一種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及莜麥蛋白粉深加工的方法，具體涉及一種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]莜麥，學(xué)名為裸燕麥，為我國特有的糧食作物，也是山西的特色小雜糧，是世界公認(rèn)的營養(yǎng)價(jià)值很高的糧食作物之一，其蛋白含量高出玉米75 %，小麥66 %，比秈大米、粳大米分別高105.3 %和132.8 %，莜麥水溶性膳食纖維是小麥的3.5倍，玉米的1.4倍，粳米的7.0倍。莜麥具有多種保健功效，諸如降血脂降膽固醇、抗動脈粥樣硬化、控制和降低血糖、降低血壓、促進(jìn)兒童生長延緩老年人衰老的進(jìn)程，同時(shí)預(yù)防直腸癌、膽結(jié)石和靜脈曲張，提高血粘度和血小板聚集。這些功效和莜麥獨(dú)特的有效成分緊密相關(guān)，比如莜麥中亞油酸，蘆丁以及人們提到較多的莜麥中可溶性膳食纖維(主要存在于莜麥的麩皮中)。
[0003]我國人民在長期食用莜麥的歷史中發(fā)現(xiàn)，莜麥?zhǔn)且环N非常好的藥食同源的糧食作物，特別是在作為糖尿病人的食品，起到很好的作用。目前認(rèn)為莜麥能在糖尿病人食療起到很好保健作用的是其中的膳食纖維(莜麥粉中可溶性膳食纖維的降糖、降脂作用，中國糧油學(xué)報(bào)，1998,13(4): 37-39)。四氧嘧啶糖尿病小鼠模型試驗(yàn)，揭示與拜糖平一樣，莜麥多糖和蛋白均可維持血清中甘油三脂含量處于相對較低水平，莜麥多糖在降糖功效方面優(yōu)于蛋白，但在改善血清高密度脂蛋白含量上又差于莜麥蛋白與拜糖平。(莜麥中蛋白與多糖成分對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖、血脂影響比較，食品科技，2013，38 (I): 66-70)。和蛋白類產(chǎn)品相比，小分子量多肽產(chǎn)品，常常由于兼具多種生理功能比如抗氧化、降糖、降壓、抑制癌癥、抗菌等，加之相比蛋白吸收快，起效快等特點(diǎn)，成為開發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)。
[0004]目前莜麥產(chǎn)品多屬初級產(chǎn)品，大多只簡單作為一種糧食作物的食品開發(fā)，如莜麥餅干，莜麥片等。在莜麥蛋白深度加工利用方面基本處于停滯狀態(tài)。如何利用莜麥開發(fā)功能性食品或藥品，提升莜麥綜合利用價(jià)值，延伸高附加值產(chǎn)業(yè)鏈，在當(dāng)前具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法。
[0006]本發(fā)明技術(shù)方案如下:
[0007]—種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法，其特征在于包括以下步驟:
[0008](I)、將脫脂莜麥蛋白粉加入純凈水中，料液比為1:100-500，用IM鹽酸調(diào)pH值為1.0-3.0,按E/S = 1:50-100加入胃蛋白酶，在37°C下酶解l_4h，得到一次酶解液；
[0009](2)、將步驟(I)得到的一次酶解液，用IM NaoH調(diào)pH值為7.0-8.0，然后按E/S= 1:50-100分別加入胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、彈性蛋白酶，在37 °C下酶解I _4h，得到二次酶解液；
[0010](3)、將步驟(2)得到的二次酶解液，加溫至95°C，滅酶活15分鐘，噴霧干燥，即得到含有抑制α葡萄糖苷酶水解活性的多肽。
[0011]所述的胃蛋白酶的活力單位為3000-3500U/mg;彈性蛋白酶的活力單位為50U/mg;胰蛋白酶的活力單位為250U/mg;a-糜蛋白酶的活力單位為1200U/mg。
[0012]所述步驟(I)，步驟(2)中的酶與蛋白底物的比例(E/S)優(yōu)選為1:50。
[0013]本發(fā)明方法得到的莜麥降糖多肽分子量低于5000Da的多肽占80%以上，莜麥多肽產(chǎn)品具有抑制α葡萄糖苷酶水解活性，可在制備預(yù)防和治療糖尿病的藥物或保健品中應(yīng)用。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0015]1、本發(fā)明制備的多肽在體外具有抑制α葡萄糖苷酶水解活性，具有良好抑制多糖代謝的降糖保健功能。
[0016]2、本發(fā)明結(jié)合人體蛋白水解過程，設(shè)計(jì)酶解工藝，獲得特殊功效的多肽產(chǎn)品。
[0017]3、本發(fā)明制備的多肽產(chǎn)品，分子量控制在5000Da以下占整個(gè)產(chǎn)品的80 %以上含量。
[0018]4、本發(fā)明制備技術(shù)工藝簡單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品安全無毒副作用，可以用來開發(fā)保健品、食品添加劑以及醫(yī)藥中間體。
【附圖說明】
[0019]圖1為脫脂莜麥蛋白粉酶解前后的Tricine-SDS電泳檢測結(jié)果，其中:泳道I為蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn);泳道2為一次酶解后多肽產(chǎn)品；泳道3為二次酶解后多肽產(chǎn)品
[0020]圖2為莜麥脫脂蛋白、莜麥多糖、莜麥水解多肽、阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶活性的抑制比較
【具體實(shí)施方式】
[0021]下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
[0022]實(shí)施例1莜麥降糖多肽制備
[0023]稱取莜麥脫脂蛋白粉與純凈水按重量比1:500配料混合，充分?jǐn)嚢?，用IM鹽酸調(diào)節(jié)PH為1.5，然后以酶與底物(莜麥脫脂蛋白)質(zhì)量比為1:50加入胃蛋白酶，在37°C下保溫I小時(shí)，進(jìn)行酶解反應(yīng);然后將所得的酶解液用IM NaOH調(diào)節(jié)至pH 8.0;按酶與底物(莜麥脫脂蛋白)質(zhì)量比為1:50，分別加入胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、彈性蛋白酶，在37°C下二次酶解Ih;將二次酶解完畢后的多肽溶液，置于95°C水浴中滅活15min，獲得莜麥降糖多肽溶液。
[0024]分別取莜麥脫脂蛋白、一次酶解液、二次酶解液樣品，進(jìn)行Tricine-SDS檢測，結(jié)果如圖1。
[0025]實(shí)施例2莜麥多肽抑制α-葡萄糖苷酶活力的測定
[0026]α-葡萄糖苷酶的測活體系:0.5mL反應(yīng)體系中，底物pNP-a-GluHNitrophenyl-a-D-glucopyranosodide) 濃度為 3 X 10—4mol/L，還原性谷胱甘肽濃度為8.125 X 10—5mol/L，酶濃度為0.51]/^;37°(:準(zhǔn)確反應(yīng)101^11后，加入終止液(0.lmol/L Na2C03溶液)2.5mL，測定
A410nm ο
[0027]ct-葡萄糖苷酶活性單位定義:在pH 6.8，37°(:條件下，每分鐘釋放仏11101 PNP為一個(gè)酶活單位。
[0028]將實(shí)施例1制備的莜麥多肽與阿卡波糖(購置于四川綠葉寶光股份有限公司)、莜麥脫脂蛋白(莜麥中蛋白與多糖成分對四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖、血脂影響比較，食品科技，2013，38(1):66-70)、莜麥多糖(購置于寧夏宏德生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行對0-葡萄糖苷酶抑制活性測定，結(jié)果見圖2。莜麥多肽對α-葡萄糖苷酶抑制活性優(yōu)于阿卡波糖。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)、將脫脂莜麥蛋白粉加入純凈水中，料液比為I: 100-500，用IM鹽酸調(diào)pH值為1.0-3.0，按E/S = 1:50-100加入胃蛋白酶，在37°C下酶解l_4h，得到一次酶解液； (2)、將步驟(I)得到的一次酶解液，用IMNaoH調(diào)pH值為7.0-8.0，然后按E/S= 1: 50-100分別加入胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、彈性蛋白酶，在37 °C下酶解I _4h，得到二次酶解液； (3)、將步驟(2)得到的二次酶解液，加溫至95°C，滅酶活15分鐘，噴霧干燥，即得到含有抑制α葡萄糖苷酶水解活性的多肽。2.如權(quán)利要求1所述的用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法，其特征在于，所述的胃蛋白酶的活力單位為3000-3500U/mg;彈性蛋白酶的活力單位為50U/mg;胰蛋白酶的活力單位為250U/mg;a-糜蛋白酶的活力單位為1200U/mg。3.如權(quán)利要求1所述的用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法，其特征在于，所述的E/S = l:50o4.如權(quán)利要求1所述方法制備的莜麥降糖多肽在制備預(yù)防和治療糖尿病的藥物中應(yīng)用。5.如權(quán)利要求1所述方法制備的莜麥降糖多肽在制備保健食品中應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用莜麥蛋白粉制備莜麥降糖多肽的方法，將脫脂莜麥蛋白粉加入純凈水中，料液比為1:100?500，用1M鹽酸調(diào)pH值為1.0?3.0，按E/S＝1:50?100加入胃蛋白酶，在37℃下酶解1?4h，得到一次酶解液；將一次酶解液，用1M NaoH調(diào)pH值為7.0?8.0，然后按E/S＝1:50?100分別加入胰蛋白酶、α?糜蛋白酶、彈性蛋白酶，在37℃下酶解1?4h，得到二次酶解液；將二次酶解液，加溫至95℃，滅酶活15分鐘，噴霧干燥，即得到含有抑制α葡萄糖苷酶水解活性的多肽。本發(fā)明工藝簡單、生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品安全無毒副作用。本發(fā)明方法制備的莜麥降糖肽可在制備預(yù)防和治療糖尿病的藥物或保健品中應(yīng)用。
【IPC分類】A23J3/34, A61P3/10, C12P21/06, A23L33/185, A23J3/14, A61K38/01, A23L33/18
【公開號】CN105713943
【申請?zhí)枴緾N201610131509
【發(fā)明人】石亞偉, 焦慧娟
【申請人】山西大學(xué)