本發(fā)明涉及一種提高大腸桿菌合成血紅素的方法，屬于代謝工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

血紅素是含鐵卟啉衍生物，由原卟啉與1個(gè)二價(jià)鐵原子構(gòu)成。其核心是亞鐵離子，具有攜氧能力，是有氧呼吸及厭氧呼吸電子傳遞鏈蛋白的重要組分。除此之外，它還是許多感應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白和酶的輔基，參與生物細(xì)胞中的許多重要的生理生化反應(yīng)過程，比如電子傳遞、氣體轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、過氧化物還原等，并且是許多生物體的優(yōu)質(zhì)鐵源。目前，血紅素不僅在食品行業(yè)常被用于著色劑，如腸類制品，而且在醫(yī)學(xué)臨床上也廣泛的使用，如血紅素可作為半合成膽紅素原料，也可生產(chǎn)抗肝功能亢進(jìn)、抗炎癥作用和抗腫瘤作用的重要藥物。血紅素也是人類良好的補(bǔ)血?jiǎng)?，亞鐵血紅素可直接被人體吸收，吸收率高達(dá)10％～20％。

包括血紅素在內(nèi)的卟啉類化合物的合成可以通過化學(xué)合成，但是由于它們結(jié)構(gòu)復(fù)雜，合成過程中反應(yīng)步驟繁瑣，得率比較低，使得卟啉類化合物價(jià)格昂貴。為此，微生物成為生產(chǎn)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的卟啉類化合物的最佳選擇。隨著基因工程技術(shù)的成熟，選擇大腸桿菌作為宿主大量合成血紅素具有廣闊的前景。Kwon等人在大腸桿菌中表達(dá)來源于類球紅細(xì)菌的hemA基因合成血紅素，并且將其作為老鼠飼料的鐵源。此外，Lee等人分別表達(dá)了參與泛酸途徑的coaA基因和卟啉合成途徑的每個(gè)基因hemB、hemC、hemD、hemE，獲得較高產(chǎn)量的血紅素，即使通過優(yōu)化培養(yǎng)基，但是這個(gè)產(chǎn)量對(duì)于工業(yè)生產(chǎn)來講，還是非常低。因此，進(jìn)一步對(duì)血紅素合成途徑進(jìn)行改造，提高血紅素產(chǎn)量是十分必要的。

在生物體內(nèi)，血紅素的合成途徑是從5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)開始的(圖1)。ALA是血紅素合成途徑的關(guān)鍵前體物質(zhì)。ALA在ALA脫水酶(HemB,由基因hemB編碼)的催化下生成膽色素原，然后膽色素原在羥甲基膽素合成酶(HemC,由基因hemC編碼)的作用下生成羥甲基膽素，又被尿卟啉原Ⅲ合成酶(HemD,由基因hemD編碼)催化生成含有四吡咯環(huán)的尿卟啉原Ⅲ，再經(jīng)過尿卟啉原Ⅲ脫羧酶(HemE,由基因hemE編碼)和糞卟啉原Ⅲ氧化酶(HemF,由基因hemF編碼；無氧條件下為HemN,由基因hemN編碼)的脫羧氧化作用生成原卟啉原Ⅸ，又在偶聯(lián)呼吸鏈輔酶Q的原卟啉原氧化酶(HemG,由基因hemG編碼)催化下生成原卟啉Ⅸ。原卟啉Ⅸ在亞鐵螯合酶(HemH,由基因hemH編碼)作用下將鐵離子螯合進(jìn)原卟啉環(huán)生成血紅素。

由于血紅素合成途徑調(diào)控機(jī)理復(fù)雜，受多方面因素影響。目前有關(guān)血紅素合成途徑的研究，主要集中于分析某單個(gè)基因或某幾個(gè)基因?qū)ρt素生產(chǎn)的影響，并未考慮血紅素合成途徑基因的表達(dá)強(qiáng)度與合成血紅素之間的關(guān)系。

ALA是血紅素合成途徑的關(guān)鍵前體物質(zhì)，為了進(jìn)一步促進(jìn)血紅素的積累，本發(fā)明在在表達(dá)5-氨基乙酰丙酸C5合成途徑關(guān)鍵酶基因hemL和hemA的基礎(chǔ)上，將來源于大腸桿菌血紅素生物合成途徑的基因分為兩個(gè)模塊，利用拷貝數(shù)不同的質(zhì)粒對(duì)兩個(gè)模塊的基因組合表達(dá)，實(shí)現(xiàn)血紅素產(chǎn)量的提高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種提高大腸桿菌工程菌株產(chǎn)血紅素的方法，是利用不同拷貝數(shù)的表達(dá)載體，將血紅素合成途徑的基因分模塊組合表達(dá)，實(shí)現(xiàn)血紅素產(chǎn)量的提高。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種高產(chǎn)血紅素的重組大腸桿菌，所述重組大腸桿菌串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述重組大腸桿菌包括(a),(b)，(c)，其中：

(a)是以pRSFDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；

(b)是以pCDFDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pRSFDuet-2或pACYCDuet-2為載體，串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；

(c)是以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pRSFDuet-2或pCDFDuet-2為載體，串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述重組大腸桿菌還以pUC19為載體過量表達(dá)hemA和hemL基因。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemL的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemB的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemC的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemD的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemE的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemF的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemG的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述hemH的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述載體pRSFDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述載體pCDFDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述載體pACYCDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供所述重組大腸桿菌的構(gòu)建方法，步驟為：(1)以pUC19為表達(dá)載體，在大腸桿菌中過量表達(dá)hemA和hemL基因；(2)再以pRSFDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；或以pCDFDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pRSFDuet-2或pACYCDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；或以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemB、hemC、hemD和hemE基因，并以pRSFDuet-2或pCDFDuet-2為載體串聯(lián)表達(dá)hemF、hemG和hemH基因；

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法步驟如下：

(1)分別以pRSFDuet-2、pCDFDuet-2和pACYCDuet-2為載體，構(gòu)建pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH六種重組載體；

(2)將pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE和pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH組合，或?qū)CDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE和pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH兩兩組合，轉(zhuǎn)入以pUC19為載體過量表達(dá)hemA和hemL基因的大腸桿菌中。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法具體包括以下步驟：

(1)基因片段的擴(kuò)增：以E.coli DH5α基因組為模板分別擴(kuò)增hemB、hemC、hemD、hemE、hemF、hemG、hemH基因。

(2)相關(guān)表達(dá)載體的構(gòu)建：利用酶切位點(diǎn)PstⅠ和HindⅢ將片段hemC-hemD分別與表達(dá)載體pRSFDuet-2、pCDFDuet-2、pACYCDuet-2連接，獲得重組載體pRSFDuet-2-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemC-hemD。通過BamHⅠ和SacⅠ將片段hemB分別與載體pRSFDuet-2-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemC-hemD連接，得到重組載體pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD。將擴(kuò)增得到的hemE片段通過酶切位點(diǎn)NdeⅠ和XhoⅠ分別連接到pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD中，得到重組質(zhì)粒pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE。

(3)利用酶切位點(diǎn)BamHⅠ和HindⅢ將從大腸桿菌基因組擴(kuò)增得到的片段hemF分別與表達(dá)載體pRSFDuet-2、pCDFDuet-2、pACYCDuet-2連接，獲得重組載體pRSFDuet-2-hemF、pCDFDuet-2-hemF、pACYCDuet-2-hemF。通過NdeⅠ和XhoⅠ將片段hemG-hemH分別與載體pRSFDuet-2-hemF、pCDFDuet-2-hemF、pACYCDuet-2-hemF連接，得到重組載體pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH。

(4)構(gòu)建相關(guān)重組菌株：將質(zhì)粒pUC19-hemA-hemL轉(zhuǎn)化菌株E.coli DH5α，得到重組菌株E.coli DH5α-pUC19-hemA-hemL。將大腸桿菌血紅素合成途徑兩個(gè)模塊的相關(guān)重組質(zhì)粒兩兩組合，轉(zhuǎn)化菌株E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL，得到如下重組工程菌株(b)、(c)、(d)、(e)、(f)：

(b)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(c)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(d)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(e)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(f)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述的重組大腸桿菌在食品、醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供應(yīng)用所述重組大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)血紅素的方法，是以1～5mL菌液/100mL培養(yǎng)基的接種量將所述重組大腸桿菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，37℃，220r/min培養(yǎng)6～48h.

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法是在接種后0h添加終濃度0.1mmol/L IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)，接種后4h時(shí)添加終濃度100μmol/L的FeSO₄。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述方法是挑取在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)的重組菌株(b)、(c)、(d)、(e)、(f)接種于LB培養(yǎng)基，37℃過夜培養(yǎng)約12h后，以1％接種量轉(zhuǎn)接發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，0h時(shí)添加0.1mM IPTG誘導(dǎo)基因表達(dá)以及對(duì)應(yīng)的抗生素，氨芐青霉素(100μg/mL)、卡那霉素(50μg/mL)、鏈霉素(50μg/mL)、氯霉素(34μg/mL)，37℃，220r/min培養(yǎng)，4h時(shí)添加100μM的FeSO₄，周期48h。

本發(fā)明還提供所述方法在生產(chǎn)血紅素中的應(yīng)用。

有益效果：本發(fā)明首次采用分模塊組合的思路，將血紅素合成途徑分成兩個(gè)模塊，用拷貝數(shù)不同的質(zhì)粒將兩個(gè)模塊的基因組合表達(dá)，控制不同基因的表達(dá)強(qiáng)度，使重組菌血紅素產(chǎn)量最高達(dá)到0.56μM/OD細(xì)胞。

附圖說明

圖1大腸桿菌血紅素合成途徑示意圖；

圖2大腸桿菌各重組工程菌株的血紅素產(chǎn)量。

具體實(shí)施方式

培養(yǎng)基：

斜面培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10，氯化鈉10，酵母粉5.0，瓊脂20，pH 7.0；

種子培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10，氯化鈉10，酵母粉5.0，pH 7.0，裝液量20mL/250mL；

發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH₄)₂SO₄15，KH₂PO₄5.0，Na₂HPO₄·12H₂O 15，MgSO₄·7H₂O 1.0，yeast extract 1.0，Glucose 20，pH 7.0，裝液量30mL/250mL。

培養(yǎng)條件：

菌種培養(yǎng)：甘油管劃線，然后挑取單菌落劃線平板37℃培養(yǎng)，作為種子來源；

種子培養(yǎng)：平板挑取菌體，37℃，220r/min，根據(jù)要求添加氨芐青霉素100μg/mL，卡那霉素50μg/mL，鏈霉素50μg/mL，氯霉素34μg/mL，培養(yǎng)約12h，轉(zhuǎn)接發(fā)酵培養(yǎng)基；

發(fā)酵培養(yǎng)：以1％接種量轉(zhuǎn)接，0h時(shí)添加0.1mM IPTG誘導(dǎo)基因表達(dá)，根據(jù)需要添加氨芐青霉素(100μg/mL)，卡那霉素(50μg/mL)，鏈霉素(50μg/mL)，氯霉素(34μg/mL)，37℃，220r/min培養(yǎng)，4h時(shí)添加100μM的FeSO₄，周期48h。

血紅素檢測(cè)方法：

采用熒光法測(cè)定血紅素的濃度：細(xì)胞發(fā)酵液4℃，12000rpm離心5min，收集菌體，加入去離子水，重懸菌體，測(cè)定其OD₆₀₀。取含有0.1-0.5OD(根據(jù)菌體產(chǎn)血紅素濃度決定)的細(xì)胞重懸液，分別加入兩個(gè)1.5mL離心管中，其中一個(gè)用于對(duì)照試驗(yàn)。向兩個(gè)1.5mL離心管中加入200mM的草酸，使其總體積為500μL，再加入500μL的2M的草酸，放入100℃的金屬浴中加熱30min，對(duì)照組放置在室溫條件下。待樣品自然冷卻后12000rpm離心5min，取200μL上清加入黑色96孔板中，將96孔板放入酶標(biāo)儀，設(shè)置熒光測(cè)定的激發(fā)波長為400nm，發(fā)射波長為620nm，測(cè)定樣品和對(duì)照的熒光值。

hemA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，hemL的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，hemB的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，hemC的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，hemD的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，hemE的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，hemF的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，hemG的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，hemH的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，pRSFDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示，pCDFDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，pACYCDuet-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示。

實(shí)施例1血紅素合成途徑相關(guān)基因片段的擴(kuò)增

以E.coli DH5α基因組為模板分別擴(kuò)增hemB(989bp)、hemC(956bp)、hemD(755bp)、hemE(1079bp)、hemF(914bp)、hemG(560bp)、hemH(977bp)基因，然后以融合PCR將hemC和hemD片段融合為hemC-hemD，將hemG和hemH片段融合為hemG-hemH。引物表1所示。

表1引物

實(shí)施例2大腸桿菌合成血紅素相關(guān)重組工程菌株的構(gòu)建

利用酶切位點(diǎn)PstⅠ和HindⅢ將片段hemC-hemD分別與表達(dá)載體pRSFDuet-2、pCDFDuet-2、pACYCDuet-2連接，獲得重組載體pRSFDuet-2-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemC-hemD。通過BamHⅠ和SacⅠ將片段hemB分別與載體pRSFDuet-2-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemC-hemD連接，得到重組載體pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD。將擴(kuò)增得到的hemE片段通過酶切位點(diǎn)NdeⅠ和XhoⅠ分別連接到pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD中，得到重組質(zhì)粒pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE、pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE。

利用酶切位點(diǎn)BamHⅠ和HindⅢ將從大腸桿菌基因組擴(kuò)增得到的片段hemF分別與表達(dá)載體pRSFDuet-2、pCDFDuet-2、pACYCDuet-2連接，獲得重組載體pRSFDuet-2-hemF、pCDFDuet-2-hemF、pACYCDuet-2-hemF。通過NdeⅠ和XhoⅠ將片段hemG-hemH分別與載體pRSFDuet-2-hemF、pCDFDuet-2-hemF、pACYCDuet-2-hemF連接，得到重組載體pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH、pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH。

將質(zhì)粒pUC19-hemA-hemL轉(zhuǎn)化菌株E.coli DH5α，得到重組菌株E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL。將大腸桿菌血紅素合成途徑兩個(gè)模塊的相關(guān)重組質(zhì)粒兩兩組合，轉(zhuǎn)化菌株E.coli DH5α：：pUC19-hemA-hemL，得到重組工程菌株(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)：(a)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(b)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(c)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(d)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(e)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(f)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH。

實(shí)施例3重組菌搖瓶發(fā)酵驗(yàn)證

以E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL作為對(duì)照，

重組菌株：

(a)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(b)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pRSFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(c)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(d)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pCDFDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pACYCDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(e)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pRSFDuet-2-hemF-hemG-hemH；

(f)E.coli DH5α：pUC19-hemA-hemL+pACYCDuet-2-hemB-hemC-hemD-hemE+pCDFDuet-2-hemF-hemG-hemH。

將重組大腸桿菌(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)與對(duì)照菌株分別在250mL三角瓶中發(fā)酵，接種量1％，初始葡萄糖濃度為20g/L，0h添加0.1mM IPTG誘導(dǎo)以及相應(yīng)的抗生素，4h時(shí)添加100μM的FeSO₄，發(fā)酵48h檢測(cè)各重組工程菌每OD菌體細(xì)胞生產(chǎn)血紅素的產(chǎn)量，結(jié)果顯示，重組工程菌(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)的血紅素產(chǎn)量分別為0.09μM/OD、0.25μM/OD、0.35μM/OD、0.44μM/OD、0.56μM/OD、0.46μM/OD(圖2)，最高比出發(fā)菌株血紅素產(chǎn)量提高8倍。

雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。