本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病或腦腫瘤的化合物、藥物組合及其應(yīng)用。本發(fā)明還涉及一系列具有抗氧化作用的SGK1和JNK的雙靶點抑制劑的制備方法及其應(yīng)用，它們可被制成適當(dāng)?shù)乃幬飫┬陀糜谥袠猩窠?jīng)退行性疾病、腦腫瘤的治療。
背景技術(shù)：
：血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶1（SerumandGlucocorticoid-InducibleKinase1,SGK1）是1993年Webster等通過糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄大鼠乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)差異篩選發(fā)現(xiàn)的一種絲/蘇氨酸蛋白激酶；當(dāng)細(xì)胞受到糖皮質(zhì)激素或者血清刺激后，SGK1的轉(zhuǎn)錄水平在30分鐘內(nèi)迅速升高，因此稱之為血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶；SGK1與蛋白激酶B（PKB/Akt）等第二信使具有高度同源性，除了具有和絕大多數(shù)蛋白激酶相似的磷酸化/去磷酸化調(diào)節(jié)機制外，SGK1還受到快速轉(zhuǎn)錄階段的調(diào)節(jié)。據(jù)文獻(xiàn)報道，SGK1受到多種激素和生長因子的調(diào)節(jié)，如糖皮質(zhì)激素、血清、鹽皮質(zhì)激素、多肽類激素CRH等均能快速誘導(dǎo)SGK1的表達(dá)。越來越多的研究表明，SGK1可能是多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和細(xì)胞磷酸化級聯(lián)反應(yīng)的一個功能性交匯點，存在參與離子通道調(diào)節(jié)、細(xì)胞存活、分化、增殖和凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生理功能。近來研究發(fā)現(xiàn)其與腦變性疾病如腦缺血、癲癇、阿爾茨海默病（AD）、帕金森氏?。≒D）和腦腫瘤等密切相關(guān)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)元變性、凋亡和腦腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。SGK1的表達(dá)及活性異常增加參與了多種疾病的發(fā)生及發(fā)展過程，SGK1的抑制劑被認(rèn)為可能是治療這些疾病的潛在的有用的藥物。c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)家族是1990年被發(fā)現(xiàn)的促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)超家族成員之一，屬于進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。JNK信號通路可被細(xì)胞因子、生長因子和應(yīng)激等多種因素激活，在細(xì)胞增殖與分化、細(xì)胞凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等多種細(xì)胞調(diào)控方面起著至關(guān)重要的作用。JNK信號通路功能失調(diào)可造成缺血再灌注損傷、慢性炎癥、神經(jīng)退行性變、糖尿病和腫瘤等多種疾病。近年來的研究發(fā)現(xiàn)過度激活的JNK信號通路與阿爾茨海默病、帕金森氏病密切相關(guān)，而敲除或JNK抑制劑則能改善AD和PD疾病模型的癥狀。有研究發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者JNK高表達(dá)，且JNK的表達(dá)量與膠質(zhì)瘤的惡性程度和膠質(zhì)瘤患者的愈后密切相關(guān)。另外，JNK的抑制劑被發(fā)現(xiàn)能降低神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的自我更新能力，促進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞朝不具有致瘤能力的膠質(zhì)樣或神經(jīng)元樣的細(xì)胞分化。因此，JNK抑制劑被認(rèn)為是神經(jīng)退行性疾病和腦腫瘤等疾病的潛在藥物。硫辛酸（lipoicacid,LA）是已知天然抗氧劑中效果最強的一種，被譽為“萬能抗氧劑”。它是丙酮酸脫氫酶的輔助因子，也是代謝性抗氧劑，在生物體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為還原型的二氫硫辛酸（DHLA），它可以通過清除自由基和活性氧；螯合金屬離子、與其他體內(nèi)的抗氧劑作用等途徑達(dá)到抗氧化作用。硫辛酸具有分子量低和兩親性的特點，使得它容易透過血腦屏障，從而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮抗氧化作用，因此，它被認(rèn)為是治療神經(jīng)退行性疾病的有效途徑。但是硫辛酸在體內(nèi)不夠穩(wěn)定，作用靶點較為單一，僅具有抗氧化作用，難以單獨用于發(fā)病機制錯綜復(fù)雜的CNS疾病。臨床上主要與其他藥物聯(lián)合使用，或作為多靶點藥物研發(fā)的藥效團。由以上可以發(fā)現(xiàn)，SGK1和JNK均在中樞神經(jīng)退行性疾病和腦腫瘤等疾病中高表達(dá)，抑制SGK1或JNK則能一定程度上改善中樞神經(jīng)退行性疾病和腦腫瘤等疾病的病程，而抗氧化劑在治療中樞神經(jīng)退行性疾病中也起到了積極的作用。中樞神經(jīng)退行性疾病和腫瘤等發(fā)病機制復(fù)雜且發(fā)病因素之間相互影響的復(fù)雜性疾病很難通過單一藥物達(dá)到治療或改善病情的目的。隨著系統(tǒng)生物和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的發(fā)展，人們越來越將這類疾病的治療寄希望于能同時作用于與發(fā)病機制相關(guān)的多個靶點的多靶點藥物上?；诖?，本發(fā)明旨在開發(fā)具有同時抑制SGK1和JNK并具有抗氧化作用的小分子化合物，達(dá)到在中樞神經(jīng)退行性疾病、腦腫瘤等疾病的治療中起到相加或協(xié)同作用，同時減少聯(lián)合用藥帶來的用藥不方便、藥物之間的相互作用等不良因素的目的。技術(shù)實現(xiàn)要素：基于以上研究和多靶點藥物研發(fā)理論，我們合成并篩選了一系列具有SGK1和JNK雙靶點抑制作用的小分子化合物。本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的化合物或其互變異構(gòu)體、藥用鹽、前藥或溶劑化物。其中結(jié)構(gòu)式通式(Ⅰ)中X為：，Y為：，Z為：。除非另外指明，本發(fā)明的化合物還意欲包括區(qū)別僅在于存在一個或多個同位素富集的原子的化合物。例如，用氘或氚替換氫，或者用13C或14C-富集的碳原子替換碳原子，或15N-富集的氮原子替換氮原子的化合物屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。屬于“藥用鹽、衍生物、溶劑化物，前藥”是指任何藥用鹽、酯、溶劑化物，或經(jīng)施用于接受者后能夠提供（直接或間接）本文所述化合物的其他化合物。然而，應(yīng)當(dāng)理解非藥用鹽也屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，因為那些可能用于制備藥用鹽和鹽，前藥和衍生物的制備可以通過本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。例如，本發(fā)明提供的化合物的藥用鹽可以通過常規(guī)方法由母體化合物合成，該母體化合物含有堿或酸部分。通常，該鹽例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計算量的適當(dāng)堿或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者的混合物中制備。通常，非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實例包括無機酸加成鹽例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽，和有機酸加成鹽例如，乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機鹽如例如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和鋰鹽；和有機堿如例如乙二胺、乙醇胺、N,N-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿性氨基酸鹽。優(yōu)選的衍生物或前藥是相對于母體物質(zhì)，當(dāng)將這些化合物使用于患者時提高本發(fā)明化合物的生物利用度（例如通過使得口服給藥的化合物更容易被吸收到血液中）或增強母體化合物向生物區(qū)室（例如腦或淋巴系統(tǒng)）的傳遞的那些。式（Ⅰ）化合物前藥的任何化合物屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語“前藥”以其最廣泛的意義使用并且包括在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物的那些衍生物。這些衍生物對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并且根據(jù)分子中存在的官能團，包括不限于本發(fā)明化合物的下列衍生物：酯、氨基酸酯、磷酸、金屬鹽硫酸、氨基甲酸酯和酰胺。本發(fā)明的化合物可以是作為有利化合物或作為溶劑化物的晶體形式，意欲將兩種形式都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化的方法是本領(lǐng)域公知的。適當(dāng)?shù)娜軇┗锸撬幱萌軇┗铩Ｔ谝粋€具體實施方案中，溶劑化物是水合物。如果需要，可以通過常規(guī)方法如結(jié)晶法或色譜法純化反應(yīng)產(chǎn)物。當(dāng)用于制備本發(fā)明化合物的上述方法產(chǎn)生立體異構(gòu)體的混合物時，這些異構(gòu)體可以通過常規(guī)技術(shù)如制備色譜法分離。如果存在手性中心，化合物可能以外消旋形式制備，或者可以通過對映特異性合成或通過拆分來制備單個的對映異構(gòu)體。一種優(yōu)選的藥用形式是結(jié)晶形式，包括藥物組合物中的這種形式。如果是鹽和溶劑化物，另外的離子或溶劑部分也應(yīng)當(dāng)是非毒性。本發(fā)明的化合物可以存在不同的多晶型物，意欲本發(fā)明包括所有這些形式。由上述發(fā)明式(Ⅰ)表示的典型化合物、其鹽、它們的溶劑化物或前藥顯示良好的血腦屏障透過率，較強的SGK1和JNK抑制作用。因此，本發(fā)明另一方面涉及治療、改善或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的方法，該方法包含向需要這種治療的患者施用治療有效量的式(Ⅰ)的化合物或其藥物組合物。本發(fā)明另外提供藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物，或其藥用鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，以及藥用載體、輔劑或賦形劑，以用于向患者給藥。本發(fā)明的化合物和組合物可以與其它藥物一起使用以提供聯(lián)合治療。其它藥物可以形成相同組合物的一部分，或者可以作為同時或不同時給藥的分開的組合物提供。附圖說明圖1.化合物對谷氨酸誘導(dǎo)的HT22死亡的保護(hù)作用。***P<0.001，**P<0.01，**P<0.05與谷氨酸組比較；###P<0.001與正常組比較。圖2.化合物PT109對ROS的影響。具體實施方式提供下列實施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，它們不應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是對本發(fā)明范圍的限定。除非特別說明，實施例中所涉及的試劑、方法均為本領(lǐng)域常用的試劑和方法。其中，DCM為二氯甲烷，TFA為三氟乙酸，EDCI為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，DMAP為4-二甲氨基吡啶。實施例15-(1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)-N-(2-(異喹啉-5-磺酰胺)乙基)戊酰胺【5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(2-(isoquinoline-5-sulfonamido)ethyl)pentanamide】（PT019）的制備：合成路線：按照上述PT019的合成路線，將異喹啉-5-磺酸置于圓底燒瓶中，加入6mL二氯亞砜和一滴DMF，回流三個小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去二氯亞砜，向剩余固體中加入DCM，過濾，固體用DCM洗滌三次后經(jīng)真空干燥箱干燥得到白色固體中間體2（1g,產(chǎn)率91.9%）。在冰浴條件下，將中間體2(130.00mg,571.01μmol)緩慢地加入含有乙二胺(381.30μL,5.71mmol)的DCM(6mL)溶液中，撤去冰浴后室溫反應(yīng)3h。反應(yīng)完成后用水洗去剩余的乙二胺，有機相用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，剩余物在乙醚中重結(jié)晶得到棕黃色固體中間體3（91.8mg,產(chǎn)率60%）。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.48(s,1H),8.70(d,J=6.1Hz,1H),8.47–8.40(m,2H),8.34(dd,J=7.4,1.1Hz,1H),7.87–7.80(m,1H),2.77(t,J=6.5Hz,2H),2.46(t,J=6.5Hz,2H).將中間體3(100mg,397.92μmol)，硫辛酸（98.52mg,477.51μmol），DMAP（4.86mg,39.79μmol）溶于DCM（6mL）中，將Et3N(165.48μL,1.19mmol)和EDCI(114.42mg,596.88μmol)加入溶液中，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜后加入DCM（30mL）稀釋，用水（10mL）終止反應(yīng)。分離后，水相用DCM（15mL×3）萃取。合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌。在Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色粘稠油狀物PT019(168mg,產(chǎn)率96%)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.36(s,1H),8.70(d,J=6.1Hz,1H),8.48–8.35(m,2H),8.22(d,J=8.2Hz,1H),7.77–7.65(m,1H),5.94(dd,J=10.0,4.8Hz,2H),3.56(dt,J=14.8,6.3Hz,1H),3.34(dd,J=11.1,5.8Hz,2H),3.14(dddd,J=22.8,16.0,8.9,5.5Hz,4H),2.46(dt,J=12.3,6.5Hz,1H),2.16–2.03(m,2H),1.91(td,J=13.7,6.9Hz,1H),1.61–1.53(m,2H),1.48–1.32(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ174.29,153.28,145.02,134.25,133.69,133.23,131.17,129.08,126.08,117.36,56.46,43.28,40.28,39.38,38.49,36.14,34.50,28.78,25.21.純度：97%(高效液相色譜法)。實施例25-(1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)-N-(3-(異喹啉-5-磺酰胺)丙基)戊酰胺【5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(3-(isoquinoline-5-sulfonamido)propyl)pentanamide】（PT046）的制備：合成路線：按照上述PT046的合成路線，在冰浴條件下，將實施例1中獲得到中間體2(600.00mg,2.27mmol)緩慢地加入含有1,3-丙二胺(1.89mL,22.72mmol)的DCM(6mL)溶液中，撤去冰浴后室溫反應(yīng)3h.反應(yīng)完成后用水洗去剩余的乙二胺，有機相用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，剩余物在乙醚中重結(jié)晶得到棕黃色固體中間體4（300mg,產(chǎn)率43.8%）。將中間體4(77.16mg,290.80μmol)，硫辛酸（50.00mg,242.34μmol），DMAP（2.96mg,24.23μmol）溶于DCM（6mL）中，將Et3N(6mL)和EDCI(69.68mg,363.50μmol)加入溶液中，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜后加入DCM（30mL）稀釋，用水（10mL）終止反應(yīng)。分離后，水相用DCM（15mL×3）萃取。合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌。在Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色粘稠油狀物PT046(19.2mg,產(chǎn)率17.5%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.34(s,1H),8.70(d,J=6.1Hz,1H),8.47(d,J=6.1Hz,1H),8.41(dd,J=7.3,1.1Hz,1H),8.19(d,J=8.2Hz,1H),7.73–7.63(m,1H),6.49(t,J=6.5Hz,1H),5.82(t,J=5.9Hz,1H),3.52–3.43(m,1H),3.28(dd,J=12.2,6.3Hz,2H),3.20–3.04(m,2H),2.92(dd,J=12.2,6.4Hz,2H),2.48-2.38(m,1H),2.11(t,J=7.3Hz,2H),1.94–1.77(m,4H),1.70–1.62(m,1H),1.55–1.46(m,2H),1.40–1.28(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ174.10,153.16,145.16,135.06,133.35,132.85,131.26,129.05,125.94,117.55,56.42,40.27,39.73,38.48,36.26,35.80,34.48,30.10,28.76,25.25.純度：96%(高效液相色譜法)。實施例35-（1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)-N-（4-（異喹啉-5-氨基）環(huán)己基）戊酰胺【5-(1,2-dithiolan-3-yl)-N-(4-(isoquinolin-5-ylamino)cyclohexyl)pentanamide】（PT109）的制備：合成路線：按照上述PT109的合成路線，將化合物5(442.31mg,2.07mmol)，5-氨基異喹啉(230.00mg,1.60mmol)和無水Na2SO4(1.13g,7.98mmol)溶于冰醋酸（10mL）中，在冰浴條件下加入氰基硼氫化鈉(200.50mg,3.19mmol)，撤掉冰浴，反應(yīng)在室溫攪拌下過夜。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去冰醋酸，剩余物中加入飽和NaHCO3溶液，水相用DCM萃取。合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色固體化合物6(372mg,產(chǎn)率68.3%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.46(s,1H),7.53(s,1H),7.49–7.39(m,1H),7.30(s,1H),6.77(s,1H),4.71–4.12(m,2H),3.55(m,3H),2.27(d,J=12.0Hz,1H),2.14(d,J=12.6Hz,1H),2.06–1.88(m,2H),1.82(m,2H),1.46(s,9H),1.34(m,3H).將化合物6(45.51mg,133.28μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，剩余物中加入硫辛酸(25.00mg,121.17μmol)，HOBt(18.01mg,133.28μmol)和EDCI(34.84mg,181.75μmol)，加入含有三乙胺(50.39μL,363.50μmol)的無水DCM，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色油狀物PT109(39.3mg，產(chǎn)率75.5%)。m.p.131.4℃.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),8.44(d,J=5.9Hz,1H),7.54(d,J=5.9Hz,1H),7.46(t,J=7.9Hz,1H),7.30(d,J=8.1Hz,1H),6.77(d,J=7.7Hz,1H),6.00(d,J=7.4Hz,1H),4.01(d,J=7.4Hz,1H),3.70(s,1H),3.62–3.48(m,1H),3.24–3.02(m,2H),2.43(tt,J=20.8,10.4Hz,1H),2.20(t,J=7.3Hz,2H),2.00–1.78(m,7H),1.70(m,7H),1.56–1.37(m,3H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.25,171.31,153.00,143.11,131.58,130.07,129.03,127.30,125.40,114.24,56.46,45.00,43.66,41.11,40.28,38.53,34.73,33.13,29.19,28.93,25.06.純度：100%(高效液相色譜法)。實施例45-（1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基）-1-（3-（異喹啉-5-氨基）哌啶-1-基）戊烷-1-酮【5-(1,2-dithiolan-3-yl)-1-(3-(isoquinolin-5-ylamino)piperidin-1-yl)pentan-1-one】（PT128）的制備：合成路線：按照上述PT128的合成路線，將化合物7(497.52mg,2.50mmol)，5-氨基異喹啉(300.00mg,2.08mmol)溶解在鈦酸異丙酯(5mL)中，室溫下攪拌30分鐘后加入無水乙醇（5mL）稀釋，冰浴條件下加入氰基硼氫化鈉(261.53mg,4.16mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌3個小時。用硅藻土過濾去除固體物，加入飽和NaHCO3溶液淬滅反應(yīng)，水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色固體化合物8(566.00mg,產(chǎn)率83%)。將化合物8(200.00mg,610.83μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，加入飽和NaHCO3溶液（10mL），水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色固體(130.00mg,產(chǎn)率93.6%)。將硫辛酸(50.00mg,242.34μmol)溶解到DMF(3mL)中，加入EDCI(139.37mg,727.01μmol)，HOBt(39.29mg,290.80μmol)和三乙胺(100.78μL,727.01μmol)在室溫下攪拌10分鐘后一次性加入上述反應(yīng)得到的黃色固體(71.61mg,315.04μmol)，室溫氬氣保護(hù)攪拌6小時，加入飽和NaHCO3溶液水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到棕黃色油狀物(53mg,產(chǎn)率52.6%)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.12(s,1H),8.40(s,1H),8.14–8.02(m,1H),7.46(d,J=4.7Hz,1H),7.28(t,J=7.0Hz,1H),6.93–6.80(m,1H),6.12–5.98(m,1H),4.63(d,J=12.4Hz,1H),4.03(d,J=11.9Hz,1H),3.85(d,J=12.0Hz,1H),3.62(s,2H),3.51(s,1H),3.24–2.99(m,4H),2.91(s,1H),2.43–2.30(m,2H),2.15(dd,J=38.2,16.6Hz,3H),1.93–1.65(m,5H),1.63–1.33(m,7H),1.22(s,1H).純度：99%(高效液相色譜法)。實施例51-(5-(1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)戊?；?N-(異喹啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺【1-(5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoyl)-N-(isoquinolin-5-yl)piperidine-4-carboxamide】(PT106)的制備：合成路線：按照上述PT106的合成路線，將化合物9(1g,7.74mmol)溶解在NaOH溶液（2M,10mL）中，在冰浴條件下緩慢加入溶解了BOC酸酐(2.53g,11.61mmol)的THF(10mL)溶液，反應(yīng)在室溫下攪拌1小時，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去THF，水相用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5-6，然后用乙酸乙酯萃取，合并的有機相用無水Na2SO4干燥并過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，真空干燥后得到白色固體化合物10(1.78g,7.76mmol,產(chǎn)率100%)。將化合物10(279.89mg,1.22mmol)，5-氨基異喹啉（160.00mg,1.11mmol），DMAP（13.56mg,110.98μmol）溶解在無水DCM(8ml)中，常溫下加入三乙胺(461.50μL,3.33mmol)和EDCI(319.12mg,1.66mmol)，室溫下攪拌過夜；反應(yīng)完成后加水（10mL）淬滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體中間體11(174.30mg,490.39μmol,產(chǎn)率44.2%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.27(s,1H),8.57(d,J=6.0Hz,1H),8.16(d,J=7.2Hz,1H),7.84(d,J=8.2Hz,1H),7.64-7.57(m,3H),4.37–4.10(m,2H),2.86(s,2H),2.59(s,1H),2.05-2.01(m,2H),1.89-1.79(m,2H),1.48(s,9H).將中間體11(85.00mg,239.15μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，剩余物中加入硫辛酸（59.21mg,286.98μmol），DMAP（2.92mg,23.91μmol）和EDCI(91.69mg,478.29μmol)，加入含有三乙胺(99.45μL,717.44μmol)的無水DCM，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到黃色油狀物PT106(77mg,173.57μmol,產(chǎn)率72.6%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.22(s,1H),8.51(d,J=5.9Hz,1H),8.12(s,1H),8.06(d,J=7.4Hz,1H),7.81(d,J=8.1Hz,1H),7.60-7.56(m,2H),4.65(d,J=12.8Hz,1H),3.96(d,J=13.3Hz,1H),3.59-3.52(m,1H),3.23–3.05(m,3H),2.76-2.67(m,11.2Hz,2H),2.48-2.40(m,1H),2.38–2.27(m,2H),2.05(d,J=12.5Hz,2H),1.96–1.84(m,5H),1.84–1.74(m,2H),1.70-1.59(m,4H),1.52–1.40(m,2H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.34,171.40,153.09,143.20,131.67,130.16,129.12,127.39,125.49,114.33,56.55,45.09,43.75,41.20,40.37,38.62,34.82,33.22,29.19,25.15.純度：96%(高效液相色譜法)。實施例64-（5-（1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基）戊酰胺）-N-(異喹啉-5-基)苯甲酰胺【4-(5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanamido)-N-(isoquinolin-5-yl)benzamide】(PT133)的制備：合成路線：按照上述PT133的合成路線，將化合物12(200.00mg,1.39mmol)，5-氨基異喹啉(427.86mg,1.80mmol)，DMAP(16.95mg,138.72umol)，三乙胺(576.87μL,4.16mmol)溶解在無水DCM中，室溫下攪拌30分鐘后一次性加入EDCI(797.80mg,4.16mmol)，回流反應(yīng)過夜；反應(yīng)完成后加水（10mL）淬滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體中間體13(426,1.17mmol,產(chǎn)率84.5%)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.36(s,1H),9.71(s,1H),9.35(s,1H),8.52(d,J=5.9Hz,1H),8.03(t,J=8.3Hz,3H),7.88(d,J=7.3Hz,1H),7.82(d,J=5.6Hz,1H),7.72(t,J=7.7Hz,1H),7.63(d,J=8.1Hz,2H),1.51(s,9H).將中間體13(80.00mg,220.14μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，剩余物中加入硫辛酸(54.50mg,264.16μmol)，DMAP(2.69mg,22.01μmol)和EDCI(126.60mg,660.41μmol)，加入含有三乙胺(91.54μL,660.41μmol)的無水DCM（6mL），室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體PT133(54.40mg,120.46μmol,產(chǎn)率54.7%)。m.p.172.6℃.1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.41(s,1H),10.20(s,1H),9.38(s,1H),8.53(d,J=6.0Hz,1H),8.08–8.03(m,3H),7.91(d,J=7.3Hz,1H),7.85(d,J=6.0Hz,1H),7.78(s,1H),7.76(d,J=2.3Hz,1H),7.73(d,J=7.8Hz,1H),3.69-3.60(m,1H),3.21-3.13(m,3H),2.46–2.35(m,3H),1.83-1.93(m,1H),1.78–1.55(m,4H),1.47-1.42(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ172.11,166.12,152.97,143.15,142.98,133.77,131.84,129.33,128.73,127.80,127.66,126.00,118.72,116.89,113.08,56.59,38.60,36.80,34.64,28.82,25.24.純度：97%(高效液相色譜法)。實施例74-(5-(1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺)N-（吡啶-4-基）苯甲酰胺【4-(5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanamido)-N-(pyridin-4-yl)benzamide】（PT119）的制備：合成路線：按照上述PT119的合成路線，將化合物14(1.00g,5.15mmol)溶解在DCM(2mL)中，加入TFA(2mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，得到4-氨基吡啶三氟乙酸鹽粗品。將4-氨基吡啶三氟乙酸鹽(300.00mg,1.45mmol)，N-BOC-4-氨基苯甲酸（377.99mg,1.59mmol），DMAP（17.69mg,144.84μmol）溶解在無水DCM（6mL）中，室溫下加入三乙胺(602.30μL,4.35mmol)和EDCI(416.48mg,2.17mmol)，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體中間體15(140mg,446.78μmol,產(chǎn)率30.85%)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.41(s,1H),9.72(s,1H),8.45(d,J=4.6Hz,2H),7.90(d,J=8.3Hz,2H),7.77(d,J=4.9Hz,2H),7.60(d,J=8.3Hz,2H),1.49(s,9H).將中間體15(50.00mg,159.57μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，剩余物中加入硫辛酸(32.92mg,159.57μmol)，HOBt(25.87mg,191.48μmol)和EDCI(45.88mg,239.35μmol)，加入含有三乙胺(66.36μL,478.70μmol)的無水DMF（4mL）溶液，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體PT119(48mg,119.54μmol,產(chǎn)率74.91%)。m.p.159.9℃.1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.44(s,1H),10.21(s,1H),8.45(s,2H),7.94(d,J=7.4Hz,2H),7.75(d,J=9.1Hz,4H),3.63(s,1H),3.15(d,J=20.1Hz,2H),2.36(s,3H),1.90-1.86(m,1H),1.61(s,4H),1.42(s,2H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ171.64,165.72,150.19,146.05,142.75,128.86,128.11,118.20,113.94,56.07,38.08,36.27,34.11,28.27,24.69.純度：97%(高效液相色譜法)。實施例81-(5-(1,2-二硫環(huán)戊烷-3-基)戊酰胺)-N-（吡啶-4-基）哌啶-4-甲酰胺【1-(5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoyl)-N-(pyridin-4-yl)piperidine-4-carboxamide】（PT134）的制備：合成路線：按照上述PT134的合成路線，將實施例7中獲得的4-氨基吡啶三氟乙酸鹽(200.00mg,965.58μmol)，化合物10（265.66mg,1.16mmol），DMAP（11.80mg,96.56μmol）溶解在無水DCM（6mL）中，加入三乙胺(401.53μL,2.90mmol)和EDCI(555.31mg,2.90mmol)，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到白色固體中間體16(281mg,920.19μmol,產(chǎn)率95.3%)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.29(s,1H),8.40(d,J=4.8Hz,2H),7.56(d,J=4.8Hz,2H),3.99(d,J=14.2Hz,3H),2.86-2.67(m,2H),1.79(d,J=12.9Hz,2H),1.51-1.45(m,2H),1.40(s,9H).將化合物16(140.00mg,458.46μmol)溶解在DCM(1mL)中，加入TFA(1mL)，室溫下攪拌3小時。反應(yīng)完成后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去TFA，剩余物中加入硫辛酸(113.51mg,550.15μmol)，DMAP(5.60mg,45.85μmol)和EDCI(263.66mg,1.38mmol)和DMF(1mL)，最后加入溶解了三乙胺(190.65μL,1.38mmol)的無水DCM(6mL)，室溫下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加水（10mL）萃滅，水相用DCM萃取，合并的有機相用飽和的食鹽水（10mL×1）洗滌，在無水Na2SO4干燥后旋蒸除去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜純化得到棕黃色油狀物PT134(154.3mg,392.06μmol,產(chǎn)率85.52%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J=5.3Hz,2H),8.34(s,1H),7.51(d,J=5.4Hz,2H),4.59(d,J=13.4Hz,1H),3.94(d,J=13.5Hz,1H),3.66–3.48(m,1H),3.25–3.01(m,3H),2.68(t,J=12.2Hz,1H),2.59–2.41(m,2H),2.35(t,J=7.4Hz,2H),1.94-1.91(m,2H),1.81-1.79(m,1H),1.72-1.63(m,6H),1.52-1.45(m,3H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.78,171.51,150.35,145.93,113.98,56.53,45.02,43.83,41.17,40.37,38.61,34.79,33.21,29.14,25.19.純度：98%(高效液相色譜法)。實施例9：生物學(xué)評估化合物對谷氨酸誘導(dǎo)的HT22死亡的保護(hù)作用取對數(shù)生長期HT-22細(xì)胞，以0.25%胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸，顯微鏡下細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為10×104個/mL，接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，100μL/孔，培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞貼壁。將96孔板中培養(yǎng)基吸走，加入不同濃度的化合物到96孔板中，100μL/孔。預(yù)孵育30min后，加入2μL100mML-glutamate。模型組不加待測化合物，直接加入2μL100mML-glutamate。孵育24h后，每孔加入10μL5mg/mLMTT，孵育1h，棄去上清，加DMSO100μL/孔，振蕩使生成物formazan充分溶解，在酶標(biāo)儀上測定各孔吸光度值，測定波長570nm。采用公式化合物促進(jìn)細(xì)胞的存活率(%)=100%*(A待測化合物-A模型組)/(A模型組-A空白)計算細(xì)胞存活率。結(jié)果見附圖1。從結(jié)果可以看出，除化合物PT119外，其他化合物均能在一定的濃度下逆轉(zhuǎn)谷氨酸誘導(dǎo)的HT-22細(xì)胞的死亡。實施例10：生物學(xué)評估PT109對ROS的影響采用DHE染色檢測氧自由基的生成情況。HT-22細(xì)胞用DMEM+10%胎牛血清，并置于37℃，含5%CO2孵箱中。將細(xì)胞以合適的密度種在多聚賴氨酸包被的24孔板；待細(xì)胞貼壁后，分別用培養(yǎng)基配制好的PT109加入對應(yīng)的孔中，處理30min后，加入2mM谷氨酸處理10h。收集細(xì)胞，并用DHE染料孵育細(xì)胞30min左右，洗凈DHE染料，用高內(nèi)涵系統(tǒng)檢測DHE的熒光強度。實驗結(jié)果顯示PT109在10μM條件下能明顯減少由谷氨酸誘導(dǎo)的ROS升高。實施例11：生物學(xué)評估PT109對SGK1和JNK的抑制作用通過lifeTechnologies公司的激酶篩選商業(yè)化服務(wù)檢測PT109對SGK和JNK的抑制作用。結(jié)果如表1所示：PT109對SGK1、SGK2和SGK3的IC50為分別為1.34μM、5.6μM和26.4μM，對SGK1有較好的選擇性；對JNK1、JNK2和JNK3的IC50分別為0.285μM、0.143μM和0.831μM。表1PT109對JNK和SGK1的抑制作用實施例12：生物學(xué)評估PT109的激酶選擇性通過lifeTechnologies公司的激酶篩選服務(wù)檢測PT109對其他激酶(包括JNK和SGK1)的抑制作用（化合物9的濃度為10μM，重復(fù)兩次取平均值），考察化合物對JNK和SGK1的選擇性。結(jié)果如表2所示：PT109在10μM的條件下對SGK1和JNK具有較好的選擇性。表2PT109對其他激酶的篩選結(jié)果KinaseTested%InhibitionKinaseTested%InhibitionADRBK1(GRK2)6PRKCA(PKCalpha)25AKT1(PKBalpha)22PRKCB1(PKCbetaI)-10AKT2(PKBbeta)30PRKCG(PKCgamma)63AURKC(AuroraC)5PRKCH(PKCeta)-17CDK1/cyclinB14PRKCI(PKCiota)-14CDK5/p2518PTK2B(FAK2)8CDK5/p3526PTK6(Brk)7CSNK1A1(CK1alpha1)3RPS6KA3(RSK2)54CSNK1D(CK1delta)6RPS6KA4(MSK2)28CSNK1E(CK1epsilon)10SGK(SGK1)91CSNK1G1(CK1gamma1)9SRMS(Srm)20CSNK1G2(CK1gamma2)15STK22D(TSSK1)-2CSNK1G3(CK1gamma3)24TAOK2(TAO1)-6CSNK2A1(CK2alpha1)14TBK110CSNK2A2(CK2alpha2)11TYRO3(RSE)12DYRK1A16CHUK(IKKalpha)16EGFR(ErbB1)-6PI4KB(PI4Kbeta)39FGFR1-3PIK3C2A(PI3K-C2alpha)3FGFR4-2PIK3C3(hVPS34)11FLT1(VEGFR1)3PIK3CA/PIK3R1(p110alpha/p85alpha)56GRK52PIK3CD/PIK3R1(p110delta/p85alpha)48GSK3A(GSK3alpha)41PIK3CG(p110gamma)9GSK3B(GSK3beta)61MAP2K1(MEK1)S218DS222D13HCK9MAP3K2(MEKK2)10HIPK1(Myak)0MAP3K3(MEKK3)3LTK(TYK1)40MAP3K5(ASK1)9MAP3K9(MLK1)2MAP3K7/MAP3K7IP1(TAK1-TAB1)39MAP4K4(HGK)34MAPK10(JNK3)90MAPK1(ERK2)4MAPK8(JNK1)104MST1R(RON)35MAPK9(JNK2)91NEK43MKNK2(MNK2)26NEK63MYO3B(MYO3beta)43NEK72PLK435NTRK1(TRKA)35SLK5NTRK3(TRKC)28TEC26PAK6-16TLK120PDGFRB(PDGFRbeta)7ULK126PDK1Direct51ULK24PDK15WNK213PHKG110WNK37PKN1(PRK1)16實施例13：生物學(xué)評估體外血腦屏障透過率1)取4μL2%（PBL）溶液加于MAIPn4550的96孔板的疏水膜上，滴加過程中注意移液槍頭勿接觸膜表面以防破壞膜結(jié)構(gòu)；2)迅速(10min內(nèi))定量吸取200μL待測樣品液（0.1mg/ml）加入到96孔板中的膜上方作為給藥池，膜另一側(cè)加入200μLPBS(pH=7.4)為接受池，注意保持接受液與膜的充分接觸；3)室溫靜止120min后，小心移除給藥池，用UV光譜儀測試接受池內(nèi)化合物吸光度值（250-500nm）；4)吸取100μL待測樣品液與100μLPBS充分混勻，作為理論平衡溶液，測試其吸光度值（250-500nm），需要用acceptor板測試；5)根據(jù)公式計算logPe值：式中Vd是接受池的體積，Va是接受池的體積，A是膜面積，t是滲透時間，[drug]acceptor是接受池的吸光度，[drug]equilibrium是理論平衡吸光度。注：Pe×10-6cms-1值大于5.3，則化合物能夠透過血腦屏障，小于2.4被定義為不能透過血腦屏障。由結(jié)果表3可知，PT109具有較好的血腦屏障透過率。表3PT109的血腦屏障透過率CompoundPe(×10-6cms-1)PredictionM.WcLogPPT10911.93±0.08CNS+429.194.26當(dāng)前第1頁1 2 3