本發(fā)明涉及一種從煙草廢料中提取綠原酸的制備方法，屬于綠原酸領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，屬于苯丙素類化合物，主要存于金銀花、杜仲、可可樹以及咖啡等植物中。綠原酸作為藥物合成的重要原料，對防治心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病有顯著的療效，也廣泛應用與食品保鮮、化妝品中抗衰老以及預防肥預等方面，在醫(yī)藥及人口健康等領(lǐng)域具有廣闊的市場應用前景。但綠原酸本身具有不穩(wěn)定性，從植物中提取的過程中，高溫、強光以及長時間加熱等條件可加速綠原酸水解以及分子內(nèi)酯基遷移，發(fā)生綠原酸異構(gòu)化。
目前，植物提取物的濃縮過程通常由加熱、常減壓蒸餾的辦法來實現(xiàn)。但由于長時間加熱，可使溶液中的綠原酸分解，使綠原酸產(chǎn)品得率降低。而以金銀花為原料生產(chǎn)綠原酸是我國綠原酸的主要生產(chǎn)方式。目前，國內(nèi)金銀花中綠原酸的制備一般是先將綠原酸提取液醇沉或絮凝沉淀后，采用大孔樹脂進行分離純化，但是，在生成沉淀的過程中會伴有綠原酸的包夾，導致綠原酸的大量損失，產(chǎn)率低。另外，沉淀法除雜效果差，產(chǎn)品純度低。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對以金銀花為主要原料并采用大孔樹脂進行分離純化，而導致綠原酸的大量損失，產(chǎn)率低，同時制備的綠原酸雜質(zhì)多，純度低的問題，本發(fā)明主要是以煙草廢料為主要原料，利用無水乙醇對其進行超聲萃取，得到濾液和濾渣，將濾渣進行酶解，得到煙草廢料酶解液，將其進行分離，得到的上清液與濾液混合后，并利用CO2超臨界萃取，得到多酚類化合物溶液，最后利用液氮對其降溫提取，即可得到綠原酸。本發(fā)明制備的綠原酸產(chǎn)率高，純度高，可應用于大規(guī)模生產(chǎn)中。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是：
（1）稱取30～40g煙草廢料，用去離子水進行洗滌3～5次，并用粉碎機粉碎，將粉碎后的煙草粉末加入到燒杯中，向燒杯中加入300～400mL無水乙醇，并置于3000～3200W超聲波萃取機上，超聲提取40～50min，過濾，分別收集濾液和濾渣，濾液備用；
（2）將濾渣置于酶解罐中，同時向酶解罐中依次加入300～400mL無水乙醇、50～100mLpH為6.8～7.0磷酸鹽緩沖溶液，攪拌30～40min，再向酶解罐中依次加入0.5～0.7g果膠酶、1～3g纖維素酶、1～3g半纖維素酶，控制酶解罐內(nèi)溫度為45～55℃，攪拌反應2～3h，反應結(jié)束，將溫度升至110～120℃，加熱20～30min，再降溫至室溫，得到煙草廢料酶解液；
（3）將上述煙草廢料酶解液放入6000～8000r/min離心機中離心分離10～20min，棄去下層雜質(zhì)，得到煙草廢料酶解上清液，再將所得酶解上清液與步驟（1）中備用的濾液加入CO2超臨界萃取儀中，再加入100～200mL無水乙醇，控制萃取壓力為25～35MPa，萃取溫度為35～40℃，CO2的流量為25～35kg/h，萃取20～30min，得到多酚類化合物溶液；
（4）向上述多酚類化合物溶液中加入2～4g活性炭，攪拌5～10min，過濾，得濾液，用0.5～0.7L液氮噴淋濾液，使濾液溫度降至-50～-40℃，過濾，得到濾渣，將濾渣置于燒瓶中，向燒瓶中加入200～300mL無水乙醇，將0.1～0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30～-20℃，過濾，得到濾液，再用0.3～0.5L液氮噴淋濾液，使溶液溫度降至-40～-30℃，過濾，收集濾渣；
（5）將上述收集的濾渣置于25～30℃真空干燥箱內(nèi)干燥1～2h，即可得到從煙草廢料中提取的綠原酸。
本發(fā)明的應用方法：稱取10～15g上述制備的從煙草廢料中提取的綠原酸，將其溶解于150～200mL質(zhì)量分數(shù)為15％乙醇溶液中，待溶解完成后，向其加入1～2g甜菊素，2～3g苯甲酸鈉，攪拌混合直至均勻，再利用質(zhì)量分數(shù)為15％碳酸氫鈉調(diào)節(jié)其pH值為7.0～7.5，待調(diào)節(jié)結(jié)束后，經(jīng)活性炭進行脫色，再經(jīng)微孔濾膜過濾，將濾液滅菌即可得到口服液，該口服液可用于保健藥品，具有清熱解毒，養(yǎng)顏潤膚、解救等功效。
本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：
（1）本發(fā)明主要利用液氮冷凍提取，避免了綠原酸大量損失，提高了其提取率，提取率達到97％以上；
（2）本發(fā)明從煙草廢料中提取的綠原酸純度較高，達到98％以上；
（3）本發(fā)明主要是以煙草廢料為主原料，資源化再利用，所需成本低，且制備步驟簡單。
具體實施方式
首先稱取30～40g煙草廢料，用去離子水進行洗滌3～5次，并用粉碎機粉碎，將粉碎后的煙草粉末加入到燒杯中，向燒杯中加入300～400mL無水乙醇，并置于3000～3200W超聲波萃取機上，超聲提取40～50min，過濾，分別收集濾液和濾渣，濾液備用；再將濾渣置于酶解罐中，同時向酶解罐中依次加入300～400mL無水乙醇、50～100mLpH為6.8～7.0磷酸鹽緩沖溶液，攪拌30～40min，再向酶解罐中依次加入0.5～0.7g果膠酶、1～3g纖維素酶、1～3g半纖維素酶，控制酶解罐內(nèi)溫度為45～55℃，攪拌反應2～3h，反應結(jié)束，將溫度升至110～120℃，加熱20～30min，再降溫至室溫，得到煙草廢料酶解液；接著將上述煙草廢料酶解液放入6000～8000r/min離心機中離心分離10～20min，棄去下層雜質(zhì)，得到煙草廢料酶解上清液，再將所得酶解上清液與備用的濾液加入CO2超臨界萃取儀中，再加入100～200mL無水乙醇，控制萃取壓力為25～35MPa，萃取溫度為35～40℃，CO2的流量為25～35kg/h，萃取20～30min，得到多酚類化合物溶液；再向上述多酚類化合物溶液中加入2～4g活性炭，攪拌5～10min，過濾，得濾液，用0.5～0.7L液氮噴淋濾液，使濾液溫度降至-50～-40℃，過濾，得到濾渣，將濾渣置于燒瓶中，向燒瓶中加入200～300mL無水乙醇，將0.1～0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30～-20℃，過濾，得到濾液，再用0.3～0.5L液氮噴淋濾液，使溶液溫度降至-40～-30℃，過濾，收集濾渣；最后將上述收集的濾渣置于25～30℃真空干燥箱內(nèi)干燥1～2h，即可得到從煙草廢料中提取的綠原酸。
實例1
首先稱取40g煙草廢料，用去離子水進行洗滌5次，并用粉碎機粉碎，將粉碎后的煙草粉末加入到燒杯中，向燒杯中加入400mL無水乙醇，并置于3200W超聲波萃取機上，超聲提取50min，過濾，分別收集濾液和濾渣，濾液備用；再將濾渣置于酶解罐中，同時向酶解罐中依次加入400mL無水乙醇、100mLpH為7.0磷酸鹽緩沖溶液，攪拌40min，再向酶解罐中依次加入0.7g果膠酶、3g纖維素酶、3g半纖維素酶，控制酶解罐內(nèi)溫度為55℃，攪拌反應3h，反應結(jié)束，將溫度升至120℃，加熱30min，再降溫至室溫，得到煙草廢料酶解液；接著將上述煙草廢料酶解液放入8000r/min離心機中離心分離20min，棄去下層雜質(zhì)，得到煙草廢料酶解上清液，再將所得酶解上清液與備用的濾液加入CO2超臨界萃取儀中，再加入200mL無水乙醇，控制萃取壓力為35MPa，萃取溫度為40℃，CO2的流量為35kg/h，萃取30min，得到多酚類化合物溶液；再向上述多酚類化合物溶液中加入4g活性炭，攪拌10min，過濾，得濾液，用0.7L液氮噴淋濾液，使濾液溫度降至-40℃，過濾，得到濾渣，將濾渣置于燒瓶中，向燒瓶中加入300mL無水乙醇，將0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-20℃，過濾，得到濾液，再用0.5L液氮噴淋濾液，使溶液溫度降至-30℃，過濾，收集濾渣；最后將上述收集的濾渣置于30℃真空干燥箱內(nèi)干燥2h，即可得到從煙草廢料中提取的綠原酸。
稱取15g上述制備的從煙草廢料中提取的綠原酸，將其溶解于200mL質(zhì)量分數(shù)為15％乙醇溶液中，待溶解完成后，向其加入2g甜菊素，3g苯甲酸鈉，攪拌混合直至均勻，再利用質(zhì)量分數(shù)為15％碳酸氫鈉調(diào)節(jié)其pH值為7.5，待調(diào)節(jié)結(jié)束后，經(jīng)活性炭進行脫色，再經(jīng)微孔濾膜過濾，將濾液滅菌即可得到口服液，該口服液可用于保健藥品，具有清熱解毒，養(yǎng)顏潤膚、解救等功效。
實例2
首先稱取30g煙草廢料，用去離子水進行洗滌3次，并用粉碎機粉碎，將粉碎后的煙草粉末加入到燒杯中，向燒杯中加入300mL無水乙醇，并置于3000W超聲波萃取機上，超聲提取40min，過濾，分別收集濾液和濾渣，濾液備用；再將濾渣置于酶解罐中，同時向酶解罐中依次加入300mL無水乙醇、50mLpH為6.8磷酸鹽緩沖溶液，攪拌30min，再向酶解罐中依次加入0.5g果膠酶、1g纖維素酶、1g半纖維素酶，控制酶解罐內(nèi)溫度為45℃，攪拌反應2h，反應結(jié)束，將溫度升至110℃，加熱20min，再降溫至室溫，得到煙草廢料酶解液；接著將上述煙草廢料酶解液放入6000r/min離心機中離心分離10min，棄去下層雜質(zhì)，得到煙草廢料酶解上清液，再將所得酶解上清液與備用的濾液加入CO2超臨界萃取儀中，再加入100mL無水乙醇，控制萃取壓力為25MPa，萃取溫度為35℃，CO2的流量為25kg/h，萃取20min，得到多酚類化合物溶液；再向上述多酚類化合物溶液中加入2g活性炭，攪拌5min，過濾，得濾液，用0.5L液氮噴淋濾液，使濾液溫度降至-50℃，過濾，得到濾渣，將濾渣置于燒瓶中，向燒瓶中加入200mL無水乙醇，將0.1L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30℃，過濾，得到濾液，再用0.3L液氮噴淋濾液，使溶液溫度降至-40℃，過濾，收集濾渣；最后將上述收集的濾渣置于25℃真空干燥箱內(nèi)干燥1h，即可得到從煙草廢料中提取的綠原酸。
稱取10g上述制備的從煙草廢料中提取的綠原酸，將其溶解于150mL質(zhì)量分數(shù)為15％乙醇溶液中，待溶解完成后，向其加入1g甜菊素，2g苯甲酸鈉，攪拌混合直至均勻，再利用質(zhì)量分數(shù)為15％碳酸氫鈉調(diào)節(jié)其pH值為7.0，待調(diào)節(jié)結(jié)束后，經(jīng)活性炭進行脫色，再經(jīng)微孔濾膜過濾，將濾液滅菌即可得到口服液，該口服液可用于保健藥品，具有清熱解毒，養(yǎng)顏潤膚、解救等功效。
實例3
首先稱取35g煙草廢料，用去離子水進行洗滌4次，并用粉碎機粉碎，將粉碎后的煙草粉末加入到燒杯中，向燒杯中加入350mL無水乙醇，并置于3100W超聲波萃取機上，超聲提取45min，過濾，分別收集濾液和濾渣，濾液備用；再將濾渣置于酶解罐中，同時向酶解罐中依次加入350mL無水乙醇、70mLpH為6.9磷酸鹽緩沖溶液，攪拌35min，再向酶解罐中依次加入0.6g果膠酶、2g纖維素酶、2g半纖維素酶，控制酶解罐內(nèi)溫度為47℃，攪拌反應2h，反應結(jié)束，將溫度升至115℃，加熱25min，再降溫至室溫，得到煙草廢料酶解液；接著將上述煙草廢料酶解液放入7000r/min離心機中離心分離15min，棄去下層雜質(zhì)，得到煙草廢料酶解上清液，再將所得酶解上清液與備用的濾液加入CO2超臨界萃取儀中，再加入150mL無水乙醇，控制萃取壓力為30MPa，萃取溫度為37℃，CO2的流量為30kg/h，萃取25min，得到多酚類化合物溶液；再向上述多酚類化合物溶液中加入3g活性炭，攪拌7min，過濾，得濾液，用0.6L液氮噴淋濾液，使濾液溫度降至-45℃，過濾，得到濾渣，將濾渣置于燒瓶中，向燒瓶中加入250mL無水乙醇，將0.2L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-25℃，過濾，得到濾液，再用0.4L液氮噴淋濾液，使溶液溫度降至-35℃，過濾，收集濾渣；最后將上述收集的濾渣置于27℃真空干燥箱內(nèi)干燥1h，即可得到從煙草廢料中提取的綠原酸。
稱取12g上述制備的從煙草廢料中提取的綠原酸，將其溶解于170mL質(zhì)量分數(shù)為15％乙醇溶液中，待溶解完成后，向其加入1g甜菊素，2g苯甲酸鈉，攪拌混合直至均勻，再利用質(zhì)量分數(shù)為15％碳酸氫鈉調(diào)節(jié)其pH值為7.2，待調(diào)節(jié)結(jié)束后，經(jīng)活性炭進行脫色，再經(jīng)微孔濾膜過濾，將濾液滅菌即可得到口服液，該口服液可用于保健藥品，具有清熱解毒，養(yǎng)顏潤膚、解救等功效。