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一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng)及工藝的制作方法

文檔序號(hào):12456910閱讀:530來源:國(guó)知局
一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng)及工藝的制作方法與工藝

本發(fā)明屬于中草藥微生態(tài)制劑發(fā)酵領(lǐng)域,具體涉及一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng)及工藝。



背景技術(shù):

卵黃抗體(egg yolk antibodies,IgY)是存在于禽類卵黃中的免疫球蛋白,是指產(chǎn)蛋雞受特定抗原免疫后產(chǎn)生并轉(zhuǎn)移和貯存在卵黃中的特異性抗體,從蛋黃中將IgY提取并應(yīng)用在動(dòng)物疾病的防治中已得到廣泛認(rèn)可。由于其具有良好的治療效果、較高的特異性、安全無殘留、不產(chǎn)生耐藥性菌、且制備量大、工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)在抗生素替代品的研究熱潮中脫穎而出。自1898年由Klemperer 首次發(fā)現(xiàn)以來,已廣泛應(yīng)用于畜禽疾病的防治和疾病診斷等方面。美國(guó)食品和藥品管理局 (FDA) 將卵黃抗體列入“公認(rèn)安全使用物質(zhì) (Generally Recognized As Safe, GRAS)”,把卵黃抗體看作藥效營(yíng)養(yǎng)品 (Nutraceuticals)??偟膩碇v,卵黃抗體對(duì)動(dòng)物沒有毒副作用,用卵黃抗體治療動(dòng)物疾病不但避免了血清價(jià)格昂貴、產(chǎn)量低的缺點(diǎn),而且可以避免血清在治療過程中引起的副作用,是一種很有前途的發(fā)明免疫球蛋白制劑。因此,卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預(yù)防的應(yīng)用越來越多。在卵黃抗體提取的過程中會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物,目前大部分都是干燥后作為飼料或者是直接排放而沒有得到有效利用。

中草藥微生態(tài)制劑是中草藥物中加入有益微生物經(jīng)發(fā)酵制成的生物制劑,用于提高畜、禽自身免疫能力的中藥加活菌的微生態(tài)制劑。通過調(diào)整動(dòng)物體內(nèi)腸道微生態(tài)平衡和激發(fā)動(dòng)物自身的非特異性免疫功能,起到有病治病、沒病防病的作用,減少病毒性疾病的發(fā)生,避免了抗生素的濫用,以達(dá)到提高養(yǎng)殖效益,提高食品安全的目的。目前中草藥微生態(tài)制劑己被廣泛應(yīng)用養(yǎng)殖領(lǐng)域中。特別近幾年來,家禽家畜養(yǎng)殖業(yè)中中草藥微生態(tài)制劑已經(jīng)在逐步地取代傳統(tǒng)的添加劑。尤其現(xiàn)在抗生素的使用越來越受限制,腸道保健越來越重要,中草藥微生態(tài)制劑的使用必將越來越廣泛。

如能巧妙地將卵黃抗體提取副產(chǎn)物和中草藥聯(lián)合制成微生態(tài)制劑,無疑將顯著增加卵黃抗體提取副產(chǎn)物的附加價(jià)值,同時(shí)還可以減少環(huán)境污染。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

為克服現(xiàn)有技術(shù)中卵黃抗體提取副產(chǎn)物的利用不足,本發(fā)明的目的旨在提供一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng)及工藝。

為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:

一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng):該生產(chǎn)系統(tǒng)包括打蛋器、卵黃分離儀、卵黃儲(chǔ)罐、動(dòng)力泵I、動(dòng)力泵II、動(dòng)力泵III、動(dòng)力泵IV、動(dòng)力泵V、動(dòng)力泵VI、動(dòng)力泵VII、動(dòng)力泵VIII、罐體I(用于高免卵黃稀釋和消毒)及其外界附屬系統(tǒng)、罐體II(用于卵黃液酸化分層和抗體提?。┘捌渫饨绺綄傧到y(tǒng)、稀釋熟化罐I、稀釋熟化罐II、水解罐I、水解罐II、調(diào)制罐、噴霧干燥機(jī)、篩分粉碎機(jī)、混料罐、分裝機(jī)、發(fā)酵車間、板框過濾機(jī)、發(fā)酵種子罐、上料機(jī);

罐體I底部設(shè)有出口腔I和基架I;罐體I頂部設(shè)有封口法蘭I,封口法蘭I上配合連接有固定法蘭I,固定法蘭I上設(shè)有卵黃液進(jìn)口、溫度表插孔I、罐內(nèi)燈開關(guān)I、攪拌電機(jī)I、蒸餾水進(jìn)口、噴淋液進(jìn)口I和高溫蒸汽進(jìn)口;罐體I內(nèi)設(shè)有與罐內(nèi)燈開關(guān)I配合連接的罐內(nèi)燈I(可耐高溫高壓和腐蝕)、與噴淋液進(jìn)口I配合連接的噴淋頭I、與攪拌電機(jī)I配合連接的攪拌軸I,攪拌軸I下端設(shè)有攪拌槳I;罐體I外壁設(shè)有夾層I,夾層I上下兩端分別設(shè)有夾層進(jìn)口I和夾層出口I,罐體I外壁上同時(shí)設(shè)有內(nèi)窺鏡I,內(nèi)窺鏡I一端位于夾層I內(nèi)、另一端伸出夾層I;

罐體I的外界附屬系統(tǒng)包括罐外夾層控溫裝置I,所述罐外夾層控溫裝置I包括泵I和恒溫水箱I(可控溫:50~90℃),夾層出口I、恒溫水箱I、泵I、夾層進(jìn)口I通過管路依次串連形成一封閉循環(huán)系統(tǒng);

罐體II底部設(shè)有出口腔II和基架II;罐體II頂部設(shè)有封口法蘭II,封口法蘭II上配合連接有固定法蘭II,固定法蘭II上設(shè)有進(jìn)料口、溫度表插孔II、罐內(nèi)燈開關(guān)II、攪拌電機(jī)II、氣路口、噴淋液進(jìn)口II和pH耦合試劑液進(jìn)口;罐體II內(nèi)設(shè)有與罐內(nèi)燈開關(guān)II配合連接的罐內(nèi)燈II(可耐高溫高壓和腐蝕)、與噴淋液進(jìn)口II配合連接的噴淋頭II、與攪拌電機(jī)II配合連接的攪拌軸II,攪拌軸II下端設(shè)有攪拌槳II;罐體II外壁設(shè)有夾層II,夾層II上下兩端分別設(shè)有夾層進(jìn)口II和夾層出口II,罐體II外壁上同時(shí)設(shè)有內(nèi)窺鏡II,內(nèi)窺鏡II一端位于夾層II內(nèi)、另一端伸出夾層II;

罐體II的外界附屬系統(tǒng)包括罐外夾層控溫裝置II、罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置、罐體氣壓動(dòng)力裝置和pH耦合試劑輸出裝置;

所述罐外夾層控溫裝置II包括泵II和恒溫水箱II(可控溫:0~37℃),夾層出口II、恒溫水箱II、泵II、夾層進(jìn)口II通過管路依次串連形成一封閉循環(huán)系統(tǒng);

所述罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置包括超聲波發(fā)射接收器、反射板、信號(hào)轉(zhuǎn)換器、時(shí)間繼電器和電磁閥,超聲波發(fā)射接收器和反射板設(shè)在出口腔II中部相對(duì)兩側(cè),電磁閥位于出口腔II末端,超聲波發(fā)射接收器通過電路依次串連信號(hào)轉(zhuǎn)換器、時(shí)間繼電器和電磁閥,電磁閥則再通過兩支管路分別連接有儲(chǔ)罐I(用于存儲(chǔ)卵黃抗體提取廢棄副產(chǎn)物)和儲(chǔ)罐II(用于存儲(chǔ)卵黃抗體前提取液),電磁閥連接儲(chǔ)罐I的管路上設(shè)有閥門I,電磁閥連接儲(chǔ)罐II的管路上設(shè)有閥門II;

所述罐體氣壓動(dòng)力裝置包括真空泵、穩(wěn)壓器、壓力表、閥門III和空氣過濾器,真空泵通過管路依次串連穩(wěn)壓器、壓力表、閥門III和空氣過濾器至氣路口;

所述pH耦合試劑輸出裝置包括pH傳感器、pH控制器、恒流泵、流量計(jì)I、閥門IV、閥門V、試劑罐I和試劑罐II,pH傳感器設(shè)在罐體II外壁上,pH傳感器一端位于夾層II內(nèi),另一端伸出夾層II后通過電路依次串連pH控制器、恒流泵,恒流泵的輸入端通過兩支管路分別連接試劑罐I(存儲(chǔ)酸化液)和試劑罐II(存儲(chǔ)正辛酸試劑液),試劑罐I連接恒流泵的管路上設(shè)有閥門IV,試劑罐II連接恒流泵的管路上設(shè)有閥門V,恒流泵的輸出端則通過管路再串連流量計(jì)I至pH耦合試劑液進(jìn)口;

打蛋器通過管路依次串連卵黃分離儀、卵黃儲(chǔ)罐、動(dòng)力泵I至罐體I的卵黃液進(jìn)口,罐體I的出口腔I通過管路依次串連止回閥、流量計(jì)II至罐體II的進(jìn)料口;

卵黃分離儀在與卵黃儲(chǔ)罐連接的同時(shí),通過另一支路依次串連動(dòng)力泵II、稀釋熟化罐I、動(dòng)力泵III、水解罐I、動(dòng)力泵IV、調(diào)制罐、動(dòng)力泵V、噴霧干燥機(jī)、篩分粉碎機(jī)、混料罐、分裝機(jī)、發(fā)酵車間;

罐II的儲(chǔ)罐I通過管路依次串連動(dòng)力泵VI、稀釋熟化罐II、動(dòng)力泵VII、板框過濾機(jī)、水解罐II、動(dòng)力泵VIII至調(diào)制罐的頂端;

篩分粉碎機(jī)在與混料罐連接的同時(shí),通過另一支路串連發(fā)酵種子罐至混料罐的頂端,混料罐的頂端同時(shí)與上料機(jī)相連。

較好地,在上述生產(chǎn)系統(tǒng)基礎(chǔ)上還可以增加與卵黃抗體的制備加工相配套的設(shè)施,即所述生產(chǎn)系統(tǒng)增設(shè)有動(dòng)力泵IX、過濾組件、真空冷凍儀、成品儲(chǔ)罐;過濾組件由過濾器I、過濾器II、過濾器III依次串連而成;過濾器I、過濾器II、過濾器III的濾芯孔徑分別為0.65~1μm、0.4~0.45μm、0.2~0.22μm;罐體II的儲(chǔ)罐II通過管路依次串連動(dòng)力泵IX、過濾組件、真空冷凍儀和成品儲(chǔ)罐。

較好地,封口法蘭I與固定法蘭I之間、封口法蘭II與固定法蘭II之間均設(shè)有墊片且通過螺栓孔及螺栓實(shí)現(xiàn)配合連接。

較好地,罐體I為圓筒形罐體,材質(zhì)為不銹鋼,耐溫≥121℃,耐壓≥2個(gè)大氣壓強(qiáng),罐體I的徑高比范圍為1/5~1/3,底部為錐形結(jié)構(gòu),錐角角度為160度;罐體II為圓筒形罐體,材質(zhì)為不銹鋼,耐溫≥121℃,耐壓≥2個(gè)大氣壓強(qiáng),罐體II的徑高比范圍為1/6~1/4,底部為錐形結(jié)構(gòu),錐角角度為120度;出口腔II腔體內(nèi)徑為罐體II內(nèi)徑的1/6~1/5,出口腔II腔體長(zhǎng)度為出口腔II腔體內(nèi)徑的2~2.5倍。

較好地,攪拌槳I和攪拌槳II材質(zhì)均為硬質(zhì)不銹鋼且呈彎月狀。

較好地,攪拌槳I上方的攪拌軸I上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有若干層攪拌槳I',攪拌槳I'材質(zhì)為硬質(zhì)不銹鋼,形狀為長(zhǎng)方形且表面均勻分布有網(wǎng)孔,網(wǎng)孔孔徑為3~8mm;攪拌槳II上方的攪拌軸II上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有若干層攪拌槳II',攪拌槳II'材質(zhì)為硬質(zhì)不銹鋼,形狀為長(zhǎng)方形。更好地,攪拌槳I上方的攪拌軸I上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有兩層攪拌槳I';攪拌槳II上方的攪拌軸II上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有一層攪拌槳II'

較好地,空氣過濾器的濾孔孔徑為0.2~0.22μm。

一種利用所述生產(chǎn)系統(tǒng)制備卵黃抗體的工藝:該工藝包括卵黃抗體提取副產(chǎn)物的制備、卵黃抗體提取副產(chǎn)物的加工、卵黃抗體提取副產(chǎn)物聯(lián)合中草藥固體發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑三部分;其中,所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物的制備包括蛋清液的分離獲取和卵黃液酸化分層物的分離獲取,所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物的加工包括蛋清液的加工和卵黃液酸化分層物的加工;

所述蛋清液的分離獲取包括如下步驟:

S1.1消毒和清洗處理:利用人工將高免雞蛋進(jìn)行外殼消毒和清洗處理;

S1.2打蛋:將高免雞蛋置于打蛋器內(nèi),進(jìn)行打蛋;

S1.3卵黃和蛋清的分離:將高免雞蛋傳輸至卵黃分離儀內(nèi),進(jìn)行卵黃和蛋清的分離,分別獲得卵黃和蛋清液,然后對(duì)卵黃進(jìn)行攪拌獲得卵黃液;

所述卵黃液酸化分層物的分離獲取包括如下步驟:

S2.1卵黃臨時(shí)儲(chǔ)存:將S1.3獲得的卵黃液經(jīng)管路輸送至卵黃儲(chǔ)罐內(nèi)臨時(shí)儲(chǔ)存;

S2.2卵黃稀釋和消毒:

(a)關(guān)閉閥門I、閥門II、閥門III、閥門IV、閥門V和固定法蘭I及固定法蘭II上的所有進(jìn)口,打開高溫蒸汽進(jìn)口,使高溫滅菌蒸汽先進(jìn)入罐體I,后經(jīng)出口腔I、管路由進(jìn)料口進(jìn)入罐體II,進(jìn)而進(jìn)行罐體I、罐體II和管路滅菌工序;

(b)滅菌工序后,待罐體I罐溫下降至60~70℃時(shí)關(guān)閉出口腔I,動(dòng)力泵I將卵黃儲(chǔ)罐內(nèi)臨時(shí)儲(chǔ)存的卵黃液經(jīng)卵黃液進(jìn)口輸進(jìn)罐體I,輸入完畢關(guān)閉卵黃液進(jìn)口;

(c)仍關(guān)閉出口腔I,同時(shí)開啟攪拌電機(jī)I和泵I,攪拌電機(jī)I帶動(dòng)攪拌軸I進(jìn)行攪拌,同步將卵黃液體積3~5倍的弱酸性蒸餾水經(jīng)蒸餾水進(jìn)口輸入罐體I內(nèi),泵I同步將在恒溫水箱I加熱到預(yù)定設(shè)置溫度65~70℃的熱水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口I輸入進(jìn)夾層I,再由夾層出口I經(jīng)管路輸回恒溫水箱I,控制30~40min進(jìn)而達(dá)到卵黃稀釋液的消毒作用;

S2.3卵黃液酸化分層和抗體提?。?/p>

(a)先開啟泵II,泵II將在恒溫水箱II制冷到預(yù)定設(shè)置溫度30~37℃的溫水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口II輸入進(jìn)夾層II,再由夾層出口II經(jīng)管路輸回恒溫水箱II;待罐體II內(nèi)溫度下降到工藝要求溫度30~37℃時(shí)關(guān)閉泵II,打開閥門III和啟動(dòng)真空泵,待罐體II的上端壓力表指針指向負(fù)壓時(shí)打開罐體II的出口腔II,打開卵黃液進(jìn)口,S2.2處理后的卵黃稀釋液便由出口腔I經(jīng)管路通過進(jìn)料口輸入罐體II內(nèi);

(b)關(guān)閉真空泵、閥門III、卵黃液進(jìn)口、出口腔I和進(jìn)料口,開啟攪拌電機(jī)II和恒流泵,打開閥門IV,攪拌軸II勻速轉(zhuǎn)動(dòng),酸化液由試劑罐I經(jīng)管路通過pH耦合試劑液進(jìn)口恒速輸入罐體II內(nèi),待混合液pH值達(dá)到設(shè)定值5.0~5.5時(shí),pH傳感器將信號(hào)傳至pH控制器,由pH控制器經(jīng)電路控制并關(guān)閉恒流泵,關(guān)閉閥門IV和攪拌電機(jī)II;再開啟泵II,泵II將在恒溫水箱II制冷到預(yù)定設(shè)置溫度3~5℃的冷水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口II輸入進(jìn)夾層II,再由夾層出口II經(jīng)管路輸回恒溫水箱II,罐體II內(nèi)溫度下降到工藝所需溫度值3~5℃時(shí)保持工藝既定時(shí)間12~20h;

(c)保持工藝既定時(shí)間結(jié)束時(shí)罐體II內(nèi)的流體已完成分層:下層為沉淀、上層為上清液,啟動(dòng)罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置在線監(jiān)測(cè)到分層的流體密度的差異,然后信號(hào)轉(zhuǎn)換器將根據(jù)監(jiān)測(cè)到的不同信號(hào)轉(zhuǎn)換成不同指令經(jīng)時(shí)間繼電器自動(dòng)控制電磁閥進(jìn)而自動(dòng)控制不同密度流體從出口腔II末端流出罐體II;首先打開閥門I,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置在線監(jiān)測(cè)到下層沉淀部分流體使得控制電磁閥進(jìn)而完成該流體經(jīng)管路進(jìn)入儲(chǔ)罐I進(jìn)行臨時(shí)存儲(chǔ)的工作,待下層沉淀部分流體排出罐體II后電磁閥會(huì)聽從指令及時(shí)關(guān)閉,關(guān)閉閥門I,保證上清液不得排出;

(d)開啟攪拌電機(jī)II和恒流泵,打開閥門V,攪拌軸II勻速轉(zhuǎn)動(dòng),正辛酸試劑液由試劑罐II經(jīng)管路通過pH耦合試劑液進(jìn)口恒速輸入罐體II內(nèi),待罐體II內(nèi)上清液pH值達(dá)到設(shè)定值4.0~4.5時(shí),pH傳感器將信號(hào)傳至pH控制器,由pH控制器經(jīng)電路控制并關(guān)閉恒流泵,關(guān)閉閥門V和攪拌電機(jī)II,按照工藝要求時(shí)間6~10h靜止;待工藝既定靜止時(shí)間結(jié)束時(shí),罐體II內(nèi)的流體再次分層:下層為沉淀、中層為上清液、頂層為懸浮物,啟動(dòng)罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置在線監(jiān)測(cè)到分層的流體密度的差異,然后由信號(hào)轉(zhuǎn)換器將根據(jù)監(jiān)測(cè)到的不同信號(hào)轉(zhuǎn)換成不同指令經(jīng)時(shí)間繼電器自動(dòng)控制電磁閥進(jìn)而自動(dòng)控制不同密度流體從出口腔II末端流出罐體II,下層沉淀部分流體排出罐體II的操作參照S2.3之(c),下層沉淀部分流體排出后及中層上清液排出前先關(guān)閉閥門I并打開閥門II,進(jìn)而保障中層流體順利進(jìn)入儲(chǔ)罐II進(jìn)行臨時(shí)儲(chǔ)存,中層流體即為卵黃抗體提取液,該步驟已完成卵黃抗體前提取工序;同樣頂層懸浮物也根據(jù)相同原理經(jīng)管路進(jìn)入儲(chǔ)罐I進(jìn)行臨時(shí)存儲(chǔ);儲(chǔ)罐I內(nèi)臨時(shí)存儲(chǔ)的物料即為卵黃液酸化分層物;

所述蛋清液的加工包括如下步驟:

S3.1蛋清液稀釋和熟化:將經(jīng)卵黃分離儀獲取的蛋清液由動(dòng)力泵II提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入稀釋熟化罐I內(nèi),再向其內(nèi)加水稀釋蛋清液,蛋清液與水的體積百分比為20~35%;蛋清液稀釋后進(jìn)行升溫熟化,熟化溫度為80~100℃,保持時(shí)間為20~30min;整個(gè)S3.1工序中全程攪拌(速率為80~100 rpm/min);

S3.2水解:將S3.1獲得的蛋清液作為底物I,由動(dòng)力泵III提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入水解罐I內(nèi),向其內(nèi)加入復(fù)合酶I,而后再加1M NaOH溶液升高體系的pH值至7~9,在45~60℃下水解3~5h;其中,所述復(fù)合酶I為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶的混合物,木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶的酶活力分別為80萬~90萬U/g和20萬~30萬U/g,木瓜蛋白酶和和堿性蛋白酶的質(zhì)量比為2:1~4:1;以g/mL計(jì),復(fù)合酶I占底物I的5~8%;整個(gè)S3.2工序中全程攪拌(速率為80~100 rpm/min);

S3.3酶滅活:升高水解罐I罐體溫度達(dá)80~100℃,使復(fù)合酶I活性滅活;

所述卵黃液酸化分層物的加工包括如下步驟:

S4.1卵黃液酸化分層物稀釋和熟化:將儲(chǔ)罐I內(nèi)的卵黃液酸化分層物由動(dòng)力泵VI提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入稀釋熟化罐II內(nèi),再向其內(nèi)加水稀釋卵黃液酸化分層物,以g/mL計(jì),卵黃液酸化分層物占水的20~35%;卵黃液酸化分層物稀釋后進(jìn)行升溫熟化,熟化溫度為80~100℃,保持時(shí)間為20~30min;待熟化過程結(jié)束后降溫至室溫,再加入1M NaOH溶液使體系pH值為中性;整個(gè)S4.1工序中全程攪拌(速率為80~100 rpm/min);

S4.2板框過濾:將S4.1工序獲得的中性熟化液由動(dòng)力泵VII提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入板框過濾機(jī)內(nèi)(輸入壓力達(dá)0.2~0.4Mpa)進(jìn)行連續(xù)性過濾,進(jìn)而獲得固形物;

S4.3水解:將S4.2工序獲得的固形物投料至水解罐II內(nèi),加水和氯化鈣,保證鈣離子在水中濃度達(dá)10~30mM,固形物與水以g/mL計(jì)為20~30%,獲得底物II;加入復(fù)合酶II,而后再加1M NaOH溶液升高體系的pH值至7~8.5,在45~60℃下水解2~3h;其中,所述復(fù)合酶II為木瓜蛋白酶和磷脂酶A的混合物,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的酶活力分別為80萬~90萬U/g和50~60萬U/g,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的質(zhì)量比為1:1~3:1;以g/mL計(jì),復(fù)合酶II占底物II的5~7%;整個(gè)S4.3工序全程攪拌(速率為80~100 rpm/min);

S4.4酶滅活:升高水解罐II罐體溫度達(dá)80~100℃,使復(fù)合酶II活性滅活;

所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物聯(lián)合中草藥固體發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑包括如下步驟:

S5.1營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分的配制:將S3.3和S4.4獲得的兩種水解液全部分別由動(dòng)力泵IV和動(dòng)力泵VIII經(jīng)管路輸入調(diào)制罐內(nèi),然后以g/mL計(jì),分別加入占混合水解液15~20%的紅糖、5~10%的葡萄糖、8~10%的磷酸氫二鉀、0.8~1%的七水硫酸鎂、1~2%的氯化鈉、8~10%的檸檬酸二銨、0.5~1%的氯化銨、3~5%的吐溫-80,然后攪拌(速率90~100 rpm/min)混合并將pH值調(diào)至6.8~7.0;

S5.2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分的后處理:將配制好的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分由動(dòng)力泵V經(jīng)管路輸送至噴霧干燥機(jī)進(jìn)行噴霧干燥,噴霧干燥條件為:進(jìn)口溫度120~160℃,出口溫度60~80℃;然后再將噴霧干燥后獲得的固形物送至篩分粉碎機(jī)進(jìn)行篩分粉碎(粉碎目數(shù)為80~100目);

S5.3菌種培養(yǎng):將S5.2后處理的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分投料進(jìn)入發(fā)酵種子罐內(nèi),加水,接種培養(yǎng)菌,在28~37℃培養(yǎng)24~48h,獲得菌種培養(yǎng)液;其中,以g/mL計(jì),營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分占水的3~6%,培養(yǎng)菌占水的0.25~0.5%;所述培養(yǎng)菌為枯草芽孢桿菌粉、多粘芽孢桿菌粉、地衣芽孢桿菌粉、乳酸菌粉、酵母菌粉和酪酸梭菌粉中的一種或兩種以上的混合,培養(yǎng)菌的總活菌數(shù)≥1.0×1010 cfu/g;

S5.4中草藥及發(fā)酵物料混勻:同時(shí)向混料罐內(nèi)添加S5.3獲得的菌種培養(yǎng)液和S5.2后處理的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分,另外利用上料機(jī)向混料罐內(nèi)添加中草藥,然后攪拌(速率90~100 rpm/min)混合(20~30min);其中,以質(zhì)量百分比計(jì),營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分占中草藥的10~15%;以ml/g計(jì),菌種培養(yǎng)液占中草藥的30~40%;所述中草藥為不會(huì)對(duì)培養(yǎng)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用的一種或多種中草藥復(fù)方;

S5.5發(fā)酵袋分裝和車間發(fā)酵:將混料罐內(nèi)混勻的物料送至分裝機(jī)分裝入發(fā)酵袋,所述發(fā)酵袋為頂部設(shè)置有氣體單向閥的透明塑料袋;將已分裝結(jié)束的發(fā)酵袋直接運(yùn)輸至發(fā)酵車間,在發(fā)酵車間內(nèi)將發(fā)酵袋排列堆放,要求發(fā)酵車間內(nèi)30~37℃恒溫和避光,發(fā)酵15~30d,發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵袋內(nèi)容物即為微生態(tài)制劑。

較好地,在上述工藝步驟基礎(chǔ)上,S2.3卵黃液酸化分層和抗體提取工序在步驟(d)之后包括步驟(e)兩罐體清洗和滅菌:兩罐體清洗時(shí),打開噴淋液進(jìn)口I和噴淋液進(jìn)口II,將潔凈水經(jīng)噴淋頭I和噴淋頭II進(jìn)入兩罐體進(jìn)行清洗,待兩罐體清洗結(jié)束時(shí),開啟罐體氣壓動(dòng)力裝置將罐體I內(nèi)的洗滌水輸入罐體II內(nèi),再開啟電磁閥將罐體II內(nèi)洗滌水經(jīng)管路輸入儲(chǔ)罐I進(jìn)行排出;待兩罐體清洗結(jié)束后進(jìn)行高溫蒸汽滅菌,操作方法同S2.2之(a);整個(gè)制備工藝還可以包括卵黃抗體的制備,步驟如下:

S6.1過濾:動(dòng)力泵IX將儲(chǔ)罐II內(nèi)臨時(shí)儲(chǔ)存的中層流體即卵黃抗體提取液經(jīng)管路輸送至過濾組件內(nèi)依次通過過濾器I、過濾器II、過濾器III實(shí)現(xiàn)粗過慮和精過濾;

S6.2真空冷凍干燥:將S6.1制取的濾液經(jīng)管路輸送進(jìn)入真空冷凍儀內(nèi),并加入凍干保護(hù)劑,進(jìn)行真空冷凍干燥;其中,所述凍干保護(hù)劑為葡萄糖,以g/mL計(jì),葡萄糖占濾液的3~5%;

S6.3卵黃抗體成品儲(chǔ)存:真空冷凍干燥后制得成品,成品臨時(shí)輸送到成品儲(chǔ)罐內(nèi)儲(chǔ)存。

較好地,弱酸性蒸餾水為pH值為4.0~6.0的無菌蒸餾水;酸化液為1mol/L鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)的無菌純化水,酸化液終pH值為3.2~4.0;正辛酸試劑液為體積百分比濃度0.35~0.39%的正辛酸水溶液;該正辛酸水溶液可由正辛酸溶解在40~50℃的溫水中制備而成。

辛酸在水中溶解度極低(0.062g/L),因此在水溶性物質(zhì)中辛酸殘留量極微。在醫(yī)學(xué)工業(yè)中辛酸已被廣泛應(yīng)用,對(duì)生物不具毒副作用。辛酸法是目前廣泛應(yīng)用的IgY提取方法。辛酸法的原理是利用IgY的特殊化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的:在低離子強(qiáng)度、pH值酸性條件下,辛酸可與絕大多數(shù)的卵黃蛋白發(fā)生反應(yīng),形成不可逆的沉淀,只有IgY不發(fā)生反應(yīng),留在上清液中,離心除去沉淀,收集上清液,再進(jìn)行后續(xù)的抗體純化和制備。

本發(fā)明生產(chǎn)系統(tǒng)就是依據(jù)辛酸法制取卵黃抗體的工藝要求,針對(duì)其抗體前提取過程的特點(diǎn)而設(shè)計(jì),其中涉及的卵黃抗體提取裝置部分完全滿足產(chǎn)業(yè)化進(jìn)行卵黃抗體前提取工藝中的事項(xiàng)要求,適于鴨病毒性肝炎、黃病毒病、新城疫、法式囊病等卵黃抗體的提??;此外,針對(duì)辛酸法卵黃抗體提取過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物,在本發(fā)明生產(chǎn)系統(tǒng)中也到了合理設(shè)計(jì),副產(chǎn)物得到巧妙到利用。

有益效果:

1、本發(fā)明依據(jù)中草藥固體發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑原理和微生物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的原理進(jìn)行設(shè)計(jì),巧妙地將卵黃抗體提取副產(chǎn)物應(yīng)用到中草藥微生態(tài)制劑發(fā)酵中,實(shí)現(xiàn)了卵黃抗體提取副產(chǎn)物與固體發(fā)酵工藝的有機(jī)結(jié)合,充分綜合利用卵黃抗體提取副產(chǎn)物,變廢為寶,大大提升了蛋類產(chǎn)品的開發(fā)價(jià)值,節(jié)約工業(yè)化生產(chǎn)成本,降低環(huán)境污染,增加就業(yè)崗位。從微生物營(yíng)養(yǎng)學(xué)考究,本發(fā)明工藝?yán)寐腰S抗體提取副產(chǎn)物所制備的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分可完全滿足規(guī)?;胁菟幑腆w發(fā)酵中的益生菌的營(yíng)養(yǎng)需求,發(fā)酵成品中的益生菌檢測(cè)指標(biāo)均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求;

2、本發(fā)明生產(chǎn)系統(tǒng)中抗體提取裝置部分還具有如下優(yōu)點(diǎn):

①具有結(jié)構(gòu)精密、堅(jiān)固耐用、易于規(guī)模流程標(biāo)準(zhǔn)化操作使用、可連續(xù)化操作、顯著提高卵黃抗體前提取效率,降低勞動(dòng)強(qiáng)度的特點(diǎn);

②還具有密封性高、降低外界微生物或雜質(zhì)污染、保證產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)點(diǎn),同時(shí)該裝置的特性(卵黃自動(dòng)稀釋消毒、流體無菌氣壓傳輸、流體密度在線監(jiān)測(cè)、pH耦合試劑輸出)極利于卵黃抗體產(chǎn)業(yè)化運(yùn)營(yíng),利于卵黃抗體提取生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化;

③在罐體II中,集同一罐體在位冷卻、在位滅菌、辛酸自動(dòng)添加、自動(dòng)控溫、混合攪拌、自動(dòng)分層出液等多功能于一體,提高抗體提取率,后期抗體純化過程中抗體損失少,促進(jìn)卵黃抗體提取生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化,并減少不同規(guī)格罐體的配置所造成的不同批次的產(chǎn)品品質(zhì)影響。

附圖說明

圖1:本發(fā)明生產(chǎn)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖;

圖2:罐體I及其外界附屬系統(tǒng)、罐體II及其外界附屬系統(tǒng)之間連接關(guān)系的結(jié)構(gòu)示意圖;

圖3:固定法蘭I的俯視結(jié)構(gòu)示意圖;

圖4:固定法蘭II的俯視結(jié)構(gòu)示意圖;

附圖標(biāo)記說明:1-罐體I;1'-罐體II;2-出口腔I;2'-出口腔II;3-基架I;3'-基架II;4-封口法蘭I;4'-封口法蘭II;5-固定法蘭I;5'-固定法蘭II;6-墊片I;6'-墊片II;7-螺栓孔I;7'-螺栓孔II;8-螺栓I;8'-螺栓II;9-卵黃液進(jìn)口;101-溫度表插孔I;101'-溫度表插孔II;102-溫度表I;102'-溫度表II;11-罐內(nèi)燈開關(guān)I;11'-罐內(nèi)燈開關(guān)II;12-攪拌電機(jī)I;12'-攪拌電機(jī)II;13-蒸餾水進(jìn)口;14-噴淋液進(jìn)口I;14'-噴淋液進(jìn)口II;15-高溫蒸汽進(jìn)口;16-罐內(nèi)燈I;16'-罐內(nèi)燈II;17-噴淋頭I;17'-噴淋頭II;18-攪拌軸I;18'-攪拌軸II;19-攪拌槳I;19'-攪拌槳II;20-攪拌槳I';20'-攪拌槳II';21-夾層I;21'-夾層II;22-夾層進(jìn)口I;22'-夾層進(jìn)口II;23-夾層出口I;23'-夾層出口II;24-內(nèi)窺鏡I;24'-內(nèi)窺鏡II;25-泵I;25'-泵II;26-恒溫水箱I;26'-恒溫水箱II;27-進(jìn)料口;28-氣路口;29-pH耦合試劑液進(jìn)口;30-超聲波發(fā)射接收器;31-反射板;32-信號(hào)轉(zhuǎn)換器;33-時(shí)間繼電器;34-電磁閥;35-儲(chǔ)罐I;35'-儲(chǔ)罐II;361-閥門I;362-閥門II;363-閥門III;364-閥門IV;365-閥門V;37-真空泵;38-穩(wěn)壓器;39-壓力表;40-空氣過濾器;41-pH傳感器;42-pH控制器;43-恒流泵;44-流量計(jì)I;44'-流量計(jì)II;45-試劑罐I;45'-試劑罐II;46-止回閥;47-打蛋器;48-卵黃分離儀;49-卵黃儲(chǔ)罐;501-動(dòng)力泵I;502-動(dòng)力泵II;503-動(dòng)力泵III;504-動(dòng)力泵IV;505-動(dòng)力泵V;506-動(dòng)力泵VI;507-動(dòng)力泵VII;508-動(dòng)力泵VIII;509-動(dòng)力泵IX;51-過濾組件;52-真空冷凍儀;53-成品儲(chǔ)罐;54-稀釋熟化罐I;54'-稀釋熟化罐II;55-水解罐I;55'-水解罐II;56-調(diào)制罐;57-噴霧干燥機(jī);58-篩分粉碎機(jī);59-混料罐;60-分裝機(jī);61-發(fā)酵車間;62-板框過濾機(jī);63-發(fā)酵種子罐;64-上料機(jī)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)一步詳細(xì)說明:

如圖1~4所示,一種中草藥聯(lián)合卵黃抗體提取副產(chǎn)物發(fā)酵制備微生態(tài)制劑的生產(chǎn)系統(tǒng):該生產(chǎn)系統(tǒng)包括打蛋器47、卵黃分離儀48、卵黃儲(chǔ)罐49、動(dòng)力泵I 501、動(dòng)力泵II 502、動(dòng)力泵III 503、動(dòng)力泵IV 504、動(dòng)力泵V 505、動(dòng)力泵VI 506、動(dòng)力泵VII 507、動(dòng)力泵VIII 508、動(dòng)力泵IX 509、罐體I 1(用于高免卵黃稀釋和消毒)及其外界附屬系統(tǒng)、罐體II 1'(用于卵黃液酸化分層和抗體提?。┘捌渫饨绺綄傧到y(tǒng)、過濾組件51、真空冷凍儀52、成品儲(chǔ)罐53、稀釋熟化罐I 54、稀釋熟化罐II 54'、水解罐I 55、水解罐II 55'、調(diào)制罐56、噴霧干燥機(jī)57、篩分粉碎機(jī)58、混料罐59、分裝機(jī)60、發(fā)酵車間61、板框過濾機(jī)62、發(fā)酵種子罐63、上料機(jī)64;罐體I 1為圓筒形罐體,材質(zhì)為不銹鋼,耐溫≥121℃,耐壓≥2個(gè)大氣壓強(qiáng),罐體I 1的徑高比范圍為1/4,底部為錐形結(jié)構(gòu),錐角角度為160度;罐體II 1'為圓筒形罐體,材質(zhì)為不銹鋼,耐溫≥121℃,耐壓≥2個(gè)大氣壓強(qiáng),罐體II 1'的徑高比范圍為1/4,底部為錐形結(jié)構(gòu),錐角角度為120度;

罐體I 1底部設(shè)有出口腔I 2和基架I 3;罐體I 1頂部設(shè)有封口法蘭I 4,封口法蘭I 4上設(shè)有固定法蘭I 5,封口法蘭I 4與固定法蘭I 5之間設(shè)有墊片I 6,封口法蘭I 4與固定法蘭I 5上均布有四個(gè)螺栓孔I 7,兩者之間通過螺栓I 8實(shí)現(xiàn)配合連接,固定法蘭I 5上設(shè)有卵黃液進(jìn)口9、溫度表插孔I 101(內(nèi)插設(shè)有溫度表I 102)、罐內(nèi)燈開關(guān)I 11、攪拌電機(jī)I 12、蒸餾水進(jìn)口13、噴淋液進(jìn)口I 14和高溫蒸汽進(jìn)口15;罐體I 1內(nèi)設(shè)有與罐內(nèi)燈開關(guān)I 11配合連接的罐內(nèi)燈I 16(可耐高溫高壓和腐蝕)、與噴淋液進(jìn)口I 14配合連接的噴淋頭I 17、與攪拌電機(jī)I 12配合連接的攪拌軸I 18,攪拌軸I 18下端設(shè)有呈彎月狀的硬質(zhì)不銹鋼攪拌槳I 19,攪拌槳I 19上方的攪拌軸I 18上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有兩層攪拌槳I' 20,攪拌槳I' 20材質(zhì)為硬質(zhì)不銹鋼,形狀為長(zhǎng)方形且表面均勻分布有網(wǎng)孔,網(wǎng)孔孔徑為5mm;罐體I 1外壁設(shè)有夾層I 21,夾層I 21上下兩端分別設(shè)有夾層進(jìn)口I 22和夾層出口I 23,罐體I 1外壁上同時(shí)設(shè)有內(nèi)窺鏡I 24,內(nèi)窺鏡I 24一端位于夾層I 21內(nèi)、另一端伸出夾層I 21;

罐體I 1的外界附屬系統(tǒng)包括罐外夾層控溫裝置I,所述罐外夾層控溫裝置I包括泵I 25和恒溫水箱I 26(可控溫:50~90℃),夾層出口I 23、恒溫水箱I 26、泵I 25、夾層進(jìn)口I 22通過管路依次串連形成一封閉循環(huán)系統(tǒng);

罐體II 1'底部設(shè)有出口腔II 2'和基架II 3',出口腔II 2'腔體內(nèi)徑為罐體II 1'內(nèi)徑的1/5,出口腔II 2'腔體長(zhǎng)度為出口腔II 2'腔體內(nèi)徑的2倍;罐體II 1'頂部設(shè)有封口法蘭II 4',封口法蘭II 4'上設(shè)有固定法蘭II 5',封口法蘭II 4'與固定法蘭II 5'之間設(shè)有墊片II 6',封口法蘭II 4'與固定法蘭II 5'上均布有四個(gè)螺栓孔II 7',兩者之間通過螺栓II 8'實(shí)現(xiàn)配合連接,固定法蘭II 5'上設(shè)有進(jìn)料口27、溫度表插孔II 101'(內(nèi)插設(shè)有溫度表I 102')、罐內(nèi)燈開關(guān)II 11'、攪拌電機(jī)II 12'、氣路口28、噴淋液進(jìn)口II 14'和pH耦合試劑液進(jìn)口29;罐體II 1'內(nèi)設(shè)有與罐內(nèi)燈開關(guān)II 11'配合連接的罐內(nèi)燈II 16'(可耐高溫高壓和腐蝕)、與噴淋液進(jìn)口II 14'配合連接的噴淋頭II 17'、與攪拌電機(jī)II 12'配合連接的攪拌軸II 18',攪拌軸II 18'下端設(shè)有呈彎月狀的硬質(zhì)不銹鋼攪拌槳II 19',攪拌槳II 19'上方的攪拌軸II 18'上通過不銹鋼實(shí)心支桿對(duì)稱連接有一層攪拌槳II' 20',攪拌槳II' 20'材質(zhì)為硬質(zhì)不銹鋼,形狀為長(zhǎng)方形;罐體II 1'外壁設(shè)有夾層II 21',夾層II 21'上下兩端分別設(shè)有夾層進(jìn)口II 22'和夾層出口II 23',罐體II 1'外壁上同時(shí)設(shè)有內(nèi)窺鏡II 24',內(nèi)窺鏡II 24'一端位于夾層II 21'內(nèi)、另一端伸出夾層II 21';

罐體II 1'的外界附屬系統(tǒng)包括罐外夾層控溫裝置II、罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置、罐體氣壓動(dòng)力裝置和pH耦合試劑輸出裝置;

所述罐外夾層控溫裝置II包括泵II 25'和恒溫水箱II 26'(可控溫:0~37℃),夾層出口II 23'、恒溫水箱II 26'、泵II 25'、夾層進(jìn)口II 22'通過管路依次串連形成一封閉循環(huán)系統(tǒng);

所述罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置包括超聲波發(fā)射接收器30、反射板31、信號(hào)轉(zhuǎn)換器32、時(shí)間繼電器33和電磁閥34,超聲波發(fā)射接收器30和反射板31設(shè)在出口腔II 2'中部相對(duì)兩側(cè),電磁閥34位于出口腔II 2'末端,超聲波發(fā)射接收器30通過信號(hào)線依次串連信號(hào)轉(zhuǎn)換器32、時(shí)間繼電器33和電磁閥34,電磁閥34則再通過兩支管路分別連接有儲(chǔ)罐I 35(用于存儲(chǔ)卵黃抗體提取廢棄副產(chǎn)物)和儲(chǔ)罐II 35'(用于存儲(chǔ)卵黃抗體前提取液),電磁閥34連接儲(chǔ)罐I 35的管路上設(shè)有閥門I 361,電磁閥34連接儲(chǔ)罐II 35'的管路上設(shè)有閥門II 362;

所述罐體氣壓動(dòng)力裝置包括真空泵37、穩(wěn)壓器38、壓力表39、閥門III 363和空氣過濾器40(濾孔孔徑為0.2μm),真空泵37通過管路依次串連穩(wěn)壓器38、壓力表39、閥門III 363和空氣過濾器40至氣路口28;

所述pH耦合試劑輸出裝置包括pH傳感器41、pH控制器42、恒流泵43、流量計(jì)I 44、閥門IV 364、閥門V 365、試劑罐I 45和試劑罐II 45',pH傳感器41設(shè)在罐體II 1'外壁上,pH傳感器41一端位于夾層II 21'內(nèi),另一端伸出夾層II 21'后通過信號(hào)線依次串連pH控制器42、恒流泵43,恒流泵43的輸入端通過兩支管路分別連接試劑罐I 45(存儲(chǔ)酸化液)和試劑罐II 45'(存儲(chǔ)正辛酸試劑液),試劑罐I 45連接恒流泵43的管路上設(shè)有閥門IV 364,試劑罐II 45'連接恒流泵43的管路上設(shè)有閥門V 365,恒流泵43的輸出端則通過管路再串連流量計(jì)I 44至pH耦合試劑液進(jìn)口29;

過濾組件51由過濾器I、過濾器II、過濾器III依次串連而成,過濾器I、過濾器II、過濾器III均為市購常規(guī)圓筒過濾器;過濾器I、過濾器II、過濾器IIII的過濾孔徑分別為0.65μm、0.45μm、0.22μm;

打蛋器47通過管路依次串連卵黃分離儀48、卵黃儲(chǔ)罐49、動(dòng)力泵I 501至罐體I 1的卵黃液進(jìn)口9,罐體I 1的出口腔I 2通過管路依次串連止回閥46、流量計(jì)II 44'至罐體II 1'的進(jìn)料口27;

卵黃分離儀48在與卵黃儲(chǔ)罐49連接的同時(shí),通過另一支路依次串連動(dòng)力泵II 502、稀釋熟化罐I 54、動(dòng)力泵III 503、水解罐I 55、動(dòng)力泵IV 504、調(diào)制罐56、動(dòng)力泵V 505、噴霧干燥機(jī)57、篩分粉碎機(jī)58、混料罐59、分裝機(jī)60、發(fā)酵車間61;

罐II 1'的儲(chǔ)罐I 35通過管路依次串連動(dòng)力泵VI 506、稀釋熟化罐II 54'、動(dòng)力泵VII 507、板框過濾機(jī)62、水解罐II 55'、動(dòng)力泵VIII 508至調(diào)制罐56的頂端;罐體II 1'的儲(chǔ)罐II 35'再通過管路依次串連動(dòng)力泵IX 509、過濾組件51、真空冷凍儀52和成品儲(chǔ)罐53;

篩分粉碎機(jī)58在與混料罐59連接的同時(shí),通過另一支路串連發(fā)酵種子罐63至混料罐59的頂端,混料罐59的頂端同時(shí)與上料機(jī)64相連。

一種利用所述生產(chǎn)系統(tǒng)制備卵黃抗體的工藝,該工藝包括卵黃抗體提取副產(chǎn)物的制備、卵黃抗體提取副產(chǎn)物的加工、卵黃抗體提取副產(chǎn)物聯(lián)合中草藥固體發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑三部分;其中,所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物的制備包括蛋清液的分離獲取和卵黃液酸化分層物的分離獲取,所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物的加工包括蛋清液的加工和卵黃液酸化分層物的加工;

所述蛋清液的分離獲取包括如下步驟:

S1.1消毒和清洗處理:打蛋前利用人工將破損和有異味的雞蛋進(jìn)行挑選剔除,然后首先利用自來水將預(yù)處理的高免雞蛋進(jìn)行初洗,清除蛋殼上的雜質(zhì),再利用質(zhì)量百分比濃度3%的雙氧水進(jìn)行蛋殼消毒處理,最后使用純化水做蛋殼的清洗工作;

S1.2打蛋:將清洗后的高免雞蛋置于打蛋器47進(jìn)行打蛋,打蛋器47為市購常規(guī)打蛋設(shè)備,該工序中打蛋速率控制在15枚/分鐘;

S1.3卵黃分離:將打蛋工序后的高免雞蛋傳輸至卵黃分離儀48內(nèi),進(jìn)行卵黃和蛋清的分離,分別獲得卵黃和蛋清液,然后對(duì)卵黃進(jìn)行攪拌獲得卵黃液;卵黃分離儀48為市購常規(guī)蛋清蛋黃分離裝置,操作環(huán)境潔凈度為十萬級(jí);

所述卵黃液酸化分層物的分離獲取包括如下步驟:

S2.1卵黃臨時(shí)儲(chǔ)存:將S1.3獲得的卵黃液經(jīng)管路輸送至卵黃儲(chǔ)罐49內(nèi)臨時(shí)儲(chǔ)存,卵黃儲(chǔ)罐49內(nèi)溫度為20℃;

S2.2卵黃稀釋和消毒:

(a)關(guān)閉閥門I 361、閥門II 362、閥門III 363、閥門IV 364、閥門V 365和固定法蘭I 5及固定法蘭II 5'上的所有進(jìn)口,打開高溫蒸汽進(jìn)口15,使高溫滅菌蒸汽先進(jìn)入罐體I 1,后經(jīng)出口腔I 2、管路由進(jìn)料口27進(jìn)入罐體II 1',進(jìn)而進(jìn)行罐體I 1、罐體II 1'和管路滅菌工序;

(b)滅菌工序后,待罐體I 1罐溫下降至60℃時(shí)關(guān)閉出口腔I 2,由罐體I 1前工序中的動(dòng)力泵I 501提供動(dòng)力將卵黃液經(jīng)卵黃液進(jìn)口9輸進(jìn)(輸送流速為800mL/min)罐體I 1,輸入完畢關(guān)閉卵黃液進(jìn)口9;

(c)仍關(guān)閉出口腔I 2,同時(shí)開啟攪拌電機(jī)I 12和泵I 25,攪拌電機(jī)I 12帶動(dòng)攪拌軸I 18進(jìn)行攪拌(轉(zhuǎn)速為80 rpm/min),同步將一定體積(卵黃液體積的4倍)的弱酸性蒸餾水(pH值為4.0的無菌蒸餾水)經(jīng)蒸餾水進(jìn)口13輸入罐體I 1內(nèi),攪拌速率由慢至快(90 rpm/min→110 rpm/min)設(shè)定轉(zhuǎn)速,泵I 25同步將在恒溫水箱I 26加熱到預(yù)定設(shè)置溫度(70℃)的熱水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口I 22輸入進(jìn)夾層I 21,再由夾層出口I 23經(jīng)管路輸回恒溫水箱I 26,控制一定時(shí)間(35min)進(jìn)而達(dá)到卵黃稀釋液的消毒作用;

S2.3卵黃液酸化分層和抗體提取:

(a)先開啟泵II 25',泵II 25'將在恒溫水箱II 26'制冷到預(yù)定設(shè)置溫度(35℃)的溫水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口II 22'輸入進(jìn)夾層II 21',再由夾層出口II 23'經(jīng)管路輸回恒溫水箱II 26';待罐體II 1'內(nèi)溫度下降到工藝要求(35℃)時(shí)關(guān)閉泵II 25',打開閥門III 363和啟動(dòng)真空泵37,待罐體II 1'的上端壓力表39指針指向高負(fù)壓時(shí)打開罐體II 1'的出口腔II 2',稍打開卵黃液進(jìn)口9,S2.2處理后的卵黃稀釋液便由出口腔I 2經(jīng)管路通過進(jìn)料口27輸入罐體II 2'內(nèi);

(b)關(guān)閉真空泵37、閥門III 363、卵黃液進(jìn)口9、出口腔I 2和進(jìn)料口27,開啟攪拌電機(jī)II 12'和恒流泵43,打開閥門IV 364,攪拌軸II 18'勻速轉(zhuǎn)動(dòng)(轉(zhuǎn)速為100 rpm/min),酸化液(1mol/L鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)的無菌純化水,酸化液終pH值為(4.0)由試劑罐I 45經(jīng)管路通過pH耦合試劑液進(jìn)口29恒速輸入罐體II 1'內(nèi),待混合液pH值達(dá)到設(shè)定值(5.0)時(shí),pH傳感器41將信號(hào)傳至pH控制器42,由pH控制器42經(jīng)信號(hào)線控制并關(guān)閉恒流泵43,關(guān)閉閥門IV 364和攪拌電機(jī)II 12';再開啟泵II 25',泵II 25'將在恒溫水箱II 26'制冷到預(yù)定設(shè)置溫度(4℃)的冷水經(jīng)管路由夾層進(jìn)口II 22'輸入進(jìn)夾層II 21',再由夾層出口II 23'經(jīng)管路輸回恒溫水箱II 26',不斷調(diào)節(jié)泵II 25'使罐體II 1'內(nèi)溫度繼續(xù)下降到工藝所需溫度值(4℃)并保持工藝既定時(shí)間(20h);

(c)保持工藝既定時(shí)間結(jié)束時(shí)罐體II 1'內(nèi)的流體已完成分層(下層為沉淀、上層為上清液),啟動(dòng)罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置可在線監(jiān)測(cè)到分層的流體密度的差異,然后信號(hào)轉(zhuǎn)換器32將根據(jù)監(jiān)測(cè)到的不同信號(hào)轉(zhuǎn)換成不同指令經(jīng)時(shí)間繼電器33自動(dòng)控制電磁閥34進(jìn)而自動(dòng)控制不同密度流體從出口腔II 2'末端流出罐體II 1';首先打開閥門I 361,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置可在線監(jiān)測(cè)到下層沉淀部分流體使得控制電磁閥34進(jìn)而完成該流體經(jīng)管路進(jìn)入儲(chǔ)罐I 35進(jìn)行臨時(shí)存儲(chǔ)的工作,待下層沉淀部分流體排出罐體II 1'后電磁閥34會(huì)聽從指令及時(shí)關(guān)閉,關(guān)閉閥門I 361,保證上清液不得排出;

(d)開啟攪拌電機(jī)II 12'和恒流泵43,打開閥門V 365,攪拌軸II 18'勻速轉(zhuǎn)動(dòng)(轉(zhuǎn)速100 rpm/min),正辛酸試劑液(正辛酸水溶液,體積濃度0.35%)由試劑罐II 45'經(jīng)管路通過pH耦合試劑液進(jìn)口29恒速輸入罐體II 1'內(nèi),待罐體II 1'內(nèi)上清液pH值達(dá)到設(shè)定值(4.0)時(shí),pH傳感器41將信號(hào)傳至pH控制器42,由pH控制器42經(jīng)信號(hào)線控制并關(guān)閉恒流泵43,關(guān)閉閥門V 365和攪拌電機(jī)II 12',按照工藝要求時(shí)間(10h)靜止;待工藝既定靜止時(shí)間結(jié)束時(shí),罐體II 1'內(nèi)的流體再次分層(下層為沉淀、中層為上清液、頂層為懸浮物),啟動(dòng)罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置,罐內(nèi)流體密度超聲監(jiān)測(cè)裝置可在線監(jiān)測(cè)到分層的流體密度的差異,然后由信號(hào)轉(zhuǎn)換器32將根據(jù)監(jiān)測(cè)到的不同信號(hào)轉(zhuǎn)換成不同指令經(jīng)時(shí)間繼電器33自動(dòng)控制電磁閥34進(jìn)而自動(dòng)控制不同密度流體從出口腔II 2'末端流出罐體II 1',下層沉淀部分流體排出罐體II 1'的操作參照S2.3之(c),下層沉淀部分流體排出后及中層上清液排出前先關(guān)閉閥門I 361并打開閥門II 362,進(jìn)而保障中層流體順利進(jìn)入儲(chǔ)罐II 35'進(jìn)行臨時(shí)儲(chǔ)存(該步驟已完成卵黃抗體前提取工序);同樣頂層懸浮物也可根據(jù)相同原理經(jīng)管路進(jìn)入儲(chǔ)罐I 35進(jìn)行臨時(shí)存儲(chǔ);;儲(chǔ)罐I內(nèi)臨時(shí)存儲(chǔ)的物料即為卵黃液酸化分層物;

(e)兩罐體清洗和滅菌:兩罐體清洗時(shí),打開噴淋液進(jìn)口I 14和噴淋液進(jìn)口II 14',將潔凈水經(jīng)噴淋頭I 17和噴淋頭II 17'進(jìn)入兩罐體進(jìn)行清洗,待兩罐體清洗結(jié)束時(shí),開啟罐體氣壓動(dòng)力裝置將罐體I 1內(nèi)的洗滌水輸入罐體II 1'內(nèi),再開啟電磁閥34將罐體II 1'內(nèi)洗滌水經(jīng)管路輸入儲(chǔ)罐I 35進(jìn)行排出;待兩罐體清洗結(jié)束后進(jìn)行高溫蒸汽滅菌,操作方法同S2.2之(a);

所述蛋清液的加工包括如下步驟:

S3.1蛋清液稀釋和熟化:將經(jīng)卵黃分離儀48獲取的蛋清液由動(dòng)力泵II 502提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入稀釋熟化罐I 54內(nèi),再向其內(nèi)加水稀釋蛋清液,蛋清液與水的體積百分比為20%;蛋清液稀釋后進(jìn)行升溫熟化,熟化溫度為80℃,保持時(shí)間為30min;整個(gè)S3.1工序中全程攪拌(速率為90 rpm/min);

S3.2水解:將S3.1獲得的蛋清液作為底物I,由動(dòng)力泵III 503提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入水解罐I 55內(nèi),向其內(nèi)加入復(fù)合酶I,而后再加1M NaOH溶液升高體系的pH值至8,在50℃下水解4h;其中,所述復(fù)合酶I為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶的混合物,木瓜蛋白酶(市購)和堿性蛋白酶(市購)的酶活力分別為80萬U/g和20萬U/g,木瓜蛋白酶和和堿性蛋白酶的質(zhì)量比為3:1;以g/mL計(jì),復(fù)合酶I占底物I的6%;整個(gè)S3.2工序中全程攪拌(速率為90 rpm/min);

S3.3酶滅活:升高水解罐I 55罐體溫度達(dá)100℃,使復(fù)合酶I活性滅活;

所述卵黃液酸化分層物的加工包括如下步驟:

S4.1卵黃液酸化分層物稀釋和熟化:將儲(chǔ)罐I 35內(nèi)的卵黃液酸化分層物由動(dòng)力泵VI 506提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入稀釋熟化罐II 54'內(nèi),再向其內(nèi)加水稀釋卵黃液酸化分層物,以g/mL計(jì),卵黃液酸化分層物占水的30%;卵黃液酸化分層物稀釋后進(jìn)行升溫熟化,熟化溫度為100℃,保持時(shí)間為20min;待熟化過程結(jié)束后降溫至室溫,再加入1M NaOH溶液使體系pH值為中性;整個(gè)S4.1工序中全程攪拌(速率為90 rpm/min);

S4.2板框過濾:將S4.1工序獲得的中性熟化液由動(dòng)力泵VII 507提供動(dòng)力經(jīng)管路進(jìn)入板框過濾機(jī)62內(nèi)(輸入壓力達(dá)0.3Mpa)進(jìn)行連續(xù)性過濾,進(jìn)而獲得固形物;

S4.3水解:將S4.2工序獲得的固形物投料至水解罐II 55'內(nèi),加水和氯化鈣,保證鈣離子在水中濃度達(dá)20mM,固形物與水以g/mL計(jì)為25%,獲得底物II;加入復(fù)合酶II,而后再加1M NaOH溶液升高體系的pH值至7,在50℃下水解3h;其中,所述復(fù)合酶II為木瓜蛋白酶(市購)和磷脂酶A2(市購)的混合物,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的酶活力分別為80萬U/g和50萬U/g,木瓜蛋白酶和磷脂酶A的質(zhì)量比為2:1;以g/mL計(jì),復(fù)合酶II占底物II的6%;整個(gè)S4.3工序全程攪拌(速率為90 rpm/min);

S4.4酶滅活:升高水解罐II 55'罐體溫度達(dá)100℃,使復(fù)合酶II活性滅活;

所述卵黃抗體提取副產(chǎn)物聯(lián)合中草藥固體發(fā)酵生產(chǎn)微生態(tài)制劑包括如下步驟:

S5.1營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分的配制:將S3.3和S4.4獲得的兩種水解液全部分別由動(dòng)力泵IV 504和動(dòng)力泵VIII 508經(jīng)管路輸入調(diào)制罐56內(nèi),然后以g/mL計(jì),分別加入占混合水解液18%的紅糖、7%的葡萄糖、9%的磷酸氫二鉀、0.8%的七水硫酸鎂、2%的氯化鈉、10%的檸檬酸二銨、0.5%的氯化銨、4%的吐溫-80,然后攪拌(速率90 rpm/min)混合并將pH值調(diào)至7.0;

S5.2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分的后處理:將配制好的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分由動(dòng)力泵V 505經(jīng)管路輸送至噴霧干燥機(jī)57進(jìn)行噴霧干燥,噴霧干燥條件為:進(jìn)口溫度160℃,出口溫度80℃;然后再將噴霧干燥后獲得的固形物送至篩分粉碎機(jī)58進(jìn)行篩分粉碎,粉碎目數(shù)為100目;

S5.3菌種培養(yǎng):將S5.2后處理的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分投料進(jìn)入發(fā)酵種子罐63內(nèi),加水,接種培養(yǎng)菌,在35℃培養(yǎng)36h,獲得菌種培養(yǎng)液;其中,以g/mL計(jì),營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分占水的5%,培養(yǎng)菌占水的0.3%;所述培養(yǎng)菌為枯草芽孢桿菌粉與酵母菌粉質(zhì)量比1:1的混合菌,培養(yǎng)菌的總活菌數(shù)1.0×1010 cfu/g;

S5.4中草藥及發(fā)酵物料混勻:同時(shí)向混料罐59內(nèi)添加S5.3獲得的菌種培養(yǎng)液和S5.2后處理的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分,另外利用上料機(jī)64向混料罐59內(nèi)添加中草藥,然后攪拌(速率90 rpm/min)混合(25min);其中,以質(zhì)量百分比計(jì),營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分占中草藥的10%;以ml/g計(jì),菌種培養(yǎng)液占中草藥的35%;所述中草藥為板藍(lán)根、黃芪、淫羊藿三味中草藥的混合物,板藍(lán)根:黃芪:淫羊藿的質(zhì)量比為2:2:1;

S5.5發(fā)酵袋分裝和車間發(fā)酵:將混料罐59內(nèi)混勻的物料送至分裝機(jī)60分裝入發(fā)酵袋,所述發(fā)酵袋為市購頂部設(shè)置有氣體單向閥的透明塑料袋;將已分裝結(jié)束的發(fā)酵袋直接運(yùn)輸至發(fā)酵車間61,在發(fā)酵車間61內(nèi)將發(fā)酵袋排列堆放,要求發(fā)酵車間61內(nèi)37℃恒溫和避光,發(fā)酵15d,發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵袋內(nèi)容物即為微生態(tài)制劑。

上述制備工藝中還可以包括卵黃抗體的制備,步驟如下:

S6.1過濾:動(dòng)力泵IX 509將儲(chǔ)罐II 35'內(nèi)臨時(shí)儲(chǔ)存的中層流體即卵黃抗體提取液經(jīng)管路輸送至過濾組件51內(nèi)依次通過過濾器I、過濾器II、過濾器III實(shí)現(xiàn)粗過慮和精過濾,過濾器I、過濾器II、過濾器III的輸入壓力為0.2Mpa;

S6.2真空冷凍干燥:將S6.1制取的濾液經(jīng)管路輸送進(jìn)入真空冷凍儀52內(nèi),并加入凍干保護(hù)劑,先在-40℃預(yù)凍,然后在-50℃、真空度為10Pa的條件下凍干干燥:其中,所述凍干保護(hù)劑為葡萄糖,以g/mL計(jì),葡萄糖占濾液的5%;

S6.3卵黃抗體成品儲(chǔ)存:真空冷凍干燥后制得成品,成品臨時(shí)輸送到成品儲(chǔ)罐53內(nèi)儲(chǔ)存,成品儲(chǔ)罐53內(nèi)環(huán)境溫度為4℃、置有獨(dú)立干燥劑。

效果驗(yàn)證:

1、對(duì)S5.5制備獲得的微生態(tài)制劑進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明:發(fā)酵結(jié)束后的固體中草藥微生態(tài)制劑中的總活菌數(shù)達(dá)1.2×1010 cfu/g,枯草芽孢桿菌和酵母菌的活菌數(shù)量比為1.3:1,發(fā)酵后的微生態(tài)制劑有明顯的醇香氣味,各項(xiàng)指標(biāo)符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):

從同一品種的發(fā)病雞群中挑選體重均勻,癥狀表現(xiàn)程度相近,飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同,未曾使用任何藥物治療,經(jīng)臨床觀察、實(shí)驗(yàn)室診斷確診為雞傳染性法氏囊病的病雞180只,隨機(jī)分為6組,每組30只,其中設(shè)立使用無經(jīng)過發(fā)酵的市購扶正解毒散進(jìn)行治療的為對(duì)照組,另外5組對(duì)比試驗(yàn)分別使用本發(fā)明S5.5制備的微生態(tài)制劑進(jìn)行治療,該5組對(duì)比試驗(yàn)采用的治療量分別為對(duì)照組的1(一組)、0.9(二組)、0.8(三組)、0.7(四組)、0.6(五組)倍。本整體試驗(yàn)中給患病雞統(tǒng)一飼喂和衛(wèi)生管理,讓雞自由采食及飲水,連續(xù)治療觀察7d,對(duì)照組中扶正解毒散每天治療使用一次,用量1g/雞(只),拌食,對(duì)比試驗(yàn)組參考對(duì)照組。治療中,將所有試驗(yàn)雞轉(zhuǎn)入“飼養(yǎng)隔離欄”中飼養(yǎng),所有試驗(yàn)人員和飼養(yǎng)員進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和防護(hù)措施(穿戴隔離服,一次性口罩和手套)。死亡雞、雞糞、試驗(yàn)污物等均在指定區(qū)域內(nèi)消毒、焚燒和掩土深埋。

診斷標(biāo)準(zhǔn):

1、臨床癥狀:精神不振,翅膀下垂,羽毛蓬亂,怕冷,采食下降,發(fā)病雞排水樣、米湯樣白色糞便,糞便污染肛周羽毛,嚴(yán)重脫水,趾爪干癟,飲水增加;

2、剖檢病變:剖檢后可見病死雞脫水,胸肌和腿肌有條紋狀或斑狀出血;腺胃與肌胃交界處有潰瘍和出血斑,腸粘膜出血,腎腫大,蒼白;輸尿管擴(kuò)張充滿白色尿酸鹽;法氏囊腫大,外被黃色透明的膠凍物;內(nèi)褶腫脹、出血、內(nèi)有炎性分泌物或黃色干酪樣物;發(fā)病后期法氏囊萎縮或法氏囊囊壁變薄。

療效標(biāo)準(zhǔn):

(1)死亡率:用藥后,雞只出現(xiàn)法氏囊病的典型癥狀并死亡,尸體剖檢有典型特征性病變,則判定為死亡;根據(jù)每組中的死亡數(shù)占該組雞只總數(shù)即得死亡率。

(2)治愈率:用藥后雞只精神活潑,采食、飲水正常,羽毛有光澤,糞便正常,則判定為治愈;根據(jù)每組中的治愈數(shù)占該組雞只總數(shù)即得治愈率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:對(duì)照組和對(duì)比試驗(yàn)第一組至第五組的死亡率分別為10.1%、8.7%、9.2%、9.8%、10.4%,11.0%,其治愈率分別為87.2%、90.8%、90.0%、89.6%、87.8%、86.5%。結(jié)果表明:本發(fā)明實(shí)施例中的固體微生態(tài)制劑(發(fā)酵型扶正解毒散)能夠較好地起到治療雞傳染性法氏囊病,且0.8倍和0.9倍的對(duì)照組計(jì)劑就可以達(dá)到對(duì)照組的療效。

最后應(yīng)說明的是:以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制,盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換,而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍,其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。

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