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一種抑癌142aa多肽及其載體和應用的制造方法與工藝

文檔序號:11413098閱讀:479來源:國知局
一種抑癌142aa多肽及其載體和應用的制造方法與工藝
本發(fā)明涉及生物工程技術領域,具體是一種抑癌142aa多肽及其載體和應用。

背景技術:
據統(tǒng)計,全球每年約有1百萬的肝癌病例被報道,并有約74.5萬的肝癌患者死亡。我國是肝癌的高發(fā)地區(qū),全球55%的肝癌發(fā)生在我國,其死亡率在腫瘤性疾病中居第三位已成為危害人類健康的主要疾病,肝細胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是肝癌的主要類型,約占肝癌病例的90%。因此,加強治療肝癌的研究,探索新的治療途徑具有十分重要的意義。在肝癌的進展過程中,某些基因的表達發(fā)生變化,是癌癥發(fā)生發(fā)展的關鍵基因,成為癌癥治療的潛在靶點。多肽藥物是目前生物醫(yī)藥領域最具成長性的嶄新領域,以其高效、安全、特異性強等特點逐漸用于癌癥,傳染病等預防和治療?;虻墓δ茏罱K要通過其表達產物——蛋白質來實現,生物體的一切活動或功能都離不開蛋白質的物質基礎。發(fā)現和鑒定具有重要功能的蛋白質,可為新藥的開發(fā)帶來決定性的影響。并且多肽類藥物具有分子量小,在人體內不結存,無副作用,免疫原性小,活性好等優(yōu)點成為一個研究的熱點。

技術實現要素:
發(fā)明目的:針對現有技術中存在的不足,本發(fā)明的目的是提供一種多肽,具有抑癌效應,滿足生物醫(yī)藥使用需求。本發(fā)明的另一目的是提供一種表達上述多肽的載體。本發(fā)明還有一目的是提供上述多肽的用途。技術方案:為了實現上述發(fā)明目的,本發(fā)明采用的技術方案為:一種抑癌142aa多肽,其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。所述的抑癌142aa多肽的編碼基因,其DNA序列如SEQIDNO.2所示。含有所述的抑癌142aa多肽的編碼基因的載體。所述的抑癌142aa多肽在制備抗癌藥物中的應用。在本發(fā)明人的前期研究發(fā)現,肝癌組織中的表達蛋白缺少某段多肽序列后減緩了腫瘤生長的速度,故推測此多肽具有抑癌效應。所以,在本發(fā)明中利用基因重組技術,將142個氨基酸(aminoacid)多肽對應的DNA序列重組到pcDNA3.1真核表達載體。經酶切和序列分析證明重組成功后,將此真核表達重組多肽轉染到腫瘤細胞,免疫印跡證明多肽的蛋白表達,實現了多肽的重組。將表達多肽序列的重組真核載體轉染到腫瘤細胞中,證明其獨特的抑制腫瘤生長和減緩腫瘤發(fā)生的抗腫瘤效應。發(fā)明為腫瘤治療開發(fā)新的靶點提供實驗依據,對于應用于腫瘤的臨床治療具有十分重要的開發(fā)應用前景。有益效果:與現有技術相比,本發(fā)明基于腫瘤發(fā)生特點和治療難點,通過抗腫瘤基因治療途徑發(fā)明一段含有142個氨基酸的多肽,將多肽編碼序列克隆到pcDNA3.1真核表達載體,經酶切和序列分析證明重組成功后,將此真核表達重組多肽轉染到腫瘤細胞,免疫印跡證明多肽的蛋白表達,對多肽的抗腫瘤功能進行研究,細胞學和小鼠體內實驗表明此多肽具有抑制腫瘤細胞活性和抑制小鼠成瘤模型的發(fā)生與生長的重要抗癌功能,具有很好的藥物用途。附圖說明圖1是免疫印跡檢測結果圖;圖2是免疫沉淀實驗結果圖;圖3是重組多肽對p27表達影響結果圖;圖4是CCK-8實驗結果圖;圖5是克隆形成實驗結果圖;圖6是細胞周期流式分析結果圖;圖7是裸鼠成瘤結果圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規(guī)條件,例如分子克隆實驗指南(第三版,J.薩姆布魯克等著,黃培堂等譯,科學出版社,2002年)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件進行。實施例1重組肽的克隆載體構建提取人肝癌細胞HepG2的Prdx1的mRNA,體外逆轉錄成cDNA(環(huán)狀DNA),以此為模板,分別連接上下游引物5’-GGATCCAGATGGTAGGCTCCCCTGGTCCTCTA-3’,5’-CTCGAGTCACTGGGGCAGAGGGGG-3’。通過PCR擴增得到142aa的目的片段,并與pGEMT-easy載體(市售)連接...
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