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臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法與流程

文檔序號(hào):12166895閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法,其特征在于,包括如下培養(yǎng)步驟:

將獲取的臍帶組織塊置于干細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)處理,其中,所述干細(xì)胞培養(yǎng)基中含有干細(xì)胞因子和白介素6因子,且所述干細(xì)胞因子與白介素6因子的含量比為(5-20μmol/L):(5-20ug/ml)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述培養(yǎng)處理是在被包被處理的培養(yǎng)器中進(jìn)行,所述包被處理的包被液含有纖連蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述纖連蛋白在所述包被液中的濃度為5-20μg/mlμg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述培養(yǎng)處理方法是先采用所述干細(xì)胞培養(yǎng)基浸潤(rùn)被所述包被處理的所述培養(yǎng)器,去掉所述干細(xì)胞培養(yǎng)基,再將所述臍帶組織塊加入所述培養(yǎng)器中培養(yǎng)2-3小時(shí)后,加入新的所述干細(xì)胞培養(yǎng)基直至沒(méi)過(guò)所述臍帶組織塊進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng),直至有臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞爬出,待所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時(shí),棄去所述臍帶組織塊,用胰酶-EDTA消化傳代。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:在所述繼續(xù)培養(yǎng)的過(guò)程中,前三天不要?jiǎng)优囵B(yǎng)皿,第四天開始每隔兩天換一次所述干細(xì)胞培養(yǎng)基,直至有所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞爬出。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5任一所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述白介素6因子是以經(jīng)優(yōu)化后的人全長(zhǎng)IL-6基因?yàn)榘谢蜻M(jìn)行誘導(dǎo)后的重組人IL-6,所述優(yōu)化后的人全長(zhǎng)IL-6基因序列如下:

5'-ATG AAC TCC TTC TCC ACA AGC GCC TTC GGT CCA GTT GCC TTC TCC CTG GGG CTG CTC CTG GTG TTG CCT GCT GCC TTC C CT GCC CCG GTT CCG CCG GGT GAA GAC TCT AAA GAT GTT GCG GCG CCG CAC CGT CAG CCG CTG ACC TCT TCT GAA CGC ATT GAC AAA CAA ATT CGT TAC ATC CTG GAC GGC ATC TCT GCC CTG CGT AAG GAG ACC TGT AAC AAA AGC AAC ATG TGT GAA AGC AGC AAA GAA GCG CTG GCA GAA AAC AAC CTG AAC CTT CCG AAA ATG GCT GAA AAA GAT GGT TGC TTC CAA TCT GGC TTC AAT GAA GAA ACT TGC CTG GTG AAA ATC ATC ACC GGT CTT TTG GAG TTT GAA GTA TAC CTG GAA TAT CTG CAG AAC CGT TTT GAA AGC AGC GAG GAA CAA GCG CGT GCT GTG CAG ATG AGC ACC AAA GTT CTG ATC CAG TTG CTG CAG AAA AAG GCG AAA AAT CTG GAT GCA ATC ACT ACC CCG GAC CCG ACC ACC AAC GCT AGC CTG CTG ACG AAA CTG CAG GCG CAG AAC CAG TGG CTG CTG CAG GAC ATG ACC ACT CAT CTG ATT CTG CGC AGC TTT AAA GAA TTC CTG CAG TCT AGC CTG CGC GCT CTT CGT CAA ATG TAG-3'。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5任一所述的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述干細(xì)胞因子在所述干細(xì)胞培養(yǎng)基中的濃度為5-20μmol/mlμmol/ml。

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