技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，并涉及含有所述鹽的藥物組合物。此外，本發(fā)明涉及使用所述鹽治療和/或預(yù)防如下Aβ-相關(guān)病理的治療方法：唐氏綜合征(Down’s syndrome)和β-淀粉樣蛋白血管病(β-amyloid angiopathy)例例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病(cerebral amyloid angiopathy)、遺傳性腦出血(hereditary cerebral hemorrhage)、與認(rèn)知缺損(cognitive impairment)相關(guān)的病狀例例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損(mild cognitive impairment)”)、阿爾茨海默病、記憶喪失(memory loss)、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀(attention deficit symptom)、與疾病例如阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆(包括混合型血管和變性源性癡呆(dementia of mixed vascular and degenerative origin)、早老性癡呆(pre-senile dementia)、老年性癡呆(senile dementia)和與帕金森病相關(guān)的癡呆)、進(jìn)行性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy)或皮質(zhì)基底變性(cortical basal degeneration)。

背景技術(shù)：

區(qū)分阿爾茨海默病(AD)的主要神經(jīng)病理學(xué)事件為具有40-42個(gè)殘基的淀粉樣蛋白β-肽(Aβ)在腦實(shí)質(zhì)和大腦血管中的沉積。大量遺傳學(xué)、生物化學(xué)和體內(nèi)數(shù)據(jù)支持了Aβ在最終導(dǎo)致AD的病理學(xué)級(jí)聯(lián)中的關(guān)鍵作用。患者通常在其60或70歲時(shí)出現(xiàn)早期癥狀(通常為記憶喪失)。疾病隨癡呆加重和Aβ沉積增加而進(jìn)展。另外，微管相關(guān)蛋白τ的高磷酸化形式積聚在神經(jīng)元中，這對(duì)神經(jīng)元的功能造成很大的有害影響。盛行的關(guān)于Aβ和τ蛋白病理之間的時(shí)間關(guān)系的工作假設(shè)認(rèn)為在人類和動(dòng)物疾病模型中Aβ沉積在τ蛋白聚集前發(fā)生。在該背景下值得注意的是，Aβ介導(dǎo)該病理學(xué)功能的確切分子性質(zhì)目前為集中研究的問(wèn)題。最有可能的是，存在一系列毒性物質(zhì)，其范圍為低階Aβ低聚物至超分子裝配物例如Aβ纖絲。

Aβ肽為I型蛋白APP(Aβ淀粉樣蛋白前體蛋白)的整合片段，而I型蛋白APP是一種在人類組織中普遍表達(dá)的蛋白質(zhì)。因?yàn)榭稍谘獫{和腦脊液(CSF)及培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)可溶性Aβ，所以APP必然經(jīng)歷蛋白水解。存在三種主要的與AD病理生物學(xué)相關(guān)的APP裂解即所謂的α-、β-和γ-裂解。α-裂解大致在APP的Aβ域的中間進(jìn)行且通過(guò)金屬蛋白酶ADAM10或ADAM17(后者也稱為TACE)來(lái)實(shí)現(xiàn)。β-裂解在Aβ的N-末端發(fā)生且通過(guò)跨膜天冬氨酰基蛋白酶β位點(diǎn)APP裂解酶1(BACE1)來(lái)進(jìn)行。γ-裂解在Aβ的C-末端進(jìn)行且隨后釋放肽且通過(guò)稱為γ-分泌酶的多重亞單位天冬氨?；鞍酌竵?lái)實(shí)現(xiàn)。ADAM10/17裂解及隨后的γ-分泌酶裂解引起可溶性p3肽的釋放，而可溶性p3肽為不能在人類中形成淀粉樣蛋白沉積物的N-末端截短型Aβ片段。該蛋白水解途徑通常稱為非淀粉樣蛋白生成途徑。BACE1和γ-分泌酶所引起的連續(xù)裂解可產(chǎn)生完整的Aβ肽，因此該加工過(guò)程稱為淀粉樣蛋白生成途徑。在該現(xiàn)有認(rèn)識(shí)下有可能設(shè)想出兩種可能減少Aβ產(chǎn)生的途徑：刺激非淀粉樣蛋白生成加工或抑制或調(diào)節(jié)淀粉樣蛋白生成加工。本申請(qǐng)關(guān)注于后一種策略即抑制或調(diào)節(jié)淀粉樣蛋白生成加工。

淀粉樣蛋白生成斑塊和血管性淀粉樣蛋白血管病也是以下患者的腦部特征，所述患者患有第21對(duì)染色體三體癥(Trisomy 21)(唐氏綜合征)、具有荷蘭型淀粉樣變性的遺傳性腦出血(HCHWA-D)和其它神經(jīng)變性障礙。神經(jīng)原纖維纏結(jié)也出現(xiàn)在其它神經(jīng)變性障礙(包括引起癡呆的障礙)中(Varghese,J.等人,Journal of Medicinal Chemistry,2003,46,4625-4630)。β-淀粉樣蛋白沉積物主要為Aβ肽的聚集物，而Aβ肽為淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)的蛋白水解產(chǎn)物。更具體地，作為β-淀粉樣蛋白生成途徑的一部分，Aβ肽如下產(chǎn)生：APP在C-末端通過(guò)一種或多種γ-分泌酶來(lái)裂解且在N-末端通過(guò)β-分泌酶(BACE)[也稱為天冬氨?；鞍酌富駻sp2或β位點(diǎn)APP裂解酶(BACE)]來(lái)裂解。

BACE的活性與由APP產(chǎn)生Aβ肽直接相關(guān)(Sinha等人,Nature,1999,402,537-540)且越來(lái)越多的研究表明對(duì)BACE的抑制可抑制Aβ肽的產(chǎn)生(Roberds,S.L.等人,Human Molecular Genetics,2001,10,1317-1324)。BACE為膜結(jié)合1型蛋白，其被合成為具有部分活性的酶原且在腦組織中大量表達(dá)。其被認(rèn)為代表了主要的β-分泌酶活性且被認(rèn)為是產(chǎn)生淀粉樣β肽(Aβ)的限速步驟。

因此，降低或阻斷BACE活性的藥物應(yīng)該在腦中或在Aβ或其片段沉積的其它處降低Aβ水平和Aβ片段水平并由此減緩淀粉樣蛋白斑塊的形成和AD或其它涉及Aβ或其片段沉積的疾病的進(jìn)展。因此，BACE就開(kāi)發(fā)用于治療和/或預(yù)防Aβ相關(guān)病理的藥物而言是重要的候選物，所述Aβ相關(guān)病理為例如唐氏綜合征、β淀粉樣蛋白血管病例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病或遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與疾病例如阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆(包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆)、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基底變性。

因此，通過(guò)用抑制劑例如本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕衔镆种艬ACE來(lái)抑制Aβ及其部分的沉積是有用的。

抑制Aβ沉積的治療潛力已促使多個(gè)團(tuán)隊(duì)分離和表征分泌酶且鑒定它們的潛在抑制劑。

附圖說(shuō)明

圖1為(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽的X-射線粉末衍射圖。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明涉及化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽?？晒┻x擇地，(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽(camsylate salt)可描述為(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽(camphorsulfonic acid salt)。

本發(fā)明的一實(shí)施方案為化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其特征在于提供了X-射線粉末衍射(XRPD)圖，所述X-射線粉末衍射圖展現(xiàn)了基本上以下的d-間距值的峰，如表1所示：

表1：X-射線粉末衍射鑒別的峰

本發(fā)明另一實(shí)施方案為化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其特征在于提供了X-射線粉末衍射圖，所述X-射線粉末衍射圖展現(xiàn)了基本上以下的d-間距值的非常強(qiáng)、強(qiáng)和中等峰，如表2所示：

表2：X-射線粉末衍射鑒別的峰

如本申請(qǐng)中所使用的，術(shù)語(yǔ)“化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽”也涵蓋其所有溶劑化物和共晶。

化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的替代鹽包括琥珀酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、富馬酸鹽和1.5-萘二磺酸鹽。

本發(fā)明的一個(gè)具體方面提供了藥物組合物，其包含作為活性成分的治療有效量的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，以及藥用賦形劑、載體或稀釋劑。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其用作藥物。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，用作治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物的用途。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽用作治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物的用途，其中所述Aβ-相關(guān)病理為唐氏綜合征、β-淀粉樣蛋白血管病、腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥、MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性、混合型血管源性癡呆、變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽用于治療或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物的用途。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽在制備用于治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物中的用途。

本發(fā)明的另一方面提供了化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽在制備用于治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物中的用途，其中所述Aβ-相關(guān)病理為唐氏綜合征、β-淀粉樣蛋白血管病、腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥、MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性、混合型血管源性癡呆、變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

本發(fā)明的另一方面提供化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽在制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物中的用途。

本發(fā)明的另一方面提供了抑制BACE活性的方法，其包括將所述BACE與化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽接觸。

本發(fā)明的另一方面提供了在有此需要的患者中治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽。

本發(fā)明的另一方面提供了在有此需要的患者中治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其中所述Aβ-相關(guān)病理為唐氏綜合征、β-淀粉樣蛋白血管病、腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥、MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性、混合型血管源性癡呆、變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

本發(fā)明的另一方面提供了在有此需要的患者中治療或預(yù)防阿爾茨海默病的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制BACE活性的方法，其包括使BACE與化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽接觸。BACE被認(rèn)為代表主要的β-內(nèi)分泌酶活性，并被視為生成淀粉樣-β-蛋白(Aβ)的限速步驟。因此，通過(guò)抑制劑如本申請(qǐng)所提供的化合物抑制BACE可用于抑制Aβ及其部分的沉積。因?yàn)锳β及其部分的沉積與疾病例如阿爾茨海默病有關(guān)，所以BACE是研發(fā)治療和/或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物的重要候選物，所述Aβ-相關(guān)病理如唐氏綜合征和β-淀粉樣蛋白血管病，例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血，與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥，例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與例如阿爾茨海默病的疾病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其包括向哺乳動(dòng)物(包括人類)給予治療有效量的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦酸鹽，其中所述Aβ-相關(guān)病理如唐氏綜合征和β-淀粉樣蛋白血管病，例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血，與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥，例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與例如阿爾茨海默病的疾病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其通過(guò)向哺乳動(dòng)物(包括人類)給予化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦酸鹽以及認(rèn)知和/或記憶增強(qiáng)劑進(jìn)行，其中所述Aβ-相關(guān)病理如唐氏綜合征和β-淀粉樣蛋白血管病，例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血，與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥，例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與例如阿爾茨海默病的疾病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其通過(guò)向哺乳動(dòng)物(包括人類)給予化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦酸鹽和膽堿酯酶抑制劑或抗炎藥物進(jìn)行，其中所述Aβ-相關(guān)病理如唐氏綜合征和β-淀粉樣蛋白血管病，例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血，與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥，例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與例如阿爾茨海默病的疾病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其通過(guò)向哺乳動(dòng)物(包括人類)給予本發(fā)明化合物和非典型抗精神病藥進(jìn)行，其中所述Aβ-相關(guān)病理如唐氏綜合征和β-淀粉樣蛋白血管病，例如但不限于腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血，與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥，例如但不限于MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與例如阿爾茨海默病的疾病相關(guān)的神經(jīng)變性或癡呆包括混合型血管和變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。非典型抗精神病藥包括但不限于奧氮平(商品名為Zyprexa)、阿立哌唑(商品名為Abilify)、利培酮(商品名為Risperdal)、喹硫平(商品名為Seroquel)、氯氮平(商品名為Clozaril)、齊拉西酮(商品名為Geodon)和奧氮平/氟西汀(商品名為Symbyax)。

在一些實(shí)施方案中，使用化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽治療的哺乳動(dòng)物或人類被診斷為患有特定疾病或病癥，如本申請(qǐng)所述的那些。在這些情況中，所述被治療的哺乳動(dòng)物或人類需要此治療。然而，診斷并不需要在先進(jìn)行。

本發(fā)明還涉及以下方面：

項(xiàng)1.(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽。

項(xiàng)2.(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其特征在于提供了X-射線粉末衍射(XRPD)圖，所述X-射線粉末衍射圖展現(xiàn)了基本上以下的d-間距值的非常強(qiáng)、強(qiáng)和中等峰：

項(xiàng)3.(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽，其特征在于提供了基本上如圖1所示的X-射線粉末衍射圖。

項(xiàng)4.一種藥物組合物，其包含作為活性成分的治療有效量的項(xiàng)1、2或3的鹽，以及至少一種藥用賦形劑、載體或稀釋劑。

項(xiàng)5.項(xiàng)1、2或3的鹽，其用作藥物。

項(xiàng)6.項(xiàng)5的鹽，其用于治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物。

項(xiàng)7.項(xiàng)6的鹽，其用于治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物，其中所述Aβ-相關(guān)病理為唐氏綜合征、β-淀粉樣蛋白血管病、腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥、MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性、混合型血管源性癡呆、變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

項(xiàng)8.項(xiàng)7的鹽，其用于治療或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物。

項(xiàng)9.項(xiàng)1、2或3的鹽，其用作與至少一種認(rèn)知增強(qiáng)劑、記憶增強(qiáng)劑或膽堿酯酶抑制劑組合治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的藥物。

項(xiàng)10.一種在有此需要的患者中治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的項(xiàng)1、2或3的鹽。

項(xiàng)11.項(xiàng)10的方法，其中所述Aβ-相關(guān)病理為唐氏綜合征、β-淀粉樣蛋白血管病、腦淀粉樣蛋白血管病、遺傳性腦出血、與認(rèn)知缺損相關(guān)的病癥、MCI(“輕度認(rèn)知缺損”)、阿爾茨海默病、記憶喪失、與阿爾茨海默病相關(guān)的注意力缺陷癥狀、與阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)變性、混合型血管源性癡呆、變性源性癡呆、早老性癡呆、老年性癡呆、與帕金森病相關(guān)的癡呆、進(jìn)行性核上性麻痹或皮質(zhì)基質(zhì)變性。

項(xiàng)12.一種在有此需要的患者中治療或預(yù)防阿爾茨海默病的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的項(xiàng)1、2或3的鹽。

項(xiàng)13.一種在有此需要的患者中治療或預(yù)防Aβ-相關(guān)病理的方法，其包括向所述患者給予治療有效量的項(xiàng)1、2或3的鹽，和至少一種認(rèn)知增強(qiáng)劑、記憶增強(qiáng)劑或膽堿酯酶抑制劑。

本申請(qǐng)中陳述的定義意欲闡明在本申請(qǐng)通篇中所用的術(shù)語(yǔ)。術(shù)語(yǔ)“本申請(qǐng)”意指整個(gè)申請(qǐng)。

如本申請(qǐng)中所使用的，“藥用”在本申請(qǐng)中用于指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于與人和動(dòng)物組織接觸而無(wú)過(guò)度毒性、刺激性、過(guò)敏反應(yīng)或其他問(wèn)題或并發(fā)癥且與合理效益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。

本申請(qǐng)所定義的抗癡呆治療可以單一療法施用或可包含除本發(fā)明化合物外的常規(guī)化學(xué)療法。此類化學(xué)療法可包括一種或多種以下類別的藥劑：乙酰膽堿酯酶抑制劑、抗炎藥物、認(rèn)知和/或記憶增強(qiáng)劑或非典型抗精神病藥。

此類組合療法可通過(guò)附加、并行、同時(shí)、順序或單獨(dú)給藥所述治療的各別組分實(shí)現(xiàn)。此類組合產(chǎn)品使用本發(fā)明的化合物。

其他的常規(guī)化學(xué)療法可包括一種或更多種以下類別的藥劑：

(i)抗抑郁藥、(ii)非典型抗精神病藥、(iii)抗精神病藥、(iv)抗焦慮藥、(v)抗驚厥藥、(vi)目前使用的阿爾茨海默病療法、(vii)帕金森病療法、(viii)偏頭痛療法、(ix)中風(fēng)療法、(x)尿失禁療法、(xi)神經(jīng)性疼痛療法、(xii)傷害性疼痛療法、(xiii)失眠療法和(xiv)情緒穩(wěn)定劑。上述療法的已知治療可與本申請(qǐng)所述發(fā)明聯(lián)用。

此類組合產(chǎn)品使用在本申請(qǐng)所述劑量范圍內(nèi)的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽和在所批準(zhǔn)的劑量范圍內(nèi)和/或由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定的劑量范圍內(nèi)的其它一種或多種其他藥物活性化合物。

本發(fā)明化合物可按以下方式來(lái)給藥：口服、胃腸外、口腔、陰道、直腸、吸入、吹入、舌下、肌內(nèi)、皮下、局部、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸內(nèi)、靜脈內(nèi)、硬膜外、鞘內(nèi)、腦室內(nèi)和注射至關(guān)節(jié)中。

劑量將取決于給藥途徑、疾病的嚴(yán)重度、患者的年齡和體重以及在確定最適于特定患者的個(gè)別方案和劑量水平時(shí)主治醫(yī)師通?？紤]的其他因素。

用于癡呆療法的本發(fā)明化合物的有效量是足以使溫血?jiǎng)游锇Y狀緩解，尤其是人類癡呆癥狀緩解，減慢癡呆進(jìn)展或者降低具有癡呆癥狀的患者病情加重風(fēng)險(xiǎn)的量。

除本發(fā)明的化合物外，本發(fā)明的藥物組合物還可包含一種或多種在治療一種或多種本申請(qǐng)所述的疾病病狀種有價(jià)值的藥理學(xué)試劑，或者與一種或多種在治療一種或多種本申請(qǐng)所述的疾病病狀中有價(jià)值的藥理學(xué)試劑共給藥(同時(shí)或者順序)。

待給藥的化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽的量將隨所治療的患者而變化且將為每天約100ng/kg體重至100mg/kg體重。例如，劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本申請(qǐng)公開(kāi)的內(nèi)容和本領(lǐng)域的知識(shí)來(lái)容易地確定。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定化合物及任選的添加劑、媒介物和/或載體在組合物中的量和在本發(fā)明方法中的給藥量。

制備方法

(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽

化合物(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽可通過(guò)在室溫至80℃之間的溫度自(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺于適宜的溶劑(例如2-丙醇、乙腈或丙酮或這些與水的混合物)中的溶液起始，隨后將所獲得的溶液與(1S)-(+)-10-樟腦磺酸直接混合或與溶于適宜溶劑(例如2-丙醇或水)中的(1S)-(+)-10-樟腦磺酸混合獲得。結(jié)晶可通過(guò)蒸發(fā)溶劑和/或通過(guò)冷卻溶液或直接以鹽反應(yīng)結(jié)晶獲得?？墒褂镁ХN來(lái)開(kāi)始結(jié)晶?？赏ㄟ^(guò)取樣小體積的溶液然后快速對(duì)其冷卻以誘導(dǎo)結(jié)晶，從而從該批次本身制得晶種。然后將晶體添加至該批次中作為晶種。

XRPD分析：

在根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備的樣品上進(jìn)行X-射線粉末衍射分析(XRPD)，例如描述于以下文獻(xiàn)中的方法：Giacovazzo,C.et al(1995),Fundamentals of Crystallography,Oxford University Press；Jenkins,R.and Snyder,R.L.(1996),Introduction to X-Ray Powder Diffractometry,John Wiley&Sons,New York；Bunn,C.W.(1948),Chemical Crystallography,Clarendon Press,London；或Klug,H.P.&Alexander,L.E.(1974),X-ray Diffraction Procedures,John Wiley and Sons,New York。使用PANanlytical X’Pert PRO MPD衍射儀從1至60°2θ進(jìn)行X-射線衍射分析96分鐘。XRPD間距值可在最后一位小數(shù)位的±2范圍內(nèi)變化。

相對(duì)強(qiáng)度衍生自經(jīng)可變狹縫測(cè)量的衍射圖。

所測(cè)量的相對(duì)強(qiáng)度vs.最強(qiáng)峰如下表示：最強(qiáng)(vs)為大于50％，強(qiáng)(s)為25至50％，中等(m)為10至25％，弱(w)為5至10％和非常弱(vw)為低于5％相對(duì)峰高。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，由于各種各樣的原因(包括優(yōu)選取向)，XRPD強(qiáng)度可在不同樣品和不同樣品制備物間變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解的是，測(cè)量角中存在更小的偏移，因此由于各種各樣的原因(包括衍射儀中樣品表面水平的變化)可存在d-間距。

實(shí)施例

實(shí)施例1

6'-溴螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1',4(3'H)-二酮

在20-30℃將叔丁醇鉀(223g,1.99mol)加入含有6-溴-1-茚滿酮(8.38kg,39.7mol)于THF(16.75L)中的攪拌混合物的100L反應(yīng)器中。然后保持溫度在20-30℃之間，在15分鐘內(nèi)將丙烯酸甲酯(2.33L,25.8mol)加至混合物中。在20-30℃在20分鐘內(nèi)添加丙烯酸甲酯(2.33L,25.8mol)，然后添加叔丁醇鉀(89.1g,0.79mol)溶于(400mL)中的溶液。然后在20-30℃在20分鐘內(nèi)添加第三份溶于THF(400mL)的叔丁醇鉀(90g,0.80mol)，然后第三次加入丙烯酸甲酯(2.33L,25.8mol)。在20-30℃在1小時(shí)內(nèi)將溶于THF(21.9L)的叔丁醇鉀(4.86kg,43.3mol)加入反應(yīng)器中。將反應(yīng)混合物加熱至約65℃并蒸餾除去23L溶劑。將反應(yīng)混合物溫度降低至60℃并在60℃攪拌該混合物6小時(shí)后在55-60℃在30分鐘內(nèi)將50％溶于水(51.1L)的氫氧化鉀(2.42L,31.7mol)加至該混合物中，在2小時(shí)內(nèi)冷卻至20℃。在20℃攪拌12小時(shí)后，將固體物質(zhì)濾出，用水(8.4L)和THF(4.2L)的混合物洗滌2次，然后在50℃真空干燥，得到6'-溴螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1',4(3'H)-二酮(7.78kg；26.6mol)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.78-1.84(m,2H),1.95(td,2H),2.32–2.38(m,2H),2.51-2.59(m,2H),3.27(s,2H),7.60(d,1H),7.81(m,1H),7.89(m,1H).

實(shí)施例2

(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-酮

在約0-5℃歷時(shí)約25分鐘，將溶于DCM(3.8L)中的甲硼烷叔丁胺絡(luò)合物(845g,9.7mol)添加至6'-溴螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1',4(3'H)-二酮(7.7kg,26.3mol)于DCM(42.4L)中的漿液中。在分析確認(rèn)轉(zhuǎn)化為>98％后，將反應(yīng)混合物在0-5℃攪拌1小時(shí)。添加自氯化鈉(2.77kg)、水(13.3L)和37％鹽酸(2.61L,32mol)制備的溶液。將該混合物溫?zé)嶂良s15℃，并在分層后分離各相。將有機(jī)相與甲磺酸甲酯(2.68L,31.6mol)和氯化四丁銨(131g,0.47mol)一起返回至反應(yīng)器中，并在20℃劇烈攪動(dòng)該混合物。然后歷時(shí)約1小時(shí)將50％氫氧化鈉(12.5L,236mol)加至劇烈攪動(dòng)的混合物中，并在20℃劇烈攪動(dòng)該反應(yīng)混合物過(guò)夜。添加水(19L)，并在分離后棄除水相。將有機(jī)層加熱至約40℃并蒸餾除去33L溶劑。加入乙醇(21L)并升高溫度重新開(kāi)始蒸餾(在高達(dá)79℃蒸餾除去22L)。在約75℃加入乙醇(13.9L)。保持溫度在72-75℃之間歷時(shí)30分鐘加入水(14.6L)。約400ml溶液被取出置于500ml聚乙烯瓶中且該樣品自發(fā)結(jié)晶。將該批次冷卻至50℃，并將結(jié)晶的漿液樣品添加回溶液中。將混合物冷卻至40℃。在過(guò)夜攪拌后將該混合物冷卻至20℃。濾出固體，用乙醇(6.6L)和水(5L)的混合物洗滌，并在50℃真空干燥，得到(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-酮(5.83kg,18.9mol)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.22-1.32(m,2H),1.41-1.48(m,2H),1.56(td,2H),1.99-2.07(m,2H),3.01(s,2H),3.16–3.23(m,1H),3.27(s,3H),7.56(d,1H),7.77(d,1H),7.86(dd,1H).

實(shí)施例3

(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-亞胺鹽酸鹽

在環(huán)境溫度，向100L反應(yīng)器中加入(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-酮(5.82kg；17.7mol)，隨后加入乙醇鈦(IV)(7.4L；35.4mol)和叔丁基亞磺酰胺(2.94kg；23.0mol)于2-甲基四氫呋喃(13.7L)中的溶液。攪拌該混合物并加熱至82℃。在82℃保持30分鐘后，將溫度進(jìn)一步升高(高達(dá)97℃)并蒸餾除去8L溶劑。將反應(yīng)混合物冷卻至87℃并在給定反應(yīng)溫度82℃添加2-甲基四氫呋喃(8.2L)。將反應(yīng)混合物在82℃攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)溫度升高(至97℃)并蒸餾除去8.5L溶劑。將反應(yīng)混合物冷卻至87℃，并在給定反應(yīng)溫度82℃添加2-甲基四氫呋喃(8.2L)。在3.5小時(shí)后，將反應(yīng)溫度進(jìn)一步升高(至97℃)并蒸餾除去8L溶劑。將反應(yīng)冷卻至87℃并在給定反應(yīng)溫度82℃添加2-甲基四氫呋喃(8.2L)。在2小時(shí)后，將反應(yīng)溫度進(jìn)一步升高(至97℃)并蒸餾除去8.2L溶劑。將反應(yīng)冷卻至87℃并在給定反應(yīng)溫度82℃添加2-甲基四氫呋喃(8.2L)。在82℃將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)溫度進(jìn)一步升高(至97℃)并蒸餾除去8L溶劑。將反應(yīng)冷卻至25℃。加入二氯甲烷(16.4L)。向單獨(dú)的反應(yīng)器添加水(30L)并劇烈攪動(dòng)，添加硫酸鈉(7.54kg)并將所得溶液冷卻至10℃。向該水溶液中添加硫酸(2.3L,42.4mol)并將溫度調(diào)整至20℃。取出6L該酸性水溶液并保存?zhèn)溆谩v時(shí)5分鐘在良好攪動(dòng)下向該酸性水溶液添加有機(jī)反應(yīng)混合物。用二氯甲烷(16.4L)洗滌有機(jī)反應(yīng)容器，并也將該二氯甲烷洗滌液加至酸性水中。將混合物攪拌15分鐘，然后靜置20分鐘。將下層水相排出，并添加所保存的6L酸性洗滌液然后添加水(5.5L)。將混合物攪拌15分鐘，然后靜置20分鐘。將下層的有機(jī)相排出至酸壇(carboy)并將上層水層棄除。將有機(jī)層加回至容器中并添加硫酸鈉(2.74kg)，將該混合物攪動(dòng)30分鐘。濾出硫酸鈉，用二氯甲烷(5.5L)洗滌，并將合并的有機(jī)相加至干凈的容器中。將該批次加熱蒸餾(收集31L最大溫度57℃)。將該批次冷卻至40℃并添加二氯甲烷(16.4L)。將該批次加熱蒸餾(收集17L最大溫度54℃)。將該批次冷卻至20℃并添加二氯甲烷(5.5L)和乙醇(2.7L)。保持溫度在16-23℃之間歷時(shí)45分鐘將2M鹽酸的乙醚溶液(10.6L；21.2mol)加入該反應(yīng)。在20℃攪拌所得漿液1小時(shí)，此后將固體濾出，并用1:1二氯甲烷和乙醚的混合物洗滌3次(3x 5.5L)。所述固體在50℃真空干燥，得到(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-亞胺鹽酸鹽(6.0kg；14.3mol；¹H NMR測(cè)定82％w/w)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 130(m,2H),1.70(d,2H),1.98(m,2H),2.10(m,2H),3.17(s,2H),3.23(m,1H),3.29(s,3H),7.61(d,1H),8.04(dd,1H),8.75(d,1H),12.90(br s,2H).

實(shí)施例4

(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”(3”H)-硫酮

將原甲酸三甲酯(4.95L；45.2mol)和二異丙基乙基胺(3.5L；20.0mol)加至含有于異丙醇(50.5L)中的(1r,4r)-6'-溴-4-甲氧基螺[環(huán)己烷-1,2'-茚]-1'(3'H)-亞胺鹽酸鹽(6.25kg；14.9mol)的反應(yīng)器。攪拌該反應(yīng)混合物并在1小時(shí)內(nèi)加熱至75℃從而獲得澄清的溶液。將溫度設(shè)置為70℃，并歷時(shí)1小時(shí)加入2M2-氧代丙硫酰胺于異丙醇中的溶液(19.5kg；40.6mol)，其后將反應(yīng)在69℃攪拌過(guò)夜。對(duì)該批次用(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”(3”H)-硫酮(3g；7.6mmol)種晶，并將溫度降低至60℃且攪拌1小時(shí)。通過(guò)蒸餾濃縮該混合物(蒸餾溫度約為60℃；蒸餾除去31L)。在60℃在1小時(shí)內(nèi)添加水(31L)，將混合物攪拌3小時(shí)，然后在90分鐘內(nèi)將溫度降低至25℃。將固體濾出，用異丙醇洗滌兩次(2x 5.2L)并在40℃真空干燥，得到(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”(3”H)-硫酮(4.87kg；10.8mol；¹H NMR測(cè)定87％w/w)。

實(shí)施例5

(1r,1’R,4R)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺D(+)-10-樟腦磺酸鹽

將7M氨的甲醇溶液(32L；224mol)加至含有(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”(3”H)-硫酮(5.10kg；11.4mol)和醋酸鋅二水合物(3.02kg；13.8mol)的反應(yīng)器中。將反應(yīng)器密封，將混合物冷卻至30℃，然后將混合物加熱至80℃并攪拌24小時(shí)。加入1-丁醇(51L)并真空濃縮反應(yīng)混合物蒸餾除去約50L。添加1-丁醇(25L)并真空濃縮混合物蒸餾除去27L。將混合物冷卻至30℃并加入1M氫氧化鈉(30L；30mol)。將雙相性混合物攪動(dòng)15分鐘。分離除去下層水相。加入水(20L)并將混合物攪動(dòng)30分鐘。分離除去下層水相。加入(1S)-(+)-10-樟腦磺酸(2.4kg；10.3mol)，然后將有機(jī)相加熱至70℃。在70℃攪拌該混合物1小時(shí)，然后歷時(shí)3小時(shí)斜降至20℃。將固體濾出，用乙醇(20L)洗滌并在50℃真空干燥，得到(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺(+)-10-樟腦磺酸鹽(3.12kg；5.13mol；¹H NMR測(cè)定102％w/w)。

實(shí)施例6

(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺

將溶于水(0.1L)中的Na₂PdCl₄(1.4g；4.76mmol)和3-(二叔丁基膦)丙烷磺酸鹽(2.6g；9.69mmol)加至含有于1-丁醇(7.7L)和水(2.6L)的混合物中的(1r,4r)-6’-溴-4-甲氧基-5”-甲基-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺(+)-10-樟腦磺酸鹽(1kg；1.58mol)、碳酸鉀(0.763kg；5.52mol)的容器中。將混合物用氮?dú)庑⌒亩杌?，此后加?-(丙-1-炔基)吡啶-3-基硼酸(0.29kg；1.62mol)并再次將混合物用氮?dú)庑⌒亩杌?。將反?yīng)混合物加熱至75℃并在分析顯示完全轉(zhuǎn)化后攪拌2小時(shí)。將溫度調(diào)整至45℃。停止攪拌并將下層水相分離。將有機(jī)層用水洗滌3次(3x 4L)。將反應(yīng)溫度調(diào)整至22℃并加入膦SPM32清除劑(0.195kg)，將混合物攪動(dòng)過(guò)夜。濾出清除劑，并用1-丁醇(1L)洗滌。將反應(yīng)減壓蒸餾濃縮至3L。加入乙酸丁酯(7.7L)并再次將混合物減壓蒸餾濃縮至3L。加入乙酸丁酯(4.8L)并將混合物加熱至60℃。減壓蒸餾將混合物濃縮至約4L，然后將該混合物攪拌1小時(shí)。將溫度設(shè)置為60℃，并歷時(shí)20分鐘添加庚烷(3.8L)。歷時(shí)3小時(shí)將混合物冷卻至20℃，然后攪拌過(guò)夜。濾出固體并用1:1乙酸丁酯:庚烷的混合物洗滌2次(2x 2L)。將產(chǎn)物在50℃真空干燥，得到(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺(0.562kg；1.36mol；¹H NMR測(cè)定100％w/w).¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)ppm 0.97(d,1H),1.12-1.30(m,2H),1.37-1.51(m,3H),1.83(d,2H),2.09(s,3H),2.17(s,2H),2.89-3.12(m,3H),3.20(s,3H),6.54(s,2H),6.83(s,1H),7.40(d,1H),7.54(d,1H),7.90(s,1H).8.51(d,1H),8.67(d,1H)

實(shí)施例7

(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽的制備

在60℃將1.105kg(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺溶于8.10L 2-丙醇和475mL水中。然后在60℃加入1.0mol當(dāng)量(622gram)的(1S)-(+)-10樟腦磺酸。攪動(dòng)該漿液直至所有(1S)-(+)-10樟腦磺酸溶解。在60℃添加第二份2-丙醇(6.0L)，然后蒸餾內(nèi)容物直至收集到4.3L餾出液。然后在65℃加入9.1L庚烷。在1小時(shí)后，該批次變得不透明。然后在約75℃進(jìn)行再次蒸餾并收集8.2L餾出液。然后歷時(shí)2小時(shí)將該批次冷卻至20℃并維持在該溫度過(guò)夜。然后過(guò)濾該批次并用1.8L 2-丙醇和2.7L庚烷的混合物洗滌。最后，該物質(zhì)在50℃減壓干燥。收率為1.44kg(83.6％w/w)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm12.12(1H,s),9,70(2H,d,J 40.2),8.81(1H,d,J 2.1),8.55(1H,d,J 1.7),8.05(1H,dd,J 2.1,1.7),7.77(1H,dd,J 7.8,1.2),7.50(2H,m),3.22(3H,s),3.19(1H,d,J 16.1),3.10(1H,d,J 16.1),3.02(1H,m),2.90(1H,d,J 14.7),2.60(1H,m),2.41(1H,d,J 14.7),2.40(3H,s),2.22(1H,m),2.10(3H,s),1.91(3H,m),1.81(1H,m),1.77(1H,d,J 18.1),1.50(2H,m),1.25(6H,m),0.98(3H,s),0.69(3H,s).

生物測(cè)定

可使用以下方法測(cè)試(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽的活性水平：

TR-FRET測(cè)定

用于TR-FRET的β-分泌酶如下制備：

人β-分泌酶的可溶性部分(AA 1-AA 460)的cDNA使用ASP2-Fc10-1-IRES-GFP-neoK哺乳動(dòng)物表達(dá)載體來(lái)克隆。將基因與IgG1(親和標(biāo)簽)的Fc結(jié)構(gòu)域融合并穩(wěn)定地克隆到HEK 293細(xì)胞中。經(jīng)純化的sBACE-Fc在-80℃貯存于50mM甘氨酸(pH 2.5)中，用1M Tris調(diào)節(jié)至pH 7.4且具有40％的純度。

在反應(yīng)緩沖液(NaAcetate,chaps,triton x-100,EDTA pH 4.5)將酶(截短形式)稀釋至6μg/mL(儲(chǔ)備液1.3mg/mL)并將TruPoint BACE1底物稀釋至200nM(儲(chǔ)備液120μM)。將酶和化合物在二甲基亞砜(DMSO的終濃度為5％)中的溶液混合并在室溫預(yù)孵育10分鐘。然后加入底物并將反應(yīng)混合物在室溫孵育15分鐘。反應(yīng)通過(guò)加入0.35體積終止液(乙酸鈉,pH 9)來(lái)停止。用Victor II讀板器以340-485nm的激發(fā)波長(zhǎng)和590-615nm的發(fā)射波長(zhǎng)測(cè)量產(chǎn)物的熒光。酶的終濃度為2.7μg/ml；底物的終濃度為100nM(Km為約250nM)。二甲基亞砜對(duì)照品(而不是測(cè)試化合物)定義了100％活性水平且0％活性通過(guò)缺乏酶(替換為反應(yīng)緩沖液)的孔或通過(guò)已知抑制劑即2-氨基-6-[3-(3-甲氧基苯基)苯基]-3,6-二甲基-5H-嘧啶-4-酮的飽和劑量來(lái)定義。在劑量響應(yīng)測(cè)定中還使用了對(duì)照抑制劑且其IC₅₀為約150nM。

(1r,1’R,4R)-4-甲氧基-5”-甲基-6’-[5-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基]-3’H-二螺[環(huán)己烷-1,2’-茚-1’2”-咪唑]-4”-胺的樟腦磺酸鹽在此測(cè)定中平均IC₅₀為0.2nM。

sAPPβ釋放測(cè)定

在具有Glutamax、10％FCS和1％非必需氨基酸的DMEM/F-12中培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，冷藏并以7.5-9.5×10⁶個(gè)細(xì)胞/小瓶的濃度貯存在-140℃。解凍細(xì)胞并以約10000個(gè)細(xì)胞/孔的濃度在具有Glutamax、10％FCS和1％非必需氨基酸的DMEM/F-12中以100μL細(xì)胞懸浮液/孔接種在384孔組織培養(yǎng)板中。然后在37℃和5％CO₂的條件下將細(xì)胞板孵育7-24小時(shí)。除去細(xì)胞培養(yǎng)基，然后加入30μL稀釋在具有Glutamax、10％FCS、1％非必需氨基酸和1％PeSt的DMEM/F-12中的化合物(DMSO的終濃度為1％)。在37℃和5％CO₂的條件下將化合物與細(xì)胞一起孵育17小時(shí)(過(guò)夜)。Meso Scale Discovery(MSD)板用于檢測(cè)sAPPβ釋放。將MSD sAPPβ板在1％BSA/Tris洗滌緩沖液(40μL/孔)中在室溫和振蕩下阻斷1小時(shí)并在Tris洗滌緩沖液(40μL/孔)中洗滌1次。將20μL培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到預(yù)先阻斷并洗滌的MSD sAPPβ微量板中且細(xì)胞板在ATP測(cè)定中進(jìn)一步用于測(cè)量細(xì)胞毒性。在室溫和振蕩下將MSD板孵育2小時(shí)并棄去培養(yǎng)基。每孔加入10μL檢測(cè)抗體(1nM)，然后在室溫和振蕩下孵育2小時(shí)，然后棄去。每孔加入40μL讀取緩沖液并在SECTOR成像儀中對(duì)板進(jìn)行讀取。

ATP測(cè)定

如在sAPPβ釋放測(cè)定中所述，從細(xì)胞版中轉(zhuǎn)移20μL培養(yǎng)基用于sAPPβ檢測(cè)后，板用于分析細(xì)胞毒性，其中使用對(duì)總細(xì)胞ATP進(jìn)行測(cè)量的ViaLightTMPlus細(xì)胞增殖/細(xì)胞毒性試劑盒(Cambrex BioScience)。測(cè)定按照廠商方案來(lái)進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，每孔加入10μL細(xì)胞溶解試劑。將板在室溫孵育10min。加入25μL復(fù)溶的ViaLightTM Plus ATP試劑后2min，測(cè)量發(fā)光。毒性閾值為在對(duì)照品的75％以下的信號(hào)。