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一種降解煙葉中葉綠素的方法與流程

文檔序號(hào):12577373閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種降解煙葉中葉綠素的方法,其特征在于,該方法利用擬南芥葉綠素酶AtCLH1基因進(jìn)行煙葉中葉綠素的降解,具體包括如下步驟:

(1)PCR克隆獲得擬南芥葉綠素酶AtCLH1基因,

(2)構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a-AtCLH1;

(3)構(gòu)建重組工程菌,具體為:

將步驟(2)中重組表達(dá)載體pET28a-AtCLH1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)篩選、鑒定后獲得轉(zhuǎn)化正確的重組工程菌;

(4)菌株擴(kuò)增與誘導(dǎo)表達(dá),具體為:

將步驟(3)中構(gòu)建正確的重組工程菌轉(zhuǎn)接于LB液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng),并加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá);

誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)束后,離心收集菌體,并加入LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行重懸,以此可作為煙葉處理用菌劑;

(5)煙葉處理,具體為:

將步驟(4)中所制備菌劑均勻噴灑于煙葉表面。

2.如權(quán)利要求1所述降解煙葉中葉綠素的方法,其特征在于,步驟(4)中,IPTG濃度為0.5 mM/L。

3.如權(quán)利要求1所述降解煙葉中葉綠素的方法,其特征在于,步驟(5)中,菌劑噴施量為煙葉質(zhì)量的0.7%~1.0%。

4.如權(quán)利要求1所述降解煙葉中葉綠素的方法,其特征在于,步驟(5)中,噴施后煙葉于37℃、60%濕度條件下貯藏10d。

5.如權(quán)利要求1所述降解煙葉中葉綠素的方法,其特征在于,所述煙葉為青黃煙或微帶青煙煙葉。

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