本發(fā)明屬于有機化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及N-2-吡啶?；?脫氫樅胺及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

脫氫樅胺，又名去氫樅胺，是一種松香的主要改性產(chǎn)物，同時也是歧化松香胺的主要成分。脫氫樅胺的性質(zhì)非常穩(wěn)定、旋光度較大，這都是其他松香衍生物不具有的物理化學(xué)性質(zhì)。脫氫樅胺如今已經(jīng)被用來大批地制備殺菌劑和防霉劑等，主要是因為它具備優(yōu)良的生物活性。除此之外，脫氫樅胺類衍生物被作為金屬緩蝕劑、潤滑油添加劑、防腐劑等也很普遍。它在各個領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用，已經(jīng)覆蓋我們?nèi)粘Ｉ畹母鱾€方面。

脫氫樅胺N-C衍生物數(shù)量占脫氫樅胺改性化合物總量的比例最高。脫氫樅胺與內(nèi)酯類化合物反應(yīng)可得到脫氫樅胺丙酸，脫氫樅胺與氯乙酸在pH大于7的條件下下可生成脫氫樅胺乙酸，這些都是N-C衍生物。通過紅外光譜法研究脫氫樅胺乙酸與金屬離子的相互作用，發(fā)現(xiàn)脫氫樅胺乙酸與釩、鉻和鉬等金屬陰離子在水溶液中可形成膠狀物。脫氫樅胺的有機部分具有良好的親油性，接上親水基團后就可以用作表面活性劑。從歧化松香胺出發(fā)，分離獲得了脫氫樅胺純品，二甲基脫氫樅胺作為中間體，得到了兩種新穎的，且同時具有陰、陽兩種離子性質(zhì)的甜菜堿類表面活性劑。脫氫樅胺酰胺類衍生物對杜氏利什曼原蟲和克氏錐蟲有良好的抑制活性。

脫氫樅胺異氰是一種結(jié)構(gòu)中含有N＝C＝O的脫氫樅胺的衍生物，它的合成方法多樣，一種是以松香中的脫氫樅酸為母體，經(jīng)過O＝C-Cl、疊氮化鈉反應(yīng)而得到的；一種是在氯化鈀及CO下，脫氫樅胺能夠直接合成脫氫樅胺異氰，但是這個反應(yīng)的條件需要控制好，因為這反應(yīng)的產(chǎn)率受到多方面影響，如反應(yīng)溫度、反應(yīng)物濃度、反應(yīng)溶劑等影響。除了上述兩種方法外，脫氫樅胺與光氣反應(yīng)也可以得到上述產(chǎn)物。脫氫樅胺能夠與含羰基的物質(zhì)縮合生成席夫堿，席夫堿含有C＝N這個結(jié)構(gòu)片段，研究此類化合物的報道很多，一般對脫氫樅胺的氨基改性都是從這個思路出發(fā)的。之所以對它的研究較多，是因為它本身有較強的抗腫瘤細(xì)胞活性且以它為配體合成的金屬配合物的生活活性也特別優(yōu)良。對肺腺癌細(xì)胞、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞都有很強的抑制作用。脫氫樅胺席夫堿化合物對金屬有良好的緩釋性能。

由于脫氫樅胺苯環(huán)上連接有異丙基和一六元環(huán)，整體空間較大，苯改性比較困難，所以在這方面的研究相對比較少。脫氫松香腈為原料，經(jīng)氯甲基化和無機氰化物置換還原反應(yīng)后，可以生成脫氫樅胺衍生物，尼龍可以利用這些衍生物來修飾，且可以做到有效殺菌和防腐。對脫氫樅胺芳環(huán)進行改性，發(fā)現(xiàn)它很容易發(fā)生磺化反應(yīng)，且只發(fā)生在特定位置上，由此得到的磺化衍生物有很好的抗?jié)兓钚?。硝基類芳環(huán)衍生物對裂褶菌、皺褶青霉都有一定的抑制效果，對一些菌種，如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等這些微生物具有優(yōu)良的抑制活性，表現(xiàn)出抑菌性。我們研究的是N-C衍生物，目前沒有對此類化合物的抗肝癌、抗卵巢癌和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性的研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種N-2-吡啶?；?脫氫樅胺，滿足抗腫瘤藥物的使用需求。本發(fā)明的另一目的是提供上述N-2-吡啶?；?脫氫樅胺的制備方法。本發(fā)明還有一目的是提供上述N-2-吡啶酰基-脫氫樅胺的應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實現(xiàn)上述發(fā)明，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

N-2-吡啶?；?脫氫樅胺，結(jié)構(gòu)式如下：

一種合成所述的N-2-吡啶?；?脫氫樅胺的方法，步驟如下：

1)取2-吡啶甲酸和1-羥基苯并三唑(HOBT)，用乙酸乙酯溶解，0～5℃攪拌0.5～1h；加入N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，0～5℃反應(yīng)2～3h；

2)取脫氫樅胺溶解于乙酸乙酯中，然后滴加至步驟1)反應(yīng)體系，室溫反應(yīng)7～8h；冰浴攪拌0.5～1h，使得二環(huán)己基脲(DCU)充分析出；

3)過濾除去DCU，稀釋濾液，用5％NaHCO₃、10％檸檬酸分別洗滌2-3遍，最后用飽和食鹽水洗滌；乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥2～4h；

4)過濾，濾液蒸除乙酸乙酯，得黃色固體產(chǎn)物。

所述的N-2-吡啶酰基-脫氫樅胺在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

有益效果，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的N-2-吡啶?；?脫氫樅胺，制備方法簡單，產(chǎn)物純度高，得率高，生物活性試驗證實，對腫瘤細(xì)胞具有很好的抗毒活性，同時對正常細(xì)胞幾乎無毒性，在制備抗腫瘤藥物中將具有廣泛的應(yīng)用。

附圖說明

圖1是脫氫樅胺(a)、2-吡啶甲酸(b)和N-2-吡啶?；?脫氫樅胺(c)的紅外光譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步的說明。

實施例1

N-2-吡啶?；?脫氫樅胺，結(jié)構(gòu)式如下：

一種合成N-2-吡啶?；?脫氫樅胺的方法，步驟如下：

1)在100mL燒瓶中加入1.23g 2-吡啶甲酸，1.35g HOBT，用40mL乙酸乙酯溶解，0℃攪拌0.5h。加入2.06g DCC，0℃反應(yīng)2.5h。2.85g脫氫樅胺溶解于10mL乙酸乙酯中，將此溶液滴加至反應(yīng)體系，室溫反應(yīng)8h。最后，冰浴攪拌半小時，使得DCU充分析出。

2)過濾除去DCU，濾液稀釋至200mL，分別用20mL 5％NaHCO₃、20mL10％檸檬酸洗滌2-3遍，最后用20mL飽和食鹽水洗滌。乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥2h。

3)過濾，濾液蒸除乙酸乙酯，得黃色固體3.58g，產(chǎn)率為91.79％。

對產(chǎn)物進行表征，脫氫樅胺、2-吡啶甲酸和N-2-吡啶?；?脫氫樅胺的紅外譜圖如圖1所示，脫氫樅胺氨基的吸收峰3400cm^-1和2-吡啶甲酸羧基的吸收峰1716cm^-1反應(yīng)后均消失，說明已生成新物質(zhì)；3392cm^-1為酰胺基團中的N-H伸縮振動特征吸收峰；2926cm^-1是甲基和亞甲基的反對稱伸縮振動峰；1678cm^-1為酰胺的C＝O特征吸收峰；1526cm^-1為酰胺的N-H特征吸收峰。

該化合物的結(jié)構(gòu)表征具體數(shù)據(jù)如下：¹H NMR(CDCl3，600MHz)δ(ppm)：1.022(3H，s，H-19)，1.21～1.24(9H，m，H-16、17、20)，1.41～1.81(7H，m，H-1α、2、3、6)，2.03～2.05(1H，m，H-5)，2.28(1H，brd，J＝12Hz，H-1β)，2.81～2.91(3H，m，H-7、15)，3.28～3.50(2H，m，H-18)，6.89(1H，t，J＝6Hz，22-CONH)，6.99(1H，s，H-14)，7.17(1H，d，J＝8.4Hz，H-12)，7.40(1H，d，J＝12Hz，H-11)，7.81～8.52(4H，m，H-24、25、26、23)；¹³C NMR(CDCl3，151MHz)δ(ppm)：18.71，18.90，19.14，23.95，23.97，25.52，30.49,33.42，36.32，37.61，37.85，38.31，45.50，49.96，122.27，123.85，124.29，126.05，126.94，134.94，137.71，145.56，147.16，148.06，149.95，164.33；IR(KBr)：3392(N-H)，2926(-CH₃，-CH₂)，1678(0＝C-N)，1526(N-H)；MS(ESI)m/z：391.33[1+H]⁺，413.33[1+Na]⁺。

實施例2

1)采用MTT法檢測N-2-吡啶?；?脫氫樅胺對Hela的抑制作用

MTT法具體操作：取對數(shù)生長期的待測試Hela細(xì)胞，配制成10⁵個/毫升的單細(xì)胞懸液，在96孔培養(yǎng)板上接種，每孔100微升，于體積分?jǐn)?shù)為5％的二氧化碳、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；之后，將100微升不同濃度的N-2-吡啶?；?脫氫樅胺加入到培養(yǎng)板上，每種濃度均為2個復(fù)孔；繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加20微升的MTT染色液，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，小心去除上層清液，然后每孔加200微升THF，充分震蕩半小時后，在酶標(biāo)儀上595nm波長處測定OD樣值，實驗的空白組是用100微升無血清的DMEM培養(yǎng)液代替樣品的，這時的吸光度值為OD空白值，通過公式(1)計算樣品對HepG2細(xì)胞抑制率：

m＝1-n＝1-OD_樣/OD_空白 (1)

式中，m：抑制率；n：細(xì)胞存活率。

然后通過公式(2)，算出IC₅₀：

lgIC₅₀＝a-b(c-(3-d-e)/4) (2)

式中，a：lg最大濃度；b：lg(最大濃度/相鄰濃度)；c：抑制率總和；d：最大抑制率；e：最小抑制率。

結(jié)果顯示，IC₅₀為30.23μmol/L，抗癌活性強。

2)采用MTT法檢測N-2-吡啶?；?脫氫樅胺對HepG2的抑制作用

MTT法具體操作如下：取對數(shù)生長期的待測試HepG2細(xì)胞，配制成10⁵個/毫升的單細(xì)胞懸液，在96孔培養(yǎng)板上接種，每孔100微升，于體積分?jǐn)?shù)為5％的二氧化碳、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；之后，將100微升不同濃度的N-2-吡啶酰基-脫氫樅胺加入到培養(yǎng)板上，每種濃度均為2個復(fù)孔；繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加20微升的MTT染色液，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，小心去除上層清液，然后每孔加200微升THF，充分震蕩半小時后，在酶標(biāo)儀上595nm波長處測定OD樣值，實驗的空白組是用100微升無血清的DMEM培養(yǎng)液代替樣品的，這時的吸光度值為OD空白值，通過公式(1)計算樣品對HepG2細(xì)胞抑制率：

m＝1-n＝1-OD_樣/OD_空白 (1)

式中，m：抑制率；n：細(xì)胞存活率。

然后通過公式(2)，算出IC₅₀：

lgIC₅₀＝a-b(c-(3-d-e)/4) (2)

式中，a：lg最大濃度；b：lg(最大濃度/相鄰濃度)；c：抑制率總和；d：最大抑制率；e：最小抑制率。

結(jié)果顯示，IC₅₀為24.53μmol/L，抗癌活性強。

3)采用MTT法檢測N-2-吡啶酰基-脫氫樅胺對Huvec的毒副作用。

MTT法具體操作如下：取對數(shù)生長期的待測試Huvec細(xì)胞，配制成10⁵個/毫升的單細(xì)胞懸液，在96孔培養(yǎng)板上接種，每孔100微升，于體積分?jǐn)?shù)為5％的二氧化碳、飽和濕度、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；之后，將100微升不同濃度的N-2-吡啶酰基-脫氫樅胺加入到培養(yǎng)板上，每種濃度均為2個復(fù)孔；繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加20微升的MTT染色液，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，小心去除上層清液，然后每孔加200微升THF，充分震蕩半小時后，在酶標(biāo)儀上595nm波長處測定OD樣值，實驗的空白組是用100微升無血清的DMEM培養(yǎng)液代替樣品的，這時的吸光度值為OD空白值，通過公式(1)計算樣品對HepG2細(xì)胞抑制率：

m＝1-n＝1-OD_樣/OD_空白 (1)

式中，m：抑制率；n：細(xì)胞存活率。

然后通過公式(2)，算出IC₅₀：

lgIC₅₀＝a-b(c-(3-d-e)/4) (2)

式中，a：lg最大濃度；b：lg(最大濃度/相鄰濃度)；c：抑制率總和；d：最大抑制率；e：最小抑制率。

結(jié)果顯示，IC₅₀為40.09μmol/L，毒性小，對正常細(xì)胞幾乎無毒害作用。