上述制得的化合物iii-6的酰氯溶液慢慢滴入反應(yīng)液，滴畢，移至室溫?cái)嚢?小時(shí)；向反應(yīng)液中加入5ml二氯甲烷，依次用1.0m鹽酸、飽和碳酸氫鈉、水以及飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干有機(jī)相得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-12-熊果烯-28-酸芐酯(iv-6)86mg，收率70％。

步驟三

將化合物iv-6(80mg)溶于甲醇(2ml)與四氫呋喃(1ml)的混合溶劑中，加入濕重10％鈀碳(15mg)，通入氫氣，室溫?cái)嚢?0小時(shí)；硅藻土過濾，濾餅分別用甲醇(5ml)與二氯甲烷(5ml)洗滌，蒸干濾液得粗品，經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得白色固體3β-(3-(((2r，4s)-1-(乙氧基羰基)-2-乙基-6-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氫喹啉-4-基)氨基)-5-氧代戊?；?氧基-12-熊果烯-28-酸(i-6)56mg，收率77％；¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.61-7.58(m，1h)，7.50-7.47(m，1h)，7.41(s，1h)，6.02(d，j＝9.0hz，1h)，5.23(s，1h)，5.11-5.04(m，1h)，4.54-4.47(m，2h)，4.28-4.16(m，2h)，2.50-2.37(m，6h)，2.19-2.16(m，1h)，1.07(s，3h)，0.94(s，6h)，0.86(s，3h)，0.85(s，6h)，0.76(s，3h)。

實(shí)施例7

體外cetp抑制活性藥效學(xué)試驗(yàn)

藥品：受試化合物(上述實(shí)施例制備)、對(duì)照藥mk-0859(4s，5r)-5-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-3-((4′-氟-5′-異丙基-2′-甲氧基-4-(三氟甲基)-[1，1′-二苯基]-2-基)甲基)-4-甲基惡唑烷-2-酮。

實(shí)驗(yàn)材料：膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白活性檢測(cè)試劑盒(roarcetprpactivityassaykit，catalog#rb-rpak)，重組人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(roarrecombinantcetp，rcetp，catalog#r8899)，96孔板(nunc-442587)，96孔微滴定透明板(greiner-655090)。

實(shí)驗(yàn)方法：cetp存在于正常人群的血漿和血清中，它將中性脂質(zhì)從hdl轉(zhuǎn)移至ldl以及vldl中，膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白活性檢測(cè)試劑盒中包含有一種帶有熒光自淬滅功能的中性脂質(zhì)分子；該脂質(zhì)分子可以被重組人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移至試劑盒中所包含的另一種受體分子上，這種受cetp介導(dǎo)的帶有熒光的脂質(zhì)分子的轉(zhuǎn)移過程導(dǎo)致了熒光強(qiáng)度的增加(exem＝465/535nm)；cetp抑制劑將使試劑盒中脂質(zhì)分子轉(zhuǎn)移到受體分子的過程受到抑制，因而熒光強(qiáng)度會(huì)減弱，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度，運(yùn)用graphpad軟件擬合出待測(cè)化合物對(duì)cetp的抑制率。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.重組人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白準(zhǔn)備：將rcetp用1x測(cè)試緩沖液調(diào)至蛋白濃度為80μg/ml；

2.化合物準(zhǔn)備：將所測(cè)化合物用100％dmso溶解配制成10mm的母液儲(chǔ)存，然后在96孔板上用dmso稀釋成8個(gè)滴定點(diǎn)；

3.測(cè)試方法按照cetp抑制劑篩選試劑盒與重組cetp蛋白使用指導(dǎo)說明進(jìn)行；

空白對(duì)照：4μl脂質(zhì)分子與4μl受體分子溶解在200μl的測(cè)試緩沖液中；

陽(yáng)性對(duì)照：4μl脂質(zhì)分子、4μl受體分子以及30ng人重組cetp蛋白溶解在200μl的測(cè)試緩沖液中；

測(cè)試板：4μl脂質(zhì)分子、4μl受體分子、30ng人重組cetp蛋白以及1μl待測(cè)化合物溶解 在200μl的測(cè)試緩沖液中；

4.將測(cè)試的96孔板在37℃的培養(yǎng)箱中孵育3個(gè)小時(shí)；

5.用熒光計(jì)檢測(cè)每個(gè)樣品的熒光增加的強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)：465nm；發(fā)射波長(zhǎng)：535nm)，通過扣除每組樣品中的空白組的熒光強(qiáng)度來(lái)確定測(cè)試組中的因轉(zhuǎn)移而增加的熒光強(qiáng)度。

6.通過graphpad軟件擬合出脂質(zhì)分子的濃度與熒光信號(hào)強(qiáng)度線性圖。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，計(jì)算待測(cè)化合物對(duì)cetp的ic50。

結(jié)果：通過化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)受試化合物對(duì)cetp的抑制活性，部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，受試化合物中部分化合物對(duì)cetp具有較好的抑制效果。

表1化合物抑制cetp作用

實(shí)施例8

片劑

將實(shí)施例14中制得的化合物i-5(50g)、羥丙甲基纖維素e(150g)、淀粉(200g)、聚維酮k30適量和硬脂酸鎂(1g)混合，制粒，壓片。