本發(fā)明涉及藥物制備技術領域，特別是涉及一種雜代吡啶并嘧啶酮衍生物作為cdk抑制劑及其應用。
背景技術：
周期蛋白依賴性蛋白激酶(cyclin-dependentkinase，cdk)和周期蛋白(cyclin)是細胞周期調(diào)控中的重要因子。cdk可以和cyclin結合形成異二聚體，其中cdk為催化亞基，cyclin為調(diào)節(jié)亞基，形成各種cyclin-cdk復合物，使不同底物磷酸化，對細胞周期不同的時相起推進和轉(zhuǎn)化作用。
在哺乳動物中至少存在9種cdk。細胞由g1期向s期轉(zhuǎn)化主要受g1期cdk激酶控制。與g1期細胞周期蛋白(cyclin)結合的cdk激酶主要包括cdk2、cdk4和ckd6。cyclind主要與cdk4和ckd6結合并調(diào)節(jié)后者活性；cycline在g1/s期與cdk2結合，呈現(xiàn)cdk2的激酶活性促進細胞進入s期。g2/m期主要受cdk1激酶調(diào)控，cyclina、cyclinb與cdk1結合，cdk1使底物蛋白磷酸化，如將組蛋白h1磷酸化則導致染色體凝縮，如將核纖層蛋白磷酸化則使核膜解體。在m期，m期促發(fā)因子(mpf)激活后期促進因子apc，將泛連接在cyclina和cyclinb上，通過多泛素化作用，使它們被蛋白酶體降解，完成一個細胞周期(malumbresm.etal.natcellbiol11：1275，2009；malumbresm.etal.natrevcancer9：153，2009)。
過去十年來，cdk抑制劑作為抗腫瘤新藥開發(fā)為全球藥業(yè)的一個熱點，有超過20個cdk抑制劑進入臨床開發(fā)。盡管cdk抑制劑抗腫瘤臨床前藥效學結果顯著，但是早前多數(shù)臨床試驗結果不盡人意。主要問題包括在實體瘤缺乏療效和毒性較大。(guham.natrevdrugdis11：892，2012)。而在分析產(chǎn)生嚴重毒副作用時發(fā)現(xiàn)，部分cdk抑制劑藥物對cdk亞型缺乏選擇性，因此產(chǎn)生了較大的毒副作用。
cdk4和cdk6是兩個密切相關的激酶，在腫瘤細胞周期中與cyclind結合促使g1期進入s期，是dna復制細胞分裂的細胞周期進程必需的。而超過90％的人類腫瘤中，均發(fā)現(xiàn)通過各種的基因和生化適應導致g1-s期的過渡控制 機制改變。p16和人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(retinoblastoma，rb)是重要的腫痛抑制蛋白，其能調(diào)控細胞周期。p16基因蛋白抑制cdk4、cyclind1和rb的反饋回路，并通過調(diào)節(jié)rb的蛋白活性，從而防止細胞過度增殖，以達到抑制腫瘤的目的。已經(jīng)證明在人體腫瘤中(如乳腺癌和骨髓瘤)，cdk4和cdk6激活導致細胞周期改變發(fā)生。而抑制cdk4和cdk6，可阻止腫瘤抑制蛋白rb的失活和干擾腫瘤細胞周期進展(choiyjandandersl，oncogene33：1890-903，2014)。
由于cdk4/6在各種實體腫瘤和血液腫瘤的細胞周期控制失調(diào)中起關鍵作用。目前，選擇性cdk4/6抑制劑目前有多個處于臨床階段(如palbociclib、ly2835219和lee011)。這些藥物的臨床評價還包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌、卵巢癌、脂肪肉瘤、非小細胞肺癌、肝癌、膠質(zhì)母細胞瘤、黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤等。
雖然有許多cdk抑制劑類化合物已經(jīng)被公開，但是，由于受cdk介導的病理的原因，仍然需要大量用于治療與cdk有關的障礙的大量藥物，特別是cdk4/6抑制類藥物。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一在于提供一種新的雜代吡啶并嘧啶酮衍生物或其可藥用的鹽。
本發(fā)明的目的之二是提供該類化合物作為新型cdk4/6抑制劑在制備預防或治療與cdk4/6相關疾病的藥物中的用途，所述與cdk4/6所參與的周期控制失調(diào)導致的各種疾病，特別是指惡性腫瘤的治療，包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結直腸癌、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、胃癌和實體瘤等。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下通式i表示的雜代吡啶并嘧啶酮衍生物或其可藥用的鹽：
其中：
r1代表氫、c1-c3的烷基、c3-c7的環(huán)烷基；
r2代表c1-c5的烷基、c3-c7的環(huán)烷基、5-6元雜芳基團基、苯基、取代苯基；
r3，r4分別代表氫、c1-c3的烷基、c3-c7的環(huán)烷基、乙酰基、鹵素、三氟甲基、氰基或conr5r6；
或者r3，r4與相連接的碳原子一起形成c3-c7的脂肪環(huán)；
r5，r6分別代表氫、甲基；
x代表o、s；
n為0或1。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，該藥物組合物包含至少一種藥用載體，和至少一種本申請所述式(i)化合物及其藥用鹽，以作為cdk4/6抑制劑的應用。
本申請所述的“c1-c3的烷基”是指甲基、乙基、正丙基或異丙基；“c1-c5的烷基”是指甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-3-丁基、1，1-二甲基-1-丙基、2，2-二甲基-1-丙基；所述的“c1-c3的烷氧基”是指甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基；所述“鹵素”是指f、cl、br、i；所述“c3-c7環(huán)烷基”是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基；所述“5-6元雜芳基團基”是指5至6元芳香的單環(huán)，其包含1-3個雜原子，該雜原子選自n，o，s，其余的環(huán)原子為碳。
本發(fā)明的典型化合物包括，但不限于以下表1化合物：
或其可藥用的鹽。
可藥用鹽的例子包括無機鹽和有機鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、扁桃體酸鹽和草酸鹽。
本發(fā)明的部分化合物可采用如下的合成通法制備：
根據(jù)文獻(isooito，noriichioda，等chem.pharm.bull.，1976，pp1189；burnettduanea等wo2015066697a1)中報道的程序制備i6，即取代2，4-二氯嘧啶(i1)與胺(i2)在堿性條件下制得中間體i3，i3經(jīng)脫甲基得i4，i4與i5經(jīng)取代、環(huán)合反應制得酯中間體i6。
i6與胺(i7)經(jīng)催化反應制得目標產(chǎn)物i。
本發(fā)明涉及所述雜代吡啶并嘧啶酮類衍生物為cdk4/6抑制劑，所述化合物可用于cdk4/6所參與的細胞周期控制失調(diào)導致的各種臨床疾病，如癌癥。這類疾病包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結直腸癌、肝癌、黑色素瘤、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、胃癌、胰腺癌。
本發(fā)明的衍生物在實施疾病治療過程中，可以組合物的形成通過口服、注射等方式，用于治療相關癌癥及其他疾病。
所述組合物包括治療有效量的上述化合物或其可藥用的鹽和醫(yī)學上可接受的載體。
所述及的載體是指藥學領域常規(guī)的載體，如：稀釋劑、賦形劑如水等；粘合劑如纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮等；填充劑如淀粉等；崩裂劑如碳酸鈣、碳酸氫鈉；另外，還可以在組合物中加入其他輔助劑如香味劑和甜味劑。
用于口服時，可將其制備成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑或膠囊等；用于注射時，可將其制備成注射液。
本發(fā)明的組合物的各種劑型可以采用醫(yī)學領域常規(guī)的方法進行制備，其中活性成分的含量為0.1％～99.5％(重量比)。
本發(fā)明的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴重程度等進行變化，其日劑量為0.005-30mg/kg體重(口服)或0.005-30mg/kg體重(注射)。
實施例
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例并不限制本發(fā)明的范圍。
實施例1
化合物(i-1)6，6-二甲基-8-異丙基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
步驟1：2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶(1.0g，5.59mmol)、異丙胺(0.33g，5.59mmol)、n，n-二異丙基乙胺(7.2g，55.9mmol)加入異丙醇(ipa，10ml)中，n2保護下100℃反應6h。濃縮溶劑至干，剩余物加h2o(50ml)/二氯甲烷(dcm，50ml)攪拌萃取，有機層干燥、過濾、濃縮得淡黃色固體2-氯-n-異丙基-5-甲氧基嘧啶-4-氨(0.78g，粗品收率69.3％)。
步驟2：2-氯-n-異丙基-5-甲氧基嘧啶-4-氨(0.78g，3.88mmol)加入dcm(15ml)中，冰浴下滴加bbr3(14.5g，58.2mmol)的dcm(15ml)溶液，滴加完畢，升至室溫攪拌反應10h，滴加甲醇(10ml)淬滅反應。反應液中加入dcm(20ml)，并以飽和nahco3溶液調(diào)ph值約為8，分液，有機層經(jīng)干燥、過濾、濃縮得白色固體2-氯-n-異丙基-5-羥基嘧啶-4-氨(0.54g，粗品收率74.5％)。
步驟3：2-氯-n-異丙基-5-羥基嘧啶-4-氨(0.54g，2.89mmol)、2-溴代異丁酸甲酯(0.63g，3.46mmol)、k2co3(1.2g，8.66mmol)加入乙腈(20ml)中，n2保護下80℃反應8h。濃縮溶劑至干，剩余物加h2o(50ml)/二氯甲烷(dcm，50ml)攪拌萃取，有機層干燥、過濾、濃縮得淡黃色固體，再經(jīng)乙酸乙酯(10ml)重結晶，得2-氯-6，6-二甲基-8-異丙基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(0.73g，收率99.0％)，ms(m/z)：257[m+h]+。
步驟4：2-氯-6，6-二甲基-8-異丙基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(0.73g，2.85mmol)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.79g，2.85mmol)、pd2(dba)3(0.26g，0.28mmol)、xantphos(0.25g，0.43mmol)和碳酸銫(1.39g，4.28mmol)加入1，4-二氧六環(huán)(15ml)中，n2保護下100℃反應8h。濃縮溶劑至干，剩余物加h2o(50ml)/二氯甲烷(dcm，50ml)攪拌萃取，有機層干燥、過濾、濃縮得淡黃色固體，無水乙醇(10ml)打漿，得淡黃色固體6，6-二甲基-8-異丙基-2-(5-(4-羧酸叔丁酯-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(0.50g，收率35.2％)，ms(m/z)：498[m+h]+。
步驟5：6，6-二甲基-8-異丙基-2-(5-(4-羧酸叔丁酯-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(0.50g，2.0mmol)加入乙酸乙酯(5ml)中，攪拌下加入3n鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌反應2h，固體析出，過濾，粗品經(jīng)無水 乙醇(5ml)打漿得淡黃色固體，經(jīng)真空干燥得目標產(chǎn)物6，6-二甲基-8-異丙基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-1，0.2g，收率46.0％)，ms(m/z)：398[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.83(br，1h)，9.74(br，2h)，8.33(s，1h)，8.25-8.23(d，j＝8.0hz，1h)，8.01(s，1h)，7.77-7.75(d，j＝8.0hz，1h)，5.32-5.25(m，1h)，3.71-3.52(m，8h)，1.59(s，12h)。
實施例2
化合物(i-2)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-2的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和環(huán)戊胺)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-2)，淡黃色固體。ms(m/z)：424[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.88(br，1h)，9.77(br，2h)，8.26(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.93(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.37-5.23(m，1h)，4.61(m，4h)，3.45(m，4h)，2.05-1.55(m，8h)，1.48(s，6h)。
實施例3
化合物(i-3)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-3的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-3)，白色固體。ms(m/z)：466[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：12.04(br，1h)，11.83(br，1h)，8.53(s，1h)，8.36-8.34(d，j＝8.0hz，1h)，8.19(s，1h)，7.72-7.70(d，j＝8.0hz，1h)，5.29-5.21(m，1h)，4.41(m，4h)，3.59-3.51(m，6h)，3.08(m，2h)，1.99-1.47(m，8h)，1.39(s，6h)，1.19-1.15(t，j＝8.0hz，3h)。
實施例4
化合物(i-4)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-4的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和1-溴環(huán)丙烷甲酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮鹽酸鹽(i-4)，淡黃色固體。ms(m/z)：422[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.89(br，1h)，9.80(br，2h)，8.25(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.92(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.36-5.23(m，1h)，4.60(m，4h)，3.47(m，4h)，2.03-1.55(m，8h)，1.01-0.57(m，4h)。
實施例5
化合物(i-5)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-5的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和1-溴環(huán)丁烷甲酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮鹽酸鹽(i-5)，淡黃色固體。ms(m/z)：436[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.79(br，2h)，8.26(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.35-5.23(m，1h)，4.55(m，4h)，3.45(m，4h)，2.71-2.59(m，4h)，2.03-1.98(m，2h)，1.75-1.57(m，8h)。
實施例6
化合物(i-6)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)戊-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-6的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)戊-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和1-溴環(huán)戊烷甲酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)戊 -1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮鹽酸鹽(i-6)，淡黃色固體。ms(m/z)：450[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.88(br，1h)，9.81(br，2h)，8.27(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.90(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.34-5.23(m，1h)，4.59(m，4h)，3.47(m，4h)，2.25-2.10(m，4h)，2.03-1.58(m，12h)。
實施例7
化合物(i-7)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)己-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-7的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)己-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和1-溴環(huán)己烷甲酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)己-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮鹽酸鹽(i-7)，淡黃色固體。ms(m/z)：464[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.79(br，2h)，8.27(s，1h)，8.25-8.23(d，j＝8.0hz，1h)，7.89(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.35-5.23(m，1h)，4.65(m，4h)，3.57(m，4h)，2.23-1.95(m，4h)，1.93-1.54(m，14h)。
實施例8
化合物(i-8)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)庚-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-8的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)庚-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和1-溴環(huán)庚烷甲酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)庚-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮鹽酸鹽(i-8)，淡黃色固體。ms(m/z)：478[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.88(br，1h)，9.78(br，2h)，8.28(s，1h)，8.25-8.23(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.37-5.23(m，1h)，4.63(m，4h)，3.58(m，4h)，2.21-1.95(m，4h)，1.91-1.46(m，16h)。
實施例9
化合物(i-9)6-乙?；?8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-9的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-乙酰基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2-羰基乙酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6-乙酰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-9)，淡黃色固體。ms(m/z)：438[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.81(br，2h)，8.27(s，1h)，8.25-8.23(d，j＝8.0hz，1h)，7.90(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.57(s，1h)，5.35-5.26(m，1h)，4.61(m，4h)，3.59(m，4h)，3.37(s，3h)，2.09-1.57(m，8h)。
實施例10
化合物(i-10)6-氰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-10的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-氰基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2-氰基乙酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6-氰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-10)，淡黃色固體。ms(m/z)：421[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.89(br，1h)，9.80(br，2h)，8.28(s，1h)，8.26-8.24(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.58(s，1h)，5.36-5.26(m，1h)，4.62(m，4h)，3.59(m，4h)，2.03-1.57(m，8h)。
實施例11
化合物(i-11)6-三氟甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-11的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-三氟甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2-三氟甲基乙酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6-三氟甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-11)，淡黃色固體。ms(m/z)：464[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.81(br，2h)，8.27(s， 1h)，8.26-8.24(d，j＝8.0hz，1h)，7.90(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.57-5.54(m，1h)，5.35-5.26(m，1h)，4.61(m，4h)，3.64(m，4h)，2.01-1.54(m，8h)。
實施例12
化合物(i-12)6，6-二氟-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-12的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二氟-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2，2-二氟乙酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二氟-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-12)，淡黃色固體。ms(m/z)：432[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.88(br，1h)，9.79(br，2h)，8.26(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.90(s，1h)，7.70-7.67(d，j＝8.0hz，1h)，5.37-5.26(m，1h)，4.62(m，4h)，3.63(m，4h)，2.03-1.57(m，8h)。
實施例13
化合物(i-13)6-環(huán)丙基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-13的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-環(huán)丙基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2-環(huán)丙基乙酸甲酯)和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6-環(huán)丙基-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-13)，淡黃色固體。ms(m/z)：436[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.89(br，1h)，9.81(br，2h)，8.27(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.89(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.58-5.57(d，j＝4.0hz，1h)，5.38-5.26(m，1h)，4.67(m，4h)，3.69(m，4h)，2.03-1.58(m，8h)，1.05-1.01(m，1h)，0.87-0.69(m，4h)。
實施例14
化合物(i-14)6-環(huán)丁基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-14的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-環(huán)丁基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-溴-2-丁丙基乙酸甲酯)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-環(huán)丁基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-14)，白色固體。ms(m/z)：492[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.53(s，1h)，8.35-8.33(d，j＝8.0hz，1h)，8.20(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.58-5.57(d，j＝4.0hz，1h)，5.27-5.21(m，1h)，4.87(s，2h)，4.45-4.23(m，11h)，2.47-2.21(m，14h)，1.19-1.15(t，j＝8.0hz，3h)。
實施例15
化合物(i-15)6-異丙基-8-甲基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-15的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-異丙基-8-甲基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶、甲胺和2-溴代異戊酸甲酯)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-異丙基-8-甲基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-15)，白色固體。ms(m/z)：426[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.55(s，1h)，8.35-8.33(d，j＝8.0hz，1h)，8.18(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.58-5.57(d，j＝4.0hz，1h)，4.89(s，2h)，4.59(s，3h)，4.41-4.23(m，11h)，1.19-1.15(t，j＝8.0hz，3h)，1.05-1.04(d，j＝4.0hz，6h)。
實施例16
化合物(i-16)6-甲基-6，8-二乙基-2-(5-(4-甲基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-16的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-甲基-6，8-二乙基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶、乙胺和2-溴代-2-甲基丁酸甲酯)和5-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-甲基-6，8-二乙基-2-(5-(4-甲基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-16)，白色固體。ms(m/z)：426[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.82(br，1h)，8.56(s，1h)，8.35-8.33(d，j＝8.0hz，1h)，8.19(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，4.89(s，2h)，4.67-4.63(q，j＝4.0hz，2h)， 4.59(s，3h)，4.40-4.22(m，8h)，3.25-3.21(q，j＝4.0hz，2h)，2.35(s，3h)，2.01-1.99(t，j＝4.0hz，3h)，1.58-1.56(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例17
化合物(i-17)6-環(huán)戊基-8-仲丁基-2-(5-(1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮
化合物i-17的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-環(huán)戊基-8-仲丁基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲硫基嘧啶、仲丁胺和2-溴代-2-環(huán)戊基乙酸甲酯)和5-[(哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-環(huán)戊基-8-仲丁基-2-(5-(1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-17)，白色固體。ms(m/z)：482[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.89(br，1h)，9.81(br，2h)，8.55(s，1h)，8.35-8.33(d，j＝8.0hz，1h)，8.21(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，4.88-4.65(m，4h)，4.42-4.25(m，8h)，2.21-1.95(m，14h)，0.98-0.96(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例18
化合物(i-18)6-環(huán)己基-8-叔戊基-2-(5-(4-環(huán)丙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-18的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-環(huán)己基-8-叔戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶、叔戊胺和2-溴代-2-環(huán)己基乙酸甲酯)和5-[(4-環(huán)丙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-環(huán)己基-8-叔戊基-2-(5-(4-環(huán)丙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-18)，白色固體。ms(m/z)：534[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.57(s，1h)，8.34-8.32(d，j＝8.0hz，1h)，8.19(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.58-5.57(d，j＝4.0hz，1h)，4.88(s，2h)，4.42-4.21(m，9h)，2.21-2.01(m，19h)，1.19-1.15(t，j＝8.0hz，1h)，0.75-0.69(m，4h)。
實施例19
化合物(i-19)6-環(huán)庚基-8-(3-甲基-2-丁基)-2-(5-(4-正丙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮
化合物i-19的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-環(huán)庚基-8-(3-甲基-2-丁基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲硫基嘧啶、3-甲基-2-丁基胺和2-溴代-2-環(huán)庚基乙酸甲酯)和5-[(4-丙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-環(huán)庚基-8-(3-甲基-2-丁基)-2-(5-(4-正丙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮(i-19)，白色固體。ms(m/z)：567[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.82(br，1h)，8.55(s，1h)，8.34-8.32(d，j＝8.0hz，1h)，8.21(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.58-5.57(d，j＝4.0hz，1h)，4.87-4.65(m，4h)，4.43-4.21(m，11h)，2.19-2.01(m，17h)，1.21-1.18(m，9h)。
實施例20
化合物(i-20)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)丁基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-20的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-環(huán)丁基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)丁基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-20)，淡黃色固體。ms(m/z)：478[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.83(br，1h)，8.26(s，1h)，8.22-8.20(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.37-5.23(m，1h)，4.61-4.56(m，5h)，3.45-3.40(m，4h)，2.05-1.47(m，20h)。
實施例21
化合物(i-21)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)戊基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-21的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-環(huán)戊基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)戊基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-21)，淡黃色固體。ms(m/z)：492[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.25(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.92(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.36-5.23(m，1h)，4.60(m，4h)，3.45-3.39(m，5h)，2.03-1.43(m，22h)。
實施例22
化合物(i-22)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)己基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-22的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-環(huán)己基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)己基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-22)，淡黃色固體。ms(m/z)：506[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.83(br，1h)，8.26(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.93(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.35-5.25(m，1h)，4.61(m，4h)，3.47-3.39(m，5h)，2.05-1.43(m，24h)。
實施例23
化合物(i-23)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)庚基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮
化合物i-23的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮和1-環(huán)庚基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-環(huán)庚基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮(i-23)，淡黃色固體。ms(m/z)：536[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.27(s，1h)，8.22-8.20(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.35-5.25(m，1h)，4.61(m，4h)，3.46-3.37(m，5h)，2.07-1.42(m，26h)。
實施例24
化合物(i-24)6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-異丙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮
化合物i-24的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮和1-異丙基-4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-異丙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]噻嗪-7(8h)-酮(i-24)，淡黃色固體。ms(m/z)：482[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.82(br，1h)，8.26(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)， 7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.38-5.27(m，1h)，4.63(m，4h)，3.47-3.37(m，5h)，2.01-1.45(m，14h)，1.58-1.57(d，j＝4.0hz，6h)。
實施例25
化合物(i-25)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-25的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮和1-(2-吡啶基)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丙-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(i-25)，淡黃色固體。ms(m/z)：464[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.83(br，1h)，8.53(s，1h)，8.36-8.34(d，j＝8.0hz，1h)，8.21(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.01-4.95(m，3h)，4.25-3.56(m，10h)，2.05-1.57(m，8h)，1.21-0.97(m，7h)。
實施例26
化合物(i-26)6-乙酰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-26的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-乙酰基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-(2-吡啶基)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-乙?；?8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-26)，淡黃色固體。ms(m/z)：480[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.52(s，1h)，8.36-8.34(d，j＝8.0hz，1h)，8.20(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，6.15(s，1h)，5.01-4.85(m，3h)，4.23-3.58(m，10h)，3.39(s，3h)，2.01-1.57(m，8h)，1.23-1.21(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例27
化合物(i-27)6-氰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-27的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-氰基-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-(2-吡啶基)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6-氰基-8-環(huán)戊基-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-27)，淡黃色固體。ms(m/z)：463[m+h]+。1hnmr (dmso-d6)：δ：11.80(br，1h)，8.51(s，1h)，8.37-8.35(d，j＝8.0hz，1h)，8.21(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，6.17(s，1h)，5.00-4.87(m，3h)，4.21-3.58(m，10h)，2.01-1.58(m，8h)，1.24-1.22(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例28
化合物(i-28)8′-環(huán)戊基-2′-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮
化合物i-28的合成按實施例1方法進行，起始原料為2′-氯-8′-環(huán)戊基-螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮和1-(2-吡啶基)和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物8′-環(huán)戊基-2′-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)螺[環(huán)丁-1，6′-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪]-7′(8′h)-酮(i-28)，淡黃色固體。ms(m/z)：478[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.82(br，1h)，8.52(s，1h)，8.37-8.35(d，j＝8.0hz，1h)，8.23(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，4.98-4.94(m，3h)，4.23-3.56(m，14h)，2.03-1.55(m，10h)，1.23-1.21(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例29
化合物(i-29)6，6-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-29的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(2-噻吩基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和2-氨基噻吩)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-29)，淡黃色固體。ms(m/z)：438[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.89(br，1h)，9.78(br，2h)，8.26(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.91-7.78(m，4h)，6.58-6.52(m，1h)，4.61(m，4h)，3.47(m，4h)，1.48(s，6h)。
實施例30
化合物(i-30)6，6-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-30的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(2-吡啶基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。 得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-30)，白色固體。ms(m/z)：475[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.83(br，1h)，8.67-8.64(m，1h)，8.61-8.58(m，1h)，8.51-8.47(m，2h)，8.36-8.34(d，j＝8.0hz，1h)，8.21(s，1h)，8.05-8.01(m，1h)，7.72-7.70(d，j＝8.0hz，1h)，4.87(s，2h)，4.23-3.56(m，10h)，1.58(s，6h)，1.19-1.17(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例31
化合物(i-31)6，6-二甲基-8-(2-嘧啶基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-31的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(2-嘧啶基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(2-嘧啶基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-31)，白色固體。ms(m/z)：476[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.81(br，1h)，8.92-8.89(m，2h)，8.53(s，1h)，8.37-8.34(m，2h)，8.20(s，1h)，7.72-7.70(d，j＝8.0hz，1h)，4.87(s，2h)，4.21-3.64(m，10h)，1.57(s，6h)，1.19-1.17(t，j＝4.0hz，3h)。
實施例32
化合物(i-32)6，6-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-32的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(2-呋喃基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-32)，淡黃色固體。ms(m/z)：422[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.81(br，2h)，8.25(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.98-7.82(m，3h)，6.57-6.52(m，2h)，4.62(m，4h)，3.48(m，4h)，1.51(s，6h)。
實施例33
化合物(i-33)n，n-二甲基-6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-33的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-n，n-二甲基-6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物n，n-二甲基-6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-33)，淡黃色固體。ms(m/z)：467[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.88(br，1h)，9.80(br，2h)，8.27(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.58(s，1h)，5.33-5.26(m，1h)，5.01(s，6h)，4.62(m，4h)，3.61(m，4h)，2.05-1.57(m，8h)。
實施例34
化合物(i-34)6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-34的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和1-(2-吡啶基)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6-甲酰胺-8-環(huán)戊基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-34)，淡黃色固體。ms(m/z)：439[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.86(br，1h)，9.83(br，2h)，9.57(br，2h)，8.26(s，1h)，8.22-8.20(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，5.59(s，1h)，5.34-5.26(m，1h)，4.63(m，4h)，3.63(m，4h)，2.01-1.62(m，8h)。
實施例35
化合物(i-35)6，6-二甲基-8-苯基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-35的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-苯基-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和苯胺)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-苯基-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-35)，淡黃色固體。ms(m/z)：432[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.86(br，1h)，9.82(br，2h)，8.56-8.52(m，4h)，8.26(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.99-7.92(m，3h)，4.61(m，4h)，3.49(m，4h)，1.52(s，6h)。
實施例36
化合物(i-36)6，6-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-36的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(4-氯苯基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(合成方法類似于實施例1，起始原料為2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶和4-氯苯氨)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-36)，淡黃色固體。ms(m/z)：466[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.85(br，2h)，8.56-8.54(d，j＝8.0hz，2h)，8.45-8.43(d，j＝8.0hz，2h)，8.26(s，1h)，8.23-8.21(d，j＝8.0hz，1h)，7.90(s，1h)，7.71-7.69(d，j＝8.0hz，1h)，4.63(m，4h)，3.51(m，4h)，1.54(s，6h)。
實施例37
化合物(i-37)6，6-二甲基-8-(3-戊基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-37的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(3-戊基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(3-戊基)-2-(5-(1-哌嗪基)-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮鹽酸鹽(i-37)，淡黃色固體。ms(m/z)：426[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.87(br，1h)，9.78(br，2h)，8.27(s，1h)，8.24-8.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.91(s，1h)，7.70-7.68(d，j＝8.0hz，1h)，5.35-5.22(m，1h)，4.61(m，4h)，3.48(m，4h)，1.58(s，6h)，1.45-1.42(m，4h)，0.92-0.88(m，6h)。
實施例38
化合物(i-38)6，6-二甲基-8-(3-戊基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮
化合物i-37的合成按實施例1方法進行，起始原料為2-氯-6，6-二甲基-8-(3-戊基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁5-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-胺。得終產(chǎn)物6，6-二甲基-8-(3-戊基)-2-(5-(4-乙基-1-哌嗪基)甲基-吡啶-2-氨基)-6h-嘧啶[5，4-b][1，4]惡嗪-7(8h)-酮(i-38)，淡黃色固體。ms(m/z)：468[m+h]+。1hnmr(dmso-d6)：δ：11.82(br，1h)，8.51(s，1h)， 8.36-8.34(d，j＝8.0hz，1h)，8.18(s，1h)，7.72-7.70(d，j＝8.0hz，1h)，5.21-5.08(m，3h)，4.61-4.02(m，10h)，1.59(s，6h)，1.46-1.42(m，4h)，0.93-0.88(m，9h)。
實施例39
生物測試
cdk4活性測試：采用caliper遷移率變動檢測技術(calipermobilityshiftassay)測定cdk4蛋白激酶活性(參見j.biomol.screen，2009，pp31)。將待測化合物以dmso溶解后用激酶緩沖溶液(20mmhepes-ph7.5，0.01％tritonx-100，10mmmgcl2，2mmdtt)稀釋，在384孔板中加入5μl的10％dmso溶解的5倍反應終濃度的化合物，無化合物對照孔是5μl的10％dmso，無沒活性對照孔是5μl的激酶緩沖液。加入10μl稀釋2.5倍后的cdk4酶溶液(gst-cdk4(1-303end))后在室溫下孵育10min，再加入10μl的稀釋2.5倍后的底物溶液peptidefam-p8。28℃下孵育3h后加25μl終止液終止反應，caliperezreaderii(caliperlifesciences)上讀取轉(zhuǎn)化率數(shù)據(jù)，按照上述方法把轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化成抑制率數(shù)據(jù)。其中，抑制率％＝(max-轉(zhuǎn)化)/(max-min)×100％。
cdk6活性測試：采用caliper遷移率變動檢測技術(calipermobilityshiftassay)測定cdk6蛋白激酶活性(參見j.biomol.screen，2009，pp31)。將待測化合物以dmso溶解后用激酶緩沖溶液(20mmhepes-ph7.5，0.01％tritonx-100，10mmmgcl2，2mmdtt)稀釋，在384孔板中加入5μl的10％dmso溶解的5倍反應終濃度的化合物，無化合物對照孔是5μl的10％dmso，無沒活性對照孔是5μl的激酶緩沖液。加入10μl稀釋2.5倍后的cdk6酶溶液(gst-cdk6(1-326end))后在室溫下孵育10min，再加入10μl的稀釋2.5倍后的底物溶液peptidefam-p8。28℃下孵育40min后加25μl終止液終止反應，caliperezreaderii(caliperlifesciences)上讀取轉(zhuǎn)化率數(shù)據(jù)，按照上述方法把轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化成抑制率數(shù)據(jù)。其中，抑制率％＝(max-轉(zhuǎn)化)/(max-min)×100％。
上述實驗結果如表2所示。
表2.測試結果：
注：a表示ic50＞500nm，b表示500nm≥ic50＞100nm，c表示100nm≥ic50＞20nm，d表示ic50≤20nm。