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生活環(huán)境微生態(tài)優(yōu)勢(shì)菌群優(yōu)化方法與流程

文檔序號(hào):12056259閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.家族生活環(huán)境微生態(tài)優(yōu)化劑是將一組益生菌通過(guò)混合協(xié)同發(fā)酵試驗(yàn),優(yōu)選并確定其高產(chǎn)工藝,獲得高活性、高菌數(shù)的菌液,然后再進(jìn)行包被(保護(hù)菌體,延長(zhǎng)在自然條件下的生存時(shí)間);制備為微生態(tài)制劑,冷藏保存,供家族生活環(huán)境即室內(nèi)定期噴霧用,亦可同時(shí)服用,以此微生態(tài)全面覆蓋家族成員生活空間乃至消化道,實(shí)現(xiàn)益生菌優(yōu)勢(shì)菌群在體內(nèi)外環(huán)境的良性循環(huán),方法如下:

步驟一,碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等最優(yōu)組分的篩選;

步驟二,培養(yǎng)基各組分最優(yōu)質(zhì)量濃度的確定;

步驟三,最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的確定;

步驟四,最優(yōu)培養(yǎng)基發(fā)酵條件的優(yōu)化;

步驟五,乳酸菌種子液的制備與批量生產(chǎn);

步驟六,菌體包被,灌裝,冷藏備用;

步驟七,微生態(tài)環(huán)境優(yōu)化劑的使用方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等最優(yōu)組分的篩選,主要對(duì)所需要的發(fā)酵培養(yǎng)基的不同組分進(jìn)行選擇,從而獲得最利于混合發(fā)酵的培養(yǎng)基,其方法是碳源選擇麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉;氮源選擇胰蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硫酸銨、硝酸鈉、胰蛋白胨與酵母膏混合(1:1);無(wú)機(jī)鹽選擇KH2PO4、Na2HPO4、NaCl、乙酸鈉、K2HPO4,3株菌種的種子液按1:1:1(接種總量為1.5%)的比例接種于不同培養(yǎng)基中,將培養(yǎng)基初始pH調(diào)節(jié)至7.5,在37℃、200r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h,采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)600nm下測(cè)定發(fā)酵液的OD值,確定最佳組分為蔗糖、胰蛋白胨酵母膏混合,Na2HPO4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基各組分最優(yōu)質(zhì)量濃度的確定,其方法是在已經(jīng)確定最佳碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽種類的基礎(chǔ)選擇不同濃度進(jìn)行混合發(fā)酵試驗(yàn),最佳碳源的濃度5g/L、7.5g/L、10g/L、12.5g/L、15g/L;最佳氮源濃度5g/L、7.5g/L、10g/L、12.5g/L、15g/L;最佳無(wú)機(jī)鹽濃度4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L,培養(yǎng)基初始pH7.5,在37℃、200r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h,采用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)600nm下測(cè)定發(fā)酵液的OD值,確定最佳濃度分別為碳源7.5g/L,氮源10g/L,無(wú)機(jī)鹽6g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的確定,將試驗(yàn)中篩選出的最佳碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及其濃度范圍按L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn),培養(yǎng)基初始pH7.5 ,接種量1.5%,發(fā)酵溫度37℃,搖床轉(zhuǎn)速200r/min,24小時(shí)后測(cè)發(fā)酵液OD值,結(jié)果為蔗糖10g/L,胰蛋白胨10g/L,酵母膏10g/L,Na2HPO4 7g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述最優(yōu)培養(yǎng)基發(fā)酵條件的優(yōu)化,用優(yōu)化的最佳培養(yǎng)基進(jìn)行復(fù)合菌發(fā)酵,選取26℃、28℃、31℃、34℃、37℃和40℃ 作為發(fā)酵溫度,測(cè)定不同溫度下復(fù)合菌的OD值;選取0.5%,1%,2%,3% 接種量,測(cè)定不同接種量下OD值;選取5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,8.5和9.0作為初始pH,測(cè)定不同初始pH下復(fù)合菌發(fā)酵后的OD值;選取100 r/min,120 r/min,140 r/min,160 r/min,180 r/min,200 r/min和220 r/min 搖床轉(zhuǎn)速,測(cè)定不同轉(zhuǎn)速下復(fù)合菌發(fā)酵后的OD值,最佳溫度、接種量、初始pH、轉(zhuǎn)速分別為37℃、0.5%、8.5、200r/min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述乳酸菌種子液的制備,將三株菌種種子液按照0.5%接種量接種于優(yōu)化得到的最佳培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的初始pH為8.5,在37℃、200r/min搖床培養(yǎng),發(fā)酵16h時(shí)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的最高峰,通過(guò)微量計(jì)數(shù)得到此時(shí)的活菌數(shù)為1.8×1013 cfu/mL,然后進(jìn)行二級(jí)發(fā)酵,條件同上,培養(yǎng)24小時(shí)后收獲菌液,質(zhì)檢,測(cè)定并記錄菌數(shù),冷藏備用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述進(jìn)行菌體包被,加入已制備的包被劑乳化30分鐘,灌裝,冷藏備用。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述微生態(tài)環(huán)境優(yōu)化劑的使用方法,用稀釋液將優(yōu)化劑稀釋至109cfu/mL,室內(nèi)噴霧,1次/周,同時(shí)服用則每月噴霧2次。

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