本發(fā)明涉及精神分裂癥易感基因檢測領(lǐng)域，具體涉及到一種檢測緊張型精神分裂癥易感性的引物及試劑盒。

背景技術(shù)：

精神分裂癥(schizophrenia)是一種慢性、嚴(yán)重性、致殘性腦病，嚴(yán)重危害人體健康。是精神類疾病中最嚴(yán)重的一種精神疾病，2009年根據(jù)柳葉刀調(diào)查顯示，我國的精神分裂癥患者人數(shù)近1000萬。精神分裂癥需要終身治療，治療成本高昂，據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國2002年精神分裂癥的治療總成本達(dá)627億美元，其中直接成本227億美元，因自殺而早夭和家屬因照顧患者而導(dǎo)致的損失等為324億美元，且精神分裂癥具有高致殘性，大多數(shù)精神分裂癥患者會(huì)終身殘留某些癥狀，需要終身治療，由于精神分裂癥的嚴(yán)重性和慢性化，對(duì)患者、家庭及社會(huì)影響很大，消耗大量公共資源，因此精神分裂癥已經(jīng)給社會(huì)和家庭帶來嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。

精神分裂癥在男性、女性中的發(fā)病率幾乎相同，但男性發(fā)生較早，發(fā)生在青春期晚期和成年早期，約在15-25歲起病，而此階段正是構(gòu)筑人生道路的關(guān)鍵時(shí)期，女性主要在20-35歲起病。患者有幻覺、妄想、自發(fā)運(yùn)動(dòng)增多等陽性癥狀，有情感冷漠、言語減退、社交退縮等陰性癥狀，同時(shí)有認(rèn)知功能缺損，抑郁，社會(huì)職業(yè)功能損害等認(rèn)知損傷等癥狀。

根據(jù)精神分裂癥不同臨床表現(xiàn)、發(fā)病形式、臨床特點(diǎn)、病程、治療方案、治療反應(yīng)及預(yù)后等因素，可以把精神分裂癥分為緊張型、偏執(zhí)型、青春型、單純型、未分化型及殘留型。

緊張型多在青春期或中年發(fā)病。其臨床主要表現(xiàn)為：情感低落、表情呆板、緊張性木僵與緊張性興奮交替出現(xiàn)、緊張性姿勢及蠟樣屈曲等。此型可自動(dòng)緩解，治療效果也較好，診斷時(shí)應(yīng)與抑郁癥相區(qū)別。緊張型在精神分裂癥中并不屬于發(fā)病率很高的類型，但是此種類型由于癥狀容易與抑郁癥相混淆，因此對(duì)緊張型精神分裂癥患者的鑒別就尤為重要。

一個(gè)世紀(jì)以來，人們對(duì)精神分裂癥的生理、生化、影像、藥物治療以及社會(huì)家庭、環(huán)境等方面觀察，對(duì)精神疾病的發(fā)病機(jī)理做出了各種假說和判斷，隨著科技進(jìn)步，人們越來越認(rèn)識(shí)到基因缺陷是許多嚴(yán)重精神疾病產(chǎn)生的重要原因，當(dāng)人們遇到環(huán)境壓力時(shí)，那些攜帶疾病易感基因的人比不攜帶易感基因的人更可能患精神衛(wèi)生疾患，經(jīng)調(diào)查研究，精神分裂癥是遺傳度很高的多基因病，主要呈現(xiàn)家族聚集，一旦一個(gè)家族成員患病，這個(gè)家庭的其他成員攜帶的易感基因遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常人，需要進(jìn)行有效的預(yù)防與治療，在科技日益發(fā)展的今天如何對(duì)待精神分裂癥，如何從遺傳角度檢測易感基因以及個(gè)體的疾病易感性，從而進(jìn)行進(jìn)一步風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測和診斷，成為廣大科技人員和醫(yī)療衛(wèi)生人員面臨的嚴(yán)峻問題，

盡管國內(nèi)外易感基因研究開展多年，但是進(jìn)展緩慢，只有少數(shù)關(guān)于鑒定遺傳易感基因的報(bào)道，但是沒有具體針對(duì)某種類型的精神分裂癥的檢測研究，國際上把精神分裂癥分為五種類型，每種類型涉及的易感基因不一樣，不能籠統(tǒng)的用一種或者幾種基因把這五種類型都鑒定，這樣必然專一性差。而且即使診斷出精神分裂癥，但是不知道是哪種具體的精神分裂癥，對(duì)后續(xù)的治療缺乏指導(dǎo)意義。

利用遺傳標(biāo)記對(duì)治病基因進(jìn)行檢測，是近幾年來發(fā)展的技術(shù)。遺傳標(biāo)記，即在染色體上有一段特異DNA序列片段，且有多態(tài)性，在世世代代傳遞中，遵循規(guī)律為分離、獨(dú)立分配和連鎖規(guī)律，因此可獲得遺傳物質(zhì)傳遞信息。遺傳標(biāo)記可以把基因組分為不同區(qū)域，通過連鎖和關(guān)聯(lián)分析可獲得致病基因所在染色體區(qū)域，可對(duì)該病基因進(jìn)一步進(jìn)行克隆。對(duì)于各種不同疾病，尋找致病基因和分析是研究的關(guān)鍵之一。

第三代遺傳標(biāo)記—SNP(single nucleotide polymorphism)指基因組中某特定核苷酸的位置上會(huì)存在兩種或兩種以上的不同堿基，在群體中最小等位基因頻率≥1％。人類的基因組中多數(shù)SNP位點(diǎn)僅存在2種等位基因，所以通常SNP會(huì)指在特定位置上，某一核苷酸出現(xiàn)雙等位基因的改變。SNP是人類基因組計(jì)劃走向應(yīng)用的非常重要方法。主要因?yàn)镾NP提供一個(gè)非常有力的工具，用于高危人群的發(fā)現(xiàn)、疾病易感基因的鑒定、藥物設(shè)計(jì)和基礎(chǔ)生物學(xué)研究等。因?yàn)槿祟惔罅看嬖赟NP位點(diǎn)，提供了更多的機(jī)會(huì)發(fā)現(xiàn)基因與疾病間的關(guān)系。通過SNP發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)基因的突變要比家系等研究容易。某些SNP并不是致病基因，但它可能與某些相鄰的致病基因連鎖，也同樣為重要標(biāo)記。

SNP以其密度高(平均每1kb就有1個(gè))、代表性強(qiáng)(位于基因內(nèi)部的SNP可能直接影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平)、遺傳穩(wěn)定性好(同微衛(wèi)星多態(tài)性比較而言)、易于自動(dòng)化分析(因SNP在人群中多為雙等位基因標(biāo)記，可簡單以“+/－或1/0”直接分型)等特點(diǎn)成為很好的遺傳標(biāo)志。

最近基因組掃描結(jié)果提示，有多條染色體與精神分裂癥易感性相關(guān)聯(lián)，其中6號(hào)染色體與緊張型精神分裂癥易感性相關(guān)聯(lián)，但至今在該染色體區(qū)域內(nèi)未發(fā)現(xiàn)確定特異的與緊張型精神分裂癥相關(guān)的易感基因。目前尚無任何關(guān)于TRAM2基因與緊張型精神分裂癥相關(guān)聯(lián)的研究結(jié)果，本發(fā)明第一次利用SNP技術(shù)對(duì)緊張型精神分裂癥易感基因進(jìn)行檢測，為緊張型精神分裂癥的深入研究和防治、診斷、治療提供了新的思路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種檢測緊張型精神分裂癥易感性的引物及試劑盒，從而滿足本領(lǐng)域?qū)τ谡_識(shí)別緊張型精神分裂癥易感基因的需求，為緊張型精神分裂癥的深入研究、預(yù)防、治療、診斷提供了新的思路。

發(fā)明人通過研究結(jié)果表明，6號(hào)染色體TRAM2基因位于6p21.1-p12，是易位相關(guān)的膜蛋白2編碼基因，是緊張型精神分裂癥的易感基因，通過對(duì)TRAM2基因的SNP位點(diǎn)：rs6778進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，rs6778與緊張型精神分裂癥高度相關(guān)。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

1、一種檢測緊張型精神分裂癥易感基因的引物，其特征在于：所述引物為擴(kuò)增TRAM2基因rs6778的核苷酸序列，分別為序列表SEQ ID No.1和序列表SEQ ID No.2所示。

AACTGATAATGCAAATGTGGACAAAGTGTC(SEQ ID No.1)

AGCATCACTGTATAAAAGCACGTCAAGGAA(SEQ ID No.2)

2、一種檢測緊張型精神分裂癥易感基因的試劑盒，其特征在于包括以下試劑：

1)引物：為SEQ ID No.1，SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，

2)PCR擴(kuò)增緩沖液，Taq DNA聚合酶，

3)dNTP混合液。

具體的說，本發(fā)明是用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種檢測緊張型精神分裂癥的TRAM2易感基因rs6778的核苷酸序列，為序列表SEQ ID No.3所示核苷酸序列。該核苷酸序列位于TRAM2基因，其變異位點(diǎn)，以字母“Y"表示，

所述的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs6778的基因型為C時(shí)，受試者的易感性最低，攜帶T等位基因時(shí)候，受試者的易感性升高。

一種體外檢測緊張型精神分裂癥易感基因的檢測方法，包括如下步驟：

1、基因組DNA提取

采用提取DNA的試劑盒，提取外周血的白細(xì)胞中全基因組的DNA

2、基因組DNA質(zhì)量檢測

3、基因組DNA含量和純度的檢測

4、利用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的片段

擴(kuò)增TRAM2基因rs6778多態(tài)性的引物分別為：SEQ ID No.1，SEQ ID No.2的核苷酸序列，擴(kuò)增TRAM2基因的包含單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs6778的部分片段

5、檢測多態(tài)性位點(diǎn)的基因型。

將PCR產(chǎn)物直接測序，根據(jù)熒光信號(hào)的差異判定基因型。

6、結(jié)果判定

rs6778堿基為(T)的個(gè)體為精神分裂癥易感人群。

本發(fā)明的測定方法測定了來源于人的基因組DNA，樣品來源無限制，如：體液(血液、腹水及尿液等)、組織細(xì)胞(如肝組織)等。通過提取和純化這些樣品可制備基因組DNA。調(diào)整基因組DNA的濃度，使其盡可能的一致。以基因組DNA為模板，可擴(kuò)增出含TRAM2基因突變位點(diǎn)的核酸片段，以獲取測定的大量樣本。這種通過擴(kuò)增含TRAM2基因變異點(diǎn)的DNA片段獲得的樣品，特別適于用作測定材料。

在進(jìn)行基因輔助診斷時(shí)，本發(fā)明優(yōu)先適用于測定根據(jù)TRAM2基因突變類型存在的輔助診斷試劑，輔助診斷試劑包括作為必要成分的特定試劑，其對(duì)應(yīng)于用于測定基因突變類型的方法。按采用的測定方法來選擇適當(dāng)?shù)奶囟ㄔ噭?，如DNA片段和/或用于PCR擴(kuò)增步驟的引物。

本發(fā)明通過大樣本的統(tǒng)計(jì)分析，研究了TRAM2基因序列的rs6778多態(tài)性位點(diǎn)在緊張型精神分裂癥患者的等位基因頻率，并根據(jù)基因型在患病子女中的傳遞情況，進(jìn)行傳遞不平衡檢驗(yàn)和單體型分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，全部樣本的基因型分布和等位基因頻率均符合Hardy-Weinburg平衡，經(jīng)過Bonferroni矯正，傳遞不平衡檢驗(yàn)分析有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，通過大樣本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了論證。

根據(jù)本發(fā)明由TRAM2基因堿基突變特性判定緊張型精神分裂癥的易感人群的方法，可對(duì)未表現(xiàn)出臨床癥狀的人群進(jìn)行如下方法的篩查，rs6778堿基為C的不易發(fā)生緊張型精神分裂癥，rs6778堿基為T的易發(fā)生緊張型精神分裂癥，為易感人群，對(duì)于緊張型精神分裂癥易感人群在日常生活中盡量要減少誘發(fā)因素，如環(huán)境中的刺激；對(duì)此病及早進(jìn)行防治，是本發(fā)明的一個(gè)重要用途。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：

1、本發(fā)明創(chuàng)造性對(duì)緊張型精神分裂癥易感性基因進(jìn)行檢測，精神分裂癥根據(jù)不同臨床表現(xiàn)、發(fā)病形式、臨床特點(diǎn)、病程、治療方案、治療反應(yīng)及預(yù)后等因素，可以分為單純型、青春型、偏執(zhí)型、緊張型、未分化型及殘留型?，F(xiàn)有的研究只泛泛針對(duì)精神分裂癥的易感基因進(jìn)行檢測，但是不同類型的精神分裂癥所涉及的易感基因是不同的，如果不對(duì)某種類型的疾病進(jìn)行特異檢測，必然特異性差，檢測效果不好。

2、緊張型精神分裂癥在精神分裂癥患者中，屬于較為難鑒別的一種，其其臨床主要表現(xiàn)為：情感低落、表情呆板、緊張性木僵與緊張性興奮交替出現(xiàn)、緊張性姿勢及蠟樣屈曲等，此型可自動(dòng)緩解，治療效果也較好；緊張型在精神分裂癥中并不屬于發(fā)病率很高的類型，但是此種類型由于癥狀容易與抑郁癥相混淆，因此對(duì)緊張型精神分裂癥患者的鑒別就尤為重要。

3、本發(fā)明的試劑盒操作簡單，屬于本領(lǐng)域人員利用現(xiàn)有技術(shù)能輕松實(shí)現(xiàn)的操作，簡單易行。

4、利用本發(fā)明闡述TRAM2基因位點(diǎn)的堿基變異，作為生物標(biāo)志物之一，可用作藥物設(shè)計(jì)的分子靶標(biāo)的篩選，以幫助尋找具有調(diào)節(jié)TRAM2表達(dá)的活性分子，有利于促進(jìn)緊張型精神分裂癥新藥研發(fā)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1、選擇候選基因和SNPs

本發(fā)明人查閱文獻(xiàn)、利用計(jì)算機(jī)互聯(lián)網(wǎng)及生物信息學(xué)獲取各方面精神分裂癥候選基因研究，在6號(hào)染色體通過連鎖不平衡分析方法進(jìn)行單個(gè)核苷酸多態(tài)性(SNP)連鎖不平衡分析，通過NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)數(shù)據(jù)庫，獲得TRAM2基因，并通過http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP，http://snp.cshl.org/數(shù)據(jù)庫，搜索出符合其條件的候選基因SNPs。其入選標(biāo)準(zhǔn)：1、已有相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行報(bào)道；2、位點(diǎn)最小等位基因頻率應(yīng)大于10％；3、所選SNPs必須能夠符合引物設(shè)計(jì)軟件的要求；4、所選位點(diǎn)不能影響基因分型實(shí)驗(yàn)

2、研究對(duì)象

本發(fā)明以201例緊張型精神分裂癥和221例健康對(duì)照(身體健康，無軀體疾病，無家族遺傳性疾病史，無精神疾病史，無藥物濫用)為研究對(duì)象。所有研究對(duì)象均為中國漢族人，并且自愿簽訂倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的知情同意書。

2.1緊張型精神分裂癥的入組和排除標(biāo)準(zhǔn)

2.1.1入組標(biāo)準(zhǔn)

(1)符合緊張型精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，PANSS評(píng)分≥60分；

(2)年齡15-50歲，病程不超過24個(gè)月，未服用過任何抗精神病藥物；

(3)自愿參加并簽署知情同意書。

2.1.2排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)診斷為非緊張型精神分裂癥患者；

(2)明確中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如中風(fēng)、帕金森和癲癇等

(3)嚴(yán)重軀體疾病，如感染、糖尿病和高血壓等；

2.2診斷標(biāo)準(zhǔn)和量表評(píng)定

2.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn)

(1)國際疾病分裂標(biāo)準(zhǔn)第10版：精神分裂診斷標(biāo)準(zhǔn)(ICD-10)；

(2)《中國精神病分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)》(第2版)修訂本精神分裂癥標(biāo)準(zhǔn)(CCMD-2-R)；

(3)所有病例均符合上述兩個(gè)診斷標(biāo)準(zhǔn)，才能入組。

2.2.2精神病狀態(tài)量表評(píng)定

由2名經(jīng)過培訓(xùn)的精神科醫(yī)生同時(shí)對(duì)病人進(jìn)行PANSS評(píng)分。PANSS包括陽性癥狀分量表、陰性癥狀分量表和一般病理分量表。參與評(píng)定量表的2名醫(yī)生均經(jīng)過PANSS量表一致性培訓(xùn)。

2.2.3認(rèn)知功能量表

重復(fù)性成套神經(jīng)心理狀態(tài)測驗(yàn)(RBANS)是一個(gè)簡明的、由單人操作的測驗(yàn)，目前是國際上常用的認(rèn)知評(píng)定工具，包括12個(gè)分測驗(yàn)，可以概括成5組神經(jīng)心理狀態(tài)：即刻記憶(immediate memory)、注意(attention)、視覺廣度(visuospatial/constructional)、語言(language)和延遲記憶(delayed memory)。由經(jīng)過培訓(xùn)的檢查者操作，完成整個(gè)檢測一般需要時(shí)間20-30分鐘，張保華等人已經(jīng)將RBANS翻譯成漢語版，并測試了精神分裂癥患者和正常人組RBANS的信度和效度，結(jié)果表明該量表是一個(gè)信度、效度較好且簡短易行的評(píng)定認(rèn)知功能的量表。

3、血液和臨床資料收集

受試者在認(rèn)真閱讀、理解、并自愿簽署倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的項(xiàng)目知情同意書后，取外周靜脈血5ml，-20度保存至提取基因組DNA。收集精神分裂癥患者年齡、性別、家族史、民族和文化程度、首次入院和確診時(shí)間、臨床癥狀、認(rèn)知功能等和疾病相關(guān)的資料；正常人收集一般人口學(xué)資料及認(rèn)知功能評(píng)定量表。

3.1基因組DNA提取

采用專門提取DNA試劑盒，提取外周血的白細(xì)胞中全基因組的DNA。操作步驟如下：血液解凍、標(biāo)記1.5mlEppendorf離心管→細(xì)胞裂解液900uL加入離心管中→加入解凍后全血200uL后，混勻，常溫下作用20min，并顛倒4-6次→10，000rpm離心時(shí)間4min，去除上清，然后振蕩，使沉淀物再次懸浮→300uL核裂解液，然后輕輕地振蕩，使其混勻，再37℃水浴30min→RNA降解酶1.5μL，振蕩混勻，水浴15min，37℃→蛋白沉淀液100uL，輕彈管底，常溫作用20min→12，000rpm離心4min，將上清液轉(zhuǎn)移到已加入異丙醇300uL的離心管中，20min輕輕顛倒→12，000rpm離心4min，棄上清，加70％乙醇300uL，輕輕搖勻→12，000rpm離心4min，棄上清，將離心管傾斜倒置，等待涼干→DNA溶解液100uL混勻，水浴1h，65℃(或4℃過夜)，DNA在離心管中已制備完畢。

3.2基因組DNA質(zhì)量檢測

取1-2μL基因組DNA原液，通過瓊脂糖電泳方法檢測所提取DNA樣品是否滿足質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求；亮色字體表示該DNA樣本符合基因分型技術(shù)要求；紅色字體(無樣本或樣本量極少)表示該DNA不符合基因分型技術(shù)要求，需要予以重新提取。

3.3基因組DNA含量和純度的檢測

用NanoDrop-1000全波長紫外/可見光掃描分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定每份樣本DNA含量和OD比值(A260/A230、A260/A280)。A260/A230比值低：小分子雜質(zhì)或殘存的鹽污染，若過高有未知的雜質(zhì)。比值(A260/A280)低：蛋白或者苯酚有殘留所致；比值(A260/A280)比值高：RNA有殘留所致；通常A260/A280≈1.8代表樣本DNA是純凈的

4、設(shè)計(jì)引物

擴(kuò)增TRAM2基因rs6778多態(tài)性的引物分別為：

AACTGATAATGCAAATGTGGACAAAGTGTC(SEQ ID No.1)

AGCATCACTGTATAAAAGCACGTCAAGGAA(SEQ ID No.2)

PCR擴(kuò)增目的片段

應(yīng)用以上引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為20ul，其中含10mM Tris-HCl(PH8.4)，50mM KCl，1.5mM MgCl2，200uM dNTP，上下游引物各0.4uM，Taq聚合酶1U，DNA模板30-50ng，PCR擴(kuò)增條件為：PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，66℃退火30s，72℃延伸25s，總共35個(gè)循環(huán)，72℃總延伸2min，取PCR產(chǎn)物5ul用1.5％瓊脂糖凝膠電泳，以DNAmarker為分子量標(biāo)準(zhǔn)品，擴(kuò)增。

5、測序判定基因型

PCR產(chǎn)物經(jīng)8％聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，凝膠成像系統(tǒng)觀察合格后基因測序公司進(jìn)行測序驗(yàn)證。

6、結(jié)果判定

rs6778堿基為(T)的個(gè)體為緊張型精神分裂癥易感人群。

本發(fā)明通過上述實(shí)驗(yàn)，建立Pedigree基因分析數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用擬合優(yōu)度卡方檢驗(yàn)和傳遞不平衡檢驗(yàn)，應(yīng)用UNPHASED分析軟件進(jìn)行單倍體傳遞卡方檢驗(yàn)，利用GraphPadprism分析數(shù)據(jù)。

傳遞不平衡檢驗(yàn)顯示，SNP與緊張型精神分裂癥顯著關(guān)聯(lián)(P<0.001).利用本發(fā)明的技術(shù)，檢測到rs6778堿基為(T)與緊張型精神分裂癥臨床癥狀總分相關(guān)(P<0.05)。rs6778(T)與陽性癥狀、認(rèn)知功能、陰性癥狀相關(guān)(P<0.05)。

應(yīng)用在線遺傳統(tǒng)計(jì)SHEsis軟件計(jì)算基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律；分析候選基因SNPs位點(diǎn)與精神分裂癥的關(guān)聯(lián)性；分析基因各個(gè)位點(diǎn)之間連鎖不平衡程度及單倍型；應(yīng)用MDR軟件分析基因-基因間的交互作用；應(yīng)用GraphPadprism軟件分析候選基因SNPs位點(diǎn)與精神分裂癥臨床癥狀。

本發(fā)明通過大樣本的統(tǒng)計(jì)分析，研究了TRAM2基因序列的rs6778多態(tài)性位點(diǎn)在緊張型精神分裂癥患者的等位基因頻率，并根據(jù)基因型在患病子女中的傳遞情況，進(jìn)行傳遞不平衡檢驗(yàn)和單體型分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，全部樣本的基因型分布和等位基因頻率均符合Hardy-Weinburg平衡，經(jīng)過Bonferroni矯正，傳遞不平衡檢驗(yàn)分析有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，通過大樣本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了論證。

該位點(diǎn)共檢測201例緊張型精神分裂癥患者，221例健康正常對(duì)照受試者；rs6778位點(diǎn)為二態(tài)SNP；經(jīng)測序檢測，在群體中出現(xiàn)不同的基因型結(jié)果。采用在線遺傳統(tǒng)計(jì)SHEsis軟件分別分析患者、和健康對(duì)照受試者的基因型和等位基因頻率，SNPs的基因型頻率分布均符合H-W平衡，說明該研究的抽樣群體符合H-W平衡。檢測rs6778位點(diǎn)基因型和緊張型精神分裂癥患者認(rèn)知功能的相關(guān)性，結(jié)果顯示與陽性癥狀、陰性癥狀、認(rèn)知有顯著差異(P<0.05)。說明該位點(diǎn)影響患者的臨床癥狀。

實(shí)施例2

驗(yàn)證試驗(yàn)：采用本試劑盒，隨機(jī)選取緊張型精神分裂癥患者樣本20例，對(duì)照組樣本20例，經(jīng)PCR測序檢測TRAM2基因rs6778位點(diǎn)多態(tài)性。

1、PCR擴(kuò)增：

通過PCR擴(kuò)增TRAM2基因rs6778部分片段，PCR反應(yīng)體系為：

10×PCR反應(yīng)緩沖液3μL，10mM/LdNTP0.5μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，10pM/L引物0.5μL，基因組DNA1μL，加去離子水至30μL。PCR時(shí)于每一體系中加入20μL石蠟油，防止液體揮發(fā)。

PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5min，96℃變性30s，66℃退火30s，72℃延伸25s，總共35個(gè)循環(huán)，72℃總延伸2min。

2、測序判定基因型

PCR產(chǎn)物經(jīng)8％聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，凝膠成像系統(tǒng)觀察合格后送基因測序公司進(jìn)行測序驗(yàn)證。

3、結(jié)果

結(jié)果顯示，患者樣本TRAM2基因rs6778位點(diǎn)，多態(tài)性基因型為CT的8例，TT12例；健康對(duì)照組基因型全部為CC。本方法可以有效檢測出緊張型精神分裂癥。

位點(diǎn)多態(tài)性：CC時(shí)，受試者的易感性最低；攜帶T等位基因，受試者的易感性升高。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。