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一種用于檢測抗菌不銹鋼長期抗菌效果的檢測方法與流程

文檔序號:12346560閱讀:1326來源:國知局

本發(fā)明屬于檢測抗菌不銹鋼長期抗菌效果的技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種用于檢測抗菌不銹鋼表面抗菌和離子溶出抗菌效果的檢測方法。



背景技術(shù):

抗菌不銹鋼是指在鋼中添加抗菌元素如Cu、Ag或稀土元素,通過合適的熱處理析出富集抗菌元素的第二相,當(dāng)抗菌不銹鋼與溶液介質(zhì)接觸時,抗菌元素可以通過表面接觸和離子溶出的方式參與細(xì)菌殺滅過程。主流觀點認(rèn)為離子溶出是主要的抗菌機(jī)制,但仍缺乏直接有力的證據(jù)。

傳統(tǒng)的抗菌檢測方法主要有:日本的JIS2801,國際標(biāo)準(zhǔn)ISO22196以及我國的GB21551.2。這些標(biāo)準(zhǔn)所采用的抗菌方法一般稱為覆膜法或貼膜法。它是把稀釋好的細(xì)菌懸液與實驗樣品均勻接觸后,在一定環(huán)境培養(yǎng)一定時間后測算抗菌率的檢測方法。該方法雖然能比較客觀的反映樣品本身的抗菌性能,但存在如下缺陷:

1.不能反映樣品本身的抗菌機(jī)制是表面接觸殺菌,還是離子溶出殺菌。覆膜法實際上涵蓋了表面接觸和離子溶出殺菌的方法。也就是說,在覆膜法過程中,既有可能是樣品表面接觸細(xì)菌懸液造成的殺菌,也可能是細(xì)菌懸液在與樣品作用時溶出的抗菌元素離子造成的殺菌。因此,覆膜法無法弄清哪種抗菌機(jī)制在起主要殺菌作用。當(dāng)面臨不同的應(yīng)用環(huán)境時,也就無法就抗菌不銹鋼應(yīng)適用的使用條件進(jìn)行指導(dǎo)。

2.不能反映樣品本身抗菌性能是否具有長效性。傳統(tǒng)抗菌檢測方法只負(fù)責(zé)靜態(tài)的樣品的抗菌檢測,本身不包含檢測樣品狀態(tài)隨著使用時間的增加而帶來的可能的抗菌效果差異評價。而抗菌不銹鋼的長效性無疑是至關(guān)重要的,它能直接關(guān)系抗菌產(chǎn)品的實際使用功效。



技術(shù)實現(xiàn)要素:

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足,提供一種用于檢測抗菌不銹鋼長期抗菌效果的檢測方法,它可以有效彌補(bǔ)現(xiàn)有抗菌檢測方法存在的不足,極大促進(jìn)抗菌不銹鋼材料在各種環(huán)境中的合理應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:

一種用于檢測抗菌不銹鋼長期抗菌效果的檢測方法,它由抗菌不銹鋼試樣片浸泡、不同浸泡時間后樣片表面和浸出液收集、抗菌實驗步驟三部分組成。

具體檢測操作步驟如下:

1)抗菌不銹鋼試樣片浸泡:選取10mm×10mm×1mm試樣片若干塊,將表面拋光無銹斑,放置于100mL的溶液中,浸泡溶液可以為生理鹽水、自來水,根據(jù)檢測抗菌性能需要確定浸泡時間節(jié)點和浸泡時間;

2)不同浸泡時間后樣片表面和離子浸出液收集:在選定溶液中浸泡不同時間節(jié)點后,分別收集至少5塊樣片和樣片浸出溶液1μL,在進(jìn)行第三步抗菌實驗步驟前,保持樣片表面狀態(tài)不變,并放置在干燥無菌的絕緣環(huán)境中;

3)菌懸液制備:試驗菌可以為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌用PBS或生理鹽水洗下24h斜面培養(yǎng)物,并依次做10倍遞增稀釋液,選擇菌液濃度為(5.0~10.0)×105cfu/mL的稀釋液作為試驗用菌液;

4)抗菌不銹鋼樣片表面抗菌試驗:試驗開始前試樣表面做滅菌處理,滴加適量的稀釋菌液至不同浸泡時間后的試樣片表面,依靠樣片表面的表面張力吸附菌液液滴;在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h;

5)抗菌不銹鋼浸出液抗菌實驗:提取1μL不同浸泡時間后的浸出液,與50μL稀釋菌液在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h;

6)抗菌不銹鋼抗菌率的對比參照空白對照,也即是稀釋菌液在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h培養(yǎng)環(huán)境下,細(xì)菌自然的生長狀態(tài);抗菌率計算公式為:

R(%)=(A-B)/A×100

式中:

R—抗菌率(%);

A—空白對照樣品平均回收菌數(shù)(cfu/片);

B—抗菌不銹鋼樣片表面和離子溶出液平均回收菌數(shù)(cfu/片)。

本發(fā)明有益效果為:

1、方法使用范圍廣,不但適用于各消毒檢驗部門、科研院所的實驗室、企業(yè)的研發(fā)部門和質(zhì)控部門、社會公共檢測機(jī)構(gòu),依據(jù)此方法開展抗菌不銹鋼長期抗菌性能的檢測工作;又適用于各類企業(yè)的抗菌效果評價;且還適用于不同抗菌不銹鋼類型,如表面涂層型和本體一體化抗菌不銹鋼的長期抗菌效果評價。

2、該方法的建立將有助于用戶企業(yè)全面評估評估抗菌不銹鋼是否適合本企業(yè)產(chǎn)品使用環(huán)境,可信度高。

3、該法能夠更清晰地辨明抗菌不銹鋼的殺菌機(jī)制,對抗菌不銹鋼的實際產(chǎn)品應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)意義。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例,對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例,而不是全部的實施例?;诒景l(fā)明中的實施例,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實施例:以304型抗菌不銹鋼為例,細(xì)菌選擇為大腸桿菌,浸泡介質(zhì)為生理鹽水環(huán)境,擬考察抗菌效果時間為30天。

具體檢測操作步驟如下:

1)選取10mm×10mm×1mm的304型抗菌不銹鋼試樣片30塊,表面拋光無銹斑,放置于100mL的生理鹽水溶液中,抗菌效果時間節(jié)點選擇:5天、10天、15天、20天、25天和30天;

2)不同浸泡時間后樣片表面和離子浸出液收集,在溶液中浸泡不同時間節(jié)點后,分別收集5塊樣片和樣片浸出溶液1μL,在進(jìn)行第三步抗菌實驗步驟前,放置樣片和浸出液于真空滅菌環(huán)境手套箱中;

3)大腸桿菌菌懸液制備。用PBS洗下24h斜面培養(yǎng)物,并依次做10倍遞增稀釋液,選擇菌液濃度為5.0×105cfu/mL的稀釋液作為試驗用菌液;

4)304型抗菌不銹鋼樣片表面抗菌試驗,試驗開始前試樣表面做滅菌處理。滴加適量的稀釋菌液至不同浸泡時間后的試樣片表面,依靠樣片表面的表面張力吸附菌液液滴;在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h;

5)304型抗菌不銹鋼浸出液抗菌實驗,提取1μL不同浸泡時間后的浸出液,與50μL稀釋菌液在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h;

6)抗菌效果評價:304型抗菌不銹鋼抗菌率的對比參照空白對照,也即是稀釋菌液在(37±1)℃、相對濕度RH>90%條件下培養(yǎng)24±1h培養(yǎng)環(huán)境下,細(xì)菌自然的生長狀態(tài);抗菌率計算公式為:

R(%)=(A-B)/A×100

式中:

R—抗菌率(%);

A—空白對照樣品平均回收菌數(shù)(cfu/片);

B—抗菌不銹鋼樣片表面和離子溶出液平均回收菌數(shù)(cfu/片)。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例,對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言,可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型,本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。

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