本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸左旋咪唑的新用途，具體涉及鹽酸左旋咪唑的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：鹽酸左旋咪唑適應(yīng)癥為對(duì)蛔蟲、鉤蟲、蟯蟲和糞類圓線蟲病有較好療效。由于本品單劑量有效率較高，故適于集體治療。對(duì)班氏絲蟲、馬來絲蟲和盤尾絲蟲成蟲及微絲蚴的活性較乙胺嗪為高，但遠(yuǎn)期療效較差。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸左旋咪唑的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽酸左旋咪唑和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸左旋咪唑和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療痔瘡。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種鹽酸左旋咪唑的藥物組合物，包括鹽酸左旋咪唑、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將車前草粉碎，用85～95％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用35％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用90％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集90％洗脫液，減壓濃縮得90％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中90％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85％的甲醇水溶液等度洗脫，收集14～18個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用90％乙醇熱回流提取，合并提取液。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在制備治療痔瘡的藥物中的應(yīng)用。上述鹽酸左旋咪唑的藥物組合物在制備治療痔瘡的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的鹽酸左旋咪唑的藥物組合物中含有鹽酸左旋咪唑和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸左旋咪唑、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)痔瘡具有治療作用；鹽酸左旋咪唑和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)痔瘡的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療痔瘡的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證分離方法：(a)將車前草(2kg)粉碎，用90％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用35％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用90％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集90％洗脫液，減壓濃縮得90％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中90％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1(11個(gè)柱體積)、60:1(9個(gè)柱體積)、30:1(9個(gè)柱體積)和15:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1(6個(gè)柱體積)、30:1(8個(gè)柱體積)和10:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85％的甲醇水溶液等度洗脫，收集14～18個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z247.1281，結(jié)合核磁特征可得分子式為C15H18O3，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-1(2.62，d，J＝4.1Hz)，H-2(2.57，dt，J＝4.1，4.7Hz)，H-3(2.42，dd，J＝12.3，3.4Hz)，H-3(2.47，dd，J＝12.3，2.9Hz)，H-5(2.24，d，J＝10.5Hz)，H-6(4.12，dd，J＝10.3，11.2Hz)，H-7(2.52，dt，J＝11.2，3.3Hz)，H-8α(2.08，m)，H-8β(1.61，ddt，J＝12.3，3.1，13.2Hz)，H-9α(1.38，dt，J＝4.1，13.2Hz)，H-9β(2.14，dt，J＝13.2，3.1Hz)，H-13(5.42，d，J＝3.3Hz)，H-13(6.12，d，J＝3.3Hz)，H-14(1.18，s)，H-15(5.02，s)，H-15(5.05，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CDCl3，125MHz)：66.2(CH，1-C)，57.3(CH，2-C)，37.9(CH2，3-C)，138.9(C，4-C)，53.8(CH，5-C)，79.6(CH，6-C)，50.3(CH，7-C)，20.6(CH2，8-C)，41.6(CH2，9-C)，37.8(C，10-C)，139.7(C，11-C)，170.5(C，12-C)，117.2(CH2，13-C)，12.3(CH3，14-C)，120.3(CH2，15-C)。紅外波譜中的1716cm-1吸收帶與UV譜中的236nm吸收帶表明該化合物含有γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步并通過分析13C-NMR譜中的δC79.6，50.3，139.7，170.5，117.2的碳信號(hào)可知存在環(huán)外亞甲基γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有15個(gè)碳信號(hào)，包括一個(gè)甲基，五個(gè)亞甲基(兩個(gè)烯烴碳)，五個(gè)次甲基(三個(gè)連氧碳)，以及四個(gè)季碳(兩個(gè)烯烴碳和一個(gè)羰基碳)。以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為四環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示一個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δH1.18(3H，s)，三個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)δH2.62(1H，d，J＝9.4Hz)、2.57(1H，dt，J＝9.4，4.7Hz)、4.12(1H，dd，J＝10.3，11.2Hz)，兩對(duì)端烯烴質(zhì)子信號(hào)δH6.12(1H，d，J＝3.3Hz)與5.42(1H，d，J＝3.3Hz)、5.05(1H，s)與5.02(1H，s)。13C-NMR譜中的δC138.9與120.3相關(guān)信號(hào)及1H-NMR譜中的δH5.05(1H，s)與5.02(1H，s)相關(guān)信號(hào)，結(jié)合HMBC譜中的H2-15與C-4相關(guān)信號(hào)暗示存在另外的一個(gè)環(huán)外亞甲基。通過1H-1HCOSY譜H-1/H-2/H2-3，H-5/H-6/H-7/H2-8/H2-9相關(guān)信號(hào)，以及HMBC譜中顯示的H-1與C-2、C-3和C-10，H-2與C-1、C-3和C-4，H2-3與C-1、C-2、C-4和C-5，H-5與C-6和C-10，H-6與C-7、C-8、C-11和C-12，H-7與C-6、C-11、C-12和C-13，H2-13與C-7和C-12，H3-14與C-10，可以構(gòu)建該化合物的連接方式，并且上述波譜數(shù)據(jù)表明該化合物為桉葉烷型倍半萜，并且存在環(huán)外亞甲基γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，C-1與C-2的化學(xué)位移以及H-H偶合常數(shù)表明C-1與C-2與氧連接形成環(huán)氧結(jié)構(gòu)。該化合物中的C-1、C-2、C-5、C-6、C-7和C-10為手性碳，通過NOESY試驗(yàn)與H-H偶合常數(shù)確認(rèn)了相對(duì)構(gòu)型。NOESY譜中H-6/H-8β、H-6/H3-14以及H-8β/H3-14的相關(guān)信號(hào)表明這些氫處在同一側(cè)，另H-1/H-5、H-1/H-9α、H-5/H-7以及H-5/H-9α的相關(guān)信號(hào)表明這些氫處在同一側(cè)，這些相關(guān)信號(hào)與相關(guān)偶合常數(shù)的結(jié)果一致，并且也表明A/B與B/C環(huán)反式連接。此外，C-1與C-2的H-H偶合常數(shù)為J1,2＝4.1Hz，因此以上相關(guān)信號(hào)可以表明該化合物的C-1、C-2、C-5、C-6、C-7和C-10構(gòu)型為1S、2R、5R、6S、7S和10R。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)例使用鹽酸灼傷人工劃傷的大鼠肛門周圍皮膚及肛門內(nèi)側(cè)的黏膜制備痔瘡模型大鼠模型，觀察藥物使被鹽酸灼傷并發(fā)生病理性改變的皮膚得到有效地恢復(fù)等方面的抗痔瘡作用。1、材料與方法1.1動(dòng)物SD大鼠180～200g，雌雄各半。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。1.2試劑與樣品鹽酸左旋咪唑購自中國藥品生物制品檢定所。化合物(Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。龍血竭膠囊用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為0.63g/kg。1.3儀器Nikon光學(xué)顯微鏡，日本Nikon生產(chǎn)。1.4大鼠分組及模型制備選健康SD品系大鼠，雌雄各半，將其肛門周圍毛發(fā)剪去并用刀劃傷，用10mol/L鹽酸1mL涂抹于去毛皮膚表面，24h后出現(xiàn)紅腫、灼傷后按體重隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(龍血竭膠囊0.63g/kg)和鹽酸左旋咪唑組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、鹽酸左旋咪唑與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1鹽酸左旋咪唑+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。各組給藥體積為1.0mL/100g，模型對(duì)照組灌胃同體積去離子水。每日1次，連續(xù)10d。1.5肛門組織病理(潰瘍、壞死)積分情況測定實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后1h，將大鼠麻醉處死，肉眼觀察評(píng)分后，取肛門組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。與模型對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。潰瘍、壞死評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：“－”計(jì)為10分；“+”計(jì)為8分；“++”計(jì)為6分；“+++”計(jì)為4分；“++++”計(jì)為2分。1.6肛門組織肉芽組織增生積分情況測定實(shí)驗(yàn)肉芽組織增生評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：“－”計(jì)為10分；“+”計(jì)為8分；“++”計(jì)為6分；“+++”計(jì)為4分；“++++”計(jì)為2分。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)痔瘡模型大鼠肛門組織病理(潰瘍、壞死)的影響與模型對(duì)照組比較，鹽酸左旋咪唑與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組肛門組織病理(潰瘍、壞死)總積分明顯減小(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，鹽酸左旋咪唑組、化合物(Ⅰ)組肛門組織病理(潰瘍、壞死)總積分減小(P＜0.05)。結(jié)果見表1。2.2對(duì)痔瘡模型大鼠肛門組織肉芽組織增生的影響與模型對(duì)照組比較，鹽酸左旋咪唑與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組肛門組織肉芽組織增生總積分明顯增加(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，鹽酸左旋咪唑組、化合物(Ⅰ)組肛門組織肉芽組織增生總積分增加(P＜0.05)。結(jié)果見表1。表1對(duì)痔瘡模型大鼠肛門組織病理(潰瘍、壞死)和肛門組織肉芽組織增生的影響組別組織病理總積分肉芽組織增生總積分模型對(duì)照組4541陽性對(duì)照組6765鹽酸左旋咪唑組5552化合物(Ⅰ)組5953鹽酸左旋咪唑與化合物(Ⅰ)組合物組6863結(jié)果表明，鹽酸左旋咪唑、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)痔瘡具有治療作用；鹽酸左旋咪唑和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)痔瘡的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療痔瘡的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3