本發(fā)明涉及免疫促進技術領域,特別是指一種生物多肽的提取方法。
背景技術:
當今社會,科學技術發(fā)展飛速,所以人們的生活水平逐步提高,生活質量也變得更好。但是與此同時,激烈的行業(yè)競爭,越來越快的生活節(jié)奏使得人類面對的生活和工作等方面的壓力也越來越大,而壓力與疾病是緊緊相連的。有研究顯示,人的壓力與免疫系統(tǒng)息息相關。當人們長時間處于壓力狀態(tài),免疫功能就會下降,人體對疾病的敏感程度增大,容易導致疾病的易感和易發(fā)。還有報道顯示,吸煙對人體有多方面的害處,其中一個就是會使得人體的免疫功能受損,使得人體免疫力下降。一個人的精神狀態(tài)可能與身體的抵抗力有關,還有一個與免疫效應有關的環(huán)節(jié)。據(jù)相關文獻,一定程度的心理壓力會使得免疫系統(tǒng)受到傷害和功能減弱,故適當放松及對行為壓力的調控身心健康有所幫助。當人體免疫功能紊亂,或者是免疫系統(tǒng)不完善時,就會導致某些疾病的反復發(fā)作。當人的身體處于免疫力低下狀態(tài)時,就會很容易受到感染或者患上癌癥;而當人體處于免疫力超常時也會有不好的情況發(fā)生,如有過敏反應的發(fā)生或想著容易引發(fā)自身免疫疾病。
隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展,我們逐漸認識到很多疾病的發(fā)生與發(fā)展和免疫系統(tǒng)功能的紊亂有著緊密的聯(lián)系。影響免疫系統(tǒng)功能的因素有很多:①先天因素,主要為遺傳因素和原發(fā)性免疫缺陷??;②后天因素,相對較為復雜,包含疾病因素、心理因素、神經內分泌因素、營養(yǎng)因素、某些藥物治療方法和年齡因素等。
免疫調節(jié)劑是一類能夠增強、促進或調節(jié)免疫功能的生物制品,它對治某些繼發(fā)性免疫缺陷癥、某些惡性腫瘤免疫功能低下和等疾病有一定的作用,但對免疫功能正常的人及動物卻不起什么作用。它的主要機制首先是通過非特異性的方式增強T、B淋巴細胞的反應性,或是提高了巨噬細胞的活性,也可以誘導干擾素或激活補體的產生。
脾臟生物多肽就是免疫調節(jié)劑中的一種,脾臟多肽存在于脾臟中。脾臟是人體免疫器官中最大的一個,它占全身所以淋巴細胞總量的25%,富含巨噬細胞和各種淋巴細胞,是人體細胞免疫和體液免疫的中心。脾臟是T淋巴細胞和B淋巴細胞定居的部位,也是各種免疫反應發(fā)生的場所。脾臟多肽是一種可透析的小分子多肽和核苷酸的復合物,由具有免疫活性的T淋巴細胞釋放出的,存在于人或動物白細胞中,能夠調節(jié)機體的免疫功能。多年來,脾臟多肽在治療各種免疫疾病,腫瘤等都有一定的療效。脾臟多肽可以作為一種良好的醫(yī)藥化工原料和功能性食品,據(jù)報道,脾臟多肽具有天然的生物活性,能夠抑制腫瘤的生長,提高機體的免疫能力,還具有抗氧化,促進凝血等功能。
惡性腫瘤患者在接受放化療的同時,機體的健康細胞便無可避免的遭受各種暫時性和長期性損害,如何提高惡性腫瘤患者的生存質量已成為近年十分重要的發(fā)展方向。
環(huán)磷酰胺是一種經典的抗癌藥,在醫(yī)學上常用于癌癥的治療,同時它也是一種療效很好的免疫抑制劑,可抑制各類動物的體液免疫與細胞免疫應答。利用環(huán)磷酰胺誘導小鼠致免疫抑制模型,其機體免疫功能低下可從諸多方面看出。本實驗選擇測定抗體生成量、TNF-α和IL-2的水平和臟器系數(shù)這四個指標以觀察脾臟多肽對小鼠機體免疫功能的影響。
目前,脾臟多肽可以用酶解法,凍融法等方法來制備。酶解法是采用DNA酶,RNA酶和胰蛋白酶對動物脾臟等器官組織進行消化處理,將水解產物透析之后得到的溶液,該方法對生產條件的要求較為嚴格,需要確定最佳的生產條件,故目前在生產中應用較少。凍融法則在生產過程中需要反復冷凍,這是一個相對耗時和耗能的環(huán)節(jié),且需要確定最佳的凍融次數(shù),所以生產成本相對較高。
因此,尋找一種新的提取制備工藝并檢驗其藥物療效顯得非常必要,且由于近幾年養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達,生豬養(yǎng)殖數(shù)量較多,但是豬脾臟卻通常被作為廢棄物來處理,如能將其用于生產脾臟多肽,那么就能夠變廢為寶,能夠為脾臟多肽的生產開辟廣闊的藥用資源,具有很好的市場前景。
技術實現(xiàn)要素:
有鑒于此,本發(fā)明所要解決的技術問題,就是提出一種生物多肽的提取方法。本方法分析了近幾年海洋生物、大腦、肝臟、胸腺、脾臟多肽的制備工藝技術的科學成果,對以往的工藝進行改進,改進后的提取方法,制得的生物多肽產物活性強,工藝產量相對前者有所提高,成本低,大大提高了其經濟效益。
為解決上述技術問題,本發(fā)明采用以下技術方案予以實現(xiàn):
一種生物多肽的提取方法,包括如下步驟:
(1)將新鮮海洋生物或健康動物的大腦、肝臟、脾臟或胸腺剪去脂肪和外包膜后,用絞肉機絞碎、稱重,以料液比為1:10,在冰浴中用高速勻質機進行均質處理,勻漿用8層紗布進行粗過濾,然后再用連續(xù)流離心機離心處理,收集上清液,使獲得多肽的粒徑在0.5μm-50μm之間;
(2)將獲得的上清液用微波提取機提取處理,然后迅速置于4℃冰水中,使獲得多肽的粒徑在0.05μm-10μm之間;
(3)提取液在4℃冰水中進行超聲處理,使獲得多肽的粒徑在0.01μm-5μm之間;
(4)超聲后的提取液用截留分子量為1000-12500doltons的側向超濾膜進行超濾;
(5)將獲得的超濾液冷凍干燥后得到生物多肽干粉,低溫儲存?zhèn)溆谩?/p>
作為優(yōu)選地,所述步驟(1)中的新鮮海洋生物為蠔或蝦或蟹或海參,健康動物為豬或馬或?;蜓蚧蝙Z。
作為優(yōu)選地,所述步驟(1)中勻漿處理為使用15000-25000rpm的高速勻質機處理15-30分鐘。
作為優(yōu)選地,所述步驟(1)中離心處理為使用12000×g連續(xù)流離心機,4℃條件下離心20分鐘。
作為優(yōu)選地,所述步驟(2)中提取處理為使用500-2500W的微波提取機處理15-45分鐘。
作為優(yōu)選地,所述步驟(3)中超聲處理為使用聲波強度在0.5-15W/cm2的超聲波處理30-60分鐘。
與現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明具有的有益效果為:本發(fā)明的方法能提高生物多肽產量230%-450%,從而提高了動物內臟的提取生物多肽的得率,且制得產物活性強,成本低,大大提高了其經濟效益。
具體實施方式
為讓本領域的技術人員更加清晰直觀的了解本發(fā)明,對本發(fā)明作進一步的說明。
一種生物多肽的提取方法,包括如下步驟:
(1)將新鮮健康動物脾臟剪去脂肪、外包膜后,用絞肉機絞碎、稱重,料液比為1:10,在冰浴中用15000-25000rpm的高速勻質機進行勻漿15-30分鐘,用8層紗布進行粗過濾,用連續(xù)流離心機在12000×g,4℃條件下離心20分鐘,收集上清液,使獲得多肽的粒徑大約為0.5μm-50μm;
(2)將得到的上清液用500-2500W微波提取機處理15-45分鐘,然后迅速置于4℃冰水中,使獲得多肽的粒徑大約為0.05μm-10μm;
(3)將得到的提取液置于4℃冰水中用聲波強度在0.5-15W/cm2的超聲波進行超聲處理30-60分鐘,使獲得多肽的粒徑大約為0.01μm-5μm;
(4)將經超聲處理的提取液用截留分子量為1000-12500doltons的側向超濾膜進行超濾;
(5)將超濾液冷凍干燥后得到生物多肽干粉,低溫儲存?zhèn)溆谩?/p>
將本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比,生物多肽的產量提高230%-450%,而且制備過程用時短,效率高,成本低。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已,并不用以限制本發(fā)明,凡在本發(fā)明的精神和原則之內,所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。