本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物的提取分離領域，具體涉及一種枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的連續(xù)提取方法。

背景技術：

枇杷，又名蘆橘，金丸、蘆枝，是薔薇科中蘋果亞科的一個屬，常綠小喬木，因其果實的形狀似琵琶而得名，同時枇杷也因其各種功效被稱為“果之冠”。枇杷具有豐富的營養(yǎng)價值和極高的醫(yī)療價值，枇杷的果實、種子、花、葉均可以入藥。中國是最主要的枇杷生產(chǎn)國，主產(chǎn)區(qū)為江蘇、福建和浙江，栽培面積和產(chǎn)量占世界的2/3以上，果肉部分被拿來鮮食或加工之后，果核一般被當做廢棄物丟掉，而枇杷果核約占整個枇杷鮮重的20％，所以枇杷果核的丟棄是對資源的一種浪費。因此，對枇杷核進行深度開發(fā)利用，對綜合利用枇杷資源，開發(fā)新產(chǎn)品，提高枇杷的經(jīng)濟價值，具有十分重要的經(jīng)濟效益和社會效益。

枇杷果核營養(yǎng)豐富，研究表明枇杷核富含淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪酸等營養(yǎng)成分，并含有苦杏仁苷、多酚、三萜類物質(zhì)、皂苷或水溶性多糖等多種生物活性物質(zhì)，具有增強免疫功能、抗氧化、抗炎、降血糖等功效。因此，對枇杷果核中苦杏仁苷和多酚類物質(zhì)的提取具有明顯的經(jīng)濟價值與社會效益。

目前，枇杷果核中苦杏仁苷和多酚類物質(zhì)的提取方法有一些專利和文獻報道。一般均是以不同濃度的乙醇或甲醇等親水性溶劑進行提取，有的還輔之以超聲或微波提取。一般提取完還需進一步進行大孔樹脂富集和重結晶等過程進行純化?，F(xiàn)有提取方法只提取其中苦杏仁苷或多酚其中一類物質(zhì)，且提取完后還要進行進行純化，耗時較長且工藝繁瑣。

目前沒有同時提取兩種生物活性物質(zhì)的報道。而且，對比多酚類和苦杏仁苷的提取方法可以發(fā)現(xiàn)，由于所使用的提取溶劑性質(zhì)極為相似，往往提取一類物質(zhì)時會混有大量的另一類物質(zhì)，這為后續(xù)分離和提純帶來相應的困難。因此，尋找一種集成式階梯提取方法，可以使枇杷果核中多酚類和苦杏仁苷依次被提取和分離純化出來，對于枇杷果核的綜合利用極具經(jīng)濟價值和社會效益。

技術實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有的枇杷果核中生物活性物質(zhì)的提取方法只提取一類物質(zhì)、提取與分離分開進行耗時長且工藝繁瑣的缺點，本發(fā)明的目的是提供一種枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的連續(xù)提取方法，將分離與提純集合為一體，同時得到高純度的多酚和苦杏仁苷。

為達到上述目的，本發(fā)明提供的技術方案為，一種枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的連續(xù)提取方法，包括如下步驟：

1)預先在提取裝置的分離純化室加入硅膠；

2)將枇杷果核粉末加入成分提取反應室；

3)在溶劑池中加入4～8倍枇杷果核粉末重量的碳酸二甲酯與乙醇混合溶劑，加熱攪拌回流2～4小時，提取多酚類物質(zhì)；然后將提取液從溶劑池放出，得到多酚類物質(zhì)提取液；

4)往溶劑池中注入3～9倍枇杷果核粉末重量的40％～75％的乙醇水溶液，繼續(xù)加熱攪拌回流2～4小時，提取苦杏仁苷類物質(zhì)；將提取液從溶劑池放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)將步驟3)得到的多酚類提取液進行濃縮后，往濃縮物中加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～30％的乙醇水溶液，冷卻、析出固體、過濾得到高純度的多酚類物質(zhì)；

6)將步驟4)得到的苦杏仁苷提取液進行濃縮后，加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～40％的乙醇水溶液，調(diào)pH值至7，在4～10℃下冷藏、靜置析晶，過濾得到高純度的苦杏仁苷白色晶體。

進一步地，步驟1)中所述硅膠為市面所售100～200目的普通硅膠；所述硅膠的重量為所述枇杷果核粉末重量的1～5倍；所述枇杷果核粉末以漳州云霄出產(chǎn)的新鮮枇杷果核為原料，經(jīng)水洗、風干、粉碎后過20-30目篩獲得。

進一步優(yōu)選地，在步驟3)之前，在溶劑池中加入2～3倍枇杷果核粉末重量的石油醚或乙醚攪拌回流1～2小時后，棄去提取液。

進一步地，步驟3)中所述碳酸二甲酯與乙醇混合液的重量比(w/w)可為9:1～1:9，在提取過程中，可往溶劑池中加入乙醇調(diào)節(jié)混合液的極性，如加熱回流1小時后將碳酸二甲酯與乙醇混合液的體積調(diào)制5:1～1：5，在某些實施方案中，所述碳酸二甲酯與乙醇混合液的重量比(w/w)可為1:1。

所述多酚類物質(zhì)包括黃酮類和非黃酮類，主要包括綠原酸、沒食子酸、咖啡酸、兒茶素、表兒茶酸、單寧酸、阿魏酸等一種或幾種化合物；所述多酚類物質(zhì)的純度可采用福林酚法分光光度計測定或高效液相色譜法測定，純度在90％以上，或95％以上。

進一步優(yōu)選的，步驟4)往溶劑池中注入4～5倍枇杷果核粉末重量的50％～60％的乙醇水溶液。

進一步地，步驟5)所述苦杏仁苷白色晶體的純度可采用苦杏仁苷標準品分光光度計測定或高效液相色譜法測定，所述高純度是指苦杏仁苷的含量在99％以上。

本發(fā)明采用碳酸二甲酯與乙醇混合液不僅能有效提取多酚類物質(zhì)，而且改變碳酸二甲酯與乙醇的比例調(diào)節(jié)混合溶劑極性，恰好能有效地將多酚類物質(zhì)從硅膠層洗脫下來，而極性更大的苦杏仁苷不被洗脫。當多酚類物質(zhì)洗脫完畢，改用極性更大的乙醇水溶液進行提取并洗脫，可以順利將苦杏仁苷洗脫下來。因此，利用不同溶劑極性不同的特點，達到多酚類和苦杏仁苷分別被洗脫下來的目的，這一過程將分離和提純合并在一起，依次提取了兩種生物活性物質(zhì)。

本發(fā)明的優(yōu)點是：

1)將分離與純化集合于一體，工藝簡單，節(jié)時省能；所提取的多酚類物質(zhì)經(jīng)過一次結晶或沉淀的純度高于95％，苦杏仁苷經(jīng)過一次結晶或沉淀的純度在99％以上，提取率在90％以上。

2)選擇性的在眾多活性成分中先后依次提取了多酚類和苦杏仁苷，而極少參雜其他活性成分。

3)所用的提取溶劑為碳酸二甲酯與乙醇混合溶液和乙醇水溶液，無毒無害，符合綠色環(huán)保標要求。

說明書附圖

圖1是本發(fā)明所述提取裝置的縱向剖面示意圖；

圖1中，1是常規(guī)的水冷式冷凝管；2是水冷式冷凝管1的低位進水口；3是溶劑蒸汽向上輸送的溶劑蒸汽輸送管的進氣室；4是成分提取室，本圖所示的成分提取反應室由兩個抽屜構成；5是抽屜支撐滑軌；6是分離純化室，本圖所示的成分提取反應室由三個抽屜構成；7是抽屜的面板；8是控制閥門A；9是溶劑回收室；10是檢測取樣口；11是溶劑添加管；12是用于更換另一種溶劑后溶劑池清洗的進水管；13是加熱水浴池；14是位于加熱水浴池13內(nèi)待加熱的溶劑池；15是溶劑排出管；16是用于為加熱水浴池供熱源的蒸汽管；17是水冷式冷凝管1的高位出水口；18是溶劑蒸汽向上輸送的溶劑蒸汽輸送管；19是控制閥門B；20是用于控制溶劑溫度平衡的磁力攪拌器。所述提取裝置已在專利ZL200920138048.3公開。

具體實施方式

下面結合具體實施例和附圖對發(fā)明做進一步說明。

實施例1

參見圖1：

1)在提取裝置的分離純化室6中加入100g 100-200目硅膠；

2)以漳州云霄出產(chǎn)的新鮮枇杷果核為原料，經(jīng)水洗、風干、粉碎后過20-30目篩得枇杷果核粉末，將100g枇杷果核粉末置于提取裝置的成分提取反應室4中；

3)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入500g碳酸二甲酯與乙醇混合液(重量比1:1)，通入蒸汽對水浴加熱池13進行加熱至回流，攪拌，開始提取多酚類物質(zhì)；加熱循環(huán)回流提取3小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到多酚類提取液；

4)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入500g 60％的乙醇水溶液，加熱循環(huán)回流提取3小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)將步驟3)得到的多酚類提取液真空濃縮，往濃縮液加入150g的15％的乙醇水溶液，4～10℃下靜置析晶，過濾得到多酚類物質(zhì)1.6g，采用福林酚法分光光度計測定，多酚類物質(zhì)的純度為95.4％；

6)將得到的苦杏仁苷提取液真空濃縮，加入18％的乙醇水溶液溶解，用1MHCl溶液和氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7，4～10℃下靜置析晶，過濾得到苦杏仁苷白色晶體2.0g，提取率為92％，經(jīng)HPLC測定苦杏仁苷白色晶體的純度為99.5％。

實施例2

參見圖1：

1)在提取裝置的分離純化室6中加入200g 100-200目硅膠；

2)以漳州云霄出產(chǎn)的新鮮枇杷果核為原料，經(jīng)水洗、風干、粉碎后過20-30目篩得枇杷果核粉末，將300g枇杷果核粉末置于提取裝置的成分提取反應室4中；

3)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入500g碳酸二甲酯與乙醇混合液(重量比9:1)，通入蒸汽對水浴加熱池13進行加熱至回流，攪拌，開始提取多酚類物質(zhì)；加熱循環(huán)回流提取1小時后，往溶劑池中加入50g乙醇，繼續(xù)加熱回流2.5小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到多酚類提取液；

4)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入1200g 50％的乙醇水溶液，加熱循環(huán)回流提取3.5小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)將步驟3)得到的多酚類提取液真空濃縮，往濃縮液加入400g的20％的乙醇水溶液，冷卻至析出固體，4～10℃下冷藏、靜置析晶，過濾得到多酚類物質(zhì)3.6g，采用福林酚法分光光度計測定，多酚類物質(zhì)的純度為95.2％；

6)將得到的苦杏仁苷提取液真空濃縮，加入300g 5％乙醇水溶液，用1M HCl溶液和氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7，4～10℃下冷藏、靜置析晶，過濾得到苦杏仁苷白色晶體4.7g，經(jīng)HPLC測定苦杏仁苷白色晶體的純度為99.1％。

實施例3

1)在提取裝置的分離純化室6中加入200g 100-200目硅膠；

2)以漳州云霄出產(chǎn)的新鮮枇杷果核為原料，經(jīng)水洗、風干、粉碎后過20-30目篩得枇杷果核粉末，將300g枇杷果核粉末置于提取裝置的成分提取反應室4中；2a)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入400g石油醚，回流攪拌2小時后，將溶劑池中的提取液棄去；

3)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入500g碳酸二甲酯與乙醇混合液(重量比9:1)，通入蒸汽對水浴加熱池13進行加熱至回流，攪拌，開始提取多酚類物質(zhì)；加熱循環(huán)回流提取1小時后，往溶劑池中加入50g乙醇，繼續(xù)加熱回流2.5小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到多酚類提取液；

4)通過溶劑添加管11在溶劑池14中注入1200g 50％的乙醇水溶液，加熱循環(huán)回流提取3.5小時，然后將提取液從溶劑池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)將步驟3)得到的多酚類提取液真空濃縮，往濃縮液加入400g的20％的乙醇水溶液，冷卻至析出固體，4～10℃下冷藏、靜置析晶，過濾得到多酚類物質(zhì)3.6g，采用福林酚法分光光度計測定，多酚類物質(zhì)的純度為95.2％；

6)將得到的苦杏仁苷提取液真空濃縮，加入300g 5％乙醇水溶液，用1M HCl溶液和氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7，4～10℃下冷藏、靜置析晶，過濾得到苦杏仁苷白色晶體4.6g，經(jīng)HPLC測定苦杏仁苷白色晶體的純度為99.5％。