本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
女性乳腺癌是近年來發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤之一，嚴重危害婦女的健康和生命。目前，內(nèi)分泌治療成為乳腺癌治療過程中一種常用的輔助治療方法。乳腺癌的內(nèi)分泌治療主要基于拮抗乳腺癌細胞高表達的雌激素受體(estrogen receptor，ER)。乳腺癌內(nèi)分泌治療藥物Tamoxifen（他莫昔芬）僅對雌激素受體(ER)陽性的乳腺癌療效確切，而對ER陰性的乳腺癌療效不佳，并且他莫昔芬還存在嚴重的毒副作用。目前臨床上乳腺癌患者中，約1/3到1/2的癌細胞為ER表達陰性，而其預(yù)后明顯差于ER陽性乳腺癌患者，研究開發(fā)新的抗癌藥和輔助治療藥物，包括化療藥、生物制劑等有助于乳腺癌的預(yù)防和治療。
香豆素類衍生物具有抗心律失常、抗骨質(zhì)疏松、抗凝血、抗氧化、鎮(zhèn)痛、降壓、平喘、光敏以及抗HIV、抗腫瘤、抗菌等多方面的生物學(xué)活性，具有潛在的藥用價值。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種操作簡單易行、原料廉價易得、反應(yīng)效率較高且重復(fù)性好的具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物及其制備方法，經(jīng)試驗表明制得的苯并香豆素類化合物具有較好的抗乳腺癌活性。
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物，其特征在于該苯并香豆素類化合物為4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛，其結(jié)構(gòu)式為：
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本發(fā)明所述的具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物的制備方法，其特征在于：以α-萘酚、丙二酸和多聚磷酸（PPA）為原料反應(yīng)制得4-羥基-[7,8]苯并香豆素，然后在N，N-二甲基甲酰胺和三氯氧磷中與4-羥基-[7,8]苯并香豆素反應(yīng)制得目標產(chǎn)物4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛。
進一步優(yōu)選，具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物的制備方法的具體步驟為：取α-萘酚、丙二酸和多聚磷酸置于反應(yīng)容器中，其中α-萘酚與丙二酸的摩爾比為1:1，于75℃反應(yīng)3h后用冰水處理，抽濾得土黃色固體，再經(jīng)硅膠柱層析分離得到黃色簇晶體4-羥基-[7,8]苯并香豆素；取有機溶劑N，N-二甲基甲酰胺和三氯氧磷置于反應(yīng)容器中，于60℃攪拌30min后加入4-羥基-[7,8]苯并香豆素的二甲基甲酰胺溶液，再于60℃反應(yīng)12h后用水處理，然后抽濾得棕色固體，再經(jīng)硅膠柱層析分離得到橙色具有金屬光澤的簇晶4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛。
本發(fā)明所述的具有抗乳腺癌活性的苯并香豆素類化合物的制備方法中的反應(yīng)方程式為：
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經(jīng)MTT實驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明合成的化合物有良好的體外抗乳腺癌細胞增殖活性，對人乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231細胞生長均受到較明顯的抑制，可作為抗腫瘤藥物或先導(dǎo)化合物進一步開發(fā)。
具體實施方式
以下通過實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進一步詳細說明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
實施例1
4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛的合成
（1）4-羥基-[7,8]苯并香豆素的合成
取α-萘酚(4.32g, 3mmol)、丙二酸(3.12g, 3mmol)和PPA適量，置于100mL反應(yīng)茄瓶中于75℃反應(yīng)3h后用冰水處理，抽濾得土黃色固體，再經(jīng)硅膠柱層析（二氯甲烷：甲醇=10: 1, v/v）分離得到黃色簇晶體4-羥基-[7, 8]苯并香豆素3.68g，收率58%。
1H-NMR: δH (400MHz, DMSO-d6) 8.39(1H, m, CH), 8.08(1H, m, CH), 7.87(2H, s, 2×CH), 7.75(2H, m, 2×CH), 5.73(1H, s, CH)。
（2）4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛的合成
取N，N-二甲基甲酰胺5mL和三氯氧磷5mL置于100mL反應(yīng)茄瓶中，于60℃攪拌30min后加入1.42g關(guān)鍵中間體4-羥基-[7,8]苯并香豆素和10mL二甲基甲酰胺組成的溶液，再于60℃反應(yīng)12h后用水處理，然后抽濾得棕色固體，再經(jīng)硅膠柱層析（石油醚: 乙酸乙酯=5:1, v/v）得橙色具有金屬光澤的簇晶1.49g，收率86%。
1H-NMR: δH (400MHz, CDCl3) 10.43 (s, 1H, CHO), 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H, CH), 8.02 (d, J = 8.9 Hz, 1H, CH), 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 1H, CH), 7.79 (d, J = 5.8 Hz, 1H, CH), 7.72 (dd, J = 15.6, 7.5 Hz, 2H, 2×CH). 13C-NMR: δC(100MHz, CDCl3) 187.2 (C-17), 158.9 (C-11), 155.8 (C-13), 152.5 (C-10), 136.9 (C-4), 131.5 (C-7), 128.6 (C-3), 128.5 (C-2), 126.1 (C-1), 124.1 (C-5), 122.7 (C-6), 121.6 (C-9), 117.6 (C-12), 114.5 (C-8)。HRMS: (ESI) calcd for C14H7ClO3[M+Na]+ 280.9976, found 280.9981。
實驗例2
本實施例的目的是在研究實施例1合成化合物的體外抗腫瘤細胞增值活性
取對數(shù)生長期的乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231以6×103個/孔接種至96孔板中，培養(yǎng)24h后將培養(yǎng)基更換為含4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛的培養(yǎng)基，每個樣品9個濃度，分別為0.32μg/mL、1.6μg/mL、8μg/mL、40μg/mL和200μg/mL，設(shè)空白對照組，繼續(xù)培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后，加MTT 20μL每孔，4h后甩掉培養(yǎng)基，每孔加150mL DMSO，震蕩均勻后酶標儀490nm波長測其OD值，根據(jù)OD值利用SPSS軟件計算化合物的IC50值。
實驗結(jié)果表明：4-氯-[7,8]苯并香豆素-3-醛作用48h后，MCF-7、MDA-MB-231細胞生長均受到較明顯的抑制，IC50值分別為8.16μg/mL和2.19μg/mL（陽性對照他莫昔芬IC50值分別為10.45μg/mL和25.79μg/mL）。
以上實施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進均落入本發(fā)明保護的范圍內(nèi)。