本發(fā)明涉及一種生化檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測陰道炎的試劑盒，以及該試劑盒的制備方法。

背景技術(shù)：

女性陰道從生理學(xué)角度上講是一個(gè)閉合的體腔，其內(nèi)包含著多種成分，也寄生著許多細(xì)菌。陰道微生態(tài)主要有三部分構(gòu)成，首先是陰道上皮細(xì)胞，第二部分是微生物菌群，第三個(gè)必須強(qiáng)調(diào)的微生態(tài)部分是宿主和菌群間及菌群與菌群之間相互作用的復(fù)雜性。它們之間是相互制約、相互作用、相互依賴的對立統(tǒng)一，或是共生關(guān)系或是拮抗關(guān)系，共處于陰道的微生態(tài)環(huán)境中，保持著協(xié)調(diào)平衡的狀態(tài)。

正常陰道內(nèi)寄生著乳酸桿菌，鏈球菌，表皮葡萄球菌，陰道加德納菌及大腸桿菌以及厭氧的消化鏈球菌屬，消化球菌，厭氧乳酸桿菌，類桿菌等，這些菌保持一定的比例，維系著陰道內(nèi)生態(tài)平衡，正常婦女陰道分泌物中每毫升有106 個(gè)菌落形成單位。

正常育齡婦女，在內(nèi)分泌激素的作用下，陰道上皮細(xì)胞增生，其表層細(xì)胞含有豐富的糖原，非常有利于兼氧乳酸桿菌的生長，這種細(xì)菌占陰道的90％以上，這種乳酸桿菌大量存在，就抑制了其他致病菌的生長，在陰道內(nèi)形成了一個(gè)正常的生態(tài)平衡。乳酸桿菌是屬于乳酸菌一類的細(xì)菌，這類菌可利用黃素蛋白將氧變成H₂O₂，這一作用結(jié)合亞鐵血紅素，過氧化氫酶的缺失，結(jié)果產(chǎn)生過量而不被細(xì)菌全部降解的H₂O₂。其濃度與乳酸桿菌的數(shù)量有關(guān)。由此可通過檢測H₂O₂的濃度來反映乳酸桿菌的狀況。正常女性陰道分泌物中的H₂O₂濃度一般在2μmol/L以上，如檢測H₂O₂濃度≤2μmol/L時(shí)，則意味著陰道生態(tài)菌群遭到了破壞，已經(jīng)引起了厭氧菌的生長，導(dǎo)致了陰道菌群的失衡。如：當(dāng)人體雌激素水平下降，導(dǎo)致陰道上皮萎縮，細(xì)胞糖原減少，不利于乳酸桿菌的生長；大量使用抗生素或用堿性液體過度沖洗陰道，抑制乳酸桿菌的生長；性亂，性交頻繁( 因精液pH 為7.2-7.8) 等導(dǎo)致致病性厭氧菌和加德納菌大量繁殖，引起陰道微生物生態(tài)平衡的失調(diào)，產(chǎn)生陰道炎。

陰道炎是婦女最常見的疾病，宮頸炎也存在較高的發(fā)病率。當(dāng)炎性患者自我癥狀比較輕微時(shí)，容易造成誤診，常常延誤了治療，并有可能并發(fā)輸卵管炎，子宮內(nèi)膜炎而導(dǎo)致不孕及流產(chǎn)。

為了能夠快速地檢測陰道炎的類型，亟待一種新型的檢測試劑盒，使得檢測快速準(zhǔn)確，為后續(xù)的治療提供便捷手段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠?qū)崿F(xiàn)快速檢測、檢測準(zhǔn)確度高且能夠?qū)崿F(xiàn)多項(xiàng)目檢測的陰道炎檢測試劑盒。

本發(fā)明還提供了一種上述試劑盒的制備方法，該方法操作簡單，制備得到的試劑盒質(zhì)量好，檢測效率高。

本發(fā)明所述一種檢測陰道炎的試劑盒所采用的技術(shù)方案是：該試劑盒包括檢測卡板，在所述檢測卡板上設(shè)置有若干個(gè)檢測孔，在該若干個(gè)檢測孔內(nèi)包被有對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS、過氧化物酶H₂O₂或pH指示劑中的至少一種。

上述方案可見，該試劑盒上的檢測卡板上設(shè)置若干檢測孔，這能夠?qū)崿F(xiàn)多個(gè)項(xiàng)目的檢測，與現(xiàn)有的單個(gè)檢測卡只能實(shí)現(xiàn)單項(xiàng)目檢測相比，該檢測卡板的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)能夠極大地提高檢測效率，實(shí)現(xiàn)一次性多項(xiàng)目檢測，且能夠?qū)崿F(xiàn)快速檢測，多項(xiàng)目進(jìn)行相同指標(biāo)的檢測，也能夠提高檢測準(zhǔn)確度，為后續(xù)的治療提供準(zhǔn)確的判斷依據(jù)。

進(jìn)一步地，在所述檢測孔內(nèi)的包被物的含量如下：

對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG 2％；

5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA 3％；

5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE 2％；

5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS 2％；

過氧化物酶H₂O₂300U/L。

上述方案可見，檢測孔內(nèi)的包被物種類較多，且含量能夠滿足檢測需求，能夠?qū)崿F(xiàn)快速檢測且保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

再進(jìn)一步地，所述檢測孔的數(shù)目為五個(gè)，該五個(gè)所述檢測孔內(nèi)分別包被有對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑；由此可見，采用五個(gè)檢測孔，能夠?qū)崿F(xiàn)五聯(lián)檢測，滿足五種不同指標(biāo)的檢測，從而實(shí)現(xiàn)多項(xiàng)目檢測。

再更進(jìn)一步地，所述檢測孔的數(shù)目為六個(gè)，該六個(gè)所述檢測孔內(nèi)分別包被有對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑；由此可見，采用六個(gè)檢測孔，能夠?qū)崿F(xiàn)六聯(lián)檢測，滿足六種不同指標(biāo)的檢測，從而實(shí)現(xiàn)多項(xiàng)目檢測。此外，所述檢測孔的數(shù)目可以根據(jù)需要設(shè)置，這沒有限制。

本發(fā)明提供的另一種方案是上述檢測試劑盒的制備方法，該方法包括以下步驟：（1）檢測紙浸泡：將檢測紙置于包被物中浸泡均勻，取出進(jìn)行干燥，其中的包被物為對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑；

（2）將干燥后的檢測紙裝入所述檢測卡的相應(yīng)的檢測孔內(nèi)；

（3）利用壓平裝置將檢測紙頂平在所述檢測孔內(nèi)，使檢測紙貼緊在所述檢測孔的底部；

（4）對頂平檢測紙后的檢測卡進(jìn)行鋁箔袋包裝，最后得到所述檢測陰道炎的試劑盒。

上述方案可見，本發(fā)明所述試劑盒的制備只需要經(jīng)過浸泡、干燥、裝卡、頂平、包裝，即可最后得到鋁箔袋包裝好的試劑盒，其制備工藝簡單，這大大地降低了工作人員的勞動強(qiáng)度，降低了成本；其制備得到的試劑盒質(zhì)量也較好，能夠?qū)崿F(xiàn)快速準(zhǔn)確的檢測。

更加具體地，所述步驟（3）中的壓平裝置為手動或自動化機(jī)械裝置；由此可見，采用帶有頂針的自動頂平機(jī)械裝置實(shí)現(xiàn)自動頂平，其效率進(jìn)一步地得到提高，且采用設(shè)備進(jìn)行頂平，其頂平效果能夠得到保證，頂平效果極好。

附圖說明

圖1是本發(fā)明所述具有五個(gè)檢測孔的檢測卡板的簡易結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本發(fā)明所述具有六個(gè)檢測孔的檢測卡板的簡易結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

如圖1至2所示，在本實(shí)施例中，本發(fā)明所述試劑盒包括檢測卡板1，在所述檢測卡板上設(shè)置有五個(gè)檢測孔或者是六個(gè)檢測孔，這根據(jù)具體的需要確定檢測孔的數(shù)目，這沒有限制，如可以設(shè)置2孔、3孔、4孔或更多孔。在本實(shí)施例中，提供檢測孔的數(shù)目為五孔和六孔兩種情況說明。當(dāng)然，這并不是對本發(fā)明的限制。當(dāng)為五個(gè)檢測孔時(shí)，五個(gè)檢測孔內(nèi)的包被物為對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰基神經(jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑。當(dāng)為六個(gè)檢測孔時(shí)，該六個(gè)檢測孔內(nèi)的包被物為對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑。上述包被物的選擇也可以有多種多樣，并不是一成不變的，根據(jù)具體的需要而設(shè)定具體的包被物。

上述包被物的含量如下：

對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG 2％；5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA 3％；5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE 2％；5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS 2％；過氧化物酶H₂O₂ 300U/L。

該試劑盒的制備方法步驟如下：

（1）檢測紙浸泡：將檢測紙置于包被物中浸泡均勻，取出進(jìn)行干燥，其中的包被物為對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG、5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA、5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE、5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS、過氧化物酶H₂O₂和pH指示劑；

（2）將干燥后的檢測紙裝入所述檢測卡的相應(yīng)的檢測孔內(nèi)；

（3）利用壓平裝置將檢測紙頂平在所述檢測孔內(nèi)，使檢測紙貼緊在所述檢測孔的底部；其中的壓平裝置為手動或自動化機(jī)械裝置。

（4）對頂平檢測紙后的檢測卡進(jìn)行鋁箔袋包裝，最后得到所述檢測陰道炎的試劑盒。

在本發(fā)明中，幾種包被物的選擇原理如下。

對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG能夠與β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶反應(yīng)，反應(yīng)生成的對（鄰）硝基苯在堿性條件下顯黃色，顏色的深淺與β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的含量成正比。而女性陰道內(nèi)的白色念珠菌、陰道毛滴蟲、人型支原體等微生物能夠分泌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。當(dāng)將女性陰道提取物與對（鄰）硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷NAG反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后的顏色顯示即可獲知所提取的標(biāo)本的情況。

唾液酸苷酶能水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA，釋放出無色的溴吲哚基，遇到反應(yīng)物時(shí)起反應(yīng)呈藍(lán)色或者是綠色，且顏色深淺與唾液酸苷酶的含量成正比。而唾液酸苷酶是加德納菌、動彎桿菌等BV致病菌分泌的特異性酶。當(dāng)將女性陰道提取物與5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸SNA反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后的顏色顯示即可獲知所提取的標(biāo)本的情況。

白細(xì)胞酯酶能水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE，釋放出無色的溴吲哚基，遇到反應(yīng)物時(shí)起反應(yīng)呈藍(lán)色或者是綠色，且顏色深淺與白細(xì)胞酯酶活性呈正比；白細(xì)胞酯酶為多形核白細(xì)胞釋放的羧酸酯酶，在發(fā)生炎癥時(shí)，多形核白細(xì)胞在病灶聚集而大量釋放白細(xì)胞酯酶，細(xì)菌性及霉菌性陰道病均可見明顯多形核白細(xì)胞，正常時(shí)無此現(xiàn)象。故當(dāng)將女性陰道提取物與5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯LE反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后的顏色顯示即可獲知女性的陰道炎癥情況。

β-葡萄糖醛酸苷酶能水解5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS，釋放出無色的溴吲哚基，遇到反應(yīng)物時(shí)起反應(yīng)呈藍(lán)色或者是綠色，且顏色深淺與β-葡萄糖醛酸苷酶活性呈正比。而β-葡萄糖醛酸苷酶是大腸埃希菌等需氧菌的特異性酶。故當(dāng)將女性陰道提取物與5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽GUS反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后的顏色顯示即可獲知女性的陰道炎癥情況。

過氧化氫是陰道乳酸桿菌的標(biāo)志物。在過氧化氫酶存在的前提下，過氧化氫分界產(chǎn)生氧，氧能使顯色底物發(fā)生由無色到紫紅色的顏色變化，顏色深淺與過氧化氫的濃度呈正比。故當(dāng)將女性陰道提取物與過氧化物酶H₂O₂反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后的顏色顯示即可獲知女性的陰道炎癥情況。

而pH值墊上指示劑底物在不同的酸堿值時(shí)，顯示對應(yīng)的不同顏色變化，從而實(shí)現(xiàn)pH值指示。

本發(fā)明采用全新的設(shè)計(jì)，將檢測卡板設(shè)計(jì)成具有多個(gè)檢測孔的形式，其可以進(jìn)行多項(xiàng)指標(biāo)的檢測，能有效提高檢測效率；其檢測準(zhǔn)確率也極高。與現(xiàn)有技術(shù)相比，其解決了現(xiàn)有的單一檢測孔進(jìn)行檢測而造成檢測效率低下的問題，同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了多個(gè)指標(biāo)同時(shí)檢測的可能。

本發(fā)明可應(yīng)用于生化檢測技術(shù)領(lǐng)域。