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一種產(chǎn)聚羥基丁酸羥基戊酸酯的基因工程菌及其應(yīng)用方法與流程

文檔序號(hào):11837457閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種產(chǎn)聚羥基丁酸羥基戊酸酯的基因工程菌,其特征在于,是將來(lái)自羅氏真養(yǎng)菌基因組的phaCAB基因簇,在谷氨酸棒桿菌WM001進(jìn)行重組表達(dá),所述谷氨酸棒桿菌WM001,已于2016年6月1日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2016303,保藏地址為中國(guó)武漢武漢大學(xué)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)聚羥基丁酸羥基戊酸酯的基因工程菌,其特征在于,是以羅氏真養(yǎng)菌基因組GenBank NC_008313.1為模板,PCR得到phaCAB基因簇,以pDXW-8為表達(dá)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入谷氨酸棒桿菌WM001,得到正確轉(zhuǎn)化子,即為可以積累PHBV的谷氨酸棒桿菌基因工程菌。

3.一種構(gòu)建權(quán)利要求1或2所述的基因工程菌的方法,其特征在于,是將來(lái)自羅氏真養(yǎng)菌基因組的phaCAB基因簇,在谷氨酸棒桿菌WM001進(jìn)行重組表達(dá);所述谷氨酸棒桿菌WM001(Corynebacterium glutamicum WM001),已于2016年6月1日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2016303,保藏地址為中國(guó)武漢武漢大學(xué)。

4.一種應(yīng)用構(gòu)建權(quán)利要求1或2所述的基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)PHBV的方法,其特征在于,是將基因工程菌的種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基,培養(yǎng)一段時(shí)間后誘導(dǎo)基因的表達(dá),使菌體內(nèi)部積累PHBV。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,發(fā)酵培養(yǎng)基配方按g/100mL計(jì)為:玉米漿1-2,硫酸銨3.5,硫酸鎂0.05-0.2,磷酸二氫鉀0.1-0.2,葡萄糖13-15,碳酸鈣2,pH為7.2。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,種子培養(yǎng)基配方按g/100mL計(jì)為:玉米漿3-4,硫酸銨0.5-1,硫酸鎂0.05-0.2,磷酸二氫鉀0.1-0.2,葡萄糖3-5,pH為7.2。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一所述的方法,其特征在于,將種子以5-10%的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基,于28-32℃、200-230rpm條件下培養(yǎng)菌株至OD600達(dá)到10-15,添加IPTG誘導(dǎo)phaCAB基因簇的表達(dá)。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,將種子以5-10%的接種量轉(zhuǎn)入裝有補(bǔ)料分批發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐,裝液量為50-70%,pH用50%氨水控制在7.2-7.4之間,通氣量為0.8-1.0L/min,于31℃下培養(yǎng),前24h相對(duì)溶氧控制在30%,24h至發(fā)酵結(jié)束溶氧控制在15%;其中,于31℃下培養(yǎng)6-8h,添加終濃度為0.5mM的IPTG,然后繼續(xù)培養(yǎng)至130h,期間當(dāng)培養(yǎng)基中剩余葡萄糖濃度低于40g/L時(shí),流加含終濃度為0.5mM的IPTG的70%葡萄糖溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,補(bǔ)料分批發(fā)酵培養(yǎng)基配方按g/100mL計(jì)為:玉米漿1-3,硫酸銨0.5-1,硫酸鎂0.1-0.2,磷酸二氫鉀0.1-0.2,葡萄糖10-15,初始pH為7.2。

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