技術(shù)特征：

1.一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征為，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)鱷魚特異基因的引物和探針，分別為：

上游引物P1：GGATGAACAGTCTAYCCA，下游引物P2：GCCGTGGTAATAAARTTAA，帶有熒光染料的探針序列為：CCACGCCGGACCATCAGTAG；

實(shí)時(shí)熒光PCR中用于評(píng)估皮革中提取的DNA質(zhì)量的18SrRNA基因檢測(cè)引物和探針，分別為：

上游引物P1：TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA，下游引物P2：AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT，帶有熒光染料的探針序列為：CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征在于：檢測(cè)鱷魚特異基因上游引物P1中的兼并堿基Y代表C或T，下游引物P2中的兼并堿基R代表A或G，檢測(cè)鱷魚特異基因和18SrRNA基因的熒光染料為：5‘端為FAM標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征在于如下步驟：

1)提取待檢皮革的DNA；

2)以所提取的DNA作為模板，加入權(quán)利要求1所述的引物對(duì)和熒光染料標(biāo)記的探針以及PCR預(yù)混液進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，記錄樣品反應(yīng)的Ct值。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征在于：將檢測(cè)鱷魚特異基因和18SrRNA基因的上游引物、下游引物和探針分別稀釋至10μmol/L，所述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系為：

。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征在于：所 述的實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件為95℃10min，1個(gè)循環(huán)；95℃15s，58℃30s，40個(gè)循環(huán)。

6.根據(jù)權(quán)利要求3、4和5任一所述的一種用于鑒定天然鱷魚皮革的方法，其特征在于：所述的實(shí)時(shí)熒光PCR方法中空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照，以及天然皮革的判定標(biāo)準(zhǔn)為：

空白對(duì)照：以ddH₂O為模板，按照2和3所述條件，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，18SrRNA基因和鱷魚特異基因Ct值均大于或等于40；

陰性對(duì)照：以非天然鱷魚皮革提取的DNA為模板，按照2和3所述條件，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，18SrRNA基因Ct值小于36、鱷魚特異基因Ct值均大于或等于40；

陽性對(duì)照：以天然鱷魚皮革提取的DNA為模板，按照2和3所述條件，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，18SrRNA基因和鱷魚特異基因Ct值均小于36；

待測(cè)皮革18SrRNA基因Ct值小于36，陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，則結(jié)合鱷魚特異基因Ct值進(jìn)行天然鱷魚皮革判定；待測(cè)皮革18SrRNA基因Ct值大于或等于40，陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為非天然皮革；18SrRNA基因在36-40之間，應(yīng)重做實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增，再次擴(kuò)增后18SrRNA基因Ct值大于或等于40，且陰性對(duì)照，陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為非天然皮革；再次擴(kuò)增后18SrRNA基因Ct值小于40且陰性對(duì)照，陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，則結(jié)合鱷魚特異基因Ct值進(jìn)行天然鱷魚皮革判定。

7.根據(jù)權(quán)利要求6中所述的結(jié)合鱷魚特異基因Ct值進(jìn)行天然鱷魚皮革判定，具體判定標(biāo)準(zhǔn)為：

待測(cè)皮革鱷魚特異基因Ct值大于或等于40，陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為非天然鱷魚皮革；待測(cè)皮革鱷魚特異基因Ct值小于36，陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為天然鱷魚皮革；待測(cè)皮革鱷魚特異基因Ct值在36-40之間，應(yīng)重做實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增，再次擴(kuò)增后鱷魚特異基因Ct值大于或等于40，且陰性對(duì)照，陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為非天然鱷魚皮革；再次擴(kuò)增后鱷魚特異基因Ct值仍小于40且陰性對(duì)照，陽性對(duì)照和空白對(duì)照結(jié)果正常，判定該皮革為天然鱷魚皮革。