本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
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D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素R＝(R)‐CH(CH3)2；
1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物最主要的方法,也是雜環(huán)藥物化學(xué)研究中較為活躍的一類反應(yīng)。近幾年來,由于色酮廣泛的生物活性,諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以,無論是從藥理學(xué)還是從合成角度考慮,這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價值。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的第一方面目的是提供一種D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
一種D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：
式中：R＝(R)-CH(CH3)2.
該化合物相關(guān)實驗數(shù)據(jù)如下：
申請人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：在D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了色酮的結(jié)構(gòu)可以改變藥理活性。通過進一步實驗確定：使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進行取代，對D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素進行結(jié)構(gòu)改造，制備的含色酮結(jié)構(gòu)吡唑類D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，具有非常好的藥物活性。
本發(fā)明的第二方面目的是提供一種D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)、去甲去氫斑蝥素的合成：將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24～48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1)；
(2)、D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和D-纈氨酸2.93克(25mmol)加入經(jīng)過分子篩干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋干，用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3)；
(3)、6-溴代色酮苯腙的合成:
采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作：取2mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmol6-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌1h，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得黃紅色針狀產(chǎn)物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化合物4)；
(4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
將1mmol D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素和1.1mmol6-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
本發(fā)明涉及的反應(yīng)如下：
本發(fā)明的第三方面目的是提供一種D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。通過實驗驗證：上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等，具有抑制作用，其中對于Bel7402(人肝癌細(xì)胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
本發(fā)明的有益效果如下：
申請人通過研究發(fā)現(xiàn)：在D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了色酮的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生的衍生物，具有良好的藥物活性，經(jīng)進一步實驗及分析，研究不同雜環(huán)在同一分子中聚集而對藥理活性所產(chǎn)生的影響,用1,3‐偶極環(huán)加成方法在D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應(yīng)導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)，合成含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
具體實施方式：
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但實施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范圍。
實施例1：
(1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24～48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1)；
(2)、D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和D-纈氨酸2.93克(25mmol)加入經(jīng)過分子篩干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋干，用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3)；
(3)、6-溴代色酮苯腙的合成：
取2mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmol 6-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌1h，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙，黃紅色針狀產(chǎn)物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化合物4)。
(4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
將1mmol D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素和1.1mmol6-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
化合物5名稱：D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物；
化學(xué)式：C29H23BrN3O7；
物化參數(shù)：黃色結(jié)晶，產(chǎn)率53.5％，m.p.115‐116℃；
結(jié)構(gòu)確認(rèn)：
1H NMR(CD3OD)δ:7.32‐7.16(m,8H,Ar‐H),6.46(s,1H,C＝C‐H),5.16(d,J＝9.60Hz,1H,H5),4.74(d,J＝17.60Hz,1H,H4),4.56(d,J＝17.60Hz,1H,H1),4.02(d,J＝9.60Hz,1H,H6),3.42(d,J＝7.20Hz,1H,H3),3.28(d,J＝7.20Hz,1H,H2),2.63‐2.75(m,1H,CH),0.72(d,3H,J＝6.4Hz,CH3),0.94(d,3H,J＝6.4Hz,CH3)；
IR 3428(N‐C＝O),3085(ArH),1703(C＝O),1541(C＝N),1310(C‐O‐C)cm‐1；
m/e:604(100.0％),606(97.5％)；
Anal.calcd.for C29H23BrN3O7：C,57.52；H,3.88；N,6.90。
應(yīng)用實施例：采用MTT法檢測受試化合物對不同瘤株的的抗腫瘤活性。
將上述實施例制備的化合物(5)，分別以不同瘤株(腫瘤細(xì)胞Bel-7402、KB、SGC7901、HO8901、HL-60、ECA109)為實驗對象，測試化合物(5)對于不同瘤株的體外抑制作用：實驗采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法)，活性用半數(shù)抑制濃度表示(IC50)。
具體實驗步驟如下：
將化合物5用DMSO溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞Bel-7402(人肝癌細(xì)胞)、KB(口腔癌細(xì)胞)、SGC7901(胃癌細(xì)胞)、HO8901(卵巢癌細(xì)胞)、HL-60(白血病細(xì)胞)、ECA109(腸癌細(xì)胞)在96孔板上種入4000個/200μL/孔，每孔加入化合物2μL，終濃度為12.0μM，6.0μM，3.0μM，1.5μM，共同于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72小時，以DMSO(1％)為空白對照。72小時后，加入終濃度為0.25mg/mL的MTT，置于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入100μl DMSO，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(OD值)，所得數(shù)據(jù)用于計算IC50值。不同濃度的受試化合物用96孔板進行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計算IC50值，結(jié)果見下表。
表1、D‐纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物對六種腫瘤細(xì)胞株的IC50值。
通過上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對于多種腫瘤細(xì)胞株具有抑制作用，其中對于Bel7402(人肝癌細(xì)胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。