本發(fā)明涉及一種促進毛發(fā)再生的細胞營養(yǎng)液的制備方法，具體涉及一種人源性細胞因子生發(fā)營養(yǎng)液及其制備方法。

背景技術(shù)：

近年來，隨著社會競爭增加以及環(huán)境日益惡化，脫發(fā)發(fā)生的比例呈上升態(tài)勢，并且年輕化趨勢明顯。目前國內(nèi)外用于治療脫發(fā)的藥品主要為西藥，如米諾地爾，其經(jīng)頭皮吸收后可擴張頭皮下血管，改善毛囊周圍的微循環(huán)，減少毛囊周圍炎癥細胞浸潤，從而使萎縮的毛囊增大并促進毛發(fā)的生長，使毳毛變成終毛；此外，非那雄胺是一種能抑制5α-還原酶的活性以阻止雄性激素合成的藥物。但米諾地爾和非那雄胺主要是針對雄激素性脫發(fā)有較好的療效，有一定局限性，且要長期用藥，對人體會產(chǎn)生副作用。國內(nèi)也有很多主要成分為中藥的產(chǎn)品，但是由于其成分單一，沒有從毛囊生理性生長的角度去解決問題，所以效果并不顯著。

隨著對毛囊微觀結(jié)構(gòu)及毛發(fā)再生機理研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)毛發(fā)再生受到毛囊自身干細胞及毛囊周圍干細胞微環(huán)境的綜合調(diào)控。干細胞是一類具有自我復(fù)制，自我更新的原始細胞，具有向多種組織細胞分化的能力，在體內(nèi)能通過分泌多種調(diào)控因子從而調(diào)節(jié)組織器官的正常生理代謝。因此，開發(fā)針對于毛囊部位干細胞微環(huán)境修復(fù)的再生產(chǎn)品成為治療脫發(fā)藥物的發(fā)展趨勢。

中國專利CN200510048870.7公開了“一種治療斑禿藥物的制備方法”采用含人AB型血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)低傳代人毛乳頭細胞，收集低傳代人毛乳頭細胞培養(yǎng)上清，將所收集上清液制備成凍干粉。此發(fā)明所制備的藥物在治療斑禿中有明顯的療效，且本藥物所用細胞和培養(yǎng)血清對人體均無抗原性，克服激素治療斑禿給人體帶來的副作用。但毛乳頭細胞的獲得是取意外死亡的正常健康青年枕后一手掌大小頭皮，而且只能使用低傳代人毛乳頭細胞的培養(yǎng)上清來制備凍干粉，其取材受限從而注定不能用于臨床推廣。

中國專利CN101336932A公開了“一種豬毛乳頭細胞培養(yǎng)上清的藥物在治療禿發(fā)中的應(yīng)用”采用含人AB型血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)低傳代豬毛乳頭細胞，收集細胞培養(yǎng)上清，將所收集的上清液制備成凍干粉用于禿發(fā)的治療。由于豬毛乳頭細胞來源廣泛，因此可以解決人毛乳頭細胞來源有限這一瓶頸，為產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用于臨床治療禿發(fā)奠定了基礎(chǔ)。但是，豬的毛發(fā)并不像人的毛發(fā)能不斷長長，因此，其毛發(fā)生長的干細胞調(diào)控機制及干細胞微環(huán)境和人的毛發(fā)生長存在差異，細胞培養(yǎng)后有效成分的種類和含量也存在差異，不利于臨床使用。

綜上所述，由于現(xiàn)有生發(fā)藥物不能從細胞再生的角度去解決脫發(fā)問題，而現(xiàn)有細胞條件培養(yǎng)液生發(fā)成分由于取材受限或者不能用于臨床推廣，因此，開發(fā)一款能從生發(fā)本質(zhì)上解決脫發(fā)問題，并且利于臨床使用的治療脫發(fā)的藥物迫在眉睫。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供一種促進毛發(fā)再生的細胞營養(yǎng)液的制備方法，主要解決了現(xiàn)有技術(shù)中不能從細胞再生的角度去解決脫發(fā)問題，同時現(xiàn)有細胞培養(yǎng)液生發(fā)成分由于取材受限無法用于臨床推廣。

本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：所提供的促進毛發(fā)再生的細胞營養(yǎng)液的制備方法，包括以下步驟：

1]ADSCs的原代分離

將脂肪組織離心處理，去除液體部分，得固態(tài)的脂肪顆粒；然后將脂肪顆粒去除結(jié)締組織，剪碎，加入生理鹽水進行清洗，離心，去除液體部分，得固態(tài)的脂肪顆粒；再加入生理鹽水配置的膠原酶溶液，震蕩，收集消化液，離心，去除上清，取細胞沉淀；再加入生理鹽水，離心，對細胞進行清洗，取細胞沉淀，用1-10ml培養(yǎng)液重懸，接種于培養(yǎng)瓶中，置于恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；其中，脂肪組織離心目的實去除抽脂前麻醉過程中注射的腫脹液，使脂肪組織純度更高；去除結(jié)締組織并將組織塊剪碎是使膠原酶對脂肪組織消化更充分。

2]ADSCs的擴大培養(yǎng)

將步驟1所得的原代脂肪細胞培養(yǎng)5-7天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS清洗一次，用胰酶消化后，根據(jù)細胞密度進行1:2-3傳代培養(yǎng)(當(dāng)細胞密度比較大時，進行1:3傳代培養(yǎng)；當(dāng)細胞密度比較小時，進行1：2傳代培養(yǎng))，之后每48-72h傳代一次；

3]ADSCs的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將步驟2中10代以內(nèi)ADSCs接種于6孔板中，培養(yǎng)1-2天，棄去培養(yǎng)液，用PBS清洗后，經(jīng)過UVB照射和成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理后，即得促進毛發(fā)再生的細胞營養(yǎng)液。其中，UVB照射是由于低劑量的UVB照射可以誘導(dǎo)活性氧的生成，并且可以明顯的增加ADSCs的存活能力和旁分泌能力，也能促進ADSCs的血管形成能力以及毛發(fā)再生能力；成纖維細胞條件培養(yǎng)的使用是由于成纖維細胞分泌的多種細胞因子可促進貫穿皮下組織、真皮層、表皮層的毛囊器官的正常代謝，因此采用成纖維細胞的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)ADSCs可以模擬在體環(huán)境下細胞的生存代謝過程，促進細胞分泌更多利于細胞微環(huán)境調(diào)控的細胞因子。

上述步驟1具體是：將抽脂獲得的脂肪組織在1000-2000r/min且溫度為21℃條件下離心處理，去除液體部分，得固態(tài)的脂肪顆粒；然后將脂肪顆粒去除結(jié)締組織，剪碎，加入等體積的生理鹽水進行清洗，在1000-1500r/min且溫度為21℃條件下離心，去除液體部分，得固態(tài)的脂肪顆粒；再加入等體積生理鹽水配置的膠原酶溶液，震蕩消化，收集消化液，在500-1200r/min且溫度為21℃條件下離心，去除上清，取細胞沉淀；再加入生理鹽水，在500-1500r/min且溫度為21℃條件下離心，對細胞進行清洗，取細胞沉淀，用1-10ml培養(yǎng)液重懸，計數(shù)后以1×10⁶個細胞/瓶接種于培養(yǎng)瓶中，置于質(zhì)量濃度為5％的CO₂、溫度為37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

上述步驟1中生理鹽水采用醫(yī)用質(zhì)量濃度為0.9％的NaCl注射液。

上述步驟3中成纖維細胞條件培養(yǎng)液是由成纖維細胞培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液換液組成。

上述成纖維細胞培養(yǎng)液是通過將原代2-7代成纖維細胞按1-3×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)三天后收集培養(yǎng)液制備。其中，成纖維細胞的培養(yǎng)和使用是由于成纖維細胞為真皮層主要結(jié)構(gòu)細胞，在毛囊的生長發(fā)育過程中，成纖維細胞通過分泌細胞因子參與毛囊的正常生長代謝；原代2-7代成纖維細胞的選擇是由于低代數(shù)的原代細胞具有更好的細胞因子分泌功能。

本發(fā)明的優(yōu)點：

1、本發(fā)明制備的細胞營養(yǎng)液可以從細胞再生角度解決脫發(fā)問題，ADSCs條件培養(yǎng)液在毛囊周期性重建過程中，能激活毛囊干細胞微環(huán)境，調(diào)控毛囊正常生長。

2、本發(fā)明采用低劑量的UVB照射可以明顯的增加ADSCs的存活、遷移、旁分泌能力，血管形成能力以及毛發(fā)再生能力。

3、本發(fā)明采用成纖維細胞的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)ADSCs可以模擬在體環(huán)境下細胞的生存代謝過程，促進細胞分泌更多利于細胞微環(huán)境調(diào)控的細胞因子。

4、本發(fā)明的制備細胞營養(yǎng)液的細胞取材方便，可取材于臨床抽脂后的脂肪廢棄物及其他外科手術(shù)切除的皮片，來源廣泛，便于臨床推廣。

附圖說明

圖1是本發(fā)明細胞營養(yǎng)液中所含細胞因子檢測結(jié)果圖；

圖2是本發(fā)明細胞營養(yǎng)液用于小鼠毛發(fā)再生效果圖。

具體實施方式

毛囊是包圍在毛發(fā)根部的囊狀組織，內(nèi)層是上皮組織性毛囊，外層是結(jié)締組織性毛囊，內(nèi)層與表皮相連，外層則與真皮相連。毛囊由毛桿，毛凸，毛球，毛乳頭，毛基質(zhì)等部分組成。神經(jīng)纖維末梢使毛囊具有感覺的功能，動脈和靜脈毛細血管叢給毛囊提供血液。毛囊的最深處是位于角質(zhì)層3-7mm的毛乳頭，它含有神經(jīng)和血管，向毛桿提供養(yǎng)分。毛囊的發(fā)育經(jīng)過表皮和真皮之間一系列復(fù)雜的相互作用而形成，且具有周期性。

皮下脂肪組織是毛囊重建和再生最基本的宏觀環(huán)境。脂肪組織可取材于臨床抽脂后的脂肪廢棄物及其他外科手術(shù)切除的皮片，來源廣泛。脂肪系細胞已被定義為皮膚微環(huán)境調(diào)控細胞，調(diào)節(jié)毛囊干細胞的激活。脂肪間充質(zhì)干細胞(Adipose-Derived Stem Cells，ADSCs)的數(shù)目隨毛發(fā)生長周期發(fā)生改變：在毛囊干細胞生長期達到頂峰，并在退行期減小。在毛囊周期性重建過程中，ADSCs最本質(zhì)的功能是分泌生長因子以激活毛囊干細胞微環(huán)境，調(diào)控毛囊正常生長。此外，ADSCs具有血管生成以及誘導(dǎo)組織血管再生的能力，能夠為毛囊再生提供充足的血液供應(yīng)。

有研究表明，ADSCs條件培養(yǎng)液可以促進體外培養(yǎng)的毛乳頭細胞的增殖，而動物在體實驗也表明ADSCs條件培養(yǎng)液可以縮短小鼠毛發(fā)再生周期，并且毛發(fā)再生部位有大量新血管形成。進一步驗證表明，ADSCs條件培養(yǎng)液中VEGF的表達量明顯增高。

外部刺激，像低氧，可以誘導(dǎo)ADSCs的增殖、遷移和促進其旁分泌功能，刺激后，ADSCs通過生成活性氧(Reactive oxygen species，ROS)而促進傷口愈合和毛發(fā)再生。紫外線B(Ultraviolet B，UVB)，像低氧一樣，是調(diào)節(jié)ROS形成的重要因素。作為一種電磁輻射，UVB比可見光和紫外線A的波長都短，在280-315nm之間。皮膚上照射UVB，可誘導(dǎo)維生素D的生成，而且很多種短時UVB照射受益于身體都是與維生素生成有關(guān)。已有研究表明，低劑量的UVB照射可以明顯的增加ADSCs的存活、遷移、旁分泌能力，血管形成能力以及毛發(fā)再生能力。

由于在毛囊的生長發(fā)育過程中，上皮組織成分、真皮組織成分及皮下組織都參與其干細胞微環(huán)境的再造過程，因此，如果體外培養(yǎng)的細胞模擬體內(nèi)的生存環(huán)境，細胞合成和分泌的蛋白質(zhì)就更接近于在體內(nèi)環(huán)境下蛋白質(zhì)的生成。

成纖維細胞(Fibroblast，F(xiàn)b)是真皮層的一種具有增殖及分化能力的細胞，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來，也具有干細胞的特性，有明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌功能，對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。同時，由于真皮層細胞微環(huán)境還能為表皮層及皮下組織層提供必需的營養(yǎng)供給，如成纖維細胞分泌的多種細胞因子可促進貫穿皮下組織、真皮層、表皮層的毛囊器官的正常代謝。因此，采用成纖維細胞的條件培養(yǎng)液(Fibroblastconditioned medium，F(xiàn)b-CM)培養(yǎng)ADSCs可以模擬在體環(huán)境下細胞的生存代謝過程，促進細胞分泌更多利于細胞微環(huán)境調(diào)控的細胞因子。

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進一步詳細說明：

實施例1：

步驟一：ADSCs的原代分離

將抽脂獲得的脂肪組織1500r/min，21℃離心5min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再將得到的脂肪顆粒去除結(jié)締組織，用組織剪將大塊組織剪碎，加入等體積生理鹽水進行清洗，1000r/min，21℃離心10min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再加入等體積生理鹽水配置的膠原酶溶液，200U/ml，37℃，恒溫震蕩消化60min，收集消化液，800r/min，21℃離心10min，去除上清，取細胞沉淀，再加入5ml生理鹽水，800r/min，21℃離心10min，對細胞進行清洗，取細胞沉淀，用3ml培養(yǎng)液重懸，計數(shù)后以1×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO₂恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；

步驟二：ADSCs的擴大培養(yǎng)

將步驟一原代脂肪細胞培養(yǎng)5天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS(磷酸緩沖鹽溶液)清洗一次，用0.25％胰酶消化后，進行1:2傳代培養(yǎng)。以后每48h傳代一次。

步驟三：成纖維細胞條件培養(yǎng)液的準(zhǔn)備

將第5代成纖維細胞按2×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)三天后收集培養(yǎng)液，用于ADSCs的誘導(dǎo)。

步驟四：ADSCs的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將步驟二中的第5代ADSCs以1.3×10⁵個細胞/孔接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)液，用2ml PBS清洗兩次后，分為不同的處理組，分別為對照組、UVB組、Fb-CM組、UVB+Fb-CM組四組。對照組為正常培養(yǎng)的ADSCs，UVB組為UVB照射處理的ADSCs，F(xiàn)b-CM組為成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理的ADSCs、UVB+Fb-CM組為UVB和成纖維細胞條件培養(yǎng)液同時處理的ADSCs。UVB照射處理為每孔加入1ml PBS，用UVB 30mJ/cm²照射4min，后棄去PBS；成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理為用70％的步驟三中收集的成纖維細胞培養(yǎng)液和30％的新鮮培養(yǎng)液換液，重新進行細胞的培養(yǎng)。

實施例2：

步驟一：ADSCs的原代分離

將抽脂獲得的脂肪組織2000r/min，21℃離心3min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再將得到的脂肪顆粒去除結(jié)締組織，用組織剪將大塊組織剪碎，加入等體積生理鹽水進行清洗，1500r/min，21℃離心3min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再加入等體積生理鹽水配置的膠原酶溶液，200U/ml，37℃，恒溫震蕩消化30min，收集消化液，1000r/min，21℃離心8min，去除上清，取細胞沉淀，再加入8ml生理鹽水，1000r/min，21℃離心8min，對細胞進行清洗，取細胞沉淀，用5ml培養(yǎng)液重懸，計數(shù)后以1×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO₂恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；

步驟二：ADSCs的擴大培養(yǎng)

將步驟一原代脂肪細胞培養(yǎng)6天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS(磷酸緩沖鹽溶液)清洗一次，用0.25％胰酶消化后，進行1:2傳代培養(yǎng)。以后每48h傳代一次。

步驟三：成纖維細胞條件培養(yǎng)液的準(zhǔn)備

將第2代成纖維細胞按1×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)三天后收集培養(yǎng)液，用于ADSCs的誘導(dǎo)。

步驟四：ADSCs的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將步驟二中的第3代ADSCs以1×10⁵個細胞/孔接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)液，用1ml PBS清洗兩次后，分為不同的處理組，分別為對照組、UVB組、Fb-CM組、UVB+Fb-CM組四組。對照組為正常培養(yǎng)的ADSCs，UVB組為UVB照射處理的ADSCs，F(xiàn)b-CM組為成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理的ADSCs、UVB+Fb-CM組為UVB和成纖維細胞條件培養(yǎng)液同時處理的ADSCs。UVB照射處理為每孔加入1ml PBS，用UVB 10mJ/cm²照射5min，后棄去PBS；成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理為用50％的步驟三中收集的成纖維細胞培養(yǎng)液和50％的新鮮培養(yǎng)液換液，重新進行細胞的培養(yǎng)。

實施例3：

步驟一：ADSCs的原代分離

將抽脂獲得的脂肪組織1000r/min，21℃離心10min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再將得到的脂肪顆粒去除結(jié)締組織，用組織剪將大塊組織剪碎，加入等體積生理鹽水進行清洗，1200r/min，21℃離心5min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒。再加入等體積生理鹽水配置的膠原酶溶液，200U/ml，37℃，恒溫震蕩消化45min，收集消化液，1200r/min，21℃離心5min，去除上清，取細胞沉淀，再加入10ml生理鹽水，1500r/min，21℃離心5min，對細胞進行清洗，取細胞沉淀，用10ml培養(yǎng)液重懸，計數(shù)后以1×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO₂恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；

步驟二：ADSCs的擴大培養(yǎng)

將步驟一原代脂肪細胞培養(yǎng)7天后，棄去培養(yǎng)液，用PBS(磷酸緩沖鹽溶液)清洗一次，用0.25％胰酶消化后，進行1:3傳代培養(yǎng)。以后每72h傳代一次。

步驟三：成纖維細胞條件培養(yǎng)液的準(zhǔn)備

將第7代成纖維細胞按3×10⁶個細胞/瓶接種于75cm²培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)三天后收集培養(yǎng)液，用于ADSCs的誘導(dǎo)。

步驟四：ADSCs的誘導(dǎo)培養(yǎng)

將步驟二中的第8代ADSCs以3×10⁵個細胞/孔接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)液，用2ml PBS清洗兩次后，分為不同的處理組，分別為對照組、UVB組、Fb-CM組、UVB+Fb-CM組四組。對照組為正常培養(yǎng)的ADSCs，UVB組為UVB照射處理的ADSCs，F(xiàn)b-CM組為成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理的ADSCs、UVB+Fb-CM組為UVB和成纖維細胞條件培養(yǎng)液同時處理的ADSCs。UVB照射處理為每孔加入1ml PBS，用UVB 100mJ/cm²照射3min，后棄去PBS；成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理為用30％的步驟三中收集的成纖維細胞培養(yǎng)液和70％的新鮮培養(yǎng)液換液，重新進行細胞的培養(yǎng)。

對制備的促進毛發(fā)再生的細胞營養(yǎng)液進行功能評價，具體如下：

對步驟四中不同處理換液后的ADSCs繼續(xù)培養(yǎng)48h后，收集上清，進行不同條件處理下條件培養(yǎng)液毛發(fā)再生功效的驗證。用PBS清洗細胞兩次，用Trizol試劑進行裂解并提取RNA，通過RT-PCR實驗進行基因水平細胞因子表達量檢測。

動物實驗是公認的直觀評價產(chǎn)品毛發(fā)再生功能的在體實驗。其具體操作步驟為：用松香/蠟混合物拔毛法對小鼠進行背部脫毛，誘導(dǎo)生長期毛發(fā)，將脫毛后的小鼠分為對照組、UVB組、Fb-CM組、UVB+Fb-CM組四組。對照組為正常培養(yǎng)的ADSCs，UVB組為UVB照射處理的ADSCs，F(xiàn)b-CM組為成纖維細胞條件培養(yǎng)液處理的ADSCs、UVB+Fb-CM組為UVB和成纖維細胞條件培養(yǎng)液同時處理的ADSCs。脫毛后每隔5天，每組條件培養(yǎng)液以200ul/cm²進行脫毛部位皮下注射，其余時間每天均勻涂抹，觀察小鼠背部皮膚顏色變化和毛發(fā)生長情況。

細胞實驗可以客觀的檢測不同處理下細胞營養(yǎng)液中各種細胞因子的含量，為最優(yōu)化的細胞處理工藝的選擇提供理論依據(jù)。其具體操作步驟為：將對照組、UVB組、Fb-CM組、UVB+Fb-CM組細胞收集條件培養(yǎng)液后，用PBS清洗兩次，每孔加入1ml Trizol裂解液，靜置5min后收樣于無酶1.5ml EP管中。按照Trizol試劑盒細胞樣品RNA提取步驟，進行RNA的抽提。抽提完成后，進行RNA濃度及A260/A280的測定。按照PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesiskit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明書進行RNA逆轉(zhuǎn)，并以cDNA為模板用RT-PCR檢測目的基因表達。

通過RT-PCR的方法，對不同處理條件下ADSCs基因水平表達干細胞因子(Stem cell factor，SCF)、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming growth factor beta，TGF-β)、肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)、纖維母細胞生長因子7(Fibroblast growth factor 7，F(xiàn)GF7)、纖維母細胞生長因子5(Fibroblast growth factor 5，F(xiàn)GF5)的量進行檢測。結(jié)果表明，UVB+Fb-CM組SCF、VEGF、TGF-β、HGF、FGF7的表達量明顯高于其余各組，這些細胞因子在毛發(fā)再生過程中，通過促進毛囊干細胞增殖、縮短毛乳頭細胞生長停滯期、促進血管發(fā)生及組織再生等不同的作用調(diào)控毛囊生長周期，促進毛發(fā)再生。而FGF5通過阻斷毛乳頭細胞的激活，抑制毛發(fā)生長。本研究結(jié)果表明，不同處理組FGF5的表達量沒有顯著性差異，見附圖1。

不同處理調(diào)價下收集到的條件培養(yǎng)液用于脫毛小鼠21天后效果圖。從結(jié)果可知，UVB+Fb-CM組小鼠毛發(fā)生長最好，脫毛區(qū)域已經(jīng)全部長出毛發(fā)；對照組仍有部分區(qū)域未長出毛發(fā)。UVB組和Fb-CM組的毛發(fā)再生效果優(yōu)于對照組，但均劣于UVB+Fb-CM組，見附圖2。