本發(fā)明屬于制藥領域，涉及咖啡酸-苯丙氨酸衍生物在降糖和腎臟保護中的應用，具體涉及所述衍生物在制備抗糖尿病及其并發(fā)癥等相關藥物中的用途。

背景技術：

咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物(Caffeoyl-N-phenylalanine)，化學名稱為(反)-3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酸-L-苯丙氨酸，廣泛存在于各種咖啡豆，如小粒種咖啡、中果咖啡、羅布斯塔咖啡等中，該化合物于1955年，由Klaus Peter Adam課題組首次從喜馬拉雅蹄蓋蕨(Athyrium filix-femina)中分離并鑒定了結構。隨后的研究陸續(xù)發(fā)現，該化合物在其他植物中也廣泛存在。

與蜂膠中的咖啡酸苯乙酯化合物類似，咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物也有非常廣泛的生物活性。早期的研究表明，其對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有較強的抑制作用；并且該類化合物對Aβ淀粉樣纖維化有一定的緩解作用。徐等人發(fā)現，該化合物對流感神經氨酸酶有較好的抑制作用，其對H9N2和H1N1病毒的IC50分別為39.6和37.4uM，通過結構改造，該化合物的類似物能大幅提高活性，其IC50達到7.2uM和8.5uM，生物活性提高5倍左右。Andreas Hensel等人通過細胞實驗發(fā)現，該化合物通過降低幽門螺桿菌的BabA外膜蛋白的粘附作用，從而達到抑制或減少胃癌細胞增生的目的，為該類化合物的應用提供了新的思路。最新的研究表明，咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物及其衍生物在抗HIV病毒方面有可能成為新的先導化合物?？Х人?咖啡酸-酒石酸衍生物，即菊苣酸(CAS:70831-56-0,化學名稱(2r,3r)-2,3-bis[[E-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]oxy]butanedioic acid)的HIV病毒抑制率IC50＝15.7mM。

隨著研究的深入，原有的從天然產物提取化合物的方法已經不能滿足活性及構效關系研究的需要，研究新的合成方法是十分必要的，同時，更深入的研究咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物及其類似物的生物學活性，為其提供新的應用，特別是在醫(yī)藥學方面的應用，也是十分有意義的。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種防治糖尿病和糖尿病腎病藥物及其合成方法和應用。

為達到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案：

一種防治糖尿病和糖尿病腎病藥物，該藥物為咖啡酸-苯丙氨酸衍生物，所述衍生物的結構如式I所示：

其中，R¹和R²為H、OH、OCH₃、OCOCH₃、3-甲基丁-2-烯基或異戊烯基；R³為H、CH₃、Bn、OCH₃、OCOCH₃、BnCH₂、i-Pr、t-Bu或金剛烷基；n為0或1，且n＝1時，為萘環(huán)衍生物，有α和β兩種不同的取代基位置。

一種防治糖尿病和糖尿病腎病藥物的合成方法，包括以下步驟：

1)將原料A溶解于有機溶劑中得溶液I，所述原料A為咖啡酸或咖啡酸衍生物；

2)向溶液I中加入有機胺，然后置于冰水浴中攪拌冷卻至0℃，得溶液II；

3)于冰水浴及攪拌條件下向溶液II中依次加入縮合劑以及原料B，得反應液；加入縮合劑與加入原料B之間間隔20～40min(旨在使縮合劑與原料A反應生成更加活潑的中間產物)，所述原料B為苯丙氨酸或苯丙氨酸衍生物，將反應液升溫后于40～80℃反應12～48小時，反應結束后旋轉蒸發(fā)除去溶劑；

4)向旋轉蒸發(fā)除去溶劑后所得剩余物中加入乙酸乙酯，然后混合均勻并抽濾，對抽濾所得濾液中的有機相進行洗滌后用無水硫酸鈉干燥，然后旋轉蒸發(fā)除去溶劑得粗產物，所述粗產物通過柱層析純化得到目的產物。

所述有機溶劑選自非質子性有機溶劑，如二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氫呋喃、甲苯、三氯乙烷等；所述有機胺選自三級胺或二級胺，如三乙胺、二異丙基胺、二異丙基乙基胺等；所述縮合劑選自活潑酯類縮合劑中的兩種(物質的量比為1:1～1:3，即其中一種是另一種用量的1～3倍)，如DCC和DMAP、NMM和IBCF、EDCI和HOBt、EDCI和DMAP等。

所述咖啡酸衍生物的結構為：

其中，R¹和R²為H、OH、OCH₃、OCOCH₃、3-甲基丁-2-烯基或異戊烯基；

所述苯丙氨酸衍生物的結構如以下結構式所示或者所述苯丙氨酸衍生物的結構為以下結構式的鹽的形式或游離堿的形式，所述鹽的形式為鹽酸鹽或硫酸鹽：

其中，R³為H、CH₃、CH₂CH₃、i-Pr、t-Bu、Bn、OCH₃、OCOCH₃或金剛烷基；n為0或1，且n＝1時，為萘環(huán)衍生物，有α和β兩種不同的取代基位置。

按物質的量比計，所述原料A與有機胺的用量比例為1:1～1:3，原料A與縮合劑(以兩種活潑酯類縮合劑的總和計)的用量比例為1:1～1:4，原料A與原料B的用量比例為1:1～1:2。

所述洗滌的具體步驟為：依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水對濾液中的有機相進行洗滌(每次5～10mL，2～3次)。

所述柱層析中，按照正己烷:丙酮的體積比＝10:1～2:1進行梯度洗脫，柱層析具體條件為：

柱層析硅膠型號是100～300目；用量為粗產物質量的10～100倍；

粗產物中加入兩倍(質量比)的柱層析硅膠，攪拌均勻后裝柱。

梯度洗脫為：

梯度I,正己烷：丙酮＝10:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為粗產物質量(單位：克)的5～10倍；

梯度II,正己烷：丙酮＝5:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為粗產物質量(單位：克)的10～20倍；

梯度III,正己烷：丙酮＝2:1(體積比)，總體積(單位：毫升)為粗產物質量(單位：克)的5～10倍；

每試管收集5mL，TLC(GF254)鑒定同一色譜峰后，收集、合并，-0.08MPa，45℃旋轉蒸發(fā)除去溶劑。

所述總體積對粗產物質量的倍數因目的產物具體結構的不同而不同。

所述制備方法還包括以下步驟：所述R¹以及R²為羥基時，在步驟1)前，對R¹以及R²進行保護，并且在步驟4)后進行脫保護。所用的保護基，如芐基、硅醚基、烷氧基等均可，以消除活潑氫可能產生的副反應。

上述防治糖尿病和糖尿病腎病藥物在制備防治糖尿病的藥物中的應用。

上述防治糖尿病和糖尿病腎病藥物在制備防治糖尿病腎病的藥物中的應用。

本發(fā)明的有益效果體現在：

本發(fā)明所述咖啡酸-苯丙氨酸衍生物的合成方法簡單，合成原料易得，通過糖尿病模型動物的體內實驗，驗證了咖啡酸-苯丙氨酸衍生物的顯著的降糖活性，酶學及組織切片研究驗證了其對腎臟的保護作用，不僅為該類化合物的制備及活性研究提供了新的思路，而且可作為藥物活性成分制備抗糖尿病、改善糖代謝及輔助治療糖尿病并發(fā)癥的藥物。

本發(fā)明在已有文獻報道的基礎上，優(yōu)化了合成路線、提高了產率，產物容易分離純化，同時擴展了底物的適用范圍，對各種官能團取代的底物均有較好的適用性。

附圖說明

圖1為腎臟細胞石蠟切片(×400倍)：A-空白組、B-模型組、C-CP5組、D-陽性組，箭頭標注細胞明顯的損傷處。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作詳細說明。

本發(fā)明所述咖啡酸-苯丙氨酸衍生物合成是以咖啡酸(或咖啡酸衍生物)和苯丙氨酸(或苯丙氨酸衍生物)通過縮合反應得到。

該咖啡酸-苯丙氨酸衍生物的結構如式I所示：

其中，R¹和R²為H、OH、OCH₃、OCOCH₃、3-甲基丁-2-烯基或異戊烯基；R³為H、CH₃、Bn、OCH₃、OCOCH₃、BnCH₂、i-Pr、t-Bu或金剛烷基。n為0或1。該合成方法也適用于制備咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物。

本發(fā)明采用STZ誘導的大鼠糖尿病模型，評價合成產物(咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物以及咖啡酸-苯丙氨酸衍生物)對糖尿病模型大鼠體內糖代謝的影響，相對于其他評價模型，能夠更加真實的反映糖尿病人的糖代謝環(huán)境，提高成藥性。實驗數據表明該類化合物有較好的降糖活性；通過糖尿病腎病模型動物的酶學和組織切片研究，發(fā)現其具有腎臟保護作用。

(一)合成實例

實例1咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物(簡稱CP1，如式II所示)的合成

1)稱取咖啡酸90mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加5mL三氯乙烷，將咖啡酸溶解；

2)向圓底燒瓶中再加入208μL(約1.5mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌10min，使體系的溫度達到0℃；

3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽)143mg(0.75mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)91.5mg(0.75mmol)，20min后向圓底燒瓶中再加入L-苯丙氨酸鹽酸鹽101mg(0.5mmol)，溫度升至40℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應24小時；

4)反應結束后減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入20mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌(10mL*2)，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得淡棕色固體粗產物，柱層析(所述總體積對固體粗產物質量的倍數：梯度I為10倍，梯度II為20倍，梯度III為5倍)后得咖啡酸-苯丙氨酸(73.8mg,產率45％)。結構鑒定數據如下：LC-MS:328.1(M+1⁺)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.29(1H,d,J＝8Hz),7.24(d,1H,J＝16Hz),7.21-7.33(m,5H),6.96(d,1H,J＝2Hz),6.85(dd,1H,J＝8Hz,2Hz),6.76(d,1H,J＝2Hz),6.42(d,1H,J＝16Hz),4.57(m,1H),3.16(m,1H),2.99(m,1H)。

實例2阿魏酸-苯丙氨酸異丙酯(簡稱CP2，如式Ⅲ所示)的合成

1)稱取阿魏酸97mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加6mL DCM(二氯甲烷)，將阿魏酸溶解；

2)向圓底燒瓶中再加入205μL(約1.5mmol)二異丙基胺，冰水浴下攪拌15min，使體系的溫度達到0℃；

3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入NMM(N-甲基嗎啡啉)101mg(1mmol)和IBCF(氯甲酸異丁酯)135mg(1mmol)，40min后向圓底燒瓶中再加入L-苯丙氨酸異丙酯鹽酸鹽101mg(1mmol)，溫度升至80℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應18小時；

4)反應結束后減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入15mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌(10mL*2)，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得棕色固體粗產物，柱層析(所述總體積對固體粗產物質量的倍數：梯度I為7倍，梯度II為20倍，梯度III為5倍)后得阿魏酸-苯丙氨酸異丙酯(119.6mg,產率62％)。結構鑒定數據如下：LC-MS:384.2(M+1⁺)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.33(1H,d,J＝8Hz),7.23(d,1H,J＝16Hz),7.20-7.32(m,5H),6.96(d,1H,J＝2Hz),6.82(dd,1H,J＝8Hz,2Hz),6.77(d,1H,J＝2Hz),6.44(d,1H,J＝16Hz),4.93(m,1H),4.55(m,1H),3.16(m,1H),2.99(m,1H),1.41(d,3H,J＝6.6Hz),1.36(d,3H,J＝6.6Hz)。

實例3 3-乙?；?咖啡酸-β-萘丙氨酸芐酯(簡稱CP3，如式Ⅳ所示)的合成

1)稱取原料3-乙?；?咖啡酸(結構式如下)111mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加5mL甲苯，將原料溶解；

2)向圓底燒瓶中再加入70μL(約0.5mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌20min，使體系的溫度達到0℃；

3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 95mg(0.5mmol)和HOBt67.3mg(0.5mmol)，30min后向圓底燒瓶中再加入β-L-萘丙氨酸芐酯183mg(0.6mmol)，溫度升至60℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應48小時；

4)反應結束后減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入20mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌(5mL*3)，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得褐色油狀粗產物，柱層析(所述總體積對粗產物質量的倍數：梯度I為10倍，梯度II為15倍，梯度III為5倍)后得3-乙?；?咖啡酸-β-萘丙氨酸芐酯(166mg,產率65％)。結構鑒定數據如下：LC-MS:510.2(M+1⁺)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.33(s,1H),7.7-7.94(m,4H),7.63(d,1H,J＝16Hz),7.44-7.54(m,3H),7.30-7.35(m,5H),6.96(d,1H,J＝2Hz),6.85(dd,1H,J＝8Hz,2Hz),6.76(d,1H,J＝2Hz),6.40(d,1H,J＝16Hz),5.07-5.11(m,2H),4.33(m,1H),3.30(m,2H),2.28(s,3H)。

實例4 3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-苯丙氨酸甲酯(簡稱CP4，如式Ⅴ所示)的合成

1)稱取原料3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸(結構式如下)150mg(0.5mmol)加入25mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加10mL丙酮，將原料溶解；

2)向圓底燒瓶中再加入205μL(約1.5mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌10min，使體系的溫度達到0℃；

3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 190mg(1mmol)和DMAP120mg(1mmol)，25min后向圓底燒瓶中再加入L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽65mg(0.6mmol)，溫度升至55℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應40小時；

4)反應結束后減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入20mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌(10mL*2)，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得深棕色油狀粗產物，柱層析(所述總體積對粗產物質量的倍數：梯度I為10倍，梯度II為12倍，梯度III為5倍)后得3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-苯丙氨酸甲酯(90mg,產率39％)。結構鑒定數據如下：LC-MS:462.3(M+1⁺)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.56(d,1H,J＝16Hz),7.20-7.32(m,5H),7.13-7.20(m,2H),6.28(d,1H,J＝16Hz),5.31-5.35(m,2H),4.06(m,1H),3.82(s,3H),3.28-3.42(m,4H),3.08(m,2H),1.91(m,6H),1.82(m,6H)。

實例5 3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-α-萘丙氨酸(簡稱CP5，如式Ⅵ所示)的合成

1)稱取原料3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸(結構式如下)116mg(0.5mmol)加入10mL圓底燒瓶中，向圓底燒瓶中滴加5mL THF(四氫呋喃)，將原料溶解；

2)向圓底燒瓶中再加入140μL(約1mmol)三乙胺，冰水浴下攪拌15min，使體系的溫度達到0℃；

3)于冰水浴及攪拌條件下向圓底燒瓶中再加入EDCI 143mg(0.75mmol)和DMAP91.5mg(0.75mmol)，20min后向圓底燒瓶中再加入α-L-萘丙氨酸鹽酸鹽75.3mg(0.6mmol)，溫度升至75℃，繼續(xù)于攪拌條件下反應12小時；

4)反應結束后減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑，加入20mL乙酸乙酯搖勻，抽濾，濾液中上層的有機相依次用質量分數5％的碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌(10mL*2)，無水硫酸鈉干燥，減壓抽干(旋轉蒸發(fā)，-0.08MPa，45℃)溶劑得褐色固體粗產物，柱層析(所述總體積對固體粗產物質量的倍數：梯度I為5倍，梯度II為20倍，梯度III為10倍)后得3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-α-萘丙氨酸(92.5mg,產率43％)。結構鑒定數據如下：LC-MS:430.2(M+1⁺)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.38(s,1H),7.60-7.80(m,4H),7.28-7.52(m,4H),7.19-7.25(m,2H),6.77(d,1H,J＝8Hz),6.25(d,1H,J＝16Hz),6.83(d,1H,J＝15Hz),6.32(d,1H,J＝15Hz),4.30(m,1H),3.28(m,2H),2.40(m,1H),0.86-0.92(m,6H)。

(二)STZ誘導大鼠的糖尿病模型及藥物的降糖作用

模型構建及藥物篩選方法參考文獻報道的標準方法，簡述為：取SD鼠40只，抽簽法分為模型組(n＝35)和正常對照組(n＝5)。模型組禁食不禁水12h后左下腹腔注射STZ40mg/kg(0.01mol/L，pH 4.2)，1次/d，連續(xù)5d。正常對照組禁食不禁水12h后腹腔注射等體積量枸櫞酸緩沖液，1次/d，連續(xù)5d。最后一次注射后1周內，每天斷尾取血測量血糖。連續(xù)3d血糖>16.7mmol/L者為糖尿病大鼠，第4天進行藥物篩選實驗。

藥物篩選實驗：取建模成功的大鼠，禁食12h，以2g/kg(濃度為0.4g/mL)體重量的葡萄糖劑量灌胃，同時灌胃給藥。用血糖儀分別在給藥后0、0.5、1、1.5、2h測定血糖(BG)；用藥時曲線下面積(AUC)來反映糖耐量。

給藥方式

(1)空白對照組(簡稱空白組)：與其他組等體積的生理鹽水(20mL/kg)；

(2CP1～CP5實驗組(簡稱CP組，CP1～CP5濃度相同)：按照15μmol/kg灌胃給藥；

(3)陽性對照藥物組(簡稱陽性組)：二甲雙胍溶解于超純水中，終濃度是10g/L，按照15μmol/kg灌胃給藥；

每組實驗動物5只，共35只，羅氏血糖儀(逸動型，已校正)尾靜脈采血測定；每組實驗數據取平均值，做藥時曲線圖。

測試結果及數據分析(結果見表1)

(1)相較于空白組(22.2，45.0，35.3，29.1，26.5)，CP組和陽性組均可不同程度的降低血糖，2h內，陽性組(即二甲雙胍22.9，33.4，29.1，27.2，23.2)的降糖效果最好；

(2)與陽性組相比，上述實例所制備的化合物的降糖能力低于或接近二甲雙胍，其中CP4和CP5(即3-(3,5-二(3-甲基丁-2-烯)苯基)丙烯酸-苯丙氨酸甲酯和3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-α-萘丙氨酸)的降糖能力與二甲雙胍非常接近，同時對原有的高血糖現象有一定的緩解作用(分別從25.2和23.0降低到21.6和21.2)，進一步的長期實驗表明可將血糖值降低到正常水平。

(3)CP5和CP4相比，其AUC面積基本相同，但是CP5具有更加平穩(wěn)的降糖能力，對體內血糖的調節(jié)更加平緩，有利于進一步的抗糖尿病藥物臨床前研究。

因此綜合考慮結果，上述實例所制備的化合物(咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物以及咖啡酸-苯丙氨酸衍生物)具有明顯的降糖能力，其中化合物CP5更適合開發(fā)成為新型的抗糖尿病藥物。

表1.STZ誘導的SD大鼠糖尿病模型結果

(三)CP5(CP1～CP5中，CP5是效果最好的)在糖尿病腎病小鼠中對腎臟的保護作用

模型構建及藥物篩選方法參考文獻報道的標準方法，簡述為：雄性昆明小鼠，體重24～26g，飼養(yǎng)溫度為23℃±2℃，濕度60％，每12小時交替照明，實驗前適應性喂飼3天，自由取食飲水；飼料分為正常飼料和模型飼料。建模及藥物保護時間為30天。甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的檢測采用全自動生化分析儀(HITACHI 7600)測定；N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的測定采用相應試劑盒按照給定方法測定。

給藥方式如下：

(1)空白對照組(簡稱空白組)：喂養(yǎng)正常飼料，灌胃給藥與其他組等體積生理鹽水(20mL/kg)；

(2)糖尿病腎病模型對照組(簡稱模型組)：喂養(yǎng)高脂高糖及含鎘的模型飼料，灌胃給藥與其他組等體積生理鹽水(20mL/kg)；

(3)3-(4-羥基-3-異戊烯基苯基)丙烯酸-α-萘丙氨酸保護組(簡稱CP5組)：喂養(yǎng)高脂高糖及含鎘的模型飼料，灌胃給藥(生理鹽水溶解，少量DMSO助溶)，劑量10μmol/kg/day；

(4)陽性對照藥物組(簡稱陽性組)：阿伏生坦(avosentan)溶解于超純水中，DMSO助溶，終濃度是10mg/mL，灌胃給藥，劑量10μmol/kg/day；

表2.糖尿病腎病模型小鼠的生化檢測結果

測試結果及數據分析(結果見表2)

(1)相較于模型組，CP5組和陽性組對腎臟的各項生化指標均有保護作用，可有效保護腎臟的損傷；其中，TG的含量可基本降至正常水平；CP5相對于阿伏生坦，其對TC有更好的正常化效果，可降至正常水平的140％左右(模型組約為234％)；

(2)相較于模型組，CP5和阿伏生坦對LDL-C均有非常好的保護作用，可大幅降低LDL-C的含量；同時對HDL-C的保護作用基本相同；

(3)NAG是腎臟損傷和正?；^程中非常重要的指標，結果表明，在實驗過程中CP5能使NAG降至正常水平。

組織切片電鏡實驗如下：

樣品制備及操作按照標準操作方法，簡述為：小鼠斷勁處死，取新鮮腎臟組織，福爾馬林浸泡并充分固定后，切成5mm×5mm的小塊；流水沖洗，酒精進行浸泡脫水及二甲苯溶液透明化后，石蠟包埋，H&E染色；德國萊卡正置式DM2500M顯微鏡觀察。

參見圖1，腎臟組織切片的電鏡圖片非常直觀的顯示出了正常和損傷的腎臟微觀結構，同時CP5和阿伏生坦對腎臟損傷有一定的保護作用，且CP5的保護作用與陽性藥物基本相同。

總之，咖啡酸-苯丙氨酸酰胺化合物以及本發(fā)明所提出的咖啡酸-苯丙氨酸衍生物具有降糖作用，相較于臨床所用降糖藥物，其降糖能力略低于二甲雙胍，但是，對原有的高血糖現象有一定的緩解作用，可作為預防和治療糖尿病藥物的先導化合物。同時，通過糖尿病腎病的模型及藥物保護實驗，初步篩選出了化合物CP5，在實驗條件下能更有效的保護腎臟的損傷，可以作為糖尿病腎病藥物的先導化合物。