本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，涉及一種肝素鈉的提取方法，具體涉及一種大孔徑樹脂吸附肝素分子工藝。
背景技術(shù)：
[0003]
肝素主要從牛肺或豬小腸黏膜提取，是一種由葡萄糖胺、l-艾杜糖醛苷、n-乙酰葡萄糖胺和d-葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸脂。肝素通過與抗凝血酶ⅲ結(jié)合使其暴露精氨酸反應中心，與活化的凝血因子結(jié)合使其滅活，主要滅活ⅹa和ⅱa因子。肝素主要用于預防和治療血栓栓塞性疾病，如心肌梗塞、肺栓塞、腦血管栓塞、外周靜脈血栓等，可防止血栓的形成和擴大。還可用于dic的早期及其它體內(nèi)外的抗凝。
目前，肝素鈉主要是從豬、羊小腸黏膜和牛肺、腌腸衣鹽水等中提取。其提取方法最常用的是鹽解或酶解-離子交換-乙醇沉淀法，但這兩種方法普遍存在回收率低、純度不高的問題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種設(shè)計合理、方法可靠的從豬小腸中提取肝素鈉的方法。
為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明一種大孔徑樹脂吸附肝素分子工藝，包括如下步驟：
（1）吸附：稱取豬小腸黏膜置反應鍋中，加水稀釋，用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至9.0～9.5，加熱至沸，保持10～15min，降溫至35℃～45℃，同時濾液虹吸至反應池中，加入5～10％樹脂，保溫攪拌吸附8～10h；
（2）洗滌：取步驟（1）吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，瀝干備用；
（3）洗脫：取步驟（2）的固體加入0.8～1.5mol/l氯化鈉洗滌1～3h，瀝干后，加入3～5mol/l氯化鈉1～3倍量，攪拌洗脫5h，瀝干后再洗脫2次，合并全部洗脫液；
（4）分離：將步驟（3）的洗脫液在攪拌的情況下使用聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30～40ml/min，并使膜上部分占總體積的10～20％時，停止抽濾；
（5）除蛋白質(zhì)：取膜上截留部分，加入dc-w，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
（6）沉淀：取步驟（5）的濾液，加入1～2倍的95％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95％乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。作為本發(fā)明的改進，步驟（1）中所述樹脂為d204樹脂。
上述步驟（3）中洗脫2次時，每次加入3～5mol/l氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、1h。
上述步驟（4）的聚丙烯腈膜為截留mr3000～4000的聚丙烯腈膜。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為：
本發(fā)明提供的制備方法以來源廣泛的豬小腸黏膜為原料，成本低廉。本發(fā)明使用聚丙烯腈膜進行分離，不僅可節(jié)約大量乙醇，降低生產(chǎn)成本，而且制備的肝素鈉精品純度高，保證了肝素的活性。
具體實施方式
為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應該明了，所述實施例僅僅用于幫助理解本發(fā)明，不應視為對本發(fā)明的具體限制。
如無具體說明，本發(fā)明的各種原料均可以通過市售得到；或根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備得到。除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領(lǐng)域技術(shù)熟練入員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。
除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。
實施例1
一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，包括如下步驟：
（1）吸附：稱取豬小腸黏膜500kg置反應鍋中，加水稀釋，用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph值至9.0～9.5，加熱至沸，保持15min，降溫至35℃，同時濾液虹吸至反應池中，加入10％d204樹脂樹脂，保溫攪拌吸附10h；
（2）洗滌：取步驟（1）吸附后的液體靜置30min后過濾，收集樹脂，并用水將樹脂漂洗干凈，瀝干備用；
（3）洗脫：取步驟（2）的固體加入1mol/l氯化鈉洗滌1～3h，瀝干后，加入4mol/l氯化鈉1～3倍量，攪拌洗脫5h，瀝干后再洗脫2次，每次加入4mol/l氯化鈉溶液量減半，洗脫時間分別為2h、1h，合并全部洗脫液。
（4）分離：
將步驟（3）的洗脫液在攪拌的情況下使用mr3000～4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持在30ml/min，并使膜上部分占總體積的15％時，停止抽濾；
（5）除蛋白質(zhì)：
取膜上截留部分，按dc－w:tq＝1.0:50.0～1.0:80.0的比例加入dc-w，充分攪拌20min，室溫下靜置5h，濾除沉淀；
（6）沉淀：取步驟（5）的濾液，加入1.5倍的95％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，虹吸上層醇液，沉淀分別用95％乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉精品。
本發(fā)明的提取方法與常規(guī)的鹽解-離子交換-乙醇沉淀法相比較，節(jié)約乙醇85％
左右，回收率要提高20％以上，回收率比本行業(yè)常規(guī)使用的膜分離法提高1％以上。