本發(fā)明屬于分離分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及是一種用于分子印跡吸附材料的制備和應用技術(shù)，特別涉及一種“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料、制備方法及在食品檢測中的應用技術(shù)。
背景技術(shù)：
蘇丹紅染色劑常作為一種工業(yè)原料被廣泛用于如溶劑、油脂、蠟、汽油的增色及鞋、地板等增光方面。蘇丹紅主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、和Ⅳ四種類型屬于偶氮類油溶性工業(yè)色素，蘇丹紅B和蘇丹紅7B也經(jīng)常作為染料及顏料。1995年歐盟(EU)等國家已禁止其作為色素添加在食品中，國際癌癥研究機構(gòu)將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ列為動物致癌物，我國衛(wèi)生監(jiān)管部門已禁止蘇丹紅作為食品添加劑使用。盡管世界各國都已命令禁止將蘇丹紅應用于食品中而在經(jīng)濟利益的驅(qū)使下，但仍有人將蘇丹紅作為食品添加劑，用于辣椒醬、腐乳等加工食品中，以增加其顏色的色澤，對人體健康造成極大的傷害。然而食品中的蘇丹紅殘留一般為痕量，因此在分析之前通常需要進行分離、富集。由于食品基體的復雜性，基于商品化的固相萃取材料往往選擇性較差，有時還很難徹底清除基質(zhì)的干擾，所以發(fā)展新的具有特異識別能力的高選擇性的固相萃取吸附材料，因此盡快建立準確可靠的食品中蘇丹紅的分析檢測方法尤為重要。
具有分子識別功能的高選擇性材料，一直受到人們的關(guān)注，分子印跡技術(shù)是當前制備高選擇性材料的主要方法之一。依據(jù)此技術(shù)制備的分子印跡聚合物，由于對印跡分子的立體結(jié)構(gòu)具有“記憶”功能而表現(xiàn)預定、專一的識別性能，在分離科學、生物模擬科學等領(lǐng)域有十分廣闊的應用前景。傳統(tǒng)的分子印跡聚合物具有機械穩(wěn)定性好、化學選擇性高、成本低、制備容易等優(yōu)點，然而，用這種方法得到的分子印跡聚合物通常存在以下缺陷由于研磨過程的可控性差，會產(chǎn)生大量不規(guī)則粒子同時破壞部分印跡空腔所制備的是高度交聯(lián)的聚合物，致使內(nèi)部模板分子的洗脫比較困難，殘留的模板分子在使用過程中發(fā)生緩慢脫吸，給痕量分析等應用帶來較大誤差印跡位點分布不均一，一部分處于粒子孔壁上，模板分子向這部分位點的傳質(zhì)速率較快，而另一些則包埋在聚合物本體之中，受位阻影響，這部分印跡空穴可接近性差，再結(jié)合模板分子的速率慢，從而降低了印跡位點的利用率，尤其對生物大分子而言，影響更為嚴重。為了解決上述問題，表面印跡作為一種新的方法近年來成為研究的熱點。所謂表面分子印跡就是采取一定的措施把所有的結(jié)合位點結(jié)合在具有良好可接近性的表面上，從而有利于模板分子的脫除和再結(jié)合。所以選擇理想的支持體很重要，目前所用的支持體主要是磁性微球和硅膠顆粒，申請?zhí)枮?01010519633.5、201010242495.0的專利中公開都是以硅膠球為支持的印跡吸附材料；申請?zhí)枮?01110252472.2的專利中公開一種以磁性微球為支持的印跡吸附材料；申請?zhí)枮?012100978655的專利中公開都是以葡聚糖凝膠球為支持的印跡吸附材料。
蘇丹紅分子結(jié)構(gòu)中均含有氮原子，環(huán)上的氮原子與金納米粒子具有較強的親和作用，“巰基-金”修飾的硅膠與蘇丹紅分子模板結(jié)合穩(wěn)定。“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料由于比表面積極大，印跡位點位于表面，模板分子洗脫較徹底，可很大程度減少模板分子滲漏，同時模板分子的去除和再結(jié)合也比較迅速不僅使識別位點位于可接近的表面之上，可快速到達飽和吸附，而且具有良好的熱穩(wěn)定性、較高的結(jié)合速率、粒徑分布均勻等優(yōu)點。將巰基-金接枝到硅膠上合成“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物用于蘇丹紅分離富集，采用蘇丹紅分子印跡吸附材料分離富集后進行測定使檢測蘇丹紅的方法更靈敏、更準確。而用“巰基-金”修飾的硅膠作為支持體合成蘇丹紅分子印跡吸附材料的未見公開的專利和文獻報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料及制備方法，制備的材料對蘇丹紅分子具有吸附性，且具有高選擇性、有特異識別能力等優(yōu)點。
一種“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料的制備方法，將硅膠進行表面改性，使硅膠表面含有巰基，將金納米粒子與巰基進行配位結(jié)合，使金納米粒子通過巰基與硅膠連接，從而形成“巰基-金”@硅膠；以蘇丹紅為模板分子，加入“巰基-金”@硅膠、交聯(lián)劑、引發(fā)劑及致孔劑進行聚合反應后，脫除模板分子即得“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
優(yōu)選的，采用的蘇丹紅為蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、蘇丹紅B或蘇丹紅7B。
優(yōu)選的，其方法包括硅膠的表面改性、“巰基-金”@硅膠的制備、“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備及模板分子的脫除；
所述硅膠的表面改性的步驟為：將硅膠、含有巰基的硅烷偶聯(lián)劑及末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑加入溶劑在惰性氣體保護下進行加熱反應，使硅膠表面含有巰基，然后經(jīng)過后處理得到表面改性的硅膠；
所述“巰基-金”@硅膠的制備的步驟為：將所述表面改性的硅膠逐漸加入至含有金納米粒子的金溶膠中均勻混合，使金納米粒子與巰基進行配位結(jié)合，即可獲得“巰基-金”@硅膠；
所述“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備的步驟為：將“巰基-金”@硅膠、模板分子、交聯(lián)劑、致孔劑及引發(fā)劑混合后，在惰性氣體氛圍下，加熱至一定溫度后進行聚合反應一段時間，再加熱，使再加熱之后的溫度大于再加熱之前的溫度0-20℃，再反應一段時間后經(jīng)后處理得到“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料；
所述模板分子的脫除的方法為索氏提取法。
采用末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑能夠保證含有巰基的硅烷偶聯(lián)劑結(jié)合在硅膠表面，從而使確保巰基結(jié)合在硅膠表面。
進一步優(yōu)選的，所述硅膠為活化后的硅膠。
更進一步優(yōu)選的，所述硅膠的活化方法為：將硅膠置于稀鹽酸中，105℃恒溫條件下攪拌，冷凝回流24h；最后，用去離子水洗至中性，再用無水乙醇洗滌3-4次，晾干。
進一步優(yōu)選的，所述硅膠的表面改性中，按質(zhì)量百分比計，硅膠6～8％，含有巰基的硅烷偶聯(lián)劑6～8％、末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑6～8％、溶劑75～80％，各組分含量之和為百分之百。
進一步優(yōu)選的，所述含有巰基的硅烷偶聯(lián)劑為3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)。
進一步優(yōu)選的，所述末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑為某一支鏈末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑。
更進一步優(yōu)選的，所述末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑為3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)。
進一步優(yōu)選的，所述硅膠的表面改性中，加熱反應的條件為：135～140℃下冷凝回流12～16h。
進一步優(yōu)選的，所述硅膠的表面改性中，后處理包括洗滌、干燥。
更進一步優(yōu)選的，所述洗滌為依次采用甲苯、乙醇進行洗滌。
更進一步優(yōu)選的，所述干燥為55～60℃下真空干燥過夜。
進一步優(yōu)選的，所述“巰基-金”@硅膠的制備中，采用的金納米粒子可以通過購買獲得，也可通過自行制備獲得。
更進一步優(yōu)選的，自行制備的方法包括還原法、模板法、種子生長法和兩相合成法等。
其中還原法中包括檸檬酸鈉還原法。
采用檸檬酸鈉還原法制備金納米粒子的步驟為：將100mL 1mM的HAuCl4水溶液加熱回流直至沸騰，在劇烈攪拌下迅速加入10mL 38.8mM檸檬酸鈉水溶液，兩分鐘后溶液顏色由淡黃的變成酒紅色，保持沸騰狀態(tài)反應15min停止加熱，繼續(xù)攪拌至室溫，得到Au納米粒子，放于4℃條件下儲藏備用。
進一步優(yōu)選的，所述“巰基-金”@硅膠的制備中，將得到的“巰基-金”@硅膠進行離心、洗滌，并多次重復離心和洗滌的步驟，直至洗滌的上層清液中不再含有Au納米粒子，然后放置在冰箱中沉化6-8天。
進一步優(yōu)選的，所述“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備中，加入“巰基-金”@硅膠、模板分子、交聯(lián)劑、致孔劑及引發(fā)劑的比例為，1.1-1.5:1.2-1.4:10-25:500-600:0.05-0.1，g:g:g:mL:g。
進一步優(yōu)選的，所述“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備中，將“巰基-金”@硅膠、模板分子、交聯(lián)劑、致孔劑及引發(fā)劑混合后，通入惰性氣體除去氧氣，于50±5℃恒溫反應8～10h，再升溫60±5℃恒溫反應12～14h。
進一步優(yōu)選的，所述“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備中，后處理為將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
進一步優(yōu)選的，所述索氏提取法，采用的萃取液為乙酸的甲醇溶液。
更進一步優(yōu)選的，所述乙酸的甲醇溶液中乙酸的體積分數(shù)為10％～20％。
一種上述方法制備的“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
本發(fā)明的目的還在于，提供一種上述印跡材料在固相萃取中的應用。
一種上述印跡材料在食品中痕量蘇丹紅的凈化和富集的應用。
一種在食品中痕量蘇丹紅的凈化和富集的方法，將上述印跡材料作柱層析填料裝柱，用添加了多種等量的蘇丹紅標準品的辣椒粉提取液上柱，真空抽濾控制流速，用乙醇淋洗，除去非特異性吸附的干擾物質(zhì)后，以乙腈為洗脫劑，洗脫回收被保留的模板分子，采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。
一種上述印跡材料的再生方法，將上述印跡材料用95％乙醇洗脫。
本發(fā)明的有益效果為：
(1)本發(fā)明獲得高選擇性吸附材料是“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料，該法制得的表面分子印跡聚合物具有特定的空穴，對蘇丹紅具有特異的識別能力，選擇性較高，對其它共存物質(zhì)不吸附。
(2)本發(fā)明采用含有巰基的硅烷偶聯(lián)劑及末端含有雙鍵基團的硅烷偶聯(lián)劑對硅膠進行兩步改性，使硅膠表面接枝上含有C＝C的結(jié)構(gòu)，直接參與聚合反應，增強印跡聚合物與硅膠表面的結(jié)合力，提高了表面印跡聚合物的穩(wěn)定性，同時硅膠表面接枝上含有S-的結(jié)構(gòu)，下一步巰基與金納米粒子結(jié)合，完成“巰基-金”修飾硅膠表面。
(3)本發(fā)明制備“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料，由于是在“巰基-金”@硅膠的表面修飾上分子印跡聚合物，其吸附位點(金納米粒子)都在吸附劑的表面，有利于模板分子吸附和洗脫，洗脫時間短，吸附能力強、效率高。
(4)本發(fā)明“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料制備過程簡單，條件易于控制，生產(chǎn)成本低。
(5)本發(fā)明制備“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料，有良好的物理化學穩(wěn)定性和優(yōu)異的機械穩(wěn)定性，對蘇丹紅分子吸附操作簡單。同時具有再生能力，可以反復使用10次以上。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1
(1)金納米粒子的制備：檸檬酸鈉還原法，將100mL1mM的HAuCl4水溶液加熱回流直至沸騰，在劇烈攪拌下迅速加入10mL38.8mM檸檬酸鈉水溶液，兩分鐘后溶液顏色由淡黃的變成酒紅色，保持沸騰狀態(tài)反應15min停止加熱，繼續(xù)攪拌至室溫，得到Au納米粒子，放于4℃條件下儲藏備用。
(2)硅膠活化處理：取4g硅膠置于100mL的圓底燒瓶中，然后向其中添加的40mL水和40mL濃鹽酸，105℃恒溫條件下攪拌，冷凝回流24h。最后，用去離子水洗至中性，再用無水乙醇洗滌3-4次，晾干。
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1g活化的硅膠，分散在10mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。
(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到200mL，取200mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備：在100mL四口燒瓶中加入125mg“巰基-金”@硅膠，加入120mg蘇丹紅Ⅰ，1.9gEGDMA，50mL乙腈，偶氮二異丁腈5mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于55℃恒溫反應10h，再升溫60℃恒溫反應12h，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)10％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.0g，加入25mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在95.87％～98.41％之間，RSD小于3.1％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
實施例2
(1)金納米粒子的制備同實施例1
(2)硅膠活化處理同實施例1
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1.5g活化的硅膠，分散在15mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到210mL，取210mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料制備：在100mL四口燒瓶中加入150mg“巰基-金”@硅膠，加入125mg蘇丹紅Ⅱ，2gEGDMA，55mL乙腈，偶氮二異丁腈6mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于50℃恒溫反應10h，再升溫65℃恒溫反應12h，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)15％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸和乙醇，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.1g，加入25mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6.5mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在96.86％～99.41％之間，RSD小于3.5％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
實施例3
(1)金納米粒子的制備同實施例1
(2)硅膠活化處理同實施例1
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1g活化的硅膠，分散在10mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1.5mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1.5mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。
(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到250mL，取250mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備：在100mL四口燒瓶中加入150mg“巰基-金”@硅膠，加入135mg蘇丹紅Ⅲ，2gEGDMA，60mL乙腈，偶氮二異丁腈8mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于53℃恒溫反應10h，再升溫65℃恒溫反應12h，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)18％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸和乙醇，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.1g，加入25mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6.1mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在96.76％～98.91％之間，RSD小于3.5％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
實施例4
(1)金納米粒子的制備同實施例1
(2)硅膠活化處理同實施例1
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1.2g活化的硅膠，分散在15mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1.2mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1.2mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。
(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到210mL，取210mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備：在100mL四口燒瓶中加入130mg“巰基-金”@硅膠，加入120mg蘇丹紅Ⅳ，1.95gEGDMA，55mL乙腈，偶氮二異丁腈6mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于52℃恒溫反應10h，再升溫65℃恒溫反應12h，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)15％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸和乙醇，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.2g，加入26mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6.4mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在94.97％～98.50％之間，RSD小于2.9％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
實施例5
(1)金納米粒子的制備同實施例1
(2)硅膠活化處理同實施例1
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1.3g活化的硅膠，分散在16mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1.5mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1.5mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。
(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到230mL，取230mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料制備：在100mL四口燒瓶中加入115mg“巰基-金”@硅膠，加入125mg蘇丹紅B，1.8gEGDMA，50mL乙腈，偶氮二異丁腈5mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于55℃恒溫反應10h，再升溫65℃恒溫反應12h，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)12％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸和乙醇，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.0g，加入25mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在96.97％～99.31％之間，RSD小于2.1％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
實施例6
(1)金納米粒子的制備同實施例1
(2)硅膠活化處理同實施例1
(3)硅膠的表面改性：在25mL的三口圓底燒瓶中，加入1.2g活化的硅膠，分散在14mL的二甲苯溶液中，然后，向其中加入約1.3mL的硅烷偶聯(lián)劑3-巰基丙基三甲氧基硅烷(TMMPS)和1.3mL的3-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)，在N2的保護下磁力攪拌進行反應，140℃下冷凝回流12h，冷卻至室溫后，依次用甲苯、乙醇洗滌，60℃下真空干燥過夜備用，即可得到表面改性處理的硅膠。
(4)“巰基-金”@硅膠的制備：將制得的金溶膠稀釋到225mL，取225mg上述表面改性的硅膠體粒子，在磁力攪拌下，將其逐加入到金溶膠中，繼續(xù)攪拌12h。將制得的“巰基-金”@硅膠粒子反復離心、洗滌，直到上層清液中不再含有Au納米粒子。然后將其沉化在冰箱中7d左右。
(5)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡吸附材料制備：在100mL四口燒瓶中加入145mg“巰基-金”@硅膠，加入135mg蘇丹紅7B，2gEGDMA，60mL乙腈，偶氮二異丁腈9mg，常溫下超聲15min使其充分分散，最后通入氮氣除去氧氣，與空氣隔絕，攪拌，于55℃恒溫反應10h，再升溫65℃恒溫反應14h，最后，反應結(jié)束，冷卻至室溫，將所得物抽濾洗滌，60℃真空干燥24h。
(6)模板分子的脫除：用體積分數(shù)20％乙酸甲醇溶液索氏萃取24h，再用甲醇洗去殘留的乙酸和乙醇，洗到洗滌液檢測不到蘇丹紅為止，置于55℃真空干燥箱中干燥，即為“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料。
(7)“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡材料在固相萃取中的應用：取1.0g本實例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取紅辣椒粉1.0g，加入25mL正己烷超聲波提取15min，過濾，殘渣重復提取2次，收集濾液混勻，加入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，蘇丹紅B和蘇丹紅7B均6mg，完全溶解后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾均勻上柱，真空抽濾控制流速0.7mL/min，待上柱溶液流盡后，用乙醇進行淋洗，得淋洗液。層析柱再用乙醇洗脫再按照上述步驟進行固相萃取。采用高效液相色譜法對流出液和洗脫液進行檢測。結(jié)果說明分子印跡一固相萃取對蘇丹紅有較好純化富集效果。結(jié)果表明，由本發(fā)明建立的方法可用于辣椒粉樣品中痕量蘇丹紅的凈化和富集，六種蘇丹紅的加標回收率均在95.5.0％～98.88％之間，RSD小于3.6％。
“巰基-金”修飾硅膠表面蘇丹紅分子印跡聚合物的再生：將上述分子印跡聚合物用95％乙醇洗脫后，即可再生用于下一次凈化富集用，且可以反復使用10次以上。
上述實施例雖然對本發(fā)明的具體實施方式進行了描述，但并非對發(fā)明保護范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應該明白，在發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。