本發(fā)明屬于分子標記技術(shù)，具體涉及一種紅麻微衛(wèi)星DNA標記的指紋圖譜及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

紅麻(Hibiscus cannabinus)是我國重要的天然韌皮纖維作物，主要在中國、泰國和印度種植。生產(chǎn)上栽培紅麻染色體數(shù)均為2n=2X=36。紅麻具有耐旱、耐鹽堿、抗逆性強、根系發(fā)達、生長速度快、生物產(chǎn)量高、易栽培等特點，作為造紙和麻紡工業(yè)的原料，近年來在建材、可降解性塑料、吸污、飼料、麻油和藥用等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。

優(yōu)質(zhì)紅麻品種在紅麻單產(chǎn)和質(zhì)量中的貢獻率舉足輕重。我國自20世紀20年代就開始紅麻的種植，在70年代開始引種育種研究，先后推出了福紅1號、福紅2號、福紅952和福紅航992等，其中福紅952以其高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗等特征成為我國紅麻主產(chǎn)區(qū)品種審定的對照品種。

1999年我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種知識產(chǎn)權(quán)，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產(chǎn)權(quán)，為了建立紅麻品種登記制度來真正保護我國的品種產(chǎn)權(quán)，必須首先建立成熟的品種鑒定技術(shù)，為新品種登記奠定基礎(chǔ)。就國內(nèi)而言，由于20世紀地域間引種利用，紅麻品種同種異名現(xiàn)象十分嚴重，地方品種遺傳相似性高，傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)和細胞學(xué)鑒定方法很難做到準確而真實的鑒定紅麻的品種差別，為此需要在分子水平上進行分析鑒定。

DNA指紋圖譜能夠從DNA水平上鑒定出品種間的差異或遺傳相似性。而微衛(wèi)星（又稱為簡單重復(fù)序列，SSR）是由1-6個核苷酸組成的短序列串聯(lián)重復(fù)多次而組成的一段DNA。由于微衛(wèi)星中重復(fù)單元的重復(fù)次數(shù)不同，因而擴增出的微衛(wèi)星序列的長度呈現(xiàn)多態(tài)性。微衛(wèi)星序列具有多態(tài)性較高，重復(fù)性和穩(wěn)定性好等特點，是十分有效的分子標記，被廣泛應(yīng)用于品種的指紋圖譜構(gòu)建等領(lǐng)域。

為了有效保護我國紅麻的品種知識產(chǎn)權(quán)，有必要在我國開展紅麻開發(fā)微衛(wèi)星標記開發(fā)，并應(yīng)用于紅麻優(yōu)良品種 “分子身份證”構(gòu)建的研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜及其應(yīng)用，該指紋圖譜與常規(guī)形態(tài)學(xué)和細胞學(xué)檢測相比，具有檢測時間短，準確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點。

本發(fā)明提供了一種獲取紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜的專用引物，所述引物為64對SSR引物，其SSR引物序列如SEQ ID NO. 1-128所示。

本發(fā)明提供了一種紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜，選用如表1所示的來自不同地區(qū)的24個紅麻品種/系為供試材料.

表1 供試紅麻種質(zhì)資源的品種名稱及來源

根據(jù)上述24個品種所建立的指紋圖譜用數(shù)字表示為DNA fingerprint No. 1-24所示（表2）。其中，“1”代表圖譜中某個位置上有擴增條帶存在，而“0”代表圖譜中某個位置上沒有擴增條帶存在。

表2 利用64對SSR引物構(gòu)建24份紅麻的指紋信息

其中，無條帶的記為“0”，有條帶的記為“1”。

64對引物產(chǎn)生的215個SSR標記：HcES001-750, HcES005-90, HcES007-250, HcES007-80, HcES008-150, HcES011-650, HcES011-250, HcES011-220, HcES012-850, HcES012-550, HcES012-300, HcES012-190, HcES012-140, HcES013-900, HcES013-850, HcES013-250, HcES013-220, HcES013-150, HcES013-120, HcES013-80, HcES014-900, HcES014-300, HcES014-180, HcES014-80, HcES015-160, HcES015-140, HcES020-500, HcES020-200, HcES020-140, HcES020-120, HcES021-150, HcES021-130, HcES021-120, HcES021-80, HcES029-450, HcES029-210, HcES029-120, HcES029-80, HcES030-210, HcES030-120, HcES030-90, HcES031-280, HcES031-250, HcES031-150, HcES032-280, HcES032-80, HcES034-600, HcES034-500, HcES034-240, HcES034-220, HcES034-150, HcES034-120, HcES037-190, HcES037-90, HcES037-80, HcES039-550, HcES039-180, HcES039-80, HcES041-900, HcES041-300, HcES041-150, HcES043-800, HcES043-650, HcES043-260, HcES043-120, HcES043-80, HcES044-400, HcES044-200, HcES045-220, HcES045-180, HcES045-120, HcES048-500, HcES048-260, HcES048-80, HcES049-180, HcES049-100, HcES049-80, HcES051-500, HcES051-240, HcES051-150, HcES054-220, HcES054-140, HcES054-80, HcES055-900, HcES055-800, HcES055-600, HcES055-550, HcES055-120, HcES055-90, HcES056-600, HcES056-550, HcES056-250, HcES056-120, HcES056-80, HcES059-80, HcES063-900, HcES063-600, HcES063-260, HcES063-140, HcES064-260, HcES064-120, HcES064-80, HcES067-190, HcES067-80, HcES070-350, HcES070-250, HcES070-220, HcES070-200, HcES070-150, HcES070-80, HcES071-300, HcES072-200, HcES072-180, HcES072-120, HcES072-100, HcES073-190, HcES073-180, HcES073-150, HcES073-140, HcES073-120, HcES073-110, HcES075-550, HcES075-280, HcES075-220, HcES075-200, HcES075-150, HcES075-120, HcES077-700, HcES077-80, HcES078-100, HcES078-80, HcES079-700, HcES079-400, HcES079-180, HcES079-140, HcES079-90, HcES079-80, HcES080-200, HcES080-150, HcES080-90, HcES085-500, HcES085-450, HcES085-380, HcES085-260, HcES085-220, HcES085-200, HcES086-150, HcES086-120, HcES086-100, HcES086-80, HcES087-550, HcES087-250, HcES090-250, HcES090-220, HcES090-180, HcES090-160, HcES090-140, HcES090-120, HcES090-100, HcES090-80, HcES091-700, HcES091-260, HcES091-140, HcES091-100, HcES091-80, HcES093-280, HcES093-160, HcES093-90, HcES093-80, HcEMS022-370, HcEMS022-310, HcEMS022-170, HcEMS022-160, HcEMS022-130, HcEMS023-550, HcEMS023-200, HcEMS023-180, HcEMS023-160, HcEMS023-150, HcEMS025-380, HcEMS025-190, HcEMS025-120, HcEMS025-80, HcEMS064-550, HcEMS064-200, HcEMS140-195, HcEMS140-70, HcEMS172-150, HcEMS177-170, HcEMS177-130, HcEMS183-120, HcEMS183-100, HcEMS183-95, HcEMS197-200, HcEMS197-180, HcEMS197-160, HcEMS200-210, HcEMS200-190, HcEMS200-100, HcEMS200-190, HcEMS201-260, HcEMS209-650, HcEMS209-280, HcEMS259-150, HcEMS343-300, HcEMS346-260, HcEMS394-550, HcEMS394-400, HcEMS394-270, HcEMS394-240, HcEMS408-330, HcEMS408-260, HcEMS408-230, HcEMS409-240, HcEMS409-200.

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

紅麻基因組DNA的提取，SSR引物擴增與篩選，PCR擴增產(chǎn)物的電泳檢測，條帶分子量大小的測定及紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜的構(gòu)建。

具體步驟如下：

DNA提取：采用CTAB大量法提取紅麻基因組DNA。

擴增：PCR所用到的引物如表3所示。PCR體系為10ul體系，即2.0ul 紅麻DNA，1.0ul 10×TaqBuffer，0.8ul MgCl2，0.2ul dNTPs mixture，0.2ul Taq酶（2.5U），上下游引物各0.5ul 引物（ 引物濃度均為10 umol/L），5.3ul ddH₂O，加10.0ul石蠟覆蓋，離心混勻。

將配制好的PCR管放入PTC-1000 PCR 儀中進行反應(yīng)。PCR程序為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，10個循環(huán)，每個循環(huán)退火溫度降低0.5℃；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，35個循環(huán)；72℃延伸10min；4℃保存30℃。PCR擴增反應(yīng)結(jié)束后，每管加入4ul 6×loading Buffer，離心混勻。

PCR擴增產(chǎn)物通過9%聚丙烯酰胺凝膠電泳，每管取7~8ul 擴增產(chǎn)物進行點樣，每板膠電壓約為200V，電流為100mA，功率不超過20W，電泳時間根據(jù)具體情況而定，一般為1.5h~2h。而后進行銀染、顯影，并做好標記。

表3 紅麻新開發(fā)的64對SSR引物的編號及序列

數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析：根據(jù)擴增產(chǎn)物的聚丙烯凝膠電泳結(jié)果，采用0、1讀帶，無條帶的記為“0”，有條帶的記為“1”。每個引物擴增的結(jié)果根據(jù)片段大小形成不同的等位片段組合，得到0,1數(shù)據(jù)。SSR引物等位片段組合的0,1數(shù)字串作為每一個品種的數(shù)字指紋。

本發(fā)明的積極效果如下：

(1)分離并鑒定了215個適于紅麻品種/系的指紋圖譜構(gòu)建的微衛(wèi)星DNA標記，標記的編號為HcES001-750, HcES005-90, HcES007-250, HcES007-80, HcES008-150, HcES011-650, HcES011-250, HcES011-220, HcES012-850, HcES012-550, HcES012-300, HcES012-190, HcES012-140, HcES013-900, HcES013-850, HcES013-250, HcES013-220, HcES013-150, HcES013-120, HcES013-80, HcES014-900, HcES014-300, HcES014-180, HcES014-80, HcES015-160, HcES015-140, HcES020-500, HcES020-200, HcES020-140, HcES020-120, HcES021-150, HcES021-130, HcES021-120, HcES021-80, HcES029-450, HcES029-210, HcES029-120, HcES029-80, HcES030-210, HcES030-120, HcES030-90, HcES031-280, HcES031-250, HcES031-150, HcES032-280, HcES032-80, HcES034-600, HcES034-500, HcES034-240, HcES034-220, HcES034-150, HcES034-120, HcES037-190, HcES037-90, HcES037-80, HcES039-550, HcES039-180, HcES039-80, HcES041-900, HcES041-300, HcES041-150, HcES043-800, HcES043-650, HcES043-260, HcES043-120, HcES043-80, HcES044-400, HcES044-200, HcES045-220, HcES045-180, HcES045-120, HcES048-500, HcES048-260, HcES048-80, HcES049-180, HcES049-100, HcES049-80, HcES051-500, HcES051-240, HcES051-150, HcES054-220, HcES054-140, HcES054-80, HcES055-900, HcES055-800, HcES055-600, HcES055-550, HcES055-120, HcES055-90, HcES056-600, HcES056-550, HcES056-250, HcES056-120, HcES056-80, HcES059-80, HcES063-900, HcES063-600, HcES063-260, HcES063-140, HcES064-260, HcES064-120, HcES064-80, HcES067-190, HcES067-80, HcES070-350, HcES070-250, HcES070-220, HcES070-200, HcES070-150, HcES070-80, HcES071-300, HcES072-200, HcES072-180, HcES072-120, HcES072-100, HcES073-190, HcES073-180, HcES073-150, HcES073-140, HcES073-120, HcES073-110, HcES075-550, HcES075-280, HcES075-220, HcES075-200, HcES075-150, HcES075-120, HcES077-700, HcES077-80, HcES078-100, HcES078-80, HcES079-700, HcES079-400, HcES079-180, HcES079-140, HcES079-90, HcES079-80, HcES080-200, HcES080-150, HcES080-90, HcES085-500, HcES085-450, HcES085-380, HcES085-260, HcES085-220, HcES085-200, HcES086-150, HcES086-120, HcES086-100, HcES086-80, HcES087-550, HcES087-250, HcES090-250, HcES090-220, HcES090-180, HcES090-160, HcES090-140, HcES090-120, HcES090-100, HcES090-80, HcES091-700, HcES091-260, HcES091-140, HcES091-100, HcES091-80, HcES093-280, HcES093-160, HcES093-90, HcES093-80, HcEMS022-370, HcEMS022-310, HcEMS022-170, HcEMS022-160, HcEMS022-130, HcEMS023-550, HcEMS023-200, HcEMS023-180, HcEMS023-160, HcEMS023-150, HcEMS025-380, HcEMS025-190, HcEMS025-120, HcEMS025-80, HcEMS064-550, HcEMS064-200, HcEMS140-195, HcEMS140-70, HcEMS172-150, HcEMS177-170, HcEMS177-130, HcEMS183-120, HcEMS183-100, HcEMS183-95, HcEMS197-200, HcEMS197-180, HcEMS197-160, HcEMS200-210, HcEMS200-190, HcEMS200-100, HcEMS200-190, HcEMS201-260, HcEMS209-650, HcEMS209-280, HcEMS259-150, HcEMS343-300, HcEMS346-260, HcEMS394-550, HcEMS394-400, HcEMS394-270, HcEMS394-240, HcEMS408-330, HcEMS408-260, HcEMS408-230, HcEMS409-240, HcEMS409-200。

(2) 本發(fā)明提供的指紋圖譜在所收集的國內(nèi)外24個紅麻品種（系）中具有特異性，具有良好的應(yīng)用前景。與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測相比，具有檢測時間短，準確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點。指紋圖譜分析結(jié)果如表2所示。

附圖說明

圖1:紅麻品種k79的特征引物HcEMS140電泳擴增圖。其中，M為100 bp marker。（每條電泳帶代表SCS-11-06-1，Taihong，KO3-2，K79，IDN147，India S1，閩紅312，福紅4號，福紅5號，T19，福紅優(yōu)2號選，福紅優(yōu)5號選，浙江 142-20，R2，ZH-01，Taihong Z，BG52-135，ID85，阿聯(lián)紅麻，722-3，NA126，Ecerglades41，贊引1號，金山無刺）。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的說明，其目的僅在于更好理解本發(fā)明的內(nèi)容而非限制本發(fā)明的保護范圍。

實施例1紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜的構(gòu)建：按照上述表2中各材料各引物(64對SSR引物)擴增情況，繪制24個紅麻品種(系)的DNA指紋圖譜。在該DNA指紋圖譜中，每個紅麻品種(系)均有其特異的DNA指紋，可以把這24個品種(系)彼此區(qū)分開(見圖1與表2)。24個品種(系)的名稱、來源等見表1。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建農(nóng)林大學(xué)

<120> 一種紅麻微衛(wèi)星DNA標記指紋圖譜及其應(yīng)用

<130> 128

<160> 128

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atatttgttt gatcacaccg tgt 23

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ccttatcagc gttcagggca 20

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

acgcggtaaa aacattggag a 21

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

tgcaaacgaa atgtggcgat 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

cgtgaggaag gttctgcgaa 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ttttgcaata ccagggacga 20

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

cagaattcca gagcccttcg a 21

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

ggccccaacc cttcttcttt 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gctaagctgg gtttctggga 20

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

cccaacagct tctattcact gc 22

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ccccctccat ttgggtttct 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

aacccagcaa tcccttggtt 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

ggcaaaccct ccgagaagaa 20

<210> 14

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ggaaacaaga gaaagaagcc gt 22

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

cgtgcatgtc gtgaaatccg 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

attacaaagt gggcaggcga 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

tgggaaaggg attggaacca 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

acaattccgt caccacctcc 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

cacgtgtgac cacagagcta 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

aacaaaacat gcagctcccg 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

caccctccat atgccaccaa 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

atctgcaagc caagggtctc 20

<210> 23

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

acgcccagaa aaatcaagct c 21

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

tggaagcgtt ggagaagctt 20

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

aagcatgatc cagtcgcaca 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

accatatagc aacctggcgg 20

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

agcttgtaca cgatgtggaa 20

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

ctggtgattg gctttgtgca 20

<210> 29

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

aaacgcagaa agccgtaaaa a 21

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

cgttggacct cacactctcc 20

<210> 31

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

agttaaagca taggagagaa agtga 25

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

ccaagggcaa ggagactgag 20

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

ctgcatgcta cagcgttgtg 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

tcgggcttcc ttttcccttc 20

<210> 35

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

ccattgcgag cattgagtgg 20

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gcttcgattg ctgcacttca 20

<210> 37

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

atccaatcca atccaaactc ct 22

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tcaggtataa gtcggggcgt 20

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

tgacaaagtg ccgaggaaca 20

<210> 40

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

agtgccattt tactccttgg ga 22

<210> 41

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

acaaattata cccttagtca aaatcca 27

<210> 42

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

acaacaactg taccagcggt 20

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

gaatctgccc acccagcata 20

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

gtgtggtctc gttcgttcct 20

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

ggctattgca ccgtttagcg 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

gcctccatct ttgccctcaa 20

<210> 47

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

tgagaccatc aattatctct agacgg 26

<210> 48

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

agctggctca ttatcttcgg a 21

<210> 49

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

acaaaaccag aggacgaagg a 21

<210> 50

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

tgaactgcct ggctacttgg 20

<210> 51

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

attcctcgcg atccgttctc 20

<210> 52

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

gaggcgggga gaatcgattt 20

<210> 53

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

tggcggggtt tgcttagaat 20

<210> 54

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

tgatcgcccg attgtttcca 20

<210> 55

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

agtgcaattg gttgggatag a 21

<210> 56

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

cttgagtggt gttaccccac a 21

<210> 57

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

gaaaaacgtc gtcgcaccaa 20

<210> 58

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

aaggggcttg tatcgatggc 20

<210> 59

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

agttgggatc tgctgacacg 20

<210> 60

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

ctgaaccgaa atcaaggcac a 21

<210> 61

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

ccactagaag tttatcgttg gcc 23

<210> 62

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

agagtatgtg cacgggaagc 20

<210> 63

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

acccctcact tcccctgatt 20

<210> 64

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

atgtaaaccc cgctcgttgt 20

<210> 65

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

aggctgttgc tgagctgaat 20

<210> 66

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

cgccgttagc aatagcaacc 20

<210> 67

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

cagctgaccc tgcatcttga 20

<210> 68

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

taacatagcc ggagcagcag 20

<210> 69

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

tcattaaacc aggccaccgt 20

<210> 70

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

tgcttctact ttagcaaaac cact 24

<210> 71

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

ccctgtcctc ccacttgaaa 20

<210> 72

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

ccagccgacg acacgatatt 20

<210> 73

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

caggaaggaa atgggcagga 20

<210> 74

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

atcgaccgaa actcgagagc 20

<210> 75

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

agattgtcga cgtagcgaat 20

<210> 76

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

tagagcagga acaacagccg 20

<210> 77

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

acggcattcc atcccatgaa 20

<210> 78

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

catcgatgca ggaatgtcgc 20

<210> 79

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

cgagactcgg attgaagggt 20

<210> 80

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

agggtagaag gtggaggcat 20

<210> 81

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

tcgcttgacc gaggagtttc 20

<210> 82

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 82

ccggctctcc ctaaatggtc 20

<210> 83

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 83

agccatccca ttgcaagaca 20

<210> 84

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 84

tcactgcatc acccttccaa 20

<210> 85

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 85

ggggtaaagc tcgggtcttt 20

<210> 86

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 86

tggtgtccat ctagctccca 20

<210> 87

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 87

cctctgatgc atccgcttct 20

<210> 88

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 88

atctccaggg tgttgcgttt 20

<210> 89

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 89

aaaagtccac tccgtcgtcg 20

<210> 90

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 90

accaagaatc ccaaacccca 20

<210> 91

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 91

catgaaagcg aaggcagcaa 20

<210> 92

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 92

acttctcagc atttccgaga gt 22

<210> 93

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 93

cggtgttctg cggtaaaagc 20

<210> 94

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 94

tcgtcgtgca tcaaagctct 20

<210> 95

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 95

tggcgggaaa atgagggaaa 20

<210> 96

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 96

agaagaaatc ccagggaaag aaaga 25

<210> 97

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 97

cgtgcaccaa acagacaagg 20

<210> 98

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 98

aacagccccc attgtggaaa 20

<210> 99

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 99

acacagaggg gagtgaatat ga 22

<210> 100

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 100

cgcgatcgat ggctacagat 20

<210> 101

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 101

gatgcccaca gctttgcaat 20

<210> 102

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 102

tgttaagtca cttgaaagtt cagg 24

<210> 103

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 103

gggagacttg gtccagttcc 20

<210> 104

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 104

tcttcacccc cacaaaagca 20

<210> 105

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 105

atacgatagc ccgccagagg 20

<210> 106

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 106

atcgtggggg taacacttgg 20

<210> 107

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 107

gcttgaaagg gattggtgcg 20

<210> 108

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 108

agcaatgaaa ccggaaaagg a 21

<210> 109

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 109

aatcaagcaa tgccccttgc 20

<210> 110

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 110

aaccatgaag gcggacaatg 20

<210> 111

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 111

cccgacactt gaccattcca 20

<210> 112

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 112

cacgagaact gcttcaacgc 20

<210> 113

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 113

cgttcacagt aatggcgttc a 21

<210> 114

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 114

tgcaaaaggt tttggtggca 20

<210> 115

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 115

tgtccaagtc atatgaagcc ct 22

<210> 116

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 116

agagccggag aggaggaatt 20

<210> 117

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 117

ctcgttacag aagtggtcaa aca 23

<210> 118

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 118

tggtacaagt ctcccagcat g 21

<210> 119

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 119

tgcccgcgat cataaactca 20

<210> 120

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 120

gtaaacccgg agctagaccc 20

<210> 121

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 121

catgctacag atcggtaccg t 21

<210> 122

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 122

ttgatgcagt tccaccccaa 20

<210> 123

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 123

ggtttgggtg gtcgtagagg 20

<210> 124

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 124

gcaccaactg aattgtagcc a 21

<210> 125

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 125

aacaccccga gtacgttcac 20

<210> 126

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 126

agccatgctc tgcttctctt 20

<210> 127

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 127

aacatctgcc atctgctgct 20

<210> 128

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 128

gttggtgggg gttggttttg 20