本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從積雪草中提取積雪草酸的方法。
背景技術(shù)：
積雪草(Centella asiatica(L.)Urban)為傘形科積雪草樹植物，因其葉子酷似馬蹄狀或半個銅錢，所以又名馬蹄草、連錢草等，民間也有地方稱其為胡薄荷、地錢草等。積雪草在許多國家和地區(qū)的傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用歷史悠久，我國中醫(yī)中藥對積雪草的內(nèi)服和外用已有兩千年歷史，最早被《神農(nóng)本草經(jīng)》一書所收載。據(jù)《本草綱目》記載，積雪草味苦、辛，性寒，無毒，歸肝、脾、腎、胃經(jīng)，其功效為活血、消腫止痛，并有清熱解毒、利尿等。積雪草的化學(xué)成分主要有三萜類、黃酮類、多炔烯類和揮發(fā)油類等。三萜類主要有三萜皂苷類，如積雪草苷、羥基積雪草苷等，和三萜酸類，如積雪草酸、羥基積雪草酸等。積雪草的化學(xué)成分中，三萜酸類物質(zhì)是研究最早，生物學(xué)活性研究最深入的一大類組分。積雪草三萜酸類物質(zhì)主要由積雪草酸和羥基積雪草酸組成，它們屬于烏蘇烷型的五環(huán)三萜酸類，具有治療皮膚創(chuàng)傷，抗炎、抗抑郁、抗腫瘤和修復(fù)神經(jīng)損傷、保護(hù)心腦血管等多種藥理作用。積雪草酸一般先用溶劑法提取，然后采用有機(jī)溶劑萃取，最后過硅膠色譜柱，用石油醚-丙酮體系洗脫。然而上述方法不僅繁瑣，有機(jī)溶劑不易分離，目標(biāo)成分的損耗較大，收率較低，而且提取的積雪草酸的純度也較小。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種從積雪草中提取積雪草酸的方法，該方法提取得到的積雪草酸收率大，純度高。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是提供一種從積雪草中提取積雪草酸的方法，包括以下步驟：
1)將積雪草粉碎，用60～70v％乙醇溶液回流提取，將提取液過濾，濾液回收溶劑，再加40～50℃水溶解，過濾，將濾渣溶于50～60v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入稀土鹽混合，攪勻，得到混合液；
3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，先水洗至無色，然后用體積濃度為20～30v％乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標(biāo)成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草酸。
步驟1)中，乙醇的用量為積雪草重量的10～20倍，回流提取1～3次，每次1～3h。
體積濃度為60～70％的乙醇可充分溶解積雪草中的三萜類物質(zhì)，包括三萜類皂苷和三萜酸類物質(zhì)。由于積雪草皂苷的分子中往往結(jié)合有多數(shù)糖分子，羥基數(shù)目多，能表現(xiàn)出一定的親水性，但是親水性不強(qiáng)，微溶于水中，而三萜酸類極性較小，不能溶于水中。因此采用40～50℃溫水可幫助積雪草總皂苷溶解，積雪草三萜酸類物質(zhì)不溶于熱水中，將濾液過濾，取濾渣溶于乙醇，可達(dá)到去除積雪草總皂苷的目的。
步驟2)中，所述稀土鹽為稀土氯化物、稀土硫酸鹽或稀土硝酸鹽。稀土氯化物可以是氯化鑭、氯化鈰、氯化鐠、氯化釹、氯化釤、氯化銪、氯化釓、氯化鋱、氯化鏑、氯化鈥、氯化鉺、氯化銩、氯化鐿、氯化镥、氯化鈧和氯化釔；稀土硫酸鹽可以是硫酸鑭、硫酸鈰、硫酸鐠、硫酸釹、硫酸釤、硫酸銪、硫酸釓、硫酸鋱、硫酸鏑、硫酸鈥、硫酸鉺、硫酸銩、硫酸鐿、硫酸镥、硫酸鈧和硫酸釔；稀土硝酸鹽可以是硝酸鑭、硝酸鈰、硝酸鐠、硝酸釹、硝酸釤、硝酸銪、硝酸釓、硝酸鋱、硝酸鏑、硝酸鈥、硝酸鉺、硝酸銩、硝酸鐿、硝酸镥、硝酸鈧和硝酸釔。
稀土元素與三萜酸類物質(zhì)上羥基、羧基上的氧原子形成配位鍵和，形成化學(xué)親和力，根據(jù)軟硬酸堿理論，由于稀土是硬酸，積雪草三萜酸類是軟堿，因此，兩者的結(jié)合不是特別穩(wěn)固。
所述稀土鹽的用量為粗提液重量的0.1～0.5％。此時，稀土元素可與三萜酸類物質(zhì)充分配位。
步驟3)中，X-5型號大孔樹脂為非極性樹脂，粒徑為0.3～1.25mm，比表面積為500～600m2/g，平均孔徑為29～30nm。其孔徑遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于三萜酸類物質(zhì)的分子粒徑，孔徑越大，截留的物質(zhì)越少，雜質(zhì)越少。而稀土的配位數(shù)較大，與三萜酸類物質(zhì)進(jìn)行配位鍵和的含氧官能團(tuán)數(shù)目往往達(dá)不到其最高配位數(shù)，因此稀土還會與大孔樹脂中的C產(chǎn)生交聯(lián)，以達(dá)到吸附的效果。
為了保證稀土元素與大孔樹脂的交聯(lián)，混合液的上柱速度越小，效果越好，經(jīng)申請人大量實驗，混合液上柱速度為0.5～0.8BV/h，交聯(lián)效果最好。
由于稀土元素與三萜酸類物質(zhì)的結(jié)合十分不穩(wěn)固，而三萜酸類物質(zhì)與乙醇的親和力極強(qiáng)，采用乙醇溶液將三萜酸類物質(zhì)順利從樹脂柱中洗脫下來。又由于積雪草酸三個位點上有羥基，這三個位點都是配位原子與稀土原子進(jìn)行配位，而羥基積雪草酸比積雪草酸多一個羥基，配位能力更強(qiáng)。因此，在洗脫時，積雪草酸先被洗脫下來。采用體積濃度為20～30％的乙醇可優(yōu)先將積雪草酸洗脫，而不混入羥基積雪草酸。乙醇洗脫速度為2～2.5BV/h為宜。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方法針對目標(biāo)成分進(jìn)行吸附和解吸附，提取的積雪草酸收率高達(dá)95％以上，純度高達(dá)99.5％以上。
具體實施方式
以下具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不作為對本發(fā)明的限定。
以下百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)。
實施例1
1)將積雪草粉碎，加入積雪草總重10倍的60％乙醇溶液回流提取1次，每次1h，將提取液過濾，濾液回收溶劑，再加40℃水溶解，過濾，將濾渣溶于50v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.1％的氯化鑭混合，攪勻，得到混合液；
3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，上柱速度為0.5BV/h，先水洗至無色，然后用體積濃度為20v％乙醇洗脫，洗脫速度為2BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標(biāo)成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草酸。
經(jīng)HLPC分析，積雪草酸的回收率為95.16％以上，純度高達(dá)99.50％以上。
實施例2
1)將積雪草粉碎，加入積雪草總重20倍的70％乙醇溶液回流提取3次，每次3h，將提取液合并，過濾，濾液回收溶劑，再加50℃水溶解，過濾，將濾渣溶于60v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.5％的硫酸鈰混合，攪勻，得到混合液；
3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，上柱速度為0.8BV/h，先水洗至無色，然后用體積濃度為30v％乙醇洗脫，洗脫速度為2.5BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標(biāo)成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草酸。
經(jīng)HLPC分析，積雪草酸的回收率為95.08％以上，純度高達(dá)99.58％以上。
實施例3
1)將積雪草粉碎，加入積雪草總重15倍的65％乙醇溶液回流提取2次，每次2h，將提取液合并，過濾，濾液回收溶劑，再加45℃水溶解，過濾，將濾渣溶于55v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.3％的硝酸鐠混合，攪勻，得到混合液；
3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，上柱速度為0.6BV/h，先水洗至無色，然后用體積濃度為25v％乙醇洗脫，洗脫速度為2.2BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標(biāo)成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草酸。
經(jīng)HLPC分析，積雪草酸的回收率為95.42％以上，純度高達(dá)99.63％以上。
實施例4
1)將積雪草粉碎，加入積雪草總重10倍的70％乙醇溶液回流提取3次，每次1h，將提取液合并，過濾，濾液回收溶劑，再加50℃水溶解，過濾，將濾渣溶于50v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.1％的氯化鉺混合，攪勻，得到混合液；
3)將混合液上X-5型號大孔樹脂柱，上柱速度為0.8BV/h，先水洗至無色，然后用體積濃度為20v％乙醇洗脫，洗脫速度為2.5BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集含目標(biāo)成分的乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到積雪草酸。
經(jīng)HLPC分析，積雪草酸的回收率為95.40％以上，純度高達(dá)99.59％以上。