本申請大體上涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本申請?zhí)峁┝擞糜谥委熤袠猩窠?jīng)系統(tǒng)損傷的肽、組合物和方法。發(fā)明背景腦卒中是中老年常見的急性腦血管病，并出現(xiàn)年輕化的趨勢。它是當今世界對人類危害最大的三種疾病(癌癥，心腦血管疾病，糖尿病)之一。我國每年死于腦血管疾病近300萬人，高于歐美國家4到5倍，是日本的3.5倍，甚至高于泰國、印度等發(fā)展中國家；發(fā)病率以每年8.7％的速率上升，復(fù)發(fā)率超過30％，5年內(nèi)再次發(fā)生率達54％；腦卒中患者幸存者中75％不同程度喪失勞動能力，40％重殘。腦卒中大致可以分為兩大類，即缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中占腦卒中病人總數(shù)的85％。目前，缺血性腦卒中的治療藥物主要分為如下幾類：血管擴張藥(如潘生丁等)、改善微循環(huán)、擴充血容量的藥物(如低分子右旋糖酐等)、溶解血栓的藥物(如尿激酶等)、抗凝治療、防止血小板凝聚的藥(如阿司匹林等)、中藥、神經(jīng)元保護劑等，但是由于這些藥物大多存在副作用大、具有潛在的危險性或療效不顯著等問題，因此研究腦卒中的發(fā)病機制并針對其機制進行藥物研發(fā)，對防治腦血管病發(fā)生和發(fā)展具有重要的社會意義。腦卒中的特征是局部缺血區(qū)域、腦出血區(qū)域和/或創(chuàng)傷區(qū)域的神經(jīng)元細胞死亡。而由于腦缺血引起的神經(jīng)元死亡或損傷是一個損傷級聯(lián)反應(yīng)過程，腦缺血后組織血液灌注下降，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)增加，激活nmda和ampa受體，引起離子通道開放，鈣離子內(nèi)流，激活大量的酶引發(fā)信號級聯(lián)反應(yīng)，造成多途徑的神經(jīng)細胞損傷。其下游的突觸后密度95蛋白(psd-95)通過與多種蛋白的相互作用，引發(fā)一系列缺血性損傷，是腦缺血損傷的關(guān)鍵性位點，同時也是藥物治療的潛在靶點，因此psd-95抑制劑 的研發(fā)對于包括腦卒中在內(nèi)的多種興奮性神經(jīng)毒性引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷具有很大的藥用意義。此外，研究顯示興奮性神經(jīng)遞質(zhì)nmda在焦慮，癲癇和多種神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、帕金森氏病或亨廷頓氏病等中都發(fā)揮重要作用。例如，研究顯示中樞的谷氨酸能系統(tǒng)過度興奮可引發(fā)焦慮，而nmda受體(nmdar)負責谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性的主要部分。癲癇的發(fā)作包含起動、發(fā)作性放電的維持與擴展以及發(fā)作性放電的抑制3個不同而連續(xù)的病理生理過程，在該過程中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸、天門冬氨酸起重要作用。在阿爾茲海默癥中，psd-95通過glur6-psd-95-mlk3通路參與導(dǎo)致其的神經(jīng)毒性機制。此外，在亨廷頓氏病中，psd-95是nmda受體和huntingtin突變體神經(jīng)毒性的介體。因此psd-95抑制劑的研發(fā)對于上述疾病的治療、改善和預(yù)防也具有重要意義。發(fā)明概述第一方面，本申請?zhí)峁┝穗?，其包含氨基酸序列yeklldtei(seqidno:1)或其功能性變體。在一些實施方案中，功能性變體為seqidno:1中的ldtei部分發(fā)生一處或多處保守型取代后產(chǎn)生的變體。在一些實施方案中，保守型取代選自d和e之間的取代，l、v和i之間的取代以及t和s之間的取代。在一些實施方案中，功能性變體為seqidno:1中的ldtei部分被替換為下述任一序列后產(chǎn)生的變體：ldtel、ldtev、ldtdi、ldtdl、ldtdv、ldsei、ldsel、ldsev、ldsdi、ldsdl、ldsdv、letei、letel、letev、letdi、letdl、letdv、vdtei、vdtel、vdtev、vdtdi、vdtdl、vdtdv、idtei、idtel、idtev、idtdi、idtdl、idtdv、ietei、ietel、ietev、ietdi、ietdl、ietdv。第二方面，本申請?zhí)峁┝饲逗想?，其包含活性肽和?nèi)化肽，其中所述活性肽為第一方面所述的肽，所述內(nèi)化肽能促進所述嵌合肽被細胞攝取。在一些實施方案中，內(nèi)化肽包含氨基酸序列ygrkkrrqrrr(seqidno:2)。在一些實施方案中，嵌合肽包含氨基酸序列ygrkkrrqrrryeklldtei(seqidno:3)。第三方面，本申請?zhí)峁┝怂幬锝M合物，其包含第一方面所述的肽或第二方面所述的嵌合肽，以及藥學(xué)可接受的載體。在一些實施方案中，藥物組合物用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷或用作神經(jīng)元保護劑。在一些實施方案中，藥物組合物用于治療缺血性腦卒中導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷。第四方面，本申請?zhí)峁┝酥委熤袠猩窠?jīng)系統(tǒng)損傷的方法，包括向有需要的個體給予第一方面所述的肽，或第二方面所述的嵌合肽，或第三方面所述的藥物組合物。在一些實施方案中，個體為經(jīng)歷缺血性腦卒中的個體。第五方面，本申請?zhí)峁┝说谝环矫嫠龅碾模虻诙矫嫠龅那逗想?，或第三方面所述的藥物組合物在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的藥物或神經(jīng)元保護劑中的用途。在一些實施方案中，所述藥物用于治療缺血性腦卒中導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷。附圖簡要描述圖1顯示了pull-down實驗檢測p5與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用。m代表蛋白質(zhì)分子量標識；泳道1為his+pdz1/2+p5；泳道2為單獨的p5；泳道3為his+p5；泳道4為his+pdz1/2。泳道1所示的洗脫條帶包含p5與pdz1/2兩者，證實p5能夠結(jié)合pdz1/2結(jié)構(gòu)域。圖2顯示了多肽p5對大鼠mcao模型的腦切片ttc染色圖。a.正常組；b.假手術(shù)組；c.模型組；d.陽性對照藥恩必普注射液組；e.na-1， 10mg/kg體重；f.ye-na-1，10mg/kg體重；g.p5-10mg/kg體重；h.p5-3mg/kg體重；i.p5-1mg/kg體重；j.預(yù)防給藥組p5-10mg/kg體重；k.預(yù)防給藥組p5-3mg/kg體重；l.預(yù)防給藥組p5-1mg/kg體重。圖3顯示了多肽p5的不同劑量組對大鼠mcao模型治療及預(yù)防給藥腦梗死體積數(shù)據(jù)統(tǒng)計圖。**p<0.01。圖4顯示了多肽p5在大鼠腦中的分布。圖5顯示了大鼠腦ttc染色。圖6顯示了大鼠腦石蠟切片he染色的結(jié)果。a:正常組，b：假手術(shù)組，c:模型組，d:陽性對照給藥組，e：na-1，f：ye-na-1組，g：p5組，h：p5預(yù)防給藥組。發(fā)明詳細描述本申請的發(fā)明人研究了本領(lǐng)域已報道的能降低至少部分由nmdar興奮性神經(jīng)毒性介導(dǎo)的神經(jīng)學(xué)病癥的損傷效應(yīng)的肽。不希望受任何理論的束縛，據(jù)信這類肽至少部分通過抑制nmdar與突觸后密度95蛋白(psd-95)之間的相互作用來發(fā)揮作用(即psd-95抑制劑)。在此基礎(chǔ)上，本申請的發(fā)明人對缺血性腦卒中治療的多個靶點進行了深入思考，通過體內(nèi)外的藥理藥效實驗，進行了多肽類神經(jīng)元保護劑的設(shè)計和篩選，并篩選得到了具有理想性質(zhì)的肽。定義除非另外指明，本申請中所用的術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義。本申請中對于氨基酸使用的單字母或三字母縮寫遵循國際慣例。術(shù)語“嵌合肽”表示具有兩個天然不彼此結(jié)合的組件肽的肽，所述兩個組件肽可以作為融合蛋白或通過化學(xué)鍵彼此結(jié)合。術(shù)語“pdz結(jié)構(gòu)域”是指約90個氨基酸的模塊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，其特征是對腦突觸蛋白psd-95、果蠅(drosophila)分隔連接蛋白discs-large(dlg)和上皮緊密連接蛋白z01(z01)具有顯著(例如至少60％)的序列同一性。pdz結(jié)構(gòu)域也稱作discs-large同源性重復(fù)(“dhrs”)和glgf 重復(fù)。pdz結(jié)構(gòu)域通常顯示保留核心共有序列(doyle,d.a.,1996,cell85：1067-76)。示例性的含pdz結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)和pdz結(jié)構(gòu)域序列在美國申請no.10/714,537中公開。術(shù)語“nmda受體”或“nmdar”是指已知與nmda相互作用的膜關(guān)聯(lián)蛋白。這些受體可以是人或非人的(例如小鼠、大鼠、兔子和猴子等)。術(shù)語“特異性結(jié)合”是指兩個分子(例如配體和受體)之間的結(jié)合，其特征是甚至在存在許多其他不同分子時，一種分子(配體)與另一種特異分子(受體)結(jié)合的能力，即在分子的異質(zhì)混合物中顯示一種分子對另一分子的優(yōu)先結(jié)合的能力。配體與受體的特異性結(jié)合也如下被證明：存在過量未標記的配體時，經(jīng)可檢測標記的配體與受體的結(jié)合降低(即結(jié)合競爭實驗)。統(tǒng)計學(xué)顯著的是指p值<0.05，優(yōu)選地<0.01，最優(yōu)選地<0.001。術(shù)語“功能性變體”是指與母體具有相同或相近的生物學(xué)功能和性質(zhì)的變體。作為非限制性的實例，“功能性變體”可以通過在母體中進行一處或多處保守型取代獲得。術(shù)語“內(nèi)化肽”也可稱為穿膜肽，在蛋白質(zhì)藥物領(lǐng)域被廣泛使用，其功能是促進與其結(jié)合的活性肽被細胞攝取和吸收。作為非限制性的一個實例，內(nèi)化肽可以為tat肽，其中tat肽的一個非限制性實例為ygrkkrrqrrr(seqidno:2)。第一方面，本申請?zhí)峁┝穗?，其包含氨基酸序列yeklldtei(seqidno:1)或其功能性變體。所述肽在本申請中也被稱為“活性肽”，其在本申請的嵌合肽中作為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷或作為神經(jīng)元保護劑的活性部分。根據(jù)已有的研究，一些抑制nmdar與psd-95之間的相互作用的活性肽是基于nmdar的結(jié)構(gòu)。例如，nmdar2b具有g(shù)enbankid4099612，c末端20個氨基酸為fngssnghvyeklsslesdv和pl基序esdv。已有的一些活性肽選取了nmdar2b的c末端的部分氨基酸序列，從而與nmdar2b產(chǎn)生對psd-95的競爭性抑制。有研究認為上述肽中的esdv或lesdv區(qū)段在抑制nmdar與psd-95蛋白之間的 相互作用中發(fā)揮重要作用。在不受任何理論束縛的情況下，本申請的發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，本文公開的活性肽yeklldtei(seqidno:1)中，其相對于上述nmdar2b的c末端氨基酸組成，不含有kl之后的ss兩個殘基，同時相對于pl基序增加了n端方向的yekl氨基酸序列，本申請證實這樣的改變能夠增強活性肽與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用。同時相對于yekl基序，其c端的ldtei可以進行變化，預(yù)期不影響活性肽的活性或有可能增加其活性。因此，在一些實施方案中，本申請?zhí)峁┑墓δ苄宰凅w為seqidno:1中的ldtei部分發(fā)生一處或多處保守型取代后產(chǎn)生的變體。在一些實施方案中，保守型取代選自d和e之間的取代，l、v和i之間的取代以及t和s之間的取代。在更具體的一些實施方案中，功能性變體為seqidno:1中的ldtei部分被替換為下述任一序列后產(chǎn)生的變體：ldtel、ldtev、ldtdi、ldtdl、ldtdv、ldsei、ldsel、ldsev、ldsdi、ldsdl、ldsdv、letei、letel、letev、letdi、letdl、letdv、vdtei、vdtel、vdtev、vdtdi、vdtdl、vdtdv、idtei、idtel、idtev、idtdi、idtdl、idtdv、ietei、ietel、ietev、ietdi、ietdl、ietdv。在一些實施方案中，本文所公開的功能性變體還包括與以上提到的肽具有至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、甚至更高的同一性的氨基酸序列。本領(lǐng)域已知，兩種蛋白之間的“同一性”通過將一種蛋白的氨基酸序列和它的保守氨基酸取代的第二種蛋白的序列進行比對來確定。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的計算機算法和方法確定兩種蛋白之間的同一性程度。兩個氨基酸序列之間的同一性優(yōu)選地通過利用blastp算法確定。在一些實施方案中，本文所公開的功能性變體包括與以上提到的肽相比，具有1、2、3、4、5或更多處的氨基酸殘基的取代、缺失、添加和/或插入?yún)^(qū)別于上述公開的具體的肽。如上所述，功能性變體可以通過一個或多個取代、缺失、添加和/或插入?yún)^(qū)別于上述公開的具體的肽。這些變體可以是天然存在的或可以是 合成產(chǎn)生的，例如，通過修飾一個或多個本文公開的上述肽序列并按照本文所述用本領(lǐng)域內(nèi)公知的多種技術(shù)中的任何一種評估其生物活性。第二方面，本申請?zhí)峁┝饲逗想模浒钚噪暮蛢?nèi)化肽，其中所述活性肽為第一方面所述的肽，所述內(nèi)化肽能促進所述嵌合肽被細胞攝取。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，將活性肽和內(nèi)化肽嵌合的目的主要在于使活性肽更好地到達作用靶點，因此，適用于本申請的內(nèi)化肽并不局限于特定種類，只要能實現(xiàn)穿膜、內(nèi)化的目的即可。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當理解，由于活性肽的作用靶點主要位于神經(jīng)元細胞內(nèi)部，因此能特異性地適合于神經(jīng)元細胞的內(nèi)化肽是優(yōu)選的。在一些實施方案中，內(nèi)化肽可以為tat肽。在一些實施方案中，tat肽的氨基酸序列為ygrkkrrqrrr(seqidno:2)。在一些實施方案中，嵌合肽包含氨基酸序列ygrkkrrqrrryeklldtei(seqidno:3)。應(yīng)當理解，內(nèi)化肽可以與活性肽通過酰胺鍵連接而作為融合肽，但是也可以通過其他合適的方式進行接合，例如化學(xué)鍵接合。兩種組分的偶聯(lián)可以通過偶聯(lián)劑或綴合劑實現(xiàn)。大量這類試劑是可商業(yè)獲得的，并可以參見s.s.wong，chemistryofproteinconjugationandcross-linking,crcpress(1991)。交聯(lián)試劑的一些例子包括j-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸鹽(spop)或n，n'-(1，3-亞苯基)雙馬來酰亞胺；n，n’-亞乙基-雙-(碘乙酰胺)或具有6到11個碳亞甲基橋的其他這類試劑(其它巰基相對特異)；和1，5-二氟-2，4-二硝基苯(其與氨基和酪氨酸基形成不可逆的連接)。其他交聯(lián)試劑包括p，p’-二氟-m，m’-二硝基二苯砜(其與氨基和酚基形成不可逆的交聯(lián))；二乙胺代己酸二甲酯(其對氨基是特異的)；苯酚-1，4-二磺酰氯(其主要與氨基反應(yīng))；1，6-己二異氰酸酯或二異硫氰酸酯，或苯基偶氮-對-二異氰酸酯(其主要與氨基反應(yīng))；戊二醛(其與若干不同的側(cè)鏈反應(yīng))和雙重氮基聯(lián)苯胺(其主要與酪氨酸和組氨酸反應(yīng))。此外，前文所述的肽能夠任選地被衍生化(例如乙?；?、磷酸化和/或糖基化)以促進與抑制劑的親合力，促進抑制劑跨越細胞膜被轉(zhuǎn)運的能力，或促進穩(wěn)定性?？赏ㄟ^固相合成或重組方法合成本申請的活性肽以及與內(nèi)化肽融合的融合肽?？墒褂每茖W(xué)文獻和專利文獻中所述的多種方案和方法合成擬肽，所述科學(xué)文獻和專利文獻例如為organicsynthesescollectivevolumes,gilman等(編)johnwiley&sons,inc.,ny,al-obeidi(1998)mol.biotechnol.9:205-223；hruby(1997)curr.opin.chem.biol.1：114-119；0stergaard(1997)mol.divers.3:17-27；0stresh(1996)methodsenzymol.267:220-234。第三方面，本申請?zhí)峁┝怂幬锝M合物，其包含第一方面所述的肽或第二方面所述的嵌合肽，以及藥學(xué)可接受的載體。在一些實施方案中，本文公開的活性肽或嵌合肽可以以藥物組合物的形式被施用。藥物組合物可以通過常規(guī)的混合、溶解、制粒、制錠、研磨、乳化、包封、捕獲或凍干方法制造?？梢允褂靡环N或多種生理學(xué)可接受的便于將活性肽或嵌合肽加工成可藥用制劑的載體、稀釋劑、賦形劑或輔料，以常規(guī)方式配制藥物組合物。適當?shù)呐渲埔蕾囉谶x擇的施用途徑。在一些實施方案中，施用可以是腸胃外、靜脈內(nèi)、經(jīng)口、皮下、動脈內(nèi)、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部、鼻內(nèi)或肌內(nèi)的。優(yōu)選靜脈內(nèi)施用。在一些實施方案中，用于腸胃外施用的藥物組合物優(yōu)選地是無菌和基本等滲的。對注射而言，可以將活性肽或嵌合肽配制進水溶液中，優(yōu)選地配制進生理學(xué)兼容的緩沖液例如hank’s溶液、ringer’s溶液，或生理鹽水或乙酸緩沖液中(以減輕注射位點處的不適)。溶液可以含有配制劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。或者，活性肽或嵌合肽可以是用于在使用前用合適的運載體(例如無菌無熱源水)構(gòu)建的粉末形式。對跨粘膜施用而言，在配制物中使用適合要穿透的屏障的穿透劑。該施用途徑可被用于將化合物遞送至鼻腔或用于舌下施用。在一些實施方案中，對經(jīng)口施用而言，可以將活性肽或嵌合肽與可藥用的載體一起配制為片劑、丸劑、錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿體、懸浮液等，用于由被治療的患者經(jīng)口攝入。對于口服固體配制物例如粉末、膠囊和片劑而言，合適的賦形劑包括填充劑例如糖，如乳糖、 蔗糖、甘露醇和山梨糖醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚維酮(pvp)；制粒劑和粘合劑。如果需要，可以添加崩解劑，例如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂，或海藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。如果需要，可以使用標準技術(shù)對固體劑型進行糖包裹或腸溶衣包裹。對于口服液體制劑例如懸浮液、酏劑和溶液而言，合適的載體、賦形劑或稀釋劑包括水、甘油、油、醇。另外，可以添加調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等。除了先前所述的配制物以外，也可以將活性肽或嵌合肽配制成儲存制劑。可以通過植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射來施用這類長效配制物。因此，例如可將化合物與合適的多聚體材料或疏水材料(例如配制為可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂配制在一起，或配制為略溶的衍生物，例如配制為略溶的鹽?；蛘?，可以使用其他藥物遞送系統(tǒng)?？墒褂弥|(zhì)體和乳劑遞送嵌合肽。也可以使用某些有機溶劑例如二甲基亞砜。另外，可以使用持續(xù)釋放的系統(tǒng)(例如含有治療劑的固體聚合物的半滲透性基質(zhì))遞送化合物。根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，持續(xù)釋放膠囊可釋放嵌合肽數(shù)周直至超過100天。根據(jù)治療試劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，可以使用用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定的其他策略。在一些實施方案中，因為本文公開的活性肽或嵌合肽可含有帶電的側(cè)鏈或末端，所以它們可以作為游離酸或堿或作為可藥用的鹽包含在任何上述配制物中?？伤幱玫柠}是基本保留游離堿的生物活性并通過與無機酸反應(yīng)而制備的鹽。藥物鹽傾向于比相應(yīng)的游離堿形式更易溶于水和其它質(zhì)子溶劑。活性肽或嵌合肽以有效達到預(yù)期目的(例如減輕損傷性腦卒中和相關(guān)病癥的損傷效果)的量使用。治療有效量表示：相對于未用本文公開的活性肽或嵌合肽治療的患者(或動物模型)對照群體中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷而言，在用本文公開的活性肽或嵌合肽治療的患者(或動物模型群體)中，足以顯著降低腦卒中引起的損傷的活性肽或嵌合肽的量。如果與未通過本文公開的方法治療的可比較的患者對照群體中的平均輸出 (通過梗死體積或殘疾指數(shù)測定)相比，個體經(jīng)治療的患者達到更良好的輸出，則該量也被認為是治療上有效的。如果個體被治療的患者在rankin標度中顯示2或更少的殘疾以及在barthel標度中顯示75或更多，則所述量也被認為是治療上有效的量。如果與可比較的未治療群體相比，被治療的患者群體在殘疾標度上顯示顯著改進(即更少殘疾)的分值分布，則劑量也被認為是治療上有效的，見lees等，nengljmed2006；354:588-600。治療上有效的方案表示治療上有效的劑量和達到上述預(yù)期目的所需的施用頻率的組合。通常單一施用就足夠了。在一些實施方案中，優(yōu)選的劑量范圍包括腦卒中后6小時內(nèi)每kg患者體重0.001到20μmol活性肽或嵌合肽，任選地每kg患者體重0.03到3μmol活性肽或嵌合肽。在一些方法中，在6小時內(nèi)施用每kg患者體重0.1-20μmol活性肽或嵌合肽。在一些方法中，在6小時內(nèi)施用每kg患者體重0.1-10μmol活性肽或嵌合肽，更優(yōu)選在6小時內(nèi)施用每kg患者體重約0.3μmol活性肽或嵌合肽。在其他情況下，劑量范圍是每kg患者體重0.005到0.5μmol活性肽或嵌合肽?？梢酝ㄟ^除以6.2來補償不同的表面積：質(zhì)量比，將每kg體重的劑量從大鼠轉(zhuǎn)化為人。以克計，用于人的活性肽或嵌合肽的合適劑量可包括0.01到100mg/kg患者體重，或更優(yōu)選0.01到30mg/kg患者體重或0.01到10mg/kg，或0.01到1mg/kg。在一些實施方案中，施用的活性肽或嵌合肽的量取決于被治療的受試者、受試者的體重、痛苦的嚴重性、施用方式和開處方的醫(yī)師的調(diào)節(jié)。在癥狀可檢測時或甚至不可檢測時可重復(fù)治療。治療可單獨提供或者與其他藥物組合提供。在一些實施方案中，本文公開的活性肽或嵌合肽的治療上有效的劑量能夠提供治療益處而不引起重大的毒性。可以通過標準藥物步驟在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏袦y定嵌合肽的毒性，例如通過測定ld50(使50％群體致死的劑量)或ld100(使100％群體致死的劑量)來實現(xiàn)。毒性效應(yīng)和治療效應(yīng)的劑量比例是治療指數(shù)。優(yōu)選顯示高治療指數(shù)的嵌合肽或擬肽(見例如fingl等，1975,in:thepharmacologicalbasisoftherapeutics,第1章，第1頁)。在一些實施方案中，藥物組合物用于治療、改善或預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)損傷或該損傷引起的疾病或疼痛，或者用作神經(jīng)元保護劑。在一些實施方案中，所述神經(jīng)系統(tǒng)損傷為興奮性神經(jīng)毒性引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，其中所述損傷位于外周神經(jīng)系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在一些實施方案中，興奮性神經(jīng)毒性引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷包括選自腦卒中或脊髓損傷、腦或脊髓的缺血性或創(chuàng)傷性損傷以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)神經(jīng)元的損傷，包括急性cns損傷、缺血性腦卒中或脊髓損傷，以及缺氧、缺血、機械損傷和神經(jīng)退行性疾病、焦慮、癲癇、腦卒中引起的損傷。在一些實施方案中，藥物組合物用于治療、改善或預(yù)防缺血性腦卒中導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷。腦卒中是由cns中受損的血流導(dǎo)致的病癥?？赡艿脑虬ㄋㄈ⒊鲅脱ㄐ纬?。一些神經(jīng)元細胞由于受損的血流而立即死亡。這些細胞釋放其組分分子(包括谷氨酸)，所述組分分子隨后活化nmda受體，所述nmda受體提高細胞內(nèi)鈣水平和胞內(nèi)酶水平，導(dǎo)致更多的神經(jīng)元細胞死亡(興奮性神經(jīng)毒性級聯(lián)放大)。cns組織的死亡被稱作梗死。梗死體積(即腦中由腦卒中導(dǎo)致的死亡的神經(jīng)元細胞的體積)可以被用作腦卒中導(dǎo)致的病理學(xué)損傷程度的指標。癥狀性效果既取決于梗死體積，也取決于梗死在腦中位于何處。殘疾指數(shù)可被用作癥狀性損傷的度量，例如rankin中風輸出標度(rankinstrokeoutcomescale,rankin,scottmedj；2:200-15(1957))和barthel指數(shù)(barthelindex)。rankin標度以如下直接評價患者的全局病癥為基礎(chǔ)：0完全沒有癥狀。1盡管有癥狀但是沒有顯著的殘疾；能夠進行所有日常工作和活動。2輕微殘疾；不能進行所有先前的活性，但是能夠照顧自己的事務(wù)而不需要幫助。3需要一些幫助的中度殘疾，但是能夠行走而不需要幫助。4中度到嚴重的殘疾，不受幫助時不能行走，并且不受幫助時不能照顧自身的身體需要。5嚴重殘疾；臥床不起，失禁，并需要持久的護理和關(guān)注。barthel指數(shù)以關(guān)于患者進行10種基本日常生活活動的能力的一系列 問題為基礎(chǔ)，所述問題得到0和100之間的分數(shù)，較低的分數(shù)表示較多的殘疾(mahoney等,marylandstatemedicaljournal14:56-61(1965)?；蛘呖墒褂胣ih腦卒中標度測量腦卒中嚴重性/輸出，所述nih腦卒中標度可在萬維網(wǎng)ninds.nih.gov/doctors/nih_stroke_scale_booklet.pdf上獲得。該標度以患者實行11組功能的能力為基礎(chǔ)，所述功能包括評價患者的意識、運動、感受和語言功能水平。缺血性腦卒中更明確地表示由于通向大腦的血流被堵塞而引起的一類腦卒中。這類堵塞的潛在病癥最常見地是沿血管壁的脂肪沉著物的發(fā)生。該病癥被稱作動脈粥樣硬化。這些脂肪沉著物能夠引起兩種梗阻。腦血栓形成是指在血管的阻塞部分產(chǎn)生的血栓(血塊)?！澳X栓塞”通常是指血液中的各種栓子(如心臟內(nèi)的附壁血栓、動脈粥樣硬化的斑塊、脂肪、腫瘤細胞、纖維軟骨或空氣等)隨血流進入腦動脈而阻塞血管，當側(cè)枝循環(huán)不能代償時，引起該動脈供血區(qū)腦組織缺血性壞死，出現(xiàn)局灶性神經(jīng)功能缺損。栓塞的第二個重要原因是不規(guī)則的心博，稱作動脈肌纖維震顫。其引起下述病癥，其中血塊可在心中形成，移動并轉(zhuǎn)移至腦。缺血性腦卒中的其他潛在原因是出血、血栓形成、動脈或靜脈的切割、心臟停博、任何原因(包括出血)引起的休克，和醫(yī)源性原因，如對腦血管或?qū)蚰X的血管的直接手術(shù)損傷或心臟手術(shù)。缺血性腦卒中構(gòu)成所有腦卒中病例的約83％。若干種其他神經(jīng)病學(xué)病癥也可以通過ndmar介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性導(dǎo)致神經(jīng)死亡。這些病癥包括神經(jīng)退行性疾病、焦慮、癲癇、缺氧、與腦卒中無關(guān)的對cns的創(chuàng)傷如創(chuàng)傷性腦損傷和脊髓損傷。因此，在一些實施方案中，藥物組合物用于治療、改善或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病、焦慮或癲癇，其中所述神經(jīng)退行性疾病包括阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、帕金森氏病或亨廷頓氏病。第四方面，本申請?zhí)峁┝酥委煛⒏纳苹蝾A(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)損傷及該損傷相關(guān)的疾病或疼痛、神經(jīng)退行性疾病、焦慮或癲癇的方法，包括向有需要的個體給予第一方面所述的肽，或第二方面所述的嵌合肽，或第三方面所述的藥物組合物。在一些實施方案中，興奮性神經(jīng)毒性引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷包括選自腦卒中或脊髓損傷、腦或脊髓的缺血性或創(chuàng)傷性損傷以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)神經(jīng)元的損傷，包括急性cns損傷、缺血性腦卒中或脊髓損傷，以及缺氧、缺血、機械損傷和神經(jīng)退行性疾病、焦慮、癲癇、腦卒中引起的損傷。在一些實施方案中，神經(jīng)退行性疾病包括阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、帕金森氏病或亨廷頓氏病。在一些實施方案中，個體為經(jīng)歷缺血性腦卒中的個體。在一些實施方案中，給予本申請第一方面所述的肽，或第二方面所述的嵌合肽，或第三方面所述的藥物組合物能夠降低腦缺血導(dǎo)致的腦梗塞部分的體積。第五方面，本申請?zhí)峁┝说谝环矫嫠龅碾?，或第二方面所述的嵌合肽，或第三方面所述的藥物組合物在制備用于治療、改善或預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)損傷及該損傷相關(guān)的疾病或疼痛、神經(jīng)退行性疾病、焦慮或癲癇，的藥物或神經(jīng)元保護劑中的用途。在一些實施方案中，興奮性神經(jīng)毒性引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷包括選自腦卒中或脊髓損傷、腦或脊髓的缺血性或創(chuàng)傷性損傷以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)神經(jīng)元的損傷，包括急性cns損傷、缺血性腦卒中或脊髓損傷，以及缺氧、缺血、機械損傷和神經(jīng)退行性疾病、焦慮、癲癇、腦卒中引起的損傷。在一些實施方案中，神經(jīng)退行性疾病包括阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、帕金森氏病或亨廷頓氏病。在一些實施方案中，所述藥物用于治療、改善或預(yù)防缺血性腦卒中導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷。應(yīng)當理解，以上詳細描述僅為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更清楚地了解本申請的內(nèi)容，而并非意圖在任何方面加以限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)λ鰧嵤┓桨高M行各種改動和變化。實施例提供以下實施例是僅僅是對本申請的一些實施方案進行舉例說明，沒有任何限制的目的或性質(zhì)。實施例1：活性肽分子的篩選根據(jù)已報道的研究結(jié)果，選取tat穿膜肽ygrkkrrqrrr(seqidno:2)，并將其與不同數(shù)目的氨基酸相連接，形成肽庫。將肽庫中的嵌合肽分子，分別與體外表達并純化的pdz1/2結(jié)構(gòu)域相互作用，根據(jù)相互作用力的強弱，對多肽進行初步篩選。固定的分子(配體)為pdz1/2蛋白，分子量：～20kd，濃度：2mg/ml；流動相的分子(分析物)：待篩選多肽，分子量：～2kd，濃度：10mg/ml。使用biacore3000儀器，cm5芯片進行固定。電泳緩沖液為pbs+0.005％吐溫20。使用氨基偶聯(lián)方法進行固定。配體的濃度為10μg/ml。固定緩沖液為10mm醋酸鈉，ph4.0。固定量：1400ru，固定至流動細胞2。使用的流速為10μl/ml，配體進樣1分鐘。使用ph2.0+2.5的10mmgly作為再生液，以30μl/分鐘的流速進行再生。進樣時間為30s。使用下述條件進行動力學(xué)分析：對照通道：流動細胞1；電泳緩沖液為pbs；使用kineticanalysiswizard模式，濃度梯度為6.25n、12.5n、25n、50n、100n、200n、400nm；進樣時間為1分鐘；解離時間為2min；流速為30μl/分鐘。用擬和軟件biaevaluation4.1軟件對數(shù)據(jù)進行擬合。擬和模型為1：1結(jié)合模型。解離常數(shù)kd值與作用力呈反比。通過篩選，獲得了與pdz1/2結(jié)構(gòu)域具有較強相互作用能力的嵌合肽，將其命名為p5，序列如下：p5:ygrkkrrqrrryeklldtei(seqidno:3)為了直接與已報道的研究中的類似嵌合肽進行比較，引入了對照嵌合肽na-1，序列如下：na-1：ygrkkrrqrrrklssiesdv(seqidno:4)此外，通過比較p5與na-1的結(jié)構(gòu)差異，另外引入了在嵌合肽na-1的活性肽的n端加入ye兩個殘基的嵌合肽ye-na-1，序列如下：ye-na-1：ygrkkrrqrrryeklssiesdv(seqidno:5)將嵌合肽na-1、ye-na-1和p5同時進行上文所述的與pdz1/2結(jié)構(gòu)域相互作用的測試，結(jié)果如下文表1所示：表1.三種嵌合肽與pdz1/2結(jié)構(gòu)域相互作用力檢測嵌合肽na-1ye-na-1p5kd(m)7.53e-085.44e-082.99e-08如表1所示，相比于對照嵌合肽na-1，嵌合肽ye-na-1及p5與pdz1/2結(jié)構(gòu)域相互作用力更強，并且p5的作用性質(zhì)更佳。因此，據(jù)發(fā)明人的推測，活性肽的n端額外的ye兩個氨基酸殘基對多肽與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用有一定的增強作用。此外，p5相對于ye-na-1的羧基端減少了兩個疏水性較弱的絲氨酸(ss)，據(jù)發(fā)明人的推測，這可能因此進一步增加了多肽與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用。以下實驗中對嵌合肽p5進行進一步地測試，并在部分實驗中將na-1和ye-na-1作為對照。實施例2：pull-down實驗檢測p5與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用為證明p5能與pdz1/2結(jié)構(gòu)域相互作用，進行pull-down實驗。用100μl的his珠子和1ml的mcac-0緩沖液將柱子平衡5min。在4℃震蕩。將混合物在4℃，以5000g離心1分鐘，棄上清。向混合物中加入1mgpdz1/2蛋白，并用緩沖液補齊至1ml。在4℃，將所述混合物旋轉(zhuǎn)結(jié)合1小時。將所述混合物在4℃，以5000g離心1分鐘，棄上清。用1ml的mcac-0緩沖液清洗3次，每次5分鐘(在4℃，震蕩洗滌)。向混合物中加入1mgp5蛋白，并用緩沖液補齊至1ml。在4℃，將所述混合物旋轉(zhuǎn)結(jié)合2小時。將所述混合物在4℃，以5000g離心1分鐘，棄上清。用1ml裂解液進行清洗3次，每次5分鐘(在4℃，震蕩洗滌)。清洗之后加入20μlmcac-300。離心，取洗脫液進行sds-page檢測。實驗結(jié)果顯示于圖1。如圖1所證實，嵌合肽p5的洗脫條帶中同時包含p5和pdz1/2結(jié)構(gòu)域兩者，由此證實嵌合肽p5能夠結(jié)合pdz1/2結(jié)構(gòu)域。實施例3:嵌合肽對大鼠mcao模型的治療效果mcao制備方法及評分標準：局灶性腦缺血再灌注模型的制備根據(jù)longa提出的可逆性大腦中動脈閉塞(mcao)線栓法并根據(jù)大鼠腦解剖結(jié)構(gòu)圖加以改進制作局灶性腦缺血再灌注模型，以10％水合氯醛0.3ml/kg腹腔麻醉，頸正中切口，暴露頸總動脈(cca)、頸外動脈(eca)及翼腭動脈，將0.26mm單絲尼龍魚線頭端0.5cm用石蠟包被,并于20mm長處標記，全部大鼠均通過右側(cè)cca切口處插入，翼腭動脈短暫夾閉以防誤插，栓線長度自cca分叉處約18～20mm，根據(jù)動物體重而定，栓塞右側(cè)大腦中動脈，然后縫合皮膚，栓線尾端部分固定于皮膚上。缺血達到2h后小心抽出栓線，即形成再灌注。假手術(shù)對照只是不插入尼龍魚線，其余步驟同手術(shù)組。在缺血期間及再灌注后2h保持體溫在(37±0.5)℃。模型成功的標志為以大鼠手術(shù)麻醉清醒后出現(xiàn)左側(cè)肢體癱瘓，站立不穩(wěn)，提尾時向一側(cè)轉(zhuǎn)圈為模型成功的判斷標準。神經(jīng)功能缺失體征評分參考longa及bederson的5分制法，在動物麻醉清醒后24h進行評分。0分：無神經(jīng)損傷癥狀；1分：不能完全伸展對側(cè)前爪；2分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分：向?qū)?cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。分值越高，說明動物行為障礙越嚴重。實驗用動物及材料動物：采用成年sd大鼠(維通利華)，spf級，體重220-250g，雄性。器械和藥品：線剪1把、眼外科剪2把、彎鑷4把、4#，5#手術(shù)縫線、6×17三角形縫針、0.26mm直徑的栓線、持針鉗1把。恩比普氯化鈉注射液(石藥集團恩必普藥業(yè)有限公司)，水合氯醛、速尿(20mg/支)、硫酸慶大霉素(80mg/支)，棉簽，醫(yī)用托盤等。多肽由金斯瑞生物科技公司合成。實驗分組實驗分陰性對照組，假手術(shù)組，模型組，陽性藥物恩必普組，na-1組，ye-na-1組，p5組。在缺血后1h，分別將生理鹽水，陽性藥恩必普，na-1組(10mg/kg)，ye-na-1(10mg/kg)組，p5(10mg/kg)，p5(3mg/kg)， p5(1mg/kg)經(jīng)尾靜脈注射給予各組大鼠。正常組與假手術(shù)對照組不給予任何藥物。梗死體積計算評分后大鼠斷頭處死，迅速將取出的腦組織置于-20℃冰箱，10min后置室溫環(huán)境，將腦置于大鼠腦切片模具中，切除嗅球，小腦和低位腦干后按圖譜所示間隔2mm冠狀切五刀，切成6個大腦連續(xù)冠狀粗切片。然后迅速將腦片置于5ml含2％ttc的溶液中，37℃恒溫、避光孵育30min，期間每隔5min將腦片翻動一次。經(jīng)ttc染色后，正常組織呈玫瑰紅色，梗死組織未被染色而呈白色。將每組腦片排列整齊，拍照保存，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)軟件處理并作統(tǒng)計，計算每張腦片的梗塞面積，乘以每片腦片的厚度2mm，每只動物所有腦片梗塞面積乘以厚度相加，即為腦梗塞體積。體積以所占大腦半球的百分率表示，以消除腦水腫的影響。實驗結(jié)果實驗結(jié)果如圖2所示。根據(jù)對圖2中的腦梗死體積的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析作出如圖3所示的腦梗死體積數(shù)據(jù)統(tǒng)計的直方圖，同時腦梗死體積的具體統(tǒng)計數(shù)據(jù)在如下表2中給出。結(jié)果顯示最高劑量(10mg/kg)的p5的治療給藥和預(yù)防給藥均能將腦缺血大鼠的腦梗死體積顯著減少約50％(p＜0.01)，而陽性藥物恩必普注射液組僅減少了約16％(p＜0.01)，na-1組減少了約16％(p＜0.01)，以及ye-na-1組減少了約26％(p＜0.01)。次高劑量(3mg/kg)的p5的治療給藥和預(yù)防給藥也較好地減少腦梗死體積。此外，數(shù)據(jù)顯示減少梗死體積的數(shù)值隨而p5的劑量增加而減少，治療效果與藥物濃度呈正相關(guān)。其中多肽ye-na-1的治療效果要顯著優(yōu)于na-1，據(jù)發(fā)明人的推測，ye兩個氨基酸的加入可能通過增加了多肽與pdz1/2結(jié)構(gòu)域的相互作用，從而比na-1表現(xiàn)出更好的治療效果。表2.多肽p5對大鼠mcao模型的治療效果實施例4:p5在大鼠腦內(nèi)分布將正常對照大鼠與mcao模型造模后1h，分別經(jīng)尾靜脈注射生理鹽熒光標記的多肽fitc-p5，10mg/kg，在給藥后12h小時處死大鼠，迅速取出腦組織，放置在小動物活體成像系統(tǒng)裝置中，進行熒光檢測。熒光檢測完畢后，將腦組織放入ttc染液中進行染色，判斷缺血區(qū)域與藥物分布的相關(guān)性。如圖4和5所示，正常鼠腦可完全被ttc染色，其中并無熒光標記的多肽分布，而缺血鼠腦的缺血部位不能被ttc染色，且熒光標記的多肽分布在以中動脈區(qū)域為核心缺血區(qū)的缺血部位，提示多肽p5能夠靶向分布于缺血部位，發(fā)揮治療作用，并且其分布量與缺血程度呈正相關(guān)。實施例5：he染色觀察組織學(xué)變化各組大鼠均于缺血24h斷頭取腦，以視交叉附近冠狀切片，切片厚度約為4mm，以10％福爾馬林溶液固定切片，70％至100％的酒精濃度梯度脫水，然后于二甲苯中透明兩次，再入石蠟中進行包埋，仔細修好蠟塊后固定于石蠟切片機上進行切片，片厚為4μm，將蠟片完全展開并貼附在清潔干燥的載玻片上，4℃冰箱保存，進行常規(guī)he染色，光鏡觀察 染色結(jié)果。實驗結(jié)果如由圖6所示：正常腦組織神經(jīng)細胞核仁清晰、核圓形，核膜完整；而缺血模型組大鼠缺血側(cè)腦組織出現(xiàn)嚴重的神經(jīng)細胞壞死，細胞腫脹，胞核濃縮，胞漿疏松淡染及空泡化；p5，10mg/kg治療及預(yù)防給藥組上述病理變化明顯改善，且結(jié)果優(yōu)于陽性藥物恩必普注射液，na-1及ye-na-1，10mg/kg。實施例6：急性毒性試驗用大鼠進行急性毒性試驗。結(jié)果表明：在200mg/kg體重的給藥劑量下，p5對大鼠無致死作用和其它明顯的毒副作用。本說明書中引用的所有出版物和專利文獻引入本文作為參考，如同每個出版物或?qū)＠环謩e明確指明引入本文作為參考。在不偏離本申請公開的真實思想和范圍的情況下，可對本申請公開的各實施方案進行多種改變和用等同物替換。除非上下文中另有說明，否則本公開的實施方案的任何特征、步驟或?qū)嵤┓桨付伎梢耘c任何其他特征、步驟或?qū)嵤┓桨附M合使用。當前第1頁12