本發(fā)明屬于制藥領域，具體涉及一種七葉皂苷B的制備方法。

背景技術：
七葉皂苷又稱七葉皂苷酸，為從七葉樹科屬植物種子提取得到的總皂苷、β-七葉皂苷或異七葉皂苷等的總稱，屬于三萜皂苷類。七葉皂苷的水溶解度較差，為增加其溶解度，常將其制成鈉鹽。七葉皂苷中含有很多種皂苷化合物，我國國家標準按液相出峰前后，依次命名為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D。他們互為同分異構體(見附圖1)，目前用于臨床上的七葉皂苷鈉是由七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D以及其它成分組成的鈉鹽混合物。七葉皂苷鈉長期使用過程中發(fā)現(xiàn)藥物對肌肉和粘膜具有強刺激作用，患者易出現(xiàn)靜脈炎等副作用。此外，部分皂苷類成分具有溶血作用。由于七葉皂苷鈉組合物的組分較多，七葉皂苷鈉中雜質(zhì)的定性和定量控制幾乎無法實現(xiàn)。這種不可控性會導致七葉皂苷鈉產(chǎn)品的質(zhì)量的均一性和安全性難以得到保證，特別是血管刺激性等不良反應難以掌控。因此，對七葉皂苷的各單體的分離、藥理活性和毒理性質(zhì)的研究并篩選出最適合臨床用藥的更優(yōu)單體顯得尤為重要。藥理實驗研究表明，與七葉皂苷鈉組合物相比，七葉皂苷單體B具有更優(yōu)的抗炎、抗水腫藥理活性和更低的肌肉和粘膜刺激性。此外，高純度的七葉皂苷單體B可解決目前七葉皂苷鈉產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和安全性難以得到保證，肌肉和血管刺激性等不良反應難以掌控等問題。因此，七葉皂苷單體B的制備和開發(fā)具有重大的臨床意義?，F(xiàn)有技術中，提取七葉皂苷單體主要是將提取物通過柱層析、離子交換樹脂或者大孔吸附樹脂等方法來得到粗品，然后進一步重結晶純化得到。CN102746363公開了一種高純度七葉皂苷單體B原料藥、其制備方法以及醫(yī)療用途。該方法將七葉總皂苷粗品經(jīng)反相硅膠柱層析分離得到七葉皂苷單體B洗脫液，然后將七葉皂苷單體B洗脫液濃縮、析晶可得到純度較高的七葉皂苷單體B。但是我們在試驗中發(fā)現(xiàn)，將七葉皂苷單體B洗脫液濃縮后能成功析出晶體的前提條件是：濃縮液中七葉皂苷單體B單體需要相當高的濃度，濃度至少為80％。然而由于七葉皂苷A和七葉皂苷單體B結構極其類似，它們互為順反異構體，分離難度非常大，通過實驗證明，反相硅膠柱層析將七葉皂苷單體A和七葉皂苷單體B分離開幾乎不能實現(xiàn)，通過大幅度延長分離時間和大量使用洗脫溶劑才能夠勉強得到極其少量的七葉皂苷單體B。因此該工藝路線費時、費力、溶劑使用量大、七葉皂苷B單體收率低，難以用于工業(yè)化生產(chǎn)。

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種高純度、高收率的七葉皂苷B的專屬性制備方法。該方法設備要求低、純化費用低、毒性小、環(huán)境污染少，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的七葉皂苷B制備方法包括以下步驟：1)以娑羅子為原料，用乙醇提取，收集提取液并濃縮；2)將步驟1)得到的濃縮液調(diào)節(jié)pH至2～3，然后用水飽和的正丁醇萃取，分離有機層并濃縮；3)將步驟2)得到的濃縮液加入到2～5倍體積的丙酮/甲基叔丁基醚混合溶液中，攪拌下加熱回流，然后冷卻析晶并干燥；4)將干燥后的晶體溶解于熱水中，然后再次冷卻析晶并干燥；5)將二次析晶后的固體溶解到有機溶劑中，然后再向有機溶劑中加入占二次析晶后的固體重量的10-20％的L-脯氨酸，加熱回流10～60min后再冷卻到40-50℃，此時加入少量七葉皂苷B作為晶種，繼續(xù)攪拌冷卻至0-20℃析晶，直到白色晶體不再析出，抽濾或離心，將固體烘干，即得七葉皂苷B。優(yōu)選地，步驟(1)中的乙醇為質(zhì)量濃度為30-70％的乙醇水溶液。優(yōu)選地，步驟(3)中的丙酮/甲基叔丁基醚混合溶液中，丙酮與甲基叔丁基醚的體積比為2-8∶1。優(yōu)選地，步驟(5)中的有機溶劑為乙醇/正己烷混合溶劑，所述乙醇與正己烷的體積比為10-30∶1。優(yōu)選地，步驟(5)中，所述L-脯氨酸占二次析晶后的固體重量的15％。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明針對七葉皂苷B單體制備存在的問題，提供一種制備高純度七葉皂苷B的專屬性方法。該方法采用了手性氨基酸——L-脯氨酸誘導重結晶，可得高純度、高收率的七葉皂苷B，避免了使用柱層析、離子交換樹脂等方法，操作簡單、設備要求低、純化費用低、毒性小、環(huán)境污染少，可執(zhí)行性好、適合工業(yè)化生產(chǎn)。與七葉皂苷相比，本發(fā)明提供的七葉皂苷B具有更優(yōu)的抗炎、抗水腫藥理活性和更低的肌肉和粘膜刺激性，能夠從根本上解決目前七葉皂苷產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和安全性等問題。附圖說明圖1是七葉皂苷A、B、C、D的結構式。具體實施方式以下通過實施例對本發(fā)明進行詳細地說明。實施例11)提?。喝℃读_子粉末1kg提取兩次，每次用10L質(zhì)量濃度為70％的乙醇水溶液，45℃攪拌提取2h，過濾，將兩次過濾的濾液合并，在減壓條件下旋轉回收溶劑并濃縮至2L。2)萃?。簩⒉襟E1)中得到的濃縮液用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至2，用2L的水飽和的正丁醇萃取3次，合并有機層并濃縮至400mL；3)第一次析晶：將步驟2)得到的濃縮液加入到960mL丙酮和240mL甲基叔丁基醚混合溶劑中，攪拌下加熱回流，然后冷卻至20℃析出白色沉淀，過濾、45℃干燥得白色晶體49g；4)第二次析晶：將步驟3)得到的49g晶體溶解于200mL的100℃的熱水中，攪拌20min，然后將溶液冷卻至0℃，析出白色固體，抽濾，將固體在45℃條件下烘干，得β-七葉皂苷32g；5)七葉皂苷成品的制備：將步驟4)得到的32gβ-七葉皂苷溶解于300mL乙醇和15mL正己烷混合溶劑中，向上述體系加入4.8gL-脯氨酸，加熱回流30min，將體系冷卻到50℃，此時加入0.2g純度達98％的七葉皂苷B作為晶種，繼續(xù)攪拌冷卻至20℃，析晶，直到白色晶體不再析出，抽濾，將固體在45℃烘干，得七葉皂苷B白色結晶12.5g。本實施例中，步驟1)的目的是將七葉總皂苷從娑羅子中提取分離出來，這是娑羅子總皂苷提取的常規(guī)工藝，提取方法可以采用本領域常用的回流、浸泡、滲漏等方法。其中，乙醇的濃度會對七葉總皂苷的純度、收率產(chǎn)生重要影響，乙醇濃度過低會導致產(chǎn)物提取不充分，乙醇濃度過高會導致雜質(zhì)含量增加。步驟2)的萃取和步驟3)、4)的兩次析晶目的都是純化提取物，得到高純度的β-七葉皂苷。其中，調(diào)節(jié)pH的目的是提高七葉皂苷的穩(wěn)定性和萃取效率，pH過高會導致七葉皂苷的水溶性增加，正丁醇萃取效率降低；pH過低會降低七葉皂苷的穩(wěn)定性。步驟(3)中丙酮與甲基叔丁基醚的比例會影響七葉皂苷晶體的析出速度和收率。步驟5)中的有機溶劑還可以選擇甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、四氫呋喃、甲基叔丁基醚、正己烷、正庚烷等中的一種或者多種的任意混合，目的是使β-七葉皂苷能很好的溶解，同時又能在誘導重結晶中能更好地析出七葉皂苷B。L-脯氨酸的用量直接影響了七葉皂苷B的分離和析出，本實施例七葉皂苷B不僅能夠選擇性地順利析出晶體，并且收率和純度都較高，晶體形態(tài)好。采用高效液相法對產(chǎn)物中的七葉皂苷B進行檢測，具體條件為：色譜柱為C18柱，粒徑為5um；流動相為乙腈和0.5％磷酸水溶液，乙腈和磷酸水的體積比為35∶65，流動相PH＝2.,5；檢測波長為220nm；流速為1.0ml/min，進樣量為10μl；產(chǎn)物中七葉皂苷B的含量為99.7％，收率(產(chǎn)物中七葉皂苷B的總量占投料娑羅子中七葉皂苷B的總量的百分比)為61％。實施例21)提?。喝℃读_子粉末1kg回流提取三次，每次用6L質(zhì)量濃度為30％的乙醇水溶液，過濾，將濾液合并，在減壓條件下旋轉回收溶劑并濃縮至2L。2)萃?。簩⒉襟E1)中得到的濃縮液用3mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至3，用水飽和的正丁醇萃取3次，合并有機層并濃縮至200mL；3)第一次析晶：將步驟2)得到的濃縮液加入到300mL丙酮和100mL甲基叔丁基醚混合溶劑中，攪拌下加熱回流，然后冷卻至析出白色沉淀，過濾、干燥得白色晶體38g；4)第二次析晶：將步驟3)得到的38g七葉皂苷晶體溶解于100ml80℃的熱水中，攪拌60min，然后將溶液冷卻析出白色固體，抽濾，將固體烘干，得β-七葉皂苷27g；5)七葉皂苷成品的制備：將步驟4)得到的27gβ-七葉皂苷溶解于150mL乙醇和15mL正己烷混合溶劑中，向上述體系加入2.7gL-脯氨酸，加熱回流10min，將反應體系冷卻到45℃，此時加入0.1g七葉皂苷B作為晶種，繼續(xù)攪拌冷卻至20℃，析晶，直到白色晶體不再析出，抽濾，將固體烘干，得七葉皂苷B白色結晶11.8g。產(chǎn)物中七葉皂苷單體B的含量為99.5％，收率為56％。實施例31)提?。喝℃读_子粉末1kg回流提取二次，每次用15L質(zhì)量濃度為50％的乙醇水溶液，過濾，將濾液合并，在減壓條件下旋轉回收溶劑并濃縮至3L。2)萃?。簩⒉襟E1)中得到的濃縮液用0.5mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至3，用水飽和的正丁醇萃取5次，合并有機層并濃縮至300mL；3)第一次析晶：將步驟2)得到的濃縮液加入到1200mL丙酮和150mL甲基叔丁基醚混合溶劑中，攪拌下加熱回流，然后冷卻至析出白色沉淀，過濾、干燥得白色晶體43g；4)第二次析晶：將步驟3)得到的43g七葉皂苷晶體溶解于215mL的沸水中，攪拌30min，然后將溶液冷卻析出白色固體，離心，將固體烘干，得β-七葉皂苷29g；5)七葉皂苷成品的制備：將步驟4)得到的29gβ-七葉皂苷溶解于300mL乙醇和10mL正己烷混合溶劑中，向上述體系加入5.8gL-脯氨酸，加熱回流60min，將反應體系冷卻到40℃，此時加入少量七葉皂苷B作為晶種，繼續(xù)攪拌冷卻至0℃析晶，直到白色晶體不再析出，離心，將固體烘干，得七葉皂苷B白色結晶12.2g。產(chǎn)物中七葉皂苷B的含量為98.9％，收率為60％。