本發(fā)明涉及基因工程疫苗領域、分子病毒學領域和免疫學領域。此外，本發(fā)明還特別涉及乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)感染治療領域。具體而言，本發(fā)明涉及一種核酸分子，其包含編碼多肽載體(peptidecarrier)的核苷酸序列，且用于插入編碼目的多肽的核苷酸序列。特別地，本發(fā)明的所述核酸分子在插入編碼目的多肽的核苷酸序列且表達為重組蛋白后，所述多肽載體能夠展示所述目的多肽(例如目的抗原或抗原中的目的表位)，和/或，所述重組蛋白能夠形成病毒樣顆粒并展示所述目的多肽。此外，本發(fā)明還涉及包含所述多肽載體以及目的多肽的重組蛋白。進一步，本發(fā)明還涉及，所述核酸分子和所述重組蛋白的用途。此外，本發(fā)明還特別涉及，可用于預防、減輕或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如乙肝)的疫苗或藥物組合物，其包含含有本發(fā)明的多肽載體和來自HBV的表位的重組蛋白。
背景技術(shù)：
：：疫苗是應對傳染病的有效手段。根據(jù)適用人群的不同，疫苗可分為預防性疫苗和治療性疫苗。預防性疫苗主要應用于預防病毒感染，包括減毒疫苗、滅活疫苗、基因工程疫苗，其主要通過誘導機體產(chǎn)生中和抗體來保護機體不被病毒感染。治療性疫苗主要應用于治療持續(xù)性病毒感染以及腫瘤等疾病。在這些疾病中，患者對于靶抗原通常表現(xiàn)為免疫耐受的狀態(tài)，因此，研發(fā)人員嘗試通過多種形式的疫苗來誘導機體產(chǎn)生針對靶抗原的有效免疫應答。治療性疫苗主要包括核酸疫苗、病毒載體疫苗、基因工程疫苗等，其中基因工程疫苗具有明顯的優(yōu)勢。已上市的基因工程疫苗包括乙型肝炎病毒疫苗、人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)疫苗、戊型肝炎病毒(HepatitisEvirus，HEV)疫苗，它們均為病毒樣顆粒(virus-likeparticles,VLPs)的形式。病毒樣顆粒是指，由某種病毒的一個或多個結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成的空心顆粒，其不包含病毒核酸，不能進行自主復制，但在形態(tài)上與真正的病毒粒子相同或相似。病毒樣顆粒具有以下優(yōu)點：免疫原性強、安全性好、不易失活、可展示外源肽段并誘導機體產(chǎn)生針對外源肽段的特異性免疫應答，因此，在疫苗領域具有重要的應用價值。目前，全球約有20億人感染過HBV，其中約有3.5億的慢性HBV感染者，這些感染者最終死于HBV感染相關(guān)肝臟疾病的風險可達15％-25％。全球每年超過100萬人死于乙肝導致的終末期肝病。我國是HBV感染的重災區(qū)，目前約有9300萬乙肝攜帶者。近年來，隨著病例報告系統(tǒng)不斷健全，乙肝相關(guān)疾病的發(fā)生率，病死率不降反升。當前針對慢性HBV感染的治療藥物主要可分為兩類，即干擾素類(Interferon)和核苷/核苷酸類似物(NAs)。慢性HBV感染的治療的最終目標是，阻止重癥肝炎(肝衰竭)、肝硬化和肝癌等終末期肝臟疾病的發(fā)生；其臨床最佳治療終點是，使患者達到乙型肝炎病毒表面抗原的血清學陰轉(zhuǎn)或血清學轉(zhuǎn)換，即完全清除HBV。但現(xiàn)有藥物實現(xiàn)該目標的療效十分有限。因此，針對慢性HBV感染者開發(fā)新的、能更有效地清除病毒、尤其是能有效清除HBsAg或大幅降低HBsAg水平的創(chuàng)新型治療藥物和方法是迫切而必要的，并且，研發(fā)治療性疫苗是具有一定潛力的策略。技術(shù)實現(xiàn)要素：本申請發(fā)明人基于三種蝙蝠來源的乙型肝炎病毒核心抗原蛋白(即，蹄蝠乙型肝炎病毒(roundleafbatHBV，RBHBV)的核心抗原蛋白(RBHBcAg)；筑帳蝠乙型肝炎病毒(tent-makingbatHBV，TBHBV)的核心抗原蛋白(TBHBcAg)；菊頭蝠乙型肝炎病毒(horseshoebatHBV，HBHBV)的核心抗原蛋白(HBHBcAg))，開發(fā)了一類新的用于展示目的多肽的多肽載體(peptidecarrier)。由此，本發(fā)明提供了一種核酸分子，其含有編碼多肽載體的核苷酸序列。此類核酸分子能夠插入編碼目的多肽的核苷酸序列，并表達為含有多肽載體和目的多肽(例如目的抗原，或抗原中的目的表位)的重組蛋白。進一步，所產(chǎn)生的重組蛋白能夠有效形成VLP，并能夠在VLP表面展示插入其中的目的多肽，從而所述目的多肽能夠有效地被機體的免疫系統(tǒng)識別，誘發(fā)機體產(chǎn)生針對目的多肽的特異性免疫應答。因此，本發(fā)明的多肽載體可用作疫苗載體，用于展示目的多肽，例如來自目的抗原的肽段(例如表位)；并且，包含本發(fā)明的多肽載體和目的多肽的重組蛋白可用作疫苗，用于誘發(fā)機體產(chǎn)生針對目的多肽的特異性免疫應答。此外，本申請的發(fā)明人還出人意料地發(fā)現(xiàn)，RBHBcAg蛋白、TBHBcAg蛋白和HBHBcAg蛋白的C端均為富含精氨酸的區(qū)域，其對于VLP組裝不是必須的。因此，本發(fā)明的多肽載體可以不包含RBHBcAg蛋白、TBHBcAg蛋白和HBHBcAg蛋白的C端區(qū)域。例如，本發(fā)明的RBHBcAg載體可以缺失RBHBcAg蛋白的第145-189位氨基酸的部分或全部(例如，缺失RBHBcAg蛋白的第150-189位氨基酸)；本發(fā)明的TBHBcAg載體可以缺失TBHBcAg蛋白的第149-188位氨基酸的部分或全部(例如，缺失TBHBcAg蛋白的第154-188位氨基酸)；本發(fā)明的HBHBcAg載體可以缺失HBHBcAg蛋白的第145-189位氨基酸的部分或全部(例如，缺失HBHBcAg蛋白的第150-189位氨基酸)。此外，本申請的發(fā)明人還出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的多肽載體特別適合用于展示來自人乙肝病毒的抗原表位(例如來自人HBV的HBsAg中的表位)，能夠在受試者中誘發(fā)特別強的清除HBsAg的特異性免疫應答，其功效顯著優(yōu)于現(xiàn)有的乙肝疫苗(例如，以人HBV的HBcAg為多肽載體構(gòu)建的、含有相同表位的疫苗)。因此，本發(fā)明還提供了一種特別適合用于展示來自人乙肝病毒的抗原表位的多肽載體。因此，在一個方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，其包含編碼多肽載體的核苷酸序列或者其變體，所述變體與所述核苷酸序列具有至少90％(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％)的同一性，或者在嚴緊條件或者高嚴緊條件下，能夠與所述核苷酸序列雜交，其中，所述多肽載體選自：(1)RBHBcAg載體，其與蹄蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(RBHBcAg；例如，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示)的區(qū)別在于：(a)RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個氨基酸殘基；例如，第78-83位氨基酸殘基、第78-82位氨基酸殘基、第78-81位氨基酸殘基、或第78-80位氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體(例如，柔性連接體；例如，如SEQIDNO:43所示的連接體)；以及(b)任選地，RBHBcAg蛋白的C端缺失1-40個氨基酸殘基(例如，1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，30-35個，或35-40個氨基酸殘基)；(2)TBHBcAg載體，其與筑帳蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(TBHBcAg；例如，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示)的區(qū)別在于：(a)TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個或5個氨基酸殘基；例如，第80-84位氨基酸殘基、第80-83位氨基酸殘基、或第80-82位氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體(例如，柔性連接體；例如，如SEQIDNO:43所示的連接體)；以及(b)任選地，TBHBcAg蛋白的C端缺失1-35個氨基酸殘基(例如，1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，或30-35個氨基酸殘基)；或(3)HBHBcAg載體，其與菊頭蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(HBHBcAg；例如，其氨基酸序列如SEQIDNO:3所示)的區(qū)別在于：(a)HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個氨基酸殘基；例如，第78-83位氨基酸殘基、第78-82位氨基酸殘基、第78-81位氨基酸殘基、或第78-80位氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體(例如，柔性連接體；例如，如SEQIDNO:43所示的連接體)；以及(b)任選地，HBHBcAg蛋白的C端缺失1-40個氨基酸殘基(例如，1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，30-35個，或35-40個氨基酸殘基)。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述變體與所述編碼多肽載體的核苷酸序列具有至少90％的同一性，例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的同一性。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述變體能夠在嚴緊條件下與所述編碼多肽載體的核苷酸序列雜交。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述變體能夠在高嚴緊條件下與所述編碼多肽載體的核苷酸序列雜交。在一個優(yōu)選的實施方案中，RBHBcAg蛋白是野生型RBHBcAg。在一個優(yōu)選的實施方案中，RBHBcAg蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，RBHBcAg載體與RBHBcAg蛋白的區(qū)別在于，RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體。例如，RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基、第78-82位氨基酸殘基、第78-81位氨基酸殘基、第78-80位氨基酸殘基、第78-79位氨基酸殘基、第79-83位氨基酸殘基、第79-82位氨基酸殘基、第79-81位氨基酸殘基、第79-80位氨基酸殘基、第80-83位氨基酸殘基、第80-82位氨基酸殘基、第80-81位氨基酸殘基、第81-83位氨基酸殘基、第81-82位氨基酸殘基、第82-83位氨基酸殘基、第78位氨基酸殘基、第79位氨基酸殘基、第80位氨基酸殘基、第81位氨基酸殘基、第82位氨基酸殘基、或第83位氨基酸殘基可被缺失或被置換為連接體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述連接體例如為柔性連接體。此類柔性連接體是本領域技術(shù)人員公知的，例如，GGGGGSGGGGTGSEFGGGGSGGGGS(SEQIDNO:43)。在一個優(yōu)選的實施方案中，RBHBcAg載體與RBHBcAg蛋白的區(qū)別在于：(1)RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體，如上文所定義的；和(2)RBHBcAg蛋白的C端缺失1-40個氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，RBHBcAg蛋白的C端被缺失1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，30-35個，或35-40個氨基酸殘基；例如，被缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40個氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，TBHBcAg蛋白是野生型TBHBcAg。在一個優(yōu)選的實施方案中，TBHBcAg蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，TBHBcAg載體與TBHBcAg蛋白的區(qū)別在于，TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，或5個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體。例如，TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基、第80-83位氨基酸殘基、第80-82位氨基酸殘基、第80-81位氨基酸殘基、第81-84位氨基酸殘基、第81-83位氨基酸殘基、第81-82位氨基酸殘基、第82-84位氨基酸殘基、第82-83位氨基酸殘基、第83-84位氨基酸殘基、第80位氨基酸殘基、第81位氨基酸殘基、第82位氨基酸殘基、第83位氨基酸殘基、或第84位氨基酸殘基可被缺失或被置換為連接體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述連接體例如為柔性連接體。此類柔性連接體是本領域技術(shù)人員公知的，例如，GGGGGSGGGGTGSEFGGGGSGGGGS(SEQIDNO:43)。在一個優(yōu)選的實施方案中，TBHBcAg載體與TBHBcAg蛋白的區(qū)別在于：(1)TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，或5個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體，如上文所定義的；和(2)TBHBcAg蛋白的C端缺失1-35個氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，TBHBcAg蛋白的C端被缺失1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，或30-35個氨基酸殘基；例如，被缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35個氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，HBHBcAg蛋白是野生型HBHBcAg。在一個優(yōu)選的實施方案中，HBHBcAg蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，HBHBcAg載體與HBHBcAg蛋白的區(qū)別在于，HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體。例如，HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基、第78-82位氨基酸殘基、第78-81位氨基酸殘基、第78-80位氨基酸殘基、第78-79位氨基酸殘基、第79-83位氨基酸殘基、第79-82位氨基酸殘基、第79-81位氨基酸殘基、第79-80位氨基酸殘基、第80-83位氨基酸殘基、第80-82位氨基酸殘基、第80-81位氨基酸殘基、第81-83位氨基酸殘基、第81-82位氨基酸殘基、第82-83位氨基酸殘基、第78位氨基酸殘基、第79位氨基酸殘基、第80位氨基酸殘基、第81位氨基酸殘基、第82位氨基酸殘基、或第83位氨基酸殘基可被缺失或被置換為連接體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述連接體例如為柔性連接體。此類柔性連接體是本領域技術(shù)人員公知的，例如，GGGGGSGGGGTGSEFGGGGSGGGGS(SEQIDNO:43)。在一個優(yōu)選的實施方案中，HBHBcAg載體與HBHBcAg蛋白的區(qū)別在于：(1)HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個連續(xù)氨基酸殘基(例如，1個，2個，3個，4個，5個或6個連續(xù)氨基酸殘基)被缺失或被置換為連接體，如上文所定義的；和(2)HBHBcAg蛋白的C端缺失1-40個氨基酸殘基。在一個優(yōu)選的實施方案中，HBHBcAg蛋白的C端被缺失1-5個，5-10個，10-15個，15-20個，20-25個，25-30個，30-35個，或35-40個氨基酸殘基；例如，被缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40個氨基酸殘基。如本領域技術(shù)人員已知的，限制性酶切位點的引入是特別有利的。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，在本發(fā)明的核酸分子中，在編碼所述被缺失的一個或多個氨基酸殘基的位置處引入限制性酶切位點。在一個優(yōu)選的實施方案中，在本發(fā)明的核酸分子中，在編碼所述連接體的核苷酸序列中和/或其一端或兩端引入限制性酶切位點。在一個優(yōu)選的實施方案中，在本發(fā)明的核酸分子中和/或其一端或兩端引入一個或多個限制性酶切位點。各種限制性酶切位點是本領域技術(shù)人員已知的，其包括但不限于，EcoRI、BamHI、HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等限制性內(nèi)切酶識別的酶切位點。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體的氨基酸序列選自SEQIDNO:4-9。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子包含選自SEQIDNO:12-17的核苷酸序列。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子用于插入編碼目的多肽的核苷酸序列。例如，所述編碼目的多肽的核苷酸序列被插入至編碼所述被缺失的一個或多個氨基酸殘基的位置處，或者被插入至編碼所述連接體的核苷酸序列中或其一端或兩端。在一個優(yōu)選的實施方案中，以符合讀框的方式將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，利用限制性酶切位點，將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子還包含，編碼目的多肽的核苷酸序列，其中，所述目的多肽相對于所述多肽載體而言是異源的，并且所述編碼目的多肽的核苷酸序列被插入至編碼所述被缺失的一個或多個氨基酸殘基的位置處，或者被插入至編碼所述連接體的核苷酸序列中或其一端或兩端。在一個優(yōu)選的實施方案中，以符合讀框的方式將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，利用限制性酶切位點，將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者是抗原或者含有抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是表位肽，例如包含來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白的第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:20-22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述核酸分子包含或者由編碼選自SEQIDNO:23-40和69-74的氨基酸序列的核苷酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及，含有如上所定義的本發(fā)明核酸分子的載體(vector)?？捎糜诓迦肽康亩嗪塑账?例如，本發(fā)明的核酸分子)的載體是本領域公知的，包括但不限于克隆載體和表達載體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的載體可以是真核表達載體或原核表達載體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的載體是例如質(zhì)粒，粘粒，或噬菌體等。在另一個方面，本發(fā)明還涉及包含上述核酸分子或載體的宿主細胞。此類宿主細胞包括但不限于，原核細胞例如大腸桿菌細胞，以及真核細胞例如酵母細胞，昆蟲細胞，植物細胞和動物細胞(如哺乳動物細胞，例如小鼠細胞、人細胞等)。本發(fā)明的宿主細胞還可以是細胞系，例如293T細胞。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種展示目的多肽的方法，其包括:(1)將編碼所述目的多肽的核苷酸序列插入至本發(fā)明的核酸分子中(特別是，插入至編碼多肽載體的核苷酸序列中)，從而獲得編碼重組蛋白的核酸分子；和(2)將步驟(1)中的編碼重組蛋白的核酸分子表達為重組蛋白。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽相對于所述多肽載體而言是異源的。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述編碼目的多肽的核苷酸序列被插入至編碼所述被缺失的一個或多個氨基酸殘基的位置處，或者被插入至編碼所述連接體的核苷酸序列中或其一端或兩端。在一個優(yōu)選的實施方案中，以符合讀框的方式將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，利用限制性酶切位點，將編碼目的多肽的核苷酸序列插入編碼多肽載體的核苷酸序列中。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者是抗原或者含有抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是表位肽，例如包含來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白的第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:20-22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述編碼重組蛋白的核酸分子包含或者由編碼選自SEQIDNO:23-40和69-74的氨基酸序列的核苷酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種重組蛋白，其包含多肽載體和目的多肽，其中，所述多肽載體如上文所定義，并且，所述目的多肽被插入至所述多肽載體中。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽被插入至所述被缺失的一個或多個氨基酸殘基的位置處，或者被插入至所述連接體中或其一端或兩端。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者是抗原或者含有抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是表位肽，例如包含來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HIV、PDL1或HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:20-22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體的氨基酸序列選自SEQIDNO:4-9。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:23-40和69-74的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種病毒樣顆粒，其包含或者由本發(fā)明的重組蛋白組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物(例如疫苗)，其包含本發(fā)明的重組蛋白或本發(fā)明的病毒樣顆粒，和任選地，一種或多種藥學上可接受的載體(vehicle)或賦形劑(例如佐劑)。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的重組蛋白或本發(fā)明的病毒樣顆粒以有效量存在于藥物組合物中。例如，本發(fā)明的藥物組合物可包含有效預防或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如，乙型肝炎)的量的重組蛋白或病毒樣顆粒。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種預防或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如，乙型肝炎)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物，其中所述目的多肽包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:35-40和69-74的氨基酸序列組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，以有效預防或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如，乙型肝炎)的量施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆粒用于制備藥物的用途，所述藥物用于預防或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如，乙型肝炎)，其中所述目的多肽包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:35-40和69-74的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物，其用于預防或治療HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病(例如，乙型肝炎)，其中所述目的多肽包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg或含有HBsAg的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為RBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為TBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述多肽載體為HBHBcAg載體，且所述表位肽包含或者是來自HBV(特別是人HBV)的抗原表位(例如，來自人HBV的HBsAg的表位(例如線性表位))。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人HBV的HBsAg蛋白或含有HBsAg蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBV選自HBV基因型A、B、C和D。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述HBsAg蛋白的表位為HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:22和60-62。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:35-40和69-74的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種預防或治療HIV感染或與HIV感染相關(guān)的疾病(例如，AIDS)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物，其中所述目的多肽包含來自HIV的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HIV的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:20所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:23-28的氨基酸序列組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，以有效預防或治療HIV感染或與HIV感染相關(guān)的疾病(例如，AIDS)的量施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆粒用于制備藥物的用途，所述藥物用于預防或治療HIV感染或與HIV感染相關(guān)的疾病(例如，AIDS)，其中所述目的多肽包含來自HIV的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HIV的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:20所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:23-28的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆粒或藥物組合物，其用于預防或治療HIV感染或與HIV感染相關(guān)的疾病(例如，AIDS)，其中所述目的多肽包含來自HIV的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含來自HIV的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自HIV的GP120蛋白或含有GP120蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是GP120蛋白的第361-375位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:20所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:23-28的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及一種預防或治療癌癥(例如，非小細胞肺癌)的方法，其包括，給有此需要的受試者施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物，其中所述目的多肽包含人PD-L1蛋白的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含人PD-L1蛋白的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:21所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:29-34的氨基酸序列組成。在一個優(yōu)選的實施方案中，以有效預防或治療癌癥(例如，非小細胞肺癌)的量施用本發(fā)明的重組蛋白或病毒樣顆粒或藥物組合物。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆粒用于制備藥物的用途，所述藥物用于預防或治療癌癥(例如，非小細胞肺癌)，其中所述目的多肽包含人PD-L1蛋白的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含人PD-L1蛋白的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:21所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:29-34的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及上述重組蛋白或病毒樣顆?；蛩幬锝M合物，其用于預防或治療癌癥(例如，非小細胞肺癌)，其中所述目的多肽包含人PD-L1蛋白的抗原表位。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽是包含人PD-L1蛋白的抗原表位的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽包含或者選自人PD-L1蛋白或含有人PD-L1蛋白的表位(例如線性表位)的表位肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表位肽包含或者是人PD-L1蛋白第147-160位氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述目的多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:21所示。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述重組蛋白包含或者由選自SEQIDNO:29-34的氨基酸序列組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及編碼上述重組蛋白的多核苷酸以及含有該多核苷酸的載體?？捎糜诓迦肽康亩嗪塑账岬妮d體是本領域公知的，包括但不限于克隆載體和表達載體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的載體可以是真核表達載體或原核表達載體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的載體是例如質(zhì)粒，粘粒，或噬菌體等。在另一個方面，本發(fā)明還涉及包含上述多核苷酸或載體的宿主細胞。此類宿主細胞包括但不限于，原核細胞例如大腸桿菌細胞，以及真核細胞例如酵母細胞，昆蟲細胞，植物細胞和動物細胞(如哺乳動物細胞，例如小鼠細胞、人細胞等)。本發(fā)明的宿主細胞還可以是細胞系，例如293T細胞。在另一個方面，本發(fā)明還涉及制備上述重組蛋白的方法，其包括，在適合表達所述重組蛋白的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細胞，和，回收所述重組蛋白。本發(fā)明中相關(guān)術(shù)語的說明及解釋在本發(fā)明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術(shù)名詞具有本領域技術(shù)人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的細胞培養(yǎng)、分子遺傳學、核酸化學、免疫學實驗室操作步驟均為相應領域內(nèi)廣泛使用的常規(guī)步驟。同時，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關(guān)術(shù)語的定義和解釋。如本文中所使用的，術(shù)語“蹄蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(RBHBcAg)”和“RBHBcAg蛋白”是指，來自蹄蝠乙型肝炎病毒(roundleafbatHBV，RBHBV)的核心抗原蛋白，其是本領域技術(shù)人員公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：KC790373.1)。如本文中所使用的，當提及RBHBcAg蛋白的氨基酸序列時，其使用SEQIDNO：1所示的序列來進行描述。例如，表述“RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基”是指，SEQIDNO：1所示的多肽的第78-83位氨基酸殘基。然而，本領域技術(shù)人員理解，在RBHBcAg蛋白的氨基酸序列中，可天然產(chǎn)生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加，例如不同基因型或基因亞型的RBHBcAg蛋白)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術(shù)語“RBHBcAg蛋白”應包括所有此類序列，包括例如SEQIDNO：1所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述RBHBcAg蛋白的序列片段時，其不僅包括SEQIDNO：1的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基”包括，SEQIDNO：1的第78-83位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。如本文中所使用的，術(shù)語“野生型RBHBcAg”是指，天然存在于蹄蝠乙型肝炎病毒中的核心抗原蛋白。如本文中所使用的，術(shù)語“RBHBcAg載體”是指，衍生自RBHBcAg蛋白的多肽載體。如上文所詳細描述的，RBHBcAg載體與RBHBcAg蛋白存在著如下差異：(a)RBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基被缺失或被置換為連接體；以及(b)任選地，RBHBcAg蛋白的C端被缺失1-40個氨基酸殘基。如本文中所使用的，術(shù)語“筑帳蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(TBHBcAg)”和“TBHBcAg蛋白”是指，來自筑帳蝠乙型肝炎病毒(tent-makingbatHBV，TBHBV)的核心抗原蛋白，其是本領域技術(shù)人員公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：KC790378.1)。如本文中所使用的，當提及TBHBcAg蛋白的氨基酸序列時，其使用SEQIDNO：2所示的序列來進行描述。例如，表述“TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基”是指，SEQIDNO：2所示的多肽的第80-84位氨基酸殘基。然而，本領域技術(shù)人員理解，在TBHBcAg蛋白的氨基酸序列中，可天然產(chǎn)生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加，例如不同基因型或基因亞型的TBHBcAg蛋白)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術(shù)語“TBHBcAg蛋白”應包括所有此類序列，包括例如SEQIDNO：2所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述TBHBcAg蛋白的序列片段時，其不僅包括SEQIDNO：2的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基”包括，SEQIDNO：2的第80-84位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。如本文中所使用的，術(shù)語“野生型TBHBcAg”是指，天然存在于筑帳蝠乙型肝炎病毒中的核心抗原蛋白。如本文中所使用的，術(shù)語“TBHBcAg載體”是指，衍生自TBHBcAg蛋白的多肽載體。如上文所詳細描述的，TBHBcAg載體與TBHBcAg蛋白存在著如下差異：(a)TBHBcAg蛋白的N端第80-84位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基被缺失或被置換為連接體；以及(b)任選地，TBHBcAg蛋白的C端被缺失1-35個氨基酸殘基。如本文中所使用的，術(shù)語“菊頭蝠乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白(HBHBcAg)”和“HBHBcAg蛋白”是指，來自菊頭蝠乙型肝炎病毒(horseshoebatHBV，HBHBV)的核心抗原蛋白，其是本領域技術(shù)人員公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：KC790377.1)。如本文中所使用的，當提及HBHBcAg蛋白的氨基酸序列時，其使用SEQIDNO：3所示的序列來進行描述。例如，表述“HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基”是指，SEQIDNO：3所示的多肽的第78-83位氨基酸殘基。然而，本領域技術(shù)人員理解，在HBHBcAg蛋白的氨基酸序列中，可天然產(chǎn)生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加，例如不同基因型或基因亞型的HBHBcAg蛋白)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術(shù)語“HBHBcAg蛋白”應包括所有此類序列，包括例如SEQIDNO：3所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述HBHBcAg蛋白的序列片段時，其不僅包括SEQIDNO：3的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基”包括，SEQIDNO：3的第78-83位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。如本文中所使用的，術(shù)語“野生型HBHBcAg”是指，天然存在于菊頭蝠乙型肝炎病毒中的核心抗原蛋白。如本文中所使用的，術(shù)語“HBHBcAg載體”是指，衍生自HBHBcAg蛋白的多肽載體。如上文所詳細描述的，HBHBcAg載體與HBHBcAg蛋白存在著如下差異：(a)HBHBcAg蛋白的N端第78-83位氨基酸殘基中的一個或多個氨基酸殘基被缺失或被置換為連接體；以及(b)任選地，HBHBcAg蛋白的C端被缺失1-40個氨基酸殘基。如本文中所使用的，術(shù)語“人HBV的HBcAg”和“Hu-HBcAg”是指，人乙型肝炎病毒的核心抗原蛋白，其是本領域技術(shù)人員公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：AAO63517.1)。如本文中所使用的，當提及人HBV的HBcAg的氨基酸序列時，其使用NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：AAO63517.1所示的序列來進行描述。如本文中所使用的，術(shù)語“人HBV的HBsAg”和“Hu-HBsAg”是指，人乙型肝炎病毒的表面抗原主蛋白，其是本領域技術(shù)人員公知的(參見，例如NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：AAF24729.1)。如本文中所使用的，當提及人HBV的HBsAg的氨基酸序列時，其使用SEQIDNO：44所示的序列(即，NCBIGENBANK數(shù)據(jù)庫登錄號：AAF24729.1)來進行描述。例如，表述“HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸殘基”是指，SEQIDNO：44所示的多肽的第113-135位氨基酸殘基。然而，本領域技術(shù)人員理解，在HBsAg蛋白的氨基酸序列中，可天然產(chǎn)生或人工引入突變或變異(包括但不限于，置換，缺失和/或添加，例如不同基因型或基因亞型的HBsAg蛋白)，而不影響其生物學功能。因此，在本發(fā)明中，術(shù)語“HBsAg蛋白”應包括所有此類序列，包括例如SEQIDNO：44所示的序列以及其天然或人工的變體。并且，當描述HBsAg蛋白的序列片段時，其不僅包括SEQIDNO：44的序列片段，還包括其天然或人工變體中的相應序列片段。例如，表述“HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸殘基”包括，SEQIDNO：44的第113-135位氨基酸殘基，以及其變體(天然或人工)中的相應片段。根據(jù)本發(fā)明，表述“相應序列片段”或“相應片段”是指，當對序列進行最優(yōu)比對時，即當序列進行比對以獲得最高百分數(shù)同一性時，進行比較的序列中位于等同位置的片段。如本文中所使用的，表述“X蛋白的C端缺失Y個氨基酸殘基”是指，X蛋白的C端最后Y個氨基酸殘基全部被去除。例如，表述“RBHBcAg蛋白的C端缺失1-40個氨基酸殘基”是指，RBHBcAg蛋白的C端最后1-40個氨基酸殘基全部被去除。如本文中所使用的，術(shù)語“同一性”用于指兩個多肽之間或兩個核酸之間序列的匹配情況。當兩個進行比較的序列中的某個位置都被相同的堿基或氨基酸單體亞單元占據(jù)時(例如，兩個DNA分子的每一個中的某個位置都被腺嘌呤占據(jù)，或兩個多肽的每一個中的某個位置都被賴氨酸占據(jù))，那么各分子在該位置上是同一的。兩個序列之間的“百分數(shù)同一性”是由這兩個序列共有的匹配位置數(shù)目除以進行比較的位置數(shù)目×100的函數(shù)。例如，如果兩個序列的10個位置中有6個匹配，那么這兩個序列具有60％的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50％的同一性(總共6個位置中有3個位置匹配)。通常，在將兩個序列比對以產(chǎn)生最大同一性時進行比較。這樣的比對可通過使用，例如，可通過計算機程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地進行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48：443-453的方法來實現(xiàn)。還可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.ApplBiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用PAM120權(quán)重殘基表(weightresiduetable)、12的缺口長度罰分和4的缺口罰分來測定兩個氨基酸序列之間的百分數(shù)同一性。此外，可使用已整合入GCG軟件包(可在www.gcg.com上獲得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(JMoIBiol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣以及16、14、12、10、8、6或4的缺口權(quán)重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重來測定兩個氨基酸序列之間的百分數(shù)同一性。如本文中使用的，術(shù)語“保守置換”意指不會不利地影響或改變包含氨基酸序列的蛋白/多肽的必要特性的氨基酸置換。例如，可通過本領域內(nèi)已知的標準技術(shù)例如定點誘變和PCR介導的誘變引入保守置換。保守氨基酸置換包括用具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基替代氨基酸殘基的置換，例如用在物理學上或功能上與相應的氨基酸殘基相似(例如具有相似大小、形狀、電荷、化學性質(zhì)，包括形成共價鍵或氫鍵的能力等)的殘基進行的置換。已在本領域內(nèi)定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如，賴氨酸、精氨酸和組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。因此，優(yōu)選用來自相同側(cè)鏈家族的另一個氨基酸殘基替代相應的氨基酸殘基。鑒定氨基酸保守置換的方法在本領域內(nèi)是熟知的(參見，例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人ProteinEng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人Proc.NatlAcad.SetUSA94:412-417(1997)，其通過引用并入本文)。如本文中所使用的，術(shù)語“雜交”是指，相互間具有互補序列的兩個單鏈核酸分子在一定條件下(適宜的溫度及離子強度等)按堿基互補配對原則退火形成雙鏈核酸的過程。核酸雜交可以在DNA-DNA之間，也可在DNA-RNA或RNA-RNA之間進行，只要它們之間存在互補序列，可以進行堿基配對。關(guān)于核酸雜交的進一步詳細描述，可參見例如，HenegariuO等人，(1999).“Customfluorescent-nucleotidesynthesisasanalternativemethodfornucleicacidlabeling”,NatureBiotechnology18:345-348；EzakiT等人，1989.FluorometricDeoxyribonucleicAcid-DeoxyribonucleicAcidHybridizationinMicrodilutionWellsasanAlternativetoMembraneFilterHybridizationinwhichRadioisotopesAreUsedToDetermineGeneticRelatednessamongBacterialStrains.Int.J.ofSystemicBacteriology29(3):224-229；和HerringtonC等人，1998.PCR3:PCRinsituhybridization:apracticalapproach,Volume3.Oxford:OxfordUniversityPress。為了保證核酸雜交的特異性，通常使用嚴緊條件或者高嚴緊條件。嚴緊條件和高嚴緊條件在分子生物學領域中是熟知的。例如，嚴緊條件可以是指，在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中、于約45℃下進行雜交，隨后在0.2×SSC/0.1％SDS中、于約50－65℃下進行一次或多次洗滌。高嚴緊條件可以是指，在6×SSC中、于約45℃下進行雜交，隨后在0.1×SSC/0.2％SDS中、于約68℃下進行一次或多次洗滌。關(guān)于本領域技術(shù)人員已知的其它嚴緊條件或高嚴緊條件，可參見例如Ausubel,F.M.等編,1989,CurrentProtocolsinMolecularBiology,第1卷,GreenPublishingAssociates,Inc.,和JohnWiley&Sons,Inc.,紐約，第6.3.1-6.3.6和2.10.3頁。如本文中所使用的，術(shù)語“連接體”是指，用于連接兩個分子(例如蛋白)的短肽。此類連接體是本領域技術(shù)人員公知的，包括但不限于柔性連接體，例如(Gly)4，(Gly)4-Ser，((Gly)4-Ser)3等等。在本發(fā)明中，術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”具有相同的含義，可互換使用。并且在本發(fā)明中，氨基酸通常用本領域公知的單字母和三字母縮寫來表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。如本文中所使用的，術(shù)語“限制性酶切位點”是指，限制性內(nèi)切酶識別的酶切位點。此類限制性酶切位點是本領域技術(shù)人員已知的，其包括但不限于，EcoRI、BamHI、HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等限制性內(nèi)切酶識別的酶切位點。如本文中所使用的，術(shù)語“抗原表位”和“表位”是指，抗原上被免疫球蛋白或抗體特異性結(jié)合的部位?！氨砦弧痹诒绢I域內(nèi)也稱為“抗原決定簇”。表位或抗原決定簇通常由分子的化學活性表面基團例如氨基酸或碳水化合物或糖側(cè)鏈組成并且通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特征。例如，表位通常以獨特的空間構(gòu)象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15個連續(xù)或非連續(xù)的氨基酸，其可以是“線性的”或“構(gòu)象的”。參見，例如，EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。在線性表位中，蛋白質(zhì)與相互作用分子(例如抗體)之間的所有相互作用的點沿著蛋白質(zhì)的一級氨基酸序列線性存在。在構(gòu)象表位中，相互作用的點跨越彼此分開的蛋白質(zhì)氨基酸殘基而存在。如本文中所使用的，術(shù)語“HBsAg的表位”是指，存在于HBsAg中的、能夠被免疫球蛋白或抗體特異性結(jié)合的部位。已對人HBV的HBsAg的結(jié)構(gòu)和功能進行了深入的研究。并且，已有許多文獻報道了人HBV的HBsAg上的表位。參見例如，WO97/39029A2；WO85/04103A1；XiaoxingQiu等，TheJournalofImmunology，1996，第156卷，第3350-3356頁；WO2013/185558A1等。如本文中所使用的，術(shù)語“表位肽”是指，抗原上能夠形成表位/用作表位的肽段。在一些情況下，單獨的表位肽即能夠被針對所述表位的抗體特異性識別/結(jié)合。在另一些情況下，可能需要將表位肽與多肽載體融合，以便表位肽能夠被特異性抗體識別。表位肽所包含的表位可以是線性表位，也可以是構(gòu)象表位。當表位肽包含線性表位時，其可以包含或者是抗原中構(gòu)成該表位的連續(xù)氨基酸區(qū)段(即，肽片段)。當表位肽包含構(gòu)象表位時，其可以包含或者是抗原中橫跨該構(gòu)象表位所涉及的所有氨基酸殘基的連續(xù)氨基酸區(qū)段(即，肽片段)。在本發(fā)明的某些實施方案中，表位肽優(yōu)選地具有不超過500個氨基酸殘基的長度，例如不超過400個氨基酸殘基的長度，不超過300個氨基酸殘基的長度，不超過200個氨基酸殘基的長度，不超過100個氨基酸殘基的長度，不超過90個氨基酸殘基的長度，不超過80個氨基酸殘基的長度，不超過70個氨基酸殘基的長度，不超過60個氨基酸殘基的長度，不超過50個氨基酸殘基的長度，不超過40個氨基酸殘基的長度，不超過30個氨基酸殘基的長度，或不超過25個氨基酸殘基的長度。如本文中所使用的，術(shù)語“多肽載體”是指這樣的載體蛋白，其可以充當表位肽的載體，即，其可以在特定位置處(例如蛋白內(nèi)部，N端或C端)插入表位肽，以便該表位肽能夠呈現(xiàn)出來，從而該表位肽能夠被抗體或免疫系統(tǒng)識別。之前的文獻已報道了此類載體蛋白，包括例如，HPVL1蛋白(可以將表位肽插入在所述蛋白的第130-131位氨基酸之間或在第426-427位氨基酸之間，參見Slupetzky,K.等Chimericpapillomavirus-likeparticlesexpressingaforeignepitopeoncapsidsurfaceloops[J].JGenVirol,2001,82:2799-2804；Varsani,A.等Chimerichumanpapillomavirustype16(HPV-16)L1particlespresentingthecommonneutralizingepitopefortheL2minorcapsidproteinofHPV-6andHPV-16[J].JVirol,2003,77:8386-8393)，CRM197蛋白(可以將表位肽連接至該蛋白或其片段的N末端或C末端)等。如上文所論述的，本發(fā)明提供了一類新的多肽載體，其用于展示目的多肽，并且特別適合用于展示含有來自人乙肝病毒的抗原表位(例如來自人HBV的HBsAg中的表位)的表位肽。在本發(fā)明的實施方案中，可以在表位肽與多肽載體之間使用連接體(例如柔性或剛性連接體)，以促進二者各自的折疊。如本文中所使用的，術(shù)語“重組蛋白”僅表示，所描述的蛋白不是天然存在的，而不意欲限定該蛋白的產(chǎn)生/獲得方式。本發(fā)明的重組蛋白可以通過任何已知的方法來產(chǎn)生，包括但不限于，基因工程方法和人工合成方法。如本文中所使用的，術(shù)語“病毒樣顆粒”是指，由某種病毒的一個或多個結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成的空心顆粒，其不包含病毒核酸，不能進行自主復制，但在形態(tài)和結(jié)構(gòu)上與真正的病毒粒子相同或相似。如本文中所使用的，術(shù)語“藥學可接受的載體和/或賦形劑”是指在藥理學和/或生理學上與受試者和活性成分相容的載體和/或賦形劑，其是本領域公知的(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences.EditedbyGennaroAR,19thed.Pennsylvania:MackPublishingCompany,1995)，并且包括但不限于：pH調(diào)節(jié)劑，表面活性劑，佐劑，離子強度增強劑。例如，pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于磷酸鹽緩沖液；表面活性劑包括但不限于陽離子，陰離子或者非離子型表面活性劑，例如Tween-80；離子強度增強劑包括但不限于氯化鈉。如本文中所使用的，術(shù)語“佐劑”是指非特異性免疫增強劑，當其與抗原一起或預先遞送入機體時，其可增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型。佐劑有很多種，包括但不限于鋁佐劑(例如氫氧化鋁)、弗氏佐劑(例如完全弗氏佐劑和不完全弗氏佐劑)、短小棒狀桿菌、脂多糖、細胞因子等。弗氏佐劑是目前動物試驗中最常用的佐劑。氫氧化鋁佐劑則在臨床實驗中使用較多。如本文中所使用的，術(shù)語“大腸桿菌表達系統(tǒng)”是指由大腸桿菌(菌株)與載體(vector)組成的表達系統(tǒng)，其中大腸桿菌(菌株)來源于市場上可得到的菌株，例如但不限于：GI698,ER2566,BL21(DE3),B834(DE3),BLR(DE3)。如本文中所使用的，術(shù)語“載體(vector)”是指，可將多聚核苷酸插入其中的一種核酸運載工具。當載體能使插入的多核苷酸編碼的蛋白獲得表達時，載體稱為表達載體。載體可以通過轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導或者轉(zhuǎn)染導入宿主細胞，使其攜帶的遺傳物質(zhì)元件在宿主細胞中獲得表達。載體是本領域技術(shù)人員公知的，包括但不限于：質(zhì)粒；噬菌粒；柯斯質(zhì)粒；人工染色體，例如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1來源的人工染色體(PAC)；噬菌體如λ噬菌體或M13噬菌體及動物病毒等。可用作載體的動物病毒包括但不限于，逆轉(zhuǎn)錄酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關(guān)病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)。一種載體可以含有多種控制表達的元件，包括但不限于，啟動子序列、轉(zhuǎn)錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報告基因。另外，載體還可含有復制起始位點。如本文中所使用的，術(shù)語“宿主細胞”是指，可用于導入載體的細胞，其包括但不限于，如大腸桿菌或枯草菌等的原核細胞，如酵母細胞或曲霉菌等的真菌細胞，如S2果蠅細胞或Sf9等的昆蟲細胞，或者如纖維原細胞，CHO細胞，COS細胞，NSO細胞，HeLa細胞，BHK細胞，HEK293細胞或人細胞等的動物細胞。如本文中使用的，術(shù)語“受試者”是指哺乳動物，例如靈長類哺乳動物，例如人。如本文中所使用的，術(shù)語“有效量”是指足以獲得或至少部分獲得期望的效果的量。例如，預防疾病(例如HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病)有效量是指，足以預防，阻止，或延遲疾病(例如HBV感染或與HBV感染相關(guān)的疾病)的發(fā)生的量；治療疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并發(fā)癥的量。測定這樣的有效量完全在本領域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。例如，對于治療用途有效的量將取決于待治療的疾病的嚴重度、患者自己的免疫系統(tǒng)的總體狀態(tài)、患者的一般情況例如年齡，體重和性別，藥物的施用方式，以及同時施用的其他治療等等。發(fā)明的有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)方案具有以下有益效果：(1)本發(fā)明提供了一種新的多肽載體，其具有廣泛的通用性，能夠用于高效展示各種目的多肽(例如，抗原表位/抗原肽段)，并誘發(fā)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對目的多肽的特異性免疫應答。此類目的多肽(例如，抗原表位/抗原肽段)包括但不限于，來源于HIV的抗原表位/抗原肽段(例如，來源于HIV的GP120蛋白的抗原表位/抗原肽段；例如含有GP120蛋白的第361-375位氨基酸的多肽)，來源于人PD-L1蛋白的抗原表位/抗原肽段(例如，含有人PD-L1蛋白第147-160位氨基酸的多肽)，和來源于人HBV的抗原表位/抗原肽段(例如，來源于人HBV的HBsAg蛋白的抗原表位/抗原肽段；例如含有HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸的多肽)。(2)本發(fā)明的多肽載體特別適合用于展示來自人乙肝病毒的抗原表位(例如來自人HBV的HBsAg中的表位)，能夠在受試者中誘發(fā)特別強的清除HBsAg的特異性免疫應答，其功效顯著優(yōu)于現(xiàn)有的乙肝疫苗(例如，以人HBV的HBcAg為多肽載體構(gòu)建的、含有相同表位的疫苗)。下面將結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術(shù)人員將理解，下列附圖和實施例僅用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的范圍的限定。根據(jù)附圖和優(yōu)選實施方案的下列詳細描述，本發(fā)明的各種目的和有利方面對于本領域技術(shù)人員來說將變得顯然。附圖說明圖1展示了，將目的多肽(靶抗原肽段)插入本發(fā)明的RBHBcAg載體、TBHBcAg載體和HBHBcAg載體以構(gòu)建重組蛋白的克隆方案的示意圖。圖2展示了，實施例2中所構(gòu)建的18種重組蛋白的SDS-PAGE結(jié)果，以及由所述重組蛋白形成的病毒樣顆粒的透射電鏡觀察結(jié)果。圖3展示了，用實施例2中構(gòu)建的18種重組蛋白形成的病毒樣顆粒免疫BALB/C小鼠后，小鼠血清中抗重組蛋白中的目的多肽的抗體滴度隨時間的變化情況?？v軸：抗體滴度(log10)；橫軸：時間(周)。圖3A：所使用的目的多肽為SEQIDNO:20，且檢測抗GP120抗體的滴度；圖3B：所使用的目的多肽為SEQIDNO:21，且檢測抗PD-L1抗體的滴度；圖3C：所使用的目的多肽為SEQIDNO:22，且檢測抗HBsAg抗體的滴度。圖4展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖4A)和雌性(圖4B)小鼠后，小鼠血清中HBsAg的水平隨時間的變化情況?？v軸：HBsAg的水平(IU/ml)；橫軸：時間(周)。箭頭指示，給小鼠施用病毒樣顆粒的時間點。圖5展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性小鼠后，小鼠血清中HBVDNA的水平隨時間的變化情況?？v軸：HBVDNA的水平(Log10IU/ml)；橫軸：時間(周)。箭頭指示，給小鼠施用病毒樣顆粒的時間點。圖6展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖6A)和雌性(圖6B)小鼠后，小鼠血清中抗HBsAg抗體的滴度隨時間的變化情況?？v軸：抗HBsAg抗體的滴度；橫軸：時間(周)。圖7顯示了，由實施例5中構(gòu)建的6種重組蛋白形成的病毒樣顆粒的透射電鏡觀察結(jié)果。圖8展示了，用8種重組蛋白形成的病毒樣顆粒免疫BALB/C小鼠3周后，小鼠血清中抗相應靶多肽(SEQIDNO：60，22，61，62)的抗體滴度；其中，用來自HBV基因型A的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO：60)來檢測用RBHBcAg149-SEQ60和TBHBcAg153-SEQ60免疫的小鼠血清的抗體滴度；用來自HBV基因型B的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:SEQ22)來檢測用RBHBcAg149-SEQ22和TBHBcAg153-SEQ22免疫的小鼠血清的抗體滴度；用來自HBV基因型C的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:61)來檢測用RBHBcAg149-SEQ61和TBHBcAg153-SEQ61免疫的小鼠血清的抗體滴度；并且，使用來自HBV基因型D的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:62)來檢測用RBHBcAg149-SEQ62和TBHBcAg153-SEQ62免疫的小鼠血清的抗體滴度。結(jié)果顯示，8種重組蛋白形成的病毒樣顆粒均具有良好的免疫原性，能夠誘導小鼠產(chǎn)生高滴度的特異性結(jié)合靶抗原的抗體。圖9展示了，用4種重組蛋白(SEQIDNO：36，69，70，71)形成的病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖9A)和雌性(圖9B)小鼠后，小鼠血清中HBsAg的水平隨時間的變化情況，其中，縱軸：HBsAg的水平(IU/ml)；橫軸：時間(周)。序列信息本發(fā)明涉及的部分序列(SEQIDNO:1-44)的信息提供于下面的表1中。表1：SEQIDNO:1-44的序列信息具體實施方式現(xiàn)參照下列意在舉例說明本發(fā)明(而非限定本發(fā)明)的實施例來描述本發(fā)明。除非特別指明，本發(fā)明中所使用的分子生物學實驗方法和免疫檢測法，基本上參照J.Sambrook等人，分子克?。簩嶒炇沂謨裕?版，冷泉港實驗室出版社，1989，以及F.M.Ausubel等人，精編分子生物學實驗指南，第3版，JohnWiley&Sons,Inc.，1995中所述的方法進行；限制性內(nèi)切酶的使用依照產(chǎn)品制造商推薦的條件。本領域技術(shù)人員知曉，實施例以舉例方式描述本發(fā)明，且不意欲限制本發(fā)明所要求保護的范圍。實施例1.編碼多肽載體的質(zhì)粒的構(gòu)建在本實施例中，我們構(gòu)建了編碼多肽載體的質(zhì)粒。1.1編碼多肽載體的核苷酸序列的制備基于三種蝙蝠來源的乙型肝炎病毒核心抗原蛋白(即，RBHBcAg蛋白，TBHBcAg蛋白，HBHBcAg蛋白)，設計了下述多肽載體：RBHBcAg189載體，其與RBHBcAg蛋白(SEQIDNO:1)的區(qū)別在于，RBHBcAg蛋白的第78-81位氨基酸殘基被替換為如SEQIDNO:43所示的連接體；RBHBcAg189載體的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，核苷酸序列如SEQIDNO:12所示；TBHBcAg188載體，其與TBHBcAg蛋白(SEQIDNO:2)的區(qū)別在于，RBHBcAg蛋白的第80-83位氨基酸殘基被替換為如SEQIDNO:43所示的連接體；TBHBcAg188載體的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示，核苷酸序列如SEQIDNO:14所示；HBHBcAg189載體，其與HBHBcAg蛋白(SEQIDNO:3)的區(qū)別在于，RBHBcAg蛋白的第78-81位氨基酸殘基被替換為如SEQIDNO:43所示的連接體；HBHBcAg189載體的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，核苷酸序列如SEQIDNO:16所示。另外，還基于人HBV的HBcAg蛋白，設計了HBcAg183載體，用作對照。HBcAg183載體與人HBV的HBcAg蛋白的區(qū)別在于，人HBV的HBcAg蛋白的第79-81位氨基酸殘基被替換為如SEQIDNO:43所示的連接體；HBcAg183載體的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示，核苷酸序列如SEQIDNO:18所示。上述四種載體的核苷酸序列均委托生工生物工程上海(股份)有限公司進行全基因合成。1.2編碼多肽載體的質(zhì)粒的制備以上述合成的核苷酸序列為模板，使用表2中的引物，通過PCR分別擴增上述4種載體的全長基因以及其截短體(即，C端截短的基因片段)。一共獲得8種PCR產(chǎn)物，分別是：編碼RBHBcAg189載體的基因(SEQIDNO:12；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:4)、編碼RBHBcAg149載體的基因(SEQIDNO:13；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:5)、編碼TBHBcAg188載體的基因(SEQIDNO:14；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:6)、編碼TBHBcAg153載體的基因(SEQIDNO:15；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:7)、編碼HBHBcAg189載體的基因(SEQIDNO:16；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:8)、編碼HBHBcAg149載體的基因(SEQIDNO:17；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:9)、編碼HBcAg183載體的基因(SEQIDNO:18；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:10)、和編碼HBcAg149載體的基因(SEQIDNO:19；其編碼的氨基酸序列為SEQIDNO:11)。用NdeI和HindIII將pTO-T7載體(羅文新,張軍,楊海杰,等.一種帶增強子的原核高效表達載體的構(gòu)建及初步應用[J].生物工程學報,2000,16(5):578-581)雙酶切，獲得線性化載體。利用Gibsonassembly克隆方法(NewEnglandBiolabs(UK)Ltd)，將獲得的8種PCR產(chǎn)物與線性化載體連接，并轉(zhuǎn)化入DH5a感受態(tài)細菌中。將經(jīng)轉(zhuǎn)化的細菌涂板培養(yǎng)，然后挑取單克隆菌落，提取質(zhì)粒并進行測序。經(jīng)測序驗證，獲得8種含有編碼多肽載體的核苷酸序列的質(zhì)粒。上述PCR過程涉及的引物示于表2中。表2：引物序列實施例2.重組蛋白的制備在本實施例中，我們將編碼目的多肽的核苷酸序列插入實施例1構(gòu)建的質(zhì)粒中，并獲得了含有目的多肽和多肽載體的重組蛋白。將目的多肽(靶抗原肽段)插入本發(fā)明的RBHBcAg載體、TBHBcAg載體和HBHBcAg載體以構(gòu)建重組蛋白的克隆方案的示意圖如圖1所示。2.1編碼含有目的多肽和多肽載體的重組蛋白的表達質(zhì)粒的構(gòu)建本實施例利用3種目的多肽來驗證本發(fā)明的多肽載體用于展示肽段的通用性。這3種目的多肽為：多肽HIV-GP120-aa361-375(即，來源于HIVGP120蛋白的第361-375位氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO:20所示)；多肽hPDL1-aa147-160(即，來源于人PD-L1蛋白的第147-160位氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO:21所示)；多肽HBsAg-aa113-135(即，來源于人HBV表面抗原主蛋白(HBsAg)的第113-135位氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO:22所示)。直接合成所述3種目的多肽的正義和反義編碼序列(如表3所示)，并進行退火，從而獲得具有粘性末端的、編碼目的多肽的基因片段。表3：3種目的多肽的正義和反義編碼序列將實施例1中獲得的6種質(zhì)粒(RBHBcAg189、RBHBcAg149、TBHBcAg188、TBHBcAg153、HBHBcAg189和HBHBcAg149)分別用BamHI和EcoRI雙酶切，獲得6種線性化的載體。然后，將如上制備的3種具有粘性末端的、編碼目的多肽的基因片段分別連接入各個線性化載體中，獲得編碼重組蛋白的表達質(zhì)粒(一共18種：RBHBcAg189-SEQ20，RBHBcAg149-SEQ20，TBHBcAg188-SEQ20，TBHBcAg153-SEQ20，HBHBcAg189-SEQ20，HBHBcAg149-SEQ20，RBHBcAg189-SEQ21，RBHBcAg149-SEQ21，TBHBcAg188-SEQ21，TBHBcAg153-SEQ21，HBHBcAg189-SEQ21，HBHBcAg149-SEQ21，RBHBcAg189-SEQ22，RBHBcAg149-SEQ22，TBHBcAg188-SEQ22，TBHBcAg153-SEQ22，HBHBcAg189-SEQ22，和HBHBcAg149-SEQ22)。2.2重組蛋白的表達、純化和組裝使用前一步驟構(gòu)建的18種表達質(zhì)粒，通過相同的方法來表達和純化所述表達質(zhì)粒編碼的重組蛋白。下面以RBHBcAg149-SEQX(SEQX表示SEQ20、SEQ21或SEQ22)為例，闡述這些重組蛋白的表達和純化過程。(2.2.1)用于表達重組蛋白的菌株的制備：將2.1中獲得的表達質(zhì)粒RBHBcAg149-SEQX轉(zhuǎn)化入大腸桿菌ER2566菌株，從而獲得表達菌株。(2.2.2)重組蛋白RBHBcAg149-SEQX的表達：將表達菌株接種至500mL三角瓶中，于37℃定溫搖床培養(yǎng)至OD＝1.0左右；隨后加入異丙基-beta-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至終濃度0.5mM，并于25℃繼續(xù)表達6小時。(2.2.3)重組蛋白RBHBcAg149-SEQX的純化：(2.2.3.1)菌體超聲破碎：離心收取2.2.2中的菌體，并進行超聲破碎。超聲緩沖液為：20mM磷酸鹽緩沖液(PH6.0)+300mMNaCl。(2.2.3.2)重組蛋白的初步純化：將超聲破碎后的混合物于65℃水浴中溫育30分鐘，隨后離心收取上清；按1:1的體積比向上清中加入飽和硫酸銨，離心收取沉淀；加入適當體積的緩沖液(20mM磷酸鹽緩沖液(pH＝7.4)+150mMNaCl)將沉淀重懸，從而獲得初步純化的重組蛋白RBHBcAg149-SEQX。(2.2.3.3)重組蛋白的層析純化：按照制造商的說明書，利用Sepharose4FF(GE)分子篩柱層析進一步純化2.2.3.2中獲得的蛋白，從而獲得經(jīng)純化的重組蛋白。對經(jīng)純化的目的蛋白進行SDS-PAGE檢測，并用透射電鏡觀察由重組蛋白形成的VLP的狀態(tài)。圖2顯示了，所構(gòu)建的18種重組蛋白的SDS-PAGE結(jié)果，以及由所述重組蛋白形成的病毒樣顆粒的透射電鏡觀察結(jié)果。結(jié)果顯示，所獲得的18種重組蛋白的純度均大于85％，并且均能夠組裝成直徑約30nm病毒樣顆粒。這些結(jié)果表明，本發(fā)明所構(gòu)建的多肽載體具有廣泛的通用性，能夠用于展示各種目的多肽，并且能夠形成VLP。實施例3.病毒樣顆粒的免疫原性的評估在本實施例中，我們驗證了由本發(fā)明的重組蛋白形成的病毒樣顆粒的免疫原性。此類病毒樣顆粒均能夠誘導機體產(chǎn)生特異性結(jié)合靶抗原的抗體。3.1小鼠免疫用實施例2制備的18種病毒樣顆粒分別免疫BALB/C小鼠。免疫方案如下：免疫佐劑為氫氧化鋁佐劑；免疫劑量為3ug/dose；免疫方式為后肢大腿外側(cè)肌肉注射；免疫程序為，初次免疫+2周后的加強免疫，共免疫2次。3.2血清中特異性結(jié)合靶抗原的抗體的滴度的檢測3.2.1反應板的制備反應板的包被抗原是，分別與上述3種目的多肽對應的靶抗原，即：HIV-1的gp120蛋白(購自北京義翹神州生物技術(shù)有限公司，目錄號11233-V08H)，人PD-L1蛋白(購自北京義翹神州生物技術(shù)有限公司)，CHO細胞重組表達的人乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白(HBsAg，購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司)。將3種重組蛋白分別用pH9.6的50mMCB緩沖液(NaHCO3/Na2CO3緩沖液，終濃度為50mM，pH值為9.6)稀釋，終濃度為2μg/mL，以獲得包被液。在96孔酶標板的各個孔中加入100μL的包被液，并在2-8℃包被16-24小時，然后在37℃繼續(xù)包被2小時。然后，用PBST洗滌液(20mMPB7.4，150mMNaCl，0.1％Tween20)洗滌孔1次；隨后每孔加入200μL的封閉液(含20％小牛血清及1％酪蛋白的20mMNa2HPO4/NaH2PO4緩沖液溶液，pH值為7.4)，并在37℃封閉2小時。棄去封閉液。然后，將酶標板干燥，并裝入鋁箔袋，于2-8℃保存?zhèn)溆谩?.2.2血清中Anti-HBsAg抗體滴度的ELISA檢測血清樣品的收集：在0、2、4周采集小鼠眼眶血，分離血清并凍存于-20℃，直至檢測。樣品稀釋：用含20％新生牛血清的PBS溶液將小鼠血清稀釋成1:100、1:500、1:2500、1:12500、1:62500、1:312500、1:1562500共7個稀釋梯度。ELISA檢測：向經(jīng)包被的酶標板的各孔中加入100μL已稀釋的血清樣品，于37℃孵育30分鐘。然后，用PBST洗液(20mMPB7.4，150mMNaCl，0.1％Tween20)將酶標板洗滌5遍。洗滌后，向酶標板的各孔中加入100μLGAM-HRP反應液，于37℃孵育30分鐘。然后，用PBST洗液(20mMPB7.4，150mMNaCl，0.1％Tween20)將酶標板洗滌5遍。洗滌后，向酶標板的各孔中加入50μLTMB顯色劑(由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供)，于37℃孵育15分鐘。孵育完成后，向酶標板的各孔中加入50μL終止液(由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供)，并在酶標儀上讀取各孔的OD450/630值?？贵w滴度的計算：取讀值在0.2-2.0之間的樣品孔進行分析，對樣品的稀釋倍數(shù)與讀值作回歸曲線，計算出讀值等于2倍本底值時的樣品稀釋倍數(shù)，并將該樣品稀釋倍數(shù)作為血清中的特異性抗體的滴度。圖3展示了，用18種重組蛋白形成的病毒樣顆粒免疫BALB/C小鼠后，小鼠血清中抗靶抗原的抗體滴度隨時間的變化情況。圖3A：所使用的目的多肽為SEQIDNO:20，且檢測抗GP120抗體的滴度；圖3B：所使用的目的多肽為SEQIDNO:21，且檢測抗PD-L1抗體的滴度；圖3C：所使用的目的多肽為SEQIDNO:22，且檢測抗HBsAg抗體的滴度。結(jié)果顯示，18種重組蛋白形成的病毒樣顆粒均具有良好的免疫原性，能夠誘導小鼠產(chǎn)生高滴度的特異性結(jié)合靶抗原的抗體。實施例4.展示HBsAg表位(SEQIDNO:22)的病毒樣顆粒的抗HBV治療效果的評估在本實施例中，我們評估了基于不同多肽載體構(gòu)建的、展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的病毒樣顆粒的抗HBV治療效果。4.1小鼠免疫按照實施例1-2描述的方案，制備了基于人HBV的HBcAg構(gòu)建的、展示HBsAg表位(SEQIDNO:22)的2種重組蛋白(即，HBcAg183-SEQ22，其氨基酸序列如SEQIDNO:41所示；和HBcAg149-SEQ22，其氨基酸序列如SEQIDNO:42所示)，并制備了由這2種重組蛋白形成的病毒樣顆粒。隨后，利用HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型來評價實施例2中制備的5種展示HBsAg表位(SEQIDNO:22)的病毒樣顆粒以及本實施例制備的2種病毒樣顆粒的抗HBV治療效果。免疫方案如下：免疫佐劑為氫氧化鋁佐劑；免疫劑量為12μg/dose；免疫方式為后肢大腿外側(cè)肌肉注射；免疫程序為，0、2、3、4、5、6周各免疫一次，共免疫6次。4.2血清抗體滴度與病毒學指標的檢測按實施例3.2中描述的方法進行血清中Anti-HBsAg抗體滴度的檢測，并檢測小鼠血清中的病毒學指標，即，HBVDNA和HBsAg的水平。4.3重組蛋白的治療效果分析檢測結(jié)果示于圖4-6中。圖4展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖4A)和雌性(圖4B)小鼠后，小鼠血清中HBsAg的水平隨時間的變化情況。圖5展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性小鼠后，小鼠血清中HBVDNA的水平隨時間的變化情況。圖6展示了，用展示相同表位肽(SEQIDNO:22)的不同病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖6A)和雌性(圖6B)小鼠后，小鼠血清中抗HBsAg抗體的滴度隨時間的變化情況。結(jié)果顯示，在用VLP進行免疫治療的組中，在免疫后，小鼠血清中均可檢出Anti-HBsAg抗體，并且小鼠血清中的HBVDNA和HBsAg的水平均出現(xiàn)了不同程度的下降。相比之下，對照組小鼠(未用VLP進行免疫)的血清中均沒有產(chǎn)生Anti-HBsAg抗體，并且血清中的HBVDNA和HBsAg的水平均未出現(xiàn)下降。這些結(jié)果顯示，基于蝙蝠乙型肝炎病毒核心蛋白所構(gòu)建的6種多肽載體均可以用于高效展示來自人HBV的HBsAg的表位肽(例如，HBsAg-aa113-135)，其能夠形成VLP，并在宿主體內(nèi)誘導機體產(chǎn)生高滴度的anti-HBsAg抗體，并由此抑制小鼠體內(nèi)的HBVDNA和HBsAg的水平(即，HBVDNA和HBsAg顯著下降)。此外，圖4-6的實驗數(shù)據(jù)還顯示，基于本發(fā)明的多肽載體(例如RBHBcAg149和TBHBcAg153)的病毒樣顆粒具有特別顯著的抗HBV治療效果，其優(yōu)于基于人HBV的HBcAg構(gòu)建的病毒樣顆粒。因此，本實施例的實驗結(jié)果表明：(1)本發(fā)明的多肽載體能夠形成VLP，適合于展示各種目的多肽，并能夠誘導機體產(chǎn)生高滴度的針對目的多肽的抗體；(2)本發(fā)明的多肽載體特別適合于展示人HBV的表位(例如，人HBV的HBsAg的表位)，其能夠誘導機體產(chǎn)生高滴度的針對HBsAg的抗體，清除或抑制體內(nèi)的HBVDNA和HBsAg的水平，并且其效果優(yōu)于基于人HBV的HBcAg構(gòu)建的多肽載體。因此，本發(fā)明的展示人HBV的表位的重組蛋白具有治療HBV感染的潛力，特別適合用于誘發(fā)有效的、特異的、治療性的抗HBV免疫。實施例5.展示來自不同基因型的HBV的HBsAg表位的病毒樣顆粒的制備和評估實施例2-4中所使用的HBsAg表位(SEQIDNO:22)來自HBV基因型B。為了證實本發(fā)明的多肽載體對各種基因型的HBV的廣泛適應性，我們還以RBHBcAg149和TBHBcAg153為示例性多肽載體，構(gòu)建了展示來自不同基因型(基因型A、C和D)的HBV的HBsAg表位的重組蛋白，并評估了所構(gòu)建的重組蛋白組裝成病毒樣顆粒的能力，以及所產(chǎn)生的病毒樣顆粒的免疫原性和抗HBV感染的治療效果。5.1編碼含有目的多肽和多肽載體的重組蛋白的表達質(zhì)粒的構(gòu)建在本實施例中，除了實施例2-4中所使用的HBsAg表位(來自HBV基因型B，SEQIDNO:22)之外，目的多肽還包括來自HBV基因型A、C和D的HBsAg蛋白表位(第113-135位氨基酸)，其分別被命名為：HBsAg-aa113-135-A，HBsAg-aa113-135-C和HBsAg-aa113-135-D，并且其序列(SEQIDNO:60-62)示于表4中。表4：來自HBV基因型A、C和D的HBsAg蛋白的第113-135位氨基酸的序列SEQIDNO名稱序列信息60HBsAg-aa113-135-ASTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFP61HBsAg-aa113-135-CTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFP62HBsAg-aa113-135-DSSTTSTGPCRTCTTPAQGTSMYP直接合成所述3種目的多肽的正義和反義編碼序列(如表5所示)，并進行退火，從而獲得具有粘性末端的、編碼目的多肽的基因片段。表5：3種目的多肽的正義和反義編碼序列如實施例2中所述，將如上制備的3種具有粘性末端的、編碼目的多肽的基因片段分別連接入線性化載體RBHBcAg149和TBHBcAg153中，從而獲得編碼重組蛋白的表達質(zhì)粒(共6種：RBHBcAg149-SEQ60，RBHBcAg149-SEQ61，RBHBcAg149-SEQ62，TBHBcAg153-SEQ60，TBHBcAg153-SEQ61，TBHBcAg153-SEQ62)。這些表達質(zhì)粒所編碼的重組蛋白的氨基酸序列如表6所示。表6：6種重組蛋白的氨基酸序列5.2重組蛋白的表達、純化和組裝如實施例2中所述，使用前一步驟構(gòu)建的6種表達質(zhì)粒，表達和純化了所述表達質(zhì)粒編碼的重組蛋白。隨后，使用透射電鏡觀察由這些重組蛋白形成的VLP的狀態(tài)。圖7顯示了，由所構(gòu)建的6種重組蛋白形成的病毒樣顆粒的透射電鏡觀察結(jié)果。結(jié)果顯示，所獲得的6種重組蛋白均能夠組裝成直徑約30nm病毒樣顆粒。這些結(jié)果表明，本發(fā)明所構(gòu)建的多肽載體具有廣泛的通用性，能夠用于展示來自各種基因型的HBV的表位肽(例如HBsAg蛋白的aa113-135)，并且能夠形成良好的VLP。5.3病毒樣顆粒的免疫原性的評估使用實施例3中描述的方法，評估了如上構(gòu)建的6個重組蛋白以及實施例2中的重組蛋白RBHBcAg149-SEQ22和TBHBcAg153-SEQ22形成的病毒樣顆粒的免疫原性。實驗結(jié)果示于圖8中。圖8展示了，用8種重組蛋白形成的病毒樣顆粒免疫BALB/C小鼠3周后，小鼠血清中抗相應靶多肽(SEQIDNO：60，22，61，62)的抗體滴度；其中，用來自HBV基因型A的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO：60)來檢測用RBHBcAg149-SEQ60和TBHBcAg153-SEQ60免疫的小鼠血清的抗體滴度；用來自HBV基因型B的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:SEQ22)來檢測用RBHBcAg149-SEQ22和TBHBcAg153-SEQ22免疫的小鼠血清的抗體滴度；用來自HBV基因型C的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:61)來檢測用RBHBcAg149-SEQ61和TBHBcAg153-SEQ61免疫的小鼠血清的抗體滴度；并且，使用來自HBV基因型D的HBsAg蛋白的表位肽(SEQIDNO:62)來檢測用RBHBcAg149-SEQ62和TBHBcAg153-SEQ62免疫的小鼠血清的抗體滴度。結(jié)果顯示，8種重組蛋白形成的病毒樣顆粒均具有良好的免疫原性，能夠誘導小鼠產(chǎn)生高滴度的特異性結(jié)合靶表位的抗體。5.4病毒樣顆粒的抗HBV治療效果的評估使用實施例4中描述的方法，評估了4種重組蛋白(SEQIDNO：36，69，70，71)形成的病毒樣顆粒的抗HBV治療效果。實驗結(jié)果示于圖9中。圖9展示了，用如上構(gòu)建的4種重組蛋白(RBHBcAg149-SEQ22，RBHBcAg149-SEQ60，RBHBcAg149-SEQ61，RBHBcAg149-SEQ62；其序列分別SEQIDNO：36，69，70，71)形成的病毒樣顆粒治療HBV轉(zhuǎn)基因雄性(圖9A)和雌性(圖9B)小鼠后，小鼠血清中HBsAg的水平隨時間的變化情況，其中，縱軸：HBsAg的水平(IU/ml)；橫軸：時間(周)。結(jié)果顯示，在用VLP進行免疫治療的小鼠中，在免疫后，小鼠血清中的HBsAg的水平均出現(xiàn)了顯著的下降。這些實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明的多肽載體(例如RBHBcAg149和TBHBcAg153)可用于高效展示來自不同基因型(例如基因型A、B、C和D)的人HBV的HBsAg的表位肽(例如，HBsAg-aa113-135)?；诒景l(fā)明的多肽載體和HBsAg的表位肽所構(gòu)建的重組蛋白能夠形成VLP，并且能夠在宿主體內(nèi)誘導機體產(chǎn)生高滴度的anti-HBsAg抗體，并由此抑制小鼠體內(nèi)的HBsAg的水平(即，HBsAg的水平顯著下降)。這表明，含有本發(fā)明的多肽載體和HBsAg的表位肽的重組蛋白能夠用于預防和治療各種基因型的HBV的感染，從而可用于開發(fā)新的抗HBV疫苗和藥物。盡管本發(fā)明的具體實施方式已經(jīng)得到詳細的描述，但本領域技術(shù)人員將理解：根據(jù)已經(jīng)公開的所有教導，可以對細節(jié)進行各種修改和變動，并且這些改變均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3