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一種microRNA?133a的快速檢測方法與流程

文檔序號:11838477閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種microRNA-133a的快速檢測方法,其特征在于,包括:

備料:準(zhǔn)備好患者血清、RNase-free水、濃度為18uM/uL的RNA酶抑制劑以及濃度為0.18uM/uL的DSN酶;

設(shè)計探針:根據(jù)待測靶標(biāo)microRNA-133a的序列設(shè)計出與其完全互補的單鏈DNA序列,而后在所述單鏈DNA序列兩端分別修飾熒光基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán),獲得濃度為200nmol/uL的Taqman探針;

反應(yīng):將所述患者血清、所述RNase-free水、所述DSN酶、所述Taqman探針和所述RNA酶抑制劑按照100:278:2:20:1的配比進(jìn)行混合,在85℃的反應(yīng)溫度下反應(yīng)25分鐘;

檢測:根據(jù)相應(yīng)Taqman探針設(shè)置反應(yīng)所需的激發(fā)波長和發(fā)射波長,使用全自動酶標(biāo)儀檢測反應(yīng)步驟中的反應(yīng)液的熒光強度,即得到所述患者血清中的microRNA-133a的檢測結(jié)果;

其中,與所述microRNA-133a完全互補的單鏈DNA序列為:CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA。

2.如權(quán)利要求1所述的microRNA-133a的快速檢測方法,其特征在于,所述患者血清的收集包括:獲取患者的靜脈血5mL,以3000rpm離心10min,分離血清用于檢測。

3.如權(quán)利要求1所述的microRNA-133a的快速檢測方法,其特征在于,所述熒光基團(tuán)為:5'-FAM。

4.如權(quán)利要求1所述的microRNA-133a的快速檢測方法,其特征在于,所述熒光淬滅基團(tuán):Eclipse-3'。

5.如權(quán)利要求1所述的microRNA-133a的快速檢測方法,其特征在于,所述Taqman探針為:5'-FAM-CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA-Eclipse-3';

其中,F(xiàn)AM染料的激發(fā)波長為492nM,發(fā)射波長為518nM,且檢測步驟中的激發(fā)波長和發(fā)射波長與所述FAM染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長相同。

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