本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物領(lǐng)域，本發(fā)明更具體涉及了一種具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)活性的肽及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：在癌癥發(fā)生與治療的過(guò)程中，化學(xué)治療一直屬于主體部分。現(xiàn)有的臨床使用的化療藥物，如環(huán)磷酰胺、順鉑、阿糖胞苷、阿霉素和長(zhǎng)春新堿等，它們主要是用來(lái)破壞細(xì)胞的周期的，RNA、DNA和蛋白質(zhì)都是此類藥物的靶向目標(biāo)。近年來(lái)，As2O3在對(duì)于白血病的治療上取得了很大的進(jìn)展，但是，該藥物和其他化療藥物，其本身都有自己的毒性，不管是一種化療藥物單獨(dú)使用還是幾種化療藥物結(jié)合運(yùn)用在臨床治療上，其在對(duì)癌癥有明顯療效，殺傷殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)損害病人的正常細(xì)胞。化療藥物的副作用最普遍的就是對(duì)病人的骨髓產(chǎn)生極度抑制，造成病人的極大痛苦，甚至引起死亡。目前對(duì)于癌癥的治療主要有以下幾種：手術(shù)治療，對(duì)于良性腫瘤療效較好，但是對(duì)于沒(méi)有包膜包裹的癌癥組織和擴(kuò)散性腫瘤難以完全根除；放射性治療，是利用某些腫瘤對(duì)射線敏感的特點(diǎn)選擇性地殺死癌細(xì)胞，但是對(duì)于不敏感型以及易擴(kuò)散型癌細(xì)胞療效較差，而且在治療過(guò)程中也會(huì)造成正常細(xì)胞的死亡；化學(xué)治療，是將對(duì)細(xì)胞有毒、有害的藥物經(jīng)由循環(huán)系統(tǒng)帶到全身，雖然對(duì)于擴(kuò)散型癌細(xì)胞也有一定療效，但是這種治療方法對(duì)于全身的正常細(xì)胞也會(huì)造成極大傷害，使癌癥病人在治療癌癥過(guò)程中承受巨大的生理和心理的折磨。因此開(kāi)發(fā)出一種療效好、應(yīng)用范圍廣、副作用小的抗癌藥物是癌癥患者和醫(yī)學(xué)工作者的共同心愿。盡管近幾十年來(lái)化療藥物在治療癌癥方面取得了很大的進(jìn)展，但當(dāng)前化療藥物存在的問(wèn)題仍然很多，如存在的毒性、特異性較低以及易產(chǎn)生耐藥性，探討新型療法成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。生物活性肽通常含有2～20個(gè)氨基酸殘基，其活性隨著組成它們的氨基酸不同以及氨基酸排列順序不同而發(fā)生改變。肽具有多種生理功能，如抗氧化、抗增殖、抗微管蛋白和細(xì)胞毒性，肽的這些活性使得它們具有抗癌潛能，這將在癌癥治療中有所貢獻(xiàn)。由于肽具有很強(qiáng)的穿透腫瘤組織的能力，因此不僅可以到達(dá)原發(fā)性腫瘤的靶點(diǎn)，還可以到達(dá)繼發(fā)性腫瘤的靶點(diǎn)，這些分子主要通過(guò)破壞細(xì)胞膜的完整性從而迅速殺死靶細(xì)胞，所以一般不產(chǎn)生耐藥性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是針對(duì)上述問(wèn)題，提供一種具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)活性的肽及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的在于提供了一種抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的肽，其包含氨基酸序列的肽ISDFTYAEVMGGGKQG；作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的肽的序列為ISDFTYAEVMGGGKQG。本發(fā)明還提供了編碼該短肽的核苷酸序列。作為一種優(yōu)選方案，編碼上述肽的核苷酸序列包含attagcgattttacctatgcggaagtgatgggcggcggcaaacagggc。作為一種優(yōu)選方案，編碼上述肽的核苷酸序列為attagcgattttacctatgcggaagtgatgggcggcggcaaacagggc。本發(fā)明的肽可用于制備具有治療實(shí)體腫瘤作用的藥物。采用化學(xué)合成的方法合成本發(fā)明的肽，即本領(lǐng)域熟知的已經(jīng)非常成熟的固相肽合成方法，可采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護(hù)的氨基酸逐個(gè)偶聯(lián)到惰性固相載體上去，然后利用強(qiáng)酸將肽鏈從載體上裂解下來(lái)，同時(shí)去除側(cè)鏈保護(hù)。本發(fā)明的肽具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)活性的作用，尤其對(duì)肺癌細(xì)胞或子宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制活性。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明肽的合成：本發(fā)明采用采用化學(xué)合成的方法制備所述的肽，即本領(lǐng)域熟知的已經(jīng)非常成熟的固相肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護(hù)的氨基酸逐個(gè)偶聯(lián)到惰性固相載體上去，然后利用強(qiáng)酸將肽鏈從載體上裂解下來(lái)，同時(shí)去除側(cè)鏈保護(hù)。具體而言，使用Perkin-Elmer公司的ABI433A型多肽合成儀、選用Fmoc/HOBt/DCC0.10mmol模式，采用多肽固相合成法進(jìn)行活性肽單體和酰胺化肽鏈的合成，合成中所用氨基酸用Fmoc保護(hù)，合成用樹(shù)脂為HMP樹(shù)脂。合成結(jié)束后用含0.70g結(jié)晶酚，0.25ml二巰基乙醇，0.6ml硫代苯甲醚，0.5ml去離子水，10mlTFA三氟乙酸的切割試劑將肽從樹(shù)脂上切割下來(lái)。用反相高效液相色譜，在C18柱上進(jìn)行肽的純化。制備得到氨基酸序列為ISDFTYAEVMGGGKQG的肽。實(shí)施例2抑制癌細(xì)胞的試驗(yàn)：本實(shí)施例的目的在于試驗(yàn)所述肽在一系列腫瘤細(xì)胞中的作用，實(shí)驗(yàn)將以生理鹽水作為陰性對(duì)照。選用細(xì)胞系為A549(ATCC，U.S.A，目錄號(hào)：CCL-185)，Hela，人成骨細(xì)胞瘤細(xì)胞系U-2OS(P53+，RB-；ATCC，U.S.A，目錄號(hào)：HTB-96)，在24孔板培養(yǎng)皿中種入1×105腫細(xì)胞，培養(yǎng)液為10％FBSDMEM，第二天吸去液體，按照0.005mg/ml的量加入實(shí)施例1制備的肽或生理鹽水，輕輕晃動(dòng)液體3次，在37℃、5％CO2中孵育180分鐘。加入含1％FBSDMEM培養(yǎng)基至1ml，將細(xì)胞放置于37℃、5％CO2中孵育3-10天，觀察細(xì)胞狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1所示：表1肽抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別3天抑制率(％)5天抑制率(％)10天抑制率(％)A549組364768Hela組385465U-2OS71622由上表可以看出本發(fā)明的肽對(duì)A549和Hela細(xì)胞更敏感。實(shí)施例3抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的實(shí)驗(yàn)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞細(xì)胞株，在無(wú)菌條件下制備成1×107/ml細(xì)胞懸液，以0.1ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100-200mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)為每1天測(cè)1次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對(duì)照組注射等量生理鹽水，每天1次；恩度組3.0mg/kg，每天給藥1次；實(shí)施例1中肽的高中低劑量組分別以10mg/kg、5mg/kg、1mg/kg為給藥劑量。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠處死，手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。其結(jié)果見(jiàn)下表2所示：表2肽抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(每組裸鼠數(shù)量n＝5)當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3