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一種快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法與流程

文檔序號(hào):12457157閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,包括如下步驟:

a、獲取軟骨組織樣本;

b、將獲取的軟骨組織樣本用加入雙抗的PBS清洗后轉(zhuǎn)入容器中;

c、向軟骨組織樣本中加入少量的Ⅱ型膠原酶溶液,用手術(shù)剪將軟骨組織樣本剪碎;

d、向軟骨組織樣本中加入一定量Ⅱ型膠原酶溶液,同時(shí)加入人血白蛋白,置于37℃搖床上以100~200rpm的轉(zhuǎn)速消化30-120min;

e、向軟骨組織樣本中添加氨磷汀溶液,繼續(xù)置于37℃搖床上以100~200rpm的轉(zhuǎn)速消化2-4h;

f、收集消化液,經(jīng)篩網(wǎng)過濾后,濾液再經(jīng)離心沉淀后得到軟骨細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟a獲取的軟骨組織樣本保存在入雙抗的PBS中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟b中對(duì)軟骨組織樣本清洗2~3遍后轉(zhuǎn)入以50mL燒杯中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟c具體為:向軟骨組織樣本中加入1~2mL的Ⅱ型膠原酶溶液,用手術(shù)剪將軟骨組織樣本剪碎至1mm3

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟d中Ⅱ型膠原酶溶液的加入量為軟骨組織樣本體積的5~10倍,人血白蛋白的加入量為軟骨組織樣本和Ⅱ型膠原酶溶液體積之和的0.5~2%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟e中氨磷汀溶液的加入量為軟骨組織樣本和Ⅱ型膠原酶溶液體積之和的2~5%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速高效分離軟骨細(xì)胞的方法,其特征在于,所述步驟f具體為:將收集的消化液經(jīng)200目的篩網(wǎng)過濾,濾液再經(jīng)200~400g離心沉淀,得到軟骨細(xì)胞。

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